高麗人参を有効成分として含むＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物
【課題】
本発明の目的は高麗人参を有効成分として含む，ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物を提供することである。
【解決手段】
本発明は高麗人参を有効成分にするＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用薬学的組成物に関する。本発明の薬学的組成物はＨＩＶ感染個体に投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損を誘導することができる。したがって，本発明はエイズの予防及び治療に役立つように使われることができる。
本発明の目的は高麗人参を有効成分として含む，ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物を提供することである。
【解決手段】
本発明は高麗人参を有効成分にするＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用薬学的組成物に関する。本発明の薬学的組成物はＨＩＶ感染個体に投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損を誘導することができる。したがって，本発明はエイズの予防及び治療に役立つように使われることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は高麗人参を有効成分として含むＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト免疫不全ウイルス１型 （ＨＩＶ−１）は後天性免疫不全症候群（エイズ）の病因である。ＨＩＶ−１はＨＩＶ−２と共にレトロウイルスのレンチウイルス科に属し，感染性ビリオンは二つの同じ一本鎖からなるＲＮＡ（＋）ゲノムを有する。ＨＩＶ−１が細胞に感染すれば，上記ＲＮＡ（＋）ゲノムがコーディングする逆転写酵素によりＲＮＡが二本鎖ＤＮＡに転換され，このＤＮＡが宿主細胞の染色体に挿入されてプロウイルスを形成する。そして,プロウイルス状態で,ウイルス遺伝子を転写することで複製と構築に必要なタンパク質のｍＲＮＡらが生産されて,ウイルスを増殖することになる。
【０００３】
ＨＩＶ−１ゲノム（９．２ｋｂ）はｇａｇ，ｐｏｌ，ｅｎｖの構造遺伝子とｔａｔ，ｒｅｖ，ｎｅｆ，ｖｉｆ，ｖｐｕ，ｖｐｒなどのアクセサリー遺伝子と，両端に存在する末端反復配列(ＬＴＲ；long terminal repeat sequence)とで構成されている。
【０００４】
ｇａｇタンパク質及びｐｏｌタンパク質は前駆体タンパク質を分解して生成され，ｅｎｖタンパク質はｇｐ１６０前駆体タンパク質となり，構築過程においてｇｐ１２０とｇｐ４１で分解される。ＨＩＶに最初に感染した際は，症状が無かったり，風邪のような症状が現れて，ウイルスがＣＤ４Ｔ細胞，マクロファージ，ミクログリア細胞などで潜伏感染して，長期の潜伏状態に入る。ｇｐ１２０に対する抗体は感染後３〜２０週目に現れ，この時以後に感染の有無を診断することができる。２〜１０年ほどの潜伏期を経る間に免疫体系に変化等が誘導されて，免疫欠乏症状が現れる前に前駆期症状（エイズ関連症候群（ＡＲＣ：AIDS-related complex）：疲労，発熱，体重減少，下痢）が現れる。ＨＩＶ感染によってＣＤ４Ｔ細胞数が２００／μｌ以下に低減すれば免疫欠乏の症状が現れるので，臨床的にエイズと定義される。
【０００５】
高麗人参(Panax ginseng C. A. Meyer(Panax schinseng Nees))は五加皮科(Araliaceae)のパナックス属に属する多年生宿根草で，数千年の間，東洋圏の国で様々な病気の治療に補助的に使用されてきた。高麗人参はこれまでに多くの薬理実験を通じて，コレステロール低下，脂質過酸化抑制，血圧降下，血流増加，脳血管拡張，心臓機能こう進，抗不整脈，抗血栓，慢性腎不全治療効果，免疫調節作用，記憶力増加，脳代謝こう進，抗ストレス，坑酸化作用，抗老化作用，抗潰瘍及び胃液分泌抑制，抗糖尿，解毒，肝細胞酵素増加，喘息治療，抗炎症，鎮痛作用，貧血治療，生殖能力増進，アルコール血中濃度低下，抗アレルギー，抗ガン剤などの効能を有することが知られている。
【０００６】
また，高麗人参及び紅参は加工法に応じて区分され，高麗人参は未加工のものを指し，乾燥したものを乾参，乾燥されていないものを水参と呼ぶ。紅参(Red Ginseng)は高麗人参を蒸して乾燥させて水分含有量が１４％以下になるよう加工したものを指し，製造過程中に茶色化反応が促進され，濃厚な茶褐色の色を呈する丈夫な形態として円形が維持された高麗人参である。
【０００７】
したがって，約７５％の水分を含有する水参の状態では長期間保存が困難であり，流通状態中に微生物汚染による腐敗又は高麗人参自体が含有する様々な酵素によって高麗人参成分が分解されるが，紅参は加工乾燥により水分が減少しているため，細菌，黴，及び微生物による汚染を防ぎ，体積及び重量が減少するために保存，運搬が容易という長所がある。高麗人参の代表的な有効成分であるサポニンの定量方法と品質管理の発達によって，加工過程中にサポニンが分解されるのを最大限に抑制することが可能となり，サポニンの他にマルトール，ジンセノサイドＲｈ２などの有効成分がさらに生成された。すなわち，高麗人参の主成分はサポニンであり，紅参はこの効能が変質しないように加工したものである。
【０００８】
特に紅参は中枢神経に対して鎮静作用と興奮作用があり，循環系に作用して高血圧や動脈硬化を予防する効果があり，その一方で造血作用及び血糖値を低下させ，肝を保護し，内分泌系に作用して性行動又は生殖効果に間接的に有効に作用し，抗炎及び抗腫瘍作用があり，放射線に対する防御効果，皮膚を保護しながら軟化する作用を有する。また，紅参の効果の中で重要なのは，アダプトゲン効果として周囲環境に起因する各種有害作用の流涙症(epiphora)，各種ストレスなどに対して防御能力を増加させて，生体をより簡単に適応させる効果を有する。これまでに，紅参に対する成分及び薬理的効能に対して，韓国内外で数多くの研究が進められており，特に紅参は坑酸化活性を有することが報告されている（クォン・ヨンフン他，高麗人参学会誌，２４（１），２９−３４，２０００）。
【０００９】
また，本発明者は以前の研究で，ＨＩＶ−１感染患者らを，高麗人参(以下，ＫＲＧと記載する)単独(参照文献１〜４），或いは１９９１年以降にはジドブジン(ＺＤＶ；zidovudine)と共に（参照文献５），１９９７年以降には非常に強力な高活性抗レトロウイルス療法(ＨＡＡＲＴ；highly active antiretroviral drug therapy)により（参照文献６）治療した。臨床学的適用の間（参照文献１〜７），ＫＲＧによる治療とエイズの進行速度との間に意味のある逆相関関係を示した（参照文献８）。ＨＩＶ−１遺伝子の変移率はＫＲＧによる治療と反対関係にある。さらにＫＲＧによる治療はジドブジンに対する抵抗性の発達を遅らせる。本発明者の結果によればＫＲＧによる治療は治療法或いは患者の他の特性に関係なくＣＤ４Ｔ細胞が減少する速度を低減させた。ＫＲＧとＨＡＡＲＴとの混合治療を分析した最近の結果では，薬品抵抗変移の発生なしで一貫されたウイルス調節がこれらの組合せにより可能であることを示した(参照文献7) 。
【００１０】
本発明者のコホートで長期未発症感染者(ＬＴＮＰ；long-term nonprogressor)或いは長期生存者（ＬＴＳ：long-term surviviors)におけるエイズの進行が遅くなった原因をここで説明する。最近，本発明者は持続的なＫＲＧによる治療を受けた１０人のＬＴＳにおけるｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損の比率とＫＲＧの摂取期間との関連性を報告した(参照文献９) 。これら１０人のＬＴＳからのｎｅｆ遺伝子で増幅された生成物を比較すると，ｇａｇ領域と５’ＬＴＲ領域で増幅された生成物に，プロウイルス全体の長さの塩基配列が，二つのバンド（野生型及び短バンド）が高い割合で現れた。
【００１１】
ＬＴＮＰでｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損に対する多くの研究が行われたが，幾つかの場合のみのｇａｇ領域と５’ＬＴＲ領域における大規模な欠損の関連性を現在まで報告した（参照文献１０〜１８）。より具体的に，ＨＩＶサブタイプＣに感染した一人のＬＴＳで，ｇａｇ遺伝子において３個のアミノ酸コドン中に１つの欠損があることが報告された（参照文献１９）。他の研究では２４人の治療経験がない人々の内の２人が５’ＬＴＲで１６ｂｐの欠損及び９ｂｐの小さい欠損を示した（参照文献２０）。しかし，長期間進行がない状態維持又はＨＩＶ感染の進行の速度が遅くなることと，５’ＬＴＲ領域とｇａｇ領域の遺伝的欠陥(defects)との関連は報告されたことがない。
【００１２】
本発明者はエイズの治療方法を研究中に，ＨＩＶ−１に感染した患者に紅参を長期間投与すると，ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲとｇａｇ遺伝子の欠損を確認したことによって本発明を完成した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は高麗人参を有効成分として含む，ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記のような本発明の目的を達成するために，本発明は高麗人参を有効成分として含有するＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物を提供する。以下，本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明は，高麗人参の摂取によりウイルス成長及びエイズ病因と密接な関連があるＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子が欠損する可能性を示したことに特徴がある。
【００１６】
好ましくは，前記高麗人参が紅参であることを特徴とする。
【００１７】
本発明の一実施例では，５’ＬＴＲ領域とｇａｇ領域での大規模な欠損（ｇΔ）の発生と，ＫＲＧの摂取との関連性があるかを調べるために，ＫＲＧ（総量１３，３６４±５，３６４ｇ）で１２年以上治療した１０人のＬＴＳと，ＫＲＧを摂取しなかった又は少量（総量１，４３６±１，０２７ｇ）を摂取した８人のＬＴＳ（対照群）から，部分的５’ＬＴＲ 部分とｇａｇ遺伝子を代表する１，１２５ｂｐのＰＣＲ産物の塩基配列を調査した。前記１０人のＬＴＳで，１８９個のＰＣＲ生成物が８０個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）サンプルで得られ，全体８０個のＰＢＭＣ中４４個（５５％）と１８９個のＰＣＲ産物中の７１個（３７．６％）とが大規模な欠損（ｇΔ）を示した。５５％のＰＢＭＣ及び３７．６％のＰＣＲ産物が１０人のＬＴＳで見られた一方，８人の対照群ＬＴＳの値は各々３０．３％と１４．８％であった。このような差は統計的に意味がある（Ｐ＜０．０５及びＰ＝０）。さらに，紅参を服用しなかった一般対照群患者２８人の欠損遺伝子比率はＰＢＭＣとＰＣＲ産物を基準として各々１３．３％と８．３％を示した（実施例３，図１〜図３参照）。
【００１８】
したがって，個体に紅参を投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子を欠損を誘導でき，これはエイズの予防及び治療に使用できる。
【００１９】
本発明の薬学的組成物の有効成分として使用される紅参は公知の方法で製造することができる。
【００２０】
一般的に紅参は水参（水分含有率：約７５％）を一定の温度条件下で水蒸気で蒸す蒸煮段階，及び，蒸煮された水参を乾燥させる乾燥段階を経て製造される。このように製造された紅参を加熱抽出することによって紅参抽出液を製造し，これを濃縮して紅参濃縮液を製造することができる。
【００２１】
一方，本発明では上記紅参抽出液又は濃縮液を単独で使用，又は，一つ以上の薬学的に許容される担体，賦形剤又は希釈剤を追加で含ませて，通常の方法で剤形化した後に使用できる。前記「薬学的に許容される」ということは生理学的に許容され，ヒトに投与される際に，通常，胃腸障害，めまいのようなアレルギー反応，又はこれと類似の反応を起こさない組成物をいう。また，上記のように剤形化された本発明の紅参は適切な投与方法を通じて投与できる。適合した投与方法としては経口投与でありうる。
【００２２】
望ましくは粉末，顆粒，錠剤，丸剤，糖衣錠剤，カプセル剤，液剤，ゲル剤，スラリー剤，懸濁液などのような経口投与用製剤の形態で当業界に公知の方法を利用して剤形化することができる。例えば，経口用製剤は活性成分を固体賦形剤と配合した後，これを粉砕して適切な補助剤を添加した後，顆粒混合物に加工することによって錠剤又は糖衣錠剤を得ることができる。
【００２３】
適合した賦形剤の例えばラクトース，デキストロース，スクロース，ソルビトール，マンニトール，キシリトール，エリスリトール，及びマルチトールなどを含む糖類と，とうもろこしでんぷん，小麦でんぷん，米でんぷん及びじゃがいもでん粉などを含むでん粉類，セルロース，メチルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含むセルロース類，ゼラチン，ポリビニルピロリドンなどのような充填剤が含まれてもよい。また，場合により架橋結合ポリビニルピロリドン，寒天，アルギン酸又はアルギン酸ナトリウムなどを崩解剤として添加することができる。また，本発明の薬学的組成物は抗凝集剤，潤滑剤，湿潤剤，香料，乳化剤及び防腐剤などをさらに含有してもよい。
【００２４】
また，本発明の薬学的組成物の有効成分である紅参は，市販のものを購入して使用できる。本発明の一実施例ではコリア ジンセン コーポレイションから販売されている紅参粉末カプセルを使用した。
【００２５】
本発明の薬学的組成物はほ乳動物，特にヒトを含む動物に投与できる。望ましくは上記ＨＩＶ−１に感染した患者に有効な量で投与できる。前記「有効な量」というのは試験管内又生体内でＨＩＶ−１のｎｅｆ遺伝子を欠損させるのに効果的な量を指す。
【００２６】
本発明による薬学的組成物の有効量は投与経路，治療回数，治療が必要な個体の年齢，体重，健康状態，性別，疾患の重症度，食餌及び排せつ率など様々な要因を考慮して，当業者が特定用途に伴う適切な有効投与量を決めることができる。望ましくは，本発明の紅参を含む薬学的組成物の有効量は男性の場合５０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日，女性の場合２０〜７０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００２７】
本発明の薬学的組成物は個体の診断後にエイズ疾患の進行を遅延させるために持続的に投与することができる。
【００２８】
一方，本発明で上記５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損は早期成熟停止コドン(premature stop codon)を有すること，開始コドンが欠如することで定義できる。
【００２９】
本発明の一実施例では１０人のＬＴＳから生成された増幅産物から非メチオニン開始コドン，Ｇ‐Ａ超変異(G-to A hypermutation)による早期成熟停止コドン及び小さい欠損等の遺伝的欠陥等を観察した（実施例４）。各患者及び１０人のＬＴＳ内において欠損，重複又は挿入の大きさは全て異なって現れた。
【００３０】
８人の対照群ＬＴＳでも，早期成熟停止コドン，非メチオニン開始コドンによる遺伝的欠陥が観察された（図４参照）。
【００３１】
望ましくは，本発明の方法によって欠損した５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子は，以下の配列で示される。ジェンバンク登録番号ＥＦ３７０１７２，ＥＦ３７０１７３，ＥＦ３７０１７５，ＥＵ０４７６１２，ＥＦ３７０１８４，ＥＦ３７０１８６，ＥＦ３７０１８７，ＥＦ３７０１８８，ＥＦ３７０１９１，ＥＦ３７０１９２，ＥＦ３７０１９３，ＥＦ３７０１９６，ＥＦ３７０１９７，ＥＦ３７０１９９，ＥＦ３７０２０１，ＥＦ３７０２００，ＥＦ３７０２０２，ＥＦ３７０２０５，ＥＦ３７０２０７，ＥＦ３７０２１１，ＥＦ３７０２１３，ＥＦ３７０２１１５，ＥＦ３７０２１１６，ＥＦ３７０２１１８， ＥＦ ３７０２１９， ＥＦ ３７０２２１， ＥＦ３７０２２３，ＥＦ３７０２２４，ＥＦ３７０２２５，ＥＦ３７０２２６，ＥＦ３７０２２７，ＥＦ３７０２２８，ＥＦ３７０２３１，ＥＦ３７０２３５，ＥＦ３７０２３７，ＥＦ３７０２３９，ＥＵ０４７６４７，ＥＦ３７０２４５，ＥＦ３７０２５０，ＥＦ３７０２５１，ＥＦ３７０２５２，ＥＦ３７０２５３，ＥＦ３７０２５６，ＥＦ３７０２５９，ＥＦ３７０２６２，ＥＦ３７０２６１，ＥＦ３７０２６５，ＤＱ２９５１９６，ＥＦ３７０２７５，ＥＦ３７０２７６，ＥＦ３７０２７７，ＥＦ３７０２７７８，ＥＦ３７０２７９，ＥＦ３７０２８２，ＥＵ０４７６７３，ＥＦ３７０２８３，ＥＦ３７０２８５，ＥＦ３７０２８６，ＥＦ３７０２８７，ＥＦ３７０２８８，ＥＦ３７０２９２
【発明の効果】
【００３２】
前述のように，本発明の薬学的組成物はＨＩＶ感染個体に投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損をもたらすことができる。したがって，本発明はエイズの予防及び治療に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
以下，本発明を実施例によって詳細に説明する。しかし，下記実施例は本発明を例示するためのものとして，本発明は下記実施例によって限定されることなく様々に修正及び変更できる。
【００３４】
図１は抗レトロウイルス治療なしに最小限の高麗人参を投与，或いは，高麗人参を投与しなかった８人の対照群ＬＴＳ（図１ｋ〜図１ｒ）と，最大限の高麗人参を投与した１０人のＬＴＳ（図１ａ〜図１ｊ）に対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示す。紅参の投与期間は直線で示す。３つのＰＣＲ反応が１つのサンプルを増幅させることに伴い，５’ＬＴＲ及びｇａｇ遺伝子の配列に使用されたサンプル，及び，５’ＬＴＲ及びｇａｇ遺伝子の大規模な欠損を示すサンプルは各々の下方に下側の矢印及び上側の矢印で示された。両グループで，ＣＤ４Ｔ細胞数は１０年に亘って減少した。高麗人参の投与量を除いて二つのグループ間に有意な差はなかった。
【００３５】
図２は最も初期に診断された３人のＬＴＳから得られた末梢血単核球での５’ＬＴＲとｇａｇ配列の分析を示す。１％のアガロースゲルに対する電気泳動によって増幅された生成物が分離された。患者８７−０５，８９−１７，９０−０５由来のＰＣＲ生成物はレーン１−１０，１１−１８，１９−３１各々で発現した。患者８７−０５は４種の野生型（レーン１，３，６，９）と共に３個の重複バンド（レーン２，７，１０）と二つの単一の短バンド（レーン４，８）のように五個の短バンドを有していた。患者８９−１７は７個の短バンドを示し（レーン１１，１２，１３，１４，１６−１８），この中でレーン１４は一つの短バンドであった（１４％）。患者９０−０５は７個の短バンドを示した（レーン１９，２２，２３，２４，２６，２９，３０）。その中でレーン２２，２４，２６，２９，３０は一つの短バンドを示した（７１％）（Ｍ：マーカー，ＷＴ：野生型バンド）。
【００３６】
図３は３つのグループの大規模な欠損の頻度を比較した棒グラフである。大規模な欠損を表わす末梢血単核球サンプルの比率は他の２８人の患者（１３．３％）だけでなく９人の対照群ＬＴＳの２６．７％よりＫＲＧを投与されたＬＴＳでさらに高かった（５５％）。その上，大規模な欠損に対する陽性のＰＣＲ産物の比率は，高麗人参を投与した１０人のＬＴＳにおいて３７．６％であり，８人の対照群ＬＴＳにおける比率である１３．９％，並びに，他の患者２８人における比率である８．３％よりも有意に高かった。２８人の患者中には患者８７−０５及び９０−５０の夫人も含まれた。その上，彼らの一部はＨＩＶ−１診断後に１０年が経過していないが，ＬＴＳになる可能性を有していた。
【００３７】
図４はＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列を示す。米国で非進行性患者由来のｇａｇタンパク質の共通アミノ酸配列は一番上の列に示されており（参考文献２３），１０人のＬＴＳに対する予想配列は下の列に示す。点は配列が同一であることを示し，直線は変異部分以外の部分欠損或いは大規模な欠損を意味する。クエスチョンマークは早期成熟停止コドンを意味する。アミノ酸配列は一つの文字コードで示した。各配列の出処は各患者コード（初めの２桁の数字はＨＩＶ診断年度を意味し，ハイフンの後の２桁の数字は韓国で各患者に割り当てられた固有の番号を示す）によって確認された。それぞれのジェンバンク登録番号に対するサンプルの採取日(date of sampling)は図７に示した。図７では，ｇａｇ遺伝子の欠損を含まない７種の塩基配列は示されなかった。
【００３８】
図５は，ＨＩＶ−１に感染した１８人のＬＴＳの臨床学的特徴を示す表である。去る一年を除いて，ＬＴＳ中の患者９１−２０のコンプライアンス(compliance)は患者９０−０５と共に最も良く，彼らの実際の高麗人参の服用量は個人的な購買によって２２，４２２ｇ以上だった。患者９１−２２及び患者９１−２３は患者９１−２０から提供された血液からＨＩＶ−１に感染した。ＬＴＳ８７−０５を除いて，全ての患者はＨＩＶ−１サブタイプＢの韓国サブクレイド(subclade)に感染した。
【００３９】
図６は，１８人のＬＴＳ及び２８人の高麗人参の非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【００４０】
図７は，ｎｅｆ遺伝子で大規模な欠損と比較して，５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の頻度を示す。
【実施例１】
【００４１】
実験対象者及びＫＲＧによる治療
研究群は最大値のＫＲＧを摂取した１０人のＬＴＳ，８人の対照群ＬＴＳ，及び，ＫＲＧを摂取したことがない２８人のＨＩＶ感染患者で構成された。
【００４２】
本研究で１０人のＬＴＳは，本発明者の以前の研究で詳しく説明された（参照文献９）。前記１０人全員は，１９８７年から１９９６年３月までの間に診断され，本研究期間の間，１人の患者（９３−０４）を除いて,いかなる抗レトロウイルス治療もしなかった。その患者は間歇的にＺＤＶ（１日の容量２００ｍｇ又は３００ｍｇ）を１９９３年４月から１９９７年８月まで投与した。
【００４３】
８人の対照群ＬＴＳは本発明者のコホートから選択された。上記対照群ＬＴＳに分類された患者らは１９９６年以前にＨＩＶ−１感染が診断され，彼らは非常に強力な抗レトロウイルス薬品による治療をしない状況で最小限の容量（１，５２６±１，１８３ｇ）のＫＲＧを投与する，或いは，全くＫＲＧを投与しなかった（患者８９−０５）。患者９１−２３のみが１９９３年４月から１９９９年８月までＺＤＶを投与された。患者８９−０５は１９９７年に他国に行ったため，本発明の研究サンプルから除去した。８人の対照群ＬＴＳの中に，ＬＴＳ９１−２０から輸血を受けた二人の受血者（患者９１−２２及び９１−２３）が追加された。患者８９−２６と９２−２３はＫＲＧの摂取を嫌った。患者９０−０１は血漿を８３回売血した血漿提供者であった。その患者は提供者Ｏと説明された（参照文献２１）。したがって，１０人の高いＫＲＧ摂取ＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳとを比較すると，最も基本的な特徴は似ていた。
【００４４】
言い換えれば，１０人のＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳとの間には基本的な病気の進行率又はＣＤ４Ｔ細胞数において大きな差が無く，単にＫＲＧの摂取量にのみ差があった。
【００４５】
さらに，他の２８人の対照群患者を調査した。これら２８人中には患者８７−０５と９０−５０の夫人も含まれた。これら２８人の患者の一部はＬＴＳだった。しかし，彼らは１９９７年以後に診断されたので，ＬＴＳグループに含まれなかった。各参加者から提供された同意書を受理した。
【００４６】
ＨＩＶ−１感染患者に対するＫＲＧによる治療は，１９９１年後半に韓国の国立保健院(National Institutes of Health)で始まった（参照文献１，２）。実験に用いたＫＲＧはコリア ジンセン コーポレイションから販売されている紅参粉末カプセルを使用した。各患者へのＫＲＧの一日の投与量は，男性の場合には５．４ｇ（３００ｍｇのカプセル６個を一日に３回投与）であり，女性の場合には２．７ｇ（３００ｍｇのカプセル３個を一日に３回投与）であった。各患者のＫＲＧの投与期間を図１に示す。
【００４７】
１０人のＬＴＳに投与された紅参の平均量は１５５±２８ヶ月の間に１３，３６４±５，３６４ｇであり，８人の対照群ＬＴＳでは１３２±２９ヶ月の間に１，４３６±１，０２７ｇであった（図５参照）。１０人のＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳにおいてＫＲＧの年間投与量は各々１，０３５ｇ及び１３１ｇであった。ＫＲＧの投与レベルにおける７．９倍の差は統計的に有意である（Ｐ＜０．００１）。
【実施例２】
【００４８】
ＣＤ４Ｔ細胞数と血漿ＨＩＶ−１ＲＮＡコピーレベル
３ヶ月〜６ヶ月間隔で実施例１の各患者から採血を，各サンプルで末梢血単核球細胞(PBMC；peripheralblood mononuclear cells)をフィコエリトリン(PE；phycoerythrin)-及び蛍光イソチオシアネート（FITC;Fluorescein Isothiocyanate）−コンジュゲートされたＣＤ４抗原に対する抗体と共に各々インキュベートした(サイマルテスト試薬（Simultest reagent）;ベクトン・ディッキンソン)Becton Dickinson, 米国，カリフォルニア州，サンノゼ)。ＣＤ４Ｔ細胞のレベルはファクスキャン(FACScan)（ベクトン・ディッキンソン）のフローサイトメーター を利用して測定した。血漿のＨＩＶ−１のＲＮＡ濃度はアンプリカーＨＩＶ−１モニタキット(Amplicor HIV-1 Monitor kit)(ロシェ・ダイアグノスティックス（Roche Diagnostics）,米国，ニュージャージー州，ブランチバーグ（Branchburg）)で測定された(参照文献７）。
【００４９】
ＣＤ４Ｔ細胞数は紅参を摂取した１０人のＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳで毎月６ヶ月目で測定され，その結果は図１に示すものと同様である。
【００５０】
最大限の紅参の投与による治療を受けた１０人のＬＴＳのＣＤ４Ｔ細胞数は，１６８±２９月後の最初の測定において，５５５±２０８／μｌから２４５±１６０／μｌへと大幅に減少した（年間２２／μｌの減少，図１ａ〜図１ｊ参照）。また，８人の対照群ＬＴＳのＣＤ４Ｔ細胞数は，１３２±２９月後の最初の測定において，５７４±２２２／μｌから３５３±２９７／μｌへと減少した（年間２０／μｌの減少，図１ｋ〜図１ｒ参照）。
【００５１】
両グループ全てで，ＣＤ４Ｔ細胞は１０年に亘って，同様の形態で減少したことを確認できた。
【実施例３】
【００５２】
部分的５’ＬＴＲ部位とｇａｇ遺伝子の増幅
実施例２で収得したインキュベートされなかったＰＢＭＣｓからプロウイルスＤＮＡを抽出した。ファーストラウンド（first round）プライマーＣＥ２３（５’−ｔｇｔｇｇａｔｃｔａ ｃｃａｃａｃａｃａａ ｇｇｃｔａｃｔｔ−３’；４６〜７３；配列番号１）及び５１４（５’−ｔｃｃａｇａａｔｇｃ ｔｇｇｔａｇｇｇｔａ ｔａｃ−３’；１，６１７〜１，６４０；配列番号２），セカンドラウンド（second round）プライマーＣＥ１（５’−ｃｇａｇａｇｃｔｇｃ ａｔｃｃｇｇａｇｔａ ｃｔａ−３’；２９７〜３１９；配列番号３）及び５１２（５’−ｃｔｇｃａｇｃｔｔｃ ｃｔｃａｔｔｇａｔｇ ｇｔｃ−３’；１，３９８〜１，４２０；配列番号４）及びサードラウンド(third round)プライマー５０１（５’−ｇｔｇｔｇｇｃｃｔｇ ｇｇｃｇｇｇａｃｔｇ−３’；３８０〜３９９；配列番号５）及び５１０（５’−ｇａｔｇｔａｃｃａｔ ｔｔｇｃｃｃｃｔｇｇ ａ−３’；１，２０２〜１，２２２；配列番号６）を利用したダブル−（稀にはトリプル−）ネステッドＰＣＲによって，２９７番〜１，４２１番（ここでのナンバリングは，ＨＩＶ ＮＬ４−３の配列に由来する）の１，１２５ｂｐのＰＣＲ産物が各サンプルから増幅された（上記２９７番〜１，４２１番の位置は部分的５’ＬＴＲ領域とｇａｇ遺伝子を代表する部分である）。
【００５３】
陰性対照群を含む最高で４つのＰＣＲ反応は，あらゆるサンプルで一度に実施され，一方，（陰性対照群を含む）合計５つのＰＣＲ反応がｎｅｆ遺伝子を増幅するために使用される。ＰＣＲ産物を精製して直ちにシークエンシングした。ＰＣＲ汚染の有無はＢＬＡＳＴ検索，マニュアル整列によるアミノ酸コドン比較及び系統分析の各手続きによりＰＣＲ産物の物理的分離によってモニターした。
【００５４】
実験結果は平均±標準偏差で示した。統計の有意性はＳＰＳＳパッケージ（バージョン１２．０）(SPSS package version 12.0)を使用してスチューデントの両側ｔ検定（Student’s two-tailed t-test）及びカイ二乗検定によって評価された。
【００５５】
実験結果
それぞれ異なった時点で１０人のＬＴＳから回収したＰＭＢＣサンプル８０個から，１８９個のＰＣＲ産物を増幅した（図１ａ〜図１ｊ参照）。多くの時点で１０人のＬＴＳ全員が５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子領域でｇΔを示した（図１参照）。８０個のサンプル中４４個（５５％）で欠損が観察された（図２参照）。１８９個のＰＣＲ産物中で，７１個（３７．６％）がｇΔを示した。これらの中で，２３個（３２．４％）の増幅は野生型遺伝子無しで単に一つの短バンドを示した。７１個のｇΔの特徴を図７に要約して示す。
【００５６】
５個のＰＣＲ産物（２００７年１月に患者８７−０５，２００１年７月に患者８９−１７，１９９３年１０月に患者９０−０５，及び２００６年２月及び２００４年５月に患者９２−１３から得る）と２個のＰＣＲ産物（１９９３年１０月に患者９０−０５からΔ８６ｂｐ及び２００６年に患者９０−５０からΔ４２０ｂｐ）は単に５’ＬＴＲ部位内又はｇａｇ遺伝子内でｇΔを各々含んでいた（表３）。残存したＰＣＲ産物における欠損は，５'ＬＴＲの両側末端領域（少なくとも位置７５３を含む；Δ３７ｂｐ）とｇａｇ遺伝子の開始部分（ＨＩＶ−１ ＮＬ４３における位置８１８のΔ２９ｂｐ）に位置する。換言すれば，欠損はｇａｇ遺伝子開始コドンの近傍で６６ｂｐ以上だった。
【００５７】
したがって，５’ＬＴＲ領域でｇΔの比率は３６．５％（６９／１８９）であり，ｇａｇ遺伝子に基づいたｇΔ比率は３４．９％（６６／１８９）であった。これは，ＫＲＧの投与がｇａｇ遺伝子よりも５’ＬＴＲに影響を与えたことを示す。
【００５８】
サンプルが入手できなかった患者９１−２０，及び，９３−６０は別にして，ＫＲＧ摂取開始後の５’ＬＴ領域及びｇａｇ領域におけるｇΔの最初の検出は，ｎｅｆ遺伝子の欠損の最初の検出よりも早かった（参照文献９）。ｇΔの最初の検出に対するＫＲＧ摂取開始からの中位時間は，２６ヵ月（１９〜１０１ヵ月の範囲）であった。これは，ｎｅｆ遺伝子において欠損の検出に要する時間よりもかなり短かった（参照文献９）。
【００５９】
患者８７−０５は移入されて混入した凝固因子９から由来したＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及びＨＩＶ−１サブタイプＢに同時感染した。この患者には１９９４年６月にＫＲＧの投与が開始された。全ての増幅物で９ｂｐの小さい欠損があったが，１０人のＬＴＳ中で，唯一ｇΔｎｅｆを示さなかった(参照文献９）。驚くべきことに，本発明者は１９９７年４月に得られた最も初期に使用したサンプルでｇΔを観察し，１２個のサンプル中４個から得られた３６個のＰＣＲ産物から全７個のｇΔを観察した（図１ａ〜図１ｊ，図５参照）。この患者は２００７年４月からはエイズに関連した症状を示さなかった。この症例は，抗レトロウイルス治療法を実施せずに２０年以上生存した，韓国における最初の症例に該当する。
【００６０】
患者８９−１７へは１９９１年１２月にＫＲＧの投与が開始された。そして投与に対するコンプライアンスは一貫していなかった。１９９３年７月に報告された一つのｇΔは非常に例外的だった。なぜなら，Δ９１７ｂｐの欠損がｐｏｌ遺伝子の４７４ｂｐ（逆方向に，ＮＬ４−３の４２９６ｂｐから４０３７ｂｐ）及びｇａｇ遺伝子の末端部分（２０２９ｂｐから１８３８ｂｐ）に置換されたためである。この患者には２００２年２月にＨＡＡＲＴが開始され，ＣＤ４Ｔ細胞数は，２００７年４月には５１３／μｌであった。
【００６１】
患者９０−０５は１９９０年２月にＨＩＶ−１感染と診断され，１９９１年１２月にＫＲＧの摂取を開始した。上記患者は本研究でＫＲＧによる治療に対し最も優秀なコンプライアンスを示した。２１，５２２ｇのＫＲＧの供給と共に，上記患者自ら個人的に所持したＫＲＧを摂取した。ＫＲＧの一日の服用量は９５％のコンプライアンスで６．０ｇ（３００ｍｇのカプセル１０個を１日２回）であった。ｇΔの最初の検出は，ＫＲＧ治療の開始から１１１ヵ月後（合計１２，０１２ｇが摂取された）の２００１年１月におけるｇΔｎｅｆの最初の検出よりも８７ヵ月早かった。ｇΔの例と残り７人のＬＴＳに対する詳しい情報は図１及び図６に示す。
【００６２】
また，追加的に８人の対照群ＬＴＳから回収した３３個のＰＢＭＣサンプルから８８個のＰＣＲ産物を増幅した。１３個のｇΔ（増幅されたものの内の１４．８％）は１０個のＰＢＭＣサンプルに存在した（全体の３０．３％）。１０人のＬＴＳは８人の対照群ＬＴＳよりＰＢＭＣサンプルとＰＣＴ産物全てでｇΔの著しく高い比率を含んだ（前者の場合はＰ＜０．０５，後者の場合はＰ＜０．０００１）（図３参照）。
【００６３】
また，ＫＲＧを投与しなかった２８人の患者から臨床学的段階に関係なく得られた３０個のＰＢＭＣサンプルから６０個のＰＣＲ産物を増幅した。５個のｇΔ（増幅されたものの内の８．３％）は４個のＰＢＭＣで存在した（全体の１３．３％）。
【実施例４】
【００６４】
遺伝的欠陥と小さい欠損
大規模な欠損の他にも，本発明者らは非メチオニン開始コドン，Ｇ‐Ａ超変異(hypermutation)による早期成熟停止コドン及び小さい欠損のような遺伝的欠陥を観察した。１０人のＬＴＳの中で，患者８７−０５は４個の配列（ＥＵ０４７６０１，ＥＵ０４７６０５，ＥＵ０４７６０７，ＥＵ０４７６０９）で早期成熟停止コドンを有しており，患者８９−１７も早期成熟停止コドン及び，開始コドン（ジェンバンク登録番号ＥＦ３７０１９３）としてイソロイシンを有した。患者９０−１８はｇａｇ遺伝子で６ｂｐの挿入を有しており，患者９２−１３は１０２ｂｐ（ジェンバンク ＥＦ３７０２５２）の二つの重複(duplications)と，５’ＬＴＲ領域に１５９ｂｐの欠損，及び，Ｇ‐Ａ超変異（ジェンバンク ＥＦ３７０２５６）を有しており，３２７と３２８との部分（ジェンバンク ＥＦ３７０２５８）間にも６ｂｐの挿入を有していた（図４参照）。
【００６５】
８人の対照群ＬＴＳの内，患者９１−２２は早期成熟停止コドン又は３個の配列（ジェンバンク ＥＦ３７０３１４，ＥＵ０４７６５４，そしてＥＵ０４７６５５）で開始コドンとしてイソロイシンを有していた。患者８９−２６は１個の配列（ＥＵ０４７６３５）で２つの早期成熟停止コドンを有していた。
【実施例５】
【００６６】
ＣＤ４Ｔ細胞数に従う大規模な欠損の頻度
本発明者はＣＤ４Ｔ細胞数に従う大規模な欠損の頻度を分析した。１０人のＬＴＳのＰＣＲ増幅産物をＣＤ４Ｔ細胞数２００／μｌ以下，２００〜４００／μｌ，４００／μｌ以上でグループを作った。ＫＲＧを投与した１０人のＬＴＳで大規模な欠損の頻度は４７．４％（９／１９），５１．８％（１４／２７）及び６１．８％（２１／３４）で現れ，これはＣＤ４Ｔ細胞数に対する若干の依存性を示すことができる。しかし，８人の対照群ＬＴＳでは大規模な欠損比率は４４．４％（４／９），２０％（４／２０），５０％（２／４）であり，また，ＫＲＧを投与しなかった２８人のＨＩＶ−１陽性患者は１８．２％（２／１１），１４．３％（１／７），８．３％（１／１２）であった。
【００６７】
考察
本発明者は韓国でＬＴＳ又はＬＴＮＰの健康に持続的な関心を持っており，その結果，韓国国民において，有益な宿主因子，例えばＣＣＲ５又はＨＬＡ−Ｂ５７におけるΔ３２ｂｐが存在しないにもかかわらず，本発明者は１９９３年１２月３１から診断された３２３人のＨＩＶ−１感染患者の中で多くのＬＴＳを観察することができた。
【００６８】
より具体的には，１９８７年に韓国で９人がＨＩＶ−１感染患者と診断され，その内の３人の患者はまだ生存しており，この３人全員がＫＲＧの投与を一つの治療法又はＨＡＡＲＴと並行して行ってきた。ＬＴＳ８７−０５はこれら患者の内の１人として，１９９６年６月以後にＫＲＧを摂取してきた（図１ａ参照）。これら患者の内の他の２人はＨＡＡＲＴをＫＲＧの投与と共に１９９８年から１９９９年まで受け，彼らのＣＤ４Ｔ細胞数は１９９８年には２３１／μｌ，１９９９年には６／μｌ，２００４年１２月には１，０５２／μｌに，２００６年には１，１２７／μｌに各々増加した。
【００６９】
また，１９８８年には２２人がＨＩＶ−１患者として診断され，ＫＲＧの投与により治療してきた２人の患者（９％）のみが生存している。患者のＨＩＶ−１サブタイプがＣＲＦ０２＿ＡＧであるため，この患者は本発明の研究に含まれなかったが，上記患者はＣＤ４Ｔ細胞数が５００／μｌ以上のＬＴＮＰに分類された。１９９７年以降診断された多くの患者は，ＫＲＧの投与と共にＨＡＡＲＴを受け，薬剤耐性突然変異が欠如していることを示す。これらの患者は，併用療法に驚くほど良好な反応を示した。
【００７０】
本発明者は以前行った研究を通じて，ＨＩＶ−１感染患者のＫＲＧによる治療がｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損（参照文献９）の高い頻度と関連があり，病の進行が遅くなると報告した（参照文献１，８）。
【００７１】
本発明では，各サンプルから３個のＰＣＲ産物を増幅したところ，これはｎｅｆ遺伝子から増幅された４個のＰＣＲ産物より少ない（参照文献９）にもかかわらず，本発明者は同じ１０人のＬＴＳで，ｎｅｆ欠損（サンプルの３４．３％とＰＣＲ産物の１８．８％）（参照文献９）と比較して，大規模な欠損（サンプルの５５％，ＰＣＲ産物の３７．６％）のさらに高い頻度を観察することができた（Ｐ＜０．０００１）。５'ＬＴＲ／ｇａｇの欠損の頻度はｎｅｆ遺伝子の欠損で確認された頻度よりも１．６倍及び２．０倍高かった。全体で８０個のサンプルの内，６１個は以前にｎｅｆ遺伝子増幅にも適用されたことがあり，上記６１個のサンプルの内，１３個（２１．３％）は２つの遺伝子全てで大規模な欠損を示した。特に，患者８７−０５，８９−１７，９０−０５，９０−５０，９６−５１はｎｅｆ遺伝子より,５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子で有意にさらに高い大規模な欠損頻度を示した（Ｐ＜０．０５）（図５参照）。また，大規模な欠損を示したサンプルの比率はＫＲＧによる治療を受けた１０人のＬＴＳで３７．６％確認され，これは，８人の対照群ＬＴＳ（１４．８％）及び２８人のＨＩＶ−１感染患者（８．３％）の場合より有意にさらに高かった。さらに，本発明で８人の対照群ＬＴＳ又は他の２８人の患者のどのグループの場合にも大規模な欠損の頻度とＣＤ４Ｔ細胞数との間にいかなる関連がないことを確認した（実施例５）。このような発見によって，大規模な欠損とＫＲＧの摂取との間の関係が証明される。
【００７２】
さらに，ｇΔとＫＲＧの摂取との関連性は，８人のＬＴＳ対照群又は別の２８人の患者においてｇΔｓの頻度とＣＤ４Ｔ細胞数との間に関連性が無いことを発見したことによっても支持される。この知見は，１０人のＬＴＳのＣＤ４Ｔ細胞に対する中程度の依存性との良好な対比を示す。ＫＲＧによる治療を行った1０人のＬＴＳの中でも，安定した良好な付着性を有する患者８７−０５，９０−０５，９２−１３，９６−５１はＣＤ４Ｔ体細胞数を維持し，一方，過去１〜２年の間に良好な付着性を示さなかった患者９０−５０，９１−２０，９３−６０は，ＣＤ４Ｔ細胞数の急激な減少を示した。この結果に基づき，ＣＤ４Ｔ細胞の減少は，すでに患者８９−１８及び，９０−１８において示された。あらゆるエイズ関連の症状が無く１０年以上が経過すると，多くの患者は，ＫＲＧの投与を怠る，或いは健康状態に注意を払わなくなる傾向がある。
【００７３】
幾つかの論文において，ＬＴＮＰにおけるウイルス配列の全長の遺伝子の特徴が発表されている。アレクサンダー（Alexander）他（参照文献２２）は，ｎｅｆ遺伝子以外に他の遺伝子で欠陥を発見できず，早期成熟停止コドン，アウト−オブ−フレーム欠損（out-of-frame deletions）及び全体欠損を発見した。通常でない多形性(polymorphism)とｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損は８人のＬＴＮＰから発現した。また，フアン（Huang）他（参照文献２３，２４）は，８人のＬＴＳから５’ＬＴＲ及びｇａｇ遺伝子において遺伝的欠陥を報告した。この研究でウイルス配列の全体が得られ，一人の患者のみに，５’ＬＴＲとｇａｇ遺伝子においてＧ‐Ａ超変異が発現した。最近，カルギ（Calugi）他はｅｎｖ遺伝子（ｎｅｆ遺伝子のそばに位置する遺伝子）で大規模な欠損を確認した(参照文献２５）。ブラックソン（Blankson）他（参照文献２６）は，５０コピー／ｍＬ未満の血漿ＲＮＡのウイルス量を有する，抑制因子におけるＨＩＶ−１全長の塩基配列においてもいかなる大規模な欠損は観察できなかった。
【００７４】
ＨＩＶ−１遺伝子の発現は，ＴＡＴＡボックスと，転写因子ＮＦ−κＢ及びＳｐ１（参照文献２７）の結合部位とを含むＬＴＲにおいて幾つかの非常に高く保存されたシス作用調節要素(cis-acting regulatory elements)によって調整される。ある成分がＮＦ−κＢとＡｐ−１転写因子活性をヒト細胞株で抑制することが知られている（参照文献２８）。ＬＴＲ領域はＨＩＶ−１の他の部分よりＫＲＧの摂取によって，影響を受けることが可能である。
【００７５】
本発明において，５’ＬＴＲの大規模な欠損は患者８７−０５（ｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損を示さなかった）を含む１０人のＬＴＳで観察された。さらに，観察された大規模な欠損の各々のサイズは大きいが，遺伝子内で単一部位にのみ位置していた。本発明者らは６人のＬＴＳ（患者９０−０５，９０−１８，９０−５０，９１−２０，９２−１３及び９６−５１）からｅｎｖ遺伝子大規模な欠損（＞１，０００ｂｐ）をＨＩＶ−１全体の長さ塩基配列が得られた時に確認した（データ図示せず）。
【００７６】
したがって，ＫＲＧの摂取と遺伝的欠陥との間の関係なしで，本発明の観察は単に本発明の研究で観察された様々な有益な要素の中の一つの発見に過ぎなくても，本発明の結果は５’ＬＴＲ領域とｇａｇ領域における大規模な欠損が，ＨＩＶ疾病の進行率と有意に関係があるという一次的証拠を提供している(参照文献１〜９）。ウィルス遺伝子欠損は，どのようにＬＴＳ又はＬＴＮＰに貢献するかについての可能なメカニズムに関して，我々は，遺伝子欠損がＫＲＧの摂取による免疫調整の間接的な結果ではないかと考える。ＫＲＧがＴｈ１サイトカインを通じた細胞媒介性免疫反応を媒介して（参照文献２９〜３２），ＨＩＶ−１感染で全般的な免疫活性状態(generalized immune activation state)を抑制することがよく知られている。それにもかかわらず，ＫＲＧを投与しないＬＴＳが相変らずＨＩＶに感染した他の２８人の患者よりさらに高い５’ＬＴＲ／ｇａｇ欠損を有するということは，ＫＲＧの摂取が唯一の要素ではないと考えられる。このような知見は，ＬＴＳ又はＬＮＴＰの延命にとって，ＫＲＧによって誘導された遺伝的欠損が重要であることを裏付ける。
【００７７】
塩基配列データ
全３３６塩基配列の内，１７８個がジェンバンクに提出され，ジェンバンク登録番号ＥＦ３７０１７２〜ＥＦ３７０３４９，ＥＵ０４７６００〜ＥＵ０４７６６７，ＥＵ０４７６７０〜ＥＵ０４７６７６及びＥＵ０４７６８１〜ＥＵ０４７６９３が付与された。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
詳述したように，本発明の薬学的組成物はＨＩＶ感染個体に投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子での欠損を誘導することができる。したがって，本発明はエイズの予防及び治療に役立つよう使用できる。
【００７９】
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【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１ａ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｂ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｃ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｄ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｅ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｆ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｇ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｈ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｉ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｊ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｋ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｌ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｍ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｎ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｏ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｐ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｑ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｒ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図２】最も初期に診断された３人のＬＴＳから得られた末梢血単核球での５’ＬＴＲとｇａｇ配列の分析を示す。
【図３】３つグループの大規模な欠損の頻度を比較した棒グラフである。
【図４ａ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｂ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｃ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｄ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｅ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｆ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図５】ＨＩＶ−１に感染した１８人のＬＴＳの臨床学的特徴を示す表である。
【図６ａ】１８人のＬＴＳ及び２８人のＫＲＧの非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【図６ｂ】１８人のＬＴＳ及び２８人のＫＲＧの非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【図６ｃ】１８人のＬＴＳ及び２８人のＫＲＧの非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【図７】ｎｅｆ遺伝子で大規模な欠損と比較して，５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子での大規模な欠損の頻度を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は高麗人参を有効成分として含むＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト免疫不全ウイルス１型 （ＨＩＶ−１）は後天性免疫不全症候群（エイズ）の病因である。ＨＩＶ−１はＨＩＶ−２と共にレトロウイルスのレンチウイルス科に属し，感染性ビリオンは二つの同じ一本鎖からなるＲＮＡ（＋）ゲノムを有する。ＨＩＶ−１が細胞に感染すれば，上記ＲＮＡ（＋）ゲノムがコーディングする逆転写酵素によりＲＮＡが二本鎖ＤＮＡに転換され，このＤＮＡが宿主細胞の染色体に挿入されてプロウイルスを形成する。そして,プロウイルス状態で,ウイルス遺伝子を転写することで複製と構築に必要なタンパク質のｍＲＮＡらが生産されて,ウイルスを増殖することになる。
【０００３】
ＨＩＶ−１ゲノム（９．２ｋｂ）はｇａｇ，ｐｏｌ，ｅｎｖの構造遺伝子とｔａｔ，ｒｅｖ，ｎｅｆ，ｖｉｆ，ｖｐｕ，ｖｐｒなどのアクセサリー遺伝子と，両端に存在する末端反復配列(ＬＴＲ；long terminal repeat sequence)とで構成されている。
【０００４】
ｇａｇタンパク質及びｐｏｌタンパク質は前駆体タンパク質を分解して生成され，ｅｎｖタンパク質はｇｐ１６０前駆体タンパク質となり，構築過程においてｇｐ１２０とｇｐ４１で分解される。ＨＩＶに最初に感染した際は，症状が無かったり，風邪のような症状が現れて，ウイルスがＣＤ４Ｔ細胞，マクロファージ，ミクログリア細胞などで潜伏感染して，長期の潜伏状態に入る。ｇｐ１２０に対する抗体は感染後３〜２０週目に現れ，この時以後に感染の有無を診断することができる。２〜１０年ほどの潜伏期を経る間に免疫体系に変化等が誘導されて，免疫欠乏症状が現れる前に前駆期症状（エイズ関連症候群（ＡＲＣ：AIDS-related complex）：疲労，発熱，体重減少，下痢）が現れる。ＨＩＶ感染によってＣＤ４Ｔ細胞数が２００／μｌ以下に低減すれば免疫欠乏の症状が現れるので，臨床的にエイズと定義される。
【０００５】
高麗人参(Panax ginseng C. A. Meyer(Panax schinseng Nees))は五加皮科(Araliaceae)のパナックス属に属する多年生宿根草で，数千年の間，東洋圏の国で様々な病気の治療に補助的に使用されてきた。高麗人参はこれまでに多くの薬理実験を通じて，コレステロール低下，脂質過酸化抑制，血圧降下，血流増加，脳血管拡張，心臓機能こう進，抗不整脈，抗血栓，慢性腎不全治療効果，免疫調節作用，記憶力増加，脳代謝こう進，抗ストレス，坑酸化作用，抗老化作用，抗潰瘍及び胃液分泌抑制，抗糖尿，解毒，肝細胞酵素増加，喘息治療，抗炎症，鎮痛作用，貧血治療，生殖能力増進，アルコール血中濃度低下，抗アレルギー，抗ガン剤などの効能を有することが知られている。
【０００６】
また，高麗人参及び紅参は加工法に応じて区分され，高麗人参は未加工のものを指し，乾燥したものを乾参，乾燥されていないものを水参と呼ぶ。紅参(Red Ginseng)は高麗人参を蒸して乾燥させて水分含有量が１４％以下になるよう加工したものを指し，製造過程中に茶色化反応が促進され，濃厚な茶褐色の色を呈する丈夫な形態として円形が維持された高麗人参である。
【０００７】
したがって，約７５％の水分を含有する水参の状態では長期間保存が困難であり，流通状態中に微生物汚染による腐敗又は高麗人参自体が含有する様々な酵素によって高麗人参成分が分解されるが，紅参は加工乾燥により水分が減少しているため，細菌，黴，及び微生物による汚染を防ぎ，体積及び重量が減少するために保存，運搬が容易という長所がある。高麗人参の代表的な有効成分であるサポニンの定量方法と品質管理の発達によって，加工過程中にサポニンが分解されるのを最大限に抑制することが可能となり，サポニンの他にマルトール，ジンセノサイドＲｈ２などの有効成分がさらに生成された。すなわち，高麗人参の主成分はサポニンであり，紅参はこの効能が変質しないように加工したものである。
【０００８】
特に紅参は中枢神経に対して鎮静作用と興奮作用があり，循環系に作用して高血圧や動脈硬化を予防する効果があり，その一方で造血作用及び血糖値を低下させ，肝を保護し，内分泌系に作用して性行動又は生殖効果に間接的に有効に作用し，抗炎及び抗腫瘍作用があり，放射線に対する防御効果，皮膚を保護しながら軟化する作用を有する。また，紅参の効果の中で重要なのは，アダプトゲン効果として周囲環境に起因する各種有害作用の流涙症(epiphora)，各種ストレスなどに対して防御能力を増加させて，生体をより簡単に適応させる効果を有する。これまでに，紅参に対する成分及び薬理的効能に対して，韓国内外で数多くの研究が進められており，特に紅参は坑酸化活性を有することが報告されている（クォン・ヨンフン他，高麗人参学会誌，２４（１），２９−３４，２０００）。
【０００９】
また，本発明者は以前の研究で，ＨＩＶ−１感染患者らを，高麗人参(以下，ＫＲＧと記載する)単独(参照文献１〜４），或いは１９９１年以降にはジドブジン(ＺＤＶ；zidovudine)と共に（参照文献５），１９９７年以降には非常に強力な高活性抗レトロウイルス療法(ＨＡＡＲＴ；highly active antiretroviral drug therapy)により（参照文献６）治療した。臨床学的適用の間（参照文献１〜７），ＫＲＧによる治療とエイズの進行速度との間に意味のある逆相関関係を示した（参照文献８）。ＨＩＶ−１遺伝子の変移率はＫＲＧによる治療と反対関係にある。さらにＫＲＧによる治療はジドブジンに対する抵抗性の発達を遅らせる。本発明者の結果によればＫＲＧによる治療は治療法或いは患者の他の特性に関係なくＣＤ４Ｔ細胞が減少する速度を低減させた。ＫＲＧとＨＡＡＲＴとの混合治療を分析した最近の結果では，薬品抵抗変移の発生なしで一貫されたウイルス調節がこれらの組合せにより可能であることを示した(参照文献7) 。
【００１０】
本発明者のコホートで長期未発症感染者(ＬＴＮＰ；long-term nonprogressor)或いは長期生存者（ＬＴＳ：long-term surviviors)におけるエイズの進行が遅くなった原因をここで説明する。最近，本発明者は持続的なＫＲＧによる治療を受けた１０人のＬＴＳにおけるｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損の比率とＫＲＧの摂取期間との関連性を報告した(参照文献９) 。これら１０人のＬＴＳからのｎｅｆ遺伝子で増幅された生成物を比較すると，ｇａｇ領域と５’ＬＴＲ領域で増幅された生成物に，プロウイルス全体の長さの塩基配列が，二つのバンド（野生型及び短バンド）が高い割合で現れた。
【００１１】
ＬＴＮＰでｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損に対する多くの研究が行われたが，幾つかの場合のみのｇａｇ領域と５’ＬＴＲ領域における大規模な欠損の関連性を現在まで報告した（参照文献１０〜１８）。より具体的に，ＨＩＶサブタイプＣに感染した一人のＬＴＳで，ｇａｇ遺伝子において３個のアミノ酸コドン中に１つの欠損があることが報告された（参照文献１９）。他の研究では２４人の治療経験がない人々の内の２人が５’ＬＴＲで１６ｂｐの欠損及び９ｂｐの小さい欠損を示した（参照文献２０）。しかし，長期間進行がない状態維持又はＨＩＶ感染の進行の速度が遅くなることと，５’ＬＴＲ領域とｇａｇ領域の遺伝的欠陥(defects)との関連は報告されたことがない。
【００１２】
本発明者はエイズの治療方法を研究中に，ＨＩＶ−１に感染した患者に紅参を長期間投与すると，ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲとｇａｇ遺伝子の欠損を確認したことによって本発明を完成した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は高麗人参を有効成分として含む，ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記のような本発明の目的を達成するために，本発明は高麗人参を有効成分として含有するＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物を提供する。以下，本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明は，高麗人参の摂取によりウイルス成長及びエイズ病因と密接な関連があるＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子が欠損する可能性を示したことに特徴がある。
【００１６】
好ましくは，前記高麗人参が紅参であることを特徴とする。
【００１７】
本発明の一実施例では，５’ＬＴＲ領域とｇａｇ領域での大規模な欠損（ｇΔ）の発生と，ＫＲＧの摂取との関連性があるかを調べるために，ＫＲＧ（総量１３，３６４±５，３６４ｇ）で１２年以上治療した１０人のＬＴＳと，ＫＲＧを摂取しなかった又は少量（総量１，４３６±１，０２７ｇ）を摂取した８人のＬＴＳ（対照群）から，部分的５’ＬＴＲ 部分とｇａｇ遺伝子を代表する１，１２５ｂｐのＰＣＲ産物の塩基配列を調査した。前記１０人のＬＴＳで，１８９個のＰＣＲ生成物が８０個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）サンプルで得られ，全体８０個のＰＢＭＣ中４４個（５５％）と１８９個のＰＣＲ産物中の７１個（３７．６％）とが大規模な欠損（ｇΔ）を示した。５５％のＰＢＭＣ及び３７．６％のＰＣＲ産物が１０人のＬＴＳで見られた一方，８人の対照群ＬＴＳの値は各々３０．３％と１４．８％であった。このような差は統計的に意味がある（Ｐ＜０．０５及びＰ＝０）。さらに，紅参を服用しなかった一般対照群患者２８人の欠損遺伝子比率はＰＢＭＣとＰＣＲ産物を基準として各々１３．３％と８．３％を示した（実施例３，図１〜図３参照）。
【００１８】
したがって，個体に紅参を投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子を欠損を誘導でき，これはエイズの予防及び治療に使用できる。
【００１９】
本発明の薬学的組成物の有効成分として使用される紅参は公知の方法で製造することができる。
【００２０】
一般的に紅参は水参（水分含有率：約７５％）を一定の温度条件下で水蒸気で蒸す蒸煮段階，及び，蒸煮された水参を乾燥させる乾燥段階を経て製造される。このように製造された紅参を加熱抽出することによって紅参抽出液を製造し，これを濃縮して紅参濃縮液を製造することができる。
【００２１】
一方，本発明では上記紅参抽出液又は濃縮液を単独で使用，又は，一つ以上の薬学的に許容される担体，賦形剤又は希釈剤を追加で含ませて，通常の方法で剤形化した後に使用できる。前記「薬学的に許容される」ということは生理学的に許容され，ヒトに投与される際に，通常，胃腸障害，めまいのようなアレルギー反応，又はこれと類似の反応を起こさない組成物をいう。また，上記のように剤形化された本発明の紅参は適切な投与方法を通じて投与できる。適合した投与方法としては経口投与でありうる。
【００２２】
望ましくは粉末，顆粒，錠剤，丸剤，糖衣錠剤，カプセル剤，液剤，ゲル剤，スラリー剤，懸濁液などのような経口投与用製剤の形態で当業界に公知の方法を利用して剤形化することができる。例えば，経口用製剤は活性成分を固体賦形剤と配合した後，これを粉砕して適切な補助剤を添加した後，顆粒混合物に加工することによって錠剤又は糖衣錠剤を得ることができる。
【００２３】
適合した賦形剤の例えばラクトース，デキストロース，スクロース，ソルビトール，マンニトール，キシリトール，エリスリトール，及びマルチトールなどを含む糖類と，とうもろこしでんぷん，小麦でんぷん，米でんぷん及びじゃがいもでん粉などを含むでん粉類，セルロース，メチルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含むセルロース類，ゼラチン，ポリビニルピロリドンなどのような充填剤が含まれてもよい。また，場合により架橋結合ポリビニルピロリドン，寒天，アルギン酸又はアルギン酸ナトリウムなどを崩解剤として添加することができる。また，本発明の薬学的組成物は抗凝集剤，潤滑剤，湿潤剤，香料，乳化剤及び防腐剤などをさらに含有してもよい。
【００２４】
また，本発明の薬学的組成物の有効成分である紅参は，市販のものを購入して使用できる。本発明の一実施例ではコリア ジンセン コーポレイションから販売されている紅参粉末カプセルを使用した。
【００２５】
本発明の薬学的組成物はほ乳動物，特にヒトを含む動物に投与できる。望ましくは上記ＨＩＶ−１に感染した患者に有効な量で投与できる。前記「有効な量」というのは試験管内又生体内でＨＩＶ−１のｎｅｆ遺伝子を欠損させるのに効果的な量を指す。
【００２６】
本発明による薬学的組成物の有効量は投与経路，治療回数，治療が必要な個体の年齢，体重，健康状態，性別，疾患の重症度，食餌及び排せつ率など様々な要因を考慮して，当業者が特定用途に伴う適切な有効投与量を決めることができる。望ましくは，本発明の紅参を含む薬学的組成物の有効量は男性の場合５０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日，女性の場合２０〜７０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００２７】
本発明の薬学的組成物は個体の診断後にエイズ疾患の進行を遅延させるために持続的に投与することができる。
【００２８】
一方，本発明で上記５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損は早期成熟停止コドン(premature stop codon)を有すること，開始コドンが欠如することで定義できる。
【００２９】
本発明の一実施例では１０人のＬＴＳから生成された増幅産物から非メチオニン開始コドン，Ｇ‐Ａ超変異(G-to A hypermutation)による早期成熟停止コドン及び小さい欠損等の遺伝的欠陥等を観察した（実施例４）。各患者及び１０人のＬＴＳ内において欠損，重複又は挿入の大きさは全て異なって現れた。
【００３０】
８人の対照群ＬＴＳでも，早期成熟停止コドン，非メチオニン開始コドンによる遺伝的欠陥が観察された（図４参照）。
【００３１】
望ましくは，本発明の方法によって欠損した５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子は，以下の配列で示される。ジェンバンク登録番号ＥＦ３７０１７２，ＥＦ３７０１７３，ＥＦ３７０１７５，ＥＵ０４７６１２，ＥＦ３７０１８４，ＥＦ３７０１８６，ＥＦ３７０１８７，ＥＦ３７０１８８，ＥＦ３７０１９１，ＥＦ３７０１９２，ＥＦ３７０１９３，ＥＦ３７０１９６，ＥＦ３７０１９７，ＥＦ３７０１９９，ＥＦ３７０２０１，ＥＦ３７０２００，ＥＦ３７０２０２，ＥＦ３７０２０５，ＥＦ３７０２０７，ＥＦ３７０２１１，ＥＦ３７０２１３，ＥＦ３７０２１１５，ＥＦ３７０２１１６，ＥＦ３７０２１１８， ＥＦ ３７０２１９， ＥＦ ３７０２２１， ＥＦ３７０２２３，ＥＦ３７０２２４，ＥＦ３７０２２５，ＥＦ３７０２２６，ＥＦ３７０２２７，ＥＦ３７０２２８，ＥＦ３７０２３１，ＥＦ３７０２３５，ＥＦ３７０２３７，ＥＦ３７０２３９，ＥＵ０４７６４７，ＥＦ３７０２４５，ＥＦ３７０２５０，ＥＦ３７０２５１，ＥＦ３７０２５２，ＥＦ３７０２５３，ＥＦ３７０２５６，ＥＦ３７０２５９，ＥＦ３７０２６２，ＥＦ３７０２６１，ＥＦ３７０２６５，ＤＱ２９５１９６，ＥＦ３７０２７５，ＥＦ３７０２７６，ＥＦ３７０２７７，ＥＦ３７０２７７８，ＥＦ３７０２７９，ＥＦ３７０２８２，ＥＵ０４７６７３，ＥＦ３７０２８３，ＥＦ３７０２８５，ＥＦ３７０２８６，ＥＦ３７０２８７，ＥＦ３７０２８８，ＥＦ３７０２９２
【発明の効果】
【００３２】
前述のように，本発明の薬学的組成物はＨＩＶ感染個体に投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損をもたらすことができる。したがって，本発明はエイズの予防及び治療に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
以下，本発明を実施例によって詳細に説明する。しかし，下記実施例は本発明を例示するためのものとして，本発明は下記実施例によって限定されることなく様々に修正及び変更できる。
【００３４】
図１は抗レトロウイルス治療なしに最小限の高麗人参を投与，或いは，高麗人参を投与しなかった８人の対照群ＬＴＳ（図１ｋ〜図１ｒ）と，最大限の高麗人参を投与した１０人のＬＴＳ（図１ａ〜図１ｊ）に対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示す。紅参の投与期間は直線で示す。３つのＰＣＲ反応が１つのサンプルを増幅させることに伴い，５’ＬＴＲ及びｇａｇ遺伝子の配列に使用されたサンプル，及び，５’ＬＴＲ及びｇａｇ遺伝子の大規模な欠損を示すサンプルは各々の下方に下側の矢印及び上側の矢印で示された。両グループで，ＣＤ４Ｔ細胞数は１０年に亘って減少した。高麗人参の投与量を除いて二つのグループ間に有意な差はなかった。
【００３５】
図２は最も初期に診断された３人のＬＴＳから得られた末梢血単核球での５’ＬＴＲとｇａｇ配列の分析を示す。１％のアガロースゲルに対する電気泳動によって増幅された生成物が分離された。患者８７−０５，８９−１７，９０−０５由来のＰＣＲ生成物はレーン１−１０，１１−１８，１９−３１各々で発現した。患者８７−０５は４種の野生型（レーン１，３，６，９）と共に３個の重複バンド（レーン２，７，１０）と二つの単一の短バンド（レーン４，８）のように五個の短バンドを有していた。患者８９−１７は７個の短バンドを示し（レーン１１，１２，１３，１４，１６−１８），この中でレーン１４は一つの短バンドであった（１４％）。患者９０−０５は７個の短バンドを示した（レーン１９，２２，２３，２４，２６，２９，３０）。その中でレーン２２，２４，２６，２９，３０は一つの短バンドを示した（７１％）（Ｍ：マーカー，ＷＴ：野生型バンド）。
【００３６】
図３は３つのグループの大規模な欠損の頻度を比較した棒グラフである。大規模な欠損を表わす末梢血単核球サンプルの比率は他の２８人の患者（１３．３％）だけでなく９人の対照群ＬＴＳの２６．７％よりＫＲＧを投与されたＬＴＳでさらに高かった（５５％）。その上，大規模な欠損に対する陽性のＰＣＲ産物の比率は，高麗人参を投与した１０人のＬＴＳにおいて３７．６％であり，８人の対照群ＬＴＳにおける比率である１３．９％，並びに，他の患者２８人における比率である８．３％よりも有意に高かった。２８人の患者中には患者８７−０５及び９０−５０の夫人も含まれた。その上，彼らの一部はＨＩＶ−１診断後に１０年が経過していないが，ＬＴＳになる可能性を有していた。
【００３７】
図４はＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列を示す。米国で非進行性患者由来のｇａｇタンパク質の共通アミノ酸配列は一番上の列に示されており（参考文献２３），１０人のＬＴＳに対する予想配列は下の列に示す。点は配列が同一であることを示し，直線は変異部分以外の部分欠損或いは大規模な欠損を意味する。クエスチョンマークは早期成熟停止コドンを意味する。アミノ酸配列は一つの文字コードで示した。各配列の出処は各患者コード（初めの２桁の数字はＨＩＶ診断年度を意味し，ハイフンの後の２桁の数字は韓国で各患者に割り当てられた固有の番号を示す）によって確認された。それぞれのジェンバンク登録番号に対するサンプルの採取日(date of sampling)は図７に示した。図７では，ｇａｇ遺伝子の欠損を含まない７種の塩基配列は示されなかった。
【００３８】
図５は，ＨＩＶ−１に感染した１８人のＬＴＳの臨床学的特徴を示す表である。去る一年を除いて，ＬＴＳ中の患者９１−２０のコンプライアンス(compliance)は患者９０−０５と共に最も良く，彼らの実際の高麗人参の服用量は個人的な購買によって２２，４２２ｇ以上だった。患者９１−２２及び患者９１−２３は患者９１−２０から提供された血液からＨＩＶ−１に感染した。ＬＴＳ８７−０５を除いて，全ての患者はＨＩＶ−１サブタイプＢの韓国サブクレイド(subclade)に感染した。
【００３９】
図６は，１８人のＬＴＳ及び２８人の高麗人参の非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【００４０】
図７は，ｎｅｆ遺伝子で大規模な欠損と比較して，５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の頻度を示す。
【実施例１】
【００４１】
実験対象者及びＫＲＧによる治療
研究群は最大値のＫＲＧを摂取した１０人のＬＴＳ，８人の対照群ＬＴＳ，及び，ＫＲＧを摂取したことがない２８人のＨＩＶ感染患者で構成された。
【００４２】
本研究で１０人のＬＴＳは，本発明者の以前の研究で詳しく説明された（参照文献９）。前記１０人全員は，１９８７年から１９９６年３月までの間に診断され，本研究期間の間，１人の患者（９３−０４）を除いて,いかなる抗レトロウイルス治療もしなかった。その患者は間歇的にＺＤＶ（１日の容量２００ｍｇ又は３００ｍｇ）を１９９３年４月から１９９７年８月まで投与した。
【００４３】
８人の対照群ＬＴＳは本発明者のコホートから選択された。上記対照群ＬＴＳに分類された患者らは１９９６年以前にＨＩＶ−１感染が診断され，彼らは非常に強力な抗レトロウイルス薬品による治療をしない状況で最小限の容量（１，５２６±１，１８３ｇ）のＫＲＧを投与する，或いは，全くＫＲＧを投与しなかった（患者８９−０５）。患者９１−２３のみが１９９３年４月から１９９９年８月までＺＤＶを投与された。患者８９−０５は１９９７年に他国に行ったため，本発明の研究サンプルから除去した。８人の対照群ＬＴＳの中に，ＬＴＳ９１−２０から輸血を受けた二人の受血者（患者９１−２２及び９１−２３）が追加された。患者８９−２６と９２−２３はＫＲＧの摂取を嫌った。患者９０−０１は血漿を８３回売血した血漿提供者であった。その患者は提供者Ｏと説明された（参照文献２１）。したがって，１０人の高いＫＲＧ摂取ＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳとを比較すると，最も基本的な特徴は似ていた。
【００４４】
言い換えれば，１０人のＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳとの間には基本的な病気の進行率又はＣＤ４Ｔ細胞数において大きな差が無く，単にＫＲＧの摂取量にのみ差があった。
【００４５】
さらに，他の２８人の対照群患者を調査した。これら２８人中には患者８７−０５と９０−５０の夫人も含まれた。これら２８人の患者の一部はＬＴＳだった。しかし，彼らは１９９７年以後に診断されたので，ＬＴＳグループに含まれなかった。各参加者から提供された同意書を受理した。
【００４６】
ＨＩＶ−１感染患者に対するＫＲＧによる治療は，１９９１年後半に韓国の国立保健院(National Institutes of Health)で始まった（参照文献１，２）。実験に用いたＫＲＧはコリア ジンセン コーポレイションから販売されている紅参粉末カプセルを使用した。各患者へのＫＲＧの一日の投与量は，男性の場合には５．４ｇ（３００ｍｇのカプセル６個を一日に３回投与）であり，女性の場合には２．７ｇ（３００ｍｇのカプセル３個を一日に３回投与）であった。各患者のＫＲＧの投与期間を図１に示す。
【００４７】
１０人のＬＴＳに投与された紅参の平均量は１５５±２８ヶ月の間に１３，３６４±５，３６４ｇであり，８人の対照群ＬＴＳでは１３２±２９ヶ月の間に１，４３６±１，０２７ｇであった（図５参照）。１０人のＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳにおいてＫＲＧの年間投与量は各々１，０３５ｇ及び１３１ｇであった。ＫＲＧの投与レベルにおける７．９倍の差は統計的に有意である（Ｐ＜０．００１）。
【実施例２】
【００４８】
ＣＤ４Ｔ細胞数と血漿ＨＩＶ−１ＲＮＡコピーレベル
３ヶ月〜６ヶ月間隔で実施例１の各患者から採血を，各サンプルで末梢血単核球細胞(PBMC；peripheralblood mononuclear cells)をフィコエリトリン(PE；phycoerythrin)-及び蛍光イソチオシアネート（FITC;Fluorescein Isothiocyanate）−コンジュゲートされたＣＤ４抗原に対する抗体と共に各々インキュベートした(サイマルテスト試薬（Simultest reagent）;ベクトン・ディッキンソン)Becton Dickinson, 米国，カリフォルニア州，サンノゼ)。ＣＤ４Ｔ細胞のレベルはファクスキャン(FACScan)（ベクトン・ディッキンソン）のフローサイトメーター を利用して測定した。血漿のＨＩＶ−１のＲＮＡ濃度はアンプリカーＨＩＶ−１モニタキット(Amplicor HIV-1 Monitor kit)(ロシェ・ダイアグノスティックス（Roche Diagnostics）,米国，ニュージャージー州，ブランチバーグ（Branchburg）)で測定された(参照文献７）。
【００４９】
ＣＤ４Ｔ細胞数は紅参を摂取した１０人のＬＴＳと８人の対照群ＬＴＳで毎月６ヶ月目で測定され，その結果は図１に示すものと同様である。
【００５０】
最大限の紅参の投与による治療を受けた１０人のＬＴＳのＣＤ４Ｔ細胞数は，１６８±２９月後の最初の測定において，５５５±２０８／μｌから２４５±１６０／μｌへと大幅に減少した（年間２２／μｌの減少，図１ａ〜図１ｊ参照）。また，８人の対照群ＬＴＳのＣＤ４Ｔ細胞数は，１３２±２９月後の最初の測定において，５７４±２２２／μｌから３５３±２９７／μｌへと減少した（年間２０／μｌの減少，図１ｋ〜図１ｒ参照）。
【００５１】
両グループ全てで，ＣＤ４Ｔ細胞は１０年に亘って，同様の形態で減少したことを確認できた。
【実施例３】
【００５２】
部分的５’ＬＴＲ部位とｇａｇ遺伝子の増幅
実施例２で収得したインキュベートされなかったＰＢＭＣｓからプロウイルスＤＮＡを抽出した。ファーストラウンド（first round）プライマーＣＥ２３（５’−ｔｇｔｇｇａｔｃｔａ ｃｃａｃａｃａｃａａ ｇｇｃｔａｃｔｔ−３’；４６〜７３；配列番号１）及び５１４（５’−ｔｃｃａｇａａｔｇｃ ｔｇｇｔａｇｇｇｔａ ｔａｃ−３’；１，６１７〜１，６４０；配列番号２），セカンドラウンド（second round）プライマーＣＥ１（５’−ｃｇａｇａｇｃｔｇｃ ａｔｃｃｇｇａｇｔａ ｃｔａ−３’；２９７〜３１９；配列番号３）及び５１２（５’−ｃｔｇｃａｇｃｔｔｃ ｃｔｃａｔｔｇａｔｇ ｇｔｃ−３’；１，３９８〜１，４２０；配列番号４）及びサードラウンド(third round)プライマー５０１（５’−ｇｔｇｔｇｇｃｃｔｇ ｇｇｃｇｇｇａｃｔｇ−３’；３８０〜３９９；配列番号５）及び５１０（５’−ｇａｔｇｔａｃｃａｔ ｔｔｇｃｃｃｃｔｇｇ ａ−３’；１，２０２〜１，２２２；配列番号６）を利用したダブル−（稀にはトリプル−）ネステッドＰＣＲによって，２９７番〜１，４２１番（ここでのナンバリングは，ＨＩＶ ＮＬ４−３の配列に由来する）の１，１２５ｂｐのＰＣＲ産物が各サンプルから増幅された（上記２９７番〜１，４２１番の位置は部分的５’ＬＴＲ領域とｇａｇ遺伝子を代表する部分である）。
【００５３】
陰性対照群を含む最高で４つのＰＣＲ反応は，あらゆるサンプルで一度に実施され，一方，（陰性対照群を含む）合計５つのＰＣＲ反応がｎｅｆ遺伝子を増幅するために使用される。ＰＣＲ産物を精製して直ちにシークエンシングした。ＰＣＲ汚染の有無はＢＬＡＳＴ検索，マニュアル整列によるアミノ酸コドン比較及び系統分析の各手続きによりＰＣＲ産物の物理的分離によってモニターした。
【００５４】
実験結果は平均±標準偏差で示した。統計の有意性はＳＰＳＳパッケージ（バージョン１２．０）(SPSS package version 12.0)を使用してスチューデントの両側ｔ検定（Student’s two-tailed t-test）及びカイ二乗検定によって評価された。
【００５５】
実験結果
それぞれ異なった時点で１０人のＬＴＳから回収したＰＭＢＣサンプル８０個から，１８９個のＰＣＲ産物を増幅した（図１ａ〜図１ｊ参照）。多くの時点で１０人のＬＴＳ全員が５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子領域でｇΔを示した（図１参照）。８０個のサンプル中４４個（５５％）で欠損が観察された（図２参照）。１８９個のＰＣＲ産物中で，７１個（３７．６％）がｇΔを示した。これらの中で，２３個（３２．４％）の増幅は野生型遺伝子無しで単に一つの短バンドを示した。７１個のｇΔの特徴を図７に要約して示す。
【００５６】
５個のＰＣＲ産物（２００７年１月に患者８７−０５，２００１年７月に患者８９−１７，１９９３年１０月に患者９０−０５，及び２００６年２月及び２００４年５月に患者９２−１３から得る）と２個のＰＣＲ産物（１９９３年１０月に患者９０−０５からΔ８６ｂｐ及び２００６年に患者９０−５０からΔ４２０ｂｐ）は単に５’ＬＴＲ部位内又はｇａｇ遺伝子内でｇΔを各々含んでいた（表３）。残存したＰＣＲ産物における欠損は，５'ＬＴＲの両側末端領域（少なくとも位置７５３を含む；Δ３７ｂｐ）とｇａｇ遺伝子の開始部分（ＨＩＶ−１ ＮＬ４３における位置８１８のΔ２９ｂｐ）に位置する。換言すれば，欠損はｇａｇ遺伝子開始コドンの近傍で６６ｂｐ以上だった。
【００５７】
したがって，５’ＬＴＲ領域でｇΔの比率は３６．５％（６９／１８９）であり，ｇａｇ遺伝子に基づいたｇΔ比率は３４．９％（６６／１８９）であった。これは，ＫＲＧの投与がｇａｇ遺伝子よりも５’ＬＴＲに影響を与えたことを示す。
【００５８】
サンプルが入手できなかった患者９１−２０，及び，９３−６０は別にして，ＫＲＧ摂取開始後の５’ＬＴ領域及びｇａｇ領域におけるｇΔの最初の検出は，ｎｅｆ遺伝子の欠損の最初の検出よりも早かった（参照文献９）。ｇΔの最初の検出に対するＫＲＧ摂取開始からの中位時間は，２６ヵ月（１９〜１０１ヵ月の範囲）であった。これは，ｎｅｆ遺伝子において欠損の検出に要する時間よりもかなり短かった（参照文献９）。
【００５９】
患者８７−０５は移入されて混入した凝固因子９から由来したＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及びＨＩＶ−１サブタイプＢに同時感染した。この患者には１９９４年６月にＫＲＧの投与が開始された。全ての増幅物で９ｂｐの小さい欠損があったが，１０人のＬＴＳ中で，唯一ｇΔｎｅｆを示さなかった(参照文献９）。驚くべきことに，本発明者は１９９７年４月に得られた最も初期に使用したサンプルでｇΔを観察し，１２個のサンプル中４個から得られた３６個のＰＣＲ産物から全７個のｇΔを観察した（図１ａ〜図１ｊ，図５参照）。この患者は２００７年４月からはエイズに関連した症状を示さなかった。この症例は，抗レトロウイルス治療法を実施せずに２０年以上生存した，韓国における最初の症例に該当する。
【００６０】
患者８９−１７へは１９９１年１２月にＫＲＧの投与が開始された。そして投与に対するコンプライアンスは一貫していなかった。１９９３年７月に報告された一つのｇΔは非常に例外的だった。なぜなら，Δ９１７ｂｐの欠損がｐｏｌ遺伝子の４７４ｂｐ（逆方向に，ＮＬ４−３の４２９６ｂｐから４０３７ｂｐ）及びｇａｇ遺伝子の末端部分（２０２９ｂｐから１８３８ｂｐ）に置換されたためである。この患者には２００２年２月にＨＡＡＲＴが開始され，ＣＤ４Ｔ細胞数は，２００７年４月には５１３／μｌであった。
【００６１】
患者９０−０５は１９９０年２月にＨＩＶ−１感染と診断され，１９９１年１２月にＫＲＧの摂取を開始した。上記患者は本研究でＫＲＧによる治療に対し最も優秀なコンプライアンスを示した。２１，５２２ｇのＫＲＧの供給と共に，上記患者自ら個人的に所持したＫＲＧを摂取した。ＫＲＧの一日の服用量は９５％のコンプライアンスで６．０ｇ（３００ｍｇのカプセル１０個を１日２回）であった。ｇΔの最初の検出は，ＫＲＧ治療の開始から１１１ヵ月後（合計１２，０１２ｇが摂取された）の２００１年１月におけるｇΔｎｅｆの最初の検出よりも８７ヵ月早かった。ｇΔの例と残り７人のＬＴＳに対する詳しい情報は図１及び図６に示す。
【００６２】
また，追加的に８人の対照群ＬＴＳから回収した３３個のＰＢＭＣサンプルから８８個のＰＣＲ産物を増幅した。１３個のｇΔ（増幅されたものの内の１４．８％）は１０個のＰＢＭＣサンプルに存在した（全体の３０．３％）。１０人のＬＴＳは８人の対照群ＬＴＳよりＰＢＭＣサンプルとＰＣＴ産物全てでｇΔの著しく高い比率を含んだ（前者の場合はＰ＜０．０５，後者の場合はＰ＜０．０００１）（図３参照）。
【００６３】
また，ＫＲＧを投与しなかった２８人の患者から臨床学的段階に関係なく得られた３０個のＰＢＭＣサンプルから６０個のＰＣＲ産物を増幅した。５個のｇΔ（増幅されたものの内の８．３％）は４個のＰＢＭＣで存在した（全体の１３．３％）。
【実施例４】
【００６４】
遺伝的欠陥と小さい欠損
大規模な欠損の他にも，本発明者らは非メチオニン開始コドン，Ｇ‐Ａ超変異(hypermutation)による早期成熟停止コドン及び小さい欠損のような遺伝的欠陥を観察した。１０人のＬＴＳの中で，患者８７−０５は４個の配列（ＥＵ０４７６０１，ＥＵ０４７６０５，ＥＵ０４７６０７，ＥＵ０４７６０９）で早期成熟停止コドンを有しており，患者８９−１７も早期成熟停止コドン及び，開始コドン（ジェンバンク登録番号ＥＦ３７０１９３）としてイソロイシンを有した。患者９０−１８はｇａｇ遺伝子で６ｂｐの挿入を有しており，患者９２−１３は１０２ｂｐ（ジェンバンク ＥＦ３７０２５２）の二つの重複(duplications)と，５’ＬＴＲ領域に１５９ｂｐの欠損，及び，Ｇ‐Ａ超変異（ジェンバンク ＥＦ３７０２５６）を有しており，３２７と３２８との部分（ジェンバンク ＥＦ３７０２５８）間にも６ｂｐの挿入を有していた（図４参照）。
【００６５】
８人の対照群ＬＴＳの内，患者９１−２２は早期成熟停止コドン又は３個の配列（ジェンバンク ＥＦ３７０３１４，ＥＵ０４７６５４，そしてＥＵ０４７６５５）で開始コドンとしてイソロイシンを有していた。患者８９−２６は１個の配列（ＥＵ０４７６３５）で２つの早期成熟停止コドンを有していた。
【実施例５】
【００６６】
ＣＤ４Ｔ細胞数に従う大規模な欠損の頻度
本発明者はＣＤ４Ｔ細胞数に従う大規模な欠損の頻度を分析した。１０人のＬＴＳのＰＣＲ増幅産物をＣＤ４Ｔ細胞数２００／μｌ以下，２００〜４００／μｌ，４００／μｌ以上でグループを作った。ＫＲＧを投与した１０人のＬＴＳで大規模な欠損の頻度は４７．４％（９／１９），５１．８％（１４／２７）及び６１．８％（２１／３４）で現れ，これはＣＤ４Ｔ細胞数に対する若干の依存性を示すことができる。しかし，８人の対照群ＬＴＳでは大規模な欠損比率は４４．４％（４／９），２０％（４／２０），５０％（２／４）であり，また，ＫＲＧを投与しなかった２８人のＨＩＶ−１陽性患者は１８．２％（２／１１），１４．３％（１／７），８．３％（１／１２）であった。
【００６７】
考察
本発明者は韓国でＬＴＳ又はＬＴＮＰの健康に持続的な関心を持っており，その結果，韓国国民において，有益な宿主因子，例えばＣＣＲ５又はＨＬＡ−Ｂ５７におけるΔ３２ｂｐが存在しないにもかかわらず，本発明者は１９９３年１２月３１から診断された３２３人のＨＩＶ−１感染患者の中で多くのＬＴＳを観察することができた。
【００６８】
より具体的には，１９８７年に韓国で９人がＨＩＶ−１感染患者と診断され，その内の３人の患者はまだ生存しており，この３人全員がＫＲＧの投与を一つの治療法又はＨＡＡＲＴと並行して行ってきた。ＬＴＳ８７−０５はこれら患者の内の１人として，１９９６年６月以後にＫＲＧを摂取してきた（図１ａ参照）。これら患者の内の他の２人はＨＡＡＲＴをＫＲＧの投与と共に１９９８年から１９９９年まで受け，彼らのＣＤ４Ｔ細胞数は１９９８年には２３１／μｌ，１９９９年には６／μｌ，２００４年１２月には１，０５２／μｌに，２００６年には１，１２７／μｌに各々増加した。
【００６９】
また，１９８８年には２２人がＨＩＶ−１患者として診断され，ＫＲＧの投与により治療してきた２人の患者（９％）のみが生存している。患者のＨＩＶ−１サブタイプがＣＲＦ０２＿ＡＧであるため，この患者は本発明の研究に含まれなかったが，上記患者はＣＤ４Ｔ細胞数が５００／μｌ以上のＬＴＮＰに分類された。１９９７年以降診断された多くの患者は，ＫＲＧの投与と共にＨＡＡＲＴを受け，薬剤耐性突然変異が欠如していることを示す。これらの患者は，併用療法に驚くほど良好な反応を示した。
【００７０】
本発明者は以前行った研究を通じて，ＨＩＶ−１感染患者のＫＲＧによる治療がｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損（参照文献９）の高い頻度と関連があり，病の進行が遅くなると報告した（参照文献１，８）。
【００７１】
本発明では，各サンプルから３個のＰＣＲ産物を増幅したところ，これはｎｅｆ遺伝子から増幅された４個のＰＣＲ産物より少ない（参照文献９）にもかかわらず，本発明者は同じ１０人のＬＴＳで，ｎｅｆ欠損（サンプルの３４．３％とＰＣＲ産物の１８．８％）（参照文献９）と比較して，大規模な欠損（サンプルの５５％，ＰＣＲ産物の３７．６％）のさらに高い頻度を観察することができた（Ｐ＜０．０００１）。５'ＬＴＲ／ｇａｇの欠損の頻度はｎｅｆ遺伝子の欠損で確認された頻度よりも１．６倍及び２．０倍高かった。全体で８０個のサンプルの内，６１個は以前にｎｅｆ遺伝子増幅にも適用されたことがあり，上記６１個のサンプルの内，１３個（２１．３％）は２つの遺伝子全てで大規模な欠損を示した。特に，患者８７−０５，８９−１７，９０−０５，９０−５０，９６−５１はｎｅｆ遺伝子より,５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子で有意にさらに高い大規模な欠損頻度を示した（Ｐ＜０．０５）（図５参照）。また，大規模な欠損を示したサンプルの比率はＫＲＧによる治療を受けた１０人のＬＴＳで３７．６％確認され，これは，８人の対照群ＬＴＳ（１４．８％）及び２８人のＨＩＶ−１感染患者（８．３％）の場合より有意にさらに高かった。さらに，本発明で８人の対照群ＬＴＳ又は他の２８人の患者のどのグループの場合にも大規模な欠損の頻度とＣＤ４Ｔ細胞数との間にいかなる関連がないことを確認した（実施例５）。このような発見によって，大規模な欠損とＫＲＧの摂取との間の関係が証明される。
【００７２】
さらに，ｇΔとＫＲＧの摂取との関連性は，８人のＬＴＳ対照群又は別の２８人の患者においてｇΔｓの頻度とＣＤ４Ｔ細胞数との間に関連性が無いことを発見したことによっても支持される。この知見は，１０人のＬＴＳのＣＤ４Ｔ細胞に対する中程度の依存性との良好な対比を示す。ＫＲＧによる治療を行った1０人のＬＴＳの中でも，安定した良好な付着性を有する患者８７−０５，９０−０５，９２−１３，９６−５１はＣＤ４Ｔ体細胞数を維持し，一方，過去１〜２年の間に良好な付着性を示さなかった患者９０−５０，９１−２０，９３−６０は，ＣＤ４Ｔ細胞数の急激な減少を示した。この結果に基づき，ＣＤ４Ｔ細胞の減少は，すでに患者８９−１８及び，９０−１８において示された。あらゆるエイズ関連の症状が無く１０年以上が経過すると，多くの患者は，ＫＲＧの投与を怠る，或いは健康状態に注意を払わなくなる傾向がある。
【００７３】
幾つかの論文において，ＬＴＮＰにおけるウイルス配列の全長の遺伝子の特徴が発表されている。アレクサンダー（Alexander）他（参照文献２２）は，ｎｅｆ遺伝子以外に他の遺伝子で欠陥を発見できず，早期成熟停止コドン，アウト−オブ−フレーム欠損（out-of-frame deletions）及び全体欠損を発見した。通常でない多形性(polymorphism)とｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損は８人のＬＴＮＰから発現した。また，フアン（Huang）他（参照文献２３，２４）は，８人のＬＴＳから５’ＬＴＲ及びｇａｇ遺伝子において遺伝的欠陥を報告した。この研究でウイルス配列の全体が得られ，一人の患者のみに，５’ＬＴＲとｇａｇ遺伝子においてＧ‐Ａ超変異が発現した。最近，カルギ（Calugi）他はｅｎｖ遺伝子（ｎｅｆ遺伝子のそばに位置する遺伝子）で大規模な欠損を確認した(参照文献２５）。ブラックソン（Blankson）他（参照文献２６）は，５０コピー／ｍＬ未満の血漿ＲＮＡのウイルス量を有する，抑制因子におけるＨＩＶ−１全長の塩基配列においてもいかなる大規模な欠損は観察できなかった。
【００７４】
ＨＩＶ−１遺伝子の発現は，ＴＡＴＡボックスと，転写因子ＮＦ−κＢ及びＳｐ１（参照文献２７）の結合部位とを含むＬＴＲにおいて幾つかの非常に高く保存されたシス作用調節要素(cis-acting regulatory elements)によって調整される。ある成分がＮＦ−κＢとＡｐ−１転写因子活性をヒト細胞株で抑制することが知られている（参照文献２８）。ＬＴＲ領域はＨＩＶ−１の他の部分よりＫＲＧの摂取によって，影響を受けることが可能である。
【００７５】
本発明において，５’ＬＴＲの大規模な欠損は患者８７−０５（ｎｅｆ遺伝子の大規模な欠損を示さなかった）を含む１０人のＬＴＳで観察された。さらに，観察された大規模な欠損の各々のサイズは大きいが，遺伝子内で単一部位にのみ位置していた。本発明者らは６人のＬＴＳ（患者９０−０５，９０−１８，９０−５０，９１−２０，９２−１３及び９６−５１）からｅｎｖ遺伝子大規模な欠損（＞１，０００ｂｐ）をＨＩＶ−１全体の長さ塩基配列が得られた時に確認した（データ図示せず）。
【００７６】
したがって，ＫＲＧの摂取と遺伝的欠陥との間の関係なしで，本発明の観察は単に本発明の研究で観察された様々な有益な要素の中の一つの発見に過ぎなくても，本発明の結果は５’ＬＴＲ領域とｇａｇ領域における大規模な欠損が，ＨＩＶ疾病の進行率と有意に関係があるという一次的証拠を提供している(参照文献１〜９）。ウィルス遺伝子欠損は，どのようにＬＴＳ又はＬＴＮＰに貢献するかについての可能なメカニズムに関して，我々は，遺伝子欠損がＫＲＧの摂取による免疫調整の間接的な結果ではないかと考える。ＫＲＧがＴｈ１サイトカインを通じた細胞媒介性免疫反応を媒介して（参照文献２９〜３２），ＨＩＶ−１感染で全般的な免疫活性状態(generalized immune activation state)を抑制することがよく知られている。それにもかかわらず，ＫＲＧを投与しないＬＴＳが相変らずＨＩＶに感染した他の２８人の患者よりさらに高い５’ＬＴＲ／ｇａｇ欠損を有するということは，ＫＲＧの摂取が唯一の要素ではないと考えられる。このような知見は，ＬＴＳ又はＬＮＴＰの延命にとって，ＫＲＧによって誘導された遺伝的欠損が重要であることを裏付ける。
【００７７】
塩基配列データ
全３３６塩基配列の内，１７８個がジェンバンクに提出され，ジェンバンク登録番号ＥＦ３７０１７２〜ＥＦ３７０３４９，ＥＵ０４７６００〜ＥＵ０４７６６７，ＥＵ０４７６７０〜ＥＵ０４７６７６及びＥＵ０４７６８１〜ＥＵ０４７６９３が付与された。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
詳述したように，本発明の薬学的組成物はＨＩＶ感染個体に投与することによってＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子での欠損を誘導することができる。したがって，本発明はエイズの予防及び治療に役立つよう使用できる。
【００７９】
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30. Han SK, Song JY, Yun YS, Yi SY. Ginsan improved Th1 immune response inhibited by gamma radiation. Arch Pharm Res. 2005;28:343-50.
31. Larsen MW, Moser C, Hoiby N, Song Z, Kharazmi A. Ginseng modulates the immune response by induction of interleukin-12 production. APMIS. 2004;112:369-73.
32. Lee EJ, Ko E, Lee J, Rho S, Ko S, Shin MK, et al. Ginsenoside Rg1 enhances CD4(+) T cell activities and modulates Th1/Th2 differentiation. Int Immunopharmacol. 2004;4:235-44.
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１ａ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｂ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｃ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｄ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｅ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｆ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｇ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｈ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｉ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｊ】最大量のＫＲＧの投与を受けた１０人のＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｋ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｌ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｍ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｎ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｏ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｐ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｑ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図１ｒ】抗レトロウイルス治療なしに最小限のＫＲＧの投与或いは投与しなかった８人の対照群ＬＴＳに対するＣＤ４Ｔ細胞数の変化を示すグラフ。
【図２】最も初期に診断された３人のＬＴＳから得られた末梢血単核球での５’ＬＴＲとｇａｇ配列の分析を示す。
【図３】３つグループの大規模な欠損の頻度を比較した棒グラフである。
【図４ａ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｂ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｃ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｄ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｅ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図４ｆ】ＨＩＶ−１に感染した１０人のＬＴＳの代表的な部分ｇａｇタンパク質の予想アミノ酸配列。
【図５】ＨＩＶ−１に感染した１８人のＬＴＳの臨床学的特徴を示す表である。
【図６ａ】１８人のＬＴＳ及び２８人のＫＲＧの非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【図６ｂ】１８人のＬＴＳ及び２８人のＫＲＧの非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【図６ｃ】１８人のＬＴＳ及び２８人のＫＲＧの非投与患者に対する５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子の大規模な欠損の特徴を示す。
【図７】ｎｅｆ遺伝子で大規模な欠損と比較して，５’ＬＴＲ／ｇａｇ遺伝子での大規模な欠損の頻度を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高麗人参を有効成分として含むＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物。
【請求項２】
前記高麗人参は紅参であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
ＨＩＶ−１に感染した患者に投与されることを特徴とする請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
男性の場合，５０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日，女性の場合２０〜７０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与されることを特徴とする請求項２記載の組成物。
【請求項５】
前記５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損が早期成熟停止コドンを有し，開始コドンが欠如することで定義されることを特徴とする請求項１又は２記載の組成物。
【請求項６】
前記５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損が以下の配列のように示されることを特徴とする請求項２記載の組成物。
ジェンバンク（GenBank）登録番号ＥＦ３７０１７２，ＥＦ３７０１７３，ＥＦ３７０１７５，ＥＵ０４７６１２，ＥＦ３７０１８４，ＥＦ３７０１８６，ＥＦ３７０１８７，ＥＦ３７０１８８，ＥＦ３７０１９１，ＥＦ３７０１９２，ＥＦ３７０１９３，ＥＦ３７０１９６，ＥＦ３７０１９７，ＥＦ３７０１９９，ＥＦ３７０２０１，ＥＦ３７０２００，ＥＦ３７０２０２，ＥＦ３７０２０５，ＥＦ３７０２０７，ＥＦ３７０２１１，ＥＦ３７０２１３，ＥＦ３７０２１１５，ＥＦ３７０２１１６，ＥＦ３７０２１１８，ＥＦ３７０２１９，ＥＦ３７０２２１，ＥＦ３７０２２３，ＥＦ３７０２２４，ＥＦ３７０２２５，ＥＦ３７０２２６，ＥＦ３７０２２７，ＥＦ３７０２２８，ＥＦ３７０２３１，ＥＦ３７０２３５，ＥＦ３７０２３７，ＥＦ３７０２３９，ＥＵ０４７６４７，ＥＦ３７０２４５，ＥＦ３７０２５０，ＥＦ３７０２５１，ＥＦ３７０２５２，ＥＦ３７０２５３，ＥＦ３７０２５６，ＥＦ３７０２５９，ＥＦ３７０２６２，ＥＦ３７０２６１，ＥＦ３７０２６５，ＤＱ２９５１９６，ＥＦ３７０２７５，ＥＦ３７０２７６，ＥＦ３７０２７７，ＥＦ３７０２７７８，ＥＦ３７０２７９，ＥＦ３７０２８２，ＥＵ０４７６７３，ＥＦ３７０２８３，ＥＦ３７０２８５，ＥＦ３７０２８６，ＥＦ３７０２８７，ＥＦ３７０２８８，ＥＦ３７０２９２
【請求項１】
高麗人参を有効成分として含むＨＩＶ−１の５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子欠損用の薬学的組成物。
【請求項２】
前記高麗人参は紅参であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
ＨＩＶ−１に感染した患者に投与されることを特徴とする請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
男性の場合，５０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日，女性の場合２０〜７０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与されることを特徴とする請求項２記載の組成物。
【請求項５】
前記５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損が早期成熟停止コドンを有し，開始コドンが欠如することで定義されることを特徴とする請求項１又は２記載の組成物。
【請求項６】
前記５’ＬＴＲ及び／又はｇａｇ遺伝子の欠損が以下の配列のように示されることを特徴とする請求項２記載の組成物。
ジェンバンク（GenBank）登録番号ＥＦ３７０１７２，ＥＦ３７０１７３，ＥＦ３７０１７５，ＥＵ０４７６１２，ＥＦ３７０１８４，ＥＦ３７０１８６，ＥＦ３７０１８７，ＥＦ３７０１８８，ＥＦ３７０１９１，ＥＦ３７０１９２，ＥＦ３７０１９３，ＥＦ３７０１９６，ＥＦ３７０１９７，ＥＦ３７０１９９，ＥＦ３７０２０１，ＥＦ３７０２００，ＥＦ３７０２０２，ＥＦ３７０２０５，ＥＦ３７０２０７，ＥＦ３７０２１１，ＥＦ３７０２１３，ＥＦ３７０２１１５，ＥＦ３７０２１１６，ＥＦ３７０２１１８，ＥＦ３７０２１９，ＥＦ３７０２２１，ＥＦ３７０２２３，ＥＦ３７０２２４，ＥＦ３７０２２５，ＥＦ３７０２２６，ＥＦ３７０２２７，ＥＦ３７０２２８，ＥＦ３７０２３１，ＥＦ３７０２３５，ＥＦ３７０２３７，ＥＦ３７０２３９，ＥＵ０４７６４７，ＥＦ３７０２４５，ＥＦ３７０２５０，ＥＦ３７０２５１，ＥＦ３７０２５２，ＥＦ３７０２５３，ＥＦ３７０２５６，ＥＦ３７０２５９，ＥＦ３７０２６２，ＥＦ３７０２６１，ＥＦ３７０２６５，ＤＱ２９５１９６，ＥＦ３７０２７５，ＥＦ３７０２７６，ＥＦ３７０２７７，ＥＦ３７０２７７８，ＥＦ３７０２７９，ＥＦ３７０２８２，ＥＵ０４７６７３，ＥＦ３７０２８３，ＥＦ３７０２８５，ＥＦ３７０２８６，ＥＦ３７０２８７，ＥＦ３７０２８８，ＥＦ３７０２９２
【図１ａ】
【図１ｂ】
【図１ｃ】
【図１ｄ】
【図１ｅ】
【図１ｆ】
【図１ｇ】
【図１ｈ】
【図１ｉ】
【図１ｊ】
【図１ｋ】
【図１ｌ】
【図１ｍ】
【図１ｎ】
【図１ｏ】
【図１ｐ】
【図１ｑ】
【図１ｒ】
【図２】
【図３】
【図４ａ】
【図４ｂ】
【図４ｃ】
【図４ｄ】
【図４ｅ】
【図４ｆ】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図６ｃ】
【図７】
【図１ｂ】
【図１ｃ】
【図１ｄ】
【図１ｅ】
【図１ｆ】
【図１ｇ】
【図１ｈ】
【図１ｉ】
【図１ｊ】
【図１ｋ】
【図１ｌ】
【図１ｍ】
【図１ｎ】
【図１ｏ】
【図１ｐ】
【図１ｑ】
【図１ｒ】
【図２】
【図３】
【図４ａ】
【図４ｂ】
【図４ｃ】
【図４ｄ】
【図４ｅ】
【図４ｆ】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図６ｃ】
【図７】
【公開番号】特開２００９−２６３３２７（Ｐ２００９−２６３３２７Ａ）
【公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１９６６４４（Ｐ２００８−１９６６４４）
【出願日】平成２０年７月３０日（２００８．７．３０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 国際レトロウイルス学会（Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）学会誌『ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ』（エイズ研究及びヒトレトロウイルス），第２４巻，第２号 発行日：平成２０年２月１日
【出願人】（５０８２３１７１７）コリア ジンセン コーポレイション (1)
【出願人】（５０８２３１７３９）ファウンデーション フォー インダストリー コーペレイション，ユニバーシティ オブ ウルサン (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月３０日（２００８．７．３０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 国際レトロウイルス学会（Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）学会誌『ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ』（エイズ研究及びヒトレトロウイルス），第２４巻，第２号 発行日：平成２０年２月１日
【出願人】（５０８２３１７１７）コリア ジンセン コーポレイション (1)
【出願人】（５０８２３１７３９）ファウンデーション フォー インダストリー コーペレイション，ユニバーシティ オブ ウルサン (1)
【Ｆターム（参考）】
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