１‐アミノシクロプロパンカルボン酸等を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤
【課題】新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を提供すること。
【解決手段】１‐アミノシクロプロパンカルボン酸及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を開発した。例えば、１‐アミノシクロプロパンカルボン酸塩酸塩一水和物は、急性毒性の１００分の１以下の５０ミリグラム／キログラム投与により、脳卒中発症を９割抑え、脳卒中発症の場合も、その後遺症は軽い。
【解決手段】１‐アミノシクロプロパンカルボン酸及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を開発した。例えば、１‐アミノシクロプロパンカルボン酸塩酸塩一水和物は、急性毒性の１００分の１以下の５０ミリグラム／キログラム投与により、脳卒中発症を９割抑え、脳卒中発症の場合も、その後遺症は軽い。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
平成13年度の厚生労働省の統計によれば、介護を要する65歳以上の高齢者94,750人に対し、介護が必要になった主な原因の１位は脳卒中等脳血管疾患24,749人、２位は骨折11,744人、３位は痴呆10,659人であり、脳卒中等脳血管疾患が飛びぬけて多い。脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の開発が強く望まれる。
高齢者の高血圧症患者、糖尿病患者、高脂血症患者は脳卒中を起こしやすい。そこで、脳卒中又は脳卒中後遺症の予防として、脳卒中又は脳卒中後遺症の原因たる高血圧症を降圧剤で、糖尿病を抗糖尿病剤で、高脂血症を抗脂血剤で管理する方法が取られているが、脳卒中又は脳卒中後遺症の発生を十分には防いでいない。
そこで、種々のアプローチに脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の開発研究が行われている。例えば、トロンボキサンＡ２合成阻害剤によるアテローム動脈硬化性脳卒中の血栓症状の治療（特許文献１）、血圧を低下させない用量で脳卒中の再発防止剤（特許文献２）、ＮＲ２Ｂサブタイプ選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを種々の薬剤と組み合わせる脳卒中治療法（特許文献３）、ホスファチジルコリンを有効成分とする脳卒中予防剤（特許文献４）、アホエンを有効成分とする過酸化物を減少させることによる脳卒中予防剤（特許文献５）、キサンチンを有効成分とする脳卒中予防剤（特許文献６）、ジオキサンシクロ［３，３，０］オクタン誘導体を有効成分とする高血圧症状の改善による脳卒中予防剤（特許文献７）等が公表されている。しかし、未だ十分ではなく、新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の開発が望まれている。
【０００３】
一方、１‐アミノシクロプロパンカルボン酸、別名アルファ‐アミノシクロプロパンカルボン酸（英語名：１−ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ・ａｃｉｄ。以下、略称ＡＣＣで表す。）は濃縮果物汁より抽出した天然物質（非特許文献１）で、無臭・水溶性の白色結晶体であり、植物成長調節剤の１種で、１個のアミノ基と１個のカルボン酸と１個の３員環を有する。ＡＣＣは、植物抽出法の他、合成法（特許文献８、非特許文献２−４）からも得られる。
ＡＣＣは、植物成長調節作用、エタノール消費作用（非特許文献５）の他、Ｎ‐メチル-Ｄ-アスパラギン酸（以下、ＮＭＤＡと略称する。）受容体複合体のストリキニン非感受性グリシン受容体部位の部分アゴニストであり（非特許文献６）、かつ、グルタミン酸受容体部位のアンタゴニストである（非特許文献７）。ＡＣＣは、ＮＭＤＡにより誘導される海馬神経の変性を抑え（非特許文献８）、ＮＭＤＡ毒性に対し脊髄神経を保護し（非特許文献９）、ＮＭＤＡ受容体を介して記憶を改良し（特許文献９）、病巣虚血、広範囲虚血及び脊髄虚血による神経障害を予防するが、ＡＣＣの長期投与によりＮＭＤＡ受容体のメッセンジャーＲＮＡの発現が減少し、薬効が減少する（非特許文献１０）。従って、ＡＣＣはＮＭＤＡ受容体に作用して神経を保護するが持続せず、脳卒中又は脳卒中後遺症を予防又は治療しないと思われた。
【０００４】
以下に先行文献を特許文献と非特許文献に分けて表示する。
【特許文献１】特開２００３−２６６６０号公報
【特許文献２】特開２００２−３７０９８１号公報
【特許文献３】特開２００２−３２２０９５号公報
【特許文献４】特開２０００−２３９１６８号公報
【特許文献５】特開平１１−２２８３９６号公報
【特許文献６】特開平１０−１８２４６９号公報
【特許文献７】特開平８−２６８８８７号公報
【特許文献８】特開平７−２７８０７７号公報
【特許文献９】特開平８−５１０９９０号公報
【非特許文献１】L．F．Burroughs、Nature，１９５７年１７９巻３６０頁
【非特許文献２】Ａ．Ｃｏｎｎｏｒｓら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６０年２１２９頁
【非特許文献３】Ｅ．Ｂｕｎｕｅｌら、Ｓｙｎｌｅｔｔ．１９９２年７巻５７９頁
【非特許文献４】X．Zhuら、Synthetic Communication １９９８年２８巻１７号３１５９頁
【非特許文献５】Ｂ．Ａ．ＭｃＭｉｌｌｅｎら、Ｂｒａｉｎ・Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．２００４年６４巻３号２７９頁
【非特許文献６】Ｒ．Ｔｒｕｌｌａｓら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１９８９年３４巻２号３１３頁
【非特許文献７】Ｒ．Ｎａｈｕｍ‐Ｌｅｖｙら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ・Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９８９年５６巻１２０７頁
【非特許文献８】Ａ．Ｚａｐａｔａら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ．１９９６年７巻２号３９７頁
【非特許文献９】Ｙ．Ｌｉｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９６年３１８巻２-３号４９１頁
【非特許文献１０】Ｓ．Ｂｏｖｅｔｔｏら、Ａｍ．Ｓｏｃ．ｆｏｒ・Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１９９７年２９３巻３号１５０３頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、今回、発明者等はACCを用いて脳卒中易発症ラットＳＨＲＳＰにおける血圧の降圧作用、脳卒中発症率、脳卒中後遺症の重傷度、主要臓器及び寿命への影響を対照ラットと比較検討し、ACCが脳卒中易発症ラットＳＨＲＳＰの脳卒中又は脳卒中後遺症の予防又は治療に著しい効果があることを確認し、この結果を基に更に種々研究した結果、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、「新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を提供する」という課題に対し、「ＡＣＣ及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤」を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の薬剤は、脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の発明である。本発明の薬剤の主成分はＡＣＣ及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物である。
【００１０】
ＡＣＣは、天然物質も合成品も使用可能である。天然のACCは洋ナシやリンゴジュース等に含まれており、前述の非特許文献１に記載の方法により濃縮した洋ナシやリンゴジュースより抽出して得られるが、ＡＣＣは他の種々の果物に含まれているので、他の果物から抽出したものも使用可能である。合成のACCは前述の非特許文献２−４に記載の方法により得られるが、他の方法で合成したものも使用可能である。種々の合成法の中、非特許文献４に記載されている方法は、容易に得られる材料を用い、温和な反応条件で高収率でＡＣＣを合成可能であるため、大量合成の場合に特に望ましい。例えば、ジエチルマロン酸と１，２‐ジブロモエタンよりシクロプロパン‐１，１‐ジカルボン酸（以下、化合物１と略称する。）を得る。化合物１に無水酢酸、濃硫酸とアセトンを加えてスピロ‐［２，５］‐５，７‐ジオキサ‐６，６‐ジメチルオクタン‐４，８ジオン（以下、化合物２と略称する。）を得る。化合物２をヒドラジン分解して１‐ヒドラジノカルボニルシクロプロパン‐１‐カルボン酸（以下、化合物３と略称する。）を得る。化合物３を塩酸処理後硝酸ナトリウム処理して生じた１‐アジドカルボニルシクロプロパン‐１‐カルボン酸（以下、化合物４と略称する。）のクルチウス転位によりACCを得る。ACCは多くの会社が市販している。市販しているACCも使用可能である。ACCは実施例に示す様に急性毒性LD５０が６．８１グラム／キログラム、体重、食物利用率、血液像、生化学、臓器等亜急性毒性は特になく、骨髄小核率、奇形率、変異原、生殖等に影響を与える特殊毒性もなく、ヒトへの投与を躊躇する毒性は認められない。
【００１１】
ＡＣＣのプロドラッグは加水分解等分解を受けてＡＣＣに成るものであれば、薬学的に許容することのできる限り、どのようなものでもよい。当該プロドラッグの一つとしてＡＣＣ分子中のカルボキシル基でのメチルエステル誘導体又はエチルエステル誘導体やＡＣＣ分子中のアミノ基でのアセチル誘導体等が挙げられるが、それらに限らない。将来合成されるものでも差し支えない。
【００１２】
ＡＣＣの塩及びＡＣＣのプロドラッグの塩は薬学的に許容することのできる塩に限られる。薬学的に許容することのできる塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等のアンモニウム塩、トリエチルアミン、リジン、アルギニン等の有機アミンの塩、塩酸、臭化水素酸、硫酸等鉱酸との酸付加塩等が挙げられるが、それらに限らない。薬学的に許容することのできる塩であればよく、薬学的に許容することのできる限り、将来合成される有機化合物との塩でも差し支えない。
【００１３】
ＡＣＣ及びそのプロドラッグの水和物、薬学的に許容することのできるＡＣＣの塩及びそのプロドラッグの塩の水和物も本発明の主成分として用いることができる。ＡＣＣの水和物としてはＡＣＣ（H2O）、ＡＣＣ（H2O）２、ＡＣＣ（H2O）３、ＡＣＣ（H2O）４、ＡＣＣ（H2O）５、ＡＣＣ（H2O）６、ＡＣＣ（H2O）７、ＡＣＣ（H2O）８が挙げられる。ACCの塩の水和物としてはＡＣＣ・HCｌ（H2O）等が挙げられる。
【００１４】
本発明の脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤は、主成分が非高分子であることから、経口投与又は非経口投与（坐薬、筋肉内、皮下、静脈内、脳内など）のいずれでも投与できる。主成分がＡＣＣのプロドラッグの場合も、体内で当該プロドラッグが活性化するので、当該プロドラッグを予め活性化しておく必要はない。
【００１５】
経口用製剤を調製する場合、賦形剤、さらに必要に応じて、抗酸化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により、錠剤、被服錠剤、顆粒剤、カプセル剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性又は水性の懸濁液剤などとする。賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、ソルビット、結晶セルーロスなどが挙げられる。結合剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【００１６】
崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン未、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストラン、ペクチンなどが挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などが挙げられる。着色剤としては、医薬品に添加することが許可されているものが使用できる。矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、竜脳、桂皮末などが使用できる。これらの錠剤は、顆粒剤には、糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングしてもよい。
【００１７】
注射剤を調製する場合、必要により、グルコースや生理的食塩水等の等調液、pH調整剤、緩衝剤、抗酸化剤及びその他の安定化剤、保存剤などを添加し、常法により、皮下、筋肉内、静脈内、脳内注射剤とする。注射剤は、溶液を容器に収納後、凍結乾燥などによって、固形製剤として、用事調製の製剤としてもよい。また、一投与量を容器に収納してもよく、また、多投与量を同一の容器に収納してもよい。溶液の場合、酸素や湿気を遮断する方がよい。そのため、場合によってはアンプル型の容器に入れ、空気を抜くか、窒素ガス等で空気を置換しておく方がよい。公知の方法でよい。
【００１８】
本発明の脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の投与量は、経口剤、坐薬、皮下注射剤、筋肉内注射剤、静脈内注射剤、脳内注射剤等剤型によって異なるが、ヒトの場合、成人１日当たり通常０．０１〜１０００ミリグラム、好ましくは、０．１〜１００ミリグラムの範囲で、１日量を１日１回、あるいは２〜４回に分けて投与する。なお、年齢、症状により適宜増減する。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、ACCの毒性試験、薬効試験に関し、急性毒性試験、亜急性毒性試験、催奇性毒性試験、変異原性試験、繁殖性試験中の白血球、リンパ、好中数、ヘモグロビン、GOT、血清総蛋白、アルブミン、トリグリセリド、コレステロール、グルコース、尿素、小核率、精子奇形率、復帰変異菌、死胎率、胎児体重・身長・尾長、胸骨欠失率、等の分析は株式会社日本実権医学研究等毒性試験受託会社がルーチンに受託分析し、尿中NO2／NO3、クレアチニン、Na、K、Ca、Cl、Mg、血中アルブミン、グロブリン、GOT、GTP、ガンマ‐グルタミルトランスペプチダーゼ、尿素窒素、クレアチニン、Na、K、Ca、Cl、Mg、アンギオテンシン１転換酵素、アンギオテンシン２等分析はシオノギ・バイオメディカル・ラボラトリーズ等臨床検査受託会社がルーチンに受託分析している。
【実施例１】
【００１９】
摂氏０度で氷塩の浴槽中で２４ミリリットルの無水酢酸に２６グラムの化合物１を加え、攪拌により懸濁しつつ、９８％の濃硫酸０．８ミリリットルと２０ミリリットルのアセトンを１滴ずつ加えた。不溶物が溶け、透明な溶液になった。この溶液を氷塩浴槽中で更に１時間攪拌した後に、冷蔵庫に入れ、１晩放置した。翌日にこの溶液を３００ミリリットルの氷水で希釈した。生じた結晶をろ過で分離し、３００ミリリットルの氷水で２回洗浄し、第１番目の結晶を得た。ろ液と洗浄液を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウムでPH５にまで中和し、生じた結晶をろ過で分離し、少量の氷水で２回洗浄し、第２番目の結晶を得た。ろ液を５０ミリリットルのエーテルで３回抽出し、エーテル層を分離し、蒸発させ、第３番目の結晶を得た。第１番目から第３番目までの結晶を集め、乾燥し、２９グラムの結晶を得た。融点（摂氏６１−６３度）とシクロヘキサンとアセトン（３：１容量比）で展開した薄層クロマトグラフのアールエフ値（０．３４）より、この結晶が化合物２であることを確認した。
【実施例２】
【００２０】
実施例１で得られた化合物２の１７グラムを室温（摂氏２１−２５度）で無水エタノール１００ミリリットルに懸濁し、その懸濁液に１０グラムの８５％ヒドラジン水和物と無水エタノール１０ミリリットルの混合溶液を１滴ずつ加えた。不溶物が溶け、透明な溶液になった。この透明溶液を室温で４晩放置した。溶液中の化合物２が消失したことを実施例１に記載の薄層クロマトグラフで確認した。溶液を蒸発させ、生じた白い針状結晶を吸引ポンプでろ過し、結晶を少量の無水エタノールで洗浄し、乾燥した。１４．４グラムの乾燥結晶を得た。融点（摂氏１５０−１５２度）とエタノールで展開した薄層クロマトグラフのアールエフ値（０．５）より、この結晶が化合物３であることを確認した。
【実施例３】
【００２１】
実施例２で得られた化合物３の５グラムを室温で水１０ミリリットルに溶解し、その溶液に３６−３８％の濃塩酸５ミリリットルを加え、１５グラムの砕いた氷とエーテル２０ミリリットルの中に注ぎ、攪拌して不溶物を懸濁した。氷塩の浴槽中で懸濁液を攪拌しつつ、３４．５％の亜硝酸ナトリウム水溶液５．７ミリリットルを１滴ずつゆっくりと添加した。不溶物が溶け、透明な溶液になった。この透明溶液を更に２０分間攪拌した。操作中混合液の温度は摂氏０度からマイナス５度の間で維持した。エーテル層を分離した。水層を冷却したエーテル１０ミリリットルで２回抽出した。得られた３つのエーテル溶液を合わせ、無水塩化カルシウム上で１５分間乾燥させた。乾燥させたエーテルを摂氏４０度の浴槽中のフラスコに入ったベンゼン３０ミリリットル中に１時間かけて移した。ベンゼン溶液中のエーテルと窒素を室温で蒸発させた。エーテルと窒素を蒸発させたベンゼン溶液に３６−３８％の濃塩酸１２ミリリットルを振動させながら１滴ずつ加えた。ベンゼンと炭酸ガスを減圧で除いた。残った溶液を水で希釈し、濃塩酸でPHを１に調節し、エタノールと水で再結晶させ、室温で減圧で乾燥させた。２．５グラムの乾燥結晶を得た。融点（摂氏２１５−２２０度）とｎブタノールと酢酸と水（６：２：２容量比）で展開した薄層クロマトグラフのアールエフ値（０．４２）、赤外線スペクトルIR（KBｒ）（３０５０、３０５０−２８００、２６４０−２４４０、２１００、１６５０−１５４０、１４１０、１６３５ｃｍ−１）、プロトン核磁気共鳴スペクトル１H‐NMR（CF3COOD、７９．５４２MHｚ）（１．８３（ｓ，２Ｈ）、１．９５（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ）、質量スペクトルMS（ｍ／ｚ，ＥＩ）１０１（Ｍ＋）、８３、５６、５５、５４、３８、３６、２８、元素分析（C３１．０６、Ｈ６．４８、Ｎ８．９７、Ｃｌ２２．７９）より、この結晶がACCの塩酸塩１水和物C4H10ClNO3であることを確認した。
【実施例４】
【００２２】
実施例１から３と同様な操作でACC塩酸塩１水和物を４５０グラム合成した。これを用いて「食品安全性毒理学評価程序和方法」に準拠して、急性毒性試験、亜急性毒性試験、小核試験、変異原性試験、生殖に及ぼす影響試験等を行った。
【実施例５】
【００２３】
体重１９−２２グラムの健康なマウス雌雄２０匹ずつを１群５匹、雌雄各４群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を１．００、２．１５、４．６４、１０．０（グラム／キログラム体重）ずつゾンデで経口より強制投与（順に１．００群、２．１５群、４．６４群、１０．０群とする。）し、７日間観察し、急性毒性を調べた。１．００群、２．１５群、４．６４群は雌雄いずれの群も死ななかった。１０．０群は強制経口投与後３０分以内に５匹中５匹が死亡した。計算によりLD５０は雌雄とも６．８１グラム／キログラムになった。
【実施例６】
【００２４】
体重９０−１２０グラムの健康なSDラット雌雄４０匹ずつを１群１０匹、雌雄各４群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を毎日０．０、０．１２５、０．２５、０．５０（グラム／キログラム体重）ずつ３０日間ゾンデで経口より強制投与（各群を順に０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群とする。）し、３０日間観察し、亜急性毒性を調べた。４週目の０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群の体重は、雌がそれぞれ１９４．０±１５．４４、１８８．０±１９．２４、１９１．４±１２．８９、１９９．５±１６．７８（グラム）、雄がそれぞれ２５７．０±１８．３１、２５４．４±３７．５２、２６５．０±１９．７５、２６０．６±２４．１２（グラム）、食物利用率（体重増量／摂取量）は、雌がそれぞれ２１．９９±４．２８、２０．９８±３．２８、２１．４３±３．２６、２１．００±２．２３（％）、雄がそれぞれ２８．６１±２．４１、２８．９０±７．１２、３０．５８±２．５２、３１．０５±５．１１（％）、ヘモグロビン量は、雌がそれぞれ１４．２９±０．７６、１４．９３±０．９１、１４．７６±０．６８、１４．０６±０．６７（グラム／デシリットル）、雄がそれぞれ１４．６７±１．４３、１４．１３±１．４２、１４．１７±０．８５、１４．６６±０．６６（グラム／デシリットル）、白血球数は、雌がそれぞれ１５．８７±３．３５、１６．３１±４．２７、１４．８３±３．７６、１７．１７±４．００（１０の９乗個／リットル）、雄がそれぞれ１８．３８±３．６９、１８．３９±３．２４、１８．９４±４．０１、１６．５４±１．６７（１０の９乗個／リットル）、リンパ球は、雌がそれぞれ８３．４、８３．７、８１．４、８４．２（％）、雄がそれぞれ８７．３、８８．６、８６．５、８６．３（％）、好中球は、雌がそれぞれ１５．７、１５．８、１８．０、１５．２（％）、雄がそれぞれ１２．５、１１．０、１３．３、１３．４（％）、その他の白血球は、雌がそれぞれ０．９、０．５、０．６、０．６（％）、雄がそれぞれ０．２、０．４、０．２、０．３（％）、GPTは、雌がそれぞれ５４．１±５．６９、６４．５±１１．３３、５１．１±６．２３、４５．２±４．８７（国際単位／リットル）、雄がそれぞれ５８．４±５．１７、５８．７±０．３３、５２．８±５．０７、６０．４±４．４３（国際単位／リットル）、血清総蛋白量は、雌がそれぞれ８２．５±３．５０、９０．９±５．５３、８０．９±２．３３、８３．５±４．４０（グラム／リットル）、雄がそれぞれ７４．１±３．８４、７２．３±３．１３、７３．０±４．１４、７３．１±３．９０（グラム／リットル）、アルブミンは、雌がそれぞれ３９．１±０．８８、３９．２±１．０３、３９．０±０．６７、３９．１±１．２９（グラム／リットル）、雄がそれぞれ３６．６±１．５８、３５．８±０．９２、３６．１±０．９９、３６．０±１．０５（グラム／リットル）、トリグリセリドは、雌がそれぞれ０．８７±０．２２、０．９５±０．１５、０．６５±０．０８、０．８９±０．２５（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ１．１６±０．４９、１．４１±０．５０、１．００±０．２１、１．６２±０．５４（ミリモル／リットル）、コレステロールは、雌がそれぞれ２．５２±０．３４、２．４３±０．３４、２．８６±０．３５、１．９７±０．２９（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ２．２４±０．３２、１．９８±０．１８、１．９６±０．１６、２．０８±０．３２（ミリモル／リットル）、グルコースは、雌がそれぞれ４．７６±０．５０、４．８９±０．８７、４．５３±０．３９、５．１９±１．０６（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ４．４８±０．５８、４．２９±０．６３、４．５０±０．５７、４．６２±０．４２（ミリモル／リットル）、尿素は、雌がそれぞれ７．０２±１．１２、６．９０±０．８１、６．９９±０．６５、７．９６±１．１３（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ５．８０±０．５１、５．７５±０．５１、４．８７±０．４３、５．２５±０．６１（ミリモル／リットル）、肝体比は、雌がそれぞれ４．２０±０．３７、４．３４±０．１５、４．２１±０．３４、３．８２±０．５４（％）、雄がそれぞれ３．９９±０．３４、３．９７±０．３７、３．９８±０．１６、４．００±０．１５（％）、腎体比は、雌がそれぞれ０．７９±０．０８、０．８０±０．０３、０．８１±０．０５、０．８３±０．０６（％）、雄がそれぞれ０．８３±０．０９、０．８０±０．０４、０．８２±０．０４、０．８５±０．０５（％）であった。即ち、薬剤を投与しない対照群に比較し、どの薬剤投与群も体重、食物利用率、ヘモグロビン、白血球数、白血球中のリンパ球と好中球とその他の白血球の割合、GPT、血清総蛋白質、血清アルブミン、トリグリセリド、コレステロール、グルコース、尿素、肝体比、腎体比のいずれについても統計的有意差はなかった。
【実施例７】
【００２５】
体重２５−３０グラムの健康なマウス雌雄２５匹ずつを１群５匹、雌雄各５群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を０．０、１．２５、２．５０、５．００（グラム／キログラム）、メタンスルホン酸エチルを０．０８（グラム／キログラム）ずつ２４時間間隔で２回強制経口投与（各群を順に０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MSE０．０８群とする。）し、その６時間後に胸骨の骨髄を取り出し、染色して小核率を調べた。０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MSE０．０８群の小核率は、雌がそれぞれ２．２、１．４、１．４、１．８、３４．２（千分率）、雄がそれぞれ１．６、１．８、１．８、１．６、３３．２（千分率）であった。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群も骨髄小核率に統計的有意差はなかった。メタンスルホン酸エチルを投与する陽性対照群は雌雄共にP<０．０１の範囲で統計的有意差があった。
【実施例８】
【００２６】
体重２０−２５グラムの健康な雄マウス５０匹を１群１０匹、５群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を０、１．２５、２．５０、５．００（グラム／キログラム体重）、マイトマイシンC
を０．００２（グラム／キログラム体重）ずつ５日間強制経口投与（各群を順に０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MMC０．００２群とする。）し、その３５日後に両側の睾丸から精子を採取し、精子奇形率を調べた。０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MMC０．００２群の精子奇形率は、それぞれ１．５８、１．４０、１．３６、１．４８、６．１０（％）であった。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群も精子奇形率に統計的有意差はなかった。マイトマイシンCを投与する陽性対照群はP<０．０１の範囲で統計的有意差があった。
【実施例９】
【００２７】
Ames試験をするために、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物をシャーレ当たり５０００、１０００、２００、４０、８、０マイクログラムずつ添加し培地にサルモネラ菌４株TA97ａ、TA９８、TA１００、TA１０２を別々に接種し、摂氏３７度で４８時間培養し、変異菌のコロニーの出現数を数えた。陽性対照群として変異原剤マイトマイシンCを５マイクログラム、NaN3を１．５マイクログラム添加した培地を用いた。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群も変異菌のコロニーの出現数に統計的有意差はなかった。マイトマイシンC又はNaN3を投与する陽性対照群はP<０．０１の範囲で統計的有意差があった。
【実施例１０】
【００２８】
体重２００−２５０グラムの健康な未交配の雌のSDラット６０匹を１群１２匹、５群に分け、受精させた。受精後７日目から１６日目の間、毎日実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を０．０、０．１２５、０．２５、０．５０（グラム／キログラム体重）ずつ投与（各群を順に０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群とする。）し、受精後２０日目に受胎率を調べた。０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群の受胎率は順に７５．００、７５．００、９１．６７、８３．３３（％）であった。受精日及び受精２０日後の体重を測定した。体重増は順に１００．４±２８．５９、９０．２±２０．７４、８４．９±２４．５７、９５．３±１４．３１（グラム）であった。死胎率は順に０．００、０．９３、０．８９、０．００（％）であった。胎児の発育程度を反映する胸骨欠失率は順に４９．０２、４５．２８、４７．９２、３９．６２（％）であった。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群の受胎率、受精後の体重増、死胎率、胸骨欠失率にも統計的有意差はなかった。胎児の体重、身長、尾長に関しても対照群に比較し、統計的有意差はなかった。
【実施例１１】
【００２９】
４週齢雄ＳＨＲ‐ＳＰ／Ｉｚｍラットを京都にあるＳＨＲ等疾患モデル動物利用研究会より入手後、室温を摂氏２２±１度、湿度を６０±１０％、照明時間を６時から１８時まで１２時間に設定した飼育室で１週間予備飼育した。体重増加が順調で、一般状態に異常の認められなかったラット４０匹の血圧及び体重を測定し、このラット４０匹を１０匹ずつ４群に群間で血圧、体重の差のないように分けた。以下、毎日１回、週５回、２．５％のACC塩酸塩１水和物溶液を５０ミリグラム／キログラム体重の割合でラットの腹腔内に注射で投与する群をACC群、同じ投与条件でラットの脳血流量等を測定する群をＢ‐ＡＣＣ群、同量の蒸留水をラットの腹腔内に注射で投与する群を対照群、同じ投与条件でラットの脳血流量等を測定する群をＢ‐対照群とした。実験期間は固体SP飼料と水道水を自由に摂取させて飼育した。動物実験の取扱いに関しては、日本生理学会の定める「生理学領域における動物実験に関する基本指針」に従った。
【実施例１２】
【００３０】
実施例１１において、毎週１回、前述の温度・湿度の部屋で午前１１時から午後５時までで、薬剤投与前後にラットを摂氏３８度の加温器中で１０分間加温させ、順応した後、無麻酔下でテイル‐カット（ｔａｉｌ‐ｃｕｆｆ）法によりソフトロン（Ｓｏｆｔｒｏｎ）非観血式自動血圧測定装置（ＢＰ‐９８Ａ）（株式会社ソフトロン製）を用いて、収縮期血圧、拡張期血圧と心拍数を３回測定し、平均値と標準偏差を計算し、平均値±標準誤差で表した。有意差の有無をｔ‐検定により調べた。
実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物の投与開始直前、投与開始１週間後、２週間後、３週間後、４週間後の収縮期血圧は、対照群がそれぞれ１５０．６９±１１．２、１７５．３８±１０．５、１９９．５８±１８．２、２０７．５０±１７．５、２１３．６１±１１．３（ミリメートルＨｇ）であり、ACC群がそれぞれ１４４．７７±１１．１、１５３．３３±１１．７（＊３）、１７５．５８±１５．２（＊３）、１９４．４１±１４．４（＊）、１９８．５２±１６．７（＊２）（ミリメートルＨｇ）であり、弛緩期血圧は、対照群がそれぞれ１０７．１９±１１．７、１２４．２７±１０．２、１４０．７７±１７．０、１４７．７２±８．６９、１４９．６１±１３．６８（ミリメートルＨｇ）であり、ACC群がそれぞれ１０４．２２±１３．１、１１１．３３±１１．７（＊）、１２４．０５±９．６（＊２）、１４６．２２±１０．３、１５０．１１±１０．５（ミリメートルＨｇ）であり、心拍数は、対照群がそれぞれ３５９．８３±３２．５、３８４．０５±４０．８、３４９．８０±２５．８、３５９．６６±１９．０、３４９．５８±２２．６（回数／分）であり、ACC群がそれぞれ３７１．３０±２７．０、３５６．２２±２９．３、３４８．８８±２９．８、３５９．３６±２２．６、３５４．６１±２８．３（回数／分）であった。なお、対照群と比較してＰ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１の範囲で有意差があったACC群の値はそれぞれ（＊）、（＊２）、（＊３）印で示した。
収縮期血圧はACC群と対照群ともに投与４週目まで上昇したが、ＡＣＣ群では、対照群と比較して投与開始後１、２、３、４週目において血圧は有意な低値を示し、血圧上昇抑制効果を示した（それぞれＰ＜０．００１、０．００１、０．０５、０．０１）。拡張期血圧について投与開始後１、２週目においてＡＣＣ群は対照群に比べ有意に低値を示したが（それぞれＰ＜０．０５、Ｐ＜０．００５）、３と４週目においては有意な差が認められなかった。心拍数については、各週目においてＡＣＣ群と対照群の間に有意な差が認められなかった。
【実施例１３】
【００３１】
実施例１２において、ACC塩酸塩１水和物投与開始４週間後の血圧と心拍数測定後に、ラットを代謝ケ―ジに入れ、24時間採尿を行った。対照群とACC群の２４時間排泄量に関し、NO2／NO3をGriess法により、クレアチニンをアルカリピクリン法により、NaとKとClをイオン電極法により、Mgをキシリジル‐ブルー法により、CaをOCPC法により測定した。対照群とACC群のNO2／NO3は順に８．６８±３．２６と４．９２±２．０７（＊）（マイクロモル）、クレアチニンは順に３８．７５±７．９２と３５．８７±８．２２（ミリグラム／デシリットル）、Naは順に０．２６７±０．０８６と０．３９６±０．０６（＊２）（ミリ等量）、Kは順に０．５９０±０．１７と０．６６９±０．１３（ミリ等量）、Clは順に０．２２２±０．０７と０．３１９±０．０８（＊）（ミリ等量）、Mgは順に１．６１±０．８０と１．７４±０．６３（ミリ等量）、Caは順に０．２０±０．０８と０．２９±０．１１（ミリ等量）の値を得た。ＡＣＣ群は対照群に比べ、尿中のNO2／NO3がP<０．０５（＊）の範囲ないで、有意に低値を示し、尿中NaとClはそれぞれP<０．００５（＊２）とP<０．０５（＊）の範囲内で有意に高値を示した。ＡＣＣ群のクレアチンとK、Mg、Caは、対照群に比べ有意な差は無かった。NOの代謝産物であるNO2/NO3はNOの排泄量を反映している。NO、特にeNOS由来のNOは強力な血管拡張物質である。一方、NO、特にnNOS、iNOS由来のNOは神経細胞の障害物質として働いている。三種NOSの阻害剤が脳卒中の脳組織障害程度を軽減させる。ACC群のNO2／NO3低値はNOを減少させることによりSHR-SPラットの脳卒中発症予防や脳障害軽減、寿命を延長させたと思われる。しがし、ACC塩酸塩１水和物の降血圧作用はNOとの関係が薄く、その他の血圧調節物質と関与すると思われる。Na、Clの排泄量はACC群が対照群より有意に高いことは、両群とも同じ餌で飼育したので、NaCｌの排泄を促進、Na水貯留を防ぐことにより降血圧作用を発揮した可能性があると考えられる。
【実施例１４】
【００３２】
実施例１３において２４時間採尿後、24時間絶食させ、エーテル麻酔し、腹動脈より採血を行った。血中アルブミンはBCG法により、アルブミン／グロビン比は計算により、GOTとGPTはUV法により、ガンマ‐グルタミルトランスペプチダーゼは比色法により、尿素窒素はUV法により、クレアチニンはアルカリピクリン法により、NaとKはイオン電極法により、CaはOCPC法により、Clはイオン電極法により、Mgはキシリジル‐ブルー法により、アンジオテンシン１転移酵素は笠原法により、アンジオテンシン２はRIA・DCC法により測定した。対照群とACC群の血中アルブミンは順に２．３１±０．１８と２．３３±０．１５（グラム／デシリットル）、アルブミン／グロビン比は順に０．６１±０．０２と０．６１±０．０３（計算値）、GOTは順に４７６．９±１７８．１と５３２．２±１７５．７（単位／リットル）、GPTは順に１１５．６±４３．９と１２６．５±６８．２（単位／リットル）、ガンマ‐グルタミルトランスペプチダーゼは順に１．８６±０．９０と３．１７±０．７５（＊２）（単位／リットル）、尿素窒素は順に２０．４３±２．８２と１９．５０±４．３２（ミリグラム／デシリットル）、クレアチニンは順に０．３７±０．０８と０．３５±０．０６（ミリグラム／デシリットル）、Naは順に１４８．０±７．０２と１５３．５±１０．８（ミリ等量／リットル）、Kは順に６．３６±１．３７と６．７５±０．６７（ミリ等量／リットル）、Caは順に１０．９５±１．００と１０．１７±２．６９（ミリグラム／デシリットル）、Clは順に１０４．０±５．９０と１０７．３±８．８２（ミリ等量／リットル）、Mgは順に３．３４±０．４５と２．８５±０．５１（ミリグラム／デシリットル）、アンジオテンシン１転移酵素は順に２８．４７±１０．３と２５．５３±２．５（単位／リットル）、アンジオテンシン２は順位２０７．２±２１０．４と１５０．２±８１．３２（ピコグラム／ミリリットル）の値を得た。栄養状態を反映する血中アルブミン、アルブミン/ゴロブリン比及び、肝、腎機能を表すGOT、GPTや尿素窒素、クレアチニンは全て対照群とACC群の間に有意な差が無かったため、ACC塩酸塩１水和物の栄養状態、肝腎機能への影響が少ないと考えられる。ガンマGTP値についてACC群が対照群よりP<０．００１（＊２）の範囲内で有意に高値を示したが、正常範囲内であるので、ACC塩酸塩１水和物の副作用と考えにくい。また、血中Na、Cl、K、Ca、Mg値について、ACC群と対照群の間に有意な差が示されなかったことは、ACC塩酸塩１水和物が血中電解質のバランスに影響が無いことを示す。対照群に比べ、ACC群のアンジオテンシン１転移酵素、アンジオテンシン２値が低下の傾向が見られた。これはACC塩酸塩１水和物の降血圧の一因の可能性がある。
【実施例１５】
【００３３】
実施例１２において、ACC塩酸塩１水和物投与後１００日目の脳卒中の発症率と脳卒中後遺症の重傷度及び生存状況を観察し、分析した。死亡したラットを当日に解剖し、脳卒中病変の有無を病理検査した。実験データは平均値±標準誤差で表した。有意差の有無をｔ‐検定により調べた。
投与１００日まで、行動神経症状（過敏性、痛覚過敏性、四肢の麻痺等）の観察から脳卒中症状を示していた個体数はそれぞれＡＣＣ群２匹、対照群１０匹であった。ACC塩酸塩１水和物投与により脳卒中発症を抑制することが示された。投与１００日までの生存個体数に関しては、ＡＣＣ群は７９日目に１匹死亡した。これに対して対照群は７０日目に３匹、７５日目に２匹、８０日目に１匹、８２日目に３匹、８５日目に１匹、計１０匹の死亡が認められた。ACC塩酸塩１水和物投与による延命効果が確認できた（P<0.01）。死亡した個体についての解剖肉眼的所見は対照群の全例に大脳皮質下と大脳基底核に梗塞巣とその周囲の瀰漫性脳浮腫および出血巣を認めたのに対し、ＡＣＣ群ではこの病理変化が軽かった。
【実施例１６】
【００３４】
実施例１５において、ラットの行動神経症状により重症度の判定を行い、点数を付きて評価した。以下の評価基準を用いた。感覚（痛覚等）過敏を１点、片肢体マヒがあるが、自主的に歩け、ケージ蓋上の餌が自主的に食べられるを２点、片肢体マヒが存在し、自主的歩きが困難、ケージ内の餌しかを食べられないを３点、死亡を４点とした。対照群４０点に対し、ACC群は４点であり、対照群に比較してACC群は有意に脳卒中後遺症を軽減した。
【実施例１７】
【００３５】
実施例１１において、薬剤投与後の３０日目に、Ｂ‐ＡＣＣ群とＢ‐対照群の２群のラットにレーザー・ドップラ法を用いて脳血流量の連続的測定と２次元的測定を行なった。測定方法としては麻酔下においてラット頭皮を切開し、頭蓋骨を露出させ、リスカ社のレーザー・トップラー血流画像装置ＰＩＭ２（リスカ社、スウェーデン）を用いてラットの脳血流量を測定した。有意差の有無をｔ‐検定により調べた。レーザードップラ法を用いて連続的測定と二次元的測定を行い、ACC群１．４６４±０．２２、対照群１．１４４±０．３０（Ｐ＜０．０５）の値を得た。この結果はＡＣＣ群ラットの脳血流状況が対照群のラットより改善されたことを示している。
【実施例１８】
【００３６】
高血圧症、糖尿病、高脂血症、心疾患、一過性能虚血発作等脳卒中発症の危険因子の大きい患者で治験に参加を希望する人に対し、本治験により得られる可能性のある効果と危険性、及びいつでも治験参加を撤回でき、撤回により不利に扱わない旨が書かれた文書を渡して、かつ口頭でも説明した上で、それでも参加を希望する患者に対し、事前に治験倫理委員会の承認を得る治験プロトコールに従い、基礎治療の上にACC塩酸塩１水和物投与を行うACC群と基礎治療だけを行う対照群に２群する。患者の症状を毎日ジャパン・ストローク・スケール調査票に従い、点数を記入し、調査票に書かれた規則に従って計算された計算値で脳卒中の発症を診断し、対照群とACC群の脳卒中発症率の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中予防効果を測定できる。
ジャパン・ストローク・スケール調査票の内容は以下の通りである。
１．意識：ａ）またはｂ）
ａ）グラスゴウ・コマ・スケール：［開眼］自発的に開眼するを４点、呼びかけにより開眼するを３点、痛み刺激により開眼するを２点、全く開眼しないを１点、［言語］見当識良好を５点、混乱した会話を４点、不適切な言葉を３点、理解不能の応答を２点、反応なしを１点、［運動］命令に従うを６点、疼痛に適切に反応を５点、屈曲逃避を４点、異常屈曲反応を３点、伸展反応を２点、反応なしを１点とし、［開眼］と［言語］と［運動］の合計が15点をA、１４−７点をB、６−３点をCと分類する。
ｂ）ジャパン・コマ・スケール：［刺激しなくても覚醒している状態］全く正常を９点、大体意識清明だが、今一つはっきりしないを８点、時・人・場所がわからないを７点、自分の名前、生年月日が言えないを６点、［刺激すると覚醒している状態］普通の呼びかけで容易に開眼するを５点、大きな声または体を揺さぶることにより開眼するを４点、痛み・刺激を加えつつ呼びかけを繰り返すとかろうじて開眼するを３点、［刺激しても覚醒しない状態］痛み刺激に対しはらいのける様な動作をするを２点、痛み刺激で少し手足を動かしたり顔をしかめるを１点、痛み刺激に全く反応しないを０点とし、９点をA、8-3点をB、2-点をCと分類する。
分類の値（A＝７．７４、B＝１５．４７、＝２３．２１）を累計に用いる。
２．言語：口頭命令で拳をつくる、時計を見せて時計といえる、サクラを繰り返して言える、住所・家族の名前が上手に言える：４／４をA、３／４又は２／４をB、１／４又は０／４をCと分類し、分類の値（A＝１．７４、B＝２．９５、C＝４．４２）を累計に用いる。
３．無視：線分ニ等分試験正常をA、線分ニ等分試験で半側空間無視をB、麻痺に気が付かないあるいは一側の空間を無視した行動をするをCと分類し、分類の値（A＝０．４２、B＝０．８５、C＝１．２７）を累計に用いる。
４．視野欠損または半盲：同名性の視野欠損または半盲なしをA、同名性の視野欠損または半盲ありをBと分類し、分類の値（A=０．４５、B=０．９１）を累計に用いる。
５．眼球運動障害：なしをA、側方視が自由にできないをB、眼球に偏位したままで反対側へ側方視できないをCと分類し、分類の値（A＝０．８４、B＝１．６８、C＝２．５３）を累計に用いる。
６．瞳孔異常：瞳孔異常なしをA、片側の瞳孔異常ありをB、両側の瞳孔異常ありをCと分類し、分類の値（A＝１．０３、B＝２．０６、C＝３．０９）を累計に用いる。
７．顔面麻痺：なしをA、片側の鼻唇が浅いをB、安静時に口角が下垂しているをCと分類し、分類の値（A＝０．３１、B＝０．６２、C＝０．９３）を累計に用いる。
８．足底反射：正常をA、いずれとも言えないをB、病的反射ありをCと分類し、分類の値（A＝０．０８、B＝０．１５、C＝０．２３）を累計に用いる。
９．感覚系：正常をA、何らかの軽い感覚障害があるをB,はっきりした感覚障害があるをCと分類し、分類の値（A＝−０．１５、B＝−０．２９、C＝−０．４４）を累計に用いる。
１０．運動系：
１０‐１．手：正常をA、親指と小指で輪をつくる、またはそばに置いたコップが持てるをB、指は動くが物がつかめない、または全く動かないをCと分類し、分類の値（A＝０．３３、B＝０．６６、C＝０．９９）を累計に用いる。
１０‐２．腕：正常をA、肘を伸ばしたまま腕を挙上できる、または肘を屈曲すれば腕を挙上できるをB、腕はある程度動くが持ち上げられない、または全く動かないをCと分類し、分類の値（A＝０．６６、B＝１．３１、C＝１．９７）を累計に用いる。
１０‐３．下肢手：正常をA、膝を伸ばしたまま下肢を挙上できる、または自力で膝立てが可能をB、下肢は動くが膝立てはできない、または全く動かないをCと分類し、分類の値（A＝１．１５、B＝２．３１、C＝３．４６）を累計に用いる。
上記各分類の値の累計から定数１４．７１を差引いた値がプラスの場合は脳卒中発症と判断する。対照群とACC群の脳卒中発症の頻度の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中予防または治療効果を測定できる。
【実施例１９】
【００３７】
脳卒中後遺症がある患者を脳卒中運動機能障害重傷度スケールに従い、診断し、重傷度別に群分けをする。一つの群をACC塩酸塩１水和物を投与するACC群と投与しない対照群に２群する。両群とも重傷度に合わせた同じリハビリを行い、定期的に脳卒中運動機能障害重傷度スケール採点を行う。対照群とACC群の脳卒中運動機能障害重傷度の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中後遺症予防または治療効果を測定する。
脳卒中運動機能障害重傷度スケールの内容は以下の通りである。
１．顔面麻痺：なしをA、ありをBと分類し、分類の値（A＝−１．２７、B＝１．２７）を累計に用いる。
２．嚥下障害：なしをA、時にむせることがあるをB、チューブ・フィーディングが必要をCと分類し、分類の値（A＝−４．９３、B＝−０．８９、C＝５．８２）を累計に用いる。
３．腕：肘を伸ばしたまま腕を挙上できるをA、肘を屈曲すれば腕を挙上できるをB、重力に抗して運動できないをCと分類し、分類の値（A＝−０．９７、B＝−０．０９、C＝１．０６）を累計に用いる。
４．手：正常をA、そばに置いたコップが持てるをB、物がつかめないをCと分類し、分類の値（A＝−１．２６、B＝−０．１６、C＝１．４２）を累計に用いる。
５．下肢近位筋：臥位で検査し正常をA、膝立て可能をB、膝立て不能をCと分類し、分類の値（A＝−１．０４、B＝０．１４、C＝０．８９）を累計に用いる。
６．足関節：座位で検査し、座位がとれない場合は臥位の筋力から推定し、爪先を上げられるをA、爪先を上げられないをBと分類し、分類の値（A＝−０．５２、B＝０．５２）を累計に用いる。
７．複合運動：ベッド上仰臥位からベッド脇で立位になるまでの一連の動作で、ベッド脇に立てるをA、ベッドに座れるをB、座れないをCと分類し、分類の値（A＝−１．２４、B＝−０．３９、C＝１．６３）を累計に用いる。
８．歩行：補助具なしに歩けるをA、補助具ないしは介護者があれば歩けるをB、自力では歩けないをCと分類し、分類の値（A＝−３．６３、B＝−０．４５、C＝４．０８）を累計に用いる。
上記各分類の値の累計に定数１４．６０を加え値がプラスの場合は脳卒中後遺症ありと判断する。対照群とACC群の脳卒中運動機能障害重傷度の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中後遺症予防または治療効果を測定できる。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明の薬剤は、脳卒中又は脳卒中後遺症の予防剤又は治療剤として、利用可能性がある。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
平成13年度の厚生労働省の統計によれば、介護を要する65歳以上の高齢者94,750人に対し、介護が必要になった主な原因の１位は脳卒中等脳血管疾患24,749人、２位は骨折11,744人、３位は痴呆10,659人であり、脳卒中等脳血管疾患が飛びぬけて多い。脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の開発が強く望まれる。
高齢者の高血圧症患者、糖尿病患者、高脂血症患者は脳卒中を起こしやすい。そこで、脳卒中又は脳卒中後遺症の予防として、脳卒中又は脳卒中後遺症の原因たる高血圧症を降圧剤で、糖尿病を抗糖尿病剤で、高脂血症を抗脂血剤で管理する方法が取られているが、脳卒中又は脳卒中後遺症の発生を十分には防いでいない。
そこで、種々のアプローチに脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の開発研究が行われている。例えば、トロンボキサンＡ２合成阻害剤によるアテローム動脈硬化性脳卒中の血栓症状の治療（特許文献１）、血圧を低下させない用量で脳卒中の再発防止剤（特許文献２）、ＮＲ２Ｂサブタイプ選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを種々の薬剤と組み合わせる脳卒中治療法（特許文献３）、ホスファチジルコリンを有効成分とする脳卒中予防剤（特許文献４）、アホエンを有効成分とする過酸化物を減少させることによる脳卒中予防剤（特許文献５）、キサンチンを有効成分とする脳卒中予防剤（特許文献６）、ジオキサンシクロ［３，３，０］オクタン誘導体を有効成分とする高血圧症状の改善による脳卒中予防剤（特許文献７）等が公表されている。しかし、未だ十分ではなく、新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の開発が望まれている。
【０００３】
一方、１‐アミノシクロプロパンカルボン酸、別名アルファ‐アミノシクロプロパンカルボン酸（英語名：１−ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ・ａｃｉｄ。以下、略称ＡＣＣで表す。）は濃縮果物汁より抽出した天然物質（非特許文献１）で、無臭・水溶性の白色結晶体であり、植物成長調節剤の１種で、１個のアミノ基と１個のカルボン酸と１個の３員環を有する。ＡＣＣは、植物抽出法の他、合成法（特許文献８、非特許文献２−４）からも得られる。
ＡＣＣは、植物成長調節作用、エタノール消費作用（非特許文献５）の他、Ｎ‐メチル-Ｄ-アスパラギン酸（以下、ＮＭＤＡと略称する。）受容体複合体のストリキニン非感受性グリシン受容体部位の部分アゴニストであり（非特許文献６）、かつ、グルタミン酸受容体部位のアンタゴニストである（非特許文献７）。ＡＣＣは、ＮＭＤＡにより誘導される海馬神経の変性を抑え（非特許文献８）、ＮＭＤＡ毒性に対し脊髄神経を保護し（非特許文献９）、ＮＭＤＡ受容体を介して記憶を改良し（特許文献９）、病巣虚血、広範囲虚血及び脊髄虚血による神経障害を予防するが、ＡＣＣの長期投与によりＮＭＤＡ受容体のメッセンジャーＲＮＡの発現が減少し、薬効が減少する（非特許文献１０）。従って、ＡＣＣはＮＭＤＡ受容体に作用して神経を保護するが持続せず、脳卒中又は脳卒中後遺症を予防又は治療しないと思われた。
【０００４】
以下に先行文献を特許文献と非特許文献に分けて表示する。
【特許文献１】特開２００３−２６６６０号公報
【特許文献２】特開２００２−３７０９８１号公報
【特許文献３】特開２００２−３２２０９５号公報
【特許文献４】特開２０００−２３９１６８号公報
【特許文献５】特開平１１−２２８３９６号公報
【特許文献６】特開平１０−１８２４６９号公報
【特許文献７】特開平８−２６８８８７号公報
【特許文献８】特開平７−２７８０７７号公報
【特許文献９】特開平８−５１０９９０号公報
【非特許文献１】L．F．Burroughs、Nature，１９５７年１７９巻３６０頁
【非特許文献２】Ａ．Ｃｏｎｎｏｒｓら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６０年２１２９頁
【非特許文献３】Ｅ．Ｂｕｎｕｅｌら、Ｓｙｎｌｅｔｔ．１９９２年７巻５７９頁
【非特許文献４】X．Zhuら、Synthetic Communication １９９８年２８巻１７号３１５９頁
【非特許文献５】Ｂ．Ａ．ＭｃＭｉｌｌｅｎら、Ｂｒａｉｎ・Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．２００４年６４巻３号２７９頁
【非特許文献６】Ｒ．Ｔｒｕｌｌａｓら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１９８９年３４巻２号３１３頁
【非特許文献７】Ｒ．Ｎａｈｕｍ‐Ｌｅｖｙら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ・Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９８９年５６巻１２０７頁
【非特許文献８】Ａ．Ｚａｐａｔａら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ．１９９６年７巻２号３９７頁
【非特許文献９】Ｙ．Ｌｉｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９６年３１８巻２-３号４９１頁
【非特許文献１０】Ｓ．Ｂｏｖｅｔｔｏら、Ａｍ．Ｓｏｃ．ｆｏｒ・Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１９９７年２９３巻３号１５０３頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、今回、発明者等はACCを用いて脳卒中易発症ラットＳＨＲＳＰにおける血圧の降圧作用、脳卒中発症率、脳卒中後遺症の重傷度、主要臓器及び寿命への影響を対照ラットと比較検討し、ACCが脳卒中易発症ラットＳＨＲＳＰの脳卒中又は脳卒中後遺症の予防又は治療に著しい効果があることを確認し、この結果を基に更に種々研究した結果、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、「新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤を提供する」という課題に対し、「ＡＣＣ及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤」を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の薬剤は、脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は新しい脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の発明である。本発明の薬剤の主成分はＡＣＣ及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物である。
【００１０】
ＡＣＣは、天然物質も合成品も使用可能である。天然のACCは洋ナシやリンゴジュース等に含まれており、前述の非特許文献１に記載の方法により濃縮した洋ナシやリンゴジュースより抽出して得られるが、ＡＣＣは他の種々の果物に含まれているので、他の果物から抽出したものも使用可能である。合成のACCは前述の非特許文献２−４に記載の方法により得られるが、他の方法で合成したものも使用可能である。種々の合成法の中、非特許文献４に記載されている方法は、容易に得られる材料を用い、温和な反応条件で高収率でＡＣＣを合成可能であるため、大量合成の場合に特に望ましい。例えば、ジエチルマロン酸と１，２‐ジブロモエタンよりシクロプロパン‐１，１‐ジカルボン酸（以下、化合物１と略称する。）を得る。化合物１に無水酢酸、濃硫酸とアセトンを加えてスピロ‐［２，５］‐５，７‐ジオキサ‐６，６‐ジメチルオクタン‐４，８ジオン（以下、化合物２と略称する。）を得る。化合物２をヒドラジン分解して１‐ヒドラジノカルボニルシクロプロパン‐１‐カルボン酸（以下、化合物３と略称する。）を得る。化合物３を塩酸処理後硝酸ナトリウム処理して生じた１‐アジドカルボニルシクロプロパン‐１‐カルボン酸（以下、化合物４と略称する。）のクルチウス転位によりACCを得る。ACCは多くの会社が市販している。市販しているACCも使用可能である。ACCは実施例に示す様に急性毒性LD５０が６．８１グラム／キログラム、体重、食物利用率、血液像、生化学、臓器等亜急性毒性は特になく、骨髄小核率、奇形率、変異原、生殖等に影響を与える特殊毒性もなく、ヒトへの投与を躊躇する毒性は認められない。
【００１１】
ＡＣＣのプロドラッグは加水分解等分解を受けてＡＣＣに成るものであれば、薬学的に許容することのできる限り、どのようなものでもよい。当該プロドラッグの一つとしてＡＣＣ分子中のカルボキシル基でのメチルエステル誘導体又はエチルエステル誘導体やＡＣＣ分子中のアミノ基でのアセチル誘導体等が挙げられるが、それらに限らない。将来合成されるものでも差し支えない。
【００１２】
ＡＣＣの塩及びＡＣＣのプロドラッグの塩は薬学的に許容することのできる塩に限られる。薬学的に許容することのできる塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等のアンモニウム塩、トリエチルアミン、リジン、アルギニン等の有機アミンの塩、塩酸、臭化水素酸、硫酸等鉱酸との酸付加塩等が挙げられるが、それらに限らない。薬学的に許容することのできる塩であればよく、薬学的に許容することのできる限り、将来合成される有機化合物との塩でも差し支えない。
【００１３】
ＡＣＣ及びそのプロドラッグの水和物、薬学的に許容することのできるＡＣＣの塩及びそのプロドラッグの塩の水和物も本発明の主成分として用いることができる。ＡＣＣの水和物としてはＡＣＣ（H2O）、ＡＣＣ（H2O）２、ＡＣＣ（H2O）３、ＡＣＣ（H2O）４、ＡＣＣ（H2O）５、ＡＣＣ（H2O）６、ＡＣＣ（H2O）７、ＡＣＣ（H2O）８が挙げられる。ACCの塩の水和物としてはＡＣＣ・HCｌ（H2O）等が挙げられる。
【００１４】
本発明の脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤は、主成分が非高分子であることから、経口投与又は非経口投与（坐薬、筋肉内、皮下、静脈内、脳内など）のいずれでも投与できる。主成分がＡＣＣのプロドラッグの場合も、体内で当該プロドラッグが活性化するので、当該プロドラッグを予め活性化しておく必要はない。
【００１５】
経口用製剤を調製する場合、賦形剤、さらに必要に応じて、抗酸化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により、錠剤、被服錠剤、顆粒剤、カプセル剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性又は水性の懸濁液剤などとする。賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、ソルビット、結晶セルーロスなどが挙げられる。結合剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【００１６】
崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン未、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストラン、ペクチンなどが挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などが挙げられる。着色剤としては、医薬品に添加することが許可されているものが使用できる。矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、竜脳、桂皮末などが使用できる。これらの錠剤は、顆粒剤には、糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングしてもよい。
【００１７】
注射剤を調製する場合、必要により、グルコースや生理的食塩水等の等調液、pH調整剤、緩衝剤、抗酸化剤及びその他の安定化剤、保存剤などを添加し、常法により、皮下、筋肉内、静脈内、脳内注射剤とする。注射剤は、溶液を容器に収納後、凍結乾燥などによって、固形製剤として、用事調製の製剤としてもよい。また、一投与量を容器に収納してもよく、また、多投与量を同一の容器に収納してもよい。溶液の場合、酸素や湿気を遮断する方がよい。そのため、場合によってはアンプル型の容器に入れ、空気を抜くか、窒素ガス等で空気を置換しておく方がよい。公知の方法でよい。
【００１８】
本発明の脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤の投与量は、経口剤、坐薬、皮下注射剤、筋肉内注射剤、静脈内注射剤、脳内注射剤等剤型によって異なるが、ヒトの場合、成人１日当たり通常０．０１〜１０００ミリグラム、好ましくは、０．１〜１００ミリグラムの範囲で、１日量を１日１回、あるいは２〜４回に分けて投与する。なお、年齢、症状により適宜増減する。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、ACCの毒性試験、薬効試験に関し、急性毒性試験、亜急性毒性試験、催奇性毒性試験、変異原性試験、繁殖性試験中の白血球、リンパ、好中数、ヘモグロビン、GOT、血清総蛋白、アルブミン、トリグリセリド、コレステロール、グルコース、尿素、小核率、精子奇形率、復帰変異菌、死胎率、胎児体重・身長・尾長、胸骨欠失率、等の分析は株式会社日本実権医学研究等毒性試験受託会社がルーチンに受託分析し、尿中NO2／NO3、クレアチニン、Na、K、Ca、Cl、Mg、血中アルブミン、グロブリン、GOT、GTP、ガンマ‐グルタミルトランスペプチダーゼ、尿素窒素、クレアチニン、Na、K、Ca、Cl、Mg、アンギオテンシン１転換酵素、アンギオテンシン２等分析はシオノギ・バイオメディカル・ラボラトリーズ等臨床検査受託会社がルーチンに受託分析している。
【実施例１】
【００１９】
摂氏０度で氷塩の浴槽中で２４ミリリットルの無水酢酸に２６グラムの化合物１を加え、攪拌により懸濁しつつ、９８％の濃硫酸０．８ミリリットルと２０ミリリットルのアセトンを１滴ずつ加えた。不溶物が溶け、透明な溶液になった。この溶液を氷塩浴槽中で更に１時間攪拌した後に、冷蔵庫に入れ、１晩放置した。翌日にこの溶液を３００ミリリットルの氷水で希釈した。生じた結晶をろ過で分離し、３００ミリリットルの氷水で２回洗浄し、第１番目の結晶を得た。ろ液と洗浄液を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウムでPH５にまで中和し、生じた結晶をろ過で分離し、少量の氷水で２回洗浄し、第２番目の結晶を得た。ろ液を５０ミリリットルのエーテルで３回抽出し、エーテル層を分離し、蒸発させ、第３番目の結晶を得た。第１番目から第３番目までの結晶を集め、乾燥し、２９グラムの結晶を得た。融点（摂氏６１−６３度）とシクロヘキサンとアセトン（３：１容量比）で展開した薄層クロマトグラフのアールエフ値（０．３４）より、この結晶が化合物２であることを確認した。
【実施例２】
【００２０】
実施例１で得られた化合物２の１７グラムを室温（摂氏２１−２５度）で無水エタノール１００ミリリットルに懸濁し、その懸濁液に１０グラムの８５％ヒドラジン水和物と無水エタノール１０ミリリットルの混合溶液を１滴ずつ加えた。不溶物が溶け、透明な溶液になった。この透明溶液を室温で４晩放置した。溶液中の化合物２が消失したことを実施例１に記載の薄層クロマトグラフで確認した。溶液を蒸発させ、生じた白い針状結晶を吸引ポンプでろ過し、結晶を少量の無水エタノールで洗浄し、乾燥した。１４．４グラムの乾燥結晶を得た。融点（摂氏１５０−１５２度）とエタノールで展開した薄層クロマトグラフのアールエフ値（０．５）より、この結晶が化合物３であることを確認した。
【実施例３】
【００２１】
実施例２で得られた化合物３の５グラムを室温で水１０ミリリットルに溶解し、その溶液に３６−３８％の濃塩酸５ミリリットルを加え、１５グラムの砕いた氷とエーテル２０ミリリットルの中に注ぎ、攪拌して不溶物を懸濁した。氷塩の浴槽中で懸濁液を攪拌しつつ、３４．５％の亜硝酸ナトリウム水溶液５．７ミリリットルを１滴ずつゆっくりと添加した。不溶物が溶け、透明な溶液になった。この透明溶液を更に２０分間攪拌した。操作中混合液の温度は摂氏０度からマイナス５度の間で維持した。エーテル層を分離した。水層を冷却したエーテル１０ミリリットルで２回抽出した。得られた３つのエーテル溶液を合わせ、無水塩化カルシウム上で１５分間乾燥させた。乾燥させたエーテルを摂氏４０度の浴槽中のフラスコに入ったベンゼン３０ミリリットル中に１時間かけて移した。ベンゼン溶液中のエーテルと窒素を室温で蒸発させた。エーテルと窒素を蒸発させたベンゼン溶液に３６−３８％の濃塩酸１２ミリリットルを振動させながら１滴ずつ加えた。ベンゼンと炭酸ガスを減圧で除いた。残った溶液を水で希釈し、濃塩酸でPHを１に調節し、エタノールと水で再結晶させ、室温で減圧で乾燥させた。２．５グラムの乾燥結晶を得た。融点（摂氏２１５−２２０度）とｎブタノールと酢酸と水（６：２：２容量比）で展開した薄層クロマトグラフのアールエフ値（０．４２）、赤外線スペクトルIR（KBｒ）（３０５０、３０５０−２８００、２６４０−２４４０、２１００、１６５０−１５４０、１４１０、１６３５ｃｍ−１）、プロトン核磁気共鳴スペクトル１H‐NMR（CF3COOD、７９．５４２MHｚ）（１．８３（ｓ，２Ｈ）、１．９５（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ）、質量スペクトルMS（ｍ／ｚ，ＥＩ）１０１（Ｍ＋）、８３、５６、５５、５４、３８、３６、２８、元素分析（C３１．０６、Ｈ６．４８、Ｎ８．９７、Ｃｌ２２．７９）より、この結晶がACCの塩酸塩１水和物C4H10ClNO3であることを確認した。
【実施例４】
【００２２】
実施例１から３と同様な操作でACC塩酸塩１水和物を４５０グラム合成した。これを用いて「食品安全性毒理学評価程序和方法」に準拠して、急性毒性試験、亜急性毒性試験、小核試験、変異原性試験、生殖に及ぼす影響試験等を行った。
【実施例５】
【００２３】
体重１９−２２グラムの健康なマウス雌雄２０匹ずつを１群５匹、雌雄各４群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を１．００、２．１５、４．６４、１０．０（グラム／キログラム体重）ずつゾンデで経口より強制投与（順に１．００群、２．１５群、４．６４群、１０．０群とする。）し、７日間観察し、急性毒性を調べた。１．００群、２．１５群、４．６４群は雌雄いずれの群も死ななかった。１０．０群は強制経口投与後３０分以内に５匹中５匹が死亡した。計算によりLD５０は雌雄とも６．８１グラム／キログラムになった。
【実施例６】
【００２４】
体重９０−１２０グラムの健康なSDラット雌雄４０匹ずつを１群１０匹、雌雄各４群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を毎日０．０、０．１２５、０．２５、０．５０（グラム／キログラム体重）ずつ３０日間ゾンデで経口より強制投与（各群を順に０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群とする。）し、３０日間観察し、亜急性毒性を調べた。４週目の０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群の体重は、雌がそれぞれ１９４．０±１５．４４、１８８．０±１９．２４、１９１．４±１２．８９、１９９．５±１６．７８（グラム）、雄がそれぞれ２５７．０±１８．３１、２５４．４±３７．５２、２６５．０±１９．７５、２６０．６±２４．１２（グラム）、食物利用率（体重増量／摂取量）は、雌がそれぞれ２１．９９±４．２８、２０．９８±３．２８、２１．４３±３．２６、２１．００±２．２３（％）、雄がそれぞれ２８．６１±２．４１、２８．９０±７．１２、３０．５８±２．５２、３１．０５±５．１１（％）、ヘモグロビン量は、雌がそれぞれ１４．２９±０．７６、１４．９３±０．９１、１４．７６±０．６８、１４．０６±０．６７（グラム／デシリットル）、雄がそれぞれ１４．６７±１．４３、１４．１３±１．４２、１４．１７±０．８５、１４．６６±０．６６（グラム／デシリットル）、白血球数は、雌がそれぞれ１５．８７±３．３５、１６．３１±４．２７、１４．８３±３．７６、１７．１７±４．００（１０の９乗個／リットル）、雄がそれぞれ１８．３８±３．６９、１８．３９±３．２４、１８．９４±４．０１、１６．５４±１．６７（１０の９乗個／リットル）、リンパ球は、雌がそれぞれ８３．４、８３．７、８１．４、８４．２（％）、雄がそれぞれ８７．３、８８．６、８６．５、８６．３（％）、好中球は、雌がそれぞれ１５．７、１５．８、１８．０、１５．２（％）、雄がそれぞれ１２．５、１１．０、１３．３、１３．４（％）、その他の白血球は、雌がそれぞれ０．９、０．５、０．６、０．６（％）、雄がそれぞれ０．２、０．４、０．２、０．３（％）、GPTは、雌がそれぞれ５４．１±５．６９、６４．５±１１．３３、５１．１±６．２３、４５．２±４．８７（国際単位／リットル）、雄がそれぞれ５８．４±５．１７、５８．７±０．３３、５２．８±５．０７、６０．４±４．４３（国際単位／リットル）、血清総蛋白量は、雌がそれぞれ８２．５±３．５０、９０．９±５．５３、８０．９±２．３３、８３．５±４．４０（グラム／リットル）、雄がそれぞれ７４．１±３．８４、７２．３±３．１３、７３．０±４．１４、７３．１±３．９０（グラム／リットル）、アルブミンは、雌がそれぞれ３９．１±０．８８、３９．２±１．０３、３９．０±０．６７、３９．１±１．２９（グラム／リットル）、雄がそれぞれ３６．６±１．５８、３５．８±０．９２、３６．１±０．９９、３６．０±１．０５（グラム／リットル）、トリグリセリドは、雌がそれぞれ０．８７±０．２２、０．９５±０．１５、０．６５±０．０８、０．８９±０．２５（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ１．１６±０．４９、１．４１±０．５０、１．００±０．２１、１．６２±０．５４（ミリモル／リットル）、コレステロールは、雌がそれぞれ２．５２±０．３４、２．４３±０．３４、２．８６±０．３５、１．９７±０．２９（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ２．２４±０．３２、１．９８±０．１８、１．９６±０．１６、２．０８±０．３２（ミリモル／リットル）、グルコースは、雌がそれぞれ４．７６±０．５０、４．８９±０．８７、４．５３±０．３９、５．１９±１．０６（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ４．４８±０．５８、４．２９±０．６３、４．５０±０．５７、４．６２±０．４２（ミリモル／リットル）、尿素は、雌がそれぞれ７．０２±１．１２、６．９０±０．８１、６．９９±０．６５、７．９６±１．１３（ミリモル／リットル）、雄がそれぞれ５．８０±０．５１、５．７５±０．５１、４．８７±０．４３、５．２５±０．６１（ミリモル／リットル）、肝体比は、雌がそれぞれ４．２０±０．３７、４．３４±０．１５、４．２１±０．３４、３．８２±０．５４（％）、雄がそれぞれ３．９９±０．３４、３．９７±０．３７、３．９８±０．１６、４．００±０．１５（％）、腎体比は、雌がそれぞれ０．７９±０．０８、０．８０±０．０３、０．８１±０．０５、０．８３±０．０６（％）、雄がそれぞれ０．８３±０．０９、０．８０±０．０４、０．８２±０．０４、０．８５±０．０５（％）であった。即ち、薬剤を投与しない対照群に比較し、どの薬剤投与群も体重、食物利用率、ヘモグロビン、白血球数、白血球中のリンパ球と好中球とその他の白血球の割合、GPT、血清総蛋白質、血清アルブミン、トリグリセリド、コレステロール、グルコース、尿素、肝体比、腎体比のいずれについても統計的有意差はなかった。
【実施例７】
【００２５】
体重２５−３０グラムの健康なマウス雌雄２５匹ずつを１群５匹、雌雄各５群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を０．０、１．２５、２．５０、５．００（グラム／キログラム）、メタンスルホン酸エチルを０．０８（グラム／キログラム）ずつ２４時間間隔で２回強制経口投与（各群を順に０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MSE０．０８群とする。）し、その６時間後に胸骨の骨髄を取り出し、染色して小核率を調べた。０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MSE０．０８群の小核率は、雌がそれぞれ２．２、１．４、１．４、１．８、３４．２（千分率）、雄がそれぞれ１．６、１．８、１．８、１．６、３３．２（千分率）であった。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群も骨髄小核率に統計的有意差はなかった。メタンスルホン酸エチルを投与する陽性対照群は雌雄共にP<０．０１の範囲で統計的有意差があった。
【実施例８】
【００２６】
体重２０−２５グラムの健康な雄マウス５０匹を１群１０匹、５群に分け、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を０、１．２５、２．５０、５．００（グラム／キログラム体重）、マイトマイシンC
を０．００２（グラム／キログラム体重）ずつ５日間強制経口投与（各群を順に０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MMC０．００２群とする。）し、その３５日後に両側の睾丸から精子を採取し、精子奇形率を調べた。０．０群、１．２５群、２．５０群、５．００群、MMC０．００２群の精子奇形率は、それぞれ１．５８、１．４０、１．３６、１．４８、６．１０（％）であった。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群も精子奇形率に統計的有意差はなかった。マイトマイシンCを投与する陽性対照群はP<０．０１の範囲で統計的有意差があった。
【実施例９】
【００２７】
Ames試験をするために、実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物をシャーレ当たり５０００、１０００、２００、４０、８、０マイクログラムずつ添加し培地にサルモネラ菌４株TA97ａ、TA９８、TA１００、TA１０２を別々に接種し、摂氏３７度で４８時間培養し、変異菌のコロニーの出現数を数えた。陽性対照群として変異原剤マイトマイシンCを５マイクログラム、NaN3を１．５マイクログラム添加した培地を用いた。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群も変異菌のコロニーの出現数に統計的有意差はなかった。マイトマイシンC又はNaN3を投与する陽性対照群はP<０．０１の範囲で統計的有意差があった。
【実施例１０】
【００２８】
体重２００−２５０グラムの健康な未交配の雌のSDラット６０匹を１群１２匹、５群に分け、受精させた。受精後７日目から１６日目の間、毎日実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物を０．０、０．１２５、０．２５、０．５０（グラム／キログラム体重）ずつ投与（各群を順に０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群とする。）し、受精後２０日目に受胎率を調べた。０．０群、０．１２５群、０．２５群、０．５０群の受胎率は順に７５．００、７５．００、９１．６７、８３．３３（％）であった。受精日及び受精２０日後の体重を測定した。体重増は順に１００．４±２８．５９、９０．２±２０．７４、８４．９±２４．５７、９５．３±１４．３１（グラム）であった。死胎率は順に０．００、０．９３、０．８９、０．００（％）であった。胎児の発育程度を反映する胸骨欠失率は順に４９．０２、４５．２８、４７．９２、３９．６２（％）であった。薬剤を投与しない対照群に比較し、どのACC塩酸塩１水和物投与群の受胎率、受精後の体重増、死胎率、胸骨欠失率にも統計的有意差はなかった。胎児の体重、身長、尾長に関しても対照群に比較し、統計的有意差はなかった。
【実施例１１】
【００２９】
４週齢雄ＳＨＲ‐ＳＰ／Ｉｚｍラットを京都にあるＳＨＲ等疾患モデル動物利用研究会より入手後、室温を摂氏２２±１度、湿度を６０±１０％、照明時間を６時から１８時まで１２時間に設定した飼育室で１週間予備飼育した。体重増加が順調で、一般状態に異常の認められなかったラット４０匹の血圧及び体重を測定し、このラット４０匹を１０匹ずつ４群に群間で血圧、体重の差のないように分けた。以下、毎日１回、週５回、２．５％のACC塩酸塩１水和物溶液を５０ミリグラム／キログラム体重の割合でラットの腹腔内に注射で投与する群をACC群、同じ投与条件でラットの脳血流量等を測定する群をＢ‐ＡＣＣ群、同量の蒸留水をラットの腹腔内に注射で投与する群を対照群、同じ投与条件でラットの脳血流量等を測定する群をＢ‐対照群とした。実験期間は固体SP飼料と水道水を自由に摂取させて飼育した。動物実験の取扱いに関しては、日本生理学会の定める「生理学領域における動物実験に関する基本指針」に従った。
【実施例１２】
【００３０】
実施例１１において、毎週１回、前述の温度・湿度の部屋で午前１１時から午後５時までで、薬剤投与前後にラットを摂氏３８度の加温器中で１０分間加温させ、順応した後、無麻酔下でテイル‐カット（ｔａｉｌ‐ｃｕｆｆ）法によりソフトロン（Ｓｏｆｔｒｏｎ）非観血式自動血圧測定装置（ＢＰ‐９８Ａ）（株式会社ソフトロン製）を用いて、収縮期血圧、拡張期血圧と心拍数を３回測定し、平均値と標準偏差を計算し、平均値±標準誤差で表した。有意差の有無をｔ‐検定により調べた。
実施例４で得られたACC塩酸塩１水和物の投与開始直前、投与開始１週間後、２週間後、３週間後、４週間後の収縮期血圧は、対照群がそれぞれ１５０．６９±１１．２、１７５．３８±１０．５、１９９．５８±１８．２、２０７．５０±１７．５、２１３．６１±１１．３（ミリメートルＨｇ）であり、ACC群がそれぞれ１４４．７７±１１．１、１５３．３３±１１．７（＊３）、１７５．５８±１５．２（＊３）、１９４．４１±１４．４（＊）、１９８．５２±１６．７（＊２）（ミリメートルＨｇ）であり、弛緩期血圧は、対照群がそれぞれ１０７．１９±１１．７、１２４．２７±１０．２、１４０．７７±１７．０、１４７．７２±８．６９、１４９．６１±１３．６８（ミリメートルＨｇ）であり、ACC群がそれぞれ１０４．２２±１３．１、１１１．３３±１１．７（＊）、１２４．０５±９．６（＊２）、１４６．２２±１０．３、１５０．１１±１０．５（ミリメートルＨｇ）であり、心拍数は、対照群がそれぞれ３５９．８３±３２．５、３８４．０５±４０．８、３４９．８０±２５．８、３５９．６６±１９．０、３４９．５８±２２．６（回数／分）であり、ACC群がそれぞれ３７１．３０±２７．０、３５６．２２±２９．３、３４８．８８±２９．８、３５９．３６±２２．６、３５４．６１±２８．３（回数／分）であった。なお、対照群と比較してＰ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１の範囲で有意差があったACC群の値はそれぞれ（＊）、（＊２）、（＊３）印で示した。
収縮期血圧はACC群と対照群ともに投与４週目まで上昇したが、ＡＣＣ群では、対照群と比較して投与開始後１、２、３、４週目において血圧は有意な低値を示し、血圧上昇抑制効果を示した（それぞれＰ＜０．００１、０．００１、０．０５、０．０１）。拡張期血圧について投与開始後１、２週目においてＡＣＣ群は対照群に比べ有意に低値を示したが（それぞれＰ＜０．０５、Ｐ＜０．００５）、３と４週目においては有意な差が認められなかった。心拍数については、各週目においてＡＣＣ群と対照群の間に有意な差が認められなかった。
【実施例１３】
【００３１】
実施例１２において、ACC塩酸塩１水和物投与開始４週間後の血圧と心拍数測定後に、ラットを代謝ケ―ジに入れ、24時間採尿を行った。対照群とACC群の２４時間排泄量に関し、NO2／NO3をGriess法により、クレアチニンをアルカリピクリン法により、NaとKとClをイオン電極法により、Mgをキシリジル‐ブルー法により、CaをOCPC法により測定した。対照群とACC群のNO2／NO3は順に８．６８±３．２６と４．９２±２．０７（＊）（マイクロモル）、クレアチニンは順に３８．７５±７．９２と３５．８７±８．２２（ミリグラム／デシリットル）、Naは順に０．２６７±０．０８６と０．３９６±０．０６（＊２）（ミリ等量）、Kは順に０．５９０±０．１７と０．６６９±０．１３（ミリ等量）、Clは順に０．２２２±０．０７と０．３１９±０．０８（＊）（ミリ等量）、Mgは順に１．６１±０．８０と１．７４±０．６３（ミリ等量）、Caは順に０．２０±０．０８と０．２９±０．１１（ミリ等量）の値を得た。ＡＣＣ群は対照群に比べ、尿中のNO2／NO3がP<０．０５（＊）の範囲ないで、有意に低値を示し、尿中NaとClはそれぞれP<０．００５（＊２）とP<０．０５（＊）の範囲内で有意に高値を示した。ＡＣＣ群のクレアチンとK、Mg、Caは、対照群に比べ有意な差は無かった。NOの代謝産物であるNO2/NO3はNOの排泄量を反映している。NO、特にeNOS由来のNOは強力な血管拡張物質である。一方、NO、特にnNOS、iNOS由来のNOは神経細胞の障害物質として働いている。三種NOSの阻害剤が脳卒中の脳組織障害程度を軽減させる。ACC群のNO2／NO3低値はNOを減少させることによりSHR-SPラットの脳卒中発症予防や脳障害軽減、寿命を延長させたと思われる。しがし、ACC塩酸塩１水和物の降血圧作用はNOとの関係が薄く、その他の血圧調節物質と関与すると思われる。Na、Clの排泄量はACC群が対照群より有意に高いことは、両群とも同じ餌で飼育したので、NaCｌの排泄を促進、Na水貯留を防ぐことにより降血圧作用を発揮した可能性があると考えられる。
【実施例１４】
【００３２】
実施例１３において２４時間採尿後、24時間絶食させ、エーテル麻酔し、腹動脈より採血を行った。血中アルブミンはBCG法により、アルブミン／グロビン比は計算により、GOTとGPTはUV法により、ガンマ‐グルタミルトランスペプチダーゼは比色法により、尿素窒素はUV法により、クレアチニンはアルカリピクリン法により、NaとKはイオン電極法により、CaはOCPC法により、Clはイオン電極法により、Mgはキシリジル‐ブルー法により、アンジオテンシン１転移酵素は笠原法により、アンジオテンシン２はRIA・DCC法により測定した。対照群とACC群の血中アルブミンは順に２．３１±０．１８と２．３３±０．１５（グラム／デシリットル）、アルブミン／グロビン比は順に０．６１±０．０２と０．６１±０．０３（計算値）、GOTは順に４７６．９±１７８．１と５３２．２±１７５．７（単位／リットル）、GPTは順に１１５．６±４３．９と１２６．５±６８．２（単位／リットル）、ガンマ‐グルタミルトランスペプチダーゼは順に１．８６±０．９０と３．１７±０．７５（＊２）（単位／リットル）、尿素窒素は順に２０．４３±２．８２と１９．５０±４．３２（ミリグラム／デシリットル）、クレアチニンは順に０．３７±０．０８と０．３５±０．０６（ミリグラム／デシリットル）、Naは順に１４８．０±７．０２と１５３．５±１０．８（ミリ等量／リットル）、Kは順に６．３６±１．３７と６．７５±０．６７（ミリ等量／リットル）、Caは順に１０．９５±１．００と１０．１７±２．６９（ミリグラム／デシリットル）、Clは順に１０４．０±５．９０と１０７．３±８．８２（ミリ等量／リットル）、Mgは順に３．３４±０．４５と２．８５±０．５１（ミリグラム／デシリットル）、アンジオテンシン１転移酵素は順に２８．４７±１０．３と２５．５３±２．５（単位／リットル）、アンジオテンシン２は順位２０７．２±２１０．４と１５０．２±８１．３２（ピコグラム／ミリリットル）の値を得た。栄養状態を反映する血中アルブミン、アルブミン/ゴロブリン比及び、肝、腎機能を表すGOT、GPTや尿素窒素、クレアチニンは全て対照群とACC群の間に有意な差が無かったため、ACC塩酸塩１水和物の栄養状態、肝腎機能への影響が少ないと考えられる。ガンマGTP値についてACC群が対照群よりP<０．００１（＊２）の範囲内で有意に高値を示したが、正常範囲内であるので、ACC塩酸塩１水和物の副作用と考えにくい。また、血中Na、Cl、K、Ca、Mg値について、ACC群と対照群の間に有意な差が示されなかったことは、ACC塩酸塩１水和物が血中電解質のバランスに影響が無いことを示す。対照群に比べ、ACC群のアンジオテンシン１転移酵素、アンジオテンシン２値が低下の傾向が見られた。これはACC塩酸塩１水和物の降血圧の一因の可能性がある。
【実施例１５】
【００３３】
実施例１２において、ACC塩酸塩１水和物投与後１００日目の脳卒中の発症率と脳卒中後遺症の重傷度及び生存状況を観察し、分析した。死亡したラットを当日に解剖し、脳卒中病変の有無を病理検査した。実験データは平均値±標準誤差で表した。有意差の有無をｔ‐検定により調べた。
投与１００日まで、行動神経症状（過敏性、痛覚過敏性、四肢の麻痺等）の観察から脳卒中症状を示していた個体数はそれぞれＡＣＣ群２匹、対照群１０匹であった。ACC塩酸塩１水和物投与により脳卒中発症を抑制することが示された。投与１００日までの生存個体数に関しては、ＡＣＣ群は７９日目に１匹死亡した。これに対して対照群は７０日目に３匹、７５日目に２匹、８０日目に１匹、８２日目に３匹、８５日目に１匹、計１０匹の死亡が認められた。ACC塩酸塩１水和物投与による延命効果が確認できた（P<0.01）。死亡した個体についての解剖肉眼的所見は対照群の全例に大脳皮質下と大脳基底核に梗塞巣とその周囲の瀰漫性脳浮腫および出血巣を認めたのに対し、ＡＣＣ群ではこの病理変化が軽かった。
【実施例１６】
【００３４】
実施例１５において、ラットの行動神経症状により重症度の判定を行い、点数を付きて評価した。以下の評価基準を用いた。感覚（痛覚等）過敏を１点、片肢体マヒがあるが、自主的に歩け、ケージ蓋上の餌が自主的に食べられるを２点、片肢体マヒが存在し、自主的歩きが困難、ケージ内の餌しかを食べられないを３点、死亡を４点とした。対照群４０点に対し、ACC群は４点であり、対照群に比較してACC群は有意に脳卒中後遺症を軽減した。
【実施例１７】
【００３５】
実施例１１において、薬剤投与後の３０日目に、Ｂ‐ＡＣＣ群とＢ‐対照群の２群のラットにレーザー・ドップラ法を用いて脳血流量の連続的測定と２次元的測定を行なった。測定方法としては麻酔下においてラット頭皮を切開し、頭蓋骨を露出させ、リスカ社のレーザー・トップラー血流画像装置ＰＩＭ２（リスカ社、スウェーデン）を用いてラットの脳血流量を測定した。有意差の有無をｔ‐検定により調べた。レーザードップラ法を用いて連続的測定と二次元的測定を行い、ACC群１．４６４±０．２２、対照群１．１４４±０．３０（Ｐ＜０．０５）の値を得た。この結果はＡＣＣ群ラットの脳血流状況が対照群のラットより改善されたことを示している。
【実施例１８】
【００３６】
高血圧症、糖尿病、高脂血症、心疾患、一過性能虚血発作等脳卒中発症の危険因子の大きい患者で治験に参加を希望する人に対し、本治験により得られる可能性のある効果と危険性、及びいつでも治験参加を撤回でき、撤回により不利に扱わない旨が書かれた文書を渡して、かつ口頭でも説明した上で、それでも参加を希望する患者に対し、事前に治験倫理委員会の承認を得る治験プロトコールに従い、基礎治療の上にACC塩酸塩１水和物投与を行うACC群と基礎治療だけを行う対照群に２群する。患者の症状を毎日ジャパン・ストローク・スケール調査票に従い、点数を記入し、調査票に書かれた規則に従って計算された計算値で脳卒中の発症を診断し、対照群とACC群の脳卒中発症率の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中予防効果を測定できる。
ジャパン・ストローク・スケール調査票の内容は以下の通りである。
１．意識：ａ）またはｂ）
ａ）グラスゴウ・コマ・スケール：［開眼］自発的に開眼するを４点、呼びかけにより開眼するを３点、痛み刺激により開眼するを２点、全く開眼しないを１点、［言語］見当識良好を５点、混乱した会話を４点、不適切な言葉を３点、理解不能の応答を２点、反応なしを１点、［運動］命令に従うを６点、疼痛に適切に反応を５点、屈曲逃避を４点、異常屈曲反応を３点、伸展反応を２点、反応なしを１点とし、［開眼］と［言語］と［運動］の合計が15点をA、１４−７点をB、６−３点をCと分類する。
ｂ）ジャパン・コマ・スケール：［刺激しなくても覚醒している状態］全く正常を９点、大体意識清明だが、今一つはっきりしないを８点、時・人・場所がわからないを７点、自分の名前、生年月日が言えないを６点、［刺激すると覚醒している状態］普通の呼びかけで容易に開眼するを５点、大きな声または体を揺さぶることにより開眼するを４点、痛み・刺激を加えつつ呼びかけを繰り返すとかろうじて開眼するを３点、［刺激しても覚醒しない状態］痛み刺激に対しはらいのける様な動作をするを２点、痛み刺激で少し手足を動かしたり顔をしかめるを１点、痛み刺激に全く反応しないを０点とし、９点をA、8-3点をB、2-点をCと分類する。
分類の値（A＝７．７４、B＝１５．４７、＝２３．２１）を累計に用いる。
２．言語：口頭命令で拳をつくる、時計を見せて時計といえる、サクラを繰り返して言える、住所・家族の名前が上手に言える：４／４をA、３／４又は２／４をB、１／４又は０／４をCと分類し、分類の値（A＝１．７４、B＝２．９５、C＝４．４２）を累計に用いる。
３．無視：線分ニ等分試験正常をA、線分ニ等分試験で半側空間無視をB、麻痺に気が付かないあるいは一側の空間を無視した行動をするをCと分類し、分類の値（A＝０．４２、B＝０．８５、C＝１．２７）を累計に用いる。
４．視野欠損または半盲：同名性の視野欠損または半盲なしをA、同名性の視野欠損または半盲ありをBと分類し、分類の値（A=０．４５、B=０．９１）を累計に用いる。
５．眼球運動障害：なしをA、側方視が自由にできないをB、眼球に偏位したままで反対側へ側方視できないをCと分類し、分類の値（A＝０．８４、B＝１．６８、C＝２．５３）を累計に用いる。
６．瞳孔異常：瞳孔異常なしをA、片側の瞳孔異常ありをB、両側の瞳孔異常ありをCと分類し、分類の値（A＝１．０３、B＝２．０６、C＝３．０９）を累計に用いる。
７．顔面麻痺：なしをA、片側の鼻唇が浅いをB、安静時に口角が下垂しているをCと分類し、分類の値（A＝０．３１、B＝０．６２、C＝０．９３）を累計に用いる。
８．足底反射：正常をA、いずれとも言えないをB、病的反射ありをCと分類し、分類の値（A＝０．０８、B＝０．１５、C＝０．２３）を累計に用いる。
９．感覚系：正常をA、何らかの軽い感覚障害があるをB,はっきりした感覚障害があるをCと分類し、分類の値（A＝−０．１５、B＝−０．２９、C＝−０．４４）を累計に用いる。
１０．運動系：
１０‐１．手：正常をA、親指と小指で輪をつくる、またはそばに置いたコップが持てるをB、指は動くが物がつかめない、または全く動かないをCと分類し、分類の値（A＝０．３３、B＝０．６６、C＝０．９９）を累計に用いる。
１０‐２．腕：正常をA、肘を伸ばしたまま腕を挙上できる、または肘を屈曲すれば腕を挙上できるをB、腕はある程度動くが持ち上げられない、または全く動かないをCと分類し、分類の値（A＝０．６６、B＝１．３１、C＝１．９７）を累計に用いる。
１０‐３．下肢手：正常をA、膝を伸ばしたまま下肢を挙上できる、または自力で膝立てが可能をB、下肢は動くが膝立てはできない、または全く動かないをCと分類し、分類の値（A＝１．１５、B＝２．３１、C＝３．４６）を累計に用いる。
上記各分類の値の累計から定数１４．７１を差引いた値がプラスの場合は脳卒中発症と判断する。対照群とACC群の脳卒中発症の頻度の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中予防または治療効果を測定できる。
【実施例１９】
【００３７】
脳卒中後遺症がある患者を脳卒中運動機能障害重傷度スケールに従い、診断し、重傷度別に群分けをする。一つの群をACC塩酸塩１水和物を投与するACC群と投与しない対照群に２群する。両群とも重傷度に合わせた同じリハビリを行い、定期的に脳卒中運動機能障害重傷度スケール採点を行う。対照群とACC群の脳卒中運動機能障害重傷度の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中後遺症予防または治療効果を測定する。
脳卒中運動機能障害重傷度スケールの内容は以下の通りである。
１．顔面麻痺：なしをA、ありをBと分類し、分類の値（A＝−１．２７、B＝１．２７）を累計に用いる。
２．嚥下障害：なしをA、時にむせることがあるをB、チューブ・フィーディングが必要をCと分類し、分類の値（A＝−４．９３、B＝−０．８９、C＝５．８２）を累計に用いる。
３．腕：肘を伸ばしたまま腕を挙上できるをA、肘を屈曲すれば腕を挙上できるをB、重力に抗して運動できないをCと分類し、分類の値（A＝−０．９７、B＝−０．０９、C＝１．０６）を累計に用いる。
４．手：正常をA、そばに置いたコップが持てるをB、物がつかめないをCと分類し、分類の値（A＝−１．２６、B＝−０．１６、C＝１．４２）を累計に用いる。
５．下肢近位筋：臥位で検査し正常をA、膝立て可能をB、膝立て不能をCと分類し、分類の値（A＝−１．０４、B＝０．１４、C＝０．８９）を累計に用いる。
６．足関節：座位で検査し、座位がとれない場合は臥位の筋力から推定し、爪先を上げられるをA、爪先を上げられないをBと分類し、分類の値（A＝−０．５２、B＝０．５２）を累計に用いる。
７．複合運動：ベッド上仰臥位からベッド脇で立位になるまでの一連の動作で、ベッド脇に立てるをA、ベッドに座れるをB、座れないをCと分類し、分類の値（A＝−１．２４、B＝−０．３９、C＝１．６３）を累計に用いる。
８．歩行：補助具なしに歩けるをA、補助具ないしは介護者があれば歩けるをB、自力では歩けないをCと分類し、分類の値（A＝−３．６３、B＝−０．４５、C＝４．０８）を累計に用いる。
上記各分類の値の累計に定数１４．６０を加え値がプラスの場合は脳卒中後遺症ありと判断する。対照群とACC群の脳卒中運動機能障害重傷度の差から、ACC塩酸塩１水和物の脳卒中後遺症予防または治療効果を測定できる。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明の薬剤は、脳卒中又は脳卒中後遺症の予防剤又は治療剤として、利用可能性がある。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１‐アミノシクロプロパンカルボン酸及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤。
【請求項２】
請求項１に記載する脳卒中予防用又は治療用薬剤。
【請求項１】
１‐アミノシクロプロパンカルボン酸及びそのプロドラッグ、ならびに薬学的に許容することのできるそれらの塩およびそれらの水和物から選ばれる化合物を主成分とする脳卒中又は脳卒中後遺症の予防用又は治療用薬剤。
【請求項２】
請求項１に記載する脳卒中予防用又は治療用薬剤。
【公開番号】特開２００６−２１３６１１（Ｐ２００６−２１３６１１Ａ）
【公開日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２５８０６（Ｐ２００５−２５８０６）
【出願日】平成１７年２月２日（２００５．２．２）
【出願人】（３０００２７５１０）学校法人鈴鹿医療科学大学 (6)
【出願人】（３００００７２３５）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月２日（２００５．２．２）
【出願人】（３０００２７５１０）学校法人鈴鹿医療科学大学 (6)
【出願人】（３００００７２３５）
【Ｆターム（参考）】
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