３−アリール−クマリン、又は３−アクリル−キノリン−２−オンから派生した抗増殖性の化合物、及びその使用
本発明は、３−アリール−クマリン、又は３−アリール−キノリン−２−オンから派生する分子であって、特に腫瘍細胞に対して抗増殖性及び／又は細胞毒性の活性を有する分子に関する。本発明は、多種の癌の治療のための、これら分子の治療への応用における使用にも関する。本発明では、癌治療を目的とする薬剤の製造のための前記化合物の使用も開示する。また、本発明は、本発明に係る化合物と前記細胞との接触を含む細胞増殖の阻害のための方法にも関わる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に、癌、及び腫瘍の治療に用いることができる抗増殖性の特性を有する化合物、及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍は、世界中で最も広まっている疾患の１つである。患者への治療法が進歩しているにもかかわらず、薬剤は、多くのケースでは効果が乏しく、劇的な副作用に耐えさせる治療は通常困難であるし、しばしば腫瘍の影響を受けた組織や器官の外科的切除を避けられない。患者の死は、いまだに高い頻度で発生している。
【０００３】
特に、最近の腫瘍の診断及び治療の進歩にもかかわらず、依然として腫瘍細胞の進行及び転移は、腫瘍患者の発病及び死亡の大半の原因となっている。腫瘍の形成、進行、転移に寄与する機構の分子生物学的及び細胞生物学的な理解は、腫瘍研究の大きな挑戦であり、特に、腫瘍細胞の細胞増殖を抑制する機構の理解は必要とされる。
【０００４】
今日まで使用されているほとんどの抗腫瘍剤は、プログラム細胞死又はアポトーシスとして知られる細胞の自殺を引き起こすための細胞内在性の医学生物学的な経路を活性化することにより、腫瘍細胞を殺すものである。アポトーシスは、遺伝的にプログラムされた細胞死である。アポトーシスは、正常発生の過程において、細胞の数と増殖の調節にも重要である。幾つかの化学治療法剤は、アポトーシスを直接的に誘導するのではないにもかかわらず、細胞毒性薬によって損傷を受けた細胞が辿る多種の経路の最終的な部分には、共通の経路としてしばしばプログラム細胞死がある。
【０００５】
しかしながら、多くの悪性細胞は、アポトーシスの経路を調節する遺伝子の制御に欠陥を有して発生するため、このような細胞では化学療法に対する抵抗性を示す。多剤耐性遺伝子発現、化学療法剤の膜ポンプによる押し出し、腫瘍低酸素、腫瘍血管形成の減少、不都合な細胞周期動態を含む、多くのメカニズムは、従来用いられる化学療法剤の効果に対する非感受性の原因と提言されていた。化学療法効果と同様に、アポトーシスへの耐性は、腫瘍がプログラムされた老化や死を回避するメカニズムを介した別のメカニズムでもある。アポトーシスへの耐性の発達は、従来用いる化学療法剤への応答の悪化を導くことが報告されてきた。
【０００６】
細胞がアポトーシスへ入る多くの経路があるにもかかわらず、ＦａｓＬのような細胞表面の死受容体よりも、むしろ細胞カスパーゼ（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｓｐａｓｅ）のシトクロムｃ（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃ）活性化を担うミトコンドリアへの作用を介して、大多数の化学療法剤が細胞死を誘導することが明らかになっている。ＢＣＬ−２ファミリータンパク質は、ミトコンドリアによるアポトーシス恒常性の主要な調節因子である。主にフォスファチジルイノシトール３（ＰＩ３）キナーゼシステムが主に担うリン酸化イベントの相互作用、及びアポトーシス促進性（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）と抗アポトーシス性のＢＣＬ−２タンパク質との間で調整されるバランスは、細胞がプログラム細胞死へのプロセスに入るか回避するかを決定する。
【０００７】
ガン原遺伝子であるＢＣＬ−２ファミリーは、アポトーシスのきわめて重要な調節因子であり、リンパ腫を含むヒトの腫瘍において、発現が変化する。Ｂｃｌ−２は、Ｂ細胞の非ホジキンリンパ腫（ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ‘ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＮＨＬ）から、一般に認められる染色体の転位座が関与することにより、このファミリーの中で初めて同定されたメンバーである。
【０００８】
Ｂｃｌ−２ファミリーは、タンパク質の大きなファミリーであり、ＢＣＬ−２ホモロジー（ＢＨ）領域として知られる幾つかのホモロジー（相同性）のある領域を共通して有する２つのサブファミリーに大別され、第１のクラスは抗アポトーシス性のものであり、第２のクラスはアポトーシス促進性のものである。これらたんぱく質の主要な活性機構は、ミトコンドリア膜の透過性の調節であると想定されている。ＢＣＬ−２スーパーファミリーの中のアポトーシス促進性のメンバーは、ミトコンドリア膜の透過性を増加し、対して、ＢＣＬ−２スーパーファミリーの中の抗アポトーシス性のメンバーは、このミトコンドリア膜の透過性増加に対して反対の作用をする。
【０００９】
アポトーシス促進性のＢＣＬ−２ファミリーのメンバーには、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂａｄ、Ｂｃｌ−Ｘｓ、Ｂｉｄ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍ、Ｈｒｋがあり、抗アポトーシス性のＢＣＬ−２ファミリーメンバーには、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−Ｗ、Ｂｆｌ−１、Ｍｃｌ−１がある。
【００１０】
抗アポトーシス性のＢＣＬ−２ファミリーのメンバーは、シトクロム−ｃの放出をブロックすることによりアポトーシスに対するリプレッサーとして働き、対して、アポトーシス促進性のＢＣＬ−２ファミリーメンバーは、アポトーシスに対するプロモーターとして働く。ＢＣＬ−２ファミリーのメンバーが、ミトコンドリア膜の透過性を調節する幾つかの想定される機構がある。
【００１１】
ＢＣＬ−２ファミリーの抗アポトーシス性のメンバーは、染色体の転位座なしに、多くの腫瘍において過剰に発現している。抗アポトーシス性ＢＣＬ−２メンバーの発現の増加は、化学療法剤や放射線療法への耐性を引き起こし、逆に、抗アポトーシス性のＢＣＬ−２メンバーの発現の減少は、抗腫瘍剤に対するアポトーシスの応答を促進すると推察される。加えて、抗アポトーシス性メンバーのＢｃｌ−２の過剰な発現は、細胞周期のＧ０期に細胞を蓄積させ、化学療法剤耐性に寄与する。
【００１２】
抗アポトーシス性メンバーのＢＣＬ−２ファミリーの１つ、Ｂｃｌ−ｘＬに言及すると、過去に以下のことが証明された：
―Ｂｃｌ−ｘＬは主要な抗アポトーシス性のタンパク質である；
―Ｂｃｌ−ｘＬ（及び他のＢｃＬ−２様たんぱく質群）が多くの腫瘍において過剰に発現していることが観察された；
―Ｂｃｌ−ｘＬの基底レベルの発現は、多様なクラスの抗腫瘍分子に対する化学療法剤耐性と強く相関している。
【００１３】
したがって、Ｂｃｌ−ｘＬの抗アポトーシス性活性の低分子阻害剤は、単独又は既知の細胞毒性剤との組み合わせにより、広い範囲の腫瘍に対して抗腫瘍作用を発揮することが推測される。
【００１４】
それゆえ、ＢＣＬ−２ファミリータンパク質、特にＢｃＬ−ｘＬは、薬剤デザインのための魅力的な標的となる。アポトーシス性の細胞死の中枢の調節因子として、抗腫瘍作用のためにＢＣＬ−２の機能を操作する論理は、腫瘍治療のために提案される分子レベルの目標の１つである。さらに、アポトーシス性のタンパク質の発現レベルの上昇は、あらゆるタイプのヒトの腫瘍において実際に証明されている。
【００１５】
最初の試みは、ＢＣＬ−２ホモロジー（ＢＨ）ファミリー内でのタンパク質−タンパク質相互作用を乱すことが中心となった。この課題の続く進展は、分子モデリングや創薬を生んだ。
【００１６】
ＢＣＬ−２ファミリータンパク質を標的とする以下の異なる分子群は、とりわけ前臨床試験中又は臨床試験中である。
【００１７】
―ＡＢＴ−７３７（Ｏｌｔｅｒｓｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，２００５）：標的分子：ＢｃＬ−ｘＬ、ＢｃＬ−２、Ｂｃｌ−ｗ。ＡＢＴ−７３７は、小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＣＬＣ）及びリンパ様細胞（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌ）のアポトーシスを誘導し、マウスモデルにおいてＳＣＬＣの腫瘍抑制を引き起こす。
【００１８】
―ＩＰＩ−９８３Ｌ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｐｉ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ ｂｉｏ．ｈｔｍｌ）：標的分子：Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２。
【００１９】
―Ｇｏｓｓｙｐｏｌ（Ｍｏｈａｍｍａｄ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，１９９５）：標的分子：ＢＣＬ−２様タンパク質。この分子は、肺癌及び前立腺癌の細胞株の増殖をインビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において阻害することが示されている。
【００２０】
―ＧＸ１５−０７０（Ｃｏｎｔｒａｃｔｏｒ Ｒ． ｅｔ ａｌ．及びＧａｌａｎ ｅｔ ａｌ．）：標的分子：ＢＣＬ−２様タンパク質（ＢｃＬ−ｗ及びＭＣＬ−１との解離定数（Ｋｄ）は０．５ｍＭ以下）。この分子は、黒色腫、乳癌、肺癌、頸部腫瘤、前立腺癌、結腸癌の各腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている。しかしながら、この分子は低い最大耐性量（ＭＴＤ（Ｍａｘｉｍａｌ ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ｄｏｄｅ）；おおよそ１６ｍｇ／ｋｇ）である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明者等は、現在、ＢｃＬ−ｘＬを標的とする新規の潜在的な抗腫瘍分子を得ている。この分子ファミリーは、３−アリール−クマリン又は３−アクリル−キノリン−２−オンから派生するものである。本発明は、これら化合物、及びこれら化合物の治療への使用法、特に多くのタイプの腫瘍の治療への使用に関するものである。
【００２２】
本発明の構成において、以下の用語は、以下の定義に従って定められる。
【００２３】
アポトーシス（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）は、プログラム細胞死、及び細胞の規則な分解として定義される。急性の細胞障害からもたらされる細胞死である壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）とは対照的に、アポトーシスは、生体の生命周期の中で、好都合をもたらす規則的なプロセスの中で実行される。アポトーシスの主要な機能は、隣接する細胞に対してダメージ又はストレスを生じさせることなく、細胞を処分することにある。アポトーシスは、食細胞による取り込まれるアポトーシス小体へ細胞が規則的に分解されることも関係する。このアポトーシス小体の取り込みは、ネクローシスに関連した炎症反応を回避する。アポトーシスは、実施例において、実施例７にて説明する検出法を用いて検出できる。
【００２４】
抗アポトーシス性（Ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｉｃ）：アポトーシスを妨げ、減少させ、又は遅らせること。
【００２５】
アポトーシス促成性（Ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）：アポトーシスを活性化又は促進すること。
【００２６】
増殖（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）：数を多数化又は増加すること。生物学では、細胞増殖は、細胞分裂によって生じる。
【００２７】
抗増殖性（Ａｎｔｉ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）：細胞の増殖を減少させる又は遅らせること。したがって、抗増殖性の化合物による処理後、細胞数は、恒常的なままであるか、又は、非処理よりも増加速度が低い、又は、減少する。抗増殖性の活性は、細胞増抑制性の作用、細胞毒性の作用、又は、両者による。化合物の抗増殖性の活性は、実施例のパートで詳しく説明する方法に従って、試験と測定を行うことができる（実施例３Ｃを参照）。ある分子により７２時間処理した際、統計的見地での細胞数が、コントロール又は未処理と比較して有意に減少している場合、その分子が、本発明のいう抗増殖性活性を有するという。
【００２８】
細胞毒性（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ）：細胞の死をもたらすもの。ある化合物で処理して７２時間後の細胞数が、当初の細胞数よりも統計的見地から有意に減少している場合、その化合物には、細胞毒性があると考えられる。実施例２Ａの記述では、化合物の細胞毒性の活性の規定のための方法を詳しく述べている。本発明に従うと、細胞毒性の特性を有する化合物は、例えば、抗増殖性の化合物である。細胞毒性は、とりわけ壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）、又はアポトーシスにより、細胞の死を引き起こすと思われる。
【００２９】
細胞増殖抑制性（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ）：細胞分裂を阻害又は抑制するもの。本発明に従えば、細胞増殖抑制の特性を持つ化合物としては、例えば、抗増殖性化合物がある。
【００３０】
癌（Ｃａｎｃｅｒ）：未分化細胞の増殖により特徴付けられる多種の悪性な腫瘍（新生物）である。この未分化細胞は、周囲組織へ侵入や、体の新たな部位へ転位する傾向を有する。
【００３１】
抗癌性（ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ、ａｎｔｉｃａｎｃｅｒｏｕｓ）：癌の治療に効果のあること。
【００３２】
腫瘍（ｔｕｍｏｒ）：異常な細胞成長。この異常な細胞成長は、制御不能で進行性の細胞の増加、及び生理機能を果たさないことの結果として生じる。英語の別名、ｎｅｏｐｌａｓｍ。
【００３３】
抗腫瘍性（ａｎｔｉｔｕｍｏｒ、又は、ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ）：悪性腫瘍の形成への拮抗、又は抑制。抗癌性。
【００３４】
アルキル（ａｌｋｙｌ）：直鎖又は分岐鎖の炭素鎖を表し、これら炭素鎖は、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、最も好ましくは１〜５個の炭素原子を含む。低級アルキルは、１〜４個の炭素原子を含み、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、又はＣ４炭素鎖といわれる。
【００３５】
シクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）：分岐又は非分岐の飽和炭素環を表し、この飽和炭素環は、３〜２０個の炭素原子からなり、好ましくは３〜７個の炭素原子、最も好ましくは５又は６個の炭素原子からなる。前記炭素環は、任意に、１又は複数のハロ（ｈａｌｏ）、アルキル（ａｌｋｙｌ）、水酸（ｈｙｄｒｏｘｙ）、アルコキシル（ａｌｋｏｘｙ）、フェノキシ（ｐｈｅｎｏｘｙ）、ＣＦ３、アミノ（ａｍｉｎｏ）、アルキルアミノ（ａｌｋｙｌａｍｉｎｏ）、ジアルキルアミノ（ｄｉａｌｋｙｌａｍｉｎｏ）、−ＣＯＯＲ（Ｒは、水素、又はアルキル）、−ＮＯ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、により置換される。前記炭素環は、１置換または２置換であることが好ましい。シクロアルキルは、好ましくは２００個未満、又は１００個未満、よりこの好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。
【００３６】
ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）：分岐又は非分岐の飽和炭素環を表し、この炭素環は、３〜１５個の炭素原子を含み、好ましくは４〜６個の炭素原子を含む。この炭素環は、以下から選択される１〜３個のヘテロ基を挿入している。選択されるヘテロ基は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ（Ｒは、例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）２、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）２、−ＣＨＯ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリール）。ヘテロシクロアルキルは、炭素環が１又は２個のヘテロ基を挿入しているものが好ましい。ヘテロシクロアルキルは、好ましくは、２００個未満、１００個未満、より好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。好ましいヘテロシクロアルキルは、フラン（ｆｕｒａｎ）、チオフェン（ｔｈｉｏｐｈｅｎｅ）、ピロール（ｐｙｒｒｏｌｅ）、チアゾール（ｔｈｉａｚｏｌｅ）、ピラゾール（ｐｙｒｒａｚｏｌｅ）、及びオキサゾール（ｏｘａｚｏｌｅ）である。
【００３７】
アリール（ａｒｙｌ、アリールオキシ（ａｒｙｌｏｘｙ）とアラルキル（ａｒａｌｋｙｌ）のアリールモイティを含む）：６〜１５個の炭素原子を含み、少なくとも１個の芳香族環を有する炭素環基を表し、前記炭素環基は、任意に、１又複数の、ハロ、アルキル、ヘテロシクロアルキル（例えば、Ｎ−アルキル−ピペラジン（Ｎ−アルキル−ピペラジン、モルフォリン）、水酸、アルコキシ、フェノキシ、ＣＦ３、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−ＣＯＯＲ（Ｒは水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル）、ＮＯ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３、により置換される。前記炭素環基は、１置換又は２置換が好ましい。アリールは、好ましくは、２００未満、又は１００個未満、より好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。
【００３８】
ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）：酸素、硫黄、又は窒素から選ばれた少なくとも１個のヘテロ原子を有し、任意に置換されている環状基を表す。前記へテロ原子は、炭素環構造に挿入され、芳香族性を付与するために、十分な数の非局在化π電子を有する。この芳香族性複素環基は、２〜１４個の炭素原子を含むことが好ましい。この芳香族性複素環基は、任意に、アリールの定義で述べた置換基の１又は複数により置換されている。前記炭素環は、１又は２個のヘテロ原子が挿入されていることが好ましい。ヘテロアリールは、好ましくは、２００個未満、又は１００個未満、より好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。
【００３９】
アラルキル（ａｒａｌｋｙｌ、アリールアルキル（ａｒａｌａｌｋｙｌ）の略）：アリール基とアルキル基の双方から構成される基を表す。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
コンピューターシュミレーションによる仮想的なスクリーニングによって、本発明者等は、Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質と相互作用する可能性のある分子を同定した。Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質は、三次元構造は知られている（Ｓｃａｔｔｌｅｒら）。この分子は、インビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及びインビボ系（ｉｎ ｖｉｖｏ）でテストし、効果的な抗増殖性剤であることが証明された。
【００４１】
特に、化合物０１と名づけた化合物は、インビトロ系において、多種のヒト癌細胞の増殖を阻害する。また、化合物０１は、マウスを用いたインビボ系での異種移植モデルにおいて、非小細胞肺癌の成長を阻害する。化合物０１を手掛かりとした最適化は、癌治療に有用な類似の特性を有する化合物０１に関連した構造の分子のファミリーの同定を可能にする。
【００４２】
化合物０１は、（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド、である。化合物０１のコア構造を保持した多数の誘導体は、今、化合物０１の有意な抗増殖性の特性を増進するため、及び薬剤として適合する目的の改良のため、本発明者によってテストされている。これら分子は、本質的に以下のコア構造を有する。
【００４３】
【化１】
【００４４】
第１の態様に従うと、本発明は、以下の一般式のうちの１つを有する化合物が包含される。
【００４５】
【化２】
【００４６】
但し、上記式（ａ），（ａ’）及び（ｂ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の置換可能な炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換され、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、そして、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｙは、Ｈ、ＣＨ３、又はＣＯ−ＣＨ３を表し、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ，ＣＣＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨ２Ｒ１６，Ｏ−ＣＨ２Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６，ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基により置換可能であって、ｐ＝０、１、２、３、４、５、又は６、そして、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個より少ない炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ３は、式（ａ）中では、Ｓ、Ｏ、又はＮＨを表し、式（ａ’）中では、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すものであって、Ｒ１０は、Ｒ９と同義であり、ｑ＝０、１、２、３、又は４であって、
Ｒ４は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１１を表すものであって、Ｒ１１は、Ｒ４と同義であり、Ｒ４の分子量は、５００Ｄａ未満であって、
さらに、
Ｒ３がＯを表すとき、Ｒは、Ｎ＊−Ｒ５、又はＯ−Ｒ５であって、Ｒ５は、Ｒ４と同義であり、Ｎ＊はＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＮＨ、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すとき、Ｒは、Ｒ６、又はＮ＊−ＣＯ−Ｒ６であって、Ｒ６はＲ４と同義であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＳを表すとき、
Ｒは、Ｎ＊−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、Ｒ１２は、Ｒ７と同義であり、ｎ＝０、１、２、３、又は４であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ８であって、−Ｒ８は、ｔ−ブチルを除く直鎖又は分岐鎖のアルキル、−Ｒ８は、−（ＣＨ２）ｓ−Ｃ４Ｈ３Ｏを表し、Ｓ＝１，２、３又は４、Ｒ８は、アルキル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、−ＯＨ、−ＣＯ−ＮＨ２、−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＯ−ＯＨ、−ＣＯ−ＯＣＨ３、もしくは−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３によりパラ位が１置換されたフェニルラジカルを表すか、又は、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ１７であって、Ｒ１７は、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１８を表すものであって、そして、Ｒ１８はＲ１７と同義であり、Ｒ１７の分子量は５００Ｄａ未満であって、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表し、Ｒ１はＯでないものである。
【００４７】
前記化合物のアルカリ及び酸付加塩、幾何異性体、光学異性体、並びにジアステレオ異性体に関しても同様である。
【００４８】
各々の置換基は、他の置換基とは独立に選択される。
【００４９】
本発明の実施形態に従えば、分子は、一般式（ａ）に表す構造を有する。
【００５０】
他の実施形態に従えば、本発明に係る分子は、一般式（ａ’）に表す構造を有する。
【００５１】
さらに、他の実施形態に従えば、本発明に係る分子は、一般式（ｂ）に表す構造を有する。
【００５２】
化合物の全分子量は、１０００Ｄａ未満であることが好ましい。化合物の全分子量は、８００Ｄａ未満がより好ましく、７００Ｄａ未満、６５０Ｄａ未満又は６００Ｄａ未満がさらに好ましい。特に、化合物は、細胞膜を通過できるものが好ましい。それゆえ、化合物の分子量は、できれば最小化する。
【００５３】
本発明の第１の態様に従えば、化合物は、抗増殖性の特性を有することが好ましく、その場合には、抗腫瘍剤として有用である。本発明に係る化合物は、腫瘍細胞、癌性細胞、又は不死化細胞の集団を主な標的とした抗増殖性の作用を有することが好ましい。腫瘍細胞、癌性細胞、又は不死化細胞の集団を主な標的とするとは、換言すると、抗増殖性（又は細胞毒性）について、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団に対する方が、正常細胞（不死化していない）の集団に対するよりも、少なくとも１０％は高い場合をいうことができる。例えば、本発明の態様に従った化合物とともに細胞の集団をインキュベートした後、正常細胞の集団よりも、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団の方が、細胞の増殖率が、１０％低下する。この正常細胞の集団と比較した腫瘍細胞又は癌性細胞の集団への作用の差は、好ましくは、少なくとも２０％、さら好ましくは、少なくとも３０％、さらには、少なくとも５０％、又はそれ以上がなお一層好ましい。
【００５４】
抗増殖性の活性は、実施例の部分に詳しく記述した方法に従って試験及び測定できる（実施例２Ｃを参照）。
【００５５】
前記化合物は、細胞毒性又はアポトーシス促進性を有することがより好ましい。このアポトーシス促進性は、腫瘍細胞に対して優先的な作用であることが好ましい。同様に、この腫瘍細胞に優先的な作用とは、細胞毒性又はアポトーシス促進性の作用に関し、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団の方が、正常細胞の集団よりも、少なくとも１０％は作用が大きいことを意味する。
【００５６】
アポトーシス促進性活性は、実施例の部分に詳しく記述した方法に従って試験及び測定できる（実施例７）。
【００５７】
本発明のこの態様により定義される化合物は、治療、予防的又は根治的処置に用いることが好ましい。
【００５８】
ここに定義された化合物は、特に癌性細胞の除去に有用であり、これらは、それゆえ、癌、白血病、又はあらゆるタイプの腫瘍の治療に大変有用である。
【００５９】
本発明の第１の態様に従う化合物は、患者に投与されることが好ましく、この患者とは、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトの患者である。それゆえ、動物に対する免疫原性を化合物に与えやすい置換基、二次的な毒性作用を起こしやすい置換基、又は最大耐量の減少しやすい置換基は、回避することが好ましい。さらには、置換基は、化合物の溶解性、特に動物の体液への溶解性を改善するために、選択されることが好ましい。
【００６０】
式（ａ）、（ａ’）、及び（ｂ）における置換基の好適なものを決定するため、下にゆくに従って重要性が低下するように分類されている次の基準を適用する：又は
―化合物全体に対して抗増殖性の活性の促進を付与する；又は
―化合物全体に対して腫瘍細胞へ正確に標的される抗増殖性の活性を付与する；
―より少ない免疫原性又は毒性を化合物に付与する；又は
―化合物全体に対してより優れた溶解性を付与する；又は
―化合物の代謝保護性（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を付与し、生物学的利用率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）又は半減期を増加する；又は
―より少ない分子量を有する。
【００６１】
本発明の構成における種々の構造では、すなわち、式（ａ）、（ａ’）、又は（ｂ）において、Ｒ１は酸素原子、又はＮＨが好ましい。
【００６２】
式（ａ）、（ａ’）、又は（ｂ）において、Ｒ１モイティの性質とは独立して、Ｒ２モイティは、メチルが好ましい。好ましくは、Ｒ１がＯであってＲ２がＣＨ３であるか、又は、Ｒ１がＮＨであってＲ２がＣＨ３である。
【００６３】
本発明のこの態様に従った化合物では、環（Ｉ）及び（ＩＩ）のうち少なくとも一方が置換されていることが好都合である。特に、この発明の構成において適している置換基は、化合物の抗増殖性の活性を増加できる置換基であり、化合物の溶解性を増加できる置換基であり、化合物の抗原活性を減少できる置換基であり、非常に重要なのは代謝保護性を化合物に付与する置換基である。このような可能性のある置換基は、熟達者には知られている。
【００６４】
環（Ｉ）単独、環（ＩＩ）単独、又は環（Ｉ）及び（ＩＩ）が置換されていることが好ましい。環（ＩＩＩ）もまた、置換されているものでもよい。環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）それぞれが、既に式（ａ）、（ａ’）、及び（ｂ）に存在する置換基に加えて、さらに１つだけ置換基が付加されることが好ましい。
【００６５】
環（Ｉ）及び（ＩＩ）の好ましい置換基としては、フッ素（Ｆ）及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９であって、（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９中、ｍ＝１、又は２であり、−（Ｒ９）は、以下の化学式に表される構造のいずれかである。
【００６６】
【化３】
【００６７】
このような置換基は、環（ＩＩＩ）にも適用できると思われる。
【００６８】
本発明の他の好ましい実施形態によると、式（ａ）、又は（ｂ）において、Ｙは、水素を表す。
【００６９】
本発明の他の好ましい実施形態によると、式（ａ）、（ａ’）、及び（ｂ）において、Ｒ１はＯ及び／又はＲ２は−ＣＨ３である。
【００７０】
他の実施形態によると、Ｒ１は、Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンであり、好ましくはＮ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンである。
【００７１】
さらに他の好ましい実施形態によると、Ｒ１６は、Ｈ、又はＣＨ３であり、最も好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである。
【００７２】
さらに他の好ましい実施形態によると、Ｒ１７は、フラン、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティであり、このケースではＲ１がＯでない。また、この実施形態では、Ｒ１７がフランモイティであることが好ましい。
【００７３】
本発明に係る好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＯであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−Ｒ５であって、但し、Ｒ５が、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、又はアリラキルであり、好ましくは、Ｒ５が、フェニル、ベンジル、又は−Ｃ６Ｈ４−Ｎ（ＣＨ３）２である。
【００７４】
本発明に係る他の好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１がＯ、−Ｒ２が−ＣＨ３、Ｒ３がＮＨ、ＹがＨ、及び−（Ｒ）が下記化学式に表す構造のいずれかであり、上記化学式中のフランモイティが、１〜４個の炭素原子を含むアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換されているものである。
【００７５】
【化４】
【００７６】
あるいは、上記式中のフランモイティが、任意に他のヘテロシクロアルキル、例えば、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティに置き換えることもでき、また、これらの構造は上述のように任意に置換される。
【００７７】
任意に、Ｒ１は、Ｏの代わりにＮＨにもできる。
【００７８】
本発明の第１の形態において、さらに他の望ましい化合物としては、式（ｂ）において、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、ＹがＨであり、−（Ｒ４）が以下の化学式に表す構造のいずれかである。
【００７９】
【化５】
【００８０】
本発明において、他の好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏ、又はＮＨであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、ＮＨであり、Ｙが、Ｈであり、−Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ６Ｈ５である。
【００８１】
本発明の構成において、好ましい他の分子は、一般式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、Ｒ２が、Ｈ、又はＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｙが、Ｈであり、Ｒが、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であり、ｎ＝０でり、−（Ｒ１２）が以下の化学式に表す構造のいずれかである。
【００８２】
【化６】
【００８３】
先の式では、任意に、Ｒ３が、Ｓの代わりに、Ｏともできる。
【００８４】
また、一般式（ａ）と同じ構造を有するさらに他の分子で、本発明の構成のうち特に好ましいものは、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２で、ｎ＝０、Ｒ１２がＣ６Ｈ５である。任意に、Ｒ３は、Ｓの代わりに、Ｏとできる。
【００８５】
他のクラスで一般式（ａ）と同じ構造の好ましい化合物としては、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−ＣＯ−Ｒ８であり、Ｒ８が−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ４Ｈ３Ｏ、又は（−Ｒ８）が以下の化学式に表す構造のものであって、下記化学式中、Ｒ１３がＣ１〜Ｃ６のアルキルである。
【００８６】
【化７】
【００８７】
これに代わるものとして、本発明に係る化合物で他の好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ７で、ｎ＝１、Ｒ７が−Ｃ６Ｈ５のものである。
【００８８】
一般式（ａ’）の構造を有する本発明に係る化合物において、好ましい置換基としては、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２がＣＨ３であり、Ｒ３がＳ−ＣＨ３であり、（−Ｒ）が下記化学式に表される構造のいずれかに該当するものであって、下記化学式中、フランモイティが、１〜４個の炭素を有するアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換される。
【００８９】
【化８】
【００９０】
これに代わるものとして、フランモイティは、他のヘテロシクロアルキル、特に、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティが上述のように任意に置換されているものに置き換えてもよい。
【００９１】
例えば、特に好ましい化合物としては、以下のものである。
【００９２】
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル−尿素；
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニルチオ尿素；
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド；
化合物０６：１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド；
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イルピリジン−３−イル）チオ尿素；
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１ Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート；
化合物１０：メチルＮ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル−）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド；
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド；
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート、
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１６：メチル Ｎ−（４−フルオロベンゾイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１８：１−［３−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン；
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素；
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素；
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン；
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド；
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素；及び、
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素。
【００９３】
第２の態様によると、本発明は、以下の一般式に表す構造を有するものに関する。
【００９４】
【化９】
【００９５】
但し、上記式（ｃ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換可能であって、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ，Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ，ＣＯＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨＲ１６，Ｏ−ＣＨ２−Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６，ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ，Ｃｌ、ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基で置換可能であって、そして、ｐ＝０、１，２、３、４、５、又は６であり、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個未満の炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ１４及びＲ１５は、独立して、分子量４００Ｄａ未満の多種の置換基であって、Ｒ１４とＲ１５は同時に酸素であることはない。
【００９６】
前記化合物は、治療に用いる。
【００９７】
本発明では、前記化合物のアルカリ及び酸付加塩、幾何異性体、光学異性体、及びジアステレオ異性体も治療に使用する。
【００９８】
各々の置換基は、他の置換基とは独立に選択される。
【００９９】
第１の態様に従った化合物のように、置換基は、化合物全体に対して抗増殖性の活性の促進を付与するためのものから選択することが好ましく、より少ない免疫原性又は毒性を化合物に付与するためのものから選択することが好ましく、化合物全体に対してより優れた溶解性（特に動物の体液への溶解性）を付与するためのものから選択することが好ましく、化合物の代謝保護性（ｍｅｔａｂｉｌｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を付与して生物学的利用率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）又は半減期を増加するためのものから選択することが好ましく、又は、化合物全体の分子量を減らすためのものから選択することが好ましい。
【０１００】
化合物の全分子量は、１０００Ｄａ未満であることが好ましい。化合物の全分子量は、８００Ｄａ未満がより好ましく、７００Ｄａ未満、６５０Ｄａ未満又は６００Ｄａ未満がさらに好ましい。特に、化合物は、細胞膜を通過できるものが好ましい。それゆえ、化合物の分子量は、できれば最小化する。
【０１０１】
このような化合物の治療における使用は、予防的又は根治的な目的である。
【０１０２】
本発明の第２の態様に従えば、化合物は、抗増殖性の特性を有することが好ましい。この化合物は、腫瘍細胞、癌性細胞、又は不死化細胞の集団を主な標的として抗増殖性（細胞増殖抑制性）の作用を有することが好ましい。例えば、細胞の集団をこの化合物に接触させた後、腫瘍細胞又は癌細胞の集団の細胞数の減少が、正常細胞の集団の細胞数の減少よりも１０％以上大きいことをいう。正常細胞の集団への作用に比較した、腫瘍細胞又は癌細胞の集団への作用の違いは、この好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、又は少なくとも５０％、あるいはそれ以上であることがなお一層好ましい。
【０１０３】
さらに好ましくは、前記化合物は、細胞毒性又はアポトーシス促進性を有する。このアポトーシス促進性は、腫瘍細胞に対して優先的な作用であることが好ましい。同様に、この腫瘍細胞に優先的な作用とは、細胞毒性又はアポトーシス促進性の作用について、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団に対する方が、正常細胞の集団に対するよりも、少なくとも１０％は作用が強いことを意味する。
【０１０４】
好適な置換基を選択する際に適用される基準は、本発明の第１の態様と同じである。
【０１０５】
ここに定義された化合物は、癌性細胞の除去に有用であり、これらは、それゆえ、癌、白血病、又はあらゆるタイプの腫瘍の治療に大変有用である。
【０１０６】
本発明の第２の態様による化合物としては、ヒトの治療、又は獣医による治療に使用するためのものであり、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトの患者に投与するためのものである。それゆえ、動物に対する免疫原性を化合物に与えやすい置換基、二次的な毒性作用を起こしやすい置換基、又は最大耐量の減少しやすい置換基は、回避することが好ましい。好ましい患者（治療対象）は、哺乳類、特に家畜やペット、そしてヒト（小児又は成人）である。
【０１０７】
本発明の第２の態様において、別の好ましい構造としては、すなわち、式（ｃ）において、Ｒ１が好ましくは酸素原子、又はＮＨである。
【０１０８】
Ｒ１モイティとは独立に、Ｒ２モイティがメチルであることが好ましい。好ましくは、Ｒ１がＯであってＲ２がＣＨ３、又は、Ｒ１がＮＨであってＲ２がＣＨ３である。
【０１０９】
本発明のこの態様による化合物は、環（Ｉ）と環（ＩＩ）の少なくとも１つは置換されていると好都合である。本発明のこの構成において、適した置換基は、化合物の抗増殖性の活性を増加できる置換基であり、化合物の溶解性を増加できる置換基であり、化合物の抗原活性を減少できる置換基であり、非常に重要なのは代謝保護性（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を化合物に付与する置換基である。このような可能性のある置換基は、熟達者には知られている。
【０１１０】
環（Ｉ）単独、環（ＩＩ）単独、又は環（Ｉ）及び（ＩＩ）が置換されていることが好ましい。環（ＩＩＩ）もまた、置換されていてもよい。環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）それぞれが、式（ｃ）中の既に存在する置換基に加えて、１つだけ付加的な置換基を有することが好ましい。
【０１１１】
環（Ｉ）及び（ＩＩ）の置換基としては、フッ素（Ｆ）及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９であることが好ましい。（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９中、ｍ＝１、又は２であり、Ｒ９が、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、又はアリラキル、及び、好ましくは（−Ｒ９）が、下記化学式に表された構造のいずれかに該当するものである。
【０１１２】
【化１０】
【０１１３】
本発明の他の好ましい実施形態によると、Ｙは、水素を表す。
【０１１４】
本発明の他の好ましい実施形態によると、Ｒ１がＯ、及び／又はＲ２が−ＣＨ３である。
【０１１５】
本発明に係る好ましい化合物では、Ｒ１４、Ｒ１５、ＮＲ１４、及びＮＲ１５のうち少なくとも１つが、アミド、スルホンアミド、ケトン、フラン、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、オキサゾール、尿素、チオ尿素基、ベンジル、フェニル、アクリル、グアニジンを含む。
【０１１６】
Ｒ１４とＲ１５が異なることが好ましい。
【０１１７】
他の好ましい実施形態によれば、Ｒ１４とＲ１５のうち少なくとも１つが、Ｈ、又はＣＨ３である。
【０１１８】
一般式（ｃ）によれば、Ｒ１４及びＲ１５は、窒素と一重結合により連結することに留意したい。しかしながら、Ｒ１４及びＲ１５が、共に酸素原子でないときは、二重結合もまたありうる。
【０１１９】
Ｒ１６が，Ｈ、又はＣＨ３であることが好ましい。
【０１２０】
他の実施形態によると、Ｒ１は、Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンであり、好ましくはＮ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンである。
【０１２１】
この第２の態様の好ましい化合物は、本発明の第１の態様において例示されたものであり、換言すると、化合物０３、０４、０５、０６、０７、０８、０９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、及び２５である。
【０１２２】
本発明の第２の態様によると、他の好ましい化合物は以下のものである：
化合物０１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物０２：Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）ベンズアミド。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１２３】
以下においては、本発明に係る化合物としては、本発明の第１の態様、及び第２の態様に従った化合物を参照する。
【０１２４】
本発明は、本発明に係る化合物の塩も含まれ、例えば、塩酸塩（ｃｈｌｏｒｈｙｄｒａｔｅ ｓａｌｔｓ）、特に医薬的に許容される本発明に係る化合物の塩である。
【０１２５】
さらに、本発明には、本発明に係る化合物の代謝物も含まれ、特に生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で形成される代謝物が含まれる。さらに進んで、本発明には、本発明に係る化合物のプロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇ）も関わる。なお、ここにいうプロドラッグとは、前記化合物へ生体内で転換したものである。
【０１２６】
重要なことに、本発明に係る化合物には、本発明に係る化合物の立体異性体及び／又は互変異性も含み、これら異性体の混合物も同様に含まれることに留意する。
【０１２７】
先に述べたように、本発明に係る化合物は、細胞毒性、又は細胞増殖抑制性の特性を腫瘍細胞に対して有することが好ましい。対象として好ましい腫瘍細胞は、肺、前立腺、胸部、結腸、メラノーマ、リンパ腫、及び／又は脊髄、の腫瘍細胞である。
【０１２８】
先に述べたように、本発明に係る化合物は、水溶性であることが好ましく、多種の体液に溶解性があることが好ましい。水溶性の観点では、本発明に係る化合物は、モル濃度において５０×１０−６ ｍｏｌ／Ｌ超にて水に溶解できるものが好ましく、さらに、５００×１０−６ ｍｏｌ／Ｌ超、さらに好ましくは８００×１０−６ ｍｏｌ／Ｌ超又は約１ ｍｍｏｌ／Ｌ（言い換えれば約１×１０−３ｍｏｌ／Ｌ）超であることがなお一層好ましい。
【０１２９】
本発明の好ましい実施形態によれば、先に定義された化合物は、直接的又は間接的に、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−ｘＬと相互作用できる。本発明に係る化合物は、Ｂｃｌ−ｘＬたんぱく質に、少なくともインビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において結合し、好ましくは解離係数（Ｋｄ）が１μＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満、又はそれより少なく、例えば、２０ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満であることがなお一層好ましい。このような化合物は、特に好ましい。
【０１３０】
分子とＢｃｌ−ｘＬたんぱく質との相互作用の解離係数（Ｋｄ）を規定するために適切な方法としては、本出願の実施例に挙げられている（実施例５参照）。
【０１３１】
また、本発明は、本発明に係る化合物を含む製剤処方も包含するため、化合物の生体利用効率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）が少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも８０％、９０％、又は９５％であるとよい。
【０１３２】
また、本発明は、第１の態様、又は第２の態様に従って規定される化合物と、少なくも１つの他の活性含有物とを合わせた組成物も関連する。前記他の活性化合物は、あらゆるタイプの治療剤、例えば、抗炎症剤、又は本発明に係る化合物の副作用を緩和する（前記潜在的な副作用を減少、撤廃、又は遅延する）ものでよい。
【０１３３】
好都合なものとしては、本発明に係る化合物は、抗腫瘍剤又は化学療法剤、又は放射線療法と合わせて使用又は与えられる。特に、発明者等の観察では、本発明に係る化合物の抗癌作用は、他の抗癌性の治療薬と併用すると、増強される。本発明に係る化合物と、少なくとも２つ、３つ又はそれ以上の他の化学療法薬とを合わせた組成物は、好都合である。
【０１３４】
本発明に係る化合物と組み合わせて適用できる抗癌剤としては、例えば、タキソール（パクリタキセル）、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、レチノイン酸、タモキシフェン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、又はラパマイシンである。ただし、このリストは、すべてを挙げたものではなく、他の多種の化学療法薬を本発明に係る化合物と合わせることもできる。
【０１３５】
このような組成物として好ましいものは、本発明に係る化合物と抗増殖性の特性、言い換えると、腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性の活性、を有する他の化学療法薬とを含むものである。
【０１３６】
本発明は、上に述べたような組成物の使用も関連する。この使用は、治療中の癌、又は、その他、制御不能な進行性の細胞の増殖による組織の異常成長、又は不要なもしくは病的な持続性の細胞の増殖を治療するための対象への投与を目的とする薬剤の製造のためのものである。
【０１３７】
本発明は、本発明に係る化合物と、さらに他の活性薬剤、好ましくは他の抗腫瘍剤を含み、治療において、同時に、個別に、又は連続的に使用する混合製剤としての産生物も包含する。本発明に係る化合物及び他の抗腫瘍剤は、産生物の活性成分であることが好ましい。
【０１３８】
同時の療法のための混合製剤とは、本発明に係る化合物とさらに他の薬剤、好ましくは抗腫瘍剤とを同時に投与することを含む治療として定義される。前記化合物及び薬剤は、一緒にパッケージ化、又は２つの別々の物として同時に与えられる。
【０１３９】
連続の療法のための混合製剤とは、他の薬剤単独、この好ましくは他の抗腫瘍剤単独の投与に続く、本発明に係る化合物単独の連続的な投与、又は、この逆の順序による投与を含む治療として定義される。
【０１４０】
個別の治療のための混合製剤とは、本発明に係る化合物の投与、及び他の薬剤、好ましくは他の抗腫瘍剤の投与を含む治療として定義され、両治療は同時であるが、投与は全てを同時にされるものではない。
【０１４１】
また、本発明は、本発明に従った、還元すれば、本発明の第１の態様又は第２の態様に従った化合物と医薬的に許容可能な担体とを含む医薬組成物にも関連する。活性含有物とは反対に、医薬的に許容可能な担体とは、賦形剤であり、それ自身には治療活性が欠けているものである。医薬領域の熟達者は、選択された投与の様式に依存して、本発明の化合物と組合せられる能力を持った医薬的に許容可能な担体を定義できる。ここにおいて、多種の担体は、想定可能であり、この医薬的組成物に組み込まれうる。さらに、本発明に係る化合物は、１つ以上の担体と組み合わせることもでき、例えば、少なくとも２つ、３つ、それ以上の担体と組み合わせることも可能である。他の含有物は、本発明の係る医薬組成物に添加することもできる。この他の含有物としては、例えば、治療の観点から活性又は非活性である香味剤や色素などがある。
【０１４２】
先に述べたように、この好ましい添加含有物は、他の抗癌剤、特に抗増殖性の活性を有する抗癌剤、例えば少なくとも既に選択されているものとは別の本発明に係る化合物である。
【０１４３】
本発明の好ましい実施形態によると、医薬組成物は、本発明に係る化合物、適用できる担体、及びタキソールを含むものであるものがよい。それぞれの含有物の好ましい割合は、医薬領域の当業者によって決定できる。
【０１４４】
本発明に係る医薬組成物は、病巣内、腹腔内、筋内、又は静脈内への注射を介した投与；注入（インフュージョン、ｉｎｆｕｓｉｏｎ）を介した投与；リポソームが介在したデリバリー；局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔、眼、又は耳へのデリバリーを介した投与のためにデザインできる。
【０１４５】
投与の様式は、治療される病状に依存して決定できる。
【０１４６】
さらに、例えば固形腫瘍、転移癌への治療のために、投与の異なる様式も想定できる。
【０１４７】
本発明は、治療中の癌、又は、制御不能な進行性の細胞の増殖による組織の異常成長、又は、不要な若しくは病的な持続性の細胞の増殖、を治療する対象に投与することを目的とした薬剤の製造のための、本発明に係る化合物も包含する。
【０１４８】
治療される対象は、好ましくは、哺乳類、特にネコ、イヌ、ウマ、及びヒトである。特に、好ましい患者は、ヒトである。
【０１４９】
本発明のこの実施形態によれば、調製された薬剤は、病巣内、腹腔内、筋内、又は静脈内への注射を介した投与；注入（インフュージョン、ｉｎｆｕｓｉｏｎ）を介した投与；リポソームが介在したデリバリー；局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔、眼、又は耳へのデリバリーを介した投与、のために調製される。ただし、代替の投与様式は、想定可能である。
【０１５０】
本発明には、癌、異常な細胞増殖による特徴づけられる他の病態の治療を対象とする、同時に、個別に、又は連続的に、他の薬剤、好ましくは他の抗腫瘍剤又は化学療法剤とともに投与する目的の薬剤の製造のための本発明に係る化合物の使用も関連する。先に述べたように、本発明は、１つの他の薬剤の添加に限られず、定義したように、いくつかの異なる薬剤を組成物の中に入れることができる。
【０１５１】
適用が可能な他の抗腫瘍剤の例としては、例えば、タキソール（パクリタキセル）、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、レチノイン酸、タモキシフェン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、又はラパマイシンである。但し、このリストは、全てを列挙したわけではない。
【０１５２】
また、本発明は、本発明に係る化合物（第１又は第２の態様）と細胞との接触を含む細胞増殖の阻害のための方法にも関連する。この方法は、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）又は生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で行われるが、好ましくはインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で行われる。
【実施例】
【０１５３】
実施例１：発明に係る化合物の合成：
１．Ａ クマリン誘導体の合成：
適用される主なステップ及び条件は、以下の反応スキームに要約されている。
１Ｒ及び２Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）、及び（ｃ）中の環（Ｉ）及び（ＩＩＩ）の可能性のある置換基である。３Ｒ、６Ｒ、及び７Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）、及び（ｃ）に従った化合物を得るための可能性のある置換基を表す。
【０１５４】
【化１１】
【０１５５】
さらに具体的に述べると：
【０１５６】
【化１２】
【０１５７】
ステップ１：２−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−マロン酸ジエチルエステルの調製：
マロン酸ジエチル（２５３ｍｍｏｌ）は、室温で、ＤＭＳＯ（１４０ｍｌ）を溶媒としたＮａＨ（オイル中に６０％、シクロヘキサンにて洗浄）（２７５ｍｍｏｌ）の懸濁液へ、ゆっくりと添加した。２−クロロ−５−ニトロアニソール（１０５．５ｍｍｏｌ）の添加前に、反応液は、２０分間攪拌した。１１０℃で５時間の攪拌後、溶液は、水（１．５Ｌ）へ注ぎ、それから濃ＨＣｌを添加することにより、ｐＨ＝１へ酸性化した。この溶液は、さらに２０分間攪拌した。反応溶液は、濾過して固形物を回収し、これを水で洗浄、及び乾燥することにより、赤色固形物２７．１ｇを得た。この残留物（得られた物）は、氷冷したメタノール中で粉砕し、濾過、冷メタノールでの洗浄、及び乾燥により、１９．４ｇの目的産物を得た。
【０１５８】
ステップ２：（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸の調製：
基質（６２．３ｎｍｏｌ）（ステップ１にて調製）は、メタノール（５０ｍｌ）に溶解し、氷浴（ｉｃｅ ｂａｔｈ）中で冷却した。この溶液に、６Ｍ ＮａＯＨ（３１ｍＬ）を１５分間のうちに加え、得られた混合液をさらに５分間、０℃にて撹拌した。次いで、この反応混合液は、５０℃となるように加温し、５０℃で９０分間撹拌した。さらに、減圧下で、メタノールを除去した。残留物は、０℃まで冷却し、濃ＨＣｌを添加してｐＨ＝１に酸性化した。反応混合液は、濾過し、固形物を水で洗浄した。酢酸エチルを濾液に添加し、二層性溶液を抽出した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させて、９．４ｇの目的物を得た。
【０１５９】
ステップ３：（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸メチルエステルの調製：
基質（３９．３ｍｍｏｌ）（ステップ２にて調製）は、メタノール（４５ｍＬ）と２，２−ジメトキシプロパン（１６ｍＬ）との混合液に溶解した。クロロトリメチルシラン（０．５ｍＬ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒は、減圧下で除去した。残留物は、酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３、水、及び飽和させた含水塩化ナトリウムで洗浄した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させて、８．４ｇの有機固形物を得た。
【０１６０】
ステップ４：３−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−クロメン−２−オンの調製：
サリチルアルデヒド（２９ｎｍｏｌ）を、室温で、ピペリジン（２０ｍＬ）を溶媒とした基質（１９．５ｍｍｏｌ）（ステップ３にて調製）の溶液に加えた。この反応混合物を還流下で４時間撹拌した。反応の最後で、溶液を０℃まで冷却し、エタノールを加えた。沈殿物は、濾過し、エタノールで洗浄して、黄色粉末の表題の化合物３．６ｇを得た。
【０１６１】
ステップ５：３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オンの調製：
エタノール（４０ｍＬ）を溶媒とした基質（ステップ４にて調製）の溶液へ、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合液を、還流下で２．５時間撹拌した。溶液は、室温まで冷却し、１Ｍ ＮａＯＨを加え、１時間撹拌した。混合液は、セリット（ｃｅｌｉｔｅ）で濾過し、エタノールで洗浄した。エタノールを減圧下で除去し、得られた溶液は酢酸エチルでの抽出を３回行った。有機層は、１つにまとめ、１ＭのＮａＯＨ、水、及び飽和させた含水塩化ナトリウムで洗浄した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させて、黄色粉末２．８ｇを得た。
【０１６２】
【化１３】
【０１６３】
ステップ６：（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイルイロチアネートの調製：
３−（２−フリル）アクリル酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社より入手；７２．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解した。この溶液には、続けて塩化オキサリル（１４５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）を加えた。反応液は、室温で、１時間撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させ、トルエンと供沸した。残留物は、アセトン（５０ｍｌ）に溶解した。この溶液に対して、チオシアン酸カリウム（１４５ｍｍｏｌ）を加え、そして、この溶液をさらに３０分間撹拌した。溶媒は蒸発させ、残留物は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｆｌａｓｈ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（１００％ＤＣＮ）によって精製し、黄色オイル１０．６ｇを得た。
【０１６４】
【化１４】
【０１６５】
１．Ａ．１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド（化合物０１）
（別名：１（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オン（６ｍｍｏｌ）（ステップ５にて調製）及び（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイルイロチアネート（２４ｍｍｏｌ）（ステップ６にて調製）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解した。反応溶液は、室温で、２時間撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、エタノールに溶解し、溶液をさらに３０分間撹拌した。溶液は、濾過し、得た固形物を洗浄することにより、黄色粉末２．６ｇ（ｍｐ ２２７−２３０℃）を得た。
【０１６６】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝４４７、１００％）、ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１２．８９（ｂｒ ｓ， １ Ｈ）、１１．７２（ｂｒ ｓ， １ Ｈ）、８．０７（ｓ， １ Ｈ）、７．９３（ｓ， １ Ｈ）、７．８０−７．３０（ｍ， ８Ｈ）、 ７．０１（ｄ， Ｊ ３．５， １ Ｈ）、 ６．８２（ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）、６．７０−６．６７（ｍ， １ Ｈ）、３．７８（ｓ， ３Ｈ）。
【０１６７】
【化１５】
【０１６８】
１．Ａ．２：１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−３−［−３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−尿素塩酸塩（化合物０６塩酸塩）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オン（１２．８ｍｍｏｌ）（ステップ５にて調製）及び４−（ジメチルアミノ）フェニル イソシアネート（１５．４ｍｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３５ｍＬ）に溶解した。反応は、室温で、６日間撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、ジエチルエーテルとともに粉末化し、濾過し、固形物をジエチルエーテルで洗浄して、５．６ｇの固形物を得た。この固形物は、メタノールに溶解した。メタオールに溶かした塩化水素を、得られた混合溶液に加え、２０分間撹拌した。溶媒は、真空下で蒸発させた。得られた残留物は、ジエチルエーテルで洗浄し、淡黄色粉末５．７ｇを得た。
【０１６９】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝４３０，１００％）、ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ９．４３−９．３０（ｍ， ２Ｈ）、８．００（ｓ １Ｈ）、７．７３ （ｄ， Ｊ ７．８， １ Ｈ）、７．６５−７．３０（ｍ， ８Ｈ）、７．２５ （ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）、７．０１（ｄｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ １．７， １ Ｈ）、３．７４（ｓ， ３Ｈ）、３．１６（ｓ， ６Ｈ）。
【０１７０】
【化１６】
【０１７１】
１．Ａ．３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホンアミド（化合物１３）
（別名：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル］−アミド）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オン（５．６ｍｍｏｌ）（ステップ５にて調製）、及び２，５−ジメチル−フラン−３−スルホニルクロリド（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ社より入手；６．２ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１０ｍＬ）に溶解した。反応混合液は、室温で、１２時間撹拌した。溶液は、１ＭのＨＣｌ溶液に注ぎ、ＤＣＭにて抽出し、１ＭのＨＣｌ溶液、水、及び飽和させた含水塩化ナトリウムで洗浄した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、ジエチルエーテルともに粉末化し、濾過、ジエチルエーエルで洗浄して、ベージュ色粉末１．７ｇを得た。
【０１７２】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝ ４２６、１００％）、ＮＭＲ（２５０ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１０．４１（ｂｒ ｓ， １Ｈ）１ ７．９８（ｂｒ ｓ， １Ｈ）、７．７１（ｄｄ、Ｊ ７．７ ａｎｄ １．２， １ Ｈ）、７．６１（ｔｄ、Ｊ ８．２ ａｎｄ １．５， １ Ｈ）１ ７．４５−７．２５ （ｍ， ２Ｈ）、７．２３ （ｄ、Ｊ ８．２、１Ｈ）、６．８５（ｄ， Ｊ １．７， １ Ｈ）、６．７５（ｄｄ、Ｊ ８．２ ａｎｄ ２、 １Ｈ）、６．２６（Ｓ１ １Ｈ）１ ３．６８ （Ｓ， ３Ｈ）、２．４１ （ｓ， ３Ｈ）、２．２１（ｓ， ３Ｈ）。
【０１７３】
１．Ｂ オキソキノリン誘導体の合成：
１Ｒ及び４Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）及び（ｃ）中の環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）の可能性のある置換基である。５Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）及び（ｃ）に従う化合物を得るための可能性のある置換基である。
【０１７４】
適用される主なステップ及び条件は、以下の反応スキームに要約されている。
【０１７５】
【化１７】
【０１７６】
さらに具体的に述べると：
【０１７７】
【化１８】
【０１７８】
ステップ１：３−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製：
ｏ−アミノベンズアルデヒド（Ｏｒｇ． Ｓｙｎｔｈ．， ｃｏｌｌ． Ｖｏｌ． ３、５６に記述の方法に従って調製した）は、室温で、（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸メチルエステル（１５ｍｍｏｌ）（実施例１Ａのステップ３にて調製）をピペリジンに溶かした溶液（１５ｍＬ）に加えた。反応混合液は、還流下で２時間、撹拌した。反応の最後に、溶液を室温まで冷却し、エタノール（５０ｍＬ）を加えた。混合液は、３０分間撹拌し、それから０℃まで冷却した。沈殿物は、濾過し、黄色粉末として、表題の化合物２．２ｇを得た。
【０１７９】
ステップ２：３−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製：
基質（７．４ｍｍｏｌ）（ステップ１にて調製）は、ＤＭＦ（２０ｍＬ）を溶媒とするＮａＨ（オイル中６０％、シクロヘキサンで洗浄）の懸濁液に、０℃にて、ゆっくり加えた。反応液は、５分間、０℃で撹拌し、ヨウ化メチル（１１．１ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間の撹拌後、溶液を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、濾過した。残留物は、ＥｔＯＡｃに溶解し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒は、減圧下で除去し、黄色固形物として、目的産物２．１ｇを得た。
【０１８０】
ステップ３：３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製：
エタノール（１００ｍｌ）を溶媒とした基質（６．８ｍｍｏｌ）（ステップ２にて調製）の溶液へ、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（３３．８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物は、還流下で２時間、撹拌した。溶媒は、減圧下で除去し、残留物を得て、これを酢酸エチルに溶解し、含水炭酸水素ナトリウムの飽和溶液、及び含水塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させ、黄色固形物１．９ｇを得た。
【０１８１】
１Ｂ．１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド（化合物１７）（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（１−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オン（６．８ｍｍｏｌ）（ステップ３にて調製）、及び（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル イソチアネート（１３．７ｍｍｏｌ）（実施例１Ａのステップ６にて調製）は、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。反応液は、室温、２時間、撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、エタノールに溶解し、この溶液は、濾過して、黄色固形物２．２ｇを得た。
【０１８２】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝４６０，９９％）、ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１２．８８（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、１１．７１ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９５−７．８５（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ ７．７，１Ｈ），７．７０−７．５０（ｍ，４Ｈ），７．２８−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ ３．５，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ １５．５，１Ｈ），６．７０−６．６８（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．６８（Ｓ１ ３Ｈ）。
【０１８３】
１．Ｃ：メチル化条件
化合物１４は、実施例１．Ａ．１で生成された化合物（化合物０１）とＫ２ＣＯ３（２当量）、Ｍｅｌ（１．５当量）とのアセトン中の反応により生成した。反応物は、加熱し、４時間、還流した。
【０１８４】
【化１９】
【０１８５】
１．Ｄ
実施例１．Ａ、１．Ｂ、及び１．Ｃ及び適当なバリエーションの操作によって得られた本発明に係る代表的な化合物の特徴は、以下に報告する。
【０１８６】
ＬＣ＿ＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）の詳細は以下の通りである。
自動注入器：注入量が１０μｌ；
カラム：ＴＨＥＲＭＯ ＨＹＰＥＲＳＩＬ ＨＹＰＥＲＰＲＥＰ ＲＰ Ｃ１８、８μｍ、１５０Ｍ．６ｍｍ；
ＵＶ 検知装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５Ａ ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ［１９０−４００ｎｍ］；
ＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出）装置：Ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ ＥＬＳ２１００、Ｔ° ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ＝５０°Ｃ，Ｔ° ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ＝９０°Ｃ，ｇａｚ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：１．６ ＳＬＭ。
【０１８７】
【表１】
【０１８８】
【化２０】
【０１８９】
化合物０２：Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）ベンズアミド
（別名：１−ベンゾイル−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−チオ尿素）。
ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ１ＤＭＳＯ）：δ １２．７５（ｓ，１Ｈ），１１．６５（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），８．０２−７．９５（ｍ，２Ｈ）１ ７．８０−７．３５（ｍ，１０Ｈ），３．７８（Ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ ９８％（４３１，Ｍ＋１）。
【０１９０】
【化２１】
【０１９１】
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル−尿素：
淡黄色固形物。
ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ ８．８８（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．００（Ｓ１ １Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ ７．７， １Ｈ），７．６１（ｔ， Ｊ ８．５，１Ｈ），７．５２−７．４０（ｍ，８Ｈ），７．１５−６．８５（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ 純度：１００％。
【０１９２】
【化２２】
【０１９３】
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル−チオ尿素：
白色固形物。
ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ ９．９４（ｂｒ ｓ，２Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ ６．２ ａｎｄ １．２，１Ｈ）１ ７．６２（ｔｄ，Ｊ７．０ ａｎｄ １．２， １Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ ６．２，２Ｈ）；７．４５−７．２５（ｍ，６Ｈ），７．２０−７．１０（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： １００％。
【０１９４】
【化２３】
【０１９５】
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド
（別名：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ１ ＤＭＳＯ）： δ １２．６６ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １１．７０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．１５−８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．７５ （ｄ， Ｊ ８．２，１Ｈ）， ７．７０−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５０−７．３５ （ｍ， ６Ｈ）， ３．７７ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： １００％。
【０１９６】
【化２４】
【０１９７】
化合物０６：１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−尿素．塩化水素：
淡黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ９．４３−９．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ８．００ （ｓ， １Ｈ）１ ７．７３ （ｄ， Ｊ ７．８， １ Ｈ）， ７．６５−７．３０ （ｍ，８Ｈ）， ７．２５ （ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ７．０１ （ｄｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ １．７， １Ｈ）， ３．７４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１６ （ｓ， ６Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９８％。
【０１９８】
【化２５】
【０１９９】
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イル−ピリジン−３−イル）−チオ尿素：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ９．８７ （ｓ， １ Ｈ）， ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０ （ｄ， Ｊ ２．７， １ Ｈ）， ８．０１ （ｓ， １Ｈ）１ ７．７５ （ｄｄ，Ｊ ８．２ ａｎｄ ０．７， １ Ｈ）， ７．７０−７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４５−７．２５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１２ （ｄｄ， Ｊ ８．０ ａｎｄ １．５， １Ｈ）， ６．８３ （ｄ， Ｊ８．７， １ Ｈ）， ３．８０−３．６５ （ｍ， ７Ｈ）， ３．４５−３．３５ （ｍ， ４Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９２％。
【０２００】
【化２６】
【０２０１】
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート：（別名：５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニルスルファモイル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル｝。
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １０．３０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ２．０， １ Ｈ）， ７．７０ （ｄｄ， Ｊ ８．０ ａｎｄ １．５， １ Ｈ）， ７．６０ （ｔｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ １．５， １Ｈ）， ７．４５−７．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｄ， Ｊ ８．２， １ Ｈ）， ７．０３ （ｄ， Ｊ ２．０， １ Ｈ）， ６．８６ （ｄ， Ｊ ２．０， １ Ｈ）， ６．７７ （ｄｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ ２．０， １ Ｈ）， ３．８６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９６％。
【０２０２】
【化２７】
【０２０３】
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド。（別名：２，５−ジメチルフラン−３−スルホン酸［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−アミド）。
灰色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １０．４１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７１ （ｄ， Ｊ ７．５， １ Ｈ）， ７．６１ （ｔ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ７．４３−７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ６．８４ （ｓ， １ Ｈ）， ６．７５ （ｄ， Ｊ ８．２， １ Ｈ）， ６．２６ （ｓ， １ Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２１ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％。
【０２０４】
【化２８】
【０２０５】
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−２−メチル−イソチオ尿素）：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．２０−８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８５−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５−７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１５−７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％。
【０２０６】
【化２９】
【０２０７】
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素：
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．２０−８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８５−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５−７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１５−７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％。
【０２０８】
【化３０】
【０２０９】
化合物１８：１−（３−ジメチルアミノ−フェニル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−尿素．塩化水素：
灰色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．８５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ８．００ （ｓ， １Ｈ）， ７．７４ （ｄｄ， Ｊ ７．５ ａｎｄ０．７５， １ Ｈ）， ７．６１ （ｔｄ， Ｊ ７．９ ａｎｄ １．５， １ Ｈ）， ７．４５−６．９５ （ｍ， ７Ｈ）， ６．９０−６．７５ （ｍ， １ Ｈ）， ６．５０−６．３５ （ｍ， １Ｈ），３．７５ （Ｓ， ３Ｈ）， ２．９１ （ｓ， ６Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９９％。
【０２１０】
【化３１】
【０２１１】
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド。（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １２．８７ （ｓ， １ Ｈ）， １１．８４ （ｓ， １ Ｈ）， １１．７０ （ｓ， １ Ｈ）， ８．００−７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７５− ７．２２ （ｍ， ７Ｈ）， ７．１８ （ｔ， Ｊ ７．５， １ Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ３．２， １ Ｈ）１ ６．８１ （ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）， ６．７０−６．６６ （ｍ， １Ｈ）， ３．７４ （Ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９２％。
【０２１２】
【化３２】
【０２１３】
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド。
（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １２．８８ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １１．７１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９５−７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４ （ｄ， Ｊ ７．７，１ Ｈ）， ７．７０−７．５０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２８−７．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ３．５， １ Ｈ）， ６．８２ （ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）， ６．７０−６．６８ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９３％。
【０２１４】
【化３３】
【０２１５】
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン：
灰色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ３）： δ ８．０６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．８５−６．９５ （ｍ， ９Ｈ）， ６．８０−６．７５ （ｍ， １Ｈ）， ６．６０−６．５５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３１ （ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）， ３．７９ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ３．５６ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９９％。
【０２１６】
【化３４】
【０２１７】
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ９．７０ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ７．９９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７３ （ｄ， Ｊ ７．７， １ Ｈ）， ７．６１ （ｔ， Ｊ ７．２， １ Ｈ），７．４５−７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１０ （ｄｄ， Ｊ ８．５ ａｎｄ １．７， １ Ｈ）， ６．９１ （ｄ， Ｊ ８．７， ２Ｈ）１ ３．７５−３．６５ （ｍ， ７Ｈ）， ３．１０−３．３．０５ （ｍ， ４Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９３％。
【０２１８】
【化３５】
【０２１９】
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素：
淡黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １２．８７ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １１．７０ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ７．９５−７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．９０−７．５５ （ｍ， ５Ｈ）， ７．２０−７．１０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ３．５， １Ｈ）， ６．８２ （ｄ， Ｊ １５．７， １ Ｈ）， ６．７０−６．６０ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９５ （ｔ， Ｊ ５．２， １Ｈ）， ４．３７ （ｔ， Ｊ ６．５， ２Ｈ）， ３．８０−３．６０ （ｍ， ５Ｈ）． ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％
【０２２０】
【化３６】
【０２２１】
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン：
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １１．８２ （ｓ， １ Ｈ）， ９．４０ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ８．１７−８．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６６（ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ７．６０−７．２５ （ｍ， ８Ｈ）， ７．２０ （ｔ， Ｊ ７．５， １Ｈ）１ ７．０２ （ｄ， Ｊ ６．７， １ Ｈ）１ ３．７７ （ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９３％。
【０２２２】
【化３７】
【０２２３】
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド：
白色泡沫。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ３）： δ ７．８３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６５−７．４５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４５−７．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９５−６．７０ （ｍ，２Ｈ）， ６．２６ （Ｓ， １ Ｈ）， ３．８５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．５７ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ８６％。
【０２２４】
【化３８】
【０２２５】
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素：
黄色泡沫。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．０２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）１ ７．８５ （ｂｒ Ｓ１ １ Ｈ）， ７．７２ （ｄ， Ｊ ８．２， １ Ｈ）１ ７．６１ （ｔ， Ｊ ７．５， １Ｈ）， ７．４５−７．２０ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ６．７０−６．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ３．０５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ２．５５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９８％。
【０２２６】
【化３９】
【０２２７】
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド。
（別名：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−グアニジン）。
白色固形物：
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ１ ＣＤＣＩ３）： δ ８．１７−８．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６０−７．２０ （ｍ， ８Ｈ）， ６．８５−６．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７３ （Ｓ， ３Ｈ）． ＬＣ−ＭＳ 純度： １００％。
【０２２８】
【化４０】
【０２２９】
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド。
（別名：Ｎ−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−グアニジン）
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １１．８２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １０．９３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ９．１３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）１ ８．０３ （ｓ， １Ｈ）１ ７．９６（ｓ， １ Ｈ）１ ７．７９ （ｄ， Ｊ ７．７， １ Ｈ）１ ７．７０−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５−７．３５ （ｍ， ３Ｈ）１ ７．１９ （ｄ， Ｊ １．０， １ Ｈ）１ ７．１５−７．００（ｍ， ２Ｈ）１ ６．８０−６．６０ （ｍ， ２Ｈ）１ ３．７９ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９５％。
【０２３０】
実施例２．インビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での増殖／生存、及び細胞周期の特定のための試験：
２Ａ．ヨウ化プロピジウム染色（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ）（細胞毒性試験）
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）は、正常では細胞膜を通過できない。そのため、生存細胞は排除されるが、損傷を受けた細胞膜を有して死につつある細胞又は死んだ細胞では、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）が、核酸二重鎖に挿入され、波長４８８ｎｍの光線照射時に蛍光を発する。
【０２３１】
化合物の細胞毒性を決定するため、２×１０５個の細胞を化合物と共にインキュベートした。このインキュベートは、時間（ｈｒ）単位から日（ｄａｙ）単位の範囲で行い、その後、細胞を回収した。この細胞の回収は、細胞が懸濁液中で培養されていれば簡単にピペッティングにより行い、又は、接着細胞をマイルドなトリプシン処理した後に行った。細胞は、１２００ｒｐｍで５分間の緩やかな遠心分離を４℃にて行うことによりペレットとし、それから上精を捨て、新しい培養液１ｍＬ加えることにより培養液を入れ換えた。ＦＡＣＳチューブ中において、１００μＬのヨウ化ピロピジウムを４００μＬの細胞懸濁液に加え、生存率をフローサイトメトリーによって測定した。ＦＬ−３チャンネルで０及び２の間を含む蛍光記録を示す細胞の割合（百分率）を測定した。
【０２３２】
２Ｂ．細胞周期分析：
化合物の細胞増殖抑制性の決定のため、２×１０５個の細胞を化合物と共にインキュベートした。このインキュベートは、時間（ｈｒ）単位から日（ｄａｙ）単位の範囲で行い、その後、細胞を回収した。細胞は、１２００ｒｐｍで５分間の緩やかな遠心分離を４℃で行うことによりペレットとし、それから上精を捨て、細胞は、１ｍＬの７０％エタノール／ＰＢＳにより、−２０℃で固定した。その後、チューブは、１２００ｒｐｍで５分間の遠心分離を行い、上清を除いた。それから、ペレットは、４５０μＬのＰＢＳに再懸濁し、次いで、５０μＬのＲＮａｓｅ（１ｍｇ／ｍＬ）、及び５μＬのヨウ化ピロピジウムを加えた。各チューブは、３７℃で３０分間静置してインキュベートした後、直ちにフローサイトメトリーで分析した。
【０２３３】
バイパラメトリックドットプロット（ｂｉｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｄｏｔ ｐｌｏｔ）は、ＦＬ３ピーク対ＦＬ３整数をプロットし、対角線上に位置する細胞をゲーティングして、ＦＬ３ピークの機能として細胞数を表すヒストグラムを解析した。細胞周期のサブＧ１期、Ｇ１期、Ｓ期、又はＧ２期における細胞の相対比率を規定する基準点（カーソル）の相対的位置を算出するため、Ｇ１期及びＧ２期のピークを、最初に規定した：
Ｇ１期のピークは、未処理でのメジャーピークとして規定した（一般にＸ＝２００）；
Ｇ２期のピークは、Ｇ１ピークの値の２倍の値を中心に置いた（一般にＸ＝４００）。
サブＧ１期の細胞は、Ｇ１期のピークに先立つヒストグラムのパートにプロットされた（一般にＸ＜２００）。そして、Ｓ期の細胞は、Ｇ１期とＧ２のピークの間の領域の中に収まった。以上から、このグラフ上において、細胞周期のサブＧ１期、Ｇ１期、Ｓ期、及びＳ／Ｍ期が規定された。
【０２３４】
２Ｃ．増殖試験；（ＶｉａＬｉｇｈｔ(R) ＨＳ Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｋｉｔ）：
この方法では、化合物の細胞増殖抑制性及び細胞毒性の活性を決定できる。この試験は、細胞培養系の哺乳類細胞に対して、基本的に製造業者が推奨するものに従って実施した。
【０２３５】
細胞は、１５ｍＬの各培養液に懸濁し、細胞数を数えた。細胞は、以下のものが得られるように希釈を行った：
―ＭＲＣ５細胞の場合、１ウェル当り、培養液９０μＬ中、２５００個の細胞となるようにした；
―他の細胞株の場合、１ウェル当り、培養液９０μＬ中、５０００個の細胞となるようにした。
【０２３６】
次いで、細胞は、９６ウェルの細胞培養用プレートにまき、少なくとも４時間、３７℃、５％ＣＯ２に設定したインキュベータに配置してインキュベートした。
【０２３７】
試験対象の分子は、ＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭへ以下の希釈率となるように希釈した：
―２５０μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―５０μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―１０μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―２μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―４００ｎＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―８０ｎＭの分子／１％ＤＭＳＯ。
【０２３８】
９０μＬの細胞懸濁液が含まれる各ウェルに対し、１０μＬの試験する化合物の溶液を、上述の６つの異なる条件にて添加した。次いで、細胞培養用プレートは、７２時間インキュベートした。コントロール用の細胞培養用プレートには、１０μＬの１％ＤＭＳＯを含有したＤＭＥＭで化合物を含有しないものを用いた。その後、５０μＬの溶解バッファー（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）をコントロール用の細胞培養用プレートの各ウェルに加え、フード（ｈｏｏｄ）下で１０分間インキュベートした。
【０２３９】
続いて、１００μＬのテストバッファー（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｔｅｓｔ ｂｕｆｆｅｒ）をコントロール用の細胞培養用プレートの各ウェルに加え、２分間インキュベートした。発光は、ウェル毎に検出した。各種細胞の発光の平均は、Ｔ０と称した。
【０２４０】
７２時間のインキュベート後、生存率を決定するため、５０μＬの溶解バッファー（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を細胞培養用プレートの各ウェルへ加え、フード（ｈｏｏｄ）下で、プレートを１０分間インキュベートした。
【０２４１】
その後、１００μＬのテストバッファー（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｔｅｓｔ ｂｕｆｆｅｒ）を各ウェルに加え、細胞培養用プレートを２分間インキュベートした。発光は、ウェル毎に検出した。各種の細胞について、化合物を含有しないウェルの発光の平均は、Ｃ７２と称し、試験する化合物を含有するウェルの発光の平均は、Ｔ７２と称した。各希釈（試験する化合物の濃度）に対して、Ｔ０及びＴ７２の値を比較した。
【０２４２】
Ｔ７２が、Ｔ０よりも高い、又は同じ場合、以下の式が、成長率（増殖率）を決定するためのものとして適用される。
Ｙ＝Ｇｒｏｗｔｈ（％）＝（Ｔ７２−Ｔ０）／（Ｃ７２−Ｔ０）×１００
【０２４３】
Ｔ７２が、Ｔ０よりも低い場合、以下の式が、致死率を決定するためのものとして適用される。
Ｙ＝ＬＣ（％）＝（Ｔ７２−Ｔ０）／Ｔ０×１００
【０２４４】
グラフは、化合物の種々の濃度に対してプロットされた。
【０２４５】
ＧＩ５０は、（５０％の成長阻害）が決定され、これは、５０％の細胞成長（細胞増殖）を生じる用量である（Ｙ＝５０での交点）。
【０２４６】
ＴＧＩ（全成長阻害）は、グラフ上で決定され、細胞増殖の全てが阻まれる用量である（Ｙ＝０での交点）。
【０２４７】
ＬＣ５０（５０％の致死濃度）は、５０％の細胞が致死する用量である（Ｙ＝−５０での交点）。
【０２４８】
実施例３．インビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での化合物０１による細胞増殖の阻害：
本発明に係る化合物、化合物（０１）：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド、の細胞増殖への作用を、種々の濃度にて、種々の細胞を用いて試験した。この種々の細胞とは、すなわち、ＭＲＣ５（ｎｏｒｍａｌ ｎｏｎ−ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ、正常非形質転換肺繊維芽細胞）、Ｈ１４６（肺小細胞癌）、Ｈ６９（肺小細胞癌）、Ｈ６９ＡＲ（肺小細胞癌、アドリアマイシン抵抗性（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ））、Ｕ９３７（組織球性リンパ腫）、ＢＬ４１（バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ））、Ｖａｌ（リンパ腫）、ＲＳ４−１１（急性リンパ性白血病（ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋａｅｍｉａ））、Ｈ４６０（非小細胞肺癌）、ＰＣ３（前立腺癌）、ＭＤＡ２３１（乳房上皮癌（ｂｒｅａｓｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））、Ｌｏｖｏ（結腸直腸腺癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））、及び、Ａ３７５（メラノーマ）である。方法は、実施例２Ｃに詳しく述べる。
【０２４９】
結果は、図１Ａ及び１Ｂに表した。
【０２５０】
細胞成長の負の割合（百分率）の値は、抗細胞増殖抑制性の作用の加え、細胞毒性の作用を示す。
【０２５１】
結論として、化合物（０１）は、肺、前立腺、乳房、結腸、メラノーマ、及び骨髄の腫瘍細胞に成長（増殖）を、ＩＣ５０が５０ｎＭから１μＭの範囲にて、阻害することが見られた。生存率及び細胞周期プロファイルは、５００ｎＭの化合物（０１）で試験した。
【０２５２】
【表２】
【０２５３】
結論として、化合物（０１）（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）は、リンパ系腫瘍及び骨髄腫瘍の細胞に対して、アポトーシス性の細胞周期プロファイルを生じさせ、細胞毒性の作用を有する。また、化合物（０１）は、前立腺及び肺の腫瘍細胞には、有糸分裂へ移行する時期の細胞周期を停止させる細胞増殖抑制性を有する。なお、この実験において、コントロールの非形質転換細胞（ＭＲＣ５）は、化合物（０１）と接触しても影響が及ばなかった。
【０２５４】
実施例４．インビボ系（ｉｎ ｖｉｖｏ）での腫瘍成長の阻害：
この実験のため、Ｓｗｉｓｓ系統のヌードマウス（Ｓｗｉｓｓ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）には、５×１０６個の肺癌細胞ＮＣＬ−Ｈ４６０細胞（ＮＳＣＬＣ）を、皮下へ異種移植（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）した。処理当初の腫瘍の大きさに対する腫瘍の大きさの成長の割合（百分率（％））を、１５日間にわたり４種の処理を受けたそれぞれのマウス（１種の処理の群当たり１２匹のマウス）についてプロットした。
【０２５５】
第１の処理は、コントロールに相当する。この処理では、マウスは、溶媒対照（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を腹腔内へ２日間隔で与えた（２ＱＤ）。溶媒対照（Ｖｅｈｉｃｌｅ）の組成は、１０％ＤＭＳＯ；１０％ＰＥＧ−４００；３０％（エタノール／Ｃｒｅｍｏｒｈｏｒ（１／２））；５０％滅菌水、とした。
【０２５６】
第２の処理は、本発明の係る化合物である化合物（０１）を投与量１８ｍｇ／ｋｇにて２日間隔で投与した（２ＱＤ）。
【０２５７】
第３の処理は、タキソールを投与量８ｍｇ／にて間欠投与（Ｑ３Ｄ×５；１日目；４日目；７日目；１０日目；１３日目）するものに相当する。
【０２５８】
第４の処理は、化合物（０１）の投与量１８ｍｇ／ｋｇの投与（２ＱＤ）とタキソールの投与量８ｍｇ／ｋｇの投与（Ｑ３Ｄ×５）とを組み合わせたものに相当する。
【０２５９】
結果は、図２に表す。
【０２６０】
化合物（０１）（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）は、異種移植モデルにおいて、攻撃性の肺腫瘍の成長を阻害することが結論づけられた。また、腫瘍の成長を減少させる化合物の作用は、他の抗腫瘍剤との組み合わせ、特にタキソールとの組合せにより、亢進されることが観察された。また、この阻害は、用量依存的に生じることが観察された。
【０２６１】
実施例５．化合物（０１）のＢｃｌ−ｘＬへの直接的な結合の蛍光阻害（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）による決定：
実験は、蛍光分光計（ＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ ８０００Ｃ ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ）を用い、２ｎｍ及び４ｎｍそれぞれのスペクトルバンド幅において、励起と放出を行った。
【０２６２】
０．５μＭの精製された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ＸＬは、２５℃にて１．２ｍＬの事前に平衡化された以下の緩衝液によって希釈した。この緩衝液は、１０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ， ｐＨ＝ ７．４；１００ ｍＭ ＮａＣＩ；１ ｍＭ β−メルカプトエタノール、及び１０％グリセロール、という組成とした。
【０２６３】
蛍光の測定は、１００％ＤＭＳＯを溶媒として、１００ｎＭから７．５μＭまで化合物（０１）の濃度を増加させながら実施した。
【０２６４】
Ｂｃｌ−ｘＬのトリプトファン内在性の蛍光は、２９５ｎｍの励起光に対する３１０〜３９０ｎｍの放出光の検出によって測定された。化合物（０１）の結合は、化合物（０１）の濃度の増加に伴う蛍光の増加によって観察された。内部フィルター効果（ｉｎｎｅｒｆｉｌｔｅｒ ｅｆｆｅｃｔ）の補正及びＤＭＯＳＯの希釈は、ＮＡＴＡ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｔｒｙｐｔｏｐｈａｎａｍｉｄｅ）を用いて決定した。全てのスペクトルでは、緩衝液の作用及び希釈を補正した。曲線適合は、Ｇｒａｆｉｔ（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用い、蛍光の増加に対する以下の方程式により実施した。
【０２６５】
Ｆ＝Ｆｍｉｎ＋｛（Ｆｍａｘ−Ｆｍｉｎ）［（Ｅｔ＋Ｌ＋Ｋｄ）−（（Ｅｔ＋Ｌ＋Ｋｄ）２−４ＥｔＬ）１／２］｝／２Ｅｔ
【０２６６】
但し、
Ｆ＝相対的蛍光強度、Ｆｍｉｎ＝滴定開始時の蛍光強度；
Ｆｍａｘ＝化合物（０１）濃度の飽和時の蛍光（リガンド（Ｌｉｇａｎｄ）＝Ｌ）；
Ｅｔ＝６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬの全濃度；
Ｋｄ＝６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ／化合物（０１）複合体の見掛けの解離定数
【０２６７】
実施例６．小分子のプルダウンアッセイ（Ｐｕｌｌ ｄｏｗｎ ａｓｓａｙ）：
ペプチドアプタマー（ＢＦ８と呼ぶ）は、ＢＣＬ−２ファミリーのメンバーである抗アポトーシス性たんぱく質Ｂｆｌ１に対して選択された。ＢＦ８は、Ｂｃｌ−ｘＬが属するＢＣＬ−２ファミリーの他のメンバーとの相互作用も示された。以下の２つの根拠は、ＢＦ８が、抗アポトーシス性ＢＣＬ−２様たんぱく質の疎水性溝（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｇｒｏｏｖｅ）に結合することを示す。第１に、可変部位のアミノ酸配列は、ＢＣＬ−２ファミリーのアポトーシス促進性のメンバーのＢＨ３ドメインの配列との類似性を持つ。ＢＣＬ−２ファミリーのアポトーシス促進性のメンバーは、Ｂａｋ又はＢａｘのようなものであり、この疎水性溝を介して抗アポトーシス性のたんぱく質と結合することが知られる。第２に、ＢＦ８は、前記疎水性溝内にアミノ酸置換を有するＢｆｌ−１の変異型にはもはや結合しない。
【０２６８】
Ｂｃｌ−ｘＬ／ＢＦ８インビトロ相互作用アッセイは、ペプチドアプタマーとの競合によって、本発明に係る化合物が、この結合を崩す能力を有するのか検証するために開発した。６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ及びＧＳＴ−ＢＦ８の組換え融合タンパク質は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に発現させ、アフニティークロマトグラフィーを用いて精製した。ＧＳＴ−ＢＦ８融合タンパク質（又はＧＳＴ−コントロールアプタマー融合タンパク質）は、グルタチオン−セファロース固相と結合させ、各種の分子の存在下において、溶解性の６×６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬをこの固相に加えた。固相に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ分子は、抗６×Ｈｉｓ抗体を用いて、ウェスタンブロット実験により検出した。
【０２６９】
方法の詳細は、以下に示す。
【０２７０】
（１）事前にリンスした２５μＬのグルタチオン−セファロースビーズは、１０μｇの精製されたＧＳＴ−ＢＦ８融合タンパク質を含有するプルダウンバッファー（ｐｕｌｌ ｄｏｗｎ ｂｕｆｆｅｒ）（５ＯｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ，ｐＨ＝８．０； １０ＯｍＭ ＮａＣＩ； １ｍＭ ＤＴＴ ｅｔ ０，０１％ Ｔｗｅｅｎ２０）と混合した。混合液は、室温で、３０分間インキュベートした。
【０２７１】
（２）ビーズは、遠心分離と１ｍＬのプルダウンバッファーによる希釈とによる洗浄を行った。その後、ビーズは、遠心分離し、上清を除くことにより、回収した。
【０２７２】
（３）４℃で２時間のプレインキュベートした５％ＤＭＳＯ及び化合物（５０μＭ）を含有するプルダウンバッファーへ、０．５μｇの精製された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質を添加した。この混合液は、コンスタントな攪拌下、２時間インキュベートした。
【０２７３】
（４）その後、ビーズは、濃縮と１ｍＬのプルダウンバッファーによる希釈とを３回繰り返すことにより洗浄した。
【０２７４】
（５）ビーズを回収し、上清を除き、ビーズは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ用の１×Ｌａｅｍｌｉ ｂｕｆｆｅｒ（０．２５ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ， ｐＨ＝ ６．８； ５ ％ ＳＤＳ； ０．０２５ ％ ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ ｂｌｕｅ； ０．６ Ｍ β−メルカプトエタノール、及び １０％グリセロール）に再び懸濁した。この混合液は、１００℃で１０分間加熱し、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２７５】
（６）ウェスタンブロット分析は、抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて行った。
【０２７６】
図３に示す結果から、化合物（０１）（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）、及び、化合物（０２）（（Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル］フェニル｝アミノ）カルボノチオイル）ベンズアミド）は、インビトロ系での６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬとＧＳＴ−ＢＦ８との相互作用を阻害することが、結論づけられた。
【０２７７】
実施例７．アポトーシス：
アポトーシスの誘導（ＢＣＬ−２様たんぱく質への標的から想定される）により引き起こされる本発明に係る化合物の細胞毒性の活性を証明するため、アポトーシスを特異的に検出する３種の異なるアッセイを、化合物（０１）で２４時間にわたり処理したＵ９３７細胞を用いて実施した。活性化カスパーゼ３（Ｃａｓｐａｓｅ ３）及びホスファチジルセリンの細胞膜外層への露出を示す細胞の割合（百分率比（％））をフローサイトメトリーによって決定した。両アッセイは、アポトーシスの初期マーカーを検出できる。サブＧ１期のＤＮＡ含量を示す細胞の割合（百分率比（％））もまたフローサイトメトリーによって決定した。このＤＮＡ含量は、アポトーシスのマーカーとして古典的に用いられている。図４に示す実験において、Ｇ２／Ｍ期のＤＮＡ含量を示す細胞の割合（百分率比（％））も決定した。最後に、この同じ実験において、死細胞の割合（百分率比（％））を、ヨウ化プロピジンの取り込みにより決定した。
【０２７８】
方法の詳細は、以下に示す。
【０２７９】
細胞培養及び化合物（０１）処理：
ヒト組織球性リンパ腫のＵ９３７細胞は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ ８５０１１４４０）より入手し、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ｈｅａｔ ｄｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）、１００ＵＩ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、及び２ｍＭ グルタマックスＩ（ｇｌｔａｍａｘ Ｉ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培養液に懸濁して維持した。
【０２８０】
化合物（０１）を添加する１２時間前に、Ｕ９７３細胞は、１２ウェルの細胞培養用プレートに細胞密度が（５×１０５細胞数／９００μＬ培養液）となるようにまいた。
【０２８１】
細胞には、４〜２４時間までの間の多種の処理時間での１００μＬの５μＭ 化合物（０１）／１％ＤＭＳＯ（最終濃度 ０．５μＭ／０．１％ＤＭＳＯ）による処理、又はＤＭＳＯ単独による１０時間及び２４時間の処理（それぞれコントロール１及びコントロール２）を行った。
【０２８２】
４、６、８、１０時間インキュベーションのウェル、及びコントロール１のウェルは、１日目に分析した。
【０２８３】
１２、１４、１６、２０、２４時間インキュベーションのウェル、及びコントロール２のウェルは、２日目に分析した。
【０２８４】
Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ結合分析及びヨウ化プロピジン（ＰＩ）染色は、Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ ＦＩＴＣキット（ＩＭ３５４６．； Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ； Ｖｉｌｌｅｐｉｎｔｅ）を用いたフローサイトメトリーを製造者の説明に従って実施した。
【０２８５】
５×１０５個の細胞は、１６００ｒｐｍで４℃の遠心分離によって素早くペレットとし、１μＬのＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ、５μＬのＰＩ（２５０μｇ／ｍＬ）、及び１００μＬの氷冷１×Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒを混合した液に再懸濁した。氷上で暗闇にて１５分間インキュベートした後、４００μＬの１×ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを添加し、調製した細胞をフローサイトメトリーで分析した。
【０２８６】
カスパーゼ−３，７（Ｃａｓｐａｓｅ−３，７）の活性の分析は、ＣａｓｐｇｌｏｗTM ｋｉｔ（Ｋ−１８３／ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ； Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ）を製造者の説明に従って使用したフローサイトメトリーにより実施した。
【０２８７】
５×１０５個の細胞は、１６００ｒｐｍで４℃の遠心分離によって素早くペレットとし、３００μＬの細胞培養液に再懸濁した。１μＬのＦＩＴＣ−ＤＥＶＤ−ＦＭＫを各チューブに添加し、３７℃、５％ＣＯ２に設定したインキュベータ中に３０分間静置した。細胞は、２度遠心分離（３０００ｒｐｍ／５分間）し、０．５ｍＬのＷａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄した後、３００μＬのＷａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒに再懸濁し、フローサイトメトリー分析まで氷上においた。
【０２８８】
フローサイトメトリー：
全ての実験は、空冷アルゴンイオンレザー４８８ｎｍが設定されたＣｙｔｏｍｉｃｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ ５００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施した。全ての分析は、ＣＸＰ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて行った。
【０２８９】
各データポイントに対し、最小で２００００細胞を分析した。
【０２９０】
カスパーゼ３，７の活性及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖの結合は、ＦＬ−１チャンネルを用いて定量化し、ＰＩ染色は、ＦＬ−４チャンネルを用いて定量化した。
【０２９１】
細胞周期分析は、先に記述したように、実施した。
【０２９２】
ここに示す結果及び図４から、化合物（０１）（（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）は、Ｕ９７３細胞に対する細胞増殖抑制性の作用を発揮し（細胞周期のＧ２／Ｍ期中の細胞群の初期の増加により判明）、及び、アポトーシスを誘導する（活性化カスパーゼ３、ホスファチジルセリンの膜への露出、及びサブＧ１期のＤＮＡ含量を示す細胞の割合（百分率比（％））の漸増により判明）ことが結論づけることができる。
【０２９３】
実施例８．増殖試験：
実施例２Ｃに記述した方法に従い、本発明に従う種々の化合物について、細胞培養系における哺乳類細胞（特にＵ９３７細胞）に対する細胞増殖抑制性及び細胞毒性の活性をテストした。
【０２９４】
ＧＩ５０（５０％の成長阻害）は、以下の全ての化合物に決定した。ＧＩ５０は、換言すると、５０％の細胞成長阻害を生じる化合物の用量である。
【０２９５】
得られた結果は、以下の表に示す。ＧＩ５０が数値範囲の形式で表中に与えられている場合、多数回の実験が実施され、その結果がこの数値範囲内に現れたことを意味する。そうでない場合、個別の実験の結果が表中に与えられている。
【０２９６】
【表３】
【０２９７】
【表４】
【０２９８】
【表５】
【０２９９】
［参考文献］
Ｃｏｎｔｒａｃｔｏｒ Ｒ， Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ Ｍ， Ｓａｍｕｄｉｏ Ｉ１ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｃｌ−２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＢＨ３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＧＸ１５−０７０ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｉｎ ＡＭＬ． Ｂｌｏｏｄ ． ２００５；１０６：９４２ａ， ａｂｓｔｒａｃｔ ＊ ３３７２．
【０３００】
Ｇａｌａｎ ＰＰ， Ｒｏｕｅ Ｇ， Ｂｉｌｌａｍｏｒ Ｎ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｐａｎ＝Ｂｃｌ−２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＧＸ１５−０７０ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎ ｍａｎｔｌｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ （ＭＣＬ） ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ａ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ （Ｖｅｌｃａｄｅ(R)）． Ｂｌｏｏｄ． ２００５； １０６：４２９ａ， ａｂｓｔｒａｃｔ ＃１４９０．
【０３０１】
Ｍｏｈａｍｍａｄ ＲＭ１ Ｗａｎｇ Ｓ， Ａｂｏｕｋａｍｅｅｌ Ａ， Ｃｈｅｎ Ｂ１ Ｗｕ Ｘ１ Ｃｈｅｎ Ｊ， Ａｌ−Ｋａｔｉｂ Ａ． Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ａ ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃ ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｂｃｌ−２ ａｎｄ ＢｃＩ−Ｘ（Ｌ） ［（−）−ｇｏｓｓｙｐｏｌ］ ａｇａｉｎｓｔ ｄｉｆｆｕｓｅ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ． ＭｏＩ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ． ２００５ Ｊａｎ；４（１）： １３−２１．
【０３０２】
Ｏｌｔｅｒｓｄｏｒｆ Ｔ． ｅｔ ａｌ． Ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｂｃｌ−２ ｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ． Ｎａｔｕｒｅ． ２００５； ４３５ （７０４２）： ６７７−８１．
【０３０３】
Ｓａｔｔｌｅｒ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｂｃｌ−ｘＬ−Ｂａｋ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐｌｅｘ： ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ． Ｓｉｃｅｎｃｅ． １９９７； ２７５ （５３０２）： ９８３−９８６．
【図面の簡単な説明】
【０３０４】
【図１Ａ】インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での細胞増殖の阻害。このグラフは、本発明の化合物（化合物０１）の濃度を増加した際の１４個の異なる細胞の群の成長の割合（百分率）で表す。
【図１Ｂ】インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での細胞増殖の阻害。このグラフは、本発明の化合物（化合物０１）の濃度を増加した際の１４個の異なる細胞の群の成長の割合（百分率）で表す。
【図２】インビトロ系での腫瘍の成長の阻害。このグラフは、マウスに腫瘍を移植し、１５日間にわたり各種の治療を施した際における、当初の腫瘍の大きさを基準とした腫瘍の大きさの成長を表す。ひし形：溶媒対照（Ｖｅｈｉｃｌｅ、活性成分が非含有）の腹腔内投与（２日間隔の間欠投与、２ＱＤ）を受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。三角形：化合物（０１）の用量１８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（２日間隔の間欠投与、２ＱＤ）を受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。丸：タキソール（ｔａｘｏｌ）の用量８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（Ｑ３Ｄ×５、１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目に投与）を受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。クロス：化合物（０１）の用量１８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（２日間隔の間欠投与、２ＱＤ）とタキソール（ｔａｘｏｌ）の用量８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（Ｑ３Ｄ×５、１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目に投与）との組み合わせを受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。
【図３】Ｂｃｌ−ｘＬとＢＦ３との相互作用の阻害。ＢＦ８は、ＢＣＬ−２ファミリーメンバーの疎水性溝（ｈｙｒｏｐｈｏｂｉｃ ｇｒｏｏｖｅ）を標的とするペプチドアプタマーである。この写真は、本発明の化合物（０１）及び（０２）が存在及び非存在の際の、ＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質に関するウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）解析を表す。Ｃ−：コントロールペプチドアプタマー（Ｂｃｌ−ｘＬとは相互作用しない）。Ｃ＋：５％ＤＭＳＯ中においてＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質。（０２）：化合物（０２）５０μＭが溶解した５％ＤＭＳＯ中でのＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質。（０１）：化合物（０１）５０μＭが溶解した５％ＤＭＳＯ中でのＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質。
【図４】０．５μＭの化合物（０１）に誘導されたＵ９３７細胞での細胞効果の時間的経過を表す。Ｘ軸：化合物（０１）で処理された時間（時間、ｈｒ）。Ｙ軸：陽性細胞の割合（％）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に、癌、及び腫瘍の治療に用いることができる抗増殖性の特性を有する化合物、及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍は、世界中で最も広まっている疾患の１つである。患者への治療法が進歩しているにもかかわらず、薬剤は、多くのケースでは効果が乏しく、劇的な副作用に耐えさせる治療は通常困難であるし、しばしば腫瘍の影響を受けた組織や器官の外科的切除を避けられない。患者の死は、いまだに高い頻度で発生している。
【０００３】
特に、最近の腫瘍の診断及び治療の進歩にもかかわらず、依然として腫瘍細胞の進行及び転移は、腫瘍患者の発病及び死亡の大半の原因となっている。腫瘍の形成、進行、転移に寄与する機構の分子生物学的及び細胞生物学的な理解は、腫瘍研究の大きな挑戦であり、特に、腫瘍細胞の細胞増殖を抑制する機構の理解は必要とされる。
【０００４】
今日まで使用されているほとんどの抗腫瘍剤は、プログラム細胞死又はアポトーシスとして知られる細胞の自殺を引き起こすための細胞内在性の医学生物学的な経路を活性化することにより、腫瘍細胞を殺すものである。アポトーシスは、遺伝的にプログラムされた細胞死である。アポトーシスは、正常発生の過程において、細胞の数と増殖の調節にも重要である。幾つかの化学治療法剤は、アポトーシスを直接的に誘導するのではないにもかかわらず、細胞毒性薬によって損傷を受けた細胞が辿る多種の経路の最終的な部分には、共通の経路としてしばしばプログラム細胞死がある。
【０００５】
しかしながら、多くの悪性細胞は、アポトーシスの経路を調節する遺伝子の制御に欠陥を有して発生するため、このような細胞では化学療法に対する抵抗性を示す。多剤耐性遺伝子発現、化学療法剤の膜ポンプによる押し出し、腫瘍低酸素、腫瘍血管形成の減少、不都合な細胞周期動態を含む、多くのメカニズムは、従来用いられる化学療法剤の効果に対する非感受性の原因と提言されていた。化学療法効果と同様に、アポトーシスへの耐性は、腫瘍がプログラムされた老化や死を回避するメカニズムを介した別のメカニズムでもある。アポトーシスへの耐性の発達は、従来用いる化学療法剤への応答の悪化を導くことが報告されてきた。
【０００６】
細胞がアポトーシスへ入る多くの経路があるにもかかわらず、ＦａｓＬのような細胞表面の死受容体よりも、むしろ細胞カスパーゼ（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｓｐａｓｅ）のシトクロムｃ（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃ）活性化を担うミトコンドリアへの作用を介して、大多数の化学療法剤が細胞死を誘導することが明らかになっている。ＢＣＬ−２ファミリータンパク質は、ミトコンドリアによるアポトーシス恒常性の主要な調節因子である。主にフォスファチジルイノシトール３（ＰＩ３）キナーゼシステムが主に担うリン酸化イベントの相互作用、及びアポトーシス促進性（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）と抗アポトーシス性のＢＣＬ−２タンパク質との間で調整されるバランスは、細胞がプログラム細胞死へのプロセスに入るか回避するかを決定する。
【０００７】
ガン原遺伝子であるＢＣＬ−２ファミリーは、アポトーシスのきわめて重要な調節因子であり、リンパ腫を含むヒトの腫瘍において、発現が変化する。Ｂｃｌ−２は、Ｂ細胞の非ホジキンリンパ腫（ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ‘ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＮＨＬ）から、一般に認められる染色体の転位座が関与することにより、このファミリーの中で初めて同定されたメンバーである。
【０００８】
Ｂｃｌ−２ファミリーは、タンパク質の大きなファミリーであり、ＢＣＬ−２ホモロジー（ＢＨ）領域として知られる幾つかのホモロジー（相同性）のある領域を共通して有する２つのサブファミリーに大別され、第１のクラスは抗アポトーシス性のものであり、第２のクラスはアポトーシス促進性のものである。これらたんぱく質の主要な活性機構は、ミトコンドリア膜の透過性の調節であると想定されている。ＢＣＬ−２スーパーファミリーの中のアポトーシス促進性のメンバーは、ミトコンドリア膜の透過性を増加し、対して、ＢＣＬ−２スーパーファミリーの中の抗アポトーシス性のメンバーは、このミトコンドリア膜の透過性増加に対して反対の作用をする。
【０００９】
アポトーシス促進性のＢＣＬ−２ファミリーのメンバーには、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂａｄ、Ｂｃｌ−Ｘｓ、Ｂｉｄ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍ、Ｈｒｋがあり、抗アポトーシス性のＢＣＬ−２ファミリーメンバーには、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−Ｗ、Ｂｆｌ−１、Ｍｃｌ−１がある。
【００１０】
抗アポトーシス性のＢＣＬ−２ファミリーのメンバーは、シトクロム−ｃの放出をブロックすることによりアポトーシスに対するリプレッサーとして働き、対して、アポトーシス促進性のＢＣＬ−２ファミリーメンバーは、アポトーシスに対するプロモーターとして働く。ＢＣＬ−２ファミリーのメンバーが、ミトコンドリア膜の透過性を調節する幾つかの想定される機構がある。
【００１１】
ＢＣＬ−２ファミリーの抗アポトーシス性のメンバーは、染色体の転位座なしに、多くの腫瘍において過剰に発現している。抗アポトーシス性ＢＣＬ−２メンバーの発現の増加は、化学療法剤や放射線療法への耐性を引き起こし、逆に、抗アポトーシス性のＢＣＬ−２メンバーの発現の減少は、抗腫瘍剤に対するアポトーシスの応答を促進すると推察される。加えて、抗アポトーシス性メンバーのＢｃｌ−２の過剰な発現は、細胞周期のＧ０期に細胞を蓄積させ、化学療法剤耐性に寄与する。
【００１２】
抗アポトーシス性メンバーのＢＣＬ−２ファミリーの１つ、Ｂｃｌ−ｘＬに言及すると、過去に以下のことが証明された：
―Ｂｃｌ−ｘＬは主要な抗アポトーシス性のタンパク質である；
―Ｂｃｌ−ｘＬ（及び他のＢｃＬ−２様たんぱく質群）が多くの腫瘍において過剰に発現していることが観察された；
―Ｂｃｌ−ｘＬの基底レベルの発現は、多様なクラスの抗腫瘍分子に対する化学療法剤耐性と強く相関している。
【００１３】
したがって、Ｂｃｌ−ｘＬの抗アポトーシス性活性の低分子阻害剤は、単独又は既知の細胞毒性剤との組み合わせにより、広い範囲の腫瘍に対して抗腫瘍作用を発揮することが推測される。
【００１４】
それゆえ、ＢＣＬ−２ファミリータンパク質、特にＢｃＬ−ｘＬは、薬剤デザインのための魅力的な標的となる。アポトーシス性の細胞死の中枢の調節因子として、抗腫瘍作用のためにＢＣＬ−２の機能を操作する論理は、腫瘍治療のために提案される分子レベルの目標の１つである。さらに、アポトーシス性のタンパク質の発現レベルの上昇は、あらゆるタイプのヒトの腫瘍において実際に証明されている。
【００１５】
最初の試みは、ＢＣＬ−２ホモロジー（ＢＨ）ファミリー内でのタンパク質−タンパク質相互作用を乱すことが中心となった。この課題の続く進展は、分子モデリングや創薬を生んだ。
【００１６】
ＢＣＬ−２ファミリータンパク質を標的とする以下の異なる分子群は、とりわけ前臨床試験中又は臨床試験中である。
【００１７】
―ＡＢＴ−７３７（Ｏｌｔｅｒｓｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，２００５）：標的分子：ＢｃＬ−ｘＬ、ＢｃＬ−２、Ｂｃｌ−ｗ。ＡＢＴ−７３７は、小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＣＬＣ）及びリンパ様細胞（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌ）のアポトーシスを誘導し、マウスモデルにおいてＳＣＬＣの腫瘍抑制を引き起こす。
【００１８】
―ＩＰＩ−９８３Ｌ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｐｉ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ ｂｉｏ．ｈｔｍｌ）：標的分子：Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２。
【００１９】
―Ｇｏｓｓｙｐｏｌ（Ｍｏｈａｍｍａｄ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，１９９５）：標的分子：ＢＣＬ−２様タンパク質。この分子は、肺癌及び前立腺癌の細胞株の増殖をインビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において阻害することが示されている。
【００２０】
―ＧＸ１５−０７０（Ｃｏｎｔｒａｃｔｏｒ Ｒ． ｅｔ ａｌ．及びＧａｌａｎ ｅｔ ａｌ．）：標的分子：ＢＣＬ−２様タンパク質（ＢｃＬ−ｗ及びＭＣＬ−１との解離定数（Ｋｄ）は０．５ｍＭ以下）。この分子は、黒色腫、乳癌、肺癌、頸部腫瘤、前立腺癌、結腸癌の各腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている。しかしながら、この分子は低い最大耐性量（ＭＴＤ（Ｍａｘｉｍａｌ ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ｄｏｄｅ）；おおよそ１６ｍｇ／ｋｇ）である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明者等は、現在、ＢｃＬ−ｘＬを標的とする新規の潜在的な抗腫瘍分子を得ている。この分子ファミリーは、３−アリール−クマリン又は３−アクリル−キノリン−２−オンから派生するものである。本発明は、これら化合物、及びこれら化合物の治療への使用法、特に多くのタイプの腫瘍の治療への使用に関するものである。
【００２２】
本発明の構成において、以下の用語は、以下の定義に従って定められる。
【００２３】
アポトーシス（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）は、プログラム細胞死、及び細胞の規則な分解として定義される。急性の細胞障害からもたらされる細胞死である壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）とは対照的に、アポトーシスは、生体の生命周期の中で、好都合をもたらす規則的なプロセスの中で実行される。アポトーシスの主要な機能は、隣接する細胞に対してダメージ又はストレスを生じさせることなく、細胞を処分することにある。アポトーシスは、食細胞による取り込まれるアポトーシス小体へ細胞が規則的に分解されることも関係する。このアポトーシス小体の取り込みは、ネクローシスに関連した炎症反応を回避する。アポトーシスは、実施例において、実施例７にて説明する検出法を用いて検出できる。
【００２４】
抗アポトーシス性（Ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｉｃ）：アポトーシスを妨げ、減少させ、又は遅らせること。
【００２５】
アポトーシス促成性（Ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）：アポトーシスを活性化又は促進すること。
【００２６】
増殖（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）：数を多数化又は増加すること。生物学では、細胞増殖は、細胞分裂によって生じる。
【００２７】
抗増殖性（Ａｎｔｉ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）：細胞の増殖を減少させる又は遅らせること。したがって、抗増殖性の化合物による処理後、細胞数は、恒常的なままであるか、又は、非処理よりも増加速度が低い、又は、減少する。抗増殖性の活性は、細胞増抑制性の作用、細胞毒性の作用、又は、両者による。化合物の抗増殖性の活性は、実施例のパートで詳しく説明する方法に従って、試験と測定を行うことができる（実施例３Ｃを参照）。ある分子により７２時間処理した際、統計的見地での細胞数が、コントロール又は未処理と比較して有意に減少している場合、その分子が、本発明のいう抗増殖性活性を有するという。
【００２８】
細胞毒性（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ）：細胞の死をもたらすもの。ある化合物で処理して７２時間後の細胞数が、当初の細胞数よりも統計的見地から有意に減少している場合、その化合物には、細胞毒性があると考えられる。実施例２Ａの記述では、化合物の細胞毒性の活性の規定のための方法を詳しく述べている。本発明に従うと、細胞毒性の特性を有する化合物は、例えば、抗増殖性の化合物である。細胞毒性は、とりわけ壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）、又はアポトーシスにより、細胞の死を引き起こすと思われる。
【００２９】
細胞増殖抑制性（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ）：細胞分裂を阻害又は抑制するもの。本発明に従えば、細胞増殖抑制の特性を持つ化合物としては、例えば、抗増殖性化合物がある。
【００３０】
癌（Ｃａｎｃｅｒ）：未分化細胞の増殖により特徴付けられる多種の悪性な腫瘍（新生物）である。この未分化細胞は、周囲組織へ侵入や、体の新たな部位へ転位する傾向を有する。
【００３１】
抗癌性（ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ、ａｎｔｉｃａｎｃｅｒｏｕｓ）：癌の治療に効果のあること。
【００３２】
腫瘍（ｔｕｍｏｒ）：異常な細胞成長。この異常な細胞成長は、制御不能で進行性の細胞の増加、及び生理機能を果たさないことの結果として生じる。英語の別名、ｎｅｏｐｌａｓｍ。
【００３３】
抗腫瘍性（ａｎｔｉｔｕｍｏｒ、又は、ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ）：悪性腫瘍の形成への拮抗、又は抑制。抗癌性。
【００３４】
アルキル（ａｌｋｙｌ）：直鎖又は分岐鎖の炭素鎖を表し、これら炭素鎖は、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、最も好ましくは１〜５個の炭素原子を含む。低級アルキルは、１〜４個の炭素原子を含み、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、又はＣ４炭素鎖といわれる。
【００３５】
シクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）：分岐又は非分岐の飽和炭素環を表し、この飽和炭素環は、３〜２０個の炭素原子からなり、好ましくは３〜７個の炭素原子、最も好ましくは５又は６個の炭素原子からなる。前記炭素環は、任意に、１又は複数のハロ（ｈａｌｏ）、アルキル（ａｌｋｙｌ）、水酸（ｈｙｄｒｏｘｙ）、アルコキシル（ａｌｋｏｘｙ）、フェノキシ（ｐｈｅｎｏｘｙ）、ＣＦ３、アミノ（ａｍｉｎｏ）、アルキルアミノ（ａｌｋｙｌａｍｉｎｏ）、ジアルキルアミノ（ｄｉａｌｋｙｌａｍｉｎｏ）、−ＣＯＯＲ（Ｒは、水素、又はアルキル）、−ＮＯ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、により置換される。前記炭素環は、１置換または２置換であることが好ましい。シクロアルキルは、好ましくは２００個未満、又は１００個未満、よりこの好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。
【００３６】
ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）：分岐又は非分岐の飽和炭素環を表し、この炭素環は、３〜１５個の炭素原子を含み、好ましくは４〜６個の炭素原子を含む。この炭素環は、以下から選択される１〜３個のヘテロ基を挿入している。選択されるヘテロ基は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ（Ｒは、例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）２、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）２、−ＣＨＯ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリール）。ヘテロシクロアルキルは、炭素環が１又は２個のヘテロ基を挿入しているものが好ましい。ヘテロシクロアルキルは、好ましくは、２００個未満、１００個未満、より好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。好ましいヘテロシクロアルキルは、フラン（ｆｕｒａｎ）、チオフェン（ｔｈｉｏｐｈｅｎｅ）、ピロール（ｐｙｒｒｏｌｅ）、チアゾール（ｔｈｉａｚｏｌｅ）、ピラゾール（ｐｙｒｒａｚｏｌｅ）、及びオキサゾール（ｏｘａｚｏｌｅ）である。
【００３７】
アリール（ａｒｙｌ、アリールオキシ（ａｒｙｌｏｘｙ）とアラルキル（ａｒａｌｋｙｌ）のアリールモイティを含む）：６〜１５個の炭素原子を含み、少なくとも１個の芳香族環を有する炭素環基を表し、前記炭素環基は、任意に、１又複数の、ハロ、アルキル、ヘテロシクロアルキル（例えば、Ｎ−アルキル−ピペラジン（Ｎ−アルキル−ピペラジン、モルフォリン）、水酸、アルコキシ、フェノキシ、ＣＦ３、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−ＣＯＯＲ（Ｒは水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル）、ＮＯ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３、により置換される。前記炭素環基は、１置換又は２置換が好ましい。アリールは、好ましくは、２００未満、又は１００個未満、より好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。
【００３８】
ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）：酸素、硫黄、又は窒素から選ばれた少なくとも１個のヘテロ原子を有し、任意に置換されている環状基を表す。前記へテロ原子は、炭素環構造に挿入され、芳香族性を付与するために、十分な数の非局在化π電子を有する。この芳香族性複素環基は、２〜１４個の炭素原子を含むことが好ましい。この芳香族性複素環基は、任意に、アリールの定義で述べた置換基の１又は複数により置換されている。前記炭素環は、１又は２個のヘテロ原子が挿入されていることが好ましい。ヘテロアリールは、好ましくは、２００個未満、又は１００個未満、より好ましくは、６０個未満、又は４０個未満の原子を含む。
【００３９】
アラルキル（ａｒａｌｋｙｌ、アリールアルキル（ａｒａｌａｌｋｙｌ）の略）：アリール基とアルキル基の双方から構成される基を表す。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
コンピューターシュミレーションによる仮想的なスクリーニングによって、本発明者等は、Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質と相互作用する可能性のある分子を同定した。Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質は、三次元構造は知られている（Ｓｃａｔｔｌｅｒら）。この分子は、インビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及びインビボ系（ｉｎ ｖｉｖｏ）でテストし、効果的な抗増殖性剤であることが証明された。
【００４１】
特に、化合物０１と名づけた化合物は、インビトロ系において、多種のヒト癌細胞の増殖を阻害する。また、化合物０１は、マウスを用いたインビボ系での異種移植モデルにおいて、非小細胞肺癌の成長を阻害する。化合物０１を手掛かりとした最適化は、癌治療に有用な類似の特性を有する化合物０１に関連した構造の分子のファミリーの同定を可能にする。
【００４２】
化合物０１は、（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド、である。化合物０１のコア構造を保持した多数の誘導体は、今、化合物０１の有意な抗増殖性の特性を増進するため、及び薬剤として適合する目的の改良のため、本発明者によってテストされている。これら分子は、本質的に以下のコア構造を有する。
【００４３】
【化１】
【００４４】
第１の態様に従うと、本発明は、以下の一般式のうちの１つを有する化合物が包含される。
【００４５】
【化２】
【００４６】
但し、上記式（ａ），（ａ’）及び（ｂ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の置換可能な炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換され、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、そして、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｙは、Ｈ、ＣＨ３、又はＣＯ−ＣＨ３を表し、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ，ＣＣＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨ２Ｒ１６，Ｏ−ＣＨ２Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６，ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基により置換可能であって、ｐ＝０、１、２、３、４、５、又は６、そして、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個より少ない炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ３は、式（ａ）中では、Ｓ、Ｏ、又はＮＨを表し、式（ａ’）中では、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すものであって、Ｒ１０は、Ｒ９と同義であり、ｑ＝０、１、２、３、又は４であって、
Ｒ４は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１１を表すものであって、Ｒ１１は、Ｒ４と同義であり、Ｒ４の分子量は、５００Ｄａ未満であって、
さらに、
Ｒ３がＯを表すとき、Ｒは、Ｎ＊−Ｒ５、又はＯ−Ｒ５であって、Ｒ５は、Ｒ４と同義であり、Ｎ＊はＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＮＨ、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すとき、Ｒは、Ｒ６、又はＮ＊−ＣＯ−Ｒ６であって、Ｒ６はＲ４と同義であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＳを表すとき、
Ｒは、Ｎ＊−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、Ｒ１２は、Ｒ７と同義であり、ｎ＝０、１、２、３、又は４であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ８であって、−Ｒ８は、ｔ−ブチルを除く直鎖又は分岐鎖のアルキル、−Ｒ８は、−（ＣＨ２）ｓ−Ｃ４Ｈ３Ｏを表し、Ｓ＝１，２、３又は４、Ｒ８は、アルキル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、−ＯＨ、−ＣＯ−ＮＨ２、−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＯ−ＯＨ、−ＣＯ−ＯＣＨ３、もしくは−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３によりパラ位が１置換されたフェニルラジカルを表すか、又は、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ１７であって、Ｒ１７は、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１８を表すものであって、そして、Ｒ１８はＲ１７と同義であり、Ｒ１７の分子量は５００Ｄａ未満であって、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表し、Ｒ１はＯでないものである。
【００４７】
前記化合物のアルカリ及び酸付加塩、幾何異性体、光学異性体、並びにジアステレオ異性体に関しても同様である。
【００４８】
各々の置換基は、他の置換基とは独立に選択される。
【００４９】
本発明の実施形態に従えば、分子は、一般式（ａ）に表す構造を有する。
【００５０】
他の実施形態に従えば、本発明に係る分子は、一般式（ａ’）に表す構造を有する。
【００５１】
さらに、他の実施形態に従えば、本発明に係る分子は、一般式（ｂ）に表す構造を有する。
【００５２】
化合物の全分子量は、１０００Ｄａ未満であることが好ましい。化合物の全分子量は、８００Ｄａ未満がより好ましく、７００Ｄａ未満、６５０Ｄａ未満又は６００Ｄａ未満がさらに好ましい。特に、化合物は、細胞膜を通過できるものが好ましい。それゆえ、化合物の分子量は、できれば最小化する。
【００５３】
本発明の第１の態様に従えば、化合物は、抗増殖性の特性を有することが好ましく、その場合には、抗腫瘍剤として有用である。本発明に係る化合物は、腫瘍細胞、癌性細胞、又は不死化細胞の集団を主な標的とした抗増殖性の作用を有することが好ましい。腫瘍細胞、癌性細胞、又は不死化細胞の集団を主な標的とするとは、換言すると、抗増殖性（又は細胞毒性）について、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団に対する方が、正常細胞（不死化していない）の集団に対するよりも、少なくとも１０％は高い場合をいうことができる。例えば、本発明の態様に従った化合物とともに細胞の集団をインキュベートした後、正常細胞の集団よりも、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団の方が、細胞の増殖率が、１０％低下する。この正常細胞の集団と比較した腫瘍細胞又は癌性細胞の集団への作用の差は、好ましくは、少なくとも２０％、さら好ましくは、少なくとも３０％、さらには、少なくとも５０％、又はそれ以上がなお一層好ましい。
【００５４】
抗増殖性の活性は、実施例の部分に詳しく記述した方法に従って試験及び測定できる（実施例２Ｃを参照）。
【００５５】
前記化合物は、細胞毒性又はアポトーシス促進性を有することがより好ましい。このアポトーシス促進性は、腫瘍細胞に対して優先的な作用であることが好ましい。同様に、この腫瘍細胞に優先的な作用とは、細胞毒性又はアポトーシス促進性の作用に関し、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団の方が、正常細胞の集団よりも、少なくとも１０％は作用が大きいことを意味する。
【００５６】
アポトーシス促進性活性は、実施例の部分に詳しく記述した方法に従って試験及び測定できる（実施例７）。
【００５７】
本発明のこの態様により定義される化合物は、治療、予防的又は根治的処置に用いることが好ましい。
【００５８】
ここに定義された化合物は、特に癌性細胞の除去に有用であり、これらは、それゆえ、癌、白血病、又はあらゆるタイプの腫瘍の治療に大変有用である。
【００５９】
本発明の第１の態様に従う化合物は、患者に投与されることが好ましく、この患者とは、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトの患者である。それゆえ、動物に対する免疫原性を化合物に与えやすい置換基、二次的な毒性作用を起こしやすい置換基、又は最大耐量の減少しやすい置換基は、回避することが好ましい。さらには、置換基は、化合物の溶解性、特に動物の体液への溶解性を改善するために、選択されることが好ましい。
【００６０】
式（ａ）、（ａ’）、及び（ｂ）における置換基の好適なものを決定するため、下にゆくに従って重要性が低下するように分類されている次の基準を適用する：又は
―化合物全体に対して抗増殖性の活性の促進を付与する；又は
―化合物全体に対して腫瘍細胞へ正確に標的される抗増殖性の活性を付与する；
―より少ない免疫原性又は毒性を化合物に付与する；又は
―化合物全体に対してより優れた溶解性を付与する；又は
―化合物の代謝保護性（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を付与し、生物学的利用率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）又は半減期を増加する；又は
―より少ない分子量を有する。
【００６１】
本発明の構成における種々の構造では、すなわち、式（ａ）、（ａ’）、又は（ｂ）において、Ｒ１は酸素原子、又はＮＨが好ましい。
【００６２】
式（ａ）、（ａ’）、又は（ｂ）において、Ｒ１モイティの性質とは独立して、Ｒ２モイティは、メチルが好ましい。好ましくは、Ｒ１がＯであってＲ２がＣＨ３であるか、又は、Ｒ１がＮＨであってＲ２がＣＨ３である。
【００６３】
本発明のこの態様に従った化合物では、環（Ｉ）及び（ＩＩ）のうち少なくとも一方が置換されていることが好都合である。特に、この発明の構成において適している置換基は、化合物の抗増殖性の活性を増加できる置換基であり、化合物の溶解性を増加できる置換基であり、化合物の抗原活性を減少できる置換基であり、非常に重要なのは代謝保護性を化合物に付与する置換基である。このような可能性のある置換基は、熟達者には知られている。
【００６４】
環（Ｉ）単独、環（ＩＩ）単独、又は環（Ｉ）及び（ＩＩ）が置換されていることが好ましい。環（ＩＩＩ）もまた、置換されているものでもよい。環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）それぞれが、既に式（ａ）、（ａ’）、及び（ｂ）に存在する置換基に加えて、さらに１つだけ置換基が付加されることが好ましい。
【００６５】
環（Ｉ）及び（ＩＩ）の好ましい置換基としては、フッ素（Ｆ）及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９であって、（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９中、ｍ＝１、又は２であり、−（Ｒ９）は、以下の化学式に表される構造のいずれかである。
【００６６】
【化３】
【００６７】
このような置換基は、環（ＩＩＩ）にも適用できると思われる。
【００６８】
本発明の他の好ましい実施形態によると、式（ａ）、又は（ｂ）において、Ｙは、水素を表す。
【００６９】
本発明の他の好ましい実施形態によると、式（ａ）、（ａ’）、及び（ｂ）において、Ｒ１はＯ及び／又はＲ２は−ＣＨ３である。
【００７０】
他の実施形態によると、Ｒ１は、Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンであり、好ましくはＮ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンである。
【００７１】
さらに他の好ましい実施形態によると、Ｒ１６は、Ｈ、又はＣＨ３であり、最も好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである。
【００７２】
さらに他の好ましい実施形態によると、Ｒ１７は、フラン、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティであり、このケースではＲ１がＯでない。また、この実施形態では、Ｒ１７がフランモイティであることが好ましい。
【００７３】
本発明に係る好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＯであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−Ｒ５であって、但し、Ｒ５が、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、又はアリラキルであり、好ましくは、Ｒ５が、フェニル、ベンジル、又は−Ｃ６Ｈ４−Ｎ（ＣＨ３）２である。
【００７４】
本発明に係る他の好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１がＯ、−Ｒ２が−ＣＨ３、Ｒ３がＮＨ、ＹがＨ、及び−（Ｒ）が下記化学式に表す構造のいずれかであり、上記化学式中のフランモイティが、１〜４個の炭素原子を含むアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換されているものである。
【００７５】
【化４】
【００７６】
あるいは、上記式中のフランモイティが、任意に他のヘテロシクロアルキル、例えば、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティに置き換えることもでき、また、これらの構造は上述のように任意に置換される。
【００７７】
任意に、Ｒ１は、Ｏの代わりにＮＨにもできる。
【００７８】
本発明の第１の形態において、さらに他の望ましい化合物としては、式（ｂ）において、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、ＹがＨであり、−（Ｒ４）が以下の化学式に表す構造のいずれかである。
【００７９】
【化５】
【００８０】
本発明において、他の好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏ、又はＮＨであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、ＮＨであり、Ｙが、Ｈであり、−Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ６Ｈ５である。
【００８１】
本発明の構成において、好ましい他の分子は、一般式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、Ｒ２が、Ｈ、又はＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｙが、Ｈであり、Ｒが、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であり、ｎ＝０でり、−（Ｒ１２）が以下の化学式に表す構造のいずれかである。
【００８２】
【化６】
【００８３】
先の式では、任意に、Ｒ３が、Ｓの代わりに、Ｏともできる。
【００８４】
また、一般式（ａ）と同じ構造を有するさらに他の分子で、本発明の構成のうち特に好ましいものは、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２で、ｎ＝０、Ｒ１２がＣ６Ｈ５である。任意に、Ｒ３は、Ｓの代わりに、Ｏとできる。
【００８５】
他のクラスで一般式（ａ）と同じ構造の好ましい化合物としては、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−ＣＯ−Ｒ８であり、Ｒ８が−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ４Ｈ３Ｏ、又は（−Ｒ８）が以下の化学式に表す構造のものであって、下記化学式中、Ｒ１３がＣ１〜Ｃ６のアルキルである。
【００８６】
【化７】
【００８７】
これに代わるものとして、本発明に係る化合物で他の好ましい化合物としては、式（ａ）において、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２が−ＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ７で、ｎ＝１、Ｒ７が−Ｃ６Ｈ５のものである。
【００８８】
一般式（ａ’）の構造を有する本発明に係る化合物において、好ましい置換基としては、Ｒ１がＯであり、−Ｒ２がＣＨ３であり、Ｒ３がＳ−ＣＨ３であり、（−Ｒ）が下記化学式に表される構造のいずれかに該当するものであって、下記化学式中、フランモイティが、１〜４個の炭素を有するアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換される。
【００８９】
【化８】
【００９０】
これに代わるものとして、フランモイティは、他のヘテロシクロアルキル、特に、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティが上述のように任意に置換されているものに置き換えてもよい。
【００９１】
例えば、特に好ましい化合物としては、以下のものである。
【００９２】
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル−尿素；
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニルチオ尿素；
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド；
化合物０６：１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド；
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イルピリジン−３−イル）チオ尿素；
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１ Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート；
化合物１０：メチルＮ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル−）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド；
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド；
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート、
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１６：メチル Ｎ−（４−フルオロベンゾイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１８：１−［３−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン；
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素；
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素；
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン；
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド；
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素；及び、
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素。
【００９３】
第２の態様によると、本発明は、以下の一般式に表す構造を有するものに関する。
【００９４】
【化９】
【００９５】
但し、上記式（ｃ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換可能であって、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ，Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ，ＣＯＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨＲ１６，Ｏ−ＣＨ２−Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６，ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ，Ｃｌ、ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基で置換可能であって、そして、ｐ＝０、１，２、３、４、５、又は６であり、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個未満の炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ１４及びＲ１５は、独立して、分子量４００Ｄａ未満の多種の置換基であって、Ｒ１４とＲ１５は同時に酸素であることはない。
【００９６】
前記化合物は、治療に用いる。
【００９７】
本発明では、前記化合物のアルカリ及び酸付加塩、幾何異性体、光学異性体、及びジアステレオ異性体も治療に使用する。
【００９８】
各々の置換基は、他の置換基とは独立に選択される。
【００９９】
第１の態様に従った化合物のように、置換基は、化合物全体に対して抗増殖性の活性の促進を付与するためのものから選択することが好ましく、より少ない免疫原性又は毒性を化合物に付与するためのものから選択することが好ましく、化合物全体に対してより優れた溶解性（特に動物の体液への溶解性）を付与するためのものから選択することが好ましく、化合物の代謝保護性（ｍｅｔａｂｉｌｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を付与して生物学的利用率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）又は半減期を増加するためのものから選択することが好ましく、又は、化合物全体の分子量を減らすためのものから選択することが好ましい。
【０１００】
化合物の全分子量は、１０００Ｄａ未満であることが好ましい。化合物の全分子量は、８００Ｄａ未満がより好ましく、７００Ｄａ未満、６５０Ｄａ未満又は６００Ｄａ未満がさらに好ましい。特に、化合物は、細胞膜を通過できるものが好ましい。それゆえ、化合物の分子量は、できれば最小化する。
【０１０１】
このような化合物の治療における使用は、予防的又は根治的な目的である。
【０１０２】
本発明の第２の態様に従えば、化合物は、抗増殖性の特性を有することが好ましい。この化合物は、腫瘍細胞、癌性細胞、又は不死化細胞の集団を主な標的として抗増殖性（細胞増殖抑制性）の作用を有することが好ましい。例えば、細胞の集団をこの化合物に接触させた後、腫瘍細胞又は癌細胞の集団の細胞数の減少が、正常細胞の集団の細胞数の減少よりも１０％以上大きいことをいう。正常細胞の集団への作用に比較した、腫瘍細胞又は癌細胞の集団への作用の違いは、この好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、又は少なくとも５０％、あるいはそれ以上であることがなお一層好ましい。
【０１０３】
さらに好ましくは、前記化合物は、細胞毒性又はアポトーシス促進性を有する。このアポトーシス促進性は、腫瘍細胞に対して優先的な作用であることが好ましい。同様に、この腫瘍細胞に優先的な作用とは、細胞毒性又はアポトーシス促進性の作用について、腫瘍細胞又は癌性細胞の集団に対する方が、正常細胞の集団に対するよりも、少なくとも１０％は作用が強いことを意味する。
【０１０４】
好適な置換基を選択する際に適用される基準は、本発明の第１の態様と同じである。
【０１０５】
ここに定義された化合物は、癌性細胞の除去に有用であり、これらは、それゆえ、癌、白血病、又はあらゆるタイプの腫瘍の治療に大変有用である。
【０１０６】
本発明の第２の態様による化合物としては、ヒトの治療、又は獣医による治療に使用するためのものであり、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトの患者に投与するためのものである。それゆえ、動物に対する免疫原性を化合物に与えやすい置換基、二次的な毒性作用を起こしやすい置換基、又は最大耐量の減少しやすい置換基は、回避することが好ましい。好ましい患者（治療対象）は、哺乳類、特に家畜やペット、そしてヒト（小児又は成人）である。
【０１０７】
本発明の第２の態様において、別の好ましい構造としては、すなわち、式（ｃ）において、Ｒ１が好ましくは酸素原子、又はＮＨである。
【０１０８】
Ｒ１モイティとは独立に、Ｒ２モイティがメチルであることが好ましい。好ましくは、Ｒ１がＯであってＲ２がＣＨ３、又は、Ｒ１がＮＨであってＲ２がＣＨ３である。
【０１０９】
本発明のこの態様による化合物は、環（Ｉ）と環（ＩＩ）の少なくとも１つは置換されていると好都合である。本発明のこの構成において、適した置換基は、化合物の抗増殖性の活性を増加できる置換基であり、化合物の溶解性を増加できる置換基であり、化合物の抗原活性を減少できる置換基であり、非常に重要なのは代謝保護性（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を化合物に付与する置換基である。このような可能性のある置換基は、熟達者には知られている。
【０１１０】
環（Ｉ）単独、環（ＩＩ）単独、又は環（Ｉ）及び（ＩＩ）が置換されていることが好ましい。環（ＩＩＩ）もまた、置換されていてもよい。環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）それぞれが、式（ｃ）中の既に存在する置換基に加えて、１つだけ付加的な置換基を有することが好ましい。
【０１１１】
環（Ｉ）及び（ＩＩ）の置換基としては、フッ素（Ｆ）及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９であることが好ましい。（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９中、ｍ＝１、又は２であり、Ｒ９が、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、又はアリラキル、及び、好ましくは（−Ｒ９）が、下記化学式に表された構造のいずれかに該当するものである。
【０１１２】
【化１０】
【０１１３】
本発明の他の好ましい実施形態によると、Ｙは、水素を表す。
【０１１４】
本発明の他の好ましい実施形態によると、Ｒ１がＯ、及び／又はＲ２が−ＣＨ３である。
【０１１５】
本発明に係る好ましい化合物では、Ｒ１４、Ｒ１５、ＮＲ１４、及びＮＲ１５のうち少なくとも１つが、アミド、スルホンアミド、ケトン、フラン、チオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、オキサゾール、尿素、チオ尿素基、ベンジル、フェニル、アクリル、グアニジンを含む。
【０１１６】
Ｒ１４とＲ１５が異なることが好ましい。
【０１１７】
他の好ましい実施形態によれば、Ｒ１４とＲ１５のうち少なくとも１つが、Ｈ、又はＣＨ３である。
【０１１８】
一般式（ｃ）によれば、Ｒ１４及びＲ１５は、窒素と一重結合により連結することに留意したい。しかしながら、Ｒ１４及びＲ１５が、共に酸素原子でないときは、二重結合もまたありうる。
【０１１９】
Ｒ１６が，Ｈ、又はＣＨ３であることが好ましい。
【０１２０】
他の実施形態によると、Ｒ１は、Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンであり、好ましくはＮ−ＣＯ−Ｎ−メチルピペラジンである。
【０１２１】
この第２の態様の好ましい化合物は、本発明の第１の態様において例示されたものであり、換言すると、化合物０３、０４、０５、０６、０７、０８、０９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、及び２５である。
【０１２２】
本発明の第２の態様によると、他の好ましい化合物は以下のものである：
化合物０１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物０２：Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）ベンズアミド。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１２３】
以下においては、本発明に係る化合物としては、本発明の第１の態様、及び第２の態様に従った化合物を参照する。
【０１２４】
本発明は、本発明に係る化合物の塩も含まれ、例えば、塩酸塩（ｃｈｌｏｒｈｙｄｒａｔｅ ｓａｌｔｓ）、特に医薬的に許容される本発明に係る化合物の塩である。
【０１２５】
さらに、本発明には、本発明に係る化合物の代謝物も含まれ、特に生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で形成される代謝物が含まれる。さらに進んで、本発明には、本発明に係る化合物のプロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇ）も関わる。なお、ここにいうプロドラッグとは、前記化合物へ生体内で転換したものである。
【０１２６】
重要なことに、本発明に係る化合物には、本発明に係る化合物の立体異性体及び／又は互変異性も含み、これら異性体の混合物も同様に含まれることに留意する。
【０１２７】
先に述べたように、本発明に係る化合物は、細胞毒性、又は細胞増殖抑制性の特性を腫瘍細胞に対して有することが好ましい。対象として好ましい腫瘍細胞は、肺、前立腺、胸部、結腸、メラノーマ、リンパ腫、及び／又は脊髄、の腫瘍細胞である。
【０１２８】
先に述べたように、本発明に係る化合物は、水溶性であることが好ましく、多種の体液に溶解性があることが好ましい。水溶性の観点では、本発明に係る化合物は、モル濃度において５０×１０−６ ｍｏｌ／Ｌ超にて水に溶解できるものが好ましく、さらに、５００×１０−６ ｍｏｌ／Ｌ超、さらに好ましくは８００×１０−６ ｍｏｌ／Ｌ超又は約１ ｍｍｏｌ／Ｌ（言い換えれば約１×１０−３ｍｏｌ／Ｌ）超であることがなお一層好ましい。
【０１２９】
本発明の好ましい実施形態によれば、先に定義された化合物は、直接的又は間接的に、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−ｘＬと相互作用できる。本発明に係る化合物は、Ｂｃｌ−ｘＬたんぱく質に、少なくともインビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において結合し、好ましくは解離係数（Ｋｄ）が１μＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満、又はそれより少なく、例えば、２０ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満であることがなお一層好ましい。このような化合物は、特に好ましい。
【０１３０】
分子とＢｃｌ−ｘＬたんぱく質との相互作用の解離係数（Ｋｄ）を規定するために適切な方法としては、本出願の実施例に挙げられている（実施例５参照）。
【０１３１】
また、本発明は、本発明に係る化合物を含む製剤処方も包含するため、化合物の生体利用効率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）が少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも８０％、９０％、又は９５％であるとよい。
【０１３２】
また、本発明は、第１の態様、又は第２の態様に従って規定される化合物と、少なくも１つの他の活性含有物とを合わせた組成物も関連する。前記他の活性化合物は、あらゆるタイプの治療剤、例えば、抗炎症剤、又は本発明に係る化合物の副作用を緩和する（前記潜在的な副作用を減少、撤廃、又は遅延する）ものでよい。
【０１３３】
好都合なものとしては、本発明に係る化合物は、抗腫瘍剤又は化学療法剤、又は放射線療法と合わせて使用又は与えられる。特に、発明者等の観察では、本発明に係る化合物の抗癌作用は、他の抗癌性の治療薬と併用すると、増強される。本発明に係る化合物と、少なくとも２つ、３つ又はそれ以上の他の化学療法薬とを合わせた組成物は、好都合である。
【０１３４】
本発明に係る化合物と組み合わせて適用できる抗癌剤としては、例えば、タキソール（パクリタキセル）、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、レチノイン酸、タモキシフェン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、又はラパマイシンである。ただし、このリストは、すべてを挙げたものではなく、他の多種の化学療法薬を本発明に係る化合物と合わせることもできる。
【０１３５】
このような組成物として好ましいものは、本発明に係る化合物と抗増殖性の特性、言い換えると、腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性の活性、を有する他の化学療法薬とを含むものである。
【０１３６】
本発明は、上に述べたような組成物の使用も関連する。この使用は、治療中の癌、又は、その他、制御不能な進行性の細胞の増殖による組織の異常成長、又は不要なもしくは病的な持続性の細胞の増殖を治療するための対象への投与を目的とする薬剤の製造のためのものである。
【０１３７】
本発明は、本発明に係る化合物と、さらに他の活性薬剤、好ましくは他の抗腫瘍剤を含み、治療において、同時に、個別に、又は連続的に使用する混合製剤としての産生物も包含する。本発明に係る化合物及び他の抗腫瘍剤は、産生物の活性成分であることが好ましい。
【０１３８】
同時の療法のための混合製剤とは、本発明に係る化合物とさらに他の薬剤、好ましくは抗腫瘍剤とを同時に投与することを含む治療として定義される。前記化合物及び薬剤は、一緒にパッケージ化、又は２つの別々の物として同時に与えられる。
【０１３９】
連続の療法のための混合製剤とは、他の薬剤単独、この好ましくは他の抗腫瘍剤単独の投与に続く、本発明に係る化合物単独の連続的な投与、又は、この逆の順序による投与を含む治療として定義される。
【０１４０】
個別の治療のための混合製剤とは、本発明に係る化合物の投与、及び他の薬剤、好ましくは他の抗腫瘍剤の投与を含む治療として定義され、両治療は同時であるが、投与は全てを同時にされるものではない。
【０１４１】
また、本発明は、本発明に従った、還元すれば、本発明の第１の態様又は第２の態様に従った化合物と医薬的に許容可能な担体とを含む医薬組成物にも関連する。活性含有物とは反対に、医薬的に許容可能な担体とは、賦形剤であり、それ自身には治療活性が欠けているものである。医薬領域の熟達者は、選択された投与の様式に依存して、本発明の化合物と組合せられる能力を持った医薬的に許容可能な担体を定義できる。ここにおいて、多種の担体は、想定可能であり、この医薬的組成物に組み込まれうる。さらに、本発明に係る化合物は、１つ以上の担体と組み合わせることもでき、例えば、少なくとも２つ、３つ、それ以上の担体と組み合わせることも可能である。他の含有物は、本発明の係る医薬組成物に添加することもできる。この他の含有物としては、例えば、治療の観点から活性又は非活性である香味剤や色素などがある。
【０１４２】
先に述べたように、この好ましい添加含有物は、他の抗癌剤、特に抗増殖性の活性を有する抗癌剤、例えば少なくとも既に選択されているものとは別の本発明に係る化合物である。
【０１４３】
本発明の好ましい実施形態によると、医薬組成物は、本発明に係る化合物、適用できる担体、及びタキソールを含むものであるものがよい。それぞれの含有物の好ましい割合は、医薬領域の当業者によって決定できる。
【０１４４】
本発明に係る医薬組成物は、病巣内、腹腔内、筋内、又は静脈内への注射を介した投与；注入（インフュージョン、ｉｎｆｕｓｉｏｎ）を介した投与；リポソームが介在したデリバリー；局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔、眼、又は耳へのデリバリーを介した投与のためにデザインできる。
【０１４５】
投与の様式は、治療される病状に依存して決定できる。
【０１４６】
さらに、例えば固形腫瘍、転移癌への治療のために、投与の異なる様式も想定できる。
【０１４７】
本発明は、治療中の癌、又は、制御不能な進行性の細胞の増殖による組織の異常成長、又は、不要な若しくは病的な持続性の細胞の増殖、を治療する対象に投与することを目的とした薬剤の製造のための、本発明に係る化合物も包含する。
【０１４８】
治療される対象は、好ましくは、哺乳類、特にネコ、イヌ、ウマ、及びヒトである。特に、好ましい患者は、ヒトである。
【０１４９】
本発明のこの実施形態によれば、調製された薬剤は、病巣内、腹腔内、筋内、又は静脈内への注射を介した投与；注入（インフュージョン、ｉｎｆｕｓｉｏｎ）を介した投与；リポソームが介在したデリバリー；局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔、眼、又は耳へのデリバリーを介した投与、のために調製される。ただし、代替の投与様式は、想定可能である。
【０１５０】
本発明には、癌、異常な細胞増殖による特徴づけられる他の病態の治療を対象とする、同時に、個別に、又は連続的に、他の薬剤、好ましくは他の抗腫瘍剤又は化学療法剤とともに投与する目的の薬剤の製造のための本発明に係る化合物の使用も関連する。先に述べたように、本発明は、１つの他の薬剤の添加に限られず、定義したように、いくつかの異なる薬剤を組成物の中に入れることができる。
【０１５１】
適用が可能な他の抗腫瘍剤の例としては、例えば、タキソール（パクリタキセル）、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、レチノイン酸、タモキシフェン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、又はラパマイシンである。但し、このリストは、全てを列挙したわけではない。
【０１５２】
また、本発明は、本発明に係る化合物（第１又は第２の態様）と細胞との接触を含む細胞増殖の阻害のための方法にも関連する。この方法は、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）又は生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で行われるが、好ましくはインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で行われる。
【実施例】
【０１５３】
実施例１：発明に係る化合物の合成：
１．Ａ クマリン誘導体の合成：
適用される主なステップ及び条件は、以下の反応スキームに要約されている。
１Ｒ及び２Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）、及び（ｃ）中の環（Ｉ）及び（ＩＩＩ）の可能性のある置換基である。３Ｒ、６Ｒ、及び７Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）、及び（ｃ）に従った化合物を得るための可能性のある置換基を表す。
【０１５４】
【化１１】
【０１５５】
さらに具体的に述べると：
【０１５６】
【化１２】
【０１５７】
ステップ１：２−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−マロン酸ジエチルエステルの調製：
マロン酸ジエチル（２５３ｍｍｏｌ）は、室温で、ＤＭＳＯ（１４０ｍｌ）を溶媒としたＮａＨ（オイル中に６０％、シクロヘキサンにて洗浄）（２７５ｍｍｏｌ）の懸濁液へ、ゆっくりと添加した。２−クロロ−５−ニトロアニソール（１０５．５ｍｍｏｌ）の添加前に、反応液は、２０分間攪拌した。１１０℃で５時間の攪拌後、溶液は、水（１．５Ｌ）へ注ぎ、それから濃ＨＣｌを添加することにより、ｐＨ＝１へ酸性化した。この溶液は、さらに２０分間攪拌した。反応溶液は、濾過して固形物を回収し、これを水で洗浄、及び乾燥することにより、赤色固形物２７．１ｇを得た。この残留物（得られた物）は、氷冷したメタノール中で粉砕し、濾過、冷メタノールでの洗浄、及び乾燥により、１９．４ｇの目的産物を得た。
【０１５８】
ステップ２：（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸の調製：
基質（６２．３ｎｍｏｌ）（ステップ１にて調製）は、メタノール（５０ｍｌ）に溶解し、氷浴（ｉｃｅ ｂａｔｈ）中で冷却した。この溶液に、６Ｍ ＮａＯＨ（３１ｍＬ）を１５分間のうちに加え、得られた混合液をさらに５分間、０℃にて撹拌した。次いで、この反応混合液は、５０℃となるように加温し、５０℃で９０分間撹拌した。さらに、減圧下で、メタノールを除去した。残留物は、０℃まで冷却し、濃ＨＣｌを添加してｐＨ＝１に酸性化した。反応混合液は、濾過し、固形物を水で洗浄した。酢酸エチルを濾液に添加し、二層性溶液を抽出した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させて、９．４ｇの目的物を得た。
【０１５９】
ステップ３：（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸メチルエステルの調製：
基質（３９．３ｍｍｏｌ）（ステップ２にて調製）は、メタノール（４５ｍＬ）と２，２−ジメトキシプロパン（１６ｍＬ）との混合液に溶解した。クロロトリメチルシラン（０．５ｍＬ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒は、減圧下で除去した。残留物は、酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３、水、及び飽和させた含水塩化ナトリウムで洗浄した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させて、８．４ｇの有機固形物を得た。
【０１６０】
ステップ４：３−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−クロメン−２−オンの調製：
サリチルアルデヒド（２９ｎｍｏｌ）を、室温で、ピペリジン（２０ｍＬ）を溶媒とした基質（１９．５ｍｍｏｌ）（ステップ３にて調製）の溶液に加えた。この反応混合物を還流下で４時間撹拌した。反応の最後で、溶液を０℃まで冷却し、エタノールを加えた。沈殿物は、濾過し、エタノールで洗浄して、黄色粉末の表題の化合物３．６ｇを得た。
【０１６１】
ステップ５：３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オンの調製：
エタノール（４０ｍＬ）を溶媒とした基質（ステップ４にて調製）の溶液へ、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合液を、還流下で２．５時間撹拌した。溶液は、室温まで冷却し、１Ｍ ＮａＯＨを加え、１時間撹拌した。混合液は、セリット（ｃｅｌｉｔｅ）で濾過し、エタノールで洗浄した。エタノールを減圧下で除去し、得られた溶液は酢酸エチルでの抽出を３回行った。有機層は、１つにまとめ、１ＭのＮａＯＨ、水、及び飽和させた含水塩化ナトリウムで洗浄した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させて、黄色粉末２．８ｇを得た。
【０１６２】
【化１３】
【０１６３】
ステップ６：（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイルイロチアネートの調製：
３−（２−フリル）アクリル酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社より入手；７２．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解した。この溶液には、続けて塩化オキサリル（１４５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）を加えた。反応液は、室温で、１時間撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させ、トルエンと供沸した。残留物は、アセトン（５０ｍｌ）に溶解した。この溶液に対して、チオシアン酸カリウム（１４５ｍｍｏｌ）を加え、そして、この溶液をさらに３０分間撹拌した。溶媒は蒸発させ、残留物は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｆｌａｓｈ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（１００％ＤＣＮ）によって精製し、黄色オイル１０．６ｇを得た。
【０１６４】
【化１４】
【０１６５】
１．Ａ．１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド（化合物０１）
（別名：１（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オン（６ｍｍｏｌ）（ステップ５にて調製）及び（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイルイロチアネート（２４ｍｍｏｌ）（ステップ６にて調製）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解した。反応溶液は、室温で、２時間撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、エタノールに溶解し、溶液をさらに３０分間撹拌した。溶液は、濾過し、得た固形物を洗浄することにより、黄色粉末２．６ｇ（ｍｐ ２２７−２３０℃）を得た。
【０１６６】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝４４７、１００％）、ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１２．８９（ｂｒ ｓ， １ Ｈ）、１１．７２（ｂｒ ｓ， １ Ｈ）、８．０７（ｓ， １ Ｈ）、７．９３（ｓ， １ Ｈ）、７．８０−７．３０（ｍ， ８Ｈ）、 ７．０１（ｄ， Ｊ ３．５， １ Ｈ）、 ６．８２（ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）、６．７０−６．６７（ｍ， １ Ｈ）、３．７８（ｓ， ３Ｈ）。
【０１６７】
【化１５】
【０１６８】
１．Ａ．２：１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−３−［−３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−尿素塩酸塩（化合物０６塩酸塩）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オン（１２．８ｍｍｏｌ）（ステップ５にて調製）及び４−（ジメチルアミノ）フェニル イソシアネート（１５．４ｍｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３５ｍＬ）に溶解した。反応は、室温で、６日間撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、ジエチルエーテルとともに粉末化し、濾過し、固形物をジエチルエーテルで洗浄して、５．６ｇの固形物を得た。この固形物は、メタノールに溶解した。メタオールに溶かした塩化水素を、得られた混合溶液に加え、２０分間撹拌した。溶媒は、真空下で蒸発させた。得られた残留物は、ジエチルエーテルで洗浄し、淡黄色粉末５．７ｇを得た。
【０１６９】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝４３０，１００％）、ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ９．４３−９．３０（ｍ， ２Ｈ）、８．００（ｓ １Ｈ）、７．７３ （ｄ， Ｊ ７．８， １ Ｈ）、７．６５−７．３０（ｍ， ８Ｈ）、７．２５ （ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）、７．０１（ｄｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ １．７， １ Ｈ）、３．７４（ｓ， ３Ｈ）、３．１６（ｓ， ６Ｈ）。
【０１７０】
【化１６】
【０１７１】
１．Ａ．３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホンアミド（化合物１３）
（別名：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル］−アミド）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−クロメン−２−オン（５．６ｍｍｏｌ）（ステップ５にて調製）、及び２，５−ジメチル−フラン−３−スルホニルクロリド（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ社より入手；６．２ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１０ｍＬ）に溶解した。反応混合液は、室温で、１２時間撹拌した。溶液は、１ＭのＨＣｌ溶液に注ぎ、ＤＣＭにて抽出し、１ＭのＨＣｌ溶液、水、及び飽和させた含水塩化ナトリウムで洗浄した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、ジエチルエーテルともに粉末化し、濾過、ジエチルエーエルで洗浄して、ベージュ色粉末１．７ｇを得た。
【０１７２】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝ ４２６、１００％）、ＮＭＲ（２５０ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１０．４１（ｂｒ ｓ， １Ｈ）１ ７．９８（ｂｒ ｓ， １Ｈ）、７．７１（ｄｄ、Ｊ ７．７ ａｎｄ １．２， １ Ｈ）、７．６１（ｔｄ、Ｊ ８．２ ａｎｄ １．５， １ Ｈ）１ ７．４５−７．２５ （ｍ， ２Ｈ）、７．２３ （ｄ、Ｊ ８．２、１Ｈ）、６．８５（ｄ， Ｊ １．７， １ Ｈ）、６．７５（ｄｄ、Ｊ ８．２ ａｎｄ ２、 １Ｈ）、６．２６（Ｓ１ １Ｈ）１ ３．６８ （Ｓ， ３Ｈ）、２．４１ （ｓ， ３Ｈ）、２．２１（ｓ， ３Ｈ）。
【０１７３】
１．Ｂ オキソキノリン誘導体の合成：
１Ｒ及び４Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）及び（ｃ）中の環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）の可能性のある置換基である。５Ｒは、先に定義したように、式（ａ）、（ａ’）、（ｂ）及び（ｃ）に従う化合物を得るための可能性のある置換基である。
【０１７４】
適用される主なステップ及び条件は、以下の反応スキームに要約されている。
【０１７５】
【化１７】
【０１７６】
さらに具体的に述べると：
【０１７７】
【化１８】
【０１７８】
ステップ１：３−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製：
ｏ−アミノベンズアルデヒド（Ｏｒｇ． Ｓｙｎｔｈ．， ｃｏｌｌ． Ｖｏｌ． ３、５６に記述の方法に従って調製した）は、室温で、（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸メチルエステル（１５ｍｍｏｌ）（実施例１Ａのステップ３にて調製）をピペリジンに溶かした溶液（１５ｍＬ）に加えた。反応混合液は、還流下で２時間、撹拌した。反応の最後に、溶液を室温まで冷却し、エタノール（５０ｍＬ）を加えた。混合液は、３０分間撹拌し、それから０℃まで冷却した。沈殿物は、濾過し、黄色粉末として、表題の化合物２．２ｇを得た。
【０１７９】
ステップ２：３−（２−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製：
基質（７．４ｍｍｏｌ）（ステップ１にて調製）は、ＤＭＦ（２０ｍＬ）を溶媒とするＮａＨ（オイル中６０％、シクロヘキサンで洗浄）の懸濁液に、０℃にて、ゆっくり加えた。反応液は、５分間、０℃で撹拌し、ヨウ化メチル（１１．１ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間の撹拌後、溶液を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、濾過した。残留物は、ＥｔＯＡｃに溶解し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒は、減圧下で除去し、黄色固形物として、目的産物２．１ｇを得た。
【０１８０】
ステップ３：３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オンの調製：
エタノール（１００ｍｌ）を溶媒とした基質（６．８ｍｍｏｌ）（ステップ２にて調製）の溶液へ、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（３３．８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物は、還流下で２時間、撹拌した。溶媒は、減圧下で除去し、残留物を得て、これを酢酸エチルに溶解し、含水炭酸水素ナトリウムの飽和溶液、及び含水塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機層は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、減圧下で蒸発させ、黄色固形物１．９ｇを得た。
【０１８１】
１Ｂ．１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド（化合物１７）（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（１−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）の調製：
３−（４−アミノ−２−メトキシ−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−キノリン−２−オン（６．８ｍｍｏｌ）（ステップ３にて調製）、及び（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル イソチアネート（１３．７ｍｍｏｌ）（実施例１Ａのステップ６にて調製）は、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。反応液は、室温、２時間、撹拌した。溶媒は、減圧下で蒸発させた。残留物は、エタノールに溶解し、この溶液は、濾過して、黄色固形物２．２ｇを得た。
【０１８２】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋＝４６０，９９％）、ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１２．８８（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、１１．７１ （ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９５−７．８５（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ ７．７，１Ｈ），７．７０−７．５０（ｍ，４Ｈ），７．２８−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ ３．５，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ １５．５，１Ｈ），６．７０−６．６８（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．６８（Ｓ１ ３Ｈ）。
【０１８３】
１．Ｃ：メチル化条件
化合物１４は、実施例１．Ａ．１で生成された化合物（化合物０１）とＫ２ＣＯ３（２当量）、Ｍｅｌ（１．５当量）とのアセトン中の反応により生成した。反応物は、加熱し、４時間、還流した。
【０１８４】
【化１９】
【０１８５】
１．Ｄ
実施例１．Ａ、１．Ｂ、及び１．Ｃ及び適当なバリエーションの操作によって得られた本発明に係る代表的な化合物の特徴は、以下に報告する。
【０１８６】
ＬＣ＿ＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）の詳細は以下の通りである。
自動注入器：注入量が１０μｌ；
カラム：ＴＨＥＲＭＯ ＨＹＰＥＲＳＩＬ ＨＹＰＥＲＰＲＥＰ ＲＰ Ｃ１８、８μｍ、１５０Ｍ．６ｍｍ；
ＵＶ 検知装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５Ａ ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ［１９０−４００ｎｍ］；
ＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出）装置：Ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ ＥＬＳ２１００、Ｔ° ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ＝５０°Ｃ，Ｔ° ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ＝９０°Ｃ，ｇａｚ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：１．６ ＳＬＭ。
【０１８７】
【表１】
【０１８８】
【化２０】
【０１８９】
化合物０２：Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）ベンズアミド
（別名：１−ベンゾイル−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−チオ尿素）。
ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ１ＤＭＳＯ）：δ １２．７５（ｓ，１Ｈ），１１．６５（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），８．０２−７．９５（ｍ，２Ｈ）１ ７．８０−７．３５（ｍ，１０Ｈ），３．７８（Ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ ９８％（４３１，Ｍ＋１）。
【０１９０】
【化２１】
【０１９１】
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル−尿素：
淡黄色固形物。
ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ ８．８８（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．００（Ｓ１ １Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ ７．７， １Ｈ），７．６１（ｔ， Ｊ ８．５，１Ｈ），７．５２−７．４０（ｍ，８Ｈ），７．１５−６．８５（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ 純度：１００％。
【０１９２】
【化２２】
【０１９３】
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル−チオ尿素：
白色固形物。
ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ ９．９４（ｂｒ ｓ，２Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ ６．２ ａｎｄ １．２，１Ｈ）１ ７．６２（ｔｄ，Ｊ７．０ ａｎｄ １．２， １Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ ６．２，２Ｈ）；７．４５−７．２５（ｍ，６Ｈ），７．２０−７．１０（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： １００％。
【０１９４】
【化２３】
【０１９５】
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド
（別名：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ１ ＤＭＳＯ）： δ １２．６６ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １１．７０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．１５−８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．７５ （ｄ， Ｊ ８．２，１Ｈ）， ７．７０−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５０−７．３５ （ｍ， ６Ｈ）， ３．７７ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： １００％。
【０１９６】
【化２４】
【０１９７】
化合物０６：１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−尿素．塩化水素：
淡黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ９．４３−９．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ８．００ （ｓ， １Ｈ）１ ７．７３ （ｄ， Ｊ ７．８， １ Ｈ）， ７．６５−７．３０ （ｍ，８Ｈ）， ７．２５ （ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ７．０１ （ｄｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ １．７， １Ｈ）， ３．７４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１６ （ｓ， ６Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９８％。
【０１９８】
【化２５】
【０１９９】
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イル−ピリジン−３−イル）−チオ尿素：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ９．８７ （ｓ， １ Ｈ）， ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０ （ｄ， Ｊ ２．７， １ Ｈ）， ８．０１ （ｓ， １Ｈ）１ ７．７５ （ｄｄ，Ｊ ８．２ ａｎｄ ０．７， １ Ｈ）， ７．７０−７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４５−７．２５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１２ （ｄｄ， Ｊ ８．０ ａｎｄ １．５， １Ｈ）， ６．８３ （ｄ， Ｊ８．７， １ Ｈ）， ３．８０−３．６５ （ｍ， ７Ｈ）， ３．４５−３．３５ （ｍ， ４Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９２％。
【０２００】
【化２６】
【０２０１】
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート：（別名：５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニルスルファモイル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル｝。
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １０．３０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ２．０， １ Ｈ）， ７．７０ （ｄｄ， Ｊ ８．０ ａｎｄ １．５， １ Ｈ）， ７．６０ （ｔｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ １．５， １Ｈ）， ７．４５−７．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｄ， Ｊ ８．２， １ Ｈ）， ７．０３ （ｄ， Ｊ ２．０， １ Ｈ）， ６．８６ （ｄ， Ｊ ２．０， １ Ｈ）， ６．７７ （ｄｄ， Ｊ ８．２ ａｎｄ ２．０， １ Ｈ）， ３．８６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９６％。
【０２０２】
【化２７】
【０２０３】
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド。（別名：２，５−ジメチルフラン−３−スルホン酸［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−アミド）。
灰色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １０．４１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７１ （ｄ， Ｊ ７．５， １ Ｈ）， ７．６１ （ｔ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ７．４３−７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ６．８４ （ｓ， １ Ｈ）， ６．７５ （ｄ， Ｊ ８．２， １ Ｈ）， ６．２６ （ｓ， １ Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２１ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％。
【０２０４】
【化２８】
【０２０５】
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−２−メチル−イソチオ尿素）：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．２０−８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８５−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５−７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１５−７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％。
【０２０６】
【化２９】
【０２０７】
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素：
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．２０−８．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．８５−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５−７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１５−７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％。
【０２０８】
【化３０】
【０２０９】
化合物１８：１−（３−ジメチルアミノ−フェニル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−尿素．塩化水素：
灰色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．８５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ８．００ （ｓ， １Ｈ）， ７．７４ （ｄｄ， Ｊ ７．５ ａｎｄ０．７５， １ Ｈ）， ７．６１ （ｔｄ， Ｊ ７．９ ａｎｄ １．５， １ Ｈ）， ７．４５−６．９５ （ｍ， ７Ｈ）， ６．９０−６．７５ （ｍ， １ Ｈ）， ６．５０−６．３５ （ｍ， １Ｈ），３．７５ （Ｓ， ３Ｈ）， ２．９１ （ｓ， ６Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９９％。
【０２１０】
【化３１】
【０２１１】
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド。（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １２．８７ （ｓ， １ Ｈ）， １１．８４ （ｓ， １ Ｈ）， １１．７０ （ｓ， １ Ｈ）， ８．００−７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７５− ７．２２ （ｍ， ７Ｈ）， ７．１８ （ｔ， Ｊ ７．５， １ Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ３．２， １ Ｈ）１ ６．８１ （ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）， ６．７０−６．６６ （ｍ， １Ｈ）， ３．７４ （Ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９２％。
【０２１２】
【化３２】
【０２１３】
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド。
（別名：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル）−フェニル］−チオ尿素）：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １２．８８ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １１．７１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９５−７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４ （ｄ， Ｊ ７．７，１ Ｈ）， ７．７０−７．５０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２８−７．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ３．５， １ Ｈ）， ６．８２ （ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）， ６．７０−６．６８ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９３％。
【０２１４】
【化３３】
【０２１５】
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン：
灰色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ３）： δ ８．０６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．８５−６．９５ （ｍ， ９Ｈ）， ６．８０−６．７５ （ｍ， １Ｈ）， ６．６０−６．５５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３１ （ｄ， Ｊ １５．５， １ Ｈ）， ３．７９ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ３．５６ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９９％。
【０２１６】
【化３４】
【０２１７】
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素：
黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ９．７０ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ７．９９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７３ （ｄ， Ｊ ７．７， １ Ｈ）， ７．６１ （ｔ， Ｊ ７．２， １ Ｈ），７．４５−７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１０ （ｄｄ， Ｊ ８．５ ａｎｄ １．７， １ Ｈ）， ６．９１ （ｄ， Ｊ ８．７， ２Ｈ）１ ３．７５−３．６５ （ｍ， ７Ｈ）， ３．１０−３．３．０５ （ｍ， ４Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９３％。
【０２１８】
【化３５】
【０２１９】
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素：
淡黄色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １２．８７ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １１．７０ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ７．９５−７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．９０−７．５５ （ｍ， ５Ｈ）， ７．２０−７．１０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０１ （ｄ， Ｊ ３．５， １Ｈ）， ６．８２ （ｄ， Ｊ １５．７， １ Ｈ）， ６．７０−６．６０ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９５ （ｔ， Ｊ ５．２， １Ｈ）， ４．３７ （ｔ， Ｊ ６．５， ２Ｈ）， ３．８０−３．６０ （ｍ， ５Ｈ）． ＬＣ−ＭＳ 純度： ９７％
【０２２０】
【化３６】
【０２２１】
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン：
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １１．８２ （ｓ， １ Ｈ）， ９．４０ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ８．１７−８．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６６（ｄ， Ｊ ８．０， １ Ｈ）， ７．６０−７．２５ （ｍ， ８Ｈ）， ７．２０ （ｔ， Ｊ ７．５， １Ｈ）１ ７．０２ （ｄ， Ｊ ６．７， １ Ｈ）１ ３．７７ （ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９３％。
【０２２２】
【化３７】
【０２２３】
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド：
白色泡沫。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ３）： δ ７．８３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６５−７．４５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４５−７．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９５−６．７０ （ｍ，２Ｈ）， ６．２６ （Ｓ， １ Ｈ）， ３．８５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．５７ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０１ （ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ８６％。
【０２２４】
【化３８】
【０２２５】
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素：
黄色泡沫。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ ８．０２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）１ ７．８５ （ｂｒ Ｓ１ １ Ｈ）， ７．７２ （ｄ， Ｊ ８．２， １ Ｈ）１ ７．６１ （ｔ， Ｊ ７．５， １Ｈ）， ７．４５−７．２０ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ６．７０−６．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ３．０５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ２．５５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）。 ＬＣ−ＭＳ 純度： ９８％。
【０２２６】
【化３９】
【０２２７】
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド。
（別名：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−グアニジン）。
白色固形物：
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ１ ＣＤＣＩ３）： δ ８．１７−８．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６０−７．２０ （ｍ， ８Ｈ）， ６．８５−６．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７３ （Ｓ， ３Ｈ）． ＬＣ−ＭＳ 純度： １００％。
【０２２８】
【化４０】
【０２２９】
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド。
（別名：Ｎ−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−グアニジン）
白色固形物。
ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）： δ １１．８２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， １０．９３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ９．１３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）１ ８．０３ （ｓ， １Ｈ）１ ７．９６（ｓ， １ Ｈ）１ ７．７９ （ｄ， Ｊ ７．７， １ Ｈ）１ ７．７０−７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５−７．３５ （ｍ， ３Ｈ）１ ７．１９ （ｄ， Ｊ １．０， １ Ｈ）１ ７．１５−７．００（ｍ， ２Ｈ）１ ６．８０−６．６０ （ｍ， ２Ｈ）１ ３．７９ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ 純度： ９５％。
【０２３０】
実施例２．インビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での増殖／生存、及び細胞周期の特定のための試験：
２Ａ．ヨウ化プロピジウム染色（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ）（細胞毒性試験）
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）は、正常では細胞膜を通過できない。そのため、生存細胞は排除されるが、損傷を受けた細胞膜を有して死につつある細胞又は死んだ細胞では、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）が、核酸二重鎖に挿入され、波長４８８ｎｍの光線照射時に蛍光を発する。
【０２３１】
化合物の細胞毒性を決定するため、２×１０５個の細胞を化合物と共にインキュベートした。このインキュベートは、時間（ｈｒ）単位から日（ｄａｙ）単位の範囲で行い、その後、細胞を回収した。この細胞の回収は、細胞が懸濁液中で培養されていれば簡単にピペッティングにより行い、又は、接着細胞をマイルドなトリプシン処理した後に行った。細胞は、１２００ｒｐｍで５分間の緩やかな遠心分離を４℃にて行うことによりペレットとし、それから上精を捨て、新しい培養液１ｍＬ加えることにより培養液を入れ換えた。ＦＡＣＳチューブ中において、１００μＬのヨウ化ピロピジウムを４００μＬの細胞懸濁液に加え、生存率をフローサイトメトリーによって測定した。ＦＬ−３チャンネルで０及び２の間を含む蛍光記録を示す細胞の割合（百分率）を測定した。
【０２３２】
２Ｂ．細胞周期分析：
化合物の細胞増殖抑制性の決定のため、２×１０５個の細胞を化合物と共にインキュベートした。このインキュベートは、時間（ｈｒ）単位から日（ｄａｙ）単位の範囲で行い、その後、細胞を回収した。細胞は、１２００ｒｐｍで５分間の緩やかな遠心分離を４℃で行うことによりペレットとし、それから上精を捨て、細胞は、１ｍＬの７０％エタノール／ＰＢＳにより、−２０℃で固定した。その後、チューブは、１２００ｒｐｍで５分間の遠心分離を行い、上清を除いた。それから、ペレットは、４５０μＬのＰＢＳに再懸濁し、次いで、５０μＬのＲＮａｓｅ（１ｍｇ／ｍＬ）、及び５μＬのヨウ化ピロピジウムを加えた。各チューブは、３７℃で３０分間静置してインキュベートした後、直ちにフローサイトメトリーで分析した。
【０２３３】
バイパラメトリックドットプロット（ｂｉｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｄｏｔ ｐｌｏｔ）は、ＦＬ３ピーク対ＦＬ３整数をプロットし、対角線上に位置する細胞をゲーティングして、ＦＬ３ピークの機能として細胞数を表すヒストグラムを解析した。細胞周期のサブＧ１期、Ｇ１期、Ｓ期、又はＧ２期における細胞の相対比率を規定する基準点（カーソル）の相対的位置を算出するため、Ｇ１期及びＧ２期のピークを、最初に規定した：
Ｇ１期のピークは、未処理でのメジャーピークとして規定した（一般にＸ＝２００）；
Ｇ２期のピークは、Ｇ１ピークの値の２倍の値を中心に置いた（一般にＸ＝４００）。
サブＧ１期の細胞は、Ｇ１期のピークに先立つヒストグラムのパートにプロットされた（一般にＸ＜２００）。そして、Ｓ期の細胞は、Ｇ１期とＧ２のピークの間の領域の中に収まった。以上から、このグラフ上において、細胞周期のサブＧ１期、Ｇ１期、Ｓ期、及びＳ／Ｍ期が規定された。
【０２３４】
２Ｃ．増殖試験；（ＶｉａＬｉｇｈｔ(R) ＨＳ Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｋｉｔ）：
この方法では、化合物の細胞増殖抑制性及び細胞毒性の活性を決定できる。この試験は、細胞培養系の哺乳類細胞に対して、基本的に製造業者が推奨するものに従って実施した。
【０２３５】
細胞は、１５ｍＬの各培養液に懸濁し、細胞数を数えた。細胞は、以下のものが得られるように希釈を行った：
―ＭＲＣ５細胞の場合、１ウェル当り、培養液９０μＬ中、２５００個の細胞となるようにした；
―他の細胞株の場合、１ウェル当り、培養液９０μＬ中、５０００個の細胞となるようにした。
【０２３６】
次いで、細胞は、９６ウェルの細胞培養用プレートにまき、少なくとも４時間、３７℃、５％ＣＯ２に設定したインキュベータに配置してインキュベートした。
【０２３７】
試験対象の分子は、ＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭへ以下の希釈率となるように希釈した：
―２５０μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―５０μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―１０μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―２μＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―４００ｎＭの分子／１％ＤＭＳＯ；
―８０ｎＭの分子／１％ＤＭＳＯ。
【０２３８】
９０μＬの細胞懸濁液が含まれる各ウェルに対し、１０μＬの試験する化合物の溶液を、上述の６つの異なる条件にて添加した。次いで、細胞培養用プレートは、７２時間インキュベートした。コントロール用の細胞培養用プレートには、１０μＬの１％ＤＭＳＯを含有したＤＭＥＭで化合物を含有しないものを用いた。その後、５０μＬの溶解バッファー（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）をコントロール用の細胞培養用プレートの各ウェルに加え、フード（ｈｏｏｄ）下で１０分間インキュベートした。
【０２３９】
続いて、１００μＬのテストバッファー（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｔｅｓｔ ｂｕｆｆｅｒ）をコントロール用の細胞培養用プレートの各ウェルに加え、２分間インキュベートした。発光は、ウェル毎に検出した。各種細胞の発光の平均は、Ｔ０と称した。
【０２４０】
７２時間のインキュベート後、生存率を決定するため、５０μＬの溶解バッファー（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を細胞培養用プレートの各ウェルへ加え、フード（ｈｏｏｄ）下で、プレートを１０分間インキュベートした。
【０２４１】
その後、１００μＬのテストバッファー（ｔｅｓｔ ｖｉａｌｉｇｈｔ(R) ｔｅｓｔ ｂｕｆｆｅｒ）を各ウェルに加え、細胞培養用プレートを２分間インキュベートした。発光は、ウェル毎に検出した。各種の細胞について、化合物を含有しないウェルの発光の平均は、Ｃ７２と称し、試験する化合物を含有するウェルの発光の平均は、Ｔ７２と称した。各希釈（試験する化合物の濃度）に対して、Ｔ０及びＴ７２の値を比較した。
【０２４２】
Ｔ７２が、Ｔ０よりも高い、又は同じ場合、以下の式が、成長率（増殖率）を決定するためのものとして適用される。
Ｙ＝Ｇｒｏｗｔｈ（％）＝（Ｔ７２−Ｔ０）／（Ｃ７２−Ｔ０）×１００
【０２４３】
Ｔ７２が、Ｔ０よりも低い場合、以下の式が、致死率を決定するためのものとして適用される。
Ｙ＝ＬＣ（％）＝（Ｔ７２−Ｔ０）／Ｔ０×１００
【０２４４】
グラフは、化合物の種々の濃度に対してプロットされた。
【０２４５】
ＧＩ５０は、（５０％の成長阻害）が決定され、これは、５０％の細胞成長（細胞増殖）を生じる用量である（Ｙ＝５０での交点）。
【０２４６】
ＴＧＩ（全成長阻害）は、グラフ上で決定され、細胞増殖の全てが阻まれる用量である（Ｙ＝０での交点）。
【０２４７】
ＬＣ５０（５０％の致死濃度）は、５０％の細胞が致死する用量である（Ｙ＝−５０での交点）。
【０２４８】
実施例３．インビトロ系（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での化合物０１による細胞増殖の阻害：
本発明に係る化合物、化合物（０１）：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド、の細胞増殖への作用を、種々の濃度にて、種々の細胞を用いて試験した。この種々の細胞とは、すなわち、ＭＲＣ５（ｎｏｒｍａｌ ｎｏｎ−ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ、正常非形質転換肺繊維芽細胞）、Ｈ１４６（肺小細胞癌）、Ｈ６９（肺小細胞癌）、Ｈ６９ＡＲ（肺小細胞癌、アドリアマイシン抵抗性（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ））、Ｕ９３７（組織球性リンパ腫）、ＢＬ４１（バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ））、Ｖａｌ（リンパ腫）、ＲＳ４−１１（急性リンパ性白血病（ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋａｅｍｉａ））、Ｈ４６０（非小細胞肺癌）、ＰＣ３（前立腺癌）、ＭＤＡ２３１（乳房上皮癌（ｂｒｅａｓｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））、Ｌｏｖｏ（結腸直腸腺癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））、及び、Ａ３７５（メラノーマ）である。方法は、実施例２Ｃに詳しく述べる。
【０２４９】
結果は、図１Ａ及び１Ｂに表した。
【０２５０】
細胞成長の負の割合（百分率）の値は、抗細胞増殖抑制性の作用の加え、細胞毒性の作用を示す。
【０２５１】
結論として、化合物（０１）は、肺、前立腺、乳房、結腸、メラノーマ、及び骨髄の腫瘍細胞に成長（増殖）を、ＩＣ５０が５０ｎＭから１μＭの範囲にて、阻害することが見られた。生存率及び細胞周期プロファイルは、５００ｎＭの化合物（０１）で試験した。
【０２５２】
【表２】
【０２５３】
結論として、化合物（０１）（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）は、リンパ系腫瘍及び骨髄腫瘍の細胞に対して、アポトーシス性の細胞周期プロファイルを生じさせ、細胞毒性の作用を有する。また、化合物（０１）は、前立腺及び肺の腫瘍細胞には、有糸分裂へ移行する時期の細胞周期を停止させる細胞増殖抑制性を有する。なお、この実験において、コントロールの非形質転換細胞（ＭＲＣ５）は、化合物（０１）と接触しても影響が及ばなかった。
【０２５４】
実施例４．インビボ系（ｉｎ ｖｉｖｏ）での腫瘍成長の阻害：
この実験のため、Ｓｗｉｓｓ系統のヌードマウス（Ｓｗｉｓｓ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）には、５×１０６個の肺癌細胞ＮＣＬ−Ｈ４６０細胞（ＮＳＣＬＣ）を、皮下へ異種移植（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）した。処理当初の腫瘍の大きさに対する腫瘍の大きさの成長の割合（百分率（％））を、１５日間にわたり４種の処理を受けたそれぞれのマウス（１種の処理の群当たり１２匹のマウス）についてプロットした。
【０２５５】
第１の処理は、コントロールに相当する。この処理では、マウスは、溶媒対照（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を腹腔内へ２日間隔で与えた（２ＱＤ）。溶媒対照（Ｖｅｈｉｃｌｅ）の組成は、１０％ＤＭＳＯ；１０％ＰＥＧ−４００；３０％（エタノール／Ｃｒｅｍｏｒｈｏｒ（１／２））；５０％滅菌水、とした。
【０２５６】
第２の処理は、本発明の係る化合物である化合物（０１）を投与量１８ｍｇ／ｋｇにて２日間隔で投与した（２ＱＤ）。
【０２５７】
第３の処理は、タキソールを投与量８ｍｇ／にて間欠投与（Ｑ３Ｄ×５；１日目；４日目；７日目；１０日目；１３日目）するものに相当する。
【０２５８】
第４の処理は、化合物（０１）の投与量１８ｍｇ／ｋｇの投与（２ＱＤ）とタキソールの投与量８ｍｇ／ｋｇの投与（Ｑ３Ｄ×５）とを組み合わせたものに相当する。
【０２５９】
結果は、図２に表す。
【０２６０】
化合物（０１）（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）は、異種移植モデルにおいて、攻撃性の肺腫瘍の成長を阻害することが結論づけられた。また、腫瘍の成長を減少させる化合物の作用は、他の抗腫瘍剤との組み合わせ、特にタキソールとの組合せにより、亢進されることが観察された。また、この阻害は、用量依存的に生じることが観察された。
【０２６１】
実施例５．化合物（０１）のＢｃｌ−ｘＬへの直接的な結合の蛍光阻害（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）による決定：
実験は、蛍光分光計（ＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ ８０００Ｃ ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ）を用い、２ｎｍ及び４ｎｍそれぞれのスペクトルバンド幅において、励起と放出を行った。
【０２６２】
０．５μＭの精製された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ＸＬは、２５℃にて１．２ｍＬの事前に平衡化された以下の緩衝液によって希釈した。この緩衝液は、１０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ， ｐＨ＝ ７．４；１００ ｍＭ ＮａＣＩ；１ ｍＭ β−メルカプトエタノール、及び１０％グリセロール、という組成とした。
【０２６３】
蛍光の測定は、１００％ＤＭＳＯを溶媒として、１００ｎＭから７．５μＭまで化合物（０１）の濃度を増加させながら実施した。
【０２６４】
Ｂｃｌ−ｘＬのトリプトファン内在性の蛍光は、２９５ｎｍの励起光に対する３１０〜３９０ｎｍの放出光の検出によって測定された。化合物（０１）の結合は、化合物（０１）の濃度の増加に伴う蛍光の増加によって観察された。内部フィルター効果（ｉｎｎｅｒｆｉｌｔｅｒ ｅｆｆｅｃｔ）の補正及びＤＭＯＳＯの希釈は、ＮＡＴＡ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｔｒｙｐｔｏｐｈａｎａｍｉｄｅ）を用いて決定した。全てのスペクトルでは、緩衝液の作用及び希釈を補正した。曲線適合は、Ｇｒａｆｉｔ（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用い、蛍光の増加に対する以下の方程式により実施した。
【０２６５】
Ｆ＝Ｆｍｉｎ＋｛（Ｆｍａｘ−Ｆｍｉｎ）［（Ｅｔ＋Ｌ＋Ｋｄ）−（（Ｅｔ＋Ｌ＋Ｋｄ）２−４ＥｔＬ）１／２］｝／２Ｅｔ
【０２６６】
但し、
Ｆ＝相対的蛍光強度、Ｆｍｉｎ＝滴定開始時の蛍光強度；
Ｆｍａｘ＝化合物（０１）濃度の飽和時の蛍光（リガンド（Ｌｉｇａｎｄ）＝Ｌ）；
Ｅｔ＝６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬの全濃度；
Ｋｄ＝６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ／化合物（０１）複合体の見掛けの解離定数
【０２６７】
実施例６．小分子のプルダウンアッセイ（Ｐｕｌｌ ｄｏｗｎ ａｓｓａｙ）：
ペプチドアプタマー（ＢＦ８と呼ぶ）は、ＢＣＬ−２ファミリーのメンバーである抗アポトーシス性たんぱく質Ｂｆｌ１に対して選択された。ＢＦ８は、Ｂｃｌ−ｘＬが属するＢＣＬ−２ファミリーの他のメンバーとの相互作用も示された。以下の２つの根拠は、ＢＦ８が、抗アポトーシス性ＢＣＬ−２様たんぱく質の疎水性溝（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｇｒｏｏｖｅ）に結合することを示す。第１に、可変部位のアミノ酸配列は、ＢＣＬ−２ファミリーのアポトーシス促進性のメンバーのＢＨ３ドメインの配列との類似性を持つ。ＢＣＬ−２ファミリーのアポトーシス促進性のメンバーは、Ｂａｋ又はＢａｘのようなものであり、この疎水性溝を介して抗アポトーシス性のたんぱく質と結合することが知られる。第２に、ＢＦ８は、前記疎水性溝内にアミノ酸置換を有するＢｆｌ−１の変異型にはもはや結合しない。
【０２６８】
Ｂｃｌ−ｘＬ／ＢＦ８インビトロ相互作用アッセイは、ペプチドアプタマーとの競合によって、本発明に係る化合物が、この結合を崩す能力を有するのか検証するために開発した。６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ及びＧＳＴ−ＢＦ８の組換え融合タンパク質は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に発現させ、アフニティークロマトグラフィーを用いて精製した。ＧＳＴ−ＢＦ８融合タンパク質（又はＧＳＴ−コントロールアプタマー融合タンパク質）は、グルタチオン−セファロース固相と結合させ、各種の分子の存在下において、溶解性の６×６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬをこの固相に加えた。固相に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ分子は、抗６×Ｈｉｓ抗体を用いて、ウェスタンブロット実験により検出した。
【０２６９】
方法の詳細は、以下に示す。
【０２７０】
（１）事前にリンスした２５μＬのグルタチオン−セファロースビーズは、１０μｇの精製されたＧＳＴ−ＢＦ８融合タンパク質を含有するプルダウンバッファー（ｐｕｌｌ ｄｏｗｎ ｂｕｆｆｅｒ）（５ＯｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ，ｐＨ＝８．０； １０ＯｍＭ ＮａＣＩ； １ｍＭ ＤＴＴ ｅｔ ０，０１％ Ｔｗｅｅｎ２０）と混合した。混合液は、室温で、３０分間インキュベートした。
【０２７１】
（２）ビーズは、遠心分離と１ｍＬのプルダウンバッファーによる希釈とによる洗浄を行った。その後、ビーズは、遠心分離し、上清を除くことにより、回収した。
【０２７２】
（３）４℃で２時間のプレインキュベートした５％ＤＭＳＯ及び化合物（５０μＭ）を含有するプルダウンバッファーへ、０．５μｇの精製された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質を添加した。この混合液は、コンスタントな攪拌下、２時間インキュベートした。
【０２７３】
（４）その後、ビーズは、濃縮と１ｍＬのプルダウンバッファーによる希釈とを３回繰り返すことにより洗浄した。
【０２７４】
（５）ビーズを回収し、上清を除き、ビーズは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ用の１×Ｌａｅｍｌｉ ｂｕｆｆｅｒ（０．２５ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ， ｐＨ＝ ６．８； ５ ％ ＳＤＳ； ０．０２５ ％ ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ ｂｌｕｅ； ０．６ Ｍ β−メルカプトエタノール、及び １０％グリセロール）に再び懸濁した。この混合液は、１００℃で１０分間加熱し、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２７５】
（６）ウェスタンブロット分析は、抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて行った。
【０２７６】
図３に示す結果から、化合物（０１）（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）、及び、化合物（０２）（（Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル］フェニル｝アミノ）カルボノチオイル）ベンズアミド）は、インビトロ系での６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬとＧＳＴ−ＢＦ８との相互作用を阻害することが、結論づけられた。
【０２７７】
実施例７．アポトーシス：
アポトーシスの誘導（ＢＣＬ−２様たんぱく質への標的から想定される）により引き起こされる本発明に係る化合物の細胞毒性の活性を証明するため、アポトーシスを特異的に検出する３種の異なるアッセイを、化合物（０１）で２４時間にわたり処理したＵ９３７細胞を用いて実施した。活性化カスパーゼ３（Ｃａｓｐａｓｅ ３）及びホスファチジルセリンの細胞膜外層への露出を示す細胞の割合（百分率比（％））をフローサイトメトリーによって決定した。両アッセイは、アポトーシスの初期マーカーを検出できる。サブＧ１期のＤＮＡ含量を示す細胞の割合（百分率比（％））もまたフローサイトメトリーによって決定した。このＤＮＡ含量は、アポトーシスのマーカーとして古典的に用いられている。図４に示す実験において、Ｇ２／Ｍ期のＤＮＡ含量を示す細胞の割合（百分率比（％））も決定した。最後に、この同じ実験において、死細胞の割合（百分率比（％））を、ヨウ化プロピジンの取り込みにより決定した。
【０２７８】
方法の詳細は、以下に示す。
【０２７９】
細胞培養及び化合物（０１）処理：
ヒト組織球性リンパ腫のＵ９３７細胞は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ ８５０１１４４０）より入手し、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ｈｅａｔ ｄｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）、１００ＵＩ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、及び２ｍＭ グルタマックスＩ（ｇｌｔａｍａｘ Ｉ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培養液に懸濁して維持した。
【０２８０】
化合物（０１）を添加する１２時間前に、Ｕ９７３細胞は、１２ウェルの細胞培養用プレートに細胞密度が（５×１０５細胞数／９００μＬ培養液）となるようにまいた。
【０２８１】
細胞には、４〜２４時間までの間の多種の処理時間での１００μＬの５μＭ 化合物（０１）／１％ＤＭＳＯ（最終濃度 ０．５μＭ／０．１％ＤＭＳＯ）による処理、又はＤＭＳＯ単独による１０時間及び２４時間の処理（それぞれコントロール１及びコントロール２）を行った。
【０２８２】
４、６、８、１０時間インキュベーションのウェル、及びコントロール１のウェルは、１日目に分析した。
【０２８３】
１２、１４、１６、２０、２４時間インキュベーションのウェル、及びコントロール２のウェルは、２日目に分析した。
【０２８４】
Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ結合分析及びヨウ化プロピジン（ＰＩ）染色は、Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ ＦＩＴＣキット（ＩＭ３５４６．； Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ； Ｖｉｌｌｅｐｉｎｔｅ）を用いたフローサイトメトリーを製造者の説明に従って実施した。
【０２８５】
５×１０５個の細胞は、１６００ｒｐｍで４℃の遠心分離によって素早くペレットとし、１μＬのＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ、５μＬのＰＩ（２５０μｇ／ｍＬ）、及び１００μＬの氷冷１×Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒを混合した液に再懸濁した。氷上で暗闇にて１５分間インキュベートした後、４００μＬの１×ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを添加し、調製した細胞をフローサイトメトリーで分析した。
【０２８６】
カスパーゼ−３，７（Ｃａｓｐａｓｅ−３，７）の活性の分析は、ＣａｓｐｇｌｏｗTM ｋｉｔ（Ｋ−１８３／ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ； Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ）を製造者の説明に従って使用したフローサイトメトリーにより実施した。
【０２８７】
５×１０５個の細胞は、１６００ｒｐｍで４℃の遠心分離によって素早くペレットとし、３００μＬの細胞培養液に再懸濁した。１μＬのＦＩＴＣ−ＤＥＶＤ−ＦＭＫを各チューブに添加し、３７℃、５％ＣＯ２に設定したインキュベータ中に３０分間静置した。細胞は、２度遠心分離（３０００ｒｐｍ／５分間）し、０．５ｍＬのＷａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄した後、３００μＬのＷａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒに再懸濁し、フローサイトメトリー分析まで氷上においた。
【０２８８】
フローサイトメトリー：
全ての実験は、空冷アルゴンイオンレザー４８８ｎｍが設定されたＣｙｔｏｍｉｃｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ ５００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施した。全ての分析は、ＣＸＰ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて行った。
【０２８９】
各データポイントに対し、最小で２００００細胞を分析した。
【０２９０】
カスパーゼ３，７の活性及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖの結合は、ＦＬ−１チャンネルを用いて定量化し、ＰＩ染色は、ＦＬ−４チャンネルを用いて定量化した。
【０２９１】
細胞周期分析は、先に記述したように、実施した。
【０２９２】
ここに示す結果及び図４から、化合物（０１）（（（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド）は、Ｕ９７３細胞に対する細胞増殖抑制性の作用を発揮し（細胞周期のＧ２／Ｍ期中の細胞群の初期の増加により判明）、及び、アポトーシスを誘導する（活性化カスパーゼ３、ホスファチジルセリンの膜への露出、及びサブＧ１期のＤＮＡ含量を示す細胞の割合（百分率比（％））の漸増により判明）ことが結論づけることができる。
【０２９３】
実施例８．増殖試験：
実施例２Ｃに記述した方法に従い、本発明に従う種々の化合物について、細胞培養系における哺乳類細胞（特にＵ９３７細胞）に対する細胞増殖抑制性及び細胞毒性の活性をテストした。
【０２９４】
ＧＩ５０（５０％の成長阻害）は、以下の全ての化合物に決定した。ＧＩ５０は、換言すると、５０％の細胞成長阻害を生じる化合物の用量である。
【０２９５】
得られた結果は、以下の表に示す。ＧＩ５０が数値範囲の形式で表中に与えられている場合、多数回の実験が実施され、その結果がこの数値範囲内に現れたことを意味する。そうでない場合、個別の実験の結果が表中に与えられている。
【０２９６】
【表３】
【０２９７】
【表４】
【０２９８】
【表５】
【０２９９】
［参考文献］
Ｃｏｎｔｒａｃｔｏｒ Ｒ， Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ Ｍ， Ｓａｍｕｄｉｏ Ｉ１ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｃｌ−２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＢＨ３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＧＸ１５−０７０ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｉｎ ＡＭＬ． Ｂｌｏｏｄ ． ２００５；１０６：９４２ａ， ａｂｓｔｒａｃｔ ＊ ３３７２．
【０３００】
Ｇａｌａｎ ＰＰ， Ｒｏｕｅ Ｇ， Ｂｉｌｌａｍｏｒ Ｎ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｐａｎ＝Ｂｃｌ−２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＧＸ１５−０７０ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎ ｍａｎｔｌｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ （ＭＣＬ） ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ａ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ （Ｖｅｌｃａｄｅ(R)）． Ｂｌｏｏｄ． ２００５； １０６：４２９ａ， ａｂｓｔｒａｃｔ ＃１４９０．
【０３０１】
Ｍｏｈａｍｍａｄ ＲＭ１ Ｗａｎｇ Ｓ， Ａｂｏｕｋａｍｅｅｌ Ａ， Ｃｈｅｎ Ｂ１ Ｗｕ Ｘ１ Ｃｈｅｎ Ｊ， Ａｌ−Ｋａｔｉｂ Ａ． Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ａ ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃ ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｂｃｌ−２ ａｎｄ ＢｃＩ−Ｘ（Ｌ） ［（−）−ｇｏｓｓｙｐｏｌ］ ａｇａｉｎｓｔ ｄｉｆｆｕｓｅ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ． ＭｏＩ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ． ２００５ Ｊａｎ；４（１）： １３−２１．
【０３０２】
Ｏｌｔｅｒｓｄｏｒｆ Ｔ． ｅｔ ａｌ． Ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｂｃｌ−２ ｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ． Ｎａｔｕｒｅ． ２００５； ４３５ （７０４２）： ６７７−８１．
【０３０３】
Ｓａｔｔｌｅｒ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｂｃｌ−ｘＬ−Ｂａｋ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐｌｅｘ： ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ． Ｓｉｃｅｎｃｅ． １９９７； ２７５ （５３０２）： ９８３−９８６．
【図面の簡単な説明】
【０３０４】
【図１Ａ】インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での細胞増殖の阻害。このグラフは、本発明の化合物（化合物０１）の濃度を増加した際の１４個の異なる細胞の群の成長の割合（百分率）で表す。
【図１Ｂ】インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での細胞増殖の阻害。このグラフは、本発明の化合物（化合物０１）の濃度を増加した際の１４個の異なる細胞の群の成長の割合（百分率）で表す。
【図２】インビトロ系での腫瘍の成長の阻害。このグラフは、マウスに腫瘍を移植し、１５日間にわたり各種の治療を施した際における、当初の腫瘍の大きさを基準とした腫瘍の大きさの成長を表す。ひし形：溶媒対照（Ｖｅｈｉｃｌｅ、活性成分が非含有）の腹腔内投与（２日間隔の間欠投与、２ＱＤ）を受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。三角形：化合物（０１）の用量１８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（２日間隔の間欠投与、２ＱＤ）を受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。丸：タキソール（ｔａｘｏｌ）の用量８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（Ｑ３Ｄ×５、１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目に投与）を受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。クロス：化合物（０１）の用量１８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（２日間隔の間欠投与、２ＱＤ）とタキソール（ｔａｘｏｌ）の用量８ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与（Ｑ３Ｄ×５、１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目に投与）との組み合わせを受けたマウスより回収し、測定した腫瘍の成長の推移。
【図３】Ｂｃｌ−ｘＬとＢＦ３との相互作用の阻害。ＢＦ８は、ＢＣＬ−２ファミリーメンバーの疎水性溝（ｈｙｒｏｐｈｏｂｉｃ ｇｒｏｏｖｅ）を標的とするペプチドアプタマーである。この写真は、本発明の化合物（０１）及び（０２）が存在及び非存在の際の、ＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質に関するウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）解析を表す。Ｃ−：コントロールペプチドアプタマー（Ｂｃｌ−ｘＬとは相互作用しない）。Ｃ＋：５％ＤＭＳＯ中においてＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質。（０２）：化合物（０２）５０μＭが溶解した５％ＤＭＳＯ中でのＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質。（０１）：化合物（０１）５０μＭが溶解した５％ＤＭＳＯ中でのＧＳＴ−ＢＦ８に捕捉された６×Ｈｉｓ−Ｂｃｌ−ｘＬ融合タンパク質。
【図４】０．５μＭの化合物（０１）に誘導されたＵ９３７細胞での細胞効果の時間的経過を表す。Ｘ軸：化合物（０１）で処理された時間（時間、ｈｒ）。Ｙ軸：陽性細胞の割合（％）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗増殖性の特性を有し、下記一般式（ａ）、（ａ’）及び（ｂ）のいずれか１つにて表される化合物、前記化合物のアルカリ又は酸付加塩、前記化合物の幾何異性体、前記化合物の光学異性体、又は前記化合物のジアステレオ異性体に属する化合物。
【化１】
（但し、上記式（ａ）、（ａ’）及び（ｂ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の置換可能な炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換され、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、そして、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｙは、Ｈ、ＣＨ３、又はＣＯ−ＣＨ３を表し、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ、ＣＯＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨＲ１６、Ｏ−ＣＨ２−Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６、ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基により置換可能であって、ｐ＝０、１、２、３、４、５、又は６、そして、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個より少ない炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ３は、式（ａ）中では、Ｓ、Ｏ、又はＮＨを表し、式（ａ’）中では、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すものであって、Ｒ１０は、Ｒ９と同義であり、ｑ＝０、１、２、３、又は４であって、
Ｒ４は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１１を表すものであって、Ｒ１１は、Ｒ４と同義であり、Ｒ４の分子量は、５００Ｄａ未満であって、
さらに、
Ｒ３がＯを表すとき、Ｒは、Ｎ＊−Ｒ５、又はＯ−Ｒ５であって、Ｒ５は、Ｒ４と同義であり、Ｎ＊はＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＮＨ、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すとき、Ｒは、Ｒ６、又はＮ＊−ＣＯ−Ｒ６であって、Ｒ６はＲ４と同義であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＳを表すとき、
Ｒは、Ｎ＊−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、Ｒ１２は、Ｒ７と同義であり、ｎ＝０、１、２、３、又は４であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ８であって、−Ｒ８は、ｔ−ブチルを除く直鎖又は分岐鎖のアルキル、−Ｒ８は、−（ＣＨ２）ｓ−Ｃ４Ｈ３Ｏを表し、Ｓ＝１、２、３又は４、Ｒ８は、アルキル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、−ＯＨ、−ＣＯ−ＮＨ２、−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＯ−ＯＨ、−ＣＯ−ＯＣＨ３、もしくは−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３によりパラ位が１置換されたフェニルラジカルを表すか、又は、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ１７であって、Ｒ１７は、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１８を表すものであって、そして、Ｒ１８はＲ１７と同義であり、Ｒ１７の分子量は５００Ｄａ未満であって、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表し、Ｒ１はＯでないものである。）
【請求項２】
前記Ｒ１が、酸素原子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ２が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記環（Ｉ）及び（ＩＩ）のうち少なくとも一方は、Ｆ、又は（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９にて置換され、ｍ＝１又は２であって、Ｒ９は下記式に表される構造のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【化２】
【請求項５】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｏであり、Ｙが、Ｈであり、Ｒが、ＮＨ−Ｒ５であって、Ｒ５が、フェニル、ベンジル、又は−Ｃ６Ｈ４−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏ、又はＮＨであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、ＮＨであり、Ｙが、Ｈであり、−（Ｒ）が下記式にて表される構造であって、下記式において、フランモイティは、例えばチオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティである他のヘテロシクロアルキル、と任意に置き換わり、さらに、前記モイティは、１〜４個の炭素を有するアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換される、請求項１に記載の化合物。
【化３】
【請求項７】
前記式（ｂ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｙが、Ｈであり、−（Ｒ４）が下記式に表す構造のいずれかである、請求項１に記載の化合物。
【化４】
【請求項８】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏ、又はＮＨであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、ＮＨであり、Ｙが、Ｈであり、−Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ６Ｈ５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、Ｒ２が、Ｈ又はＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、ｎ＝０であり、−（Ｒ１２）が下記式に表す構造のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【化５】
【請求項１０】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｙが、Ｈであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、ｎ＝０、Ｒ１２が、Ｃ６Ｈ５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｙが、Ｈであり、Ｒが、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ８であって、Ｒ８が、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ４Ｈ３Ｏ、又は下記式に表される構造であって、そして、下記式中、Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【化６】
【請求項１２】
式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｒが、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ７であって、ｎ＝１、Ｒ７が−Ｃ６Ｈ５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
式（ａ’）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓ−ＣＨ３であり、（−Ｒ）が、下記式に表される構造であって、そして、下記式中、フランモイティが、例えばチオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール又はオキサゾールモイティなどの他のヘテロシクロアルキルに任意に置き換えられ、さらに、前記モイティは、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換される、請求項１に記載の化合物。
【化７】
【請求項１４】
以下の化合物の中の１つを有する、請求項１に記載の化合物：
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル尿素；
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニルチオ尿素；
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド；
化合物０６：１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド；
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イルピリジン−３−イル）チオ尿素；
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１ Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート；
化合物１０：メチルＮ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル−）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド；
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド；
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート、
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１６：メチル Ｎ−（４−フルオロベンゾイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１８：１−［３−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン；
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素；
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素；
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン；
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド；
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素；及び、
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素。
【請求項１５】
治療に用いられ、抗増殖性の特性を有し、下記一般式（ｃ）にて表される化合物、前記化合物のアルカリ又は酸付加塩、前記化合物の幾何異性体、前記化合物の光学異性体、又は前記化合物のジアステレオ異性体に属する化合物。
【化８】
（但し、上記式（ｃ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換可能であって、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、そして、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ、ＣＯＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨＲ１６、Ｏ−ＣＨ２−Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６、ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基で置換可能であって、そして、ｐ＝０、１、２、３、４、５、又は６であり、そして、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個未満の炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ１４及びＲ１５は、独立して、分子量４００Ｄａ未満の多種の置換基であって、Ｒ１４とＲ１５は同時に酸素であることはない。）
【請求項１６】
Ｒ１４、Ｒ１５、ＮＲ１４、及びＮＲ１５のうち少なくともいずれかが、アミド、スルホンアミド、ケトン、フラン、尿素、チオ尿素基、ベンジル、フェニル、アクリル、又はグアニジンを含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記環（Ｉ）及び（ＩＩ）のうち少なくとも一方は、Ｆ、又は（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９にて置換されるものであって、ｍ＝１又は２であり、Ｒ９は下記式に表される構造のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【化９】
【請求項１８】
Ｒ１４とＲ１５とが異なる構造を有する、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１４、及びＲ１５のうち少なくとも一方は、Ｈ、又はＣＨ３である、請求項１５又は１８に記載の化合物。
【請求項２０】
以下の化学物から選択される、請求項１５に記載の化合物：
化合物０１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物０２：Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）ベンズアミド；
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル尿素；
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニルチオ尿素；
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド；
化合物０６：１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド；
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イルピリジン−３−イル）チオ尿素；
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１ Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート；
化合物１０：メチルＮ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル−）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド；
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド；
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート、
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１６：メチル Ｎ−（４−フルオロベンゾイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１８：１−［３−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン；
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素；
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素；
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン；
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド；
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素；及び、
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素。
【請求項２１】
腫瘍細胞に対する細胞毒性の特性を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制性の特性を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
前記腫瘍細胞が、肺、前立腺、胸部、結腸、メラノーマ、リンパ腫、又は脊髄由来の腫瘍細胞である、請求項２１又は２２に記載の化合物。
【請求項２４】
モル濃度５０×１０−６ｍｏｌ／Ｌ超、好ましくは５００×１０−６ｍｏｌ／Ｌ超にて水に溶解できる、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
解離定数Ｋｄが１μＭ未満、好ましくは１００ｎＭ未満にてＢｃｌ−ｘＬタンパク質に結合する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物を含む組成物であって、
少なくとも１つの治療薬ともに用い、好ましくは他の抗腫瘍剤ともに用いる、組成物。
【請求項２７】
前記抗腫瘍剤が、タキソール（パクリタキセル）、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、レチノイン酸、タモキシフェン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、又はラパマイシンである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物と他の抗腫瘍剤とを含み、治療において、同時に、個別に、又は連続的に使用する混合製剤としての産生物。
【請求項２９】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物と、
医学的に許容され得る担体と、を含む医薬組成物。
【請求項３０】
病巣内、腹腔内、筋内、若しくは静脈内への注射を介した投与、インフュージョンを介した投与、リポソームが介在したデリバリー、局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔、目、又は耳へのデリバリーを介した投与、のための請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
癌治療の対象への投与を目的とする薬剤の製造のための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
前記薬剤は、病巣内、腹腔内、筋内、若しくは静脈内への注射を介した投与；インフュージョンを介した投与；リポソームが介在したデリバリー；局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔内、目、又は耳へのデリバリーを介した投与、のためのものである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
癌治療の対象への投与を目的とする薬剤の製造のための、請求項２６又は２７に記載の組成物の使用。
【請求項３４】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物の使用であって、
癌の治療の対象へ、前記化合物と少なくとも他の抗腫瘍剤とを、同時に、個別に、又は連続的に投与することを目的とする薬剤の製造のための化合物の使用。
【請求項３５】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物と細胞とのインビトロ系での接触を含む、インビトロ系における細胞増殖を阻害するための方法。
【請求項１】
抗増殖性の特性を有し、下記一般式（ａ）、（ａ’）及び（ｂ）のいずれか１つにて表される化合物、前記化合物のアルカリ又は酸付加塩、前記化合物の幾何異性体、前記化合物の光学異性体、又は前記化合物のジアステレオ異性体に属する化合物。
【化１】
（但し、上記式（ａ）、（ａ’）及び（ｂ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の置換可能な炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換され、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、そして、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｙは、Ｈ、ＣＨ３、又はＣＯ−ＣＨ３を表し、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ、ＣＯＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨＲ１６、Ｏ−ＣＨ２−Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６、ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基により置換可能であって、ｐ＝０、１、２、３、４、５、又は６、そして、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個より少ない炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ３は、式（ａ）中では、Ｓ、Ｏ、又はＮＨを表し、式（ａ’）中では、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すものであって、Ｒ１０は、Ｒ９と同義であり、ｑ＝０、１、２、３、又は４であって、
Ｒ４は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１１を表すものであって、Ｒ１１は、Ｒ４と同義であり、Ｒ４の分子量は、５００Ｄａ未満であって、
さらに、
Ｒ３がＯを表すとき、Ｒは、Ｎ＊−Ｒ５、又はＯ−Ｒ５であって、Ｒ５は、Ｒ４と同義であり、Ｎ＊はＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＮＨ、Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０、又はＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ１０を表すとき、Ｒは、Ｒ６、又はＮ＊−ＣＯ−Ｒ６であって、Ｒ６はＲ４と同義であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒ３がＳを表すとき、
Ｒは、Ｎ＊−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、Ｒ１２は、Ｒ７と同義であり、ｎ＝０、１、２、３、又は４であり、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表すか、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ８であって、−Ｒ８は、ｔ−ブチルを除く直鎖又は分岐鎖のアルキル、−Ｒ８は、−（ＣＨ２）ｓ−Ｃ４Ｈ３Ｏを表し、Ｓ＝１、２、３又は４、Ｒ８は、アルキル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、−ＯＨ、−ＣＯ−ＮＨ２、−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＯ−ＯＨ、−ＣＯ−ＯＣＨ３、もしくは−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３によりパラ位が１置換されたフェニルラジカルを表すか、又は、
Ｒは、Ｎ＊−ＣＯ−Ｒ１７であって、Ｒ１７は、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はＣＨ＝ＣＨ−Ｒ１８を表すものであって、そして、Ｒ１８はＲ１７と同義であり、Ｒ１７の分子量は５００Ｄａ未満であって、Ｎ＊は、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）を表し、Ｒ１はＯでないものである。）
【請求項２】
前記Ｒ１が、酸素原子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ２が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記環（Ｉ）及び（ＩＩ）のうち少なくとも一方は、Ｆ、又は（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９にて置換され、ｍ＝１又は２であって、Ｒ９は下記式に表される構造のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【化２】
【請求項５】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｏであり、Ｙが、Ｈであり、Ｒが、ＮＨ−Ｒ５であって、Ｒ５が、フェニル、ベンジル、又は−Ｃ６Ｈ４−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏ、又はＮＨであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、ＮＨであり、Ｙが、Ｈであり、−（Ｒ）が下記式にて表される構造であって、下記式において、フランモイティは、例えばチオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール、又はオキサゾールモイティである他のヘテロシクロアルキル、と任意に置き換わり、さらに、前記モイティは、１〜４個の炭素を有するアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換される、請求項１に記載の化合物。
【化３】
【請求項７】
前記式（ｂ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｙが、Ｈであり、−（Ｒ４）が下記式に表す構造のいずれかである、請求項１に記載の化合物。
【化４】
【請求項８】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏ、又はＮＨであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、ＮＨであり、Ｙが、Ｈであり、−Ｒが、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ６Ｈ５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、Ｒ２が、Ｈ又はＣＨ３であり、Ｒ３がＳであり、ＹがＨであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、ｎ＝０であり、−（Ｒ１２）が下記式に表す構造のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【化５】
【請求項１０】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｙが、Ｈであり、ＲがＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２であって、ｎ＝０、Ｒ１２が、Ｃ６Ｈ５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｙが、Ｈであり、Ｒが、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ８であって、Ｒ８が、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ４Ｈ３Ｏ、又は下記式に表される構造であって、そして、下記式中、Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【化６】
【請求項１２】
式（ａ）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、−ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓであり、Ｒが、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ７であって、ｎ＝１、Ｒ７が−Ｃ６Ｈ５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
式（ａ’）において、Ｒ１が、Ｏであり、−Ｒ２が、ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｓ−ＣＨ３であり、（−Ｒ）が、下記式に表される構造であって、そして、下記式中、フランモイティが、例えばチオフェン、ピロール、チアゾール、ピラゾール又はオキサゾールモイティなどの他のヘテロシクロアルキルに任意に置き換えられ、さらに、前記モイティは、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、ＮＨ３、Ｏ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３によって任意に置換される、請求項１に記載の化合物。
【化７】
【請求項１４】
以下の化合物の中の１つを有する、請求項１に記載の化合物：
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル尿素；
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニルチオ尿素；
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド；
化合物０６：１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド；
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イルピリジン−３−イル）チオ尿素；
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１ Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート；
化合物１０：メチルＮ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル−）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド；
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド；
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート、
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１６：メチル Ｎ−（４−フルオロベンゾイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１８：１−［３−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン；
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素；
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素；
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン；
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド；
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素；及び、
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素。
【請求項１５】
治療に用いられ、抗増殖性の特性を有し、下記一般式（ｃ）にて表される化合物、前記化合物のアルカリ又は酸付加塩、前記化合物の幾何異性体、前記化合物の光学異性体、又は前記化合物のジアステレオ異性体に属する化合物。
【化８】
（但し、上記式（ｃ）中、
環（Ｉ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）は、１位、２位、３位、又は４位の炭素原子が、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、及び（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９からなる群から選択される基と任意に置換可能であって、Ｒ９は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、ＮＨ３、ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＯ−フェニル、アルキル、へテロアリール、又はヘテロシクロアルキルを表し、そして、ｍ＝１、２、３、又は４であって、
Ｒ１は、Ｏ、ＮＲ１６であって、Ｒ１６は、Ｈ、又は１〜４個の炭素原子を有するアルキル、又はＮ−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ７であって、Ｒ７は、ＯＨ、ＣＯＯＲ１６、ＣＯ−ＮＨＲ１６、ＮＨＲ１６、Ｏ−ＣＨ２−Ｒ１６、ＣＮ、Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｒ１６、ＣＯ−へテロシクロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は下記ラジカル：アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、−Ｃ≡Ｎ、ＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２、Ｏ−ＣＨ３、ＣＯ−ＯＨ、ＣＯ−ＯＣＨ３、又はＯ−ＣＯ−ＣＨ３、の１つ又はそれ以上の基で置換可能であって、そして、ｐ＝０、１、２、３、４、５、又は６であり、そして、Ｒ１６は、Ｈ、又は１、２、３又は４個の炭素原子を含むアルキルであって、
Ｒ２は、Ｈ、又は４個未満の炭素原子を含むアルキルを表し、
Ｒ１４及びＲ１５は、独立して、分子量４００Ｄａ未満の多種の置換基であって、Ｒ１４とＲ１５は同時に酸素であることはない。）
【請求項１６】
Ｒ１４、Ｒ１５、ＮＲ１４、及びＮＲ１５のうち少なくともいずれかが、アミド、スルホンアミド、ケトン、フラン、尿素、チオ尿素基、ベンジル、フェニル、アクリル、又はグアニジンを含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記環（Ｉ）及び（ＩＩ）のうち少なくとも一方は、Ｆ、又は（ＣＨ２）ｍ−Ｒ９にて置換されるものであって、ｍ＝１又は２であり、Ｒ９は下記式に表される構造のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【化９】
【請求項１８】
Ｒ１４とＲ１５とが異なる構造を有する、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１４、及びＲ１５のうち少なくとも一方は、Ｈ、又はＣＨ３である、請求項１５又は１８に記載の化合物。
【請求項２０】
以下の化学物から選択される、請求項１５に記載の化合物：
化合物０１：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物０２：Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）ベンズアミド；
化合物０３：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニル尿素；
化合物０４：１−［３−メトキシ−４−（２オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−３−フェニルチオ尿素；
化合物０５：４−フルオロ−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボチオイル）ベンズアミド；
化合物０６：１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物０７：Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）ベンズアミド；
化合物０８：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−３−（６−モルフォリン−４−イルピリジン−３−イル）チオ尿素；
化合物０９：メチル５−（｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝スルホニル）−１−メチル−１ Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート；
化合物１０：メチルＮ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル−）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１２：（２Ｅ）−３−（２フリル）−Ｎ−（イミノ｛［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］アミノ｝メチル）アクリルアミド；
化合物１３：Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−２，５−ジメチルフラン−３−スルホアミド；
化合物１４：メチル Ｎ−［（２Ｅ）−３−（２−フリル）プロプ−２−エノイル］−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］イミドチオカルバメート、
化合物１５：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ）カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１６：メチル Ｎ−（４−フルオロベンゾイル）−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］−Ｎ−メチルイミドチオカルバメート；
化合物１７：（２Ｅ）−３−（２−フリル）−Ｎ−（｛［３−メトキシ−４−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］アミノ｝カルボノチオイル）アクリルアミド；
化合物１８：１−［３−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）フェニル］尿素；
化合物１９：Ｎ’−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−Ｎ−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−Ｎ−メチル−グアニジン；
化合物２０：１−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル−３−（４−モルフォリン−４−イル−フェニル）−チオ尿素；
化合物２１：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）−３−｛４−［１−（ヒドロキシ−エチル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−イル］−３−メトキシ−フェニル｝−チオ尿素；
化合物２２：Ｎ−ベンゾイル−Ｎ’−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）フェニル］−グアニジン；
化合物２３：２，５−ジメチル−フラン−３−スルホン酸アセチル−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−アミド；
化合物２４：１−（（Ｅ）−３−フラン−２−イル−アクリロイル）３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素；及び、
化合物２５：１−（４−フルオロ−ベンゾイル）−３−［３−メトキシ−４−（２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）−フェニル］−１，２−ジメチル−イソチオ尿素。
【請求項２１】
腫瘍細胞に対する細胞毒性の特性を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制性の特性を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
前記腫瘍細胞が、肺、前立腺、胸部、結腸、メラノーマ、リンパ腫、又は脊髄由来の腫瘍細胞である、請求項２１又は２２に記載の化合物。
【請求項２４】
モル濃度５０×１０−６ｍｏｌ／Ｌ超、好ましくは５００×１０−６ｍｏｌ／Ｌ超にて水に溶解できる、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
解離定数Ｋｄが１μＭ未満、好ましくは１００ｎＭ未満にてＢｃｌ−ｘＬタンパク質に結合する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物を含む組成物であって、
少なくとも１つの治療薬ともに用い、好ましくは他の抗腫瘍剤ともに用いる、組成物。
【請求項２７】
前記抗腫瘍剤が、タキソール（パクリタキセル）、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、レチノイン酸、タモキシフェン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、又はラパマイシンである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物と他の抗腫瘍剤とを含み、治療において、同時に、個別に、又は連続的に使用する混合製剤としての産生物。
【請求項２９】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物と、
医学的に許容され得る担体と、を含む医薬組成物。
【請求項３０】
病巣内、腹腔内、筋内、若しくは静脈内への注射を介した投与、インフュージョンを介した投与、リポソームが介在したデリバリー、局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔、目、又は耳へのデリバリーを介した投与、のための請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
癌治療の対象への投与を目的とする薬剤の製造のための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
前記薬剤は、病巣内、腹腔内、筋内、若しくは静脈内への注射を介した投与；インフュージョンを介した投与；リポソームが介在したデリバリー；局所、鼻、経口、肛門、皮下、膣、舌下腺、尿道、経皮、髄腔内、目、又は耳へのデリバリーを介した投与、のためのものである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
癌治療の対象への投与を目的とする薬剤の製造のための、請求項２６又は２７に記載の組成物の使用。
【請求項３４】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物の使用であって、
癌の治療の対象へ、前記化合物と少なくとも他の抗腫瘍剤とを、同時に、個別に、又は連続的に投与することを目的とする薬剤の製造のための化合物の使用。
【請求項３５】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物と細胞とのインビトロ系での接触を含む、インビトロ系における細胞増殖を阻害するための方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２００９−５３８２９０（Ｐ２００９−５３８２９０Ａ）
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１１６０７（Ｐ２００９−５１１６０７）
【出願日】平成１９年５月２２日（２００７．５．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００２１７９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１３５５６５
【国際公開日】平成１９年１１月２９日（２００７．１１．２９）
【出願人】（５０８３４４６４８）イオス（エシカル オンコロジー サイエンス）エス．ピー．エー． (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年５月２２日（２００７．５．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００２１７９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１３５５６５
【国際公開日】平成１９年１１月２９日（２００７．１１．２９）
【出願人】（５０８３４４６４８）イオス（エシカル オンコロジー サイエンス）エス．ピー．エー． (1)
【Ｆターム（参考）】
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