【課題】複雑な病原体に由来する多数のタンパク質を発現させることにおいて使用される革新的なプラスミドＤＮＡの非ウイルスベクターを設計すること。
【解決手段】本発明は、（ａ）第１のプロモーターおよび第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、（ｂ）第２のプロモーターおよび第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニットと、（ｃ）第３のプロモーターおよび第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第３の転写ユニットとを含み、第１のプロモーター、第２のプロモーターおよび第３のプロモーターのそれぞれが異なる転写ユニットに由来するＤＮＡプラスミドを提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
選択された抗原に対して脊椎動物宿主を免疫化するための組成物であって、該組成物が、以下：
（ａ）ＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一転写ユニットを含み、該単一転写ユニットが、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結される第１のＤＮＡプラスミド；
（ｂ）第２のＤＮＡプラスミドであって、以下：
（ｉ）第１のプロモーターおよび第１のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の転写ユニット、
（ｉｉ）第２のプロモーターおよび第２のポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された、ＨＩＶのエンベロープポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の転写ユニット、を含み、
ここで、該第１および第２のプロモーターはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、かつ、該第１および第２のポリアデニル化シグナルはそれぞれが、異なる転写ユニットに由来し、
該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向とは反対方向であるか、または、該第１の転写ユニットについての転写方向が該第２の転写ユニットの転写方向と同じ方向であり、該第１および第２の転写ユニットが少なくとも１キロ塩基対のスペーサー領域によって隔てられる、第２のＤＮＡプラスミド；および
（ｃ）薬学的に受容可能な希釈剤、アジュバント、キャリアまたはトランスフェクション促進因子の少なくとも１つ
を含む、組成物。
【請求項２】
生体内エレクトポレーションを使用して哺乳動物に投与するために適切である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記トランスフェクション促進因子がブピバカインである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーター、サルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーター、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）潜伏期関連プロモーター−１（ＬＡＰ１）、シミアンウイルス４０プロモーター、ヒト伸長因子１αプロモーターおよびヒト筋細胞特異的デスミンプロモーターからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリアデニル化シグナルが、ウサギβ−グロビンポリ（Ａ）シグナル、合成ポリＡ、ＨＳＶチミジンキナーゼポリＡ、ヒトαグロビンポリＡ、ＳＶ４０ポリＡ、ヒトβグロビンポリＡ、ポリオーマウイルスポリＡおよびウシ成長ホルモンポリＡからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記第１のプラスミドにおける前記プロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記第１のプラスミドにおける前記ポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモンポリＡのポリアデニル化シグナルである、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記第１のＤＮＡプラスミドがＨＩＶのｇａｇ−ｐｏｌ融合ポリペプチドをコードし、ＨＩＶのｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子の前記融合体、または、ｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子がＨＩＶの単離体ＨＸＢ２に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記第２のプラスミドにおける前記第１のプロモーターがヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時初期プロモーターである、請求項４に記載の組成物。
【請求項１０】
前記第２のプラスミドにおける前記第１のポリアデニル化シグナルがＳＶ４０ポリＡのポリアデニル化シグナルである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＨＩＶ ｎｅｆ−ｔａｔ−ｖｉｆ融合ポリペプチドが、ＨＩＶのｎｅｆ遺伝子、ｔａｔ遺伝子およびｖｉｆ遺伝子の融合体（ｎｔｖ）から発現される、ｎｅｆ、ｔａｔおよびｖｉｆの融合タンパク質（ＮＴＶ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第２のプラスミドにおける前記第２のプロモーターがサルサイトメガロウイルス（ＳＣＭＶ）プロモーターである、請求項４に記載の組成物。
【請求項１３】
前記第２のポリアデニル化シグナルがウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）のポリアデニル化シグナルである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１４】
本明細書に記載の組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公開番号】特開２０１０−２６５３１３（Ｐ２０１０−２６５３１３Ａ）
【公開日】平成２２年１１月２５日（２０１０．１１．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１８４４８７（Ｐ２０１０−１８４４８７）
【出願日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【分割の表示】特願２００７−５１６６９０（Ｐ２００７−５１６６９０）の分割
【原出願日】平成１７年６月１５日（２００５．６．１５）
【出願人】（３０９０４０７０１）ワイス・エルエルシー (181)
【Ｆターム（参考）】