４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を有効成分とするＢＡＦＦの結合阻害剤
【課題】ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害し、自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群、非ホジキンリンパ腫の予防及び治療効果に優れた薬剤を提供すること。
【解決手段】次の一般式（１）：
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤。
【解決手段】次の一般式（１）：
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を有効成分とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤に関する。より詳細には、本発明は、４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を有効成分とする自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤、後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体における免疫作用は本来、細菌、ウイルスあるいは腫瘍などの異種抗原タンパクを認識して排除するための生体防御機構で、外来抗原に対する特異的な反応が起こり、特異的抗体の産生や細胞障害性Ｔ細胞の活性化を伴う。これら獲得免疫においてＢ細胞は液性免疫を介して中心的な役割を果たし、外来性抗原に対する特異的抗体を産生して異種抗原の排除に働く（非特許文献１）。しかしながら自己免疫疾患においては、自己抗原に対する過剰な反応が起こり、自己抗体の産生やＴ細胞の活性化を伴う。自己免疫反応を背景に有する関節リウマチ（Rheumatoid Arthritis；ＲＡ）や全身性エリテマトーデス（Systemic Lupus Erythematosus；ＳＬＥ）などの自己免疫疾患においては、自己反応性Ｂ細胞及び自己抗体の産生が亢進しており、それゆえにＢ細胞の成熟、活性化並びに抗体産生を制御する機構の解明について多くの研究が行われている。
【０００３】
Ｂ細胞は骨髄造血幹細胞由来で、細胞表面に免疫グロブリンを発現する細胞群であり、末梢血リンパ球の約１０〜３０％を占め、脾臓においてＢ細胞受容体（B Cell Receptor；ＢＣＲ）を介した抗原刺激あるいはＴ細胞からの活性化刺激を受けて、免疫グロブリン産生細胞（形質細胞）へと分化する。活性化されたＢ細胞はインターロイキン−６（ＩＬ−６）や腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−ａｌｐｈａ）などの炎症性サイトカインを産生するとともに、細胞表面に発現するＣＤ４０などの共刺激分子を介してＴ細胞を活性化する。このようにＢ細胞は、自己抗体産生細胞としてのみならず、抗原提示細胞としての機能や、サイトカイン産生細胞、Ｔ細胞とのクロストークを介した自己免疫性疾患の病態形成に大きく関与していることが明らかにされている。さらにＢ細胞に特異的なＣＤ抗原であるＣＤ２０に対するモノクローナル抗体（リツキシマブ、Rituxan， rituximab， 非特許文献２）はＢ細胞性非ホジキンリンパ腫、ＲＡあるいはＳＬＥの症状改善に有効であることが臨床において確認されつつあり、Ｂ細胞を標的とした自己免疫疾患の治療に大きな期待が持たれている。
【０００４】
近年、Ｂ細胞の生存及び成熟因子としてＢＡＦＦ（B cell activating factor belonging to TNF superfamily）が発見された（非特許文献３、特許文献１）。ＢＡＦＦは別名ＢＬｙＳ、ＴＡＬＬ−１、ＴＨＡＮＫ、ｚＴＮＦ４、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、又はＫａｙリガンド（特許文献１参照）としても知られ、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−ａｌｐｈａのスーパーファミリーのメンバーとして位置づけられている。ＢＡＦＦは単球、マクロファージ、樹状細胞表面に前駆体タンパクとして存在し、インターフェロン−ガンマ（interferon-gamma、IFN-gamma）、ＬＰＳ（lipopolysaccharide）あるいはインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）などの刺激によりその発現が亢進される（非特許文献４）。ＢＡＦＦはｆｕｒｉｎ型プロテアーゼのプロセッシングを受けて分泌型となり、この活性化されたＢＡＦＦタンパクはホモ三量体を形成して、同様に三量体としてＢ細胞表面に発現する受容体と結合する（非特許文献５）。ＢＡＦＦのＢ細胞に対する主な作用は、アポトーシスに拮抗的に作用するＢｃｌ−２を誘導して、Ｂ細胞の生存延長や、免疫グロブリンであるＩｇＭ産生亢進などといったＢ細胞の活性化を誘導して自己抗体の過剰産生を亢進する（非特許文献６）。その細胞内シグナルは転写因子ＮＦ−ｋａｐｐａＢ２／ｐ１００がｐ５２へプロセシングされることによる（非特許文献７）。ＢＡＦＦトランスジェニックマウスはリンパ節あるいは脾臓の腫大と、組織中のＢ細胞の過形成、及び重篤な自己免疫疾患様の表現型が確認されている（非特許文献８、非特許文献９）。一方、ＢＡＦＦノックアウトマウスについては、成熟Ｂ細胞がほとんど観察されず、液性免疫応答の欠如が報告されている（非特許文献１０）。
【０００５】
これらＢＡＦＦトランスジェニックマウスやＢＡＦＦノックアウトマウスの表現型などから、Ｂ細胞の活性化を伴う自己免疫疾患への関わりが深いことが考察できる。各種自己免疫疾患治療への応用の可能性は、Matsushitaらの総説で示されており、ＳＬＥ、シェーグレン症候群、ＲＡ、全身性強皮症（Systemic Sclerosis；ＳＳｃ）、多発性硬化症（Multiple Sclerosis：ＭＳ）、分類不能型免疫不全症（Common Variable Immunodeficiency：ＣＶＩＤ）及び非ホジキンリンパ腫など抗腫瘍剤への応用について記載されている（非特許文献１１）。また、後天性免疫不全症候群（Acquired Immune Deficiency Syndrome； ＡＩＤＳ）患者では血中Ｔ細胞が減少するとともにＢ細胞の増加及び免疫グロブリン産生が亢進しており、このＢ細胞表面におけるＢＡＦＦタンパクの発現が亢進していることから、ＡＩＤＳの病態増悪にＢＡＦＦ及びその受容体が関与していることが示唆される（非特許文献１２）。
【０００６】
ＢＡＦＦの受容体としてはＢＣＭＡ（B Cell Maturation Antigen、別名TNFRSF17、非特許文献１３）、ＴＡＣＩ（Transmembrane Activator and CAML-Interactor、別名TNFRSF13B、非特許文献１４）、及びＢＲ３（別名TNFSFR13C、BAFF Receptor、ＢＡＦＦ−Ｒと省略されることもある。非特許文献１５）の３種類の膜貫通型タンパクが報告され、これら受容体はリガンドと同様にＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。このうちＢＣＭＡとＴＡＣＩにはＴＮＦファミリーメンバーの１つであるＡＰＲＩＬ（A Proliferation Inducing Ligand）がリガンドとして結合する（非特許文献１６）。これら３つの受容体のうち、ＢＡＦＦのＢ細胞に対する作用は主にＢＲ３を介していることが示唆されている（非特許文献１５）。ＢＲ３ノックアウトマウスの表現型は、ＢＡＦＦ欠損マウスと同様に成熟型Ｂ細胞の欠失、免疫グロブリン産生能の低下などが観察され（非特許文献１７）、さらに、ＢＲ３遺伝子に自然変異のあるＡ／ＷｙＳｎＪマウスにおいても、末梢Ｂ細胞数の著しい低下が見られるなど、Ｂ細胞の成熟過程におけるＢＡＦＦ及びＢＲ３の重要性が示唆されている（非特許文献１８）。
【０００７】
近年、関節リウマチ（ＲＡ）をはじめとする自己免疫疾患の治療のために、標的タンパクの特異的抗体、あるいは標的タンパクの受容体を利用した可溶性受容体といった生物製剤の開発が行われ、例えば、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−ａｌｐｈａの可溶性受容体タンパク製剤であるエンブレル（Enbrel、Etanercept、非特許文献１９）はＲＡ治療に用いられている。同様に、ＢＡＦＦに対する特異的抗体あるいは、その受容体を利用した可溶性受容体タンパクの開発も進められており、自己免疫疾患及び他のＢ細胞が関わるとされている疾患の治療を目的として開発されている（非特許文献６）。例えば、抗ヒトＢＡＦＦ抗体であるベリムマブ（Belimumab、Lymphostat）は、ＳＬＥに対して（非特許文献２０）、ＴＡＣＩ−Ｆｃ融合タンパクであるAtaciceptもＢＡＦＦの阻害を目的として、ＳＬＥ患者での臨床試験を行っている（非特許文献２１）。また、非ホジキンリンパ腫患者の生存率と血中ＢＡＦＦ濃度の関連も示唆されており（非特許文献２２）、自己免疫疾患以外の疾患においてもＢＡＦＦを標的とした治療法の開発が期待される。さらに、可溶性受容体であるＢＲ３−Ｆｃの開発もＢ細胞活性化を制御する目的で進められている（非特許文献２３）。
【０００８】
以上のようにＢＡＦＦ及びその受容体を標的として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症、分類不能型免疫不全症などの自己免疫疾患、後天性免疫不全症候群及び非ホジキンリンパ腫などの抗腫瘍剤の治療として、抗ＢＡＦＦ抗体、ＢＲ３−Ｆｃタンパクといった生物製剤での開発が進められているが、ＢＡＦＦあるいはその受容体に作用して阻害作用を示す低分子化合物の報告はこれまでになく、僅かにＢＲ３タンパクの部分ペプチドが報告されているのみである（非特許文献２４、特許文献２）。また、前述したとおり、ＢＡＦＦが結合する受容体は少なくとも３種類知られているが、そのうちＢＲ３受容体は唯一ＢＡＦＦ特異的な受容体であり、ＢＡＦＦシグナルを主に伝達すると考えられている。
【０００９】
一方、本発明に関連する４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体には、例えば、ＩＬ−１２産生阻害作用を有し、関節リウマチ等に有用な化合物（特許文献３、特許文献４）、混合リンパ球培養反応阻害作用を有し、骨髄移植・臓器移植時の拒絶反応抑制等に有用な化合物（特許文献５）、抗癌剤として有用な化合物（特許文献６）、β−セクレターゼ阻害作用を有し、アルツハイマー病治療剤として有用な化合物（特許文献７）が開示されている。しかしながら、これらの文献に開示されている化合物は、ピリミジン環上の置換様式が本発明の化合物と異なる。また、いずれの文献においてもＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害や自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群及び非ホジキンリンパ腫に関する記載や示唆はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＷＯ９９／１２９６４号パンフレット
【特許文献２】ＷＯ２００５／００５４６２号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２００９／１００４０６号パンフレット
【特許文献４】ＷＯ２００３／０４７５１６号パンフレット
【特許文献５】特開２００５−１４５９５６号公報
【特許文献６】ＷＯ２００７／０６５９４０号パンフレット
【特許文献７】ＷＯ２００６／０２９８５０号パンフレット
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Roit Iら, IMMUNOLOGY. Fifth Edition(1998), Mosby International Ltd
【非特許文献２】Eisenberg Rら, Arthritis Res. Ther., 5: 157-159(2003)
【非特許文献３】Moore PAら, Science, 285: 260-263(1999)
【非特許文献４】Nardelli Bら, Blood, 97: 198-204(2001)
【非特許文献５】Schneider Pら, J. Exp. Med., 189: 1747-1756(1999)
【非特許文献６】Kalled SLら, Expert Opin. Ther. Targets, 7: 115-123(2003)
【非特許文献７】Kayagaki Nら, Immunity, 10: 515-524(2002)
【非特許文献８】Khare SDら, Proc. Natl. Acad. Sci., 97: 3370-3375(2000)
【非特許文献９】Mackay Fら, J.Exp.Med., 190: 1697-1710(1999)
【非特許文献１０】Schiemann Bら, Science, 293: 2111-2114(2001)
【非特許文献１１】Matsushita Tら, Jpn. J. Clin. Immunol., 28: 333-342(2005)
【非特許文献１２】Moir Sら, J. Exp. Med., 200: 587-599(2004)
【非特許文献１３】Laabi Yら, Nucleic Acids Res., 22: 1147-1154(1994)
【非特許文献１４】von Bulow GUら, Science, 278: 138-141(1997)
【非特許文献１５】Thompson JSら, Science, 293: 2108-2111(2001)
【非特許文献１６】Lopez-Fraga Mら, EMBO Rep., 2: 945-951(2001)
【非特許文献１７】Shulga-Morskaya Sら, J. Immunol., 173: 2331-2341(2004)
【非特許文献１８】Amanna IJら, J.Immunol., 170: 4593-4600(2003)
【非特許文献１９】Lovell DJら, N. Eng. J. Med., 342: 763-769(2000)
【非特許文献２０】Furie Rら, Arthritis Res. Ther., 10: R109(2008)
【非特許文献２１】Dall’Era Mら, Arthritis Rheum. 56: 4142-4150(2007)
【非特許文献２２】Novak AJら, Blood, 104: 2247-2253(2004)
【非特許文献２３】Vugmeyster Yら, Am. J. Pathol., 168: 476-489(2006)
【非特許文献２４】Gordon NCら, Biochemistry, 42: 5977-5983(2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
前述してきたように、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害することにより、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症、分類不能型免疫不全症などの自己免疫疾患の予防及び治療効果、並びに後天性免疫不全症候群又は癌の予防及び／又は治療効果に優れた薬剤を提供することができることが知られている。
本発明の目的は、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害し、自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療効果に優れた薬剤を提供することにある。特に、本発明はＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害し得る低分子化合物、及び当該低分子化合物を用いたＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合の阻害剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
以上のように、ＢＡＦＦの結合阻害剤は、抗ＢＡＦＦ抗体、ＢＲ３−Ｆｃ受容体などの生物製剤での開発が進められているが、低分子化合物の報告はこれまでない。また前述したとおり、ＢＡＦＦが結合する受容体は少なくとも３種類知られているが、そのうちＢＲ３受容体が最も重要であることも示唆されている。そこで、このＢＡＦＦ−ＢＲ３結合を阻害する低分子化合物の創生を目指したスクリーニングを行うこととし、ＢＲ３発現細胞の作製及びそれを用いたリガンド−受容体結合アッセイ系を構築してスクリーニングを行った結果、まったく意外にも本発明の４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体がこのＢＡＦＦ−ＢＲ３結合を阻害することを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち本発明は、次の一般式（１）：
【００１５】
【化１】
【００１６】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として使用される医薬組成物を提供する。本発明の一般式（１）で表される化合物は、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症及び分類不能型免疫不全症などの自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤として使用することができる。また、本発明の一般式（１）で表される化合物は、同様に、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として、後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤、及び非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤として使用することができる。
【００１７】
本発明を詳細に説明すれば、次のとおりである。
［１］前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有してなるＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤。
［２］前記一般式（１）におけるＲ２及びＲ３、Ｒ４及びＲ５の、それぞれの２個の置換基のうちの少なくとも１つが水酸基である前記［１］に記載の結合阻害剤。
［３］一般式（１）で表される化合物が、次の化合物：
（Ｅ）−４−｛２−（２−ヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン、及び、
（Ｅ）−４−｛２−（２、４−ジヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、前記［１］又は［２］に記載の結合阻害剤。
［４］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有してなるＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として使用するための医薬組成物。
【００１８】
［５］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
［６］前記自己免疫性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症又は分類不能型免疫不全症である、前記［５］に記載の自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
［７］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤。
［８］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤。
［９］前記非ホジキンリンパ腫が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、慢性Ｂリンパ球性白血病、前駆細胞性白血病、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫、形質細胞性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫又はバーキットリンパ腫である、前記［８］に記載の非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤に関する。
【００１９】
また、本発明は、
［１０］次の一般式（１）：
【００２０】
【化２】
【００２１】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効量投与することを特徴とする自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療方法、
［１１］自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤を製造するための、次の一般式（１）：
【００２２】
【化３】
【００２３】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用、及び
［１２］自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療に用いるための、次の一般式（１）：
【００２４】
【化４】
【００２５】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。
【００２６】
さらに、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を、ＢＲ３受容体を有する細胞に接触させて、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害する方法に関する。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の、一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害作用を有し、かつ低分子化合物であり、ＢＡＦＦ受容体の可溶性タンパク等と異なり経口投与が可能であり、自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤として、後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤として、又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明における用語の定義は以下のとおりである。
【００２９】
本明細書中で使用するとき、非ホジキンリンパ腫とは、悪性リンパ腫の中で、ホジキンリンパ腫以外の悪性リンパ腫であり、例えば、Revised European American Lymphoma (REAL)分類などにより既に細分化、体系化されている（例えば、Harris et al., Blood, 84 (5), 1361-1392 (1994)、溝口ら, 別冊医学のあゆみ, 血液疾患Ver.2, 医歯薬出版, 303-307(1998)等を参照）。本発明の非ホジキンリンパ腫としては、例えば、B細胞リンパ腫（前駆B細胞リンパ芽球性リンパ腫(precursor B-lymphoblastic leukemia)、慢性Bリンパ球性白血病(B-cell chronic lymphocytic leukemia)、前駆細胞性白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、小リンパ球性リンパ腫(B-cell small lymphocytic lymphoma)、リンパ形質細胞性リンパ腫(lymphoplasmacytoid lymphoma)、免疫細胞腫(immunocytoma)、マントル細胞リンパ腫 (Mantle cell lymphoma)、濾胞性リンパ腫(follicle center lymphoma)、辺縁リンパ腫(Marginal zone B-cell lymphoma)、ヘアリー細胞白血病(Hairy cell leukemia)、形質細胞腫(Plasmacytoma)、形質細胞性骨髄腫(plasma cell myeloma)、びまん性大細胞型リンパ腫(Diffuse Large B-cell lymphoma)、バーキットリンパ腫(Burkitt‘s lymphoma)等）、T細胞リンパ腫又はNK細胞リンパ腫（慢性Tリンパ球性白血病(T-cell chronic lymphocytic leukernia)、前駆リンパ球性白血病(T-cell prolymphocytic leukemia)、大顆粒Tリンパ球性白血病(T-cell Large granular lymphocyte leukemia)、大顆粒NK細胞性白血病(NK-cell Large granular lymphocyte leukemia)、菌状息肉腫(Mycosis fungoides)、セザリー症候群(Sezary syndrome)、末梢T細胞リンパ腫(Peripheral T-cell lymphomas)、血管免疫芽球性T細胞リンパ腫(Angioimmunoblastic T-cell lymphoma)、血管中枢性リンパ腫(Angiocentric lymphoma)、腸管T細胞リンパ腫(Intestinal T-cell lymphoma)、成人T細胞リンパ腫(Adult T-cell lymphoma)、未分化大細胞リンパ腫(Anaplastic large cell lymphoma)等）等が挙げられる。
【００３０】
本明細書中で使用するとき、「Ｃ１−１０アルキル基」とは、炭素数１〜１０、好ましくは炭素数１〜６、より好ましくは炭素数１〜４の鎖状又は環状の飽和又は不飽和の炭化水素基を示す。「Ｃ１−１０アルキル基」としては、特に限定されないが、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。
【００３１】
一般式（１）中、Ｒ１は「メチル基又はエチル基」であることが好ましく、メチル基であることがより好ましい。
【００３２】
一般式（１）中、Ｒ２は、水酸基であることが好ましい。また、その結合位置は、ピリミジン環との結合位置に対し、オルト位であることが好ましい。
【００３３】
一般式（１）中、Ｒ３は、水素原子であることが好ましい。
【００３４】
一般式（１）中、Ｒ４は、水酸基であることが好ましい。また、その結合位置は、メチレンとの結合位置に対し、オルト位であることが好ましい。
【００３５】
一般式（１）中、Ｒ５は、水素原子又は水酸基のいずれでもよいが、その結合位置は、メチレンとの結合位置に対し、パラ位であることが好ましい。
【００３６】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体の好ましい具体例としては、例えば、下記の化合物を挙げることができる。
【００３７】
【表１】
【００３８】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明の４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。
【００３９】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体として許容される塩としては、具体的には、化合物を塩基性化合物として扱う場合は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との酸付加塩等が挙げられ、化合物を酸性化合物として扱う場合には、無機塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、バリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等）等が挙げられる。
【００４０】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノールなどのアルコールとの溶媒和物）が挙げられる。
【００４１】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体は、公知の方法により製造することができる。例えば、下記反応工程図に示す方法、あるいはこれに準じた方法により製造することができるが、これに限定されるものではない。また、必要に応じて官能基を保護して各反応を行ってもよい。保護、脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。
【００４２】
【化５】
【００４３】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、前記定義と同義であり、Ｒ６は、低級アルキル基を示し、Ｘはハロゲン原子を示す。］
【００４４】
［工程Ａ］アミジン誘導体（２）とケトエステル誘導体（３）を溶媒中、塩基の存在下で反応させることにより、ピリミジン誘導体（４）を製造することができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのようなアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール、エチレングリコールのようなアルコール類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。塩基としては、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド類が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは８０℃〜１１０℃である。本工程おける反応時間は、使用する原料、溶媒、反応温度によって異なるが、通常、１〜７日間、好ましくは１〜３日間である。
【００４５】
［工程Ｂ］ピリミジン誘導体（４）を、溶媒中又は無溶媒でハロゲン化剤と反応させることにより、化合物（５）を製造することができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類等が挙げられる。ハロゲン化剤としては、オキシ塩化リン、オキシ臭化リンのようなオキシハロゲン化リン類；三臭化リン、五塩化リン、五臭化リン等のハロゲン化リン類等が挙げられる。本工程における反応温度は、通常、室温〜１２０℃、好ましくは８０℃〜１００℃である。本工程おける反応時間は、使用する原料、溶媒、反応温度によって異なるが、通常、３０分〜２４時間、好ましくは４〜８時間である。
【００４６】
［工程Ｃ］化合物（５）とヒドラジン誘導体（６）を溶媒中で反応させることにより、本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を製造することができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのようなアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、通常、０〜１５０℃、好ましくは６０℃〜１００℃である。本工程おける反応時間は、使用する原料、溶媒、反応温度によって異なるが、通常、３０分〜４８時間、好ましくは２４〜４８時間である。
【００４７】
前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。
【００４８】
さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００４９】
本発明のＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤、又は自己免疫性疾患等の予防及び／又は治療剤は、一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。
【００５０】
投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。
【００５１】
経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００５２】
経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては、上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としては、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００５３】
注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【００５４】
坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。
【００５５】
上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。
【００５６】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり０．１ｍｇから１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇから１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇから５００ｍｇを１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００５７】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００５８】
［実施例１］ ＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害試験
１）ＢＲ３発現細胞の樹立
ヒトＢＲ３遺伝子は、GenBank Accession No.AF373846に記載の配列を参考にしてヒトＢ細胞培養株であるＲａｊｉ細胞由来ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲ法により全長を取得しクローニングベクターであるpBlueScript IIベクター（Stratagen社）へサブクローニングした。引き続き同遺伝子を哺乳細胞発現用ベクターであるｐＥＡＫ１０ベクター（EdgeBio社）に挿入し、大腸菌株ＤＨ５α（TOYOBO社）を形質転換してクローンを取得し、プラスミドＤＮＡを大量調製後、リポフェクション法によりハムスター卵巣上皮由来細胞株であるＣＨＯ−Ｋ１細胞にトランスフェクションした。ＣＨＯ−Ｋ１細胞は１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むNutrient Mixture Ham's F-12培地（Sigma社）を用いて継代培養した。ピューロマイシン薬剤耐性細胞クローンを得た後、マウス抗ヒトＢＲ３抗体（Abcam社）及びＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体（Prozyme社）によるフローサイトメトリー法によりＢＲ３タンパクの発現を確認した。
【００５９】
２）結合試験
リガンド−受容体結合試験は以下の通り行った。蛍光標識ＢＡＦＦについては、組換えヒトＢＡＦＦ（PeproTech社）をＦＭＡＴ Ｂｌｕｅ標識キット（Applied Biosystems社）を用いて蛍光標識したものを用いた。ＢＲ３発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞を９６ well black clearマイクロタイタープレートに１．０×１０４で播き、ＣＯ２インキュベータ中で１晩培養した。培地を除去後、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝（ｐＨ７．４）、Hank's Balanced Salt Solution（Sigma社）（０．１％ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３、０．０８％ＣＨＡＰＳを含む）を反応液として、被検化合物、標識ＢＡＦＦの順で加えた後、２５℃、暗所にて６時間静置後の蛍光標識ＢＡＦＦと発現細胞のＢＲ３受容体の親和性を蛍光検出器ＦＭＡＴ８２００ＣＤＳ（Applied Biosystems社）を用いて検出した。蛍光標識ＢＡＦＦのみの最大反応を１００％として、各被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０値）を測定した。なお、化合物１及び２はAsinex社より入手可能であり、本試験においては同社より購入したものをそのまま用いた。ＥＣ５０値は、統計解析プログラム、ＳＡＳ前臨床パッケージＶｅｒ５．０（SAS institute Japan Co., 東京）を用いて算出した。
【００６０】
３）結果
化合物１は０．７μＭ、化合物２は２．６μＭのＩＣ５０値を示した。以上より、本発明の化合物は強いＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害作用を有していることが確認された。したがって、本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、ＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害作用に基づいて、自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤として有効であることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害作用を有していることを初めて見出し、経口投与可能な低分子性の自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群、非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、低分子性の新たな自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を有効成分とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤に関する。より詳細には、本発明は、４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を有効成分とする自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤、後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体における免疫作用は本来、細菌、ウイルスあるいは腫瘍などの異種抗原タンパクを認識して排除するための生体防御機構で、外来抗原に対する特異的な反応が起こり、特異的抗体の産生や細胞障害性Ｔ細胞の活性化を伴う。これら獲得免疫においてＢ細胞は液性免疫を介して中心的な役割を果たし、外来性抗原に対する特異的抗体を産生して異種抗原の排除に働く（非特許文献１）。しかしながら自己免疫疾患においては、自己抗原に対する過剰な反応が起こり、自己抗体の産生やＴ細胞の活性化を伴う。自己免疫反応を背景に有する関節リウマチ（Rheumatoid Arthritis；ＲＡ）や全身性エリテマトーデス（Systemic Lupus Erythematosus；ＳＬＥ）などの自己免疫疾患においては、自己反応性Ｂ細胞及び自己抗体の産生が亢進しており、それゆえにＢ細胞の成熟、活性化並びに抗体産生を制御する機構の解明について多くの研究が行われている。
【０００３】
Ｂ細胞は骨髄造血幹細胞由来で、細胞表面に免疫グロブリンを発現する細胞群であり、末梢血リンパ球の約１０〜３０％を占め、脾臓においてＢ細胞受容体（B Cell Receptor；ＢＣＲ）を介した抗原刺激あるいはＴ細胞からの活性化刺激を受けて、免疫グロブリン産生細胞（形質細胞）へと分化する。活性化されたＢ細胞はインターロイキン−６（ＩＬ−６）や腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−ａｌｐｈａ）などの炎症性サイトカインを産生するとともに、細胞表面に発現するＣＤ４０などの共刺激分子を介してＴ細胞を活性化する。このようにＢ細胞は、自己抗体産生細胞としてのみならず、抗原提示細胞としての機能や、サイトカイン産生細胞、Ｔ細胞とのクロストークを介した自己免疫性疾患の病態形成に大きく関与していることが明らかにされている。さらにＢ細胞に特異的なＣＤ抗原であるＣＤ２０に対するモノクローナル抗体（リツキシマブ、Rituxan， rituximab， 非特許文献２）はＢ細胞性非ホジキンリンパ腫、ＲＡあるいはＳＬＥの症状改善に有効であることが臨床において確認されつつあり、Ｂ細胞を標的とした自己免疫疾患の治療に大きな期待が持たれている。
【０００４】
近年、Ｂ細胞の生存及び成熟因子としてＢＡＦＦ（B cell activating factor belonging to TNF superfamily）が発見された（非特許文献３、特許文献１）。ＢＡＦＦは別名ＢＬｙＳ、ＴＡＬＬ−１、ＴＨＡＮＫ、ｚＴＮＦ４、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、又はＫａｙリガンド（特許文献１参照）としても知られ、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−ａｌｐｈａのスーパーファミリーのメンバーとして位置づけられている。ＢＡＦＦは単球、マクロファージ、樹状細胞表面に前駆体タンパクとして存在し、インターフェロン−ガンマ（interferon-gamma、IFN-gamma）、ＬＰＳ（lipopolysaccharide）あるいはインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）などの刺激によりその発現が亢進される（非特許文献４）。ＢＡＦＦはｆｕｒｉｎ型プロテアーゼのプロセッシングを受けて分泌型となり、この活性化されたＢＡＦＦタンパクはホモ三量体を形成して、同様に三量体としてＢ細胞表面に発現する受容体と結合する（非特許文献５）。ＢＡＦＦのＢ細胞に対する主な作用は、アポトーシスに拮抗的に作用するＢｃｌ−２を誘導して、Ｂ細胞の生存延長や、免疫グロブリンであるＩｇＭ産生亢進などといったＢ細胞の活性化を誘導して自己抗体の過剰産生を亢進する（非特許文献６）。その細胞内シグナルは転写因子ＮＦ−ｋａｐｐａＢ２／ｐ１００がｐ５２へプロセシングされることによる（非特許文献７）。ＢＡＦＦトランスジェニックマウスはリンパ節あるいは脾臓の腫大と、組織中のＢ細胞の過形成、及び重篤な自己免疫疾患様の表現型が確認されている（非特許文献８、非特許文献９）。一方、ＢＡＦＦノックアウトマウスについては、成熟Ｂ細胞がほとんど観察されず、液性免疫応答の欠如が報告されている（非特許文献１０）。
【０００５】
これらＢＡＦＦトランスジェニックマウスやＢＡＦＦノックアウトマウスの表現型などから、Ｂ細胞の活性化を伴う自己免疫疾患への関わりが深いことが考察できる。各種自己免疫疾患治療への応用の可能性は、Matsushitaらの総説で示されており、ＳＬＥ、シェーグレン症候群、ＲＡ、全身性強皮症（Systemic Sclerosis；ＳＳｃ）、多発性硬化症（Multiple Sclerosis：ＭＳ）、分類不能型免疫不全症（Common Variable Immunodeficiency：ＣＶＩＤ）及び非ホジキンリンパ腫など抗腫瘍剤への応用について記載されている（非特許文献１１）。また、後天性免疫不全症候群（Acquired Immune Deficiency Syndrome； ＡＩＤＳ）患者では血中Ｔ細胞が減少するとともにＢ細胞の増加及び免疫グロブリン産生が亢進しており、このＢ細胞表面におけるＢＡＦＦタンパクの発現が亢進していることから、ＡＩＤＳの病態増悪にＢＡＦＦ及びその受容体が関与していることが示唆される（非特許文献１２）。
【０００６】
ＢＡＦＦの受容体としてはＢＣＭＡ（B Cell Maturation Antigen、別名TNFRSF17、非特許文献１３）、ＴＡＣＩ（Transmembrane Activator and CAML-Interactor、別名TNFRSF13B、非特許文献１４）、及びＢＲ３（別名TNFSFR13C、BAFF Receptor、ＢＡＦＦ−Ｒと省略されることもある。非特許文献１５）の３種類の膜貫通型タンパクが報告され、これら受容体はリガンドと同様にＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。このうちＢＣＭＡとＴＡＣＩにはＴＮＦファミリーメンバーの１つであるＡＰＲＩＬ（A Proliferation Inducing Ligand）がリガンドとして結合する（非特許文献１６）。これら３つの受容体のうち、ＢＡＦＦのＢ細胞に対する作用は主にＢＲ３を介していることが示唆されている（非特許文献１５）。ＢＲ３ノックアウトマウスの表現型は、ＢＡＦＦ欠損マウスと同様に成熟型Ｂ細胞の欠失、免疫グロブリン産生能の低下などが観察され（非特許文献１７）、さらに、ＢＲ３遺伝子に自然変異のあるＡ／ＷｙＳｎＪマウスにおいても、末梢Ｂ細胞数の著しい低下が見られるなど、Ｂ細胞の成熟過程におけるＢＡＦＦ及びＢＲ３の重要性が示唆されている（非特許文献１８）。
【０００７】
近年、関節リウマチ（ＲＡ）をはじめとする自己免疫疾患の治療のために、標的タンパクの特異的抗体、あるいは標的タンパクの受容体を利用した可溶性受容体といった生物製剤の開発が行われ、例えば、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−ａｌｐｈａの可溶性受容体タンパク製剤であるエンブレル（Enbrel、Etanercept、非特許文献１９）はＲＡ治療に用いられている。同様に、ＢＡＦＦに対する特異的抗体あるいは、その受容体を利用した可溶性受容体タンパクの開発も進められており、自己免疫疾患及び他のＢ細胞が関わるとされている疾患の治療を目的として開発されている（非特許文献６）。例えば、抗ヒトＢＡＦＦ抗体であるベリムマブ（Belimumab、Lymphostat）は、ＳＬＥに対して（非特許文献２０）、ＴＡＣＩ−Ｆｃ融合タンパクであるAtaciceptもＢＡＦＦの阻害を目的として、ＳＬＥ患者での臨床試験を行っている（非特許文献２１）。また、非ホジキンリンパ腫患者の生存率と血中ＢＡＦＦ濃度の関連も示唆されており（非特許文献２２）、自己免疫疾患以外の疾患においてもＢＡＦＦを標的とした治療法の開発が期待される。さらに、可溶性受容体であるＢＲ３−Ｆｃの開発もＢ細胞活性化を制御する目的で進められている（非特許文献２３）。
【０００８】
以上のようにＢＡＦＦ及びその受容体を標的として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症、分類不能型免疫不全症などの自己免疫疾患、後天性免疫不全症候群及び非ホジキンリンパ腫などの抗腫瘍剤の治療として、抗ＢＡＦＦ抗体、ＢＲ３−Ｆｃタンパクといった生物製剤での開発が進められているが、ＢＡＦＦあるいはその受容体に作用して阻害作用を示す低分子化合物の報告はこれまでになく、僅かにＢＲ３タンパクの部分ペプチドが報告されているのみである（非特許文献２４、特許文献２）。また、前述したとおり、ＢＡＦＦが結合する受容体は少なくとも３種類知られているが、そのうちＢＲ３受容体は唯一ＢＡＦＦ特異的な受容体であり、ＢＡＦＦシグナルを主に伝達すると考えられている。
【０００９】
一方、本発明に関連する４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体には、例えば、ＩＬ−１２産生阻害作用を有し、関節リウマチ等に有用な化合物（特許文献３、特許文献４）、混合リンパ球培養反応阻害作用を有し、骨髄移植・臓器移植時の拒絶反応抑制等に有用な化合物（特許文献５）、抗癌剤として有用な化合物（特許文献６）、β−セクレターゼ阻害作用を有し、アルツハイマー病治療剤として有用な化合物（特許文献７）が開示されている。しかしながら、これらの文献に開示されている化合物は、ピリミジン環上の置換様式が本発明の化合物と異なる。また、いずれの文献においてもＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害や自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群及び非ホジキンリンパ腫に関する記載や示唆はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＷＯ９９／１２９６４号パンフレット
【特許文献２】ＷＯ２００５／００５４６２号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２００９／１００４０６号パンフレット
【特許文献４】ＷＯ２００３／０４７５１６号パンフレット
【特許文献５】特開２００５−１４５９５６号公報
【特許文献６】ＷＯ２００７／０６５９４０号パンフレット
【特許文献７】ＷＯ２００６／０２９８５０号パンフレット
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Roit Iら, IMMUNOLOGY. Fifth Edition(1998), Mosby International Ltd
【非特許文献２】Eisenberg Rら, Arthritis Res. Ther., 5: 157-159(2003)
【非特許文献３】Moore PAら, Science, 285: 260-263(1999)
【非特許文献４】Nardelli Bら, Blood, 97: 198-204(2001)
【非特許文献５】Schneider Pら, J. Exp. Med., 189: 1747-1756(1999)
【非特許文献６】Kalled SLら, Expert Opin. Ther. Targets, 7: 115-123(2003)
【非特許文献７】Kayagaki Nら, Immunity, 10: 515-524(2002)
【非特許文献８】Khare SDら, Proc. Natl. Acad. Sci., 97: 3370-3375(2000)
【非特許文献９】Mackay Fら, J.Exp.Med., 190: 1697-1710(1999)
【非特許文献１０】Schiemann Bら, Science, 293: 2111-2114(2001)
【非特許文献１１】Matsushita Tら, Jpn. J. Clin. Immunol., 28: 333-342(2005)
【非特許文献１２】Moir Sら, J. Exp. Med., 200: 587-599(2004)
【非特許文献１３】Laabi Yら, Nucleic Acids Res., 22: 1147-1154(1994)
【非特許文献１４】von Bulow GUら, Science, 278: 138-141(1997)
【非特許文献１５】Thompson JSら, Science, 293: 2108-2111(2001)
【非特許文献１６】Lopez-Fraga Mら, EMBO Rep., 2: 945-951(2001)
【非特許文献１７】Shulga-Morskaya Sら, J. Immunol., 173: 2331-2341(2004)
【非特許文献１８】Amanna IJら, J.Immunol., 170: 4593-4600(2003)
【非特許文献１９】Lovell DJら, N. Eng. J. Med., 342: 763-769(2000)
【非特許文献２０】Furie Rら, Arthritis Res. Ther., 10: R109(2008)
【非特許文献２１】Dall’Era Mら, Arthritis Rheum. 56: 4142-4150(2007)
【非特許文献２２】Novak AJら, Blood, 104: 2247-2253(2004)
【非特許文献２３】Vugmeyster Yら, Am. J. Pathol., 168: 476-489(2006)
【非特許文献２４】Gordon NCら, Biochemistry, 42: 5977-5983(2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
前述してきたように、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害することにより、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症、分類不能型免疫不全症などの自己免疫疾患の予防及び治療効果、並びに後天性免疫不全症候群又は癌の予防及び／又は治療効果に優れた薬剤を提供することができることが知られている。
本発明の目的は、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害し、自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療効果に優れた薬剤を提供することにある。特に、本発明はＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害し得る低分子化合物、及び当該低分子化合物を用いたＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合の阻害剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
以上のように、ＢＡＦＦの結合阻害剤は、抗ＢＡＦＦ抗体、ＢＲ３−Ｆｃ受容体などの生物製剤での開発が進められているが、低分子化合物の報告はこれまでない。また前述したとおり、ＢＡＦＦが結合する受容体は少なくとも３種類知られているが、そのうちＢＲ３受容体が最も重要であることも示唆されている。そこで、このＢＡＦＦ−ＢＲ３結合を阻害する低分子化合物の創生を目指したスクリーニングを行うこととし、ＢＲ３発現細胞の作製及びそれを用いたリガンド−受容体結合アッセイ系を構築してスクリーニングを行った結果、まったく意外にも本発明の４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体がこのＢＡＦＦ−ＢＲ３結合を阻害することを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち本発明は、次の一般式（１）：
【００１５】
【化１】
【００１６】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として使用される医薬組成物を提供する。本発明の一般式（１）で表される化合物は、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症及び分類不能型免疫不全症などの自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤として使用することができる。また、本発明の一般式（１）で表される化合物は、同様に、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として、後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤、及び非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤として使用することができる。
【００１７】
本発明を詳細に説明すれば、次のとおりである。
［１］前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有してなるＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤。
［２］前記一般式（１）におけるＲ２及びＲ３、Ｒ４及びＲ５の、それぞれの２個の置換基のうちの少なくとも１つが水酸基である前記［１］に記載の結合阻害剤。
［３］一般式（１）で表される化合物が、次の化合物：
（Ｅ）−４−｛２−（２−ヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン、及び、
（Ｅ）−４−｛２−（２、４−ジヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、前記［１］又は［２］に記載の結合阻害剤。
［４］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有してなるＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤として使用するための医薬組成物。
【００１８】
［５］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
［６］前記自己免疫性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症又は分類不能型免疫不全症である、前記［５］に記載の自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
［７］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤。
［８］前記［１］から［３］のいずれかに記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤。
［９］前記非ホジキンリンパ腫が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、慢性Ｂリンパ球性白血病、前駆細胞性白血病、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫、形質細胞性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫又はバーキットリンパ腫である、前記［８］に記載の非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤に関する。
【００１９】
また、本発明は、
［１０］次の一般式（１）：
【００２０】
【化２】
【００２１】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効量投与することを特徴とする自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療方法、
［１１］自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤を製造するための、次の一般式（１）：
【００２２】
【化３】
【００２３】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用、及び
［１２］自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療に用いるための、次の一般式（１）：
【００２４】
【化４】
【００２５】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。
【００２６】
さらに、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を、ＢＲ３受容体を有する細胞に接触させて、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合を阻害する方法に関する。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の、一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、ＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害作用を有し、かつ低分子化合物であり、ＢＡＦＦ受容体の可溶性タンパク等と異なり経口投与が可能であり、自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤として、後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤として、又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明における用語の定義は以下のとおりである。
【００２９】
本明細書中で使用するとき、非ホジキンリンパ腫とは、悪性リンパ腫の中で、ホジキンリンパ腫以外の悪性リンパ腫であり、例えば、Revised European American Lymphoma (REAL)分類などにより既に細分化、体系化されている（例えば、Harris et al., Blood, 84 (5), 1361-1392 (1994)、溝口ら, 別冊医学のあゆみ, 血液疾患Ver.2, 医歯薬出版, 303-307(1998)等を参照）。本発明の非ホジキンリンパ腫としては、例えば、B細胞リンパ腫（前駆B細胞リンパ芽球性リンパ腫(precursor B-lymphoblastic leukemia)、慢性Bリンパ球性白血病(B-cell chronic lymphocytic leukemia)、前駆細胞性白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、小リンパ球性リンパ腫(B-cell small lymphocytic lymphoma)、リンパ形質細胞性リンパ腫(lymphoplasmacytoid lymphoma)、免疫細胞腫(immunocytoma)、マントル細胞リンパ腫 (Mantle cell lymphoma)、濾胞性リンパ腫(follicle center lymphoma)、辺縁リンパ腫(Marginal zone B-cell lymphoma)、ヘアリー細胞白血病(Hairy cell leukemia)、形質細胞腫(Plasmacytoma)、形質細胞性骨髄腫(plasma cell myeloma)、びまん性大細胞型リンパ腫(Diffuse Large B-cell lymphoma)、バーキットリンパ腫(Burkitt‘s lymphoma)等）、T細胞リンパ腫又はNK細胞リンパ腫（慢性Tリンパ球性白血病(T-cell chronic lymphocytic leukernia)、前駆リンパ球性白血病(T-cell prolymphocytic leukemia)、大顆粒Tリンパ球性白血病(T-cell Large granular lymphocyte leukemia)、大顆粒NK細胞性白血病(NK-cell Large granular lymphocyte leukemia)、菌状息肉腫(Mycosis fungoides)、セザリー症候群(Sezary syndrome)、末梢T細胞リンパ腫(Peripheral T-cell lymphomas)、血管免疫芽球性T細胞リンパ腫(Angioimmunoblastic T-cell lymphoma)、血管中枢性リンパ腫(Angiocentric lymphoma)、腸管T細胞リンパ腫(Intestinal T-cell lymphoma)、成人T細胞リンパ腫(Adult T-cell lymphoma)、未分化大細胞リンパ腫(Anaplastic large cell lymphoma)等）等が挙げられる。
【００３０】
本明細書中で使用するとき、「Ｃ１−１０アルキル基」とは、炭素数１〜１０、好ましくは炭素数１〜６、より好ましくは炭素数１〜４の鎖状又は環状の飽和又は不飽和の炭化水素基を示す。「Ｃ１−１０アルキル基」としては、特に限定されないが、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。
【００３１】
一般式（１）中、Ｒ１は「メチル基又はエチル基」であることが好ましく、メチル基であることがより好ましい。
【００３２】
一般式（１）中、Ｒ２は、水酸基であることが好ましい。また、その結合位置は、ピリミジン環との結合位置に対し、オルト位であることが好ましい。
【００３３】
一般式（１）中、Ｒ３は、水素原子であることが好ましい。
【００３４】
一般式（１）中、Ｒ４は、水酸基であることが好ましい。また、その結合位置は、メチレンとの結合位置に対し、オルト位であることが好ましい。
【００３５】
一般式（１）中、Ｒ５は、水素原子又は水酸基のいずれでもよいが、その結合位置は、メチレンとの結合位置に対し、パラ位であることが好ましい。
【００３６】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体の好ましい具体例としては、例えば、下記の化合物を挙げることができる。
【００３７】
【表１】
【００３８】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明の４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。
【００３９】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体として許容される塩としては、具体的には、化合物を塩基性化合物として扱う場合は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との酸付加塩等が挙げられ、化合物を酸性化合物として扱う場合には、無機塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、バリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等）等が挙げられる。
【００４０】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノールなどのアルコールとの溶媒和物）が挙げられる。
【００４１】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体は、公知の方法により製造することができる。例えば、下記反応工程図に示す方法、あるいはこれに準じた方法により製造することができるが、これに限定されるものではない。また、必要に応じて官能基を保護して各反応を行ってもよい。保護、脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。
【００４２】
【化５】
【００４３】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、前記定義と同義であり、Ｒ６は、低級アルキル基を示し、Ｘはハロゲン原子を示す。］
【００４４】
［工程Ａ］アミジン誘導体（２）とケトエステル誘導体（３）を溶媒中、塩基の存在下で反応させることにより、ピリミジン誘導体（４）を製造することができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのようなアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール、エチレングリコールのようなアルコール類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。塩基としては、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド類が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは８０℃〜１１０℃である。本工程おける反応時間は、使用する原料、溶媒、反応温度によって異なるが、通常、１〜７日間、好ましくは１〜３日間である。
【００４５】
［工程Ｂ］ピリミジン誘導体（４）を、溶媒中又は無溶媒でハロゲン化剤と反応させることにより、化合物（５）を製造することができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類等が挙げられる。ハロゲン化剤としては、オキシ塩化リン、オキシ臭化リンのようなオキシハロゲン化リン類；三臭化リン、五塩化リン、五臭化リン等のハロゲン化リン類等が挙げられる。本工程における反応温度は、通常、室温〜１２０℃、好ましくは８０℃〜１００℃である。本工程おける反応時間は、使用する原料、溶媒、反応温度によって異なるが、通常、３０分〜２４時間、好ましくは４〜８時間である。
【００４６】
［工程Ｃ］化合物（５）とヒドラジン誘導体（６）を溶媒中で反応させることにより、本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体を製造することができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのようなアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホランのようなスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、通常、０〜１５０℃、好ましくは６０℃〜１００℃である。本工程おける反応時間は、使用する原料、溶媒、反応温度によって異なるが、通常、３０分〜４８時間、好ましくは２４〜４８時間である。
【００４７】
前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。
【００４８】
さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００４９】
本発明のＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤、又は自己免疫性疾患等の予防及び／又は治療剤は、一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。
【００５０】
投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。
【００５１】
経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００５２】
経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては、上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としては、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００５３】
注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【００５４】
坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。
【００５５】
上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。
【００５６】
本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり０．１ｍｇから１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇから１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇから５００ｍｇを１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００５７】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００５８】
［実施例１］ ＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害試験
１）ＢＲ３発現細胞の樹立
ヒトＢＲ３遺伝子は、GenBank Accession No.AF373846に記載の配列を参考にしてヒトＢ細胞培養株であるＲａｊｉ細胞由来ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲ法により全長を取得しクローニングベクターであるpBlueScript IIベクター（Stratagen社）へサブクローニングした。引き続き同遺伝子を哺乳細胞発現用ベクターであるｐＥＡＫ１０ベクター（EdgeBio社）に挿入し、大腸菌株ＤＨ５α（TOYOBO社）を形質転換してクローンを取得し、プラスミドＤＮＡを大量調製後、リポフェクション法によりハムスター卵巣上皮由来細胞株であるＣＨＯ−Ｋ１細胞にトランスフェクションした。ＣＨＯ−Ｋ１細胞は１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むNutrient Mixture Ham's F-12培地（Sigma社）を用いて継代培養した。ピューロマイシン薬剤耐性細胞クローンを得た後、マウス抗ヒトＢＲ３抗体（Abcam社）及びＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ抗体（Prozyme社）によるフローサイトメトリー法によりＢＲ３タンパクの発現を確認した。
【００５９】
２）結合試験
リガンド−受容体結合試験は以下の通り行った。蛍光標識ＢＡＦＦについては、組換えヒトＢＡＦＦ（PeproTech社）をＦＭＡＴ Ｂｌｕｅ標識キット（Applied Biosystems社）を用いて蛍光標識したものを用いた。ＢＲ３発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞を９６ well black clearマイクロタイタープレートに１．０×１０４で播き、ＣＯ２インキュベータ中で１晩培養した。培地を除去後、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝（ｐＨ７．４）、Hank's Balanced Salt Solution（Sigma社）（０．１％ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３、０．０８％ＣＨＡＰＳを含む）を反応液として、被検化合物、標識ＢＡＦＦの順で加えた後、２５℃、暗所にて６時間静置後の蛍光標識ＢＡＦＦと発現細胞のＢＲ３受容体の親和性を蛍光検出器ＦＭＡＴ８２００ＣＤＳ（Applied Biosystems社）を用いて検出した。蛍光標識ＢＡＦＦのみの最大反応を１００％として、各被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０値）を測定した。なお、化合物１及び２はAsinex社より入手可能であり、本試験においては同社より購入したものをそのまま用いた。ＥＣ５０値は、統計解析プログラム、ＳＡＳ前臨床パッケージＶｅｒ５．０（SAS institute Japan Co., 東京）を用いて算出した。
【００６０】
３）結果
化合物１は０．７μＭ、化合物２は２．６μＭのＩＣ５０値を示した。以上より、本発明の化合物は強いＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害作用を有していることが確認された。したがって、本発明の一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、ＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害作用に基づいて、自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤として有効であることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、一般式（１）で表される４−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニルピリミジン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＢＡＦＦとＢＲ３受容体の結合阻害作用を有していることを初めて見出し、経口投与可能な低分子性の自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群、非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、低分子性の新たな自己免疫性疾患、後天性免疫不全症候群又は非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤。
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物が、次の化合物：
（Ｅ）−４−｛２−（２−ヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン、及び、
（Ｅ）−４−｛２−（２、４−ジヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載のＢＡＦＦの結合阻害剤。
【請求項３】
次の一般式（１）：
【化２】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
前記自己免疫性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症又は分類不能型免疫不全症である、請求項３に記載の自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
【請求項５】
次の一般式（１）：
【化３】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤。
【請求項６】
次の一般式（１）：
【化４】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤。
【請求項７】
前記非ホジキンリンパ腫が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、慢性Ｂリンパ球性白血病、前駆細胞性白血病、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫、形質細胞性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫又はバーキットリンパ腫である、請求項６に記載の非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤。
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とするＢＲ３受容体に対するＢＡＦＦの結合阻害剤。
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物が、次の化合物：
（Ｅ）−４−｛２−（２−ヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン、及び、
（Ｅ）−４−｛２−（２、４−ジヒドロキシベンジリデン）ヒドラジニル｝−２−（２−ヒドロキシフェニル）−６−メチルピリミジン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載のＢＡＦＦの結合阻害剤。
【請求項３】
次の一般式（１）：
【化２】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
前記自己免疫性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性強皮症、多発性硬化症又は分類不能型免疫不全症である、請求項３に記載の自己免疫性疾患の予防及び／又は治療剤。
【請求項５】
次の一般式（１）：
【化３】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療剤。
【請求項６】
次の一般式（１）：
【化４】
［式中、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子又は水酸基を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤。
【請求項７】
前記非ホジキンリンパ腫が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、慢性Ｂリンパ球性白血病、前駆細胞性白血病、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫、形質細胞性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫又はバーキットリンパ腫である、請求項６に記載の非ホジキンリンパ腫の予防及び／又は治療剤。
【公開番号】特開２０１２−１４４４４２（Ｐ２０１２−１４４４４２Ａ）
【公開日】平成２４年８月２日（２０１２．８．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１５０５（Ｐ２０１１−１５０５）
【出願日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度、独立行政法人新エネルギー・産業技術総合開発機構「化合物等を活用した生物システム制御基盤技術開発」に係る委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５９７０１８７１６）
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年８月２日（２０１２．８．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度、独立行政法人新エネルギー・産業技術総合開発機構「化合物等を活用した生物システム制御基盤技術開発」に係る委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５９７０１８７１６）
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【Ｆターム（参考）】
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