Ａ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストおよびその多形体を調製するための方法
【課題】Ａ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストの大規模製造に適した合成を提供すること
【解決手段】本発明は、Ａ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストの大規模調製のための方法に関する。また、その化合物の多形体に、および特定の多形体を単離する方法に関する。本発明は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの合成方法を提供する。アデノシンは、天然に存在するヌクレオシドであり、アデノシン受容体のファミリーと相互作用することによって、その生物学的効果を発揮する。アデノシン受容体のファミリーは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３として知られており、これらのすべてが重要な生理学的過程を調節している。
【解決手段】本発明は、Ａ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストの大規模調製のための方法に関する。また、その化合物の多形体に、および特定の多形体を単離する方法に関する。本発明は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの合成方法を提供する。アデノシンは、天然に存在するヌクレオシドであり、アデノシン受容体のファミリーと相互作用することによって、その生物学的効果を発揮する。アデノシン受容体のファミリーは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３として知られており、これらのすべてが重要な生理学的過程を調節している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６０／８０１，８５７号および２００６年２月３日に出願された米国仮特許出願第６０／７６５，１１４号に対する優先権を主張する２００７年２月２日に出願された米国特許出願第１１／７０１，６９９号の一部継続出願であり、それらの全ての開示は、参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
本発明は、Ａ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストの大規模調製のための方法に関する。また、その化合物の多形体に、および特定の多形体を単離する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
アデノシンは、天然に存在するヌクレオシドであり、アデノシン受容体のファミリーと相互作用することによって、その生物学的効果を発揮する。アデノシン受容体のファミリーは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３として知られており、これらのすべてが重要な生理学的過程を調節している。アデノシンの生物学的効果の１つは、冠血管拡張剤として作用することであり、この結果は、Ａ２Ａアデノシン受容体との相互作用によって生み出される。アデノシンのこの効果は、心臓の画像化の助けとして有用であることが見出されており、造影剤（例えばタリウム２０１）の投与前に冠状動脈を拡張し、ひいては、こうして写し出された画像の観察によって、冠状動脈疾患の有無を決定することができる。このような技術の利点は、冠疾患を有する患者にとって明らかに望ましくないトレッドミル上での運動によって冠血管拡張を促すという、より従来の方法を避けることである。
【０００４】
しかし、アデノシンの投与には、いくつかの不都合がある。アデノシンは、ヒトにおいて非常に短い半減期を有し（１０秒未満）、またＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３受容体アゴニズムに関連する効果のすべてを有する。したがって、選択的なＡ２Ａアデノシン受容体アゴニストの使用、特に、より長い半減期を有し、副作用が少ないか全くないものの使用は、冠血管拡張をもたらす優れた方法を提供する。
【０００５】
これらの望ましい特性をもつ化合物の種類は、米国特許第６４０３５６７号に開示されており、その開示すべてが参照によって本明細書に組み込まれる。特に、この特許に開示されている１つの化合物、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドは、高度に選択的なＡ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストであることが示されており、心臓の画像化に有用な冠血管拡張剤として、現在臨床試験を実施中である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６４０３５６７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
この化合物および類似の化合物における関心が高まっていることを考慮すると、大量の物質を良好な収率および高純度で作る都合の良い方法を提供する、新規合成方法を見出すことが望ましくなってきている。関心対象の化合物を開示している特許（米国特許第６４０３５６７号）は、化合物を調製するいくつかの方法を提供している。しかし、これらの方法は小規模合成には適しているが、この特許に開示されているすべての合成方法は保護基を利用しており、このことが大規模合成には望ましくない。
【０００８】
加えて、所望の生成物（すなわち（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド）は、少なくとも３つの異なる結晶形で存在することができ、このうち最も安定なものは一水和物であることが発見された。この多形体は、相対湿度ストレス条件下で、その融点まで安定である。それ故に、新規合成で製造される最終生成物は、安定な一水和物として得られることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
したがって、本発明の目的は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドおよびその多形体、好ましくはその一水和物としての大規模調製のための都合の良い合成を提供することである。それ故に、第１の態様では、本発明は、式Ｉ
【００１０】
【化１】
の化合物の調製であって、
式（３）
【００１１】
【化２】
の化合物をメチルアミンと接触させることを含む調製に関する。
【００１２】
一実施形態では、反応は、メチルアミンの水溶液中、最初に約０〜５℃の温度で行われ、続いて約５０〜７０℃に温める。あるいは、反応は上述のように行われるが、密閉加圧反応器中で行われる。
【００１３】
第２の実施形態では、生成物を溶媒、例えば、ジメチルスルホキシドに溶かすことと、精製水を加えることと、こうして形成されたスラリーをろ過することと、フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、生成物は純粋な一水和物として単離される。
【００１４】
第２の態様では、本発明は、式（３）
【００１５】
【化３】
の化合物の調製であって、
式（２）
【００１６】
【化４】
の化合物をエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む調製に関する。
【００１７】
一実施形態では、反応は、エタノール中、約８０℃の温度で、約１．１モル当量のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートを用いて行われる。
【００１８】
第３の態様では、本発明は、式（２）
【００１９】
【化５】
の化合物の調製であって、
式（１）
【００２０】
【化６】
の化合物をヒドラジンと接触させることを含む調製に関する。
【００２１】
１４．３〜１６．７倍モル過剰のヒドラジンを使用してよく、反応は、約６０〜６５℃の温度で行うことができる。一実施形態では、ヒドラジンを、最初に約６０〜６５℃に加熱し、続いて式（１）の化合物を加える。式（２）の化合物は、（ａ）反応混合物を約４０℃に冷却することと、（ｂ）温度を約４０℃で維持しながら、４．２〜４．９質量当量の水を加えることと、（ｃ）混合物を約１０℃に冷却し、その温度で少なくとも約１時間維持することと、（ｄ）ろ過することと、（ｅ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、（ｆ）残った固体を真空下にて３０℃を超えない温度で少なくとも１２時間乾燥することとによって単離することができる。
【００２２】
上記の合成は、所望の生成物の大規模合成に適しており、良好な収率で生成されるが、１つの少量の不純物が最終生成物中に見られる。この不純物は、式（２）、すなわち式
【００２３】
【化７】
の化合物の未変化中間体であることが示されている。この不純物は、最終生成物から結晶化によって除去することができるとはいえ、上述の合成の利点をすべて有するが、式（２）の化合物を最終生成物中の不純物として生じさせない代替合成を探索することに決めた。
【００２４】
したがって、第４の態様では、本発明は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドを合成する方法であって、式（４）
【００２５】
【化８】
の化合物をメチルアミンと接触させることによる方法に関する。
【００２６】
一実施形態では、反応は、メチルアミンの水溶液中、最初に約０〜５℃の温度で行われ、続いて約５０〜７０℃に温める。好ましくは、反応は密閉加圧反応器中で行われる。
【００２７】
別の実施形態では、反応は約２．５〜７．５℃の温度で行われる。
【００２８】
さらに別の実施形態では、生成物を溶媒、例えば、ジメチルスルホキシドに溶かすことと、精製水を加えることと、こうして形成されたスラリーをろ過することと、フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、生成物は純粋な一水和物として単離される。いくつかの他の実施形態では、（ａ）反応混合物を真空下にて３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去することと、（ｂ）真空を解き、０〜５℃に約１５分から１時間冷却することと、（ｃ）こうして形成されたスラリーをろ過することと、（ｄ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、（ｅ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、生成物は純粋な一水和物として単離することができる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドは、（ｉ）この化合物をジメチルスルホキシドなどの溶媒に溶かし、約７８〜８８°に加熱することと、（ｉｉ）この溶液からいずれの固体不純物もろ過することと、（ｉｉｉ）追加の溶媒ですすぐことと、（ｉｖ）約７８〜８８°に維持されている精製水に溶液を加えることによって、スラリーを形成することと、（ｖ）スラリーを撹拌することと、（ｖｉ）スラリーを冷却することと、（ｖｉｉ）ろ過することと、（ｖｉｉｉ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、（ｉｘ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、さらに精製されて一水和物の形を生成する。
【００３０】
第５の態様では、本発明は、式（４）
【００３１】
【化９】
の化合物を合成する方法であって、式（２）
【００３２】
【化１０】
の化合物を過剰の、好ましくは約２〜１０倍モル過剰の、より好ましくは約５〜１０倍過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む方法に関する。一実施形態では、反応は、エタノール中、約８０℃の温度で行われる。エチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートは、５〜１０倍過剰で存在する。
【００３３】
さらなる実施形態では、式（２）
【００３４】
【化１１】
の化合物を、酸の存在下で、過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む、式（４）の化合物を合成する追加の方法も提示される。反応は、還流下で行い、一般にエタノール中で行われる。反応は、触媒としてＨＣｌを使用して、または使用せずに行われる。最大０．１モル当量まで、好ましくは約０．０５モル過剰のＨＣｌおよび約５〜１０倍モル過剰、好ましくは約６．８〜７．５倍モル過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートが使用される。この反応の生成物は、（ａ）反応が終了した混合物を約１０℃に冷却することと、（ｂ）ろ過することと、（ｃ）フィルターの内容物をエタノールで洗浄することと、（ｄ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって単離することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物（Ａ形）の１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図２】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物の熱分析を示すグラフである。
【図３】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物のＸ線回折パターンを示す図である。
【図４】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドＢ形のＸ線回折パターンを示す図である。
【図５】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドＣ形のＸ線回折パターンをＡ形と比較して示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
定義および一般的なパラメータ
本明細書において使用される場合、以下の語およびフレーズは、下記に説明される意味を有することが一般に意図される。但し、それらが使用されている状況が他に示している範囲までを除く。
【００３７】
「任意選択の」または「任意選択で」とは、後に記載される事象または状況が、起こりうるまたは起こりえないことを意味し、説明が、前記事象または状況が起こる場合および前記事象または状況が起こらない場合を含むことを意味する。
【００３８】
「治療有効量」という用語は、治療を必要としている哺乳動物に投与する場合、下記に定義されるように、そのような治療を行うのに十分な式Ｉの化合物の量を指す。治療有効量は、治療されている対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与の方法などに応じて変化し、これらは当業者によって容易に決定することができる。
【００３９】
「治療」または「治療すること」という用語は、哺乳動物における疾患の任意の治療を意味し、これには、
（ｉ）疾患を予防すること、すなわち、疾患の臨床症状を発症させないようにすること、（ｉｉ）疾患を阻止すること、すなわち、臨床症状の発症を抑えること、および／または（ｉｉｉ）疾患を和らげること、すなわち、臨床症状を退行させること
が含まれる。
【００４０】
本明細書において使用される場合、「薬学的に許容できる担体」には、任意のおよびすべての、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張遅延剤および吸収遅延剤などが含まれる。そのような媒体および薬剤を薬学的に活性な物質に使用することは、当技術分野においてよく知られている。従来の任意の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療用組成物中にそれを使用することが検討される。補足的な活性成分も、本組成物中に組み込むことができる。
【００４１】
「多形体」という用語は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの非晶形および溶媒和物を含むことが意図される。
【００４２】
この化合物は、少なくとも３つの異なる結晶形で存在することができることが発見されており、それらは本明細書においてＡ形、Ｂ形、Ｃ形および非晶形生成物と称される。
【００４３】
Ａ形：この多形体は、１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをプロトン性溶媒、例えばエタノールもしくはエタノール／水混合物から、または極性溶媒、例えばジメチルスルホキシド／水から結晶化することによって、生成させることができる。Ａ形は、一水和物であることが示されており、周囲温度では種々の多形体のうちで最も安定なものである。Ａ形は、相対湿度ストレス条件下で、その融点まで安定である。
【００４４】
Ｂ形：この多形体は、１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドのトリフルオロエタノール中溶液を、真空下にて周囲温度で蒸発させることによって生成される。この結晶のＸ線分析は、他のいずれの多形体とも明らかに異なっていた（図４を参照のこと）が、Ｘ線分析は乱れた幅広いピークを生じ、多形体は変化する量の水を含んでいたため、その構造を決定することは難しかった。この多形体の調製を確実に再現することは難しいことがわかった。
【００４５】
Ｃ形：この多形体は、１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをアセトニトリル中、６０℃で長期間スラリーにすることによって生成される。この結晶のＸ線分析は、他のいずれの多形体とも明らかに異なっていた（図５を参照のこと）。多形体Ｃは、変化し易い水和物であり、高温では不安定な形に脱溶媒和することが示された。
【００４６】
非晶質：この多形体は、Ａ形多形体を２００℃までの温度で加熱することによって生成される。この多形体は、大気中の水分の存在下で不安定であり、変化し易い水和物を形成する。
Ａ形、Ｂ形、Ｃ形および非晶質の分析技術
Ｘ線粉末回折
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＸＲＤ−６０００Ｘ線粉末回折計を使用し、ＣｕＫα放射線を用いて行った。この機器には、高精度焦点Ｘ線管球が備えられており、管のボルト数およびアンペア数を、それぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。発散および散乱スリットを１°に設定し、受光スリットを０．１５ｍｍに設定した。回折された放射線を、ＮａＩシンチレーション検出器で検出した。３°／分（０．４秒／０．０２°ステップ）で２．５〜４０°２θまでのθ−２θ連続走査を使用した。シリコン標準品を使用して、機器アライメントをチェックした。ＸＲＤ−６０００ ｖ．４．１ソフトウェアを使用して、データを収集し、分析した。
【００４７】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析はまた、ＣＰＳ（湾曲位置敏感型）検出器が備えられたＩｎｅｌ ＸＲＧ−３０００回折計を使用し、１２０°の２８範囲で行った。機器の較正は、シリコン標準品を使用して行った。管のボルト数およびアンペア数を、それぞれ４０ｋＶおよび３０ｍＡに設定した。モノクロメーターのスリットを、長さ５ｍｍ、幅８０μｍに設定した。サンプルを、シリコンインサートを有するアルミニウム製サンプルホルダーまたはＸＲＰＤ品質のガラスキャピラリーに充填した。各キャピラリーを、ゴニオメーターの先端上に取り付けた。このゴニオメーターにはモーターが備えられており、データ取得中にキャピラリーの回転を可能にしている。リアルタイムのデータを、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用して、０．０３°２θの分解能で収集した。通常は、データを３００秒間かけて収集した。２．５〜４０°２θの範囲内のデータポイントのみが、プロットされたＸＲＰＤパターンに表示される。
熱分析
熱重量（ＴＧ）分析は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ２０５０または２９５０熱重量分析器を使用して行った。較正標準は、ニッケルおよびＡｌｕｍｅｌ（商標）であった。サンプルをアルミニウム製サンプルパンに置き、ＴＧ炉の中に挿入し、正確に秤量した。サンプルを窒素中、１０℃／分の速度で、３００℃または３５０℃に加熱した。特に記述がない限り、サンプル重量は、分析前にＴＧＡ炉において２５℃で平衡が保たれていた。
【００４８】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ示差走査熱量計２９２０を使用して行った。正確に秤量したサンプルを、クリンプしたパンまたは密閉パンに入れた。これらのパンにはピンホールが含まれており、圧力の解放が可能になっていた。各サンプルを窒素下にて１０℃／分の速度で、３００℃または３５０℃に加熱した。インジウム金属を較正標準として使用した。温度を転移最大値で記録した。
赤外分光法
Ｅｖｅｒ−Ｇｌｏ中赤外／遠赤外光源、拡張範囲臭化カリウムビームスプリッターおよび重水素化硫酸トリグリシン（ＤＴＧＳ）検出器を備えたＭａｇｎａ８６０（登録商標）フーリエ変換赤外（ＦＴ−ＩＲ）分光光度計（Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｒｐ．）を使用して、赤外スペクトルを得た。特に記述がない限り、Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．拡散反射アクセサリー（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ（商標））を、サンプリングに使用した。各スペクトルは、スペクトル分解能４ｃｍ−１で、２５６回積算されたスキャンを示す。化合物のサンプル調製は、サンプルをマイクロカップに入れ、この物質をすりスライドガラスで平らにすることからなった。バックグラウンドデータセットは、適切な位置に取り付けられたアライメントミラーを用いて得た。スペクトルは、サンプルのシングルビームデータセットの、バックグラウンドのシングルビームデータセットに対する比を表す。機器の波長較正は、ポリスチレンを用いて行った。
ＮＭＲ分光法
５．８７Ｔ（ラーモア周波数：１Ｈ＝２５０ＭＨｚ）で稼働するＢｒｕｋｅｒモデルＡＭ−２５０分光計を使用して、溶液相の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを周囲温度で得た。パルス幅７．５ｐｓおよび取得時間１．６８３４秒を使用して、５０００Ｈｚのスペクトルウィンドウにわたって時間領域データを得た。合計１６，３８４個のデータポイントを収集した。５秒の緩和遅延時間を過渡の間に用いた。各データセットは通常、相互に平均化された１２８個の過渡からなった。スペクトルは、ＧＲＡＭＳ１３２ Ａ１ソフトウェア、バージョン６．００を利用して処理した。自由誘導減衰（ＦＩＤ）をゼロフィリングしてデータポイント数を４倍にし、０．６１Ｈｚの線幅拡大因子を用いて指数関数的に増加させた後、フーリエ変換を行った。１Ｈスペクトルは、内部標準として添加したテトラメチルシラン（０ｐｐｍ）を内部基準とした。
【００４９】
あるいは、ＮＭＲ分析は、実施例４に記載されているように行った。
水分吸着／脱着分析
水分吸着／脱着データは、ＶＴＩ ＳＧＡ−１００ Ｖａｐｏｒ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して収集した。吸脱着データは、窒素パージ下で、５％〜９５％の範囲の相対湿度（ＲＫ）にわたって、１０％ＲＨ間隔で収集した。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）およびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を、較正標準として使用した。分析に使用した平衡基準は、５分で０．０１００％未満の重量変化であり、重量基準が満たされなかった場合には、１８０分の最大平衡時間であった。プロットされたデータは、最初の水分含量に対して補正されていない。
命名法
化合物（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの構造は、以下の通りである。
【００５０】
【化１２】
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの合成
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの大規模合成のための１つの方法を反応スキームＩに示す。すべての反応は通常、窒素雰囲気下で行われる。
【００５１】
【化１３】
工程１−式（２）の調製
式（２）の化合物は、式（１）の化合物から、溶媒の存在下でヒドラジン一水和物との反応によって調製される。反応は、約４５〜５５℃の温度で行われる。反応が終了すると、式（２）の生成物は、式（２）の化合物の溶解度が制限されているプロトン性溶媒、例えばエタノールまたはイソプロパノールを用いて撹拌することによって単離される。混合物を約１〜５時間撹拌し、次いでろ過する。固体は、水を用いて撹拌することと、ろ過することと、水で洗浄し、続いてイソプロパノールで洗浄することと、真空下で乾燥することとによって精製され、これは精製することなく次工程に用いられる。
工程２−式（３）の調製
式（２）の化合物は、次いで、約１〜１．２モル当量のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと反応することによって、式（３）の化合物に変換される。反応は、プロトン性溶媒中、好ましくはエタノール中、約還流温度で約２〜４時間行われる。約０℃に冷却した後、固体をろ過分離し、冷エタノールで洗浄し、減圧下で乾燥させる。式（３）の生成物は、精製することなく次工程に用いられる。
工程３−最終生成物の調製
最終生成物は、式（３）の化合物から、メチルアミン、好ましくはメチルアミン水溶液と反応することによって調製される。反応は、約室温で、約４時間行われる。式Ｉの生成物は、従来の手段によって、例えば、ろ過することと、固体を冷エタノールで洗浄することと、減圧下で乾燥することとによって単離される。
出発物質の調製
（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−２−（６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル）−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−３，４−ジオールが、工程１における出発物質として使用される。この化合物は市販されている。
【００５２】
エチル２−ホルミル−３−オキソプロパノエートが、工程２における出発物質として使用される。それは市販されているか、または反応スキームＩＩに示されるように作ることができる。
【００５３】
【化１４】
エチル３，３−ジエトキシプロピオネートを、強塩基、好ましくは水素化ナトリウムの存在下でギ酸エチルと反応させる。反応は、約０〜５℃で、約２４時間行われる。生成物は、従来の手段によって、例えば、水を加え、従来の溶媒、例えばｔ−ブチルメチルエーテルで不純物を抽出することと、水相を例えば塩酸で酸性化することと、続いてジクロロメタンなどの溶媒で抽出することと、乾燥させた抽出物から溶媒を減圧下で除去することとによって単離される。エチル２−ホルミル−３−オキソプロパノエートは、減圧下で蒸留することによって精製される。
【００５４】
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの大規模合成のための好ましい方法を、反応スキームＩＩＩに示す。
【００５５】
【化１５】
工程１−式（２）の調製
前述のように、式（２）の化合物は、式（１）の化合物から、溶媒の存在下でヒドラジン一水和物との反応によって調製される。しかしこの方法では、１４．３〜１６．７倍モル過剰のヒドラジン一水和物を、最初に約６０〜６５℃に加熱し、続いて式（１）の化合物を加える。温度は反応中、約６０〜６５℃に維持され、この反応は終了するまでに約１から３時間を要する。混合物中に残存する式（１）の化合物のレベルが約０．１０％以下である場合、次いで反応混合物は、約４０℃に冷却される。水がゆっくり加えられている間、温度は維持される。約４．２〜４．９質量当量が加えられると、混合物は約１０℃に冷却され、その温度で１時間以上維持される。
【００５６】
次いで、生成物をろ過によって単離し、水で洗浄し、次いで無水エタノールで洗浄する。固体を真空下にて最大３０℃で１２時間以上乾燥させ、次いでさらに精製することなく次工程に用いる。
工程２−式（４）の調製
式（２）の化合物は、次いで、過剰の、例えば２〜１０倍過剰、好ましくは約５〜１０倍過剰、理想的には約６．８〜７．５倍過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと反応することによって、式（４）の化合物に変換される。反応は、反応スキームＩにおける式（３）の化合物の調製に関して記載されている条件と同じ条件下で行ってよい。
【００５７】
あるいは、約０．０５モル当量のＨＣｌなどの酸も、反応混合物に加えられてよい。反応は、還流温度で約２〜４時間行われ、残存する式（２）の化合物のレベルが０．５０％以下であり、形成されうるいくらかの式（３）の化合物の量が２．５％以下である状態まで行われる。約１０℃に冷却した後、固体をろ過分離し、無水エタノールで洗浄し、真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存するエタノールを除去する。式（４）の生成物は、精製することなく次工程に用いられる。
【００５８】
式（４）の化合物は、（２Ｅ）アルケン誘導体として描かれている。これは、この反応において形成される主要な異性体であるためである。しかし、かなりの量の（２Ｚ）アルケン誘導体もこの反応において形成されうることが留意されるべきである。すなわち、
【００５９】
【化１６】
であり、エチル（２Ｚ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエートと名付けられる。
【００６０】
それ故に、式（４）の化合物は、（２Ｅ）アルケン誘導体のみとして表されるが、「式（４）の化合物」という用語は、その化合物が単独に（２Ｅ）異性体である場合、および生成物の主要部分が（２Ｅ）異性体であり、副次部分の（２Ｚ）異性体も存在する場合の両方を含むことが意図される。工程３に記載されるような、メチルアミンとの反応による、式（４）の化合物の最終生成物への変換は、式（４）の化合物が（２Ｅ）異性体として存在しようが、または（２Ｅ）異性体と（２Ｚ）異性体との混合物として存在しようが、同じ方法で行われる。
工程３−最終生成物の調製
最終生成物は、式（４）の化合物から、メチルアミン、好ましくはメチルアミン水溶液と反応することによって調製される。反応は、最初に約０〜５℃で約８時間、好ましくは加圧反応器中で行われ、続いて約１時間かけて５０〜６０℃に温度を上げ、その温度を１５〜３０分間維持する。
【００６１】
あるいは、メチルアミンを最初に加圧容器中に入れ、約２．５〜７．５℃に冷却し、次いで、その温度を維持しながら式（４）の化合物を加える。反応は、残存する式（３）の化合物のレベルが約０．１０％未満である状態まで行われる。
【００６２】
終了時、生成物は、従来の手段によって、例えば、真空下にて約３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去することによって単離される。次いで、真空を解き、混合物を約０〜５℃に冷却し、その温度で１５分間から１時間維持し、続いてろ過する。こうして得られた固体を、水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄し、減圧下にて約４０℃以下の温度で乾燥させる。
【００６３】
この工程は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として提供する。この多形体は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かすことと、この溶液からいずれの固体不純物もろ過することと、追加のＤＭＳＯですすぐことと、水に加えることによって溶液から一水和物を沈殿させることとによって、さらに精製することができる。この方法が特に効果的であるのは、ＤＭＳＯ溶液および水が約７８〜８８℃に加熱され、撹拌しながら約１時間その温度で維持される場合である。撹拌した後、スラリーを約２０℃にゆっくり冷却する。次いで、最終生成物を、これまでに記載されたように、ろ過によって単離し、精製水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄し、乾燥させる。
【実施例】
【００６４】
（実施例１）
エチル−２−ホルミル−３−オキソプロピオネートの調製
【００６５】
【化１７】
磁気撹拌子、熱電対、デジタル温度計、ガス注入口および排出口ならびに添加用漏斗を備え付けた三つ口または四つ口丸底フラスコをアルゴンで洗い流した。エチル３，３−ジエトキシプロピオネート（６４．５ｇ）のテトラヒドロフラン中溶液を添加用漏斗に投入した。水素化ナトリウム（２１．２ｇの６０％分散物）を反応フラスコに投入し、続いてテトラヒドロフランを加えた。フラスコの内容物を氷浴中で０〜５℃に冷却し、ギ酸エチル（２５７ｇ）を加えた。混合物を０〜５℃に冷却し、５℃未満の内部温度を維持しながら、添加用漏斗の内容物を滴下した。氷浴を取り外し、内容物を周囲温度に温めた。エチル３，３−ジエトキシプロピオネートの消費を、ＴＬＣ分析によってモニターした。氷水（１０．６ｖｏｌ）を加えることによって反応物をクエンチし、メチルｔ−ブチルエーテルで３回抽出し（各５．４ｖｏｌ）、有機層を廃棄した。水相を濃塩酸でｐＨ１から１．５に酸性化した。酸性化した水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣を真空下で蒸留して、エチル−２−ホルミル−３−オキソプロピオネート２７．９２ｇを７０％収率で得た。
【００６６】
（実施例２）
Ａ．２−ヒドラジノアデノシン（２）の調製
【００６７】
【化１８】
撹拌機、ガス注入口、ガス排出口および熱電対を備え付けたフラスコをアルゴンで洗い流した。２−クロロアデノシン半水和物（５３．１ｇ）を加え、続いてヒドラジン一水和物（１３４ｇ）を加えた。混合物を撹拌すると同時に、４０〜４５℃に２時間加熱した。反応の進行を、ＴＬＣ分析によって追跡した。反応が終了すると、熱源を取り外し、エタノール（８００ｍｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌し、次いで沈殿物をろ過によって収集した。ろ過ケーキをエタノールで洗浄し、減圧下で３０分間乾燥させた。撹拌機を備え付けたきれいなフラスコに固体を移し、水（３００ｍｌ）を加えた。懸濁液を室温で１８時間撹拌し、固体をろ過によって単離した。ろ過ケーキを氷水（３００ｍｌ）で洗浄し、続いて氷冷エタノール（３００ｍｌ）で洗浄した。固体を減圧下で乾燥させて、２−ヒドラジノアデノシン（４１．３８ｇ、収率８１．４％、純度９９．３％）を得た。
Ｂ．２−ヒドラジノアデノシン（２）の代替調製
ヒドラジン水和物（２５８ｇ、２５０ｍｌ）を含む反応容器を４０〜５０℃に加熱した。温めた混合物に、４５〜５５℃の間の温度を維持しながら、２−クロロアデノシン半水和物（１００ｇ）を少しずつ加えた。温度をこの温度で２時間保ち、次いで、温度を４５〜５５℃で維持しながら、脱イオン水（５００ｍｌ）を３０分間かけて加えた。次いで混合物を３時間かけて０〜５℃に徐々に冷却し、次いでこの温度でさらに３０分間撹拌した。次いで固体をろ過分離し、冷（２〜５℃）脱イオン水（２００ｍｌ）で洗浄し、続いてエタノール（４００ｍｌ）で洗浄した。固体を真空下で１２時間乾燥させて、２−ヒドラジノアデノシンを得た。
Ｃ．２−ヒドラジノアデノシン（２）の代替調製
反応容器をヒドラジン水和物（１２８５ｇ）で満たす。溶液を約６２℃に加熱し、約６２℃の温度を維持しながら、２−クロロアデノシン（５００ｇ）を加える。混合物中に残存する２−クロロアデノシンのレベルが０．１０％以下である状態まで、混合物を６２℃を目標に、少なくとも２時間維持する。混合物を約４０℃に冷却し、混合物をチェックして、固体が存在していることを確認する。温度を約４０℃に維持しながら、水（２２７５ｇ）をゆっくり加える。混合物を約１０℃に冷却し、１時間以上維持する。生成物を、ろ過によって単離し、水（１１９５ｇ）で洗浄し、次いで無水エタノール（１８８５ｇ）で洗浄する。生成物を、真空下にて最大３０℃で１２時間以上乾燥させ、２−ヒドラジノアデノシンを得る。
【００６８】
（実施例３）
エチル１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−カルボキシレート（３）の調製
【００６９】
【化１９】
撹拌機、ガス注入口、ガス排出口および還流冷却器を備え付けたフラスコに、エチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネート（２３．９３ｇ、０．１７ｍｏｌ）を入れた。２−プロパノールをフラスコに加え、続いて２−ヒドラジノアデノシン（４４．４５ｇ、０．１５ｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱し、撹拌下で２〜４時間還流させ、反応の進行をＴＬＣ分析によって追跡した。反応が終了したと判断されると、熱源を取り外し、混合物を室温に冷却した。懸濁液を撹拌下にて氷浴中で１．５から２時間冷却した。固体を真空ろ過によって単離し、氷冷２−プロパノールで洗浄した。生成物であるエチル１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−カルボキシレートを、恒量に至るまで減圧下で乾燥させた。
【００７０】
（実施例４）
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの調製
【００７１】
【化２０】
エチル１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−カルボキシレート（４６．４ｇ）およびメチルアミン（水中４０％、６００ｍｌ）の混合物を周囲温度で約４時間撹拌し、反応の進行をＨＰＬＣ分析によって追跡した。過剰なメチルアミンの大部分を減圧下で除去し、残りの混合物を０℃で２時間冷却した。固体物質をろ過分離し、氷冷した２００プルーフエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥させて、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として得た。
【００７２】
この物質の構造を１Ｈ ＮＭＲによって確認した（図１および下記を参照のこと）。得られた熱分析（図２を参照のこと）の結果は、１分子の水が存在することと一致した。Ｘ線粉末回折パターンを得た（図３）。
【００７３】
【化２１】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、以下のようにして得た。上記で得られた物質の２つのサンプルを量り分け、ｄ６−ＤＭＳＯに溶かした。５．３ｍｇは１Ｈスペクトル用に使用し、２０．８ｍｇは１３Ｃスペクトル用に使用した。１Ｈについては４００ＭＨｚで、および１３Ｃについては１００ＭＨｚで稼働するＪＥＯＬ Ｅｃｌｉｐｓｅ＋４００分光計を使用して、すべてのスペクトルを周囲温度で得た。
【００７４】
【表１】
（実施例５）
Ａ．エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエート（４）の調製
【００７５】
【化２２】
２−ヒドラジノアデノシン（１００ｇ、０．３４ｍｏｌ）、エチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネート（２４２ｇ、１．７ｍｏｌ）および無水エタノールの混合物を反応器に投入し、この混合物を加熱して２時間還流させた。反応が終了したと判断されると、熱源を取り外し、混合物を３時間かけて５〜１０℃に徐々に冷却した。スラリーをこの温度で３０分間撹拌し、混合物をろ過した。固体物質を冷（５〜１０℃）無水エタノールで洗浄し、次いで真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥させて、エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）−ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエートを得た。
Ｂ．エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエート（４）の代替調製
反応容器を２−ヒドラジノアデノシン（４５０ｇ）および無水エタノール（１１３７６ｇ）で満たす。ＨＣｌ（７．４７ｇ）およびエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネート（１５５７ｇ）を加える。混合物を加熱して還流させ、サンプル採取し、混合物中に残存する２−ヒドラジノアデノシンのレベルが０．５０％以下であり、式（３）の化合物のレベルが２．５％以下である状態まで行う。混合物を約１０℃にゆっくり冷却する。生成物である式（４）の化合物をろ過によって単離し、無水エタノール（５１２１ｇ）で洗浄する。生成物を真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存するエタノールが５０００ｐｐｍ以下である状態まで行い、エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）−ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエートを得る。
【００７６】
実施例５Ａの生成物の元素分析によって、以下の結果を得た：Ｃ、４８．７５％；Ｈ、４．８６％；Ｎ、１８．０５％；Ｏ、２７．５７。理論上：Ｃ、４９．７２％；Ｈ、４．７４％；Ｎ、１８．４５％；Ｏ、２７．０９。分析は、所望の生成物の半水和物に対する実験誤差限界内に相当する（Ｃ、４８．８９％；Ｈ、４．８１％；Ｎ、１８．１％；Ｏ、２８．１２）。
【００７７】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、以下のようにして得た。式（４）の化合物２０．２ｍｇを約０．７５ｍｌのＤＭＳＯ−ｄ６に溶かし、１Ｈについては４００ＭＨｚで、および１３Ｃについては１００ＭＨｚで稼働するＪＥＯＬ ＥＣＸ−４００ＮＭＲ分光計を使用して、スペクトルを周囲温度で得た。化学シフトはＤＭＳＯ溶媒を基準とし、１Ｈについては２．５０ｐｐｍおよび１３Ｃについては３９．５ｐｐｍを基準とした。
結果
１Ｈおよび１３Ｃの化学シフトを表１に掲載する。約６０／３０の比で存在する２つの異性体は、１Ｈおよび１３Ｃの両方のスペクトル中に見られ、表中では主要および副次として分類した。
【００７８】
【表２】
式（４）の化合物は、以下の２つの異性体
【００７９】
【化２３】
の混合物であることが確認された。
【００８０】
（実施例６）
Ａ．化合物（４）からの（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの調製
【００８１】
【化２４】
４０％メチルアミン水溶液（１３００ｍｌ）を加圧反応器に入れ、０〜５℃に冷却し、実施例５Ａの生成物（エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエート（１００ｇ）を加えた。混合物を０〜５℃で少なくとも８時間撹拌し、終了を得るために反応をモニターした。終了すると、混合物を温め、５０〜６０℃の間の温度を１時間維持し、次いで１時間かけて３０℃未満に冷却した。温度が３０℃未満になると、１００〜１５０ｍｍＨｇの圧力を使用して混合物を脱気し、温度を０〜５℃に下げた。１００〜１５０ｍｍＨｇの圧力を維持しながら、混合物を０〜５℃で少なくとも１時間撹拌した。次いで、真空を中止して窒素で置換し、温度を０〜５℃で３０分間以上維持した。次いで、固体生成物をろ過分離し、水（５００ｍｌ×３回）で洗浄し、次いで無水エタノール（６２５ｍｌ）で洗浄した。生成物を、真空下で温度が４０℃を超えないようにしながら乾燥させて、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として得た。
Ｂ．化合物（４）からの（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの代替調製
加圧容器を４７％メチルアミン水溶液（１００８０ｇ）で満たす。溶液を冷却し、５℃の目標温度を維持しながら、上述の実施例５Ｂにおいて調製された式（４）の化合物（６００ｇ）を加える。混合物を５℃の目標温度で撹拌し、混合物中に残存する式（３）の化合物のレベルが０．１０％未満である状態まで行う。反応混合物を真空下にて３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去する。真空を解き、混合物を２．５℃に冷却し、少なくとも３０分間維持する。次いで、生成物をろ過によって単離し、水（９０００ｇ以上）で洗浄し、次いで無水エタノール（２９６４ｇ以上）で洗浄する。生成物を真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存するエタノールが５０００ｐｐｍ以下である状態まで行い、粗（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として得る。
【００８２】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、以下のようにして得た。実施例６Ａにおいて得られた物質の２つのサンプルを量り分け、ｄ６−ＤＭＳＯに溶かした。５．３ｍｇは１Ｈスペクトル用に使用し、２０．８ｍｇは１３Ｃスペクトル用に使用した。１Ｈについては４００ＭＨｚで、および１３Ｃについては１００ＭＨｚで稼働するＪＥＯＬ Ｅｃｌｉｐｓｅ＋４００分光計を使用して、すべてのスペクトルを周囲温度で得た。
【００８３】
【表３−１】
【００８４】
【表３−２】
元素分析によって、以下の結果を得た：Ｃ、４３．９６％；Ｈ、４．９４％；Ｎ、２７．９４。理論上：Ｃ、４４．１２％；Ｈ、４．９４％；Ｎ、２７．４４％；Ｏ、２７．０９。分析は、一水和物に対する実験誤差限界内に相当する。
【００８５】
（実施例７）
Ａ．（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物の精製
実施例４において調製された（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物（１００ｇ）のジメチルスルホキシド（３００ｍｌ）中溶液を、０．６から０．８ミクロンの前置フィルターおよび０．２ミクロンのフィルターを通してろ過し、いずれの固体不純物も除去した。次いで、ろ液を脱イオン水（１リットル）に、撹拌しながら１時間かけてゆっくり加え、こうして生成されたスラリーを１時間以上撹拌した。固体をろ過分離し、脱イオン水（１リットル×２回）で洗浄し、真空下で１時間以上乾燥させた。
【００８６】
次いで、乾燥させた生成物を、脱イオン水（１．５リットル）を用いて２時間以上再びスラリーにし、ろ過分離し、脱イオン水（１リットル）で洗浄し、続いて無水エタノール（７５０ｍｌ）で洗浄した。精製された生成物を真空下にて４０℃以下の温度で１２時間以上乾燥させて、２−ヒドラジノアデノシンの不純物が全くない、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物を得た。
Ｂ．（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物の代替精製
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物（４００ｇ）の溶液をＤＭＳＯ（１３２０ｇ）に溶かし、この溶液を０．６から０．８ミクロンおよび０．２ミクロンのインラインフィルターに順に通してろ過する。追加のＤＭＳＯ（８８０ｇ）を使用して、フィルター系をすすぐ。８３℃の目標温度を維持しながら、溶液を精製水（５０００ｇ）にゆっくり加える。加えている間に生成物が結晶化し始め、スラリーを８３℃の目標温度で約１時間撹拌する。混合物を２０℃にゆっくり冷却する。生成物をろ過によって単離し、精製水（８０００ｇ）で洗浄する。
【００８７】
固体を容器に投入し、精製水（６０００ｇ）を加える。スラリーを約１時間混合する。生成物をろ過によって単離し、精製水（４０００ｇ）で洗浄し、次いで無水エタノール（３１６０ｇ）で洗浄する。生成物を真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存する水分含量が５．５％以下であり、残存するエタノールが２０００ｐｐｍ以下である状態まで行い、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物を得る。
本発明の好ましい実施形態においては、以下が提供される。
（項１）
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド
【化２５】
を合成する方法であって、式（４）
【化２６】
の化合物をメチルアミン水溶液と、約２．５〜７．５℃の温度で接触させることによる方法。
（項２）
反応を密閉加圧反応器中で行う、上記項１に記載の方法。
（項３）
生成物を、
（ａ）真空下にて３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去することと、
（ｂ）前記真空を解き、０〜５℃に約１５分から１時間冷却することと、
（ｃ）こうして形成されたスラリーをろ過することと、
（ｄ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、
（ｅ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することと
によって単離する、上記項２に記載の方法。
（項４）
前記（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの最終生成物を、
（ｉ）上記項３に記載の工程（ｅ）由来の前記乾燥固体を溶媒に溶かすことと、
（ｉｉ）前記溶液からいずれの固体不純物もろ過することと、
（ｉｉｉ）追加の溶媒ですすぐことと、
（ｉｖ）約７８〜８８°に維持されている精製水に溶液を加えることによって、スラリーを形成することと、
（ｖ）前記スラリーを撹拌することと、
（ｖｉ）前記スラリーを冷却することと、
（ｖｉｉ）ろ過することと、
（ｖｉｉｉ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、
（ｉｘ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することと
によってさらに精製する、上記項３に記載の方法。
（項５）
工程（ｉ）および（ｉｉｉ）において使用される前記溶媒がジメチルスルホキシドである、上記項４に記載の方法。
（項６）
最終生成物中に残存する水分含量が５．５％以下であり、残存するエタノールが２０００ｐｐｍ以下である、上記項５に記載の方法。
（項７）
式（４）
【化２７】
の化合物を合成する方法であって、
式（２）
【化２８】
の化合物を、任意選択で酸の存在下で、過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む方法。
（項８）
反応をエタノール中で行う、上記項６に記載の方法。
（項９）
前記酸はＨＣｌであり、最大０．１モル当量までを使用する、上記項６に記載の方法。
（項１０）
反応を還流下で行う、上記項９に記載の方法。
（項１１）
約５〜１０倍モル過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートを使用する、上記項６に記載の方法。
（項１２）
約６．８〜７．５倍モル過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートを使用する、上記項１１に記載の方法。
（項１３）
生成物を、
（ａ）反応が終了した混合物を約１０℃に冷却することと、
（ｂ）ろ過することと、
（ｃ）フィルターの内容物をエタノールで洗浄することと、
（ｄ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することと
によって単離する、上記項１２に記載の方法。
（項１４）
式（２）
【化２９】
の化合物の調製方法であって、
式（１）
【化３０】
の化合物を１４．３〜１６．７倍モル過剰のヒドラジンと、約６０〜６５℃の温度で反応させることを含む方法。
（項１５）
前記ヒドラジンを、最初に約６０〜６５℃に加熱し、続いて式（１）の前記化合物を加える、上記項１４に記載の方法。
（項１６）
式（２）の前記化合物を、
（ａ）前記反応混合物を約４０℃に冷却することと、
（ｂ）温度を約４０℃で維持しながら、４．２〜４．９質量当量の水を加えることと、
（ｃ）前記混合物を約１０℃に冷却し、その温度で少なくとも約１時間維持することと、（ｄ）ろ過することと、
（ｅ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、
（ｆ）残った固体を真空下にて３０℃を超えない温度で少なくとも１２時間乾燥することと
によって単離する、上記項１４に記載の方法。
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６０／８０１，８５７号および２００６年２月３日に出願された米国仮特許出願第６０／７６５，１１４号に対する優先権を主張する２００７年２月２日に出願された米国特許出願第１１／７０１，６９９号の一部継続出願であり、それらの全ての開示は、参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
本発明は、Ａ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストの大規模調製のための方法に関する。また、その化合物の多形体に、および特定の多形体を単離する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
アデノシンは、天然に存在するヌクレオシドであり、アデノシン受容体のファミリーと相互作用することによって、その生物学的効果を発揮する。アデノシン受容体のファミリーは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３として知られており、これらのすべてが重要な生理学的過程を調節している。アデノシンの生物学的効果の１つは、冠血管拡張剤として作用することであり、この結果は、Ａ２Ａアデノシン受容体との相互作用によって生み出される。アデノシンのこの効果は、心臓の画像化の助けとして有用であることが見出されており、造影剤（例えばタリウム２０１）の投与前に冠状動脈を拡張し、ひいては、こうして写し出された画像の観察によって、冠状動脈疾患の有無を決定することができる。このような技術の利点は、冠疾患を有する患者にとって明らかに望ましくないトレッドミル上での運動によって冠血管拡張を促すという、より従来の方法を避けることである。
【０００４】
しかし、アデノシンの投与には、いくつかの不都合がある。アデノシンは、ヒトにおいて非常に短い半減期を有し（１０秒未満）、またＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３受容体アゴニズムに関連する効果のすべてを有する。したがって、選択的なＡ２Ａアデノシン受容体アゴニストの使用、特に、より長い半減期を有し、副作用が少ないか全くないものの使用は、冠血管拡張をもたらす優れた方法を提供する。
【０００５】
これらの望ましい特性をもつ化合物の種類は、米国特許第６４０３５６７号に開示されており、その開示すべてが参照によって本明細書に組み込まれる。特に、この特許に開示されている１つの化合物、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドは、高度に選択的なＡ２Ａ−アデノシン受容体アゴニストであることが示されており、心臓の画像化に有用な冠血管拡張剤として、現在臨床試験を実施中である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６４０３５６７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
この化合物および類似の化合物における関心が高まっていることを考慮すると、大量の物質を良好な収率および高純度で作る都合の良い方法を提供する、新規合成方法を見出すことが望ましくなってきている。関心対象の化合物を開示している特許（米国特許第６４０３５６７号）は、化合物を調製するいくつかの方法を提供している。しかし、これらの方法は小規模合成には適しているが、この特許に開示されているすべての合成方法は保護基を利用しており、このことが大規模合成には望ましくない。
【０００８】
加えて、所望の生成物（すなわち（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド）は、少なくとも３つの異なる結晶形で存在することができ、このうち最も安定なものは一水和物であることが発見された。この多形体は、相対湿度ストレス条件下で、その融点まで安定である。それ故に、新規合成で製造される最終生成物は、安定な一水和物として得られることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
したがって、本発明の目的は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドおよびその多形体、好ましくはその一水和物としての大規模調製のための都合の良い合成を提供することである。それ故に、第１の態様では、本発明は、式Ｉ
【００１０】
【化１】
の化合物の調製であって、
式（３）
【００１１】
【化２】
の化合物をメチルアミンと接触させることを含む調製に関する。
【００１２】
一実施形態では、反応は、メチルアミンの水溶液中、最初に約０〜５℃の温度で行われ、続いて約５０〜７０℃に温める。あるいは、反応は上述のように行われるが、密閉加圧反応器中で行われる。
【００１３】
第２の実施形態では、生成物を溶媒、例えば、ジメチルスルホキシドに溶かすことと、精製水を加えることと、こうして形成されたスラリーをろ過することと、フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、生成物は純粋な一水和物として単離される。
【００１４】
第２の態様では、本発明は、式（３）
【００１５】
【化３】
の化合物の調製であって、
式（２）
【００１６】
【化４】
の化合物をエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む調製に関する。
【００１７】
一実施形態では、反応は、エタノール中、約８０℃の温度で、約１．１モル当量のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートを用いて行われる。
【００１８】
第３の態様では、本発明は、式（２）
【００１９】
【化５】
の化合物の調製であって、
式（１）
【００２０】
【化６】
の化合物をヒドラジンと接触させることを含む調製に関する。
【００２１】
１４．３〜１６．７倍モル過剰のヒドラジンを使用してよく、反応は、約６０〜６５℃の温度で行うことができる。一実施形態では、ヒドラジンを、最初に約６０〜６５℃に加熱し、続いて式（１）の化合物を加える。式（２）の化合物は、（ａ）反応混合物を約４０℃に冷却することと、（ｂ）温度を約４０℃で維持しながら、４．２〜４．９質量当量の水を加えることと、（ｃ）混合物を約１０℃に冷却し、その温度で少なくとも約１時間維持することと、（ｄ）ろ過することと、（ｅ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、（ｆ）残った固体を真空下にて３０℃を超えない温度で少なくとも１２時間乾燥することとによって単離することができる。
【００２２】
上記の合成は、所望の生成物の大規模合成に適しており、良好な収率で生成されるが、１つの少量の不純物が最終生成物中に見られる。この不純物は、式（２）、すなわち式
【００２３】
【化７】
の化合物の未変化中間体であることが示されている。この不純物は、最終生成物から結晶化によって除去することができるとはいえ、上述の合成の利点をすべて有するが、式（２）の化合物を最終生成物中の不純物として生じさせない代替合成を探索することに決めた。
【００２４】
したがって、第４の態様では、本発明は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドを合成する方法であって、式（４）
【００２５】
【化８】
の化合物をメチルアミンと接触させることによる方法に関する。
【００２６】
一実施形態では、反応は、メチルアミンの水溶液中、最初に約０〜５℃の温度で行われ、続いて約５０〜７０℃に温める。好ましくは、反応は密閉加圧反応器中で行われる。
【００２７】
別の実施形態では、反応は約２．５〜７．５℃の温度で行われる。
【００２８】
さらに別の実施形態では、生成物を溶媒、例えば、ジメチルスルホキシドに溶かすことと、精製水を加えることと、こうして形成されたスラリーをろ過することと、フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、生成物は純粋な一水和物として単離される。いくつかの他の実施形態では、（ａ）反応混合物を真空下にて３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去することと、（ｂ）真空を解き、０〜５℃に約１５分から１時間冷却することと、（ｃ）こうして形成されたスラリーをろ過することと、（ｄ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、（ｅ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、生成物は純粋な一水和物として単離することができる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドは、（ｉ）この化合物をジメチルスルホキシドなどの溶媒に溶かし、約７８〜８８°に加熱することと、（ｉｉ）この溶液からいずれの固体不純物もろ過することと、（ｉｉｉ）追加の溶媒ですすぐことと、（ｉｖ）約７８〜８８°に維持されている精製水に溶液を加えることによって、スラリーを形成することと、（ｖ）スラリーを撹拌することと、（ｖｉ）スラリーを冷却することと、（ｖｉｉ）ろ過することと、（ｖｉｉｉ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、（ｉｘ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって、さらに精製されて一水和物の形を生成する。
【００３０】
第５の態様では、本発明は、式（４）
【００３１】
【化９】
の化合物を合成する方法であって、式（２）
【００３２】
【化１０】
の化合物を過剰の、好ましくは約２〜１０倍モル過剰の、より好ましくは約５〜１０倍過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む方法に関する。一実施形態では、反応は、エタノール中、約８０℃の温度で行われる。エチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートは、５〜１０倍過剰で存在する。
【００３３】
さらなる実施形態では、式（２）
【００３４】
【化１１】
の化合物を、酸の存在下で、過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む、式（４）の化合物を合成する追加の方法も提示される。反応は、還流下で行い、一般にエタノール中で行われる。反応は、触媒としてＨＣｌを使用して、または使用せずに行われる。最大０．１モル当量まで、好ましくは約０．０５モル過剰のＨＣｌおよび約５〜１０倍モル過剰、好ましくは約６．８〜７．５倍モル過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートが使用される。この反応の生成物は、（ａ）反応が終了した混合物を約１０℃に冷却することと、（ｂ）ろ過することと、（ｃ）フィルターの内容物をエタノールで洗浄することと、（ｄ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することとによって単離することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物（Ａ形）の１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図２】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物の熱分析を示すグラフである。
【図３】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物のＸ線回折パターンを示す図である。
【図４】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドＢ形のＸ線回折パターンを示す図である。
【図５】（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドＣ形のＸ線回折パターンをＡ形と比較して示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
定義および一般的なパラメータ
本明細書において使用される場合、以下の語およびフレーズは、下記に説明される意味を有することが一般に意図される。但し、それらが使用されている状況が他に示している範囲までを除く。
【００３７】
「任意選択の」または「任意選択で」とは、後に記載される事象または状況が、起こりうるまたは起こりえないことを意味し、説明が、前記事象または状況が起こる場合および前記事象または状況が起こらない場合を含むことを意味する。
【００３８】
「治療有効量」という用語は、治療を必要としている哺乳動物に投与する場合、下記に定義されるように、そのような治療を行うのに十分な式Ｉの化合物の量を指す。治療有効量は、治療されている対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与の方法などに応じて変化し、これらは当業者によって容易に決定することができる。
【００３９】
「治療」または「治療すること」という用語は、哺乳動物における疾患の任意の治療を意味し、これには、
（ｉ）疾患を予防すること、すなわち、疾患の臨床症状を発症させないようにすること、（ｉｉ）疾患を阻止すること、すなわち、臨床症状の発症を抑えること、および／または（ｉｉｉ）疾患を和らげること、すなわち、臨床症状を退行させること
が含まれる。
【００４０】
本明細書において使用される場合、「薬学的に許容できる担体」には、任意のおよびすべての、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張遅延剤および吸収遅延剤などが含まれる。そのような媒体および薬剤を薬学的に活性な物質に使用することは、当技術分野においてよく知られている。従来の任意の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療用組成物中にそれを使用することが検討される。補足的な活性成分も、本組成物中に組み込むことができる。
【００４１】
「多形体」という用語は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの非晶形および溶媒和物を含むことが意図される。
【００４２】
この化合物は、少なくとも３つの異なる結晶形で存在することができることが発見されており、それらは本明細書においてＡ形、Ｂ形、Ｃ形および非晶形生成物と称される。
【００４３】
Ａ形：この多形体は、１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをプロトン性溶媒、例えばエタノールもしくはエタノール／水混合物から、または極性溶媒、例えばジメチルスルホキシド／水から結晶化することによって、生成させることができる。Ａ形は、一水和物であることが示されており、周囲温度では種々の多形体のうちで最も安定なものである。Ａ形は、相対湿度ストレス条件下で、その融点まで安定である。
【００４４】
Ｂ形：この多形体は、１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドのトリフルオロエタノール中溶液を、真空下にて周囲温度で蒸発させることによって生成される。この結晶のＸ線分析は、他のいずれの多形体とも明らかに異なっていた（図４を参照のこと）が、Ｘ線分析は乱れた幅広いピークを生じ、多形体は変化する量の水を含んでいたため、その構造を決定することは難しかった。この多形体の調製を確実に再現することは難しいことがわかった。
【００４５】
Ｃ形：この多形体は、１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをアセトニトリル中、６０℃で長期間スラリーにすることによって生成される。この結晶のＸ線分析は、他のいずれの多形体とも明らかに異なっていた（図５を参照のこと）。多形体Ｃは、変化し易い水和物であり、高温では不安定な形に脱溶媒和することが示された。
【００４６】
非晶質：この多形体は、Ａ形多形体を２００℃までの温度で加熱することによって生成される。この多形体は、大気中の水分の存在下で不安定であり、変化し易い水和物を形成する。
Ａ形、Ｂ形、Ｃ形および非晶質の分析技術
Ｘ線粉末回折
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＸＲＤ−６０００Ｘ線粉末回折計を使用し、ＣｕＫα放射線を用いて行った。この機器には、高精度焦点Ｘ線管球が備えられており、管のボルト数およびアンペア数を、それぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。発散および散乱スリットを１°に設定し、受光スリットを０．１５ｍｍに設定した。回折された放射線を、ＮａＩシンチレーション検出器で検出した。３°／分（０．４秒／０．０２°ステップ）で２．５〜４０°２θまでのθ−２θ連続走査を使用した。シリコン標準品を使用して、機器アライメントをチェックした。ＸＲＤ−６０００ ｖ．４．１ソフトウェアを使用して、データを収集し、分析した。
【００４７】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析はまた、ＣＰＳ（湾曲位置敏感型）検出器が備えられたＩｎｅｌ ＸＲＧ−３０００回折計を使用し、１２０°の２８範囲で行った。機器の較正は、シリコン標準品を使用して行った。管のボルト数およびアンペア数を、それぞれ４０ｋＶおよび３０ｍＡに設定した。モノクロメーターのスリットを、長さ５ｍｍ、幅８０μｍに設定した。サンプルを、シリコンインサートを有するアルミニウム製サンプルホルダーまたはＸＲＰＤ品質のガラスキャピラリーに充填した。各キャピラリーを、ゴニオメーターの先端上に取り付けた。このゴニオメーターにはモーターが備えられており、データ取得中にキャピラリーの回転を可能にしている。リアルタイムのデータを、Ｃｕ−Ｋα放射線を使用して、０．０３°２θの分解能で収集した。通常は、データを３００秒間かけて収集した。２．５〜４０°２θの範囲内のデータポイントのみが、プロットされたＸＲＰＤパターンに表示される。
熱分析
熱重量（ＴＧ）分析は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ２０５０または２９５０熱重量分析器を使用して行った。較正標準は、ニッケルおよびＡｌｕｍｅｌ（商標）であった。サンプルをアルミニウム製サンプルパンに置き、ＴＧ炉の中に挿入し、正確に秤量した。サンプルを窒素中、１０℃／分の速度で、３００℃または３５０℃に加熱した。特に記述がない限り、サンプル重量は、分析前にＴＧＡ炉において２５℃で平衡が保たれていた。
【００４８】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ示差走査熱量計２９２０を使用して行った。正確に秤量したサンプルを、クリンプしたパンまたは密閉パンに入れた。これらのパンにはピンホールが含まれており、圧力の解放が可能になっていた。各サンプルを窒素下にて１０℃／分の速度で、３００℃または３５０℃に加熱した。インジウム金属を較正標準として使用した。温度を転移最大値で記録した。
赤外分光法
Ｅｖｅｒ−Ｇｌｏ中赤外／遠赤外光源、拡張範囲臭化カリウムビームスプリッターおよび重水素化硫酸トリグリシン（ＤＴＧＳ）検出器を備えたＭａｇｎａ８６０（登録商標）フーリエ変換赤外（ＦＴ−ＩＲ）分光光度計（Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｒｐ．）を使用して、赤外スペクトルを得た。特に記述がない限り、Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．拡散反射アクセサリー（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ（商標））を、サンプリングに使用した。各スペクトルは、スペクトル分解能４ｃｍ−１で、２５６回積算されたスキャンを示す。化合物のサンプル調製は、サンプルをマイクロカップに入れ、この物質をすりスライドガラスで平らにすることからなった。バックグラウンドデータセットは、適切な位置に取り付けられたアライメントミラーを用いて得た。スペクトルは、サンプルのシングルビームデータセットの、バックグラウンドのシングルビームデータセットに対する比を表す。機器の波長較正は、ポリスチレンを用いて行った。
ＮＭＲ分光法
５．８７Ｔ（ラーモア周波数：１Ｈ＝２５０ＭＨｚ）で稼働するＢｒｕｋｅｒモデルＡＭ−２５０分光計を使用して、溶液相の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを周囲温度で得た。パルス幅７．５ｐｓおよび取得時間１．６８３４秒を使用して、５０００Ｈｚのスペクトルウィンドウにわたって時間領域データを得た。合計１６，３８４個のデータポイントを収集した。５秒の緩和遅延時間を過渡の間に用いた。各データセットは通常、相互に平均化された１２８個の過渡からなった。スペクトルは、ＧＲＡＭＳ１３２ Ａ１ソフトウェア、バージョン６．００を利用して処理した。自由誘導減衰（ＦＩＤ）をゼロフィリングしてデータポイント数を４倍にし、０．６１Ｈｚの線幅拡大因子を用いて指数関数的に増加させた後、フーリエ変換を行った。１Ｈスペクトルは、内部標準として添加したテトラメチルシラン（０ｐｐｍ）を内部基準とした。
【００４９】
あるいは、ＮＭＲ分析は、実施例４に記載されているように行った。
水分吸着／脱着分析
水分吸着／脱着データは、ＶＴＩ ＳＧＡ−１００ Ｖａｐｏｒ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して収集した。吸脱着データは、窒素パージ下で、５％〜９５％の範囲の相対湿度（ＲＫ）にわたって、１０％ＲＨ間隔で収集した。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）およびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を、較正標準として使用した。分析に使用した平衡基準は、５分で０．０１００％未満の重量変化であり、重量基準が満たされなかった場合には、１８０分の最大平衡時間であった。プロットされたデータは、最初の水分含量に対して補正されていない。
命名法
化合物（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの構造は、以下の通りである。
【００５０】
【化１２】
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの合成
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの大規模合成のための１つの方法を反応スキームＩに示す。すべての反応は通常、窒素雰囲気下で行われる。
【００５１】
【化１３】
工程１−式（２）の調製
式（２）の化合物は、式（１）の化合物から、溶媒の存在下でヒドラジン一水和物との反応によって調製される。反応は、約４５〜５５℃の温度で行われる。反応が終了すると、式（２）の生成物は、式（２）の化合物の溶解度が制限されているプロトン性溶媒、例えばエタノールまたはイソプロパノールを用いて撹拌することによって単離される。混合物を約１〜５時間撹拌し、次いでろ過する。固体は、水を用いて撹拌することと、ろ過することと、水で洗浄し、続いてイソプロパノールで洗浄することと、真空下で乾燥することとによって精製され、これは精製することなく次工程に用いられる。
工程２−式（３）の調製
式（２）の化合物は、次いで、約１〜１．２モル当量のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと反応することによって、式（３）の化合物に変換される。反応は、プロトン性溶媒中、好ましくはエタノール中、約還流温度で約２〜４時間行われる。約０℃に冷却した後、固体をろ過分離し、冷エタノールで洗浄し、減圧下で乾燥させる。式（３）の生成物は、精製することなく次工程に用いられる。
工程３−最終生成物の調製
最終生成物は、式（３）の化合物から、メチルアミン、好ましくはメチルアミン水溶液と反応することによって調製される。反応は、約室温で、約４時間行われる。式Ｉの生成物は、従来の手段によって、例えば、ろ過することと、固体を冷エタノールで洗浄することと、減圧下で乾燥することとによって単離される。
出発物質の調製
（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−２−（６−アミノ−２−クロロプリン−９−イル）−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−３，４−ジオールが、工程１における出発物質として使用される。この化合物は市販されている。
【００５２】
エチル２−ホルミル−３−オキソプロパノエートが、工程２における出発物質として使用される。それは市販されているか、または反応スキームＩＩに示されるように作ることができる。
【００５３】
【化１４】
エチル３，３−ジエトキシプロピオネートを、強塩基、好ましくは水素化ナトリウムの存在下でギ酸エチルと反応させる。反応は、約０〜５℃で、約２４時間行われる。生成物は、従来の手段によって、例えば、水を加え、従来の溶媒、例えばｔ−ブチルメチルエーテルで不純物を抽出することと、水相を例えば塩酸で酸性化することと、続いてジクロロメタンなどの溶媒で抽出することと、乾燥させた抽出物から溶媒を減圧下で除去することとによって単離される。エチル２−ホルミル−３−オキソプロパノエートは、減圧下で蒸留することによって精製される。
【００５４】
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの大規模合成のための好ましい方法を、反応スキームＩＩＩに示す。
【００５５】
【化１５】
工程１−式（２）の調製
前述のように、式（２）の化合物は、式（１）の化合物から、溶媒の存在下でヒドラジン一水和物との反応によって調製される。しかしこの方法では、１４．３〜１６．７倍モル過剰のヒドラジン一水和物を、最初に約６０〜６５℃に加熱し、続いて式（１）の化合物を加える。温度は反応中、約６０〜６５℃に維持され、この反応は終了するまでに約１から３時間を要する。混合物中に残存する式（１）の化合物のレベルが約０．１０％以下である場合、次いで反応混合物は、約４０℃に冷却される。水がゆっくり加えられている間、温度は維持される。約４．２〜４．９質量当量が加えられると、混合物は約１０℃に冷却され、その温度で１時間以上維持される。
【００５６】
次いで、生成物をろ過によって単離し、水で洗浄し、次いで無水エタノールで洗浄する。固体を真空下にて最大３０℃で１２時間以上乾燥させ、次いでさらに精製することなく次工程に用いる。
工程２−式（４）の調製
式（２）の化合物は、次いで、過剰の、例えば２〜１０倍過剰、好ましくは約５〜１０倍過剰、理想的には約６．８〜７．５倍過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと反応することによって、式（４）の化合物に変換される。反応は、反応スキームＩにおける式（３）の化合物の調製に関して記載されている条件と同じ条件下で行ってよい。
【００５７】
あるいは、約０．０５モル当量のＨＣｌなどの酸も、反応混合物に加えられてよい。反応は、還流温度で約２〜４時間行われ、残存する式（２）の化合物のレベルが０．５０％以下であり、形成されうるいくらかの式（３）の化合物の量が２．５％以下である状態まで行われる。約１０℃に冷却した後、固体をろ過分離し、無水エタノールで洗浄し、真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存するエタノールを除去する。式（４）の生成物は、精製することなく次工程に用いられる。
【００５８】
式（４）の化合物は、（２Ｅ）アルケン誘導体として描かれている。これは、この反応において形成される主要な異性体であるためである。しかし、かなりの量の（２Ｚ）アルケン誘導体もこの反応において形成されうることが留意されるべきである。すなわち、
【００５９】
【化１６】
であり、エチル（２Ｚ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエートと名付けられる。
【００６０】
それ故に、式（４）の化合物は、（２Ｅ）アルケン誘導体のみとして表されるが、「式（４）の化合物」という用語は、その化合物が単独に（２Ｅ）異性体である場合、および生成物の主要部分が（２Ｅ）異性体であり、副次部分の（２Ｚ）異性体も存在する場合の両方を含むことが意図される。工程３に記載されるような、メチルアミンとの反応による、式（４）の化合物の最終生成物への変換は、式（４）の化合物が（２Ｅ）異性体として存在しようが、または（２Ｅ）異性体と（２Ｚ）異性体との混合物として存在しようが、同じ方法で行われる。
工程３−最終生成物の調製
最終生成物は、式（４）の化合物から、メチルアミン、好ましくはメチルアミン水溶液と反応することによって調製される。反応は、最初に約０〜５℃で約８時間、好ましくは加圧反応器中で行われ、続いて約１時間かけて５０〜６０℃に温度を上げ、その温度を１５〜３０分間維持する。
【００６１】
あるいは、メチルアミンを最初に加圧容器中に入れ、約２．５〜７．５℃に冷却し、次いで、その温度を維持しながら式（４）の化合物を加える。反応は、残存する式（３）の化合物のレベルが約０．１０％未満である状態まで行われる。
【００６２】
終了時、生成物は、従来の手段によって、例えば、真空下にて約３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去することによって単離される。次いで、真空を解き、混合物を約０〜５℃に冷却し、その温度で１５分間から１時間維持し、続いてろ過する。こうして得られた固体を、水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄し、減圧下にて約４０℃以下の温度で乾燥させる。
【００６３】
この工程は、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として提供する。この多形体は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かすことと、この溶液からいずれの固体不純物もろ過することと、追加のＤＭＳＯですすぐことと、水に加えることによって溶液から一水和物を沈殿させることとによって、さらに精製することができる。この方法が特に効果的であるのは、ＤＭＳＯ溶液および水が約７８〜８８℃に加熱され、撹拌しながら約１時間その温度で維持される場合である。撹拌した後、スラリーを約２０℃にゆっくり冷却する。次いで、最終生成物を、これまでに記載されたように、ろ過によって単離し、精製水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄し、乾燥させる。
【実施例】
【００６４】
（実施例１）
エチル−２−ホルミル−３−オキソプロピオネートの調製
【００６５】
【化１７】
磁気撹拌子、熱電対、デジタル温度計、ガス注入口および排出口ならびに添加用漏斗を備え付けた三つ口または四つ口丸底フラスコをアルゴンで洗い流した。エチル３，３−ジエトキシプロピオネート（６４．５ｇ）のテトラヒドロフラン中溶液を添加用漏斗に投入した。水素化ナトリウム（２１．２ｇの６０％分散物）を反応フラスコに投入し、続いてテトラヒドロフランを加えた。フラスコの内容物を氷浴中で０〜５℃に冷却し、ギ酸エチル（２５７ｇ）を加えた。混合物を０〜５℃に冷却し、５℃未満の内部温度を維持しながら、添加用漏斗の内容物を滴下した。氷浴を取り外し、内容物を周囲温度に温めた。エチル３，３−ジエトキシプロピオネートの消費を、ＴＬＣ分析によってモニターした。氷水（１０．６ｖｏｌ）を加えることによって反応物をクエンチし、メチルｔ−ブチルエーテルで３回抽出し（各５．４ｖｏｌ）、有機層を廃棄した。水相を濃塩酸でｐＨ１から１．５に酸性化した。酸性化した水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣を真空下で蒸留して、エチル−２−ホルミル−３−オキソプロピオネート２７．９２ｇを７０％収率で得た。
【００６６】
（実施例２）
Ａ．２−ヒドラジノアデノシン（２）の調製
【００６７】
【化１８】
撹拌機、ガス注入口、ガス排出口および熱電対を備え付けたフラスコをアルゴンで洗い流した。２−クロロアデノシン半水和物（５３．１ｇ）を加え、続いてヒドラジン一水和物（１３４ｇ）を加えた。混合物を撹拌すると同時に、４０〜４５℃に２時間加熱した。反応の進行を、ＴＬＣ分析によって追跡した。反応が終了すると、熱源を取り外し、エタノール（８００ｍｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌し、次いで沈殿物をろ過によって収集した。ろ過ケーキをエタノールで洗浄し、減圧下で３０分間乾燥させた。撹拌機を備え付けたきれいなフラスコに固体を移し、水（３００ｍｌ）を加えた。懸濁液を室温で１８時間撹拌し、固体をろ過によって単離した。ろ過ケーキを氷水（３００ｍｌ）で洗浄し、続いて氷冷エタノール（３００ｍｌ）で洗浄した。固体を減圧下で乾燥させて、２−ヒドラジノアデノシン（４１．３８ｇ、収率８１．４％、純度９９．３％）を得た。
Ｂ．２−ヒドラジノアデノシン（２）の代替調製
ヒドラジン水和物（２５８ｇ、２５０ｍｌ）を含む反応容器を４０〜５０℃に加熱した。温めた混合物に、４５〜５５℃の間の温度を維持しながら、２−クロロアデノシン半水和物（１００ｇ）を少しずつ加えた。温度をこの温度で２時間保ち、次いで、温度を４５〜５５℃で維持しながら、脱イオン水（５００ｍｌ）を３０分間かけて加えた。次いで混合物を３時間かけて０〜５℃に徐々に冷却し、次いでこの温度でさらに３０分間撹拌した。次いで固体をろ過分離し、冷（２〜５℃）脱イオン水（２００ｍｌ）で洗浄し、続いてエタノール（４００ｍｌ）で洗浄した。固体を真空下で１２時間乾燥させて、２−ヒドラジノアデノシンを得た。
Ｃ．２−ヒドラジノアデノシン（２）の代替調製
反応容器をヒドラジン水和物（１２８５ｇ）で満たす。溶液を約６２℃に加熱し、約６２℃の温度を維持しながら、２−クロロアデノシン（５００ｇ）を加える。混合物中に残存する２−クロロアデノシンのレベルが０．１０％以下である状態まで、混合物を６２℃を目標に、少なくとも２時間維持する。混合物を約４０℃に冷却し、混合物をチェックして、固体が存在していることを確認する。温度を約４０℃に維持しながら、水（２２７５ｇ）をゆっくり加える。混合物を約１０℃に冷却し、１時間以上維持する。生成物を、ろ過によって単離し、水（１１９５ｇ）で洗浄し、次いで無水エタノール（１８８５ｇ）で洗浄する。生成物を、真空下にて最大３０℃で１２時間以上乾燥させ、２−ヒドラジノアデノシンを得る。
【００６８】
（実施例３）
エチル１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−カルボキシレート（３）の調製
【００６９】
【化１９】
撹拌機、ガス注入口、ガス排出口および還流冷却器を備え付けたフラスコに、エチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネート（２３．９３ｇ、０．１７ｍｏｌ）を入れた。２−プロパノールをフラスコに加え、続いて２−ヒドラジノアデノシン（４４．４５ｇ、０．１５ｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱し、撹拌下で２〜４時間還流させ、反応の進行をＴＬＣ分析によって追跡した。反応が終了したと判断されると、熱源を取り外し、混合物を室温に冷却した。懸濁液を撹拌下にて氷浴中で１．５から２時間冷却した。固体を真空ろ過によって単離し、氷冷２−プロパノールで洗浄した。生成物であるエチル１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−カルボキシレートを、恒量に至るまで減圧下で乾燥させた。
【００７０】
（実施例４）
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの調製
【００７１】
【化２０】
エチル１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−カルボキシレート（４６．４ｇ）およびメチルアミン（水中４０％、６００ｍｌ）の混合物を周囲温度で約４時間撹拌し、反応の進行をＨＰＬＣ分析によって追跡した。過剰なメチルアミンの大部分を減圧下で除去し、残りの混合物を０℃で２時間冷却した。固体物質をろ過分離し、氷冷した２００プルーフエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥させて、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として得た。
【００７２】
この物質の構造を１Ｈ ＮＭＲによって確認した（図１および下記を参照のこと）。得られた熱分析（図２を参照のこと）の結果は、１分子の水が存在することと一致した。Ｘ線粉末回折パターンを得た（図３）。
【００７３】
【化２１】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、以下のようにして得た。上記で得られた物質の２つのサンプルを量り分け、ｄ６−ＤＭＳＯに溶かした。５．３ｍｇは１Ｈスペクトル用に使用し、２０．８ｍｇは１３Ｃスペクトル用に使用した。１Ｈについては４００ＭＨｚで、および１３Ｃについては１００ＭＨｚで稼働するＪＥＯＬ Ｅｃｌｉｐｓｅ＋４００分光計を使用して、すべてのスペクトルを周囲温度で得た。
【００７４】
【表１】
（実施例５）
Ａ．エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエート（４）の調製
【００７５】
【化２２】
２−ヒドラジノアデノシン（１００ｇ、０．３４ｍｏｌ）、エチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネート（２４２ｇ、１．７ｍｏｌ）および無水エタノールの混合物を反応器に投入し、この混合物を加熱して２時間還流させた。反応が終了したと判断されると、熱源を取り外し、混合物を３時間かけて５〜１０℃に徐々に冷却した。スラリーをこの温度で３０分間撹拌し、混合物をろ過した。固体物質を冷（５〜１０℃）無水エタノールで洗浄し、次いで真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥させて、エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）−ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエートを得た。
Ｂ．エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエート（４）の代替調製
反応容器を２−ヒドラジノアデノシン（４５０ｇ）および無水エタノール（１１３７６ｇ）で満たす。ＨＣｌ（７．４７ｇ）およびエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネート（１５５７ｇ）を加える。混合物を加熱して還流させ、サンプル採取し、混合物中に残存する２−ヒドラジノアデノシンのレベルが０．５０％以下であり、式（３）の化合物のレベルが２．５％以下である状態まで行う。混合物を約１０℃にゆっくり冷却する。生成物である式（４）の化合物をろ過によって単離し、無水エタノール（５１２１ｇ）で洗浄する。生成物を真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存するエタノールが５０００ｐｐｍ以下である状態まで行い、エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）−ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエートを得る。
【００７６】
実施例５Ａの生成物の元素分析によって、以下の結果を得た：Ｃ、４８．７５％；Ｈ、４．８６％；Ｎ、１８．０５％；Ｏ、２７．５７。理論上：Ｃ、４９．７２％；Ｈ、４．７４％；Ｎ、１８．４５％；Ｏ、２７．０９。分析は、所望の生成物の半水和物に対する実験誤差限界内に相当する（Ｃ、４８．８９％；Ｈ、４．８１％；Ｎ、１８．１％；Ｏ、２８．１２）。
【００７７】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、以下のようにして得た。式（４）の化合物２０．２ｍｇを約０．７５ｍｌのＤＭＳＯ−ｄ６に溶かし、１Ｈについては４００ＭＨｚで、および１３Ｃについては１００ＭＨｚで稼働するＪＥＯＬ ＥＣＸ−４００ＮＭＲ分光計を使用して、スペクトルを周囲温度で得た。化学シフトはＤＭＳＯ溶媒を基準とし、１Ｈについては２．５０ｐｐｍおよび１３Ｃについては３９．５ｐｐｍを基準とした。
結果
１Ｈおよび１３Ｃの化学シフトを表１に掲載する。約６０／３０の比で存在する２つの異性体は、１Ｈおよび１３Ｃの両方のスペクトル中に見られ、表中では主要および副次として分類した。
【００７８】
【表２】
式（４）の化合物は、以下の２つの異性体
【００７９】
【化２３】
の混合物であることが確認された。
【００８０】
（実施例６）
Ａ．化合物（４）からの（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの調製
【００８１】
【化２４】
４０％メチルアミン水溶液（１３００ｍｌ）を加圧反応器に入れ、０〜５℃に冷却し、実施例５Ａの生成物（エチル（２Ｅ）−３−（｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−２−［４−（エトキシカルボニル）ピラゾリル］プリン−６−イル｝アミノ）−２−ホルミルプロプ−２−エノエート（１００ｇ）を加えた。混合物を０〜５℃で少なくとも８時間撹拌し、終了を得るために反応をモニターした。終了すると、混合物を温め、５０〜６０℃の間の温度を１時間維持し、次いで１時間かけて３０℃未満に冷却した。温度が３０℃未満になると、１００〜１５０ｍｍＨｇの圧力を使用して混合物を脱気し、温度を０〜５℃に下げた。１００〜１５０ｍｍＨｇの圧力を維持しながら、混合物を０〜５℃で少なくとも１時間撹拌した。次いで、真空を中止して窒素で置換し、温度を０〜５℃で３０分間以上維持した。次いで、固体生成物をろ過分離し、水（５００ｍｌ×３回）で洗浄し、次いで無水エタノール（６２５ｍｌ）で洗浄した。生成物を、真空下で温度が４０℃を超えないようにしながら乾燥させて、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として得た。
Ｂ．化合物（４）からの（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの代替調製
加圧容器を４７％メチルアミン水溶液（１００８０ｇ）で満たす。溶液を冷却し、５℃の目標温度を維持しながら、上述の実施例５Ｂにおいて調製された式（４）の化合物（６００ｇ）を加える。混合物を５℃の目標温度で撹拌し、混合物中に残存する式（３）の化合物のレベルが０．１０％未満である状態まで行う。反応混合物を真空下にて３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去する。真空を解き、混合物を２．５℃に冷却し、少なくとも３０分間維持する。次いで、生成物をろ過によって単離し、水（９０００ｇ以上）で洗浄し、次いで無水エタノール（２９６４ｇ以上）で洗浄する。生成物を真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存するエタノールが５０００ｐｐｍ以下である状態まで行い、粗（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドをその一水和物として得る。
【００８２】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、以下のようにして得た。実施例６Ａにおいて得られた物質の２つのサンプルを量り分け、ｄ６−ＤＭＳＯに溶かした。５．３ｍｇは１Ｈスペクトル用に使用し、２０．８ｍｇは１３Ｃスペクトル用に使用した。１Ｈについては４００ＭＨｚで、および１３Ｃについては１００ＭＨｚで稼働するＪＥＯＬ Ｅｃｌｉｐｓｅ＋４００分光計を使用して、すべてのスペクトルを周囲温度で得た。
【００８３】
【表３−１】
【００８４】
【表３−２】
元素分析によって、以下の結果を得た：Ｃ、４３．９６％；Ｈ、４．９４％；Ｎ、２７．９４。理論上：Ｃ、４４．１２％；Ｈ、４．９４％；Ｎ、２７．４４％；Ｏ、２７．０９。分析は、一水和物に対する実験誤差限界内に相当する。
【００８５】
（実施例７）
Ａ．（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物の精製
実施例４において調製された（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物（１００ｇ）のジメチルスルホキシド（３００ｍｌ）中溶液を、０．６から０．８ミクロンの前置フィルターおよび０．２ミクロンのフィルターを通してろ過し、いずれの固体不純物も除去した。次いで、ろ液を脱イオン水（１リットル）に、撹拌しながら１時間かけてゆっくり加え、こうして生成されたスラリーを１時間以上撹拌した。固体をろ過分離し、脱イオン水（１リットル×２回）で洗浄し、真空下で１時間以上乾燥させた。
【００８６】
次いで、乾燥させた生成物を、脱イオン水（１．５リットル）を用いて２時間以上再びスラリーにし、ろ過分離し、脱イオン水（１リットル）で洗浄し、続いて無水エタノール（７５０ｍｌ）で洗浄した。精製された生成物を真空下にて４０℃以下の温度で１２時間以上乾燥させて、２−ヒドラジノアデノシンの不純物が全くない、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物を得た。
Ｂ．（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物の代替精製
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物（４００ｇ）の溶液をＤＭＳＯ（１３２０ｇ）に溶かし、この溶液を０．６から０．８ミクロンおよび０．２ミクロンのインラインフィルターに順に通してろ過する。追加のＤＭＳＯ（８８０ｇ）を使用して、フィルター系をすすぐ。８３℃の目標温度を維持しながら、溶液を精製水（５０００ｇ）にゆっくり加える。加えている間に生成物が結晶化し始め、スラリーを８３℃の目標温度で約１時間撹拌する。混合物を２０℃にゆっくり冷却する。生成物をろ過によって単離し、精製水（８０００ｇ）で洗浄する。
【００８７】
固体を容器に投入し、精製水（６０００ｇ）を加える。スラリーを約１時間混合する。生成物をろ過によって単離し、精製水（４０００ｇ）で洗浄し、次いで無水エタノール（３１６０ｇ）で洗浄する。生成物を真空下にて最大４０℃で乾燥させ、残存する水分含量が５．５％以下であり、残存するエタノールが２０００ｐｐｍ以下である状態まで行い、（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド一水和物を得る。
本発明の好ましい実施形態においては、以下が提供される。
（項１）
（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミド
【化２５】
を合成する方法であって、式（４）
【化２６】
の化合物をメチルアミン水溶液と、約２．５〜７．５℃の温度で接触させることによる方法。
（項２）
反応を密閉加圧反応器中で行う、上記項１に記載の方法。
（項３）
生成物を、
（ａ）真空下にて３５℃以下で脱気して過剰なメチルアミンを除去することと、
（ｂ）前記真空を解き、０〜５℃に約１５分から１時間冷却することと、
（ｃ）こうして形成されたスラリーをろ過することと、
（ｄ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、
（ｅ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することと
によって単離する、上記項２に記載の方法。
（項４）
前記（１−｛９−［（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６−アミノプリン−２−イル｝ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドの最終生成物を、
（ｉ）上記項３に記載の工程（ｅ）由来の前記乾燥固体を溶媒に溶かすことと、
（ｉｉ）前記溶液からいずれの固体不純物もろ過することと、
（ｉｉｉ）追加の溶媒ですすぐことと、
（ｉｖ）約７８〜８８°に維持されている精製水に溶液を加えることによって、スラリーを形成することと、
（ｖ）前記スラリーを撹拌することと、
（ｖｉ）前記スラリーを冷却することと、
（ｖｉｉ）ろ過することと、
（ｖｉｉｉ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、
（ｉｘ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することと
によってさらに精製する、上記項３に記載の方法。
（項５）
工程（ｉ）および（ｉｉｉ）において使用される前記溶媒がジメチルスルホキシドである、上記項４に記載の方法。
（項６）
最終生成物中に残存する水分含量が５．５％以下であり、残存するエタノールが２０００ｐｐｍ以下である、上記項５に記載の方法。
（項７）
式（４）
【化２７】
の化合物を合成する方法であって、
式（２）
【化２８】
の化合物を、任意選択で酸の存在下で、過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートと接触させることを含む方法。
（項８）
反応をエタノール中で行う、上記項６に記載の方法。
（項９）
前記酸はＨＣｌであり、最大０．１モル当量までを使用する、上記項６に記載の方法。
（項１０）
反応を還流下で行う、上記項９に記載の方法。
（項１１）
約５〜１０倍モル過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートを使用する、上記項６に記載の方法。
（項１２）
約６．８〜７．５倍モル過剰のエチル２−ホルミル−３−オキソプロピオネートを使用する、上記項１１に記載の方法。
（項１３）
生成物を、
（ａ）反応が終了した混合物を約１０℃に冷却することと、
（ｂ）ろ過することと、
（ｃ）フィルターの内容物をエタノールで洗浄することと、
（ｄ）残った固体を真空下にて４０℃を超えない温度で乾燥することと
によって単離する、上記項１２に記載の方法。
（項１４）
式（２）
【化２９】
の化合物の調製方法であって、
式（１）
【化３０】
の化合物を１４．３〜１６．７倍モル過剰のヒドラジンと、約６０〜６５℃の温度で反応させることを含む方法。
（項１５）
前記ヒドラジンを、最初に約６０〜６５℃に加熱し、続いて式（１）の前記化合物を加える、上記項１４に記載の方法。
（項１６）
式（２）の前記化合物を、
（ａ）前記反応混合物を約４０℃に冷却することと、
（ｂ）温度を約４０℃で維持しながら、４．２〜４．９質量当量の水を加えることと、
（ｃ）前記混合物を約１０℃に冷却し、その温度で少なくとも約１時間維持することと、（ｄ）ろ過することと、
（ｅ）フィルターの内容物を水で洗浄し、続いてエタノールで洗浄することと、
（ｆ）残った固体を真空下にて３０℃を超えない温度で少なくとも１２時間乾燥することと
によって単離する、上記項１４に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書または図面に記載の発明。
【請求項１】
本願明細書または図面に記載の発明。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１３−６７６６２（Ｐ２０１３−６７６６２Ａ）
【公開日】平成２５年４月１８日（２０１３．４．１８）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１３−７５３６（Ｐ２０１３−７５３６）
【出願日】平成２５年１月１８日（２０１３．１．１８）
【分割の表示】特願２０１０−５０８３５４（Ｐ２０１０−５０８３５４）の分割
【原出願日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【出願人】（５０４００３２２６）ギリアード・パロ・アルト・インコーポレイテッド (62)
【氏名又は名称原語表記】Ｇｉｌｅａｄ Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年４月１８日（２０１３．４．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１３−７５３６（Ｐ２０１３−７５３６）
【出願日】平成２５年１月１８日（２０１３．１．１８）
【分割の表示】特願２０１０−５０８３５４（Ｐ２０１０−５０８３５４）の分割
【原出願日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【出願人】（５０４００３２２６）ギリアード・パロ・アルト・インコーポレイテッド (62)
【氏名又は名称原語表記】Ｇｉｌｅａｄ Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】
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