Ａｋｔ活性の阻害剤
新規なピロール化合物、タンパク質キナーゼＢ活性の阻害剤としての、また、癌および関節炎の処置における、該化合物の使用が見出された。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本願は２００８年６月２６日に出願された米国仮出願第６１／０７５８４３号公報の優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、新規なピロール化合物、このような化合物のタンパク質キナーゼＢ（以下、ＰＫＢ／Ａｋｔ、ＰＫＢ、またはＡｋｔ）活性の阻害剤としての使用、ならびに癌および関節炎の処置における使用に関する。
【０００３】
背景技術
本発明は、セリン／トレオニンキナーゼＡｋｔ（タンパク質キナーゼＢとも呼ばれる）の１以上のイソ型の活性の阻害剤であるピロール含有化合物に関する。本発明はまた、このような化合物を含んでなる医薬組成物、および癌および関節炎の処置において本化合物を用いる方法に関する（Liu et al. Current Opin. Pharmacology 3:317-22 (2003))。
【０００４】
アポトーシス（プログラムされた細胞死）は、胚発達ならびに神経変性疾患、心血管疾患、および癌などの様々な疾患の病因において本質的な役割を果たす。最近の研究においては、プログラムされた細胞死の調節または実行に関与する様々なアポトーシス促進遺伝子産物および抗アポトーシス遺伝子産物の同定に至っている。Ｂｃｌ２またはＢｃｌ−ｘＬなどの抗アポトーシス遺伝子の発現は、様々な刺激によって誘導されるアポトーシス細胞死を阻害する。一方で、ＢａｘまたはＢａｄｎなどのアポトーシス促進遺伝子の発現は、プログラムされた細胞死をもたらす(Adams et al. Science, 281:1322-1326 (1998))。プログラムされた細胞死の実行は、カスパーゼ−３、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、およびカスパーゼ−９などを含む、カスパーゼ−１関連のプロテイナーゼにより媒介される(Thornberry et al. Science, 281:1312-1316 (1998))。
【０００５】
ホスファチジルイノシトール３’−ＯＨキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ／ＰＫＢ経路は、細胞の生存／細胞死を調節するのに重要であると思われる(Kulik et al. Mol.Cell.Biol. 17:1595-1606 (1997)、 Franke et al. Cell, 88:435-437 (1997)、 Kauffmann-Zeh et al. Nature 385:544-548 (1997)、 Hemmings Science, 275:628-630 (1997)、 Dudek et al. Science, 275:661-665 (1997))。血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、およびインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）などの生存因子は、ＰＩ３Ｋの活性を誘導することによって、様々な条件下で細胞の生存を促進する(Kulik et al. 1997, Hemmings 1997)。活性化されたＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）−三リン酸（ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３）の産生をもたらし、次いでそれは、プレクストリンホモログ（ＰＨ）ドメインを含むセリン／トレオニンキナーゼＡｋｔに結合し、その活性化を促進する(Franke et al Cell, 81:727-736 (1995)、Hemmings Science, 277:534 (1997)、Downward, Curr. Opin. Cell Biol. 10:262-267 (1998)、 Alessi et al., EMBO J. 15: 6541-6551 (1996))。ＰＩ３Ｋの特異的な阻害剤またはドミナントネガティブＡｋｔ／ＰＫＢ変異体は、これらの成長因子またはサイトカインの生存促進活性を無効にする。これまでに、ＰＩ３Ｋの阻害剤（ＬＹ２９４００２またはワートマニン）が上流キナーゼによるＡｋｔ／ＰＫＢの活性化を遮断することが開示されている。加えて、構成的に活性なＰＩ３ＫまたはＡｋｔ／ＰＫＢ変異体を導入すると、細胞が通常であればアポトーシスによる細胞死を受ける条件下で細胞の生存が促進される(Kulik et al. 1997, Dudek et al. 1997)。
【０００６】
ヒト腫瘍におけるＡｋｔレベルの分析によれば、Ａｋｔ２が、かなりの数の卵巣癌(J. Q. Cheung et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:9267-9271 (1992))および膵臓癌(J. Q. Cheung et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:3636-3641 (1996))で過剰発現されていることが示された。同様に、Ａｋｔ３は、乳癌細胞系および前立腺癌細胞系で過剰発現されていることが見出された(Nakatani et al. J. Biol.Chem. 274:21528-21532 (1999))。Ａｋｔ−２は、１２％の卵巣癌で過剰発現されていたこと、そして、Ａｋｔの増幅は未分化腫瘍の５０％で特に頻度が高かったことが示され、これは、Ａｋｔが腫瘍の攻撃性とも関係し得ることを示唆するものである(Bellacosa et al. Int. J. Cancer, 64, pp. 280-285, 1995)。Ａｋｔ１キナーゼ活性の増加は、乳癌、卵巣癌および前立腺癌において報告されている(Sun et al. Am. J. Pathol. 159: 431-7 (2001))。
【０００７】
ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３の３’リン酸を特異的に取り除くタンパク質および脂質ホスファターゼである腫瘍サプレッサーＰＴＥＮは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の負のレギュレーターである(Li et al. Science 275:1943-1947 (1997)、Stambolic et al. Cell 95:29-39 (1998)、Sun et al. Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 96:6199-6204 (1999))。ＰＴＥＮの生殖細胞系突然変異は、カウデン病などのヒト癌症候群の原因となる(Liaw et al. Nature Genetics 16:64-67 (1997)）。ＰＴＥＮは、高い割合のヒト腫瘍で欠失しており、機能的なＰＴＥＮの無い腫瘍細胞系統は、高レベルの活性型Ａｋｔを示す(Liら前掲、Guldberg et al. Cancer Research 57:3660-3663 (1997)、Risinger et al. Cancer Research 57:4736-4738 (1997))。
【０００８】
これらの所見は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路が、腫瘍形成における細胞生存またはアポトーシスを調節するのに重要な役割を果たすことを示す。
【０００９】
第２のメッセンジャーにより調節されるセリン／トレオニンタンパク質キナーゼのＡｋｔ／ＰＫＢサブファミリーの三つのメンバーが同定されており、それぞれＡｋｔ１／ＰＫＢα、Ａｋｔ２／ＰＫＢβ、およびＡｋｔ３／ＰＫＢγと呼ばれている。これらのイソ型は、特に触媒ドメインをコードしている領域が相同である。Ａｋｔ／ＰＫＢは、ＰＩ３Ｋシグナル伝達に応答して生じるリン酸化事象によって活性化される。ＰＩ３Ｋは、膜イノシトールリン脂質をリン酸化し、第２のメッセンジャーであるホスファチジル−イノシトール３，４，５−三リン酸およびホスファチジルイノシトール３，４−二リン酸を生成し、これがＡｋｔ／ＰＫＢのＰＨドメインと結合することが示されている。Ａｋｔ／ＰＫＢ活性化の現行モデルでは、３’リン酸化型ホスホイノシチドにより膜に酵素が補充され、そこで、上流キナーゼによるＡｋｔ／ＰＫＢの調節部位のリン酸化が生じることを提唱している(B.A. Hemmings, Science 275:628-630 (1997)、 B.A. Hemmings, Science 276:534 (1997)、 J. Downward, Science 279:673-674 (1998))。
【００１０】
Ａｋｔ１／ＰＫＢαのリン酸化は、二つの調節部位、すなわち、触媒ドメイン活性化ループ中のＴｈｒ３０８と、カルボキシ末端付近のＳｅｒ４７３とで生じる(D. R. Alessi et al. EMBO J. 15:6541-6551 (1996)およびR. Meier et al. J. Biol. Chem. 272:30491-30497 (1997))。同様の調節性リン酸化部位は、Ａｋｔ２／ＰＫＢβとＡｋｔ３／ＰＫＢγに生じる。Ａｋｔ／ＰＫＢを活性化ループ部位でリン酸化する上流キナーゼがクローニングされており、３’−ホスホイノシチド依存性タンパク質キナーゼ１（ＰＤＫ１）と呼ばれている。ＰＤＫ１は、Ａｋｔ／ＰＫＢだけでなくｐ７０リボソームＳ６キナーゼ、ｐ９０ＲＳＫ、血清およびグルココルチコイド調節型キナーゼ（ＳＧＫ）およびタンパク質キナーゼＣをリン酸化する。カルボキシ末端付近のＡｋｔ／ＰＫＢの調節部位をリン酸化する上流キナーゼはまだ同定されていないが、最近の報告では、インテグリン連結型キナーゼ（ＩＬＫ−１）、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼまたは自己リン酸化に対する役割が示唆されている。
【００１１】
Ａｋｔの活性化および活性の阻害は、ＰＩ３ＫをＬＹ２９４００２およびワートマニンなどの阻害剤で阻害することにより達成することができる。しかしながら、ＰＩ３Ｋの阻害は、３つのＡｋｔアイソザイムのみならず、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーなどのＰｄｔＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３に依存する他のＰＨドメイン含有シグナル伝達分子にも無差別に影響を及ぼす可能性がある。さらにまた、ＡｋｔがＰＩ３Ｋ非依存的な増殖シグナルによって活性化され得ることも開示されている。
【００１２】
あるいは、Ａｋｔ活性は、上流キナーゼＰＤＫ１の活性を遮断することによって阻害され得る。化合物ＵＣＮ−０１は、すでに報告されているＰＤＫ１阻害剤である(Biochem. J. 375(2):255 (2003))。また、ＰＤＫ１の阻害は、活性が非定型ＰＫＣイソ型、ＳＧＫおよびＳ６キナーゼなどのＰＤＫ１に依存する複数のタンパク質キナーゼの阻害をもたらす(Williams et al. Curr. Biol. 10:439-448 (2000))。
【００１３】
Ａｋｔの小分子阻害剤は、腫瘍、特に活性化されたＡｋｔを伴う腫瘍（例えば、ＰＴＥＮヌル腫瘍およびｒａｓ突然変異を伴う腫瘍）の処置に有用である。ＰＴＥＮはＡｋｔの重要な負のレギュレーターであり、その機能は、乳癌、前立腺癌、膠芽腫、およびバナヤン−ゾナナ症候群(Maehama, T. et al. Annual Review of Biochemistry, 70: 247 (2001))、カウデン病(Parsons, R.; Simpson, L. Methods in Molecular Biology (Totowa, NJ, United States), 222 (Tumor Suppressor Genes, Volume 1): 147 (2003))、およびレルミット−デュクロス病(Backman, S. et al. Current Opinion in Neurobiology, 12(5): 516 (2002))をはじめとするいくつかの癌症候群を含む、多くの癌で失われている。Ａｋｔの阻害は、白血病の処置に関連づけられている(J. C. Byrd, S. Stilgenbauer and I. W. Flinn "Chronic lymphocytic leukemia." Hematology / the Education Program of the American Society of Hematology. American Society of Hematology. Education Program (2004), 163-83)。Ａｋｔ３は、エストロゲン受容体欠損乳癌およびアンドロゲン非依存性前立腺癌細胞系でアップレギュレートされており、Ａｋｔ２は、膵臓癌および卵巣癌で過剰発現されている。Ａｋｔ１は胃癌で増幅されており(Staal, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 5034-7 (1987))、乳癌でアップレギュレートされている(Stal et al. Breast Cancer Res. 5: R37-R44 (2003))。従って、小分子Ａｋｔ阻害剤は、これらのタイプの癌ならびに他のタイプの癌の処置に有用であると思われる。Ａｋｔ阻害剤は、さらなる化学療法薬と組み合わせても有用である。
【００１４】
本発明の目的は、Ａｋｔ／ＰＫＢの阻害剤である新規な化合物を提供することである。
【００１５】
本発明の目的は、また、医薬担体と、本発明の方法に有用な化合物とを含んでなる医薬組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の目的は、また、このようなＡｋｔ／ＰＫＢ活性阻害剤を投与することを含んでなる癌を処置する方法を提供することである。
【００１７】
本発明の目的は、また、このようなＡｋｔ／ＰＫＢ活性阻害剤を投与することを含んでなる関節炎を処置する方法を提供することである。
【発明の概要】
【００１８】
本発明は、下記式（Ｉ）の新規な化合物またはその塩に関する：
【化１】
［式中、
Ｑは、フェニル、置換フェニル、ベンジル、および芳香環が置換されたベンジルから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４０）−（ここで、Ｒ４０は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
Ｘ、Ｙ、およびＺの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【００１９】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の薬学上許容される塩に関する。
【００２０】
本発明は、それを必要とする対象に有効量のＡｋｔ／ＰＫＢを阻害する式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる、癌を処置する方法に関する。
【００２１】
本発明は、それを必要とする対象に有効量のＡｋｔ／ＰＫＢを阻害する式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる、関節炎を処置する方法に関する。
【００２２】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物がＡｋｔ／ＰＫＢの阻害剤として有効であるという知見に関する。
【００２３】
本発明のさらなる態様では、本発明のＡｋｔ／ＰＫＢ阻害化合物の製造に有用な新規な方法が提供される。
【００２４】
本発明には、医薬担体および本発明の方法に有用な化合物を含んでなる医薬組成物が含まれる。
【００２５】
また、本発明には、本発明のＡｋｔ／ＰＫＢ阻害化合物とさらなる有効成分を共投与する方法が含まれる。
【発明の具体的説明】
【００２６】
本発明は、上記のような式（Ｉ）の化合物およびその塩、好適にはその薬学上許容される塩に関する。
【００２７】
本発明の式（Ｉ）の化合物はＡｋｔ／ＰＫＢ活性を阻害する。特に、本明細書に開示される化合物は、三つのＡｋｔ／ＰＫＢイソ型をそれぞれ阻害する。
【００２８】
本発明の式（Ｉ）の化合物には、下記式（ＩＩ）の化合物またはその塩が含まれる：
【化２】
［式中、
Ｑは、フェニル、ハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基により置換されたフェニル、ベンジル、ならびにその芳香環がハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基により置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、トリフルオロメチル、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４５）−（ここで、Ｒ４５は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【００２９】
本発明の式（Ｉ）の化合物には、式（ＩＩ）の化合物の薬学上許容される塩が含まれる。
【００３０】
本発明の式（ＩＩ）の化合物には、下記式（ＩＩＡ）の化合物またはその塩が含まれる：
【化３】
［式中、
Ｑは、フェニル、１〜２個のフルオリド置換基により置換されたフェニル、ベンジル、およびその芳香環が１〜２個のフルオリド置換基により置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｒ４は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲンおよび−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、かつ
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素である）］。
【００３１】
本発明の式（ＩＩ）の化合物には、式（ＩＩＡ）の化合物の薬学上許容される塩が含まれる。
【００３２】
本発明の式（Ｉ）の化合物には、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド、および
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボキサミド
またはその塩、好適には薬学上許容される塩が含まれる。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物およびその塩、好適には薬学上許容される塩は、本発明の医薬組成物に含まれ、本発明の方法に用いられる。
【００３４】
本明細書に記載されるある種の化合物は、１以上のキラル原子を含んでもよく、あるいはそうでなければ、二つの鏡像異性体として存在し得る。従って、本発明の化合物は、鏡像異性体の混合物ならびに精製された鏡像異性体または実質的に鏡像異性体的に富化された混合物を含む。また、総ての互変異性体および互変異性体の混合物が式（Ｉ）の化合物の範囲内に含まれると理解される。
【００３５】
本明細書に記載されるある種の化合物は溶媒和物を形成してもよく、溶媒和物は、溶質（本発明では、式（Ｉ）の化合物およびその塩、好適には薬学上許容される塩）と溶媒によって形成される様々な化学量論の複合体であると理解される。本発明の目的のためのこのような溶媒は、その溶質の生物活性に干渉しないものであろう。好適な溶媒の例としては、限定されるものではないが、水、メタノール、エタノール、および酢酸が挙げられる。好ましくは、用いる溶媒は薬学上許容される溶媒である。好適な薬学上許容される溶媒の例としては、限定されるものではないが、水、エタノール、および酢酸が挙げられる。
【００３６】
本明細書において「置換された」とは、特に断りのない限り、対象とする化学部分が、−ＣＯ２Ｒ２０、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、アミノＣ１−Ｃ４アルキル、ジＣ１−Ｃ４アルキルアミノ、ヒドロキシ、ニトロ、テトラゾール、シアノ、オキソ、ハロゲンおよびトリフルオロメチル（ここで、Ｒ２０は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびトリフルオロメチルからなる群から選択される１〜５個の置換基、好適には１〜３個の置換基を有することを意味する。
【００３７】
好適には、本明細書において「置換された」とは、対象とする化学部分が、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、アミノＣ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシ、テトラゾール、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から選択される１〜３個の置換基を有することを意味する。
【００３８】
好適には、本明細書において「置換された」とは、対象とする化学部分が、フルオリドおよびトリフルオロメチルからなる群から選択される１個の置換基を有することを意味する。
【００３９】
本明細書において「ヘテロ原子」とは、酸素、窒素、または硫黄を意味する。
【００４０】
本明細書において「ハロゲン」とは、ブロミド、ヨージド、クロリド、およびフルオリドから選択される置換基を意味する。
【００４１】
「アルキル」およびその派生語は、「−（ＣＨ２）ｎ」、「−（ＣＨ２）ｍ」などにより定義されるアルキル鎖を含む本明細書における総ての炭素鎖では、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和炭化水素鎖を意味し、特に断りのない限り、炭素鎖は１〜１２個の炭素原子を含む。本明細書で用いるアルキルの例としては、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−（ＣＨ２）３−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ２、および−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３が挙げられる。
【００４２】
本明細書において「処置する」およびその派生語は、予防的療法および治療的療法を意味する。予防的療法は、例えば、対象が癌を発症するリスクが高いと考えられる場合などの、対象が癌の家族歴を有する場合、または対象が発癌物質に曝された場合に適当である。
【００４３】
本発明の化合物の塩、好適には薬学上許容される塩は当業者によって容易に製造される。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容される塩は、本発明の医薬組成物に含まれ、本発明の方法に用いられる。−ＣＯＯＨまたは−ＯＨ基が存在する場合には、薬学上許容されるエステルが使用可能であり、例えば、−ＣＯＯＨについてはメチル、エチル、ピバロイルオキシメチルなどであり、−ＯＨについてはアセテート、マレエートなどであり、これらのエステルは、徐放処方物またはプロドラッグ処方物として用いるための、溶解度または加水分解特性の改良が当分野で知られている。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物は、以下のスキーム１〜４に示されるように、または類似の方法により製造される。総ての出発材料は、実験の節に反対のことが示されていない限り、商業的に入手可能であるか、商業的に入手可能な出発材料から当業者によって容易に作製されるか、または文献の報告に従って製造される。
【００４６】
一般スキーム
スキーム１
【化４】
試薬：（ａ）ＢＨ３ＴＨＦ、ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ、（ｂ）フタルイミド、ＰＰｈ３、ＤＩＡＤ、ＴＨＦ、ＲＴ、（ｃ）ＨＣｌ、ジオキサン／ＤＣＭ、ＲＴ
アミノ酸（Ｉ−１）を、ＴＨＦ中のボランを用いて還元し、対応するアルコール（Ｉ−２）を得た。次に、アルコール（Ｉ−２）を光延条件下で反応させて、違った保護のジアミン（Ｉ−３）を得た。光延反応は有機合成の熟練者によく知られている。このような変換の方法および反応条件はSynthesis 1981, 1-28に述べられている。ＨＣｌなどの酸を用いて（Ｉ−３）のＢｏｃ基の選択的脱保護を行い、アミン（Ｉ−４）を得た。当業者であれば多くの異なる保護基を利用でき、本明細書に挙げられている方法を妨げない限り、ここで使用可能である。アミン保護の方法は、Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (Wiley-lnterscienceにより出版)などの標準的な書籍に記載されている。
【００４７】
スキーム２
【化５】
試薬：（ａ）１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン、ＡｃＯＨ、９０℃ （ｂ）ＮＣＳ、ＤＭＦ、９０℃ （ｃ）ＮＣＳ、 ＤＭＦ ９０℃ （ｄ）６Ｎ ＮａＯＨ、ＴＨＦ （ｅ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン、ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ、ＤＣＭ、ＰｙＢｒＯＰ ２５℃ （ｆ）ヒドラジン、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ ２５℃
２，５−ビス（メチルオキシ）テトラヒドロ−３−フランカルボン酸メチル（ＩＩ−１）を、酢酸中、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン上で環化し、ピロールエステル（ＩＩ−２）を得た。その後、塩素化により、二つのモノクロロ位置異性体（ＩＩ−３）と（ＩＩ−４）の３：１混合物を得た。２倍過剰の塩素化剤では、三つの位置異性体（ＩＩ−５）、（ＩＩ−６）および（ＩＩ−７）の２：１：１混合物が得られた。エステル加水分解およびＰｙＢｒＯＰなどの好適なカップリング試薬を用いたアミド形成の後、ヒドラジンでフタルイミドの脱保護を行い、ピロールアミドを得た。
【００４８】
スキーム３
【化６】
試薬：（ａ）ＣｕＩ、Ｆｅ（ａｃａｃ）３、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、９０℃、（ｂ）ＮＣＳ、ＴＨＦ、５０℃、（ｃ）１Ｍ ＬｉＯＨ、ＴＨＦ、（ｄ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン、ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ、ＤＣＭ、ＰｙＢｒＯＰ、２５℃、（ｅ）ヒドラジン、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５℃
５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（ＩＩＩ−１）および１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル（ＩＩＩ−２）のＮ−アリール化を、Ｃｓ２ＣＯ３などの塩基の存在下、ＣｕＩなどの適当な銅塩とＦｅ（ａｃａｃ）３などの助触媒により触媒し、イミダゾールエステル（ＩＩＩ−３）を得た。次に、塩素化の後にエステル加水分解を行い、酸（ＩＩＩ−４）を得た。ＰｙＢｒＯＰなどの好適なカップリング試薬を用いたアミド形成の後、ヒドラジンでフタルイミドの脱保護を行い、イミダゾールアミド（ＩＩＩ−６）を得た。
【００４９】
スキーム４
【化７】
試薬：（ａ）ｉ−ＰｒＭｇＣｌ、ＢｏｃＮＮＢｏｃ、−７８℃、（ｂ）ジオキサン中４ＭのＨＣｌ、ＤＣＭ、ｃ）３−オキソ酪酸エチル、ＥｔＯＨ、還流、ｄ）ＮＣＳ、ＴＨＦ、５０℃、（ｅ）１Ｍ ＬｉＯＨ、ＴＨＦ、（ｆ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン、ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ、ＤＣＭ、ＰｙＢｒＯＰ、２５℃、（ｇ）ヒドラジン、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５℃
ｉＰｒＭｇＣｌを用いて５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（ＩＩＩ−１）のハロゲン−金属交換反応を行った後、中間体アニオンをビス（１，１−ジメチルエチル）（Ｅ）−１，２−ジアゼンジカルボキシレートで急冷し、Ｂｏｃ保護ヒドラジン（ＩＶ−１）を得た。ジオキサン中４ＭのＨＣｌなどの酸でＢｏｃの脱保護を行った後、３−オキソ酪酸エチルを用いて環化し、目的の（ＩＶ−２）に有利な、分割可能な位置異性体の２：１混合物を得た。次に、塩素化およびエステル加水分解により酸（ＩＶ−３）を得た。ＰｙＢｒＯＰなどの好適なカップリング試薬を用いたアミド形成の後、ヒドラジンでフタルイミドの脱保護を行い、イミダゾールアミド（ＩＶ−４）を得た。
【００５０】
本明細書において「共投与する」およびその派生語は、本明細書に記載されるＡＫＴ阻害化合物と、化学療法および放射線治療を含む癌の処置に有用であることが知られているか、または関節炎の処置に有用であることが知られているさらなる有効成分または有効成分群との同時投与または任意の様式の個別逐次投与を意味する。本発明においてさらなる有効成分または有効成分群には、癌または関節炎に対する処置を必要とする患者に投与した際に有利な特性が知られている、または有利な特性を示すいずれの化合物または治療薬も含まれる。好ましくは、投与が同時でなければ、それらの化合物は互いに近接した時間内に投与される。さらに、これらの化合物は同一投与形態で投与されるか否かは重要でなく、例えば、一方の化合物が局所投与され、他方の化合物が経口投与されてもよい。
【００５１】
一般に、本発明の癌の処置においては、処置される感受性腫瘍に対して活性を有する抗腫瘍剤を投与すればよい。このような薬剤の例としては、Cancer Principles and Practice of Oncology by VT. Devita and S. Hellman (編), 第6版 (February 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出せる。当業者ならば、どの薬剤組合せが有用であるか、その薬剤の個々の特徴と関与する癌に基づいて判断することができる。本発明で有用な典型的な抗腫瘍剤としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの抗微小管剤、白金配位錯体、ナイトロジェンマスタード、オキサアザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼンなどのアルキル化剤、アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生物質、エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、プリンおよびピリミジン類似体および抗葉酸化合物などの代謝拮抗物質、カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管形成阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス誘導薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤が挙げられる。
【００５２】
本発明のＡＫＴ阻害化合物と組み合わせて用いられる、または共投与されるさらなる有効成分または有効成分群（抗腫瘍剤）の例として、化学療法薬がある。抗微小管または抗有糸分裂剤は、細胞周期のＭ期すなわち有糸分裂期の腫瘍細胞の微小管に対して活性のある細胞周期特異的薬剤である。抗微小管剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【００５３】
天然供給源に由来するジテルペノイドは、細胞周期のＧ２／Ｍ期に働く細胞周期特異的な抗癌剤である。ジテルペノイドは微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することにより、このタンパク質を安定化すると考えられる。その後、このタンパク質の脱会合が阻害され、有糸分裂が抑えられ、細胞死に至るようである。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体のドセタキセルが挙げられる。
【００５４】
パクリタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエート１３−エステルは、タイヘイヨウイチノの木（Pacific yew tree）Taxus brevifoliaから単離される天然のジテルペン産物であり、注射溶液タキソール(TAXOL)（商標）として商業的に入手可能である。それは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。Wani et al. J. Am. Chem, Soc., 93:2325. 1971により１９７１年に最初に単離され、化学的方法およびＸ線結晶学的方法によって、その構造が同定された。その活性機構の一つは、チューブリンと結合することにより癌細胞の増殖を阻害するパクリタキセルの能力に関係する。Schiff et al. Proc. Natl, Acad, Sci. USA, 77:1561-1565 (1980)、 Schiff et al. Nature, 277:665-667 (1979)、 Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981)。いくつかのパクリタキセル誘導体の合成および抗癌活性についての総説としては、D. G. I. Kingston et al. Studies in Organic Chemistry vol. 26, 表題「New trends in Natural Products Chemistry 1986」, Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne, 編. (Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照。
【００５５】
パクリタキセルは、米国で難治性卵巣癌の処置における臨床使用が認可されており(Markman et al. Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991、 McGuire et al. Ann. lntem, Med., 111:273, 1989)、また、乳癌の処置にも認可されている(Holmes et al. J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991)。これは、皮膚の腫瘍(Einzig et al. Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)および頭頸部癌(Forastire et al. Sem. Oncol., 20:56, 1990)の処置のための有力な候補である。該化合物はまた、多発性嚢胞腎疾患(Woo et al. Nature, 368:750. 1994)、肺癌およびマラリアの処置にも可能性を示す。パクリタキセルを用いた患者の処置は、閾値濃度（５０ｎＭ）(Kearns, C.M. et al. Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995)を上回る投与を行う期間と関連して、骨髄抑制をもたらす(multiple cell lineages, Ignoff, R.J. et al. Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998)。
【００５６】
ドセタキセル、５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，１３ーエステル三水和物は、注射溶液としてのタキソテール(TAXOTERE)（商標）として商業的に入手可能である。ドセタキセルは、乳癌の処置に関して指示される。ドセタキセルは、パクリタキセル（ｑ．ｖ．）の半合成誘導体であり、ヨーロッパイチイの木の針葉から抽出される天然前駆体１０−デアセチル−バッカチン(baccatin)ＩＩＩを用いて製造される。ドセタキセルの用量制限毒性は、好中球減少である。
【００５７】
ビンカアルカロイドは、ツルニチニチソウ植物に由来する細胞周期特異的な抗腫瘍剤である。ビンカアルカロイドは、チューブリンに特異的に結合することにより細胞周期のＭ期（有糸分裂期）に作用する。結果的に、結合されたチューブリン分子は、微小管へと重合することができない。有糸分裂が分裂中期に抑えられ、細胞死に至ると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンがある。
【００５８】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射溶液としてのＶＥＬＢＡＮ（商標）として商業的に入手可能である。それらは、様々な固形腫瘍の二次療法としての適用の可能性を持つが、主として精巣癌、およびホジキン病を含む様々なリンパ腫、ならびにリンパ球性リンパ腫および組織球性リンパ腫の処置において指示される。骨髄抑制が、ビンブラスチンの用量制限副作用である。
【００５９】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチン，２２−オキソ−硫酸塩は、注射溶液としてのオンコビン(ONCOVIN)（商標）として商業的に入手可能である。ビンクリスチンは、急性白血病の処置に対して指示され、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫に対する治療計画での使用も見られる。脱毛および神経作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、また、程度は低いが、骨髄抑制および消化管粘膜炎作用が生じる。
【００６０】
酒石酸ビノレルビンの注射溶液（ナベルビン(NAVELBINE)（商標））として商業的に入手可能なビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、様々な固形腫瘍、特に非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の処置において、単剤として、または他の化学療法剤、例えばシスプラチンと組み合わせて指示される。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６１】
白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡとの相互作用性がある。この白金配位錯体は腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡと鎖内および鎖間の架橋を形成して、腫瘍に有害な生物学的影響を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【００６２】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射溶液としてのプラチノール(PLATINOL)（商標）として商業的に入手可能である。シスプラチンは、主に転移性精巣癌および卵巣癌および進行性膀胱癌の処置に指示される。シスプラチンの主な用量制限副作用は腎毒性（水和および利尿により管理可能）および内耳神経毒性である。
【００６３】
カルボプラチン、白金，ジアミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］）は、注射溶液としてのパラプラチン(PARAPLATIN)（商標）として商業的に入手可能である。カルボプラチンは、主に進行性卵巣癌の第一処置および第二処置において指示される。骨髄抑制が、カルボプラチンの用量制限毒性である。
【００６４】
アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、強力な求電子物質である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、ホスフェート、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシル、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化は核酸機能を破壊し、細胞死に至らせる。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード類、ブスルファンなどのスルホン酸アルキル類、カルムスチンなどのニトロソ尿素類、およびダカルバジンなどのトリアゼン類が挙げられる。
【００６５】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキサザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射溶液または錠剤としてのシトキサン(CYTOXAN)（商標）として商業的に入手可能である。シクロホスファミドは、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて指示される。脱毛、嘔気、嘔吐、および白血球減少が、シクロホスファミドの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６６】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射溶液または錠剤としてのアルケラン(ALKERAN)（商標）として商業的に入手可能である。メルファランは、多発性骨髄腫および卵巣の切除不能の上皮癌の待期療法として指示される。骨髄抑制が、メルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６７】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、リューケラン(LEUKERAN)（商標）錠剤として商業的に入手可能である。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待期療法として指示される。骨髄抑制が、クロラムブシルの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６８】
ブスルファン、１，４−ブタンジオールジメタンスルホネートは、ミレラン(MYLERAN)（商標）錠剤として商業的に入手可能である。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法にとして支持される。骨髄抑制が、ブスルファンの用量制限副作用である。
【００６９】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素、凍結乾燥物質の単一バイアルとしてのＢｉＣＮＵ（商標）として商業的に入手可能である。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫の待期療法として、単剤で、または他の薬剤と組み合わせて指示される。遅発性の骨髄抑制が、カルムスチンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７０】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、単一バイアル材料としてのＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（商標）として商業的に入手可能である。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の処置のために、また、ホジキン病の第二処置のための他の薬剤と組み合わせて指示される。嘔気、嘔吐、および摂食障害が、ダカルバジンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７１】
抗生抗腫瘍剤は、ＤＮＡと結合または相互作用する、非細胞周期特異的薬剤である。一般に、その作用により、安定なＤＮＡ複合体または鎖の破損をもたらし、その核酸の正常な機能を破壊し、細胞死をもたらす。抗生抗腫瘍剤の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン類、ダウノルビシン、およびドキソルビシなどのアントラサイクリン類(anthrocyclins)、ならびにブレオマイシン類が挙げられる。
【００７２】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射製剤としてのコスメゲン(COSMEGEN)（商標）として商業的に入手可能である。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の処置に対して指示される。嘔気、嘔吐、および摂食障害が、ダクチノマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７３】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射製剤としてのダウノキソム(DAUNOXOME)（商標）として、または注射製剤としてのセルビジン(CERUBIDINE)（商標）として商業的に入手可能である。ダウノルビシンは、急性非リンパ性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の処置において緩解誘導のために指示される。骨髄抑制が、ダウノルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７４】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射製剤としてのルベックス(RUBEX)（商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ(ADRIAMYCIN RDF)（商標）として商業的に入手可能である。ドキソルビシンは、主として、急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の処置に対して指示されるが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の処置においても有用な成分である。骨髄抑制が、ドキソルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７５】
ブレオマイシン、すなわち、放線菌(Streptomyces verticillus)株から単離される細胞傷害性グリコペプチド抗生物質の混合物は、ブレノキサン(BLENOXANE)（商標）として商業的に入手可能である。ブレオマイシンは、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待期療法として、単剤で、または他の試薬と組み合わせて指示される。肺および皮膚毒性が、ブレオマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７６】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【００７７】
エピポドフィロトキシンは、マンドレーク植物に由来する細胞周期特異的抗腫瘍剤である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩおよびＤＮＡと三重複合体を形成し、ＤＮＡ鎖の破損を引き起こすことにより、細胞周期のＳ期およびＧ２期の細胞に影響を及ぼす。これらの鎖の破損が蓄積し、細胞死に至る。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【００７８】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液剤またはカプセル剤としてのＶｅＰＥＳＩＤ（商標）として商業的に入手可能であり、一般にＶＰ−１６としても知られている。エトポシドは、精巣癌および非小細胞肺癌の処置において、単剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制が、エトポシドの最も一般的な用量制限副作用である。白血球減少の発生率が、血小板減少よりも重篤となる傾向がある。
【００７９】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射溶液としてのブモン(VUMON)（商標）として商業的に入手可能であり、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、小児における急性白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法剤との組み合わせにより指示される。骨髄抑制が、テニポシドの最も一般的な用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少と、血小板減少との両方を誘発し得る。
【００８０】
代謝拮抗腫瘍剤(Antimetabolite neoplastic agent)は、ＤＮＡ合成を阻害するか、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって、細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成期）に作用する細胞周期特異的な抗腫瘍剤である。結果として、Ｓ期が進行せず、細胞死に至る。代謝拮抗抗腫瘍剤の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メルカプトプリン(mecaptopurine)、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【００８１】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして商業的に入手可能である。５−フルオロウラシルの投与はチミジル酸合成の阻害をもたらし、ＲＮＡおよびＤＮＡの双方に組み込まれる。その結果、一般に細胞死に至る。５−フルオロウラシルは、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵臓癌の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制および粘膜炎が、５−フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体として、５−フルオロデオキシウリジン（フロキシウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【００８２】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、サイトサール−Ｕ(CYTOSAR-U)（商標）として商業的に入手可能であり、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖の末端にシタラビンが組み込まれることでＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期に細胞周期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、急性白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンは、白血球減少、血小板減少、および粘膜炎を誘発する。
【００８３】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、プリネトール(PURINETHOL)（商標）として商業的に入手可能である。メルカプトプリンは、詳細は未だ不明の機構によりＤＮＡ合成を阻害することで、Ｓ期に細胞周期特異性を示す。メルカプトプリンは、急性白血病の処置において、単剤として、または、他の化学療法剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制および消化管粘膜炎が、高用量のメルカプトプリンの予想される副作用である。有用なメルカプトプリン類似体として、アザチオプリンがある。
【００８４】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド(TABLOID)（商標）として商業的に入手可能である。チオグアニンは、詳細は未だ不明の機構によりＤＮＡ合成を阻害することで、Ｓ期に細胞周期特異性を示す。チオグアニンは、急性白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。白血球減少、血小板減少、および貧血を含む骨髄抑制が、チオグアニン投与の最も一般的な用量制限副作用である。しかしながら、消化管副作用が生じ、用量制限となる場合がある。他のプリン類似体として、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【００８５】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−イソ型）は、ジェムザール(GEMZAR)（商標）として商業的に入手可能である。ゲムシタビンは、Ｇ１／Ｓ期の境界で細胞増殖を阻止することで、Ｓ期に細胞周期特異性を示す。ゲムシタビンは、局所的な進行性非小細胞肺癌の処置においてシスプラチンと組み合わせて、また、局所的な進行性膵臓癌の処置において単独で指示される。白血球減少、血小板減少、および貧血を含む骨髄抑制が、ムシタビン投与の最も一般的な用量制限副作用である。
【００８６】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして商業的に入手可能である。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジレートの合成に必要とされるジヒドロ葉酸（dyhydrofolic acid）還元酵素の阻害を通じ、ＤＮＡ合成、修復、および／または置換を阻害することによりＳ期に細胞周期特異性を示す。メトトレキサートは、絨毛膜癌腫、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳房、頭部、頚部、卵巣および膀胱の癌腫の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制（白血球減少、血小板減少および貧血）および粘膜炎が、メトトレキサートの投与の予想される副作用である。
【００８７】
カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能であるか、または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連があると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの様々な光学形態が挙げられる。
【００８８】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射溶液としてのカンプトサール(CAMPTOSAR)（商標）として商業的に入手可能である。
【００８９】
イリノテカンは、その活性代謝産物ＳＮ−３８とともに、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシン誘導体である。この細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリノテカン(irintecan)またはＳＮ−３８三重複合体と複製酵素との相互作用により生じる回復不能な二本鎖破損の結果として生じると考えられる。イリノテカンは、結腸または直腸の転移癌の処置において指示される。イリノテカンＨＣｌの用量制限副作用は、好中球減少を含む骨髄抑制および下痢を含むＧＩ作用である。
【００９０】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射溶液としてのハイカムチン(HYCAMTIN)（商標）として商業的に入手可能である。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合するカンプトテシン誘導体であり、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応じてトポイソメラーゼＩにより生じる一本鎖破損の再連結を抑制する。トポテカンは、卵巣癌および小細胞肺癌の転移癌の第二処置として指示される。トポテカンＨＣｌの用量制限副作用は、骨髄抑制、主として好中球減少である。
【００９１】
また、現在開発中の、下記式Ａ：
【化８】
の、化学名「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ，Ｓ）−カンプトテシン（ラセミ混合物）または「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ）カンプトテシン（Ｒ鏡像異性体）または「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン（Ｓ鏡像異性体）」で知られるラセミ混合物（Ｒ，Ｓ）型ならびにＲおよびＳ鏡像異性体を含むカンプトテシン誘導体も着目される。このような化合物ならびに関連化合物は、製造方法を含め、米国特許第６，０６３，９２３号公報、同第５，３４２，９４７号公報、同第５，５５９，２３５号公報、同第５，４９１，２３７号公報、および１９９７年１１月２４日に出願された継続米国特許出願第０８／９７７２１７号公報に記載されている。
【００９２】
ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を処置するのに有用な化合物である。癌治療で有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の処置に有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、アミノグルテチミドおよび他のアロマターゼ阻害剤、例えば、副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の処置に有用なアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール(vorazole)およびエクセメスタン、プロゲストリン(progestrin)、例えば、ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の処置に有用な酢酸メゲストロール、エストロゲン、アンドロゲン、および抗アンドロゲン、例えば、前立腺癌および良性の前立腺肥大の処置に有用なフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロンおよび５α−還元酵素、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド、抗エストロゲン作用薬、例えば、ホルモン依存性乳癌および他の感受性癌の処置に有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、ならびに選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）、例えば米国特許第５，６８１，８３５号公報、同第５，８７７，２１９号公報、および同第６，２０７，７１６号公報に記載のもの、ならびに前立腺癌の処置のための黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨ促進薬および拮抗薬、例えば酢酸ゴセレリンおよびロイプロリド(luprolide)が挙げられる。
【００９３】
シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学的方法を遮断または阻害する阻害剤である。本明細書において、この変化は細胞増殖または分化である。本発明に有用なシグナル伝達阻害剤としては、受容体チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール(phosphotidyl inositol)−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達、およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が含まれる。
【００９４】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する様々なタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、大きくは受容体または非受容体型キナーゼとして分類することができる。
【００９５】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、トランスメンブランドメインおよびチロシンキナーゼドメインを有するトランスメンブランタンパク質である。受容体チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に成長因子受容体と呼ばれている。例えば過剰発現または突然変異による、これら多くのキナーゼの不適当または制御を欠いた活性化、すなわち異常なキナーゼ成長因子受容体活性は、制御を欠いた細胞増殖をもたらすことが示されている。従って、このようなキナーゼの異常な活性は、悪性組織増殖と関連づけられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は、癌治療法を提供し得る。成長因子受容体としては、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様ドメインおよび表皮性成長因子相同ドメインを含むチロシンキナーゼ（ＴＩＥ−２）、インスリン成長因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体ならびにＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。成長受容体のいくつかの阻害剤が開発中であり、リガンド拮抗剤、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。成長因子受容体および成長因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818、Shawver et al DDT Vol 2, No. 2 １９９７年２月、およびLofts, F. J et al, "Growth factor receptors as targets", New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy,Workman, Paul and Kerr, David編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【００９６】
成長因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼと呼ばれる。抗癌剤の標的または潜在的な標的となる、本発明で用いられる非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（焦点接着キナーゼ）、Ｂｒｕｔｏｎｓチロシンキナーゼ、およびＢｃｒ−Ａｂｌが挙げられる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465-80、およびBolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404に記載されている。
【００９７】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断薬は、ＰＩ３−Ｋｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）、およびＲａｓ−ＧＡＰを含む様々な酵素またはアダプタータンパク質におけるＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を乱す薬剤である。抗癌剤の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods 34(3) 125-32に述べられている。
【００９８】
Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）の遮断薬を含む、ＭＡＰキナーゼカスケード遮断薬を含むセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、ならびにＰＫＣ（アルファ、ベータ、ガンマ、イプシロン、ミュー、ラムダ、イオタ、ゼータ）の遮断薬を含むタンパク質キナーゼＣファミリーメンバー遮断薬。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ａｋｔキナーゼファミリーメンバー、およびＴＧＦβ受容体キナーゼ。このようなセリン／トレオニンキナーゼおよびそれらの阻害剤は、Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803、 Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107、 Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Cancer Surveys. 27:41-64、 Philip, P.A., and Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226、 米国特許第６，２６８，３９１号公報、ならびにMartinez-Iacaci, L. et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52に記載されている。
【００９９】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫおよびＫｕの遮断薬を含むホスファチジルイノシトール−３キナーゼファミリーメンバーの阻害剤もまた本発明において有用であり得る。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8、 Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308、 Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8、およびZhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545に記載されている。
【０１００】
また、本発明では、ミオイノシトールシグナル伝達阻害剤、例えば、ホスホリパーゼＣ遮断薬およびミオイノシトール類似体も着目される。このようなシグナル伝達阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Paul Workman and David Kerr編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０１０１】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。このような阻害剤には、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、および免疫療法が含まれる。このような阻害剤は、野生型変異体ｒａｓを含む細胞においてｒａｓの活性化を阻止し、それにより抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子の阻害は、Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8、Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99-102、およびBioChim. Biophys. Acta, (19899) 1423(3):19-30に記載されている。
【０１０２】
上述のように、受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体拮抗剤もまた、シグナル伝達阻害剤として機能し得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤は、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用を含む。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｃ２２５ ＥＧＦＲ特異的抗体(Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286参照)、ハーセプチン(Herceptin)（商標）ｅｒｂＢ２抗体(Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kniases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183参照)、ならびに２ＣＢ ＶＥＧＦＲ２特異的抗体(Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124参照)。
【０１０３】
非受容体型キナーゼ血管形成阻害剤は、本発明においても有用であり得る。血管形成関連ＶＥＧＦＲおよびＴＩＥ２の阻害剤は、シグナル伝達阻害剤について上述されている（両受容体とも、受容体型チロシンキナーゼである）。ｅｒｂＢ２およびＥＧＦＲの阻害剤が血管形成、主にＶＥＧＦ発現を阻害することが示されているので、血管形成は一般にｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達阻害剤と関連する。従って、非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤は、本発明の化合物と組み合わせて使用することができる。例えば、ＶＥＧＦＲ（受容体チロシンキナーゼ）を認識しないが、リガンド、血管形成を阻害するインテグリン（αｖβ３）の小分子阻害剤、エンドスタチンおよびアンギオスタチン（非ＲＴＫ）とは結合する抗ＶＥＧＦ抗体も、本明細書で開示された化合物との組合せにおいて有用である(Bruns CJ et al (2000), Cancer Res., 60: 2926-2935、 Schreiber AB, Winkler MEおよびDerynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253、Yen L et al. (2000), Oncogene 19: 3460-3469を参照）。
【０１０４】
免疫療法計画に用いられる薬剤もまた、式（Ｉ）の化合物とのとの組合せにおいて有用であり得る。免疫応答を生じさせるには、多くの免疫学的戦略が存在する。これらの戦略は一般に腫瘍ワクチン接種の範囲にある。免疫学的アプローチの有効性は、小分子阻害剤を用いたシグナル伝達経路の組合せ阻害を通じて大きく増強され得る。ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲに対する免疫学的／腫瘍ワクチンアプローチに関する考察は、Reilly RT et al. (2000), Cancer Res. 60: 3569-3576、およびChen Y, Hu D, Eling DJ, Robbins J, and Kipps TJ. (1998), Cancer Res. 58: 1965-1971に見出せる。
【０１０５】
アポトーシス誘導療法で用いられる薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組合せにおいて使用可能である。Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質のメンバーは、アポトーシスを阻止する。従って、ｂｃｌ−２のアップレギュレーションは、化学療法耐性と関連づけられている。研究によれば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）がｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシスメンバー（すなわち、ｍｃｌ−１）を刺激することが示された。従って、腫瘍においてｂｃｌ−２の発現をダウンレギュレートするように設計された戦略は、臨床的利益が実証され、現在第ＩＩ／ＩＩＩ相治験にある（すなわち、ジェンタのＧ３１３９ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）。ｂｃｌ−２に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド戦略を用いるこのようなアポトーシス誘導戦略は、Water JS et al. (2000), J. Clin. Oncol. 18: 1812-1823、およびKitada S et al. (1994), Antisense Res. Dev. 4: 71-79に述べられている。
【０１０６】
細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリー、およびそれらのサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用は、真核生物の細胞周期の進行を制御する。細胞周期の正常な進行には、別のサイクリン／ＣＤＫ複合体の同調的活性化および不活性化が必要である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発中である。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６を含むサイクリン依存性キナーゼ、およびそれらの阻害剤の例は、例えばRosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０１０７】
一つの実施形態において、本発明の癌治療法は、式（Ｉ）の化合物と、抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管形成阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス誘導薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤からなる群から選択されるものなどの少なくとも一つの抗腫瘍剤との共投与を含む。本発明の薬学上活性な化合物はＡＫＴ阻害剤として活性があることから、それらは癌および関節炎の処置における治療上の有用性を示す。
【０１０８】
よって、本発明は、ヒトを含む哺乳類において癌を処置する方法であって、該癌が脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ(Bannayan-Zonana)症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌
から選択され、
有効量の本発明のＡＫＴ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１０９】
好適には、本発明は、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、および甲状腺癌からなる群から選択される癌を処置する方法に関する。
【０１１０】
好適にな、本発明は、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、および前立腺癌から選択される癌を処置する方法に関する。
【０１１１】
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）の単離および精製
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を発現する昆虫細胞を、ポリトロン（５ｍＬ溶解バッファー／ｇ細胞）を用い、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５に溶解させた。細胞残渣を、２８，０００×ｇで３０分間遠心分離することにより除去した。上清を４．５ミクロンフィルターで濾過した後、溶解バッファーで予め平衡化したニッケルキレートカラムにのせた。このカラムを５カラム容量（ＣＶ）の溶解バッファーで、次いで、５ＣＶの２０％バッファーＢ（ここで、バッファーＢは２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、３００ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５である）で洗浄した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を、１０ＣＶ以上のバッファーＢの２０％〜１００％直線勾配で溶出した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（１３６〜４８０）溶出画分をプールし、バッファーＣ（ここで、バッファーＣは、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５である）で３倍希釈した。次いで、このサンプルを、バッファーＣで予め平衡化したＱ−セファロースＨＰカラムにてクロマトグラフィーに付した。このカラムを５ＣＶのバッファーＣで洗浄した後、５ＣＶの１０％Ｄ、５ＣＶの２０％Ｄ、５ＣＶの３０％Ｄ、５ＣＶの５０％Ｄおよび５ＣＶの１００％Ｄ（ここで、バッファーＤは、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５である）で段階的に溶出した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を含む画分をプールし、１０ｋＤａ分子量カットオフのコンセントレータで濃縮した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５で予め平衡化したスーパーデックス(Superdex)７５ゲル濾過カラムにてクロマトグラフィーに付した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥと、質量分析とを用いて調べた。タンパク質をプールし、濃縮し、−８０℃で冷凍した。
【０１１２】
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ２（ａａ１３８〜４８１）およびＨｉｓタグ付きＡＫＴ３（ａａ１３５〜４７９）を同様に単離および精製した。
【０１１３】
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ酵素アッセイ
基質リン酸化アッセイにおいて、本発明の化合物のＡＫＴ１、２および３タンパク質セリンキナーゼ阻害活性を試験した。このアッセイでは、小分子有機化合物の、ペプチド基質のセリンリン酸化阻害能を調べる。この基質リン酸化アッセイでは、ＡＫＴ１、２、または３の触媒ドメインを用いる。ＡＫＴ１、２、および３はまた、Upstate USA社から商業的に入手可能である。この方法では、ビオチニル化された合成ペプチド配列番号１（ビオチン−ａｈｘ−ＡＲＫＲＥＲＡＹＳＦＧＨＨＡ−アミド）のセリン残基上のＡＴＰからのγリン酸基の転位を触媒する、単離された酵素の能力を測定する。基質のリン酸化は、以下の手順によって検出した。
【０１１４】
アッセイは、３８４ウェルＵ字底白色プレートで行った。１０ｎＭの活性化ＡＫＴ酵素を、５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、４μＭ ＡＴＰ、８μＭペプチド、０．０４μＣｉ［ｇ−３３Ｐ］ＡＴＰ／ウェル、１ｍＭ ＣＨＡＰＳ、２ｍＭ ＤＴＴおよび１００％ＤＭＳＯ中の試験化合物１μＬを含有する２０μｌのアッセイ容量中、室温にて４０分間インキュベートした。この反応は、５０μｌのＳＰＡビーズミックス（Ｍｇ２＋およびＣａ２＋を含まないダルベッコＰＢＳ、０．１％トリトンＸ−１００、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５０μＭ ＡＴＰ、２．５ｍｇ／ｍｌストレプトアビジンコーティングＳＰＡビーズ）を添加することにより停止させた。このプレートを密閉し、ビーズを一晩定着させた後、そのプレートを、パッカード・トップカウント・マイクロプレート・シンチレーション・カウンター(Packard Topcount Microplate Scintillation Counter)(Packard Instrument Co., Meriden, CT)にて計数した。
【０１１５】
用量応答データを、データ換算式：１００×（Ｕ１−Ｃ２）／（Ｃ１−Ｃ２）［式中、Ｕは未知値であり、Ｃ１はＤＭＳＯに対して得られた平均対照値であり、Ｃ２は０．１Ｍ ＥＤＴＡに対して得られた平均対照値である］を用いて計算した対照％として化合物濃度に対してプロットした。データは、ｙ＝（（Ｖｍａｘ×ｘ）／（Ｋ＋ｘ））［式中、Ｖｍａｘは上漸近線(upper asymptote)であり、ＫはＩＣ５０である］で示される曲線に当てはめる。
【０１１６】
全長ヒト（ＦＬ）ＡＫＴ１のクローニング：
全長のヒトＡＫＴ１遺伝子を、５’プライマー：配列番号２ ５’ＴＡＴＡＴＡＧＧＡＴＣＣＡＴＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＧＣ３’および３’プライマー：配列番号３ ＡＡＡＴＴＴＣＴＣＧＡＧＴＣＡＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧ３’を用い、ミリスチル化ＡＫＴ１−ＥＲを含むプラスミド（ＭＴＡの下、デューク大学Robert T. Abrahamから譲渡、Klippel et al. in Molecular and Cellular Biology 1998 Volume 18 p.5699に記載）からＰＣＲにより増幅した。クローニングのために、５’プライマーはＢａｍＨＩ部位を含み、３’プライマーはＸｈｏＩ部位を含んだ。得られたＰＣＲ産物を、ＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ断片としてｐｃＤＮＡ３にサブクローニングした。システイン２５をコードする配列（ＴＧＣ）における突然変異を、QuikChange（商標） Site Directed Mutagenesis Kit (Stratagene)を用いた部位特異的突然変異誘発によって、アルギニン２５をコードする野生型ＡＫＴ１配列（ＣＧＣ）に変換した。ＡＫＴ１突然変異誘発プライマー：配列番号４ ５’ＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＣＡＣＧＣＴＡＣＴＴＣＣＴＣＣと選択プライマー：配列番号５ ５’ＣＴＣＧＡＧＣＡＴＧＣＡＡＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣ（ｐｃＤＮＡ３の多重クローニング部位のＸｂａＩ部位を破壊するように設計）を、製造業者の指示に従って用いた。発現／精製のために、ＡＫＴ１をＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ断片として単離し、ｐＦａｓｔｂａｃＨＴｂ(Invitrogen)のＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ部位にクローニングした。
【０１１７】
ＦＬヒトＡＫＴ１の発現：
発現は、Invitrogen（カタログ＃１０３５９−０１６）のＢＡＣ‐ｔｏ‐ＢＡＣバキュロウイルス発現系を用いて行った。要するに、１）ｃＤＮＡをＦａｓｔＢａｃベクターからバクミドＤＮＡに移し、２）そのバクミドＤＮＡを単離し、これを用いてＳｆ９昆虫細胞をトランスフェクトし、３）そのウイルスをＳｆ９細胞にて産生させ、４）Ｔ．ｎｉ細胞をこのウイルスに感染させ、精製に送った。
【０１１８】
ＦＬヒトＡＫＴ１の精製：
全長ＡＫＴ１の精製のため、１３０ｇのｓｆ９細胞（バッチ＃４１６４６Ｗ０２）を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、および２０ｍＭイミダゾールを含む溶解バッファー（バッファーＡ、１Ｌ、ｐＨ７．５）に再懸濁させた。細胞溶解は、Ａｖｅｓｔｉｎにより行った（１５Ｋ〜２０Ｋｐｓｉで２回通す）。細胞残渣を１６Ｋｒｐｍで１時間遠心分離することにより除去し、上清を４℃で一晩、１０ｍｌのニッケルセファロースＨＰビーズにバッチで結合させた。次いで、ビーズをカラムに移し、結合した物質をバッファーＢ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、３００ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５）で溶出した。ＡＫＴ溶出画分をプールし、バッファーＣ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５）を用いて３倍希釈した。このサンプルを濾過し、バッファーＣで予め平衡化した１０ｍＬのＱ−ＨＰカラムにて２ｍＬ／分でクロマトグラフィーに付した。
【０１１９】
このＱ−ＨＰカラムを、３カラム容量（ＣＶ）のバッファーＣで洗浄した後、５ＣＶの１０％Ｄ、５ＣＶの２０％Ｄ、５ＣＶの３０％Ｄ、５ＣＶの５０％Ｄ、および５ＣＶの１００％Ｄで段階的に溶出した（ここで、バッファーＤは、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５である）。５ｍＬ画分を集めた。ＡＫＴを含む画分をプールし５ｍｌまで濃縮した。次に、タンパク質を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５で予め平衡化した１２０ｍｌのスーパーデックス７５サイズ分画カラムにのせた。２．５ｍＬ画分を集めた。
【０１２０】
ＡＫＴ１溶出画分をプールし、分注し（１ｍｌ）、−８０℃で保存した。質量分析およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いて、精製した全長ＡＫＴ１の純度および属性を確認した。
全長（ＦＬ）ＡＫＴ２および（ＦＬ）ＡＫＴ３も同様に単離および精製した。
【０１２１】
全長ＡＫＴ酵素アッセイ
基質リン酸化アッセイにおいて、本発明の化合物のＡＫＴ１、２、および３タンパク質セリンキナーゼ阻害活性を試験した。このアッセイでは、ペプチド基質のセリンリン酸化を阻害する小分子有機化合物の能力を調べる。基質リン酸化アッセイでは、ＡＫＴ１、２、または３の触媒ドメインを用いる。この方法は、ビオチニル化された合成ペプチド配列番号１（ビオチン−ａｈｘ−ＡＲＫＲＥＲＡＹＳＦＧＨＨＡ−アミド）のセリン残基上のＡＴＰからのγリン酸基の転位を触媒する、単離された酵素の能力を測定する。基質のリン酸化は、以下の手順によって検出した。
【０１２２】
アッセイは、３８４ウェルＵ字底白色プレートにて行った。１０ｎＭの活性化ＡＫＴ酵素を、５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、４μＭ ＡＴＰ、８μＭペプチド、０．０４μＣｉ［ｇ−３３Ｐ］ＡＴＰ／ウェル、１ｍＭ ＣＨＡＰＳ、２ｍＭ ＤＴＴおよび１００％ＤＭＳＯ中の試験化合物１μｌを含む２０μｌのアッセイ容量中、室温にて４０分間インキュベートした。この反応は、５０μｌのＳＰＡビーズミックス（Ｍｇ２＋およびＣａ２＋を含まないダルベッコＰＢＳ、０．１％トリトンＸ−１００、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５０μＭ ＡＴＰ、２．５ｍｇ／ｍｌストレプトアビジンコーティングＳＰＡビーズ）を添加することにより停止させた。このプレートを密閉し、ビーズを一晩定着させた後、そのプレートを、パッカード・トップカウント・マイクロプレート・シンチレーション・カウンター(Packard Topcount Microplate Scintillation Counter)(Packard Instrument Co., Meriden, CT)にて計数した。
【０１２３】
用量応答データを、データ換算式：１００×（Ｕ１−Ｃ２）／（Ｃ１−Ｃ２）［式中、Ｕは未知値であり、Ｃ１はＤＭＳＯに対して得られた平均対照値であり、Ｃ２は０．１Ｍ ＥＤＴＡに対して得られた平均対照値である］を用いて計算した対照％として化合物濃度に対してプロットした。データは、ｙ＝（（Ｖｍａｘ×ｘ）／（Ｋ＋ｘ））［式中、Ｖｍａｘは上漸近線(upper asymptote)であり、ＫはＩＣ５０である］で示される曲線に当てはめる。
【０１２４】
本発明の化合物の、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２およびＡＫＴ３に対しての活性を上記のアッセイの１以上で試験する。
【０１２５】
実施例の化合物は、一般に上記のＡＫＴ酵素アッセイに従って試験し、少なくとも１回の実験で、全長ＡＫＴ１に対してｐＩＣ５０値≧６．６を示した。
【０１２６】
実施例２の化合物は、一般に上記のＡＫＴ酵素アッセイに従って試験し、少なくとも１回の実験で、全長ＡＫＴ１に対してｐＩＣ５０値８．２を示した。
【０１２７】
上記データにおいて、ｐＩＣ５０は−ｌｏｇ（ＩＣ５０）（ＩＣ５０値はモル単位で表される）と定義される。
【０１２８】
本発明の範囲内にある薬学上有効な化合物は、それを必要とする哺乳類、特にヒトにおいてＡＫＴ阻害剤として有用である。
【０１２９】
従って、本発明は、癌、関節炎およびＡＫＴ阻害を必要とする他の症状を処置する方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる方法を提供する。式（Ｉ）の化合物はまたはその薬学上許容される塩はまた、それらがＡｋｔ阻害剤として作用する能力を示したことから、上記の適応病態を処置する方法を提供する。この薬物は、それを必要とする患者に、限定されるものではないが、静脈、筋肉内、経口、皮下、皮内、および非経口を含む通常の投与経路投与経路のいずれによって投与してもよい。
【０１３０】
本発明の薬学上有効な化合物は、カプセル剤、錠剤、または注射製剤などの通常の剤形に組み込まれる。固体または液体医薬担体が用いられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が挙げられる。液体担体としては、シロップ、落花生油、オリーブ油、食塩水、および水が挙げられる。同様に、担体は、モノステアリン酸グリセリル、またはジステアリン酸グリセリルなどの任意の徐放性物質を単独で、または、ワックスとともに含んでもよい。固体担体の量は幅広く異なるが、好ましくは、用量単位当たり約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体担体が用いられる場合、製剤は、例えば、シロップ剤、エリキシル剤、エマルション、ゼラチン軟カプセル剤、アンプルなどの滅菌注射液、または水性もしくは非水性液体懸濁液の形態であろう。
【０１３１】
医薬製剤は、混合、造粒および圧縮、要すれば、錠剤の場合には、成分を混合、充填、および溶解して、必要に応じて、所望の経口または非経口製品とすることを含む、通常の製薬化学技術に従って製造される。
【０１３２】
上記の医薬投薬単位における本発明の薬学上有効な化合物の用量は、有効であり、無毒な量で、好ましくは、有効化合物は０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲から選択される。Ａｋｔ阻害剤を必要とするヒト患者を処置する場合には、選択された用量を好ましくは毎日１回〜６回、経口または非経口投与する。非経口投与の好ましい形態としては、局所、直腸、経皮、注射、および連続注入が含まれる。ヒト投与のための経口および／または非経口投与単位は、好ましくは有効化合物０．０５ｍｇ〜３５００ｍｇを含む。
【０１３３】
投与される最適用量は、当業者であれば容易に決定することができ、使用する特定のＡｋｔ阻害剤、調剤強度、投与様式、および疾患状態の進行によって異なる。患者の年齢、体重、食事、および投与時間を含む、処置される特定の患者に依存するさらなる因子も、用量調整の必要を生じるであろう。
【０１３４】
ヒトを含む哺乳類においてＡｋｔ阻害活性を誘導する本発明の方法は、このような活性を必要とする対象に、有効Ａｋｔ阻害量の本発明の薬学上有効な化合物を投与することを含んでなる。
【０１３５】
本発明はまた、Ａｋｔ阻害剤として用いるための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３６】
本発明はまた、治療に使用するための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３７】
本発明はまた、癌の処置に用いるための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３８】
本発明はまた、関節炎の処置に用いるための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３９】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と、薬学上許容される担体とを含んでなる、Ａｋｔ阻害剤として用いるための医薬組成物を提供する。
【０１４０】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と、薬学上許容される担体をと含んでなる、癌の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０１４１】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と、薬学上許容される担体とを含んでなる、関節炎の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０１４２】
さらに、本発明の薬学上有効な化合物は、例えば癌または関節炎を処置することが知られている他の化合物またはＡｋｔ阻害剤と組み合わせて用いた場合に有用性を示すことが知られている化合物などのさらなる有効成分と共投与することができる。
【０１４３】
さらなる詳述を行わなくとも、当業者であれば、これまでの記載を用いて、本発明を最大限利用することができると考えられる。よって、以下の実施例は単に例として示すものであり、本発明の範囲を何ら限定されるものではない。
【実施例】
【０１４４】
実験の詳細
実施例１〜９の化合物は、スキーム１〜４に従って、または類似の方法によって容易に製造される。
【０１４５】
製造例１
【化９】
２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオンの製造
ａ）［（１Ｓ）−２−（３−フルオロフェニル）−１−（ヒドロキシメチル）エチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１０】
０℃で攪拌したＴＨＦ（２００ｍＬ）中、Ｎ−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−３−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン（１０ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＨ３−ＴＨＦ（８８ｍＬ、ＴＨＦ中８８ｍｍｏｌ〜１Ｍ）を加えた。１２時間後、反応をＡｃＯＨ：ＭｅＯＨ（８：５０、５８ｍＬ）で急冷し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液とＤＣＭとで分液した。次に、水相をＤＣＭで数回抽出した。合わせた有機画分を濃縮し、残渣をシリカゲルパッドに通し（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）、生成化合物（７．０ｇ、７４％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/e 270 (M+H)+.
【０１４６】
ｂ）｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１１】
２５℃にて、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中、［（１Ｓ）−２−（３−フルオロフェニル）−１−（ヒドロキシメチル）エチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（７．０ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（８．１８ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）、およびフタルイミド（４．２１ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）の溶液に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（７．５８ｍＬ、３９．０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応溶液を真空濃縮し、残渣をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で摩砕し、濾過して粗生成物（２２ｇ）を白色固体として得、これをそれ以上精製せずにそのまま用いた。LCMS (ES) m/z 399 (M+H)+.
【０１４７】
ｃ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
室温にて、ＤＣＭ（２００ｍＬ）中、１，１−ジメチルエチル｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（９．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（５６ｍＬ、２２６ミリモル）を加えた。１２時間後、この溶液を濾過し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で洗浄し、標題化合物（７．８ｇ、９９％）を白色ＨＣｌ塩として得た。LCMS (ES) m/z 349 (M+H)+.
【０１４８】
実施例１
【化１２】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
ａ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル
【化１３】
酢酸（２１．０３ｍｌ）中、２，５−ビス（メチルオキシ）テトラヒドロ−３−フランカルボン酸メチル（４ｇ，２１．０３ｍｍｏｌ）［Sancelme, M.; Fabre, S.; Prudhomme, M. J. Antibio. 1994 47, 7, 792に従って製造］および１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（２．０４３ｇ，２１．０３ｍｍｏｌ）の溶液を９０℃で１２０時間攪拌した。この反応混合物を濃縮した後、１Ｎ ＮａＯＨ／ＤＣＭで分液した。水相をＤＣＭで数回洗浄し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０〜７５％ＥｔＯＡｃ）により精製し、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（８６３ｍｇ、４．２１ｍｍｏｌ、収率２０％）を透明な油状物として得た。LCMS (ES) m/e 206 (M+H)+.
【０１４９】
ｂ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
【化１４】
テトラヒドロフラン（７．４０７ｍｌ）およびＭｅＯＨ（１ｍＬ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１５２ｍｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）および６Ｎ水酸化ナトリウム（２．４６９ｍｌ、１４．８１ｍｍｏｌ）の溶液を７０℃で１２時間攪拌した。この反応混合物をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相のｐＨを〜４に調整し、ＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１３６ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ、収率９６％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/e 192 (M+H)+.
【０１５０】
ｃ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化１５】
２５℃にて、ジクロロメタン（７．１１３ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１３６ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）および２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２３８ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）［製造例に従って製造］の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４９７ｍｌ、２．８５ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（３９８ｍｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、この反応混合物をシリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（２９３ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ、収率６９．９％）を透明な油状物として得た。LCMS (ES) m/e 472 (M+H)+
【０１５１】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化１６】
２５℃にて、テトラヒドロフラン（１．４４８ｍｌ）およびメタノール（１．４４８ｍｌ）中、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（２９３ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン（０．１５６ｍｌ、４．９７ｍｍｏｌ）を滴下した。１２時間後、この溶液を濃縮し、シリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ（１％ＮＨ４ＯＨ）中５〜１５％ＭｅＯＨ）により精製した。この遊離塩基を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）中の残渣に、過剰量（２ｍｌ）のエーテル中２ＭＨＣｌを加えることでＨＣｌ塩に変換し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＨＣｌ塩（１５０ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ、収率５５．３％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/z = 342 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.31 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 8.16 (br. s., 3 H) 7.69 (t, J=1.89 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 7.32 (td, J=8.02, 6.44 Hz, 1 H) 7.06 - 7.18 (m, 3 H) 7.02 (td, J=8.40, 2.15 Hz, 1 H) 6.76 (dd, J=2.91, 1.64 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 4.39 (dd, J=7.83, 5.56 Hz, 1 H) 3.71 (s, 3 H) 2.85 - 3.05 (m, 4 H).
【０１５２】
実施例２
【化１７】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
ａ）５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル
【化１８】
テトラヒドロフラン（６．８２２ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（２８０ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）［実施例１で製造］およびＮＣＳ（１８２ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）の溶液を密閉試験管にて７０℃で１２時間にわたり攪拌した。この溶液をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相をＤＣＭで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中１０〜７０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１２５．４ｍｇ、０．５２３ｍｍｏｌ、収率３８．３％）［分離できないクロロ位置異性体混合物（１５：９：１）として存在する、１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（７５．２４ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ、収率２３．０１％）および２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（８．３６ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、収率２．５６％）を伴う主成分として（後にキラルＨＰＬＣを用いて分離、工程ｄ参照］を得た。LCMS (ES) m/e 240, 242 (M, M+2)+.
【０１５３】
ｂ）５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
【化１９】
水酸化ナトリウム（２．５９ｍｌ、１５．５２ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３．４７２ｍｌ）およびメタノール（０．８６８ｍｌ）中、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１８６ｍｇ、０．７７６ｍｍｏｌ）［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルおよび２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルを伴う分離できない（１５：９：１）混合物の主成分として］の溶液を７０℃で１２時間攪拌した。この反応混合物をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相のｐＨを〜４に調整し、ＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１１１．６ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ、収率６３．７％）を白色固体として［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６６．９６ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ、収率３８．２％）および２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（７．４４ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、収率４．２５％）を伴う分離できない混合物として、これらの化合物は後にキラルＨＰＬＣを用いて分離した、工程ｄ参照］得た。LCMS (ES) m/e 225, 227 (M, M+2)+.
【０１５４】
ｃ）５−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２０】
２５℃にて、ジクロロメタン（７．１１３ｍｌ）中、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１８６ｍｇ、０．８２４ｍｍｏｌ）［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸および２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を伴う分離できない（１５：９：１）混合物として］および２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２７６ｍｇ、０．８２４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５７６ｍｌ、３．３０ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（４６１ｍｇ、０．９８９ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、この反応混合物をシリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、５−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（１７４ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ、収率４１．７％）［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（１０４．４ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ、収率２５．０３％）および２−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（１１．６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、収率２．７８％）を伴う分離できない混合物として、これらの化合物は後にキラルＨＰＬＣを用いて分離した。工程ｄ参照］を得た。LCMS (ES) m/e 472 (M+H)+.
【０１５５】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２１】
２５℃にて、テトラヒドロフラン（２．８６６ｍｌ）およびメタノール（２．８７ｍｌ）中、５−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（２９０ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）混合物［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドおよび１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド］を伴う分離できない混合物として］の溶液に、ヒドラジン（０．１４４ｍｌ、４．５９ｍｍｏｌ）を滴下した。１２時間後、この溶液を濃縮し、シリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ（１％ＮＨ４ＯＨ）中５〜１５％ＭｅＯＨ）により精製した。この混合物を、キラルセルＯＪ−ＨカラムとｉＰｒＯＨ／ヘプタン（０．１％ｉＰｒＮＨ２）溶媒系を用いるキラルＨＰＬＣにより精製した。これにより標題化合物の遊離塩基が得られ、これをＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解させ、過剰量の４Ｍ ＨＣｌジオキサンで処理し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの二塩酸塩（２４ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、収率９．３３％）を得た。LCMS (ES) m/z = 376, 378 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.34 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 8.09 (br. s., 3 H) 7.65 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 7.61 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 7.25 - 7.37 (m, 1 H) 7.12 (d, J=7.07 Hz, 2 H) 6.95 - 7.06 (m, 1 H) 6.86 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 6.51 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 4.30 - 4.45 (m, 1 H) 3.56 (s, 3 H) 2.92 - 3.01 (m, 4 H).
【０１５６】
実施例３
【化２２】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、実施例２の製造中（工程２（ａ）の塩素化はピラゾールもまた塩素化する）に黄色固体として製造され、これを多成分混合物から、キラルセルＯＪ−ＨカラムとｉＰｒＯＨ／ヘプタン（０．１％ｉＰｒＮＨ２）溶媒系を用いるキラルＨＰＬＣにより精製した。これにより、標題化合物の遊離塩基を得、これをＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解させ、過剰量の４Ｍ ＨＣｌジオキサンで処理し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの二塩酸塩（６ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率２．３３３％）を得た。LCMS (ES) m/z = 376, 378 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.20 (br. s., 1 H) 8.01 (br. s., 3 H) 7.75 (s, 1 H) 7.61 (br. s., 1 H) 7.29 - 7.41 (m, 1 H) 7.07 - 7.17 (m, 3 H) 7.04 (t, J=9.09 Hz, 1 H) 6.80 (br. s., 1 H) 4.39 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 3.66 (s, 3 H) 2.92 - 3.01 (m, 4 H).
【０１５７】
実施例４
【化２３】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
ａ）５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（Ａ）、２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（Ｂ）および２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（Ｃ）
【化２４】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６．８２２ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（２８０ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）［実施例１で製造］およびＮＣＳ（１８２ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）の溶液を、密閉試験管にて７０℃で１時間攪拌した。ＮＣＳ（１８２ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）を追加し、３０分後、ＬＣＭＳは生成物が３成分混合物であることを示した（〜１：１．３：１）。この溶液をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相をＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中１０〜５０％ＥｔＯＡＣ）により精製し、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（６７ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ、収率１５．０５％）（Ａ）：LCMS (ES) m/e 274, 276 (M, M+2)+、２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１８１ｍｇ、０．５４１ｍｍｏｌ、収率３９．７％）（Ｂ）：LCMS (ES) m/e 274, 276 (M, M+2)+、および２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（５２ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ、収率１１．２４％）（Ｃ）：LCMS (ES) m/e 308, 310 (M, M+2)+を透明な油状物として得た。
【０１５８】
ｂ）５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
【化２５】
ＴＨＦ（２．１ｍｌ）およびメタノール（０．５２ｍｌ）中、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（７２ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（０．８７ｍｌ、５．２５ｍｍｏｌ）の溶液を７０℃で１２時間攪拌した。この反応混合物をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相のｐＨを〜４に調整し、ＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６８ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ、収率９４％）を黄色油状物として得た。LCM (ES) m/e 260, 262 (M, M+2)+.
【０１５９】
ｃ）５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２６】
２５℃にて、ジクロロメタン（２．６１５ｍｌ）中、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６８ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）、２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（８８ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）［製造例１で製造］の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１８３ｍｌ、１．０４６ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１３４ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、この反応混合物をシリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（９０ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ、収率５９．９％）を透明な油状物として得た。LCMS (ES) m/e 541 (M+H)+.
【０１６０】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２７】
２５℃にて、テトラヒドロフラン（８３３μｌ）およびメタノール（８３３μｌ）中、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（９０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン（４１．８μｌ、１．３３２ｍｍｏｌ）を滴下した。１２時間後、この溶液を濃縮し、シリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ（１％ＮＨ４ＯＨ）中５〜１５％ＭｅＯＨ）により精製した。この遊離塩基を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）中の残渣に過剰量（２ｍｌ）のエーテル中、２Ｍ ＨＣｌを加えることでＨＣｌ塩に変換し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＨＣｌ塩（３３ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ、収率３８．１％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/z = 410, 412 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.37 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 8.07 (br. s., 3 H) 7.84 (d, J=2.78 Hz, 1 H) 7.69 (dd, J=8.46, 1.89 Hz, 1 H) 7.25 - 7.41 (m, 1 H) 7.12 (d, J=8.08 Hz, 2 H) 7.04 (t, J=8.34 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=15.03, 1.89 Hz, 1 H) 4.37 (d, J=7.07 Hz, 1 H) 3.61 (d, J=2.27 Hz, 3 H) 2.83 - 3.08 (m, 4 H).
【０１６１】
実施例５
【化２８】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルの代わりに、２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１８１ｍｇ、０．５４１ｍｍｏｌ）を用いること以外は実施例４の手順に従い、白色固体として製造された。LCMS (ES) m/z = 410, 412 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.35 (br.s., 1 H) 8.14 (br. s., 3 H) 7.67 (t, J=2.02 Hz, 1 H) 7.34 (td, J=11.05, 3.16 Hz, 1 H) 7.13 (t, J=3.79 Hz, 2 H) 7.09 - 7.19 (m, 1 H) 7.04 (t, J=8.21 Hz, 1 H) 6.59 (dd, J=10.61, 2.02 Hz, 1 H) 4.25 - 4.49 (m, 1 H) 3.54 (d, J=3.79 Hz, 3 H) 2.94 (d, J=7.33 Hz, 3 H) 2.83 - 3.06 (m, 1 H).
【０１６２】
実施例６
【化２９】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルを２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（５２ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）に置き換えること以外は実施例４の手順に従い、白色固体として製造された。LCMS (ES) m/z = 444, 446 (M, M+2)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.33 (br.s., 1H), 8.04 (br. s., 3 H) 7.93 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 7.34 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.11 - 7.15 (m, 2 H) 7.10 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 7.05 (t, J=8.34 Hz, 1 H) 4.28 - 4.48 (m, 1 H) 3.63 (d, J=3.79 Hz, 3 H) 2.83 - 3.07 (m, 4 H).
【０１６３】
実施例７
【化３０】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオンを２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン［製造例１の手順に従って製造］に置き換えること以外は実施例４の手順に従い、白色固体として製造された。LCMS (ES) m/z = 428, 430 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.42 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 8.12 (br. s., 3 H) 7.83 (d, J=2.78 Hz, 1 H) 7.70 (dd, J=9.85, 2.02 Hz, 1 H) 7.26 - 7.48 (m, 2 H) 7.14 (br. s., 1 H) 6.96 (dd, J=15.79, 1.89 Hz, 1 H) 4.36 (d, J=6.82 Hz, 1 H) 3.61 (d, J=2.02 Hz, 3 H) 2.86 - 3.11 (m, 4 H).
【０１６４】
実施例８
【化３１】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドの製造
ａ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル
【化３２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中、５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（１５０ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）［Effenberger, F.; Krebs, A. J. Org. Chem. 1984, 49, 4687に従って製造］、１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル（１０９ｍｇ、０．８６５ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（ａｃａｃ）３（７６ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１３．７３ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２８２ｍｇ、０．８６５ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２でパージし、密閉し、９０℃で２４時間加熱した。粗反応混合物をロードし、２５ｓ Ｂｉｏｔａｇｅカラムを用いて精製し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０〜２０％）で溶出させ、３７ｍｇ（２２％）の生成物を得た。LCMS (M+Na+): 229.0。この生成物の位置化学を１３Ｃ化学シフト分析により決定した。
【０１６５】
ｂ）１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸
【化３３】
テトラヒドロフラン（１．５ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル（３７ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（４７．９ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２でパージし、密閉し、５０℃で２時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、１Ｎ ＬｉＯＨ（０．１７９ｍｌ、０．１７９ｍｍｏｌ）水溶液を加えた。この反応混合物を室温で一晩攪拌し、２Ｎ ＨＣｌでｐＨ３〜４まで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、３０ｍｇの粗生成物を得た。LCMS MS (M+H+): 227.0/229.0.
【０１６６】
ｃ）１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）−１−［（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）メチル］エチル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド
【化３４】
ジクロロメタン（ＤＣＭ）（１ｍｌ）中、１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）、２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（４６．７ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）［製造例の手順に従って製造］およびＰｙＢｒｏＰ（７４．１ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ヒューニッヒ(Hunig's)塩基（０．０６９ｍｌ、０．３９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で一晩攪拌した後、この反応混合物をそのまま２５ｓ Ｂｉｏｔａｇｅカラムにロードし、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出させ、１５ｍｇ（純度〜８５％、１８％）の生成物を白色固体として得た。LCMS (M+H+): 525.2/527.2.
【０１６７】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド
ジクロロメタン（０．２ｍＬ）と、ＭｅＯＨ（０．２ｍＬ）との混合物中、１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）−１−［（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）メチル］エチル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド（１５ｍｇ、８５％、０．０２４ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（５．８９μｌ、０．１２１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩攪拌した。白色沈殿が生じ、これを濾過し、ＤＣＭですすいだ。濾液を濃縮し、残渣をＲＰ ＨＰＬＣにより精製し、９．８ｍｇ（７９％）の生成物をＴＦＡ塩として得た。LCMS MS (M+H+): 395.2/397.2. 1HNMR (400 MHz, d-MeOH) δ 8.37 (NH, d, J = 8.8 Hz, <1H), 7.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.28-7.08 (m, 3H), 4.60-4.51 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.26-2.92 (m, 4H).
【０１６８】
実施例９
【化３５】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１．３’−ビピラゾール−３−カルボキサミドの製造
ａ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，２−ヒドラジンジカルボン酸ビス（１，１−ジメチルエチル）
【化３６】
−７８℃にて、テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中、５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（２０８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）［Effenberger, F.; Krebs, A. J. Org. Chem. 1984, 49, 4687に従って製造］の溶液に、塩化イソプロピルマグネシウム（０．５５ｍｌ、１．１０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物をこの温度で３０分間攪拌した。−７８℃で、５ｍＬのＴＨＦ中、（Ｅ）−１，２−ジアゼンジカルボン酸ビス（１，１−ジメチルエチル）（２５３ｍｇ、１．１００ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応混合物を室温まで温め、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加えて、反応を急冷した。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した。合わせた有機層を塩性溶液(brine)で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＣＯ３）、濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルカラムにて精製し、１８０ｍｇ（５７．６％）の生成物を得た。LCMS MS (M+H+): 313.2.
【０１６９】
ｂ）２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボン酸エチル
【化３７】
ジクロロメタン（４ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，２−ヒドラジンジカルボン酸ビス（１，１−ジメチルエチル）（１８０ｍｇ、０．５７６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１．１５２ｍｌ、４．６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で攪拌した。１２時間後、この反応混合物を濃縮し、その後、ＥｔＯＨに溶解させた。２，４−ジオキソペンタン酸エチル（０．０８１ｍｌ、０．５７６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１時間加熱還流した後、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ ２５ｓカラムで精製し、ＥＡ／ヘキサンで溶出させ、６３ｍｇ（４６．７％）の生成物および位置異性体を得た。LCMS (M+H+): 235.2.この位置化学を１３Ｃ化学シフト分析により決定した。
【０１７０】
ｃ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボキサミド
標題化合物は、８（ｂ）で１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチルを２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボン酸エチルに置き換えること以外は実施例８（ｂ）〜８（ｄ）の手順に従って製造された。最終生成物を、２Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いてＨＣｌ塩に変換した。LCMS (M+H+): 409.2/411.2. 1HNMR (400 MHz, d-MeOH) δ 8.45 (NH, d, J = 9 Hz, <1H), 7.69 (s, 1H), 7.28-7.06 (m, 3H), 6.73 (s, 1H), 4.60-4.47 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.28-2.84 (m, 4H), 2.26 (s, 3H).
【０１７１】
実施例１０−カプセル組成物
本発明を投与するための経口投与形態は、下表Ｉで示される割合で成分を含む標準的な二つ割りゼラチン硬カプセルに充填することにより製造される。
表Ｉ
成分 量
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル） ２５ ｍｇ
メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５
−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（実施例１の
化合物）
ラクトース ５５ ｍｇ
タルク １６ ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ４ ｍｇ
【０１７２】
実施例１１−注射用非経口組成物
本発明を投与するための注射形態は、水中１０容量％のプロピレングリコールにおいて１．５重量％のＮ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（実施例２の化合物）を攪拌することにより製造される。
【０１７３】
実施例１２−錠剤組成物
下表ＩＩで示されるスクロース、硫酸カルシウム二水和物、およびＡｋｔ阻害剤を混合し、１０％ゼラチン溶液を用い、示された割合で造粒する。これらの含水顆粒を篩にかけ、乾燥させ、デンプン、タルクおよびステアリン酸と混合し、篩いにかけ、打錠する。
表ＩＩ
成分 量
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル） ２０ ｍｇ
メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラ
ゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（実
施例３の化合物）
硫酸カルシウム脱水物 ３０ ｍｇ
スクロース ４ ｍｇ
デンプン ２ ｍｇ
タルク １ ｍｇ
ステアリン酸 ０．５ ｍｇ
【０１７４】
本発明の好ましい実施形態を上記で例示するが、本発明が本明細書で開示されるその厳密な説明に限定されず、また、特許請求の範囲内に入る総ての改変に対する権利が留保されているものと理解されるべきである。
【発明の背景】
【０００１】
本願は２００８年６月２６日に出願された米国仮出願第６１／０７５８４３号公報の優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、新規なピロール化合物、このような化合物のタンパク質キナーゼＢ（以下、ＰＫＢ／Ａｋｔ、ＰＫＢ、またはＡｋｔ）活性の阻害剤としての使用、ならびに癌および関節炎の処置における使用に関する。
【０００３】
背景技術
本発明は、セリン／トレオニンキナーゼＡｋｔ（タンパク質キナーゼＢとも呼ばれる）の１以上のイソ型の活性の阻害剤であるピロール含有化合物に関する。本発明はまた、このような化合物を含んでなる医薬組成物、および癌および関節炎の処置において本化合物を用いる方法に関する（Liu et al. Current Opin. Pharmacology 3:317-22 (2003))。
【０００４】
アポトーシス（プログラムされた細胞死）は、胚発達ならびに神経変性疾患、心血管疾患、および癌などの様々な疾患の病因において本質的な役割を果たす。最近の研究においては、プログラムされた細胞死の調節または実行に関与する様々なアポトーシス促進遺伝子産物および抗アポトーシス遺伝子産物の同定に至っている。Ｂｃｌ２またはＢｃｌ−ｘＬなどの抗アポトーシス遺伝子の発現は、様々な刺激によって誘導されるアポトーシス細胞死を阻害する。一方で、ＢａｘまたはＢａｄｎなどのアポトーシス促進遺伝子の発現は、プログラムされた細胞死をもたらす(Adams et al. Science, 281:1322-1326 (1998))。プログラムされた細胞死の実行は、カスパーゼ−３、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、およびカスパーゼ−９などを含む、カスパーゼ−１関連のプロテイナーゼにより媒介される(Thornberry et al. Science, 281:1312-1316 (1998))。
【０００５】
ホスファチジルイノシトール３’−ＯＨキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ／ＰＫＢ経路は、細胞の生存／細胞死を調節するのに重要であると思われる(Kulik et al. Mol.Cell.Biol. 17:1595-1606 (1997)、 Franke et al. Cell, 88:435-437 (1997)、 Kauffmann-Zeh et al. Nature 385:544-548 (1997)、 Hemmings Science, 275:628-630 (1997)、 Dudek et al. Science, 275:661-665 (1997))。血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、およびインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）などの生存因子は、ＰＩ３Ｋの活性を誘導することによって、様々な条件下で細胞の生存を促進する(Kulik et al. 1997, Hemmings 1997)。活性化されたＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）−三リン酸（ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３）の産生をもたらし、次いでそれは、プレクストリンホモログ（ＰＨ）ドメインを含むセリン／トレオニンキナーゼＡｋｔに結合し、その活性化を促進する(Franke et al Cell, 81:727-736 (1995)、Hemmings Science, 277:534 (1997)、Downward, Curr. Opin. Cell Biol. 10:262-267 (1998)、 Alessi et al., EMBO J. 15: 6541-6551 (1996))。ＰＩ３Ｋの特異的な阻害剤またはドミナントネガティブＡｋｔ／ＰＫＢ変異体は、これらの成長因子またはサイトカインの生存促進活性を無効にする。これまでに、ＰＩ３Ｋの阻害剤（ＬＹ２９４００２またはワートマニン）が上流キナーゼによるＡｋｔ／ＰＫＢの活性化を遮断することが開示されている。加えて、構成的に活性なＰＩ３ＫまたはＡｋｔ／ＰＫＢ変異体を導入すると、細胞が通常であればアポトーシスによる細胞死を受ける条件下で細胞の生存が促進される(Kulik et al. 1997, Dudek et al. 1997)。
【０００６】
ヒト腫瘍におけるＡｋｔレベルの分析によれば、Ａｋｔ２が、かなりの数の卵巣癌(J. Q. Cheung et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:9267-9271 (1992))および膵臓癌(J. Q. Cheung et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:3636-3641 (1996))で過剰発現されていることが示された。同様に、Ａｋｔ３は、乳癌細胞系および前立腺癌細胞系で過剰発現されていることが見出された(Nakatani et al. J. Biol.Chem. 274:21528-21532 (1999))。Ａｋｔ−２は、１２％の卵巣癌で過剰発現されていたこと、そして、Ａｋｔの増幅は未分化腫瘍の５０％で特に頻度が高かったことが示され、これは、Ａｋｔが腫瘍の攻撃性とも関係し得ることを示唆するものである(Bellacosa et al. Int. J. Cancer, 64, pp. 280-285, 1995)。Ａｋｔ１キナーゼ活性の増加は、乳癌、卵巣癌および前立腺癌において報告されている(Sun et al. Am. J. Pathol. 159: 431-7 (2001))。
【０００７】
ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３の３’リン酸を特異的に取り除くタンパク質および脂質ホスファターゼである腫瘍サプレッサーＰＴＥＮは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の負のレギュレーターである(Li et al. Science 275:1943-1947 (1997)、Stambolic et al. Cell 95:29-39 (1998)、Sun et al. Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 96:6199-6204 (1999))。ＰＴＥＮの生殖細胞系突然変異は、カウデン病などのヒト癌症候群の原因となる(Liaw et al. Nature Genetics 16:64-67 (1997)）。ＰＴＥＮは、高い割合のヒト腫瘍で欠失しており、機能的なＰＴＥＮの無い腫瘍細胞系統は、高レベルの活性型Ａｋｔを示す(Liら前掲、Guldberg et al. Cancer Research 57:3660-3663 (1997)、Risinger et al. Cancer Research 57:4736-4738 (1997))。
【０００８】
これらの所見は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路が、腫瘍形成における細胞生存またはアポトーシスを調節するのに重要な役割を果たすことを示す。
【０００９】
第２のメッセンジャーにより調節されるセリン／トレオニンタンパク質キナーゼのＡｋｔ／ＰＫＢサブファミリーの三つのメンバーが同定されており、それぞれＡｋｔ１／ＰＫＢα、Ａｋｔ２／ＰＫＢβ、およびＡｋｔ３／ＰＫＢγと呼ばれている。これらのイソ型は、特に触媒ドメインをコードしている領域が相同である。Ａｋｔ／ＰＫＢは、ＰＩ３Ｋシグナル伝達に応答して生じるリン酸化事象によって活性化される。ＰＩ３Ｋは、膜イノシトールリン脂質をリン酸化し、第２のメッセンジャーであるホスファチジル−イノシトール３，４，５−三リン酸およびホスファチジルイノシトール３，４−二リン酸を生成し、これがＡｋｔ／ＰＫＢのＰＨドメインと結合することが示されている。Ａｋｔ／ＰＫＢ活性化の現行モデルでは、３’リン酸化型ホスホイノシチドにより膜に酵素が補充され、そこで、上流キナーゼによるＡｋｔ／ＰＫＢの調節部位のリン酸化が生じることを提唱している(B.A. Hemmings, Science 275:628-630 (1997)、 B.A. Hemmings, Science 276:534 (1997)、 J. Downward, Science 279:673-674 (1998))。
【００１０】
Ａｋｔ１／ＰＫＢαのリン酸化は、二つの調節部位、すなわち、触媒ドメイン活性化ループ中のＴｈｒ３０８と、カルボキシ末端付近のＳｅｒ４７３とで生じる(D. R. Alessi et al. EMBO J. 15:6541-6551 (1996)およびR. Meier et al. J. Biol. Chem. 272:30491-30497 (1997))。同様の調節性リン酸化部位は、Ａｋｔ２／ＰＫＢβとＡｋｔ３／ＰＫＢγに生じる。Ａｋｔ／ＰＫＢを活性化ループ部位でリン酸化する上流キナーゼがクローニングされており、３’−ホスホイノシチド依存性タンパク質キナーゼ１（ＰＤＫ１）と呼ばれている。ＰＤＫ１は、Ａｋｔ／ＰＫＢだけでなくｐ７０リボソームＳ６キナーゼ、ｐ９０ＲＳＫ、血清およびグルココルチコイド調節型キナーゼ（ＳＧＫ）およびタンパク質キナーゼＣをリン酸化する。カルボキシ末端付近のＡｋｔ／ＰＫＢの調節部位をリン酸化する上流キナーゼはまだ同定されていないが、最近の報告では、インテグリン連結型キナーゼ（ＩＬＫ−１）、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼまたは自己リン酸化に対する役割が示唆されている。
【００１１】
Ａｋｔの活性化および活性の阻害は、ＰＩ３ＫをＬＹ２９４００２およびワートマニンなどの阻害剤で阻害することにより達成することができる。しかしながら、ＰＩ３Ｋの阻害は、３つのＡｋｔアイソザイムのみならず、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーなどのＰｄｔＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３に依存する他のＰＨドメイン含有シグナル伝達分子にも無差別に影響を及ぼす可能性がある。さらにまた、ＡｋｔがＰＩ３Ｋ非依存的な増殖シグナルによって活性化され得ることも開示されている。
【００１２】
あるいは、Ａｋｔ活性は、上流キナーゼＰＤＫ１の活性を遮断することによって阻害され得る。化合物ＵＣＮ−０１は、すでに報告されているＰＤＫ１阻害剤である(Biochem. J. 375(2):255 (2003))。また、ＰＤＫ１の阻害は、活性が非定型ＰＫＣイソ型、ＳＧＫおよびＳ６キナーゼなどのＰＤＫ１に依存する複数のタンパク質キナーゼの阻害をもたらす(Williams et al. Curr. Biol. 10:439-448 (2000))。
【００１３】
Ａｋｔの小分子阻害剤は、腫瘍、特に活性化されたＡｋｔを伴う腫瘍（例えば、ＰＴＥＮヌル腫瘍およびｒａｓ突然変異を伴う腫瘍）の処置に有用である。ＰＴＥＮはＡｋｔの重要な負のレギュレーターであり、その機能は、乳癌、前立腺癌、膠芽腫、およびバナヤン−ゾナナ症候群(Maehama, T. et al. Annual Review of Biochemistry, 70: 247 (2001))、カウデン病(Parsons, R.; Simpson, L. Methods in Molecular Biology (Totowa, NJ, United States), 222 (Tumor Suppressor Genes, Volume 1): 147 (2003))、およびレルミット−デュクロス病(Backman, S. et al. Current Opinion in Neurobiology, 12(5): 516 (2002))をはじめとするいくつかの癌症候群を含む、多くの癌で失われている。Ａｋｔの阻害は、白血病の処置に関連づけられている(J. C. Byrd, S. Stilgenbauer and I. W. Flinn "Chronic lymphocytic leukemia." Hematology / the Education Program of the American Society of Hematology. American Society of Hematology. Education Program (2004), 163-83)。Ａｋｔ３は、エストロゲン受容体欠損乳癌およびアンドロゲン非依存性前立腺癌細胞系でアップレギュレートされており、Ａｋｔ２は、膵臓癌および卵巣癌で過剰発現されている。Ａｋｔ１は胃癌で増幅されており(Staal, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 5034-7 (1987))、乳癌でアップレギュレートされている(Stal et al. Breast Cancer Res. 5: R37-R44 (2003))。従って、小分子Ａｋｔ阻害剤は、これらのタイプの癌ならびに他のタイプの癌の処置に有用であると思われる。Ａｋｔ阻害剤は、さらなる化学療法薬と組み合わせても有用である。
【００１４】
本発明の目的は、Ａｋｔ／ＰＫＢの阻害剤である新規な化合物を提供することである。
【００１５】
本発明の目的は、また、医薬担体と、本発明の方法に有用な化合物とを含んでなる医薬組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の目的は、また、このようなＡｋｔ／ＰＫＢ活性阻害剤を投与することを含んでなる癌を処置する方法を提供することである。
【００１７】
本発明の目的は、また、このようなＡｋｔ／ＰＫＢ活性阻害剤を投与することを含んでなる関節炎を処置する方法を提供することである。
【発明の概要】
【００１８】
本発明は、下記式（Ｉ）の新規な化合物またはその塩に関する：
【化１】
［式中、
Ｑは、フェニル、置換フェニル、ベンジル、および芳香環が置換されたベンジルから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４０）−（ここで、Ｒ４０は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
Ｘ、Ｙ、およびＺの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【００１９】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の薬学上許容される塩に関する。
【００２０】
本発明は、それを必要とする対象に有効量のＡｋｔ／ＰＫＢを阻害する式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる、癌を処置する方法に関する。
【００２１】
本発明は、それを必要とする対象に有効量のＡｋｔ／ＰＫＢを阻害する式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる、関節炎を処置する方法に関する。
【００２２】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物がＡｋｔ／ＰＫＢの阻害剤として有効であるという知見に関する。
【００２３】
本発明のさらなる態様では、本発明のＡｋｔ／ＰＫＢ阻害化合物の製造に有用な新規な方法が提供される。
【００２４】
本発明には、医薬担体および本発明の方法に有用な化合物を含んでなる医薬組成物が含まれる。
【００２５】
また、本発明には、本発明のＡｋｔ／ＰＫＢ阻害化合物とさらなる有効成分を共投与する方法が含まれる。
【発明の具体的説明】
【００２６】
本発明は、上記のような式（Ｉ）の化合物およびその塩、好適にはその薬学上許容される塩に関する。
【００２７】
本発明の式（Ｉ）の化合物はＡｋｔ／ＰＫＢ活性を阻害する。特に、本明細書に開示される化合物は、三つのＡｋｔ／ＰＫＢイソ型をそれぞれ阻害する。
【００２８】
本発明の式（Ｉ）の化合物には、下記式（ＩＩ）の化合物またはその塩が含まれる：
【化２】
［式中、
Ｑは、フェニル、ハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基により置換されたフェニル、ベンジル、ならびにその芳香環がハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基により置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、トリフルオロメチル、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４５）−（ここで、Ｒ４５は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【００２９】
本発明の式（Ｉ）の化合物には、式（ＩＩ）の化合物の薬学上許容される塩が含まれる。
【００３０】
本発明の式（ＩＩ）の化合物には、下記式（ＩＩＡ）の化合物またはその塩が含まれる：
【化３】
［式中、
Ｑは、フェニル、１〜２個のフルオリド置換基により置換されたフェニル、ベンジル、およびその芳香環が１〜２個のフルオリド置換基により置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｒ４は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲンおよび−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、かつ
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素である）］。
【００３１】
本発明の式（ＩＩ）の化合物には、式（ＩＩＡ）の化合物の薬学上許容される塩が含まれる。
【００３２】
本発明の式（Ｉ）の化合物には、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド、および
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボキサミド
またはその塩、好適には薬学上許容される塩が含まれる。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物およびその塩、好適には薬学上許容される塩は、本発明の医薬組成物に含まれ、本発明の方法に用いられる。
【００３４】
本明細書に記載されるある種の化合物は、１以上のキラル原子を含んでもよく、あるいはそうでなければ、二つの鏡像異性体として存在し得る。従って、本発明の化合物は、鏡像異性体の混合物ならびに精製された鏡像異性体または実質的に鏡像異性体的に富化された混合物を含む。また、総ての互変異性体および互変異性体の混合物が式（Ｉ）の化合物の範囲内に含まれると理解される。
【００３５】
本明細書に記載されるある種の化合物は溶媒和物を形成してもよく、溶媒和物は、溶質（本発明では、式（Ｉ）の化合物およびその塩、好適には薬学上許容される塩）と溶媒によって形成される様々な化学量論の複合体であると理解される。本発明の目的のためのこのような溶媒は、その溶質の生物活性に干渉しないものであろう。好適な溶媒の例としては、限定されるものではないが、水、メタノール、エタノール、および酢酸が挙げられる。好ましくは、用いる溶媒は薬学上許容される溶媒である。好適な薬学上許容される溶媒の例としては、限定されるものではないが、水、エタノール、および酢酸が挙げられる。
【００３６】
本明細書において「置換された」とは、特に断りのない限り、対象とする化学部分が、−ＣＯ２Ｒ２０、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、アミノＣ１−Ｃ４アルキル、ジＣ１−Ｃ４アルキルアミノ、ヒドロキシ、ニトロ、テトラゾール、シアノ、オキソ、ハロゲンおよびトリフルオロメチル（ここで、Ｒ２０は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびトリフルオロメチルからなる群から選択される１〜５個の置換基、好適には１〜３個の置換基を有することを意味する。
【００３７】
好適には、本明細書において「置換された」とは、対象とする化学部分が、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、アミノＣ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシ、テトラゾール、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から選択される１〜３個の置換基を有することを意味する。
【００３８】
好適には、本明細書において「置換された」とは、対象とする化学部分が、フルオリドおよびトリフルオロメチルからなる群から選択される１個の置換基を有することを意味する。
【００３９】
本明細書において「ヘテロ原子」とは、酸素、窒素、または硫黄を意味する。
【００４０】
本明細書において「ハロゲン」とは、ブロミド、ヨージド、クロリド、およびフルオリドから選択される置換基を意味する。
【００４１】
「アルキル」およびその派生語は、「−（ＣＨ２）ｎ」、「−（ＣＨ２）ｍ」などにより定義されるアルキル鎖を含む本明細書における総ての炭素鎖では、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和炭化水素鎖を意味し、特に断りのない限り、炭素鎖は１〜１２個の炭素原子を含む。本明細書で用いるアルキルの例としては、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−（ＣＨ２）３−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ２、および−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３が挙げられる。
【００４２】
本明細書において「処置する」およびその派生語は、予防的療法および治療的療法を意味する。予防的療法は、例えば、対象が癌を発症するリスクが高いと考えられる場合などの、対象が癌の家族歴を有する場合、または対象が発癌物質に曝された場合に適当である。
【００４３】
本発明の化合物の塩、好適には薬学上許容される塩は当業者によって容易に製造される。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容される塩は、本発明の医薬組成物に含まれ、本発明の方法に用いられる。−ＣＯＯＨまたは−ＯＨ基が存在する場合には、薬学上許容されるエステルが使用可能であり、例えば、−ＣＯＯＨについてはメチル、エチル、ピバロイルオキシメチルなどであり、−ＯＨについてはアセテート、マレエートなどであり、これらのエステルは、徐放処方物またはプロドラッグ処方物として用いるための、溶解度または加水分解特性の改良が当分野で知られている。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物は、以下のスキーム１〜４に示されるように、または類似の方法により製造される。総ての出発材料は、実験の節に反対のことが示されていない限り、商業的に入手可能であるか、商業的に入手可能な出発材料から当業者によって容易に作製されるか、または文献の報告に従って製造される。
【００４６】
一般スキーム
スキーム１
【化４】
試薬：（ａ）ＢＨ３ＴＨＦ、ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ、（ｂ）フタルイミド、ＰＰｈ３、ＤＩＡＤ、ＴＨＦ、ＲＴ、（ｃ）ＨＣｌ、ジオキサン／ＤＣＭ、ＲＴ
アミノ酸（Ｉ−１）を、ＴＨＦ中のボランを用いて還元し、対応するアルコール（Ｉ−２）を得た。次に、アルコール（Ｉ−２）を光延条件下で反応させて、違った保護のジアミン（Ｉ−３）を得た。光延反応は有機合成の熟練者によく知られている。このような変換の方法および反応条件はSynthesis 1981, 1-28に述べられている。ＨＣｌなどの酸を用いて（Ｉ−３）のＢｏｃ基の選択的脱保護を行い、アミン（Ｉ−４）を得た。当業者であれば多くの異なる保護基を利用でき、本明細書に挙げられている方法を妨げない限り、ここで使用可能である。アミン保護の方法は、Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (Wiley-lnterscienceにより出版)などの標準的な書籍に記載されている。
【００４７】
スキーム２
【化５】
試薬：（ａ）１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン、ＡｃＯＨ、９０℃ （ｂ）ＮＣＳ、ＤＭＦ、９０℃ （ｃ）ＮＣＳ、 ＤＭＦ ９０℃ （ｄ）６Ｎ ＮａＯＨ、ＴＨＦ （ｅ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン、ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ、ＤＣＭ、ＰｙＢｒＯＰ ２５℃ （ｆ）ヒドラジン、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ ２５℃
２，５−ビス（メチルオキシ）テトラヒドロ−３−フランカルボン酸メチル（ＩＩ−１）を、酢酸中、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン上で環化し、ピロールエステル（ＩＩ−２）を得た。その後、塩素化により、二つのモノクロロ位置異性体（ＩＩ−３）と（ＩＩ−４）の３：１混合物を得た。２倍過剰の塩素化剤では、三つの位置異性体（ＩＩ−５）、（ＩＩ−６）および（ＩＩ−７）の２：１：１混合物が得られた。エステル加水分解およびＰｙＢｒＯＰなどの好適なカップリング試薬を用いたアミド形成の後、ヒドラジンでフタルイミドの脱保護を行い、ピロールアミドを得た。
【００４８】
スキーム３
【化６】
試薬：（ａ）ＣｕＩ、Ｆｅ（ａｃａｃ）３、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、９０℃、（ｂ）ＮＣＳ、ＴＨＦ、５０℃、（ｃ）１Ｍ ＬｉＯＨ、ＴＨＦ、（ｄ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン、ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ、ＤＣＭ、ＰｙＢｒＯＰ、２５℃、（ｅ）ヒドラジン、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５℃
５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（ＩＩＩ−１）および１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル（ＩＩＩ−２）のＮ−アリール化を、Ｃｓ２ＣＯ３などの塩基の存在下、ＣｕＩなどの適当な銅塩とＦｅ（ａｃａｃ）３などの助触媒により触媒し、イミダゾールエステル（ＩＩＩ−３）を得た。次に、塩素化の後にエステル加水分解を行い、酸（ＩＩＩ−４）を得た。ＰｙＢｒＯＰなどの好適なカップリング試薬を用いたアミド形成の後、ヒドラジンでフタルイミドの脱保護を行い、イミダゾールアミド（ＩＩＩ−６）を得た。
【００４９】
スキーム４
【化７】
試薬：（ａ）ｉ−ＰｒＭｇＣｌ、ＢｏｃＮＮＢｏｃ、−７８℃、（ｂ）ジオキサン中４ＭのＨＣｌ、ＤＣＭ、ｃ）３−オキソ酪酸エチル、ＥｔＯＨ、還流、ｄ）ＮＣＳ、ＴＨＦ、５０℃、（ｅ）１Ｍ ＬｉＯＨ、ＴＨＦ、（ｆ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン、ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ、ＤＣＭ、ＰｙＢｒＯＰ、２５℃、（ｇ）ヒドラジン、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５℃
ｉＰｒＭｇＣｌを用いて５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（ＩＩＩ−１）のハロゲン−金属交換反応を行った後、中間体アニオンをビス（１，１−ジメチルエチル）（Ｅ）−１，２−ジアゼンジカルボキシレートで急冷し、Ｂｏｃ保護ヒドラジン（ＩＶ−１）を得た。ジオキサン中４ＭのＨＣｌなどの酸でＢｏｃの脱保護を行った後、３−オキソ酪酸エチルを用いて環化し、目的の（ＩＶ−２）に有利な、分割可能な位置異性体の２：１混合物を得た。次に、塩素化およびエステル加水分解により酸（ＩＶ−３）を得た。ＰｙＢｒＯＰなどの好適なカップリング試薬を用いたアミド形成の後、ヒドラジンでフタルイミドの脱保護を行い、イミダゾールアミド（ＩＶ−４）を得た。
【００５０】
本明細書において「共投与する」およびその派生語は、本明細書に記載されるＡＫＴ阻害化合物と、化学療法および放射線治療を含む癌の処置に有用であることが知られているか、または関節炎の処置に有用であることが知られているさらなる有効成分または有効成分群との同時投与または任意の様式の個別逐次投与を意味する。本発明においてさらなる有効成分または有効成分群には、癌または関節炎に対する処置を必要とする患者に投与した際に有利な特性が知られている、または有利な特性を示すいずれの化合物または治療薬も含まれる。好ましくは、投与が同時でなければ、それらの化合物は互いに近接した時間内に投与される。さらに、これらの化合物は同一投与形態で投与されるか否かは重要でなく、例えば、一方の化合物が局所投与され、他方の化合物が経口投与されてもよい。
【００５１】
一般に、本発明の癌の処置においては、処置される感受性腫瘍に対して活性を有する抗腫瘍剤を投与すればよい。このような薬剤の例としては、Cancer Principles and Practice of Oncology by VT. Devita and S. Hellman (編), 第6版 (February 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出せる。当業者ならば、どの薬剤組合せが有用であるか、その薬剤の個々の特徴と関与する癌に基づいて判断することができる。本発明で有用な典型的な抗腫瘍剤としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの抗微小管剤、白金配位錯体、ナイトロジェンマスタード、オキサアザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼンなどのアルキル化剤、アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生物質、エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、プリンおよびピリミジン類似体および抗葉酸化合物などの代謝拮抗物質、カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管形成阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス誘導薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤が挙げられる。
【００５２】
本発明のＡＫＴ阻害化合物と組み合わせて用いられる、または共投与されるさらなる有効成分または有効成分群（抗腫瘍剤）の例として、化学療法薬がある。抗微小管または抗有糸分裂剤は、細胞周期のＭ期すなわち有糸分裂期の腫瘍細胞の微小管に対して活性のある細胞周期特異的薬剤である。抗微小管剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【００５３】
天然供給源に由来するジテルペノイドは、細胞周期のＧ２／Ｍ期に働く細胞周期特異的な抗癌剤である。ジテルペノイドは微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することにより、このタンパク質を安定化すると考えられる。その後、このタンパク質の脱会合が阻害され、有糸分裂が抑えられ、細胞死に至るようである。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体のドセタキセルが挙げられる。
【００５４】
パクリタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエート１３−エステルは、タイヘイヨウイチノの木（Pacific yew tree）Taxus brevifoliaから単離される天然のジテルペン産物であり、注射溶液タキソール(TAXOL)（商標）として商業的に入手可能である。それは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。Wani et al. J. Am. Chem, Soc., 93:2325. 1971により１９７１年に最初に単離され、化学的方法およびＸ線結晶学的方法によって、その構造が同定された。その活性機構の一つは、チューブリンと結合することにより癌細胞の増殖を阻害するパクリタキセルの能力に関係する。Schiff et al. Proc. Natl, Acad, Sci. USA, 77:1561-1565 (1980)、 Schiff et al. Nature, 277:665-667 (1979)、 Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981)。いくつかのパクリタキセル誘導体の合成および抗癌活性についての総説としては、D. G. I. Kingston et al. Studies in Organic Chemistry vol. 26, 表題「New trends in Natural Products Chemistry 1986」, Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne, 編. (Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照。
【００５５】
パクリタキセルは、米国で難治性卵巣癌の処置における臨床使用が認可されており(Markman et al. Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991、 McGuire et al. Ann. lntem, Med., 111:273, 1989)、また、乳癌の処置にも認可されている(Holmes et al. J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991)。これは、皮膚の腫瘍(Einzig et al. Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)および頭頸部癌(Forastire et al. Sem. Oncol., 20:56, 1990)の処置のための有力な候補である。該化合物はまた、多発性嚢胞腎疾患(Woo et al. Nature, 368:750. 1994)、肺癌およびマラリアの処置にも可能性を示す。パクリタキセルを用いた患者の処置は、閾値濃度（５０ｎＭ）(Kearns, C.M. et al. Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995)を上回る投与を行う期間と関連して、骨髄抑制をもたらす(multiple cell lineages, Ignoff, R.J. et al. Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998)。
【００５６】
ドセタキセル、５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，１３ーエステル三水和物は、注射溶液としてのタキソテール(TAXOTERE)（商標）として商業的に入手可能である。ドセタキセルは、乳癌の処置に関して指示される。ドセタキセルは、パクリタキセル（ｑ．ｖ．）の半合成誘導体であり、ヨーロッパイチイの木の針葉から抽出される天然前駆体１０−デアセチル−バッカチン(baccatin)ＩＩＩを用いて製造される。ドセタキセルの用量制限毒性は、好中球減少である。
【００５７】
ビンカアルカロイドは、ツルニチニチソウ植物に由来する細胞周期特異的な抗腫瘍剤である。ビンカアルカロイドは、チューブリンに特異的に結合することにより細胞周期のＭ期（有糸分裂期）に作用する。結果的に、結合されたチューブリン分子は、微小管へと重合することができない。有糸分裂が分裂中期に抑えられ、細胞死に至ると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンがある。
【００５８】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射溶液としてのＶＥＬＢＡＮ（商標）として商業的に入手可能である。それらは、様々な固形腫瘍の二次療法としての適用の可能性を持つが、主として精巣癌、およびホジキン病を含む様々なリンパ腫、ならびにリンパ球性リンパ腫および組織球性リンパ腫の処置において指示される。骨髄抑制が、ビンブラスチンの用量制限副作用である。
【００５９】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチン，２２−オキソ−硫酸塩は、注射溶液としてのオンコビン(ONCOVIN)（商標）として商業的に入手可能である。ビンクリスチンは、急性白血病の処置に対して指示され、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫に対する治療計画での使用も見られる。脱毛および神経作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、また、程度は低いが、骨髄抑制および消化管粘膜炎作用が生じる。
【００６０】
酒石酸ビノレルビンの注射溶液（ナベルビン(NAVELBINE)（商標））として商業的に入手可能なビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、様々な固形腫瘍、特に非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の処置において、単剤として、または他の化学療法剤、例えばシスプラチンと組み合わせて指示される。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６１】
白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡとの相互作用性がある。この白金配位錯体は腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡと鎖内および鎖間の架橋を形成して、腫瘍に有害な生物学的影響を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【００６２】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射溶液としてのプラチノール(PLATINOL)（商標）として商業的に入手可能である。シスプラチンは、主に転移性精巣癌および卵巣癌および進行性膀胱癌の処置に指示される。シスプラチンの主な用量制限副作用は腎毒性（水和および利尿により管理可能）および内耳神経毒性である。
【００６３】
カルボプラチン、白金，ジアミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］）は、注射溶液としてのパラプラチン(PARAPLATIN)（商標）として商業的に入手可能である。カルボプラチンは、主に進行性卵巣癌の第一処置および第二処置において指示される。骨髄抑制が、カルボプラチンの用量制限毒性である。
【００６４】
アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、強力な求電子物質である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、ホスフェート、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシル、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化は核酸機能を破壊し、細胞死に至らせる。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード類、ブスルファンなどのスルホン酸アルキル類、カルムスチンなどのニトロソ尿素類、およびダカルバジンなどのトリアゼン類が挙げられる。
【００６５】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキサザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射溶液または錠剤としてのシトキサン(CYTOXAN)（商標）として商業的に入手可能である。シクロホスファミドは、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて指示される。脱毛、嘔気、嘔吐、および白血球減少が、シクロホスファミドの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６６】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射溶液または錠剤としてのアルケラン(ALKERAN)（商標）として商業的に入手可能である。メルファランは、多発性骨髄腫および卵巣の切除不能の上皮癌の待期療法として指示される。骨髄抑制が、メルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６７】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、リューケラン(LEUKERAN)（商標）錠剤として商業的に入手可能である。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待期療法として指示される。骨髄抑制が、クロラムブシルの最も一般的な用量制限副作用である。
【００６８】
ブスルファン、１，４−ブタンジオールジメタンスルホネートは、ミレラン(MYLERAN)（商標）錠剤として商業的に入手可能である。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法にとして支持される。骨髄抑制が、ブスルファンの用量制限副作用である。
【００６９】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素、凍結乾燥物質の単一バイアルとしてのＢｉＣＮＵ（商標）として商業的に入手可能である。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫の待期療法として、単剤で、または他の薬剤と組み合わせて指示される。遅発性の骨髄抑制が、カルムスチンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７０】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、単一バイアル材料としてのＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（商標）として商業的に入手可能である。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の処置のために、また、ホジキン病の第二処置のための他の薬剤と組み合わせて指示される。嘔気、嘔吐、および摂食障害が、ダカルバジンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７１】
抗生抗腫瘍剤は、ＤＮＡと結合または相互作用する、非細胞周期特異的薬剤である。一般に、その作用により、安定なＤＮＡ複合体または鎖の破損をもたらし、その核酸の正常な機能を破壊し、細胞死をもたらす。抗生抗腫瘍剤の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン類、ダウノルビシン、およびドキソルビシなどのアントラサイクリン類(anthrocyclins)、ならびにブレオマイシン類が挙げられる。
【００７２】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射製剤としてのコスメゲン(COSMEGEN)（商標）として商業的に入手可能である。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の処置に対して指示される。嘔気、嘔吐、および摂食障害が、ダクチノマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７３】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射製剤としてのダウノキソム(DAUNOXOME)（商標）として、または注射製剤としてのセルビジン(CERUBIDINE)（商標）として商業的に入手可能である。ダウノルビシンは、急性非リンパ性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の処置において緩解誘導のために指示される。骨髄抑制が、ダウノルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７４】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射製剤としてのルベックス(RUBEX)（商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ(ADRIAMYCIN RDF)（商標）として商業的に入手可能である。ドキソルビシンは、主として、急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の処置に対して指示されるが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の処置においても有用な成分である。骨髄抑制が、ドキソルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７５】
ブレオマイシン、すなわち、放線菌(Streptomyces verticillus)株から単離される細胞傷害性グリコペプチド抗生物質の混合物は、ブレノキサン(BLENOXANE)（商標）として商業的に入手可能である。ブレオマイシンは、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待期療法として、単剤で、または他の試薬と組み合わせて指示される。肺および皮膚毒性が、ブレオマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００７６】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【００７７】
エピポドフィロトキシンは、マンドレーク植物に由来する細胞周期特異的抗腫瘍剤である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩおよびＤＮＡと三重複合体を形成し、ＤＮＡ鎖の破損を引き起こすことにより、細胞周期のＳ期およびＧ２期の細胞に影響を及ぼす。これらの鎖の破損が蓄積し、細胞死に至る。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【００７８】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液剤またはカプセル剤としてのＶｅＰＥＳＩＤ（商標）として商業的に入手可能であり、一般にＶＰ−１６としても知られている。エトポシドは、精巣癌および非小細胞肺癌の処置において、単剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制が、エトポシドの最も一般的な用量制限副作用である。白血球減少の発生率が、血小板減少よりも重篤となる傾向がある。
【００７９】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射溶液としてのブモン(VUMON)（商標）として商業的に入手可能であり、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、小児における急性白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法剤との組み合わせにより指示される。骨髄抑制が、テニポシドの最も一般的な用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少と、血小板減少との両方を誘発し得る。
【００８０】
代謝拮抗腫瘍剤(Antimetabolite neoplastic agent)は、ＤＮＡ合成を阻害するか、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって、細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成期）に作用する細胞周期特異的な抗腫瘍剤である。結果として、Ｓ期が進行せず、細胞死に至る。代謝拮抗抗腫瘍剤の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メルカプトプリン(mecaptopurine)、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【００８１】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして商業的に入手可能である。５−フルオロウラシルの投与はチミジル酸合成の阻害をもたらし、ＲＮＡおよびＤＮＡの双方に組み込まれる。その結果、一般に細胞死に至る。５−フルオロウラシルは、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵臓癌の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制および粘膜炎が、５−フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体として、５−フルオロデオキシウリジン（フロキシウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【００８２】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、サイトサール−Ｕ(CYTOSAR-U)（商標）として商業的に入手可能であり、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖の末端にシタラビンが組み込まれることでＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期に細胞周期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、急性白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンは、白血球減少、血小板減少、および粘膜炎を誘発する。
【００８３】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、プリネトール(PURINETHOL)（商標）として商業的に入手可能である。メルカプトプリンは、詳細は未だ不明の機構によりＤＮＡ合成を阻害することで、Ｓ期に細胞周期特異性を示す。メルカプトプリンは、急性白血病の処置において、単剤として、または、他の化学療法剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制および消化管粘膜炎が、高用量のメルカプトプリンの予想される副作用である。有用なメルカプトプリン類似体として、アザチオプリンがある。
【００８４】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド(TABLOID)（商標）として商業的に入手可能である。チオグアニンは、詳細は未だ不明の機構によりＤＮＡ合成を阻害することで、Ｓ期に細胞周期特異性を示す。チオグアニンは、急性白血病の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。白血球減少、血小板減少、および貧血を含む骨髄抑制が、チオグアニン投与の最も一般的な用量制限副作用である。しかしながら、消化管副作用が生じ、用量制限となる場合がある。他のプリン類似体として、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【００８５】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−イソ型）は、ジェムザール(GEMZAR)（商標）として商業的に入手可能である。ゲムシタビンは、Ｇ１／Ｓ期の境界で細胞増殖を阻止することで、Ｓ期に細胞周期特異性を示す。ゲムシタビンは、局所的な進行性非小細胞肺癌の処置においてシスプラチンと組み合わせて、また、局所的な進行性膵臓癌の処置において単独で指示される。白血球減少、血小板減少、および貧血を含む骨髄抑制が、ムシタビン投与の最も一般的な用量制限副作用である。
【００８６】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして商業的に入手可能である。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジレートの合成に必要とされるジヒドロ葉酸（dyhydrofolic acid）還元酵素の阻害を通じ、ＤＮＡ合成、修復、および／または置換を阻害することによりＳ期に細胞周期特異性を示す。メトトレキサートは、絨毛膜癌腫、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳房、頭部、頚部、卵巣および膀胱の癌腫の処置において、単剤として、または他の化学療法試剤と組み合わせて指示される。骨髄抑制（白血球減少、血小板減少および貧血）および粘膜炎が、メトトレキサートの投与の予想される副作用である。
【００８７】
カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能であるか、または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連があると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの様々な光学形態が挙げられる。
【００８８】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射溶液としてのカンプトサール(CAMPTOSAR)（商標）として商業的に入手可能である。
【００８９】
イリノテカンは、その活性代謝産物ＳＮ−３８とともに、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシン誘導体である。この細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリノテカン(irintecan)またはＳＮ−３８三重複合体と複製酵素との相互作用により生じる回復不能な二本鎖破損の結果として生じると考えられる。イリノテカンは、結腸または直腸の転移癌の処置において指示される。イリノテカンＨＣｌの用量制限副作用は、好中球減少を含む骨髄抑制および下痢を含むＧＩ作用である。
【００９０】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射溶液としてのハイカムチン(HYCAMTIN)（商標）として商業的に入手可能である。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合するカンプトテシン誘導体であり、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応じてトポイソメラーゼＩにより生じる一本鎖破損の再連結を抑制する。トポテカンは、卵巣癌および小細胞肺癌の転移癌の第二処置として指示される。トポテカンＨＣｌの用量制限副作用は、骨髄抑制、主として好中球減少である。
【００９１】
また、現在開発中の、下記式Ａ：
【化８】
の、化学名「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ，Ｓ）−カンプトテシン（ラセミ混合物）または「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ）カンプトテシン（Ｒ鏡像異性体）または「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン（Ｓ鏡像異性体）」で知られるラセミ混合物（Ｒ，Ｓ）型ならびにＲおよびＳ鏡像異性体を含むカンプトテシン誘導体も着目される。このような化合物ならびに関連化合物は、製造方法を含め、米国特許第６，０６３，９２３号公報、同第５，３４２，９４７号公報、同第５，５５９，２３５号公報、同第５，４９１，２３７号公報、および１９９７年１１月２４日に出願された継続米国特許出願第０８／９７７２１７号公報に記載されている。
【００９２】
ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を処置するのに有用な化合物である。癌治療で有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の処置に有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、アミノグルテチミドおよび他のアロマターゼ阻害剤、例えば、副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の処置に有用なアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール(vorazole)およびエクセメスタン、プロゲストリン(progestrin)、例えば、ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の処置に有用な酢酸メゲストロール、エストロゲン、アンドロゲン、および抗アンドロゲン、例えば、前立腺癌および良性の前立腺肥大の処置に有用なフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロンおよび５α−還元酵素、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド、抗エストロゲン作用薬、例えば、ホルモン依存性乳癌および他の感受性癌の処置に有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、ならびに選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）、例えば米国特許第５，６８１，８３５号公報、同第５，８７７，２１９号公報、および同第６，２０７，７１６号公報に記載のもの、ならびに前立腺癌の処置のための黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨ促進薬および拮抗薬、例えば酢酸ゴセレリンおよびロイプロリド(luprolide)が挙げられる。
【００９３】
シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学的方法を遮断または阻害する阻害剤である。本明細書において、この変化は細胞増殖または分化である。本発明に有用なシグナル伝達阻害剤としては、受容体チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール(phosphotidyl inositol)−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達、およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が含まれる。
【００９４】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する様々なタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、大きくは受容体または非受容体型キナーゼとして分類することができる。
【００９５】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、トランスメンブランドメインおよびチロシンキナーゼドメインを有するトランスメンブランタンパク質である。受容体チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に成長因子受容体と呼ばれている。例えば過剰発現または突然変異による、これら多くのキナーゼの不適当または制御を欠いた活性化、すなわち異常なキナーゼ成長因子受容体活性は、制御を欠いた細胞増殖をもたらすことが示されている。従って、このようなキナーゼの異常な活性は、悪性組織増殖と関連づけられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は、癌治療法を提供し得る。成長因子受容体としては、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様ドメインおよび表皮性成長因子相同ドメインを含むチロシンキナーゼ（ＴＩＥ−２）、インスリン成長因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体ならびにＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。成長受容体のいくつかの阻害剤が開発中であり、リガンド拮抗剤、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。成長因子受容体および成長因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818、Shawver et al DDT Vol 2, No. 2 １９９７年２月、およびLofts, F. J et al, "Growth factor receptors as targets", New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy,Workman, Paul and Kerr, David編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【００９６】
成長因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼと呼ばれる。抗癌剤の標的または潜在的な標的となる、本発明で用いられる非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（焦点接着キナーゼ）、Ｂｒｕｔｏｎｓチロシンキナーゼ、およびＢｃｒ−Ａｂｌが挙げられる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465-80、およびBolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404に記載されている。
【００９７】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断薬は、ＰＩ３−Ｋｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）、およびＲａｓ−ＧＡＰを含む様々な酵素またはアダプタータンパク質におけるＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を乱す薬剤である。抗癌剤の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods 34(3) 125-32に述べられている。
【００９８】
Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）の遮断薬を含む、ＭＡＰキナーゼカスケード遮断薬を含むセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、ならびにＰＫＣ（アルファ、ベータ、ガンマ、イプシロン、ミュー、ラムダ、イオタ、ゼータ）の遮断薬を含むタンパク質キナーゼＣファミリーメンバー遮断薬。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ａｋｔキナーゼファミリーメンバー、およびＴＧＦβ受容体キナーゼ。このようなセリン／トレオニンキナーゼおよびそれらの阻害剤は、Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803、 Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107、 Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Cancer Surveys. 27:41-64、 Philip, P.A., and Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226、 米国特許第６，２６８，３９１号公報、ならびにMartinez-Iacaci, L. et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52に記載されている。
【００９９】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫおよびＫｕの遮断薬を含むホスファチジルイノシトール−３キナーゼファミリーメンバーの阻害剤もまた本発明において有用であり得る。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8、 Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308、 Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8、およびZhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545に記載されている。
【０１００】
また、本発明では、ミオイノシトールシグナル伝達阻害剤、例えば、ホスホリパーゼＣ遮断薬およびミオイノシトール類似体も着目される。このようなシグナル伝達阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Paul Workman and David Kerr編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０１０１】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。このような阻害剤には、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、および免疫療法が含まれる。このような阻害剤は、野生型変異体ｒａｓを含む細胞においてｒａｓの活性化を阻止し、それにより抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子の阻害は、Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8、Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99-102、およびBioChim. Biophys. Acta, (19899) 1423(3):19-30に記載されている。
【０１０２】
上述のように、受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体拮抗剤もまた、シグナル伝達阻害剤として機能し得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤は、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用を含む。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｃ２２５ ＥＧＦＲ特異的抗体(Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286参照)、ハーセプチン(Herceptin)（商標）ｅｒｂＢ２抗体(Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kniases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183参照)、ならびに２ＣＢ ＶＥＧＦＲ２特異的抗体(Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124参照)。
【０１０３】
非受容体型キナーゼ血管形成阻害剤は、本発明においても有用であり得る。血管形成関連ＶＥＧＦＲおよびＴＩＥ２の阻害剤は、シグナル伝達阻害剤について上述されている（両受容体とも、受容体型チロシンキナーゼである）。ｅｒｂＢ２およびＥＧＦＲの阻害剤が血管形成、主にＶＥＧＦ発現を阻害することが示されているので、血管形成は一般にｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達阻害剤と関連する。従って、非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤は、本発明の化合物と組み合わせて使用することができる。例えば、ＶＥＧＦＲ（受容体チロシンキナーゼ）を認識しないが、リガンド、血管形成を阻害するインテグリン（αｖβ３）の小分子阻害剤、エンドスタチンおよびアンギオスタチン（非ＲＴＫ）とは結合する抗ＶＥＧＦ抗体も、本明細書で開示された化合物との組合せにおいて有用である(Bruns CJ et al (2000), Cancer Res., 60: 2926-2935、 Schreiber AB, Winkler MEおよびDerynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253、Yen L et al. (2000), Oncogene 19: 3460-3469を参照）。
【０１０４】
免疫療法計画に用いられる薬剤もまた、式（Ｉ）の化合物とのとの組合せにおいて有用であり得る。免疫応答を生じさせるには、多くの免疫学的戦略が存在する。これらの戦略は一般に腫瘍ワクチン接種の範囲にある。免疫学的アプローチの有効性は、小分子阻害剤を用いたシグナル伝達経路の組合せ阻害を通じて大きく増強され得る。ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲに対する免疫学的／腫瘍ワクチンアプローチに関する考察は、Reilly RT et al. (2000), Cancer Res. 60: 3569-3576、およびChen Y, Hu D, Eling DJ, Robbins J, and Kipps TJ. (1998), Cancer Res. 58: 1965-1971に見出せる。
【０１０５】
アポトーシス誘導療法で用いられる薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組合せにおいて使用可能である。Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質のメンバーは、アポトーシスを阻止する。従って、ｂｃｌ−２のアップレギュレーションは、化学療法耐性と関連づけられている。研究によれば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）がｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシスメンバー（すなわち、ｍｃｌ−１）を刺激することが示された。従って、腫瘍においてｂｃｌ−２の発現をダウンレギュレートするように設計された戦略は、臨床的利益が実証され、現在第ＩＩ／ＩＩＩ相治験にある（すなわち、ジェンタのＧ３１３９ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）。ｂｃｌ−２に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド戦略を用いるこのようなアポトーシス誘導戦略は、Water JS et al. (2000), J. Clin. Oncol. 18: 1812-1823、およびKitada S et al. (1994), Antisense Res. Dev. 4: 71-79に述べられている。
【０１０６】
細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリー、およびそれらのサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用は、真核生物の細胞周期の進行を制御する。細胞周期の正常な進行には、別のサイクリン／ＣＤＫ複合体の同調的活性化および不活性化が必要である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発中である。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６を含むサイクリン依存性キナーゼ、およびそれらの阻害剤の例は、例えばRosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０１０７】
一つの実施形態において、本発明の癌治療法は、式（Ｉ）の化合物と、抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管形成阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス誘導薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤からなる群から選択されるものなどの少なくとも一つの抗腫瘍剤との共投与を含む。本発明の薬学上活性な化合物はＡＫＴ阻害剤として活性があることから、それらは癌および関節炎の処置における治療上の有用性を示す。
【０１０８】
よって、本発明は、ヒトを含む哺乳類において癌を処置する方法であって、該癌が脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ(Bannayan-Zonana)症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌
から選択され、
有効量の本発明のＡＫＴ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１０９】
好適には、本発明は、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、および甲状腺癌からなる群から選択される癌を処置する方法に関する。
【０１１０】
好適にな、本発明は、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、および前立腺癌から選択される癌を処置する方法に関する。
【０１１１】
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）の単離および精製
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を発現する昆虫細胞を、ポリトロン（５ｍＬ溶解バッファー／ｇ細胞）を用い、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５に溶解させた。細胞残渣を、２８，０００×ｇで３０分間遠心分離することにより除去した。上清を４．５ミクロンフィルターで濾過した後、溶解バッファーで予め平衡化したニッケルキレートカラムにのせた。このカラムを５カラム容量（ＣＶ）の溶解バッファーで、次いで、５ＣＶの２０％バッファーＢ（ここで、バッファーＢは２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、３００ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５である）で洗浄した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を、１０ＣＶ以上のバッファーＢの２０％〜１００％直線勾配で溶出した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（１３６〜４８０）溶出画分をプールし、バッファーＣ（ここで、バッファーＣは、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５である）で３倍希釈した。次いで、このサンプルを、バッファーＣで予め平衡化したＱ−セファロースＨＰカラムにてクロマトグラフィーに付した。このカラムを５ＣＶのバッファーＣで洗浄した後、５ＣＶの１０％Ｄ、５ＣＶの２０％Ｄ、５ＣＶの３０％Ｄ、５ＣＶの５０％Ｄおよび５ＣＶの１００％Ｄ（ここで、バッファーＤは、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５である）で段階的に溶出した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を含む画分をプールし、１０ｋＤａ分子量カットオフのコンセントレータで濃縮した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５で予め平衡化したスーパーデックス(Superdex)７５ゲル濾過カラムにてクロマトグラフィーに付した。Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ１（ａａ１３６〜４８０）画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥと、質量分析とを用いて調べた。タンパク質をプールし、濃縮し、−８０℃で冷凍した。
【０１１２】
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ２（ａａ１３８〜４８１）およびＨｉｓタグ付きＡＫＴ３（ａａ１３５〜４７９）を同様に単離および精製した。
【０１１３】
Ｈｉｓタグ付きＡＫＴ酵素アッセイ
基質リン酸化アッセイにおいて、本発明の化合物のＡＫＴ１、２および３タンパク質セリンキナーゼ阻害活性を試験した。このアッセイでは、小分子有機化合物の、ペプチド基質のセリンリン酸化阻害能を調べる。この基質リン酸化アッセイでは、ＡＫＴ１、２、または３の触媒ドメインを用いる。ＡＫＴ１、２、および３はまた、Upstate USA社から商業的に入手可能である。この方法では、ビオチニル化された合成ペプチド配列番号１（ビオチン−ａｈｘ−ＡＲＫＲＥＲＡＹＳＦＧＨＨＡ−アミド）のセリン残基上のＡＴＰからのγリン酸基の転位を触媒する、単離された酵素の能力を測定する。基質のリン酸化は、以下の手順によって検出した。
【０１１４】
アッセイは、３８４ウェルＵ字底白色プレートで行った。１０ｎＭの活性化ＡＫＴ酵素を、５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、４μＭ ＡＴＰ、８μＭペプチド、０．０４μＣｉ［ｇ−３３Ｐ］ＡＴＰ／ウェル、１ｍＭ ＣＨＡＰＳ、２ｍＭ ＤＴＴおよび１００％ＤＭＳＯ中の試験化合物１μＬを含有する２０μｌのアッセイ容量中、室温にて４０分間インキュベートした。この反応は、５０μｌのＳＰＡビーズミックス（Ｍｇ２＋およびＣａ２＋を含まないダルベッコＰＢＳ、０．１％トリトンＸ−１００、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５０μＭ ＡＴＰ、２．５ｍｇ／ｍｌストレプトアビジンコーティングＳＰＡビーズ）を添加することにより停止させた。このプレートを密閉し、ビーズを一晩定着させた後、そのプレートを、パッカード・トップカウント・マイクロプレート・シンチレーション・カウンター(Packard Topcount Microplate Scintillation Counter)(Packard Instrument Co., Meriden, CT)にて計数した。
【０１１５】
用量応答データを、データ換算式：１００×（Ｕ１−Ｃ２）／（Ｃ１−Ｃ２）［式中、Ｕは未知値であり、Ｃ１はＤＭＳＯに対して得られた平均対照値であり、Ｃ２は０．１Ｍ ＥＤＴＡに対して得られた平均対照値である］を用いて計算した対照％として化合物濃度に対してプロットした。データは、ｙ＝（（Ｖｍａｘ×ｘ）／（Ｋ＋ｘ））［式中、Ｖｍａｘは上漸近線(upper asymptote)であり、ＫはＩＣ５０である］で示される曲線に当てはめる。
【０１１６】
全長ヒト（ＦＬ）ＡＫＴ１のクローニング：
全長のヒトＡＫＴ１遺伝子を、５’プライマー：配列番号２ ５’ＴＡＴＡＴＡＧＧＡＴＣＣＡＴＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＧＣ３’および３’プライマー：配列番号３ ＡＡＡＴＴＴＣＴＣＧＡＧＴＣＡＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧ３’を用い、ミリスチル化ＡＫＴ１−ＥＲを含むプラスミド（ＭＴＡの下、デューク大学Robert T. Abrahamから譲渡、Klippel et al. in Molecular and Cellular Biology 1998 Volume 18 p.5699に記載）からＰＣＲにより増幅した。クローニングのために、５’プライマーはＢａｍＨＩ部位を含み、３’プライマーはＸｈｏＩ部位を含んだ。得られたＰＣＲ産物を、ＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ断片としてｐｃＤＮＡ３にサブクローニングした。システイン２５をコードする配列（ＴＧＣ）における突然変異を、QuikChange（商標） Site Directed Mutagenesis Kit (Stratagene)を用いた部位特異的突然変異誘発によって、アルギニン２５をコードする野生型ＡＫＴ１配列（ＣＧＣ）に変換した。ＡＫＴ１突然変異誘発プライマー：配列番号４ ５’ＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＣＡＣＧＣＴＡＣＴＴＣＣＴＣＣと選択プライマー：配列番号５ ５’ＣＴＣＧＡＧＣＡＴＧＣＡＡＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣ（ｐｃＤＮＡ３の多重クローニング部位のＸｂａＩ部位を破壊するように設計）を、製造業者の指示に従って用いた。発現／精製のために、ＡＫＴ１をＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ断片として単離し、ｐＦａｓｔｂａｃＨＴｂ(Invitrogen)のＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ部位にクローニングした。
【０１１７】
ＦＬヒトＡＫＴ１の発現：
発現は、Invitrogen（カタログ＃１０３５９−０１６）のＢＡＣ‐ｔｏ‐ＢＡＣバキュロウイルス発現系を用いて行った。要するに、１）ｃＤＮＡをＦａｓｔＢａｃベクターからバクミドＤＮＡに移し、２）そのバクミドＤＮＡを単離し、これを用いてＳｆ９昆虫細胞をトランスフェクトし、３）そのウイルスをＳｆ９細胞にて産生させ、４）Ｔ．ｎｉ細胞をこのウイルスに感染させ、精製に送った。
【０１１８】
ＦＬヒトＡＫＴ１の精製：
全長ＡＫＴ１の精製のため、１３０ｇのｓｆ９細胞（バッチ＃４１６４６Ｗ０２）を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、および２０ｍＭイミダゾールを含む溶解バッファー（バッファーＡ、１Ｌ、ｐＨ７．５）に再懸濁させた。細胞溶解は、Ａｖｅｓｔｉｎにより行った（１５Ｋ〜２０Ｋｐｓｉで２回通す）。細胞残渣を１６Ｋｒｐｍで１時間遠心分離することにより除去し、上清を４℃で一晩、１０ｍｌのニッケルセファロースＨＰビーズにバッチで結合させた。次いで、ビーズをカラムに移し、結合した物質をバッファーＢ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、３００ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５）で溶出した。ＡＫＴ溶出画分をプールし、バッファーＣ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５）を用いて３倍希釈した。このサンプルを濾過し、バッファーＣで予め平衡化した１０ｍＬのＱ−ＨＰカラムにて２ｍＬ／分でクロマトグラフィーに付した。
【０１１９】
このＱ−ＨＰカラムを、３カラム容量（ＣＶ）のバッファーＣで洗浄した後、５ＣＶの１０％Ｄ、５ＣＶの２０％Ｄ、５ＣＶの３０％Ｄ、５ＣＶの５０％Ｄ、および５ＣＶの１００％Ｄで段階的に溶出した（ここで、バッファーＤは、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５である）。５ｍＬ画分を集めた。ＡＫＴを含む画分をプールし５ｍｌまで濃縮した。次に、タンパク質を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．５で予め平衡化した１２０ｍｌのスーパーデックス７５サイズ分画カラムにのせた。２．５ｍＬ画分を集めた。
【０１２０】
ＡＫＴ１溶出画分をプールし、分注し（１ｍｌ）、−８０℃で保存した。質量分析およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いて、精製した全長ＡＫＴ１の純度および属性を確認した。
全長（ＦＬ）ＡＫＴ２および（ＦＬ）ＡＫＴ３も同様に単離および精製した。
【０１２１】
全長ＡＫＴ酵素アッセイ
基質リン酸化アッセイにおいて、本発明の化合物のＡＫＴ１、２、および３タンパク質セリンキナーゼ阻害活性を試験した。このアッセイでは、ペプチド基質のセリンリン酸化を阻害する小分子有機化合物の能力を調べる。基質リン酸化アッセイでは、ＡＫＴ１、２、または３の触媒ドメインを用いる。この方法は、ビオチニル化された合成ペプチド配列番号１（ビオチン−ａｈｘ−ＡＲＫＲＥＲＡＹＳＦＧＨＨＡ−アミド）のセリン残基上のＡＴＰからのγリン酸基の転位を触媒する、単離された酵素の能力を測定する。基質のリン酸化は、以下の手順によって検出した。
【０１２２】
アッセイは、３８４ウェルＵ字底白色プレートにて行った。１０ｎＭの活性化ＡＫＴ酵素を、５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２、４μＭ ＡＴＰ、８μＭペプチド、０．０４μＣｉ［ｇ−３３Ｐ］ＡＴＰ／ウェル、１ｍＭ ＣＨＡＰＳ、２ｍＭ ＤＴＴおよび１００％ＤＭＳＯ中の試験化合物１μｌを含む２０μｌのアッセイ容量中、室温にて４０分間インキュベートした。この反応は、５０μｌのＳＰＡビーズミックス（Ｍｇ２＋およびＣａ２＋を含まないダルベッコＰＢＳ、０．１％トリトンＸ−１００、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５０μＭ ＡＴＰ、２．５ｍｇ／ｍｌストレプトアビジンコーティングＳＰＡビーズ）を添加することにより停止させた。このプレートを密閉し、ビーズを一晩定着させた後、そのプレートを、パッカード・トップカウント・マイクロプレート・シンチレーション・カウンター(Packard Topcount Microplate Scintillation Counter)(Packard Instrument Co., Meriden, CT)にて計数した。
【０１２３】
用量応答データを、データ換算式：１００×（Ｕ１−Ｃ２）／（Ｃ１−Ｃ２）［式中、Ｕは未知値であり、Ｃ１はＤＭＳＯに対して得られた平均対照値であり、Ｃ２は０．１Ｍ ＥＤＴＡに対して得られた平均対照値である］を用いて計算した対照％として化合物濃度に対してプロットした。データは、ｙ＝（（Ｖｍａｘ×ｘ）／（Ｋ＋ｘ））［式中、Ｖｍａｘは上漸近線(upper asymptote)であり、ＫはＩＣ５０である］で示される曲線に当てはめる。
【０１２４】
本発明の化合物の、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２およびＡＫＴ３に対しての活性を上記のアッセイの１以上で試験する。
【０１２５】
実施例の化合物は、一般に上記のＡＫＴ酵素アッセイに従って試験し、少なくとも１回の実験で、全長ＡＫＴ１に対してｐＩＣ５０値≧６．６を示した。
【０１２６】
実施例２の化合物は、一般に上記のＡＫＴ酵素アッセイに従って試験し、少なくとも１回の実験で、全長ＡＫＴ１に対してｐＩＣ５０値８．２を示した。
【０１２７】
上記データにおいて、ｐＩＣ５０は−ｌｏｇ（ＩＣ５０）（ＩＣ５０値はモル単位で表される）と定義される。
【０１２８】
本発明の範囲内にある薬学上有効な化合物は、それを必要とする哺乳類、特にヒトにおいてＡＫＴ阻害剤として有用である。
【０１２９】
従って、本発明は、癌、関節炎およびＡＫＴ阻害を必要とする他の症状を処置する方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる方法を提供する。式（Ｉ）の化合物はまたはその薬学上許容される塩はまた、それらがＡｋｔ阻害剤として作用する能力を示したことから、上記の適応病態を処置する方法を提供する。この薬物は、それを必要とする患者に、限定されるものではないが、静脈、筋肉内、経口、皮下、皮内、および非経口を含む通常の投与経路投与経路のいずれによって投与してもよい。
【０１３０】
本発明の薬学上有効な化合物は、カプセル剤、錠剤、または注射製剤などの通常の剤形に組み込まれる。固体または液体医薬担体が用いられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が挙げられる。液体担体としては、シロップ、落花生油、オリーブ油、食塩水、および水が挙げられる。同様に、担体は、モノステアリン酸グリセリル、またはジステアリン酸グリセリルなどの任意の徐放性物質を単独で、または、ワックスとともに含んでもよい。固体担体の量は幅広く異なるが、好ましくは、用量単位当たり約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体担体が用いられる場合、製剤は、例えば、シロップ剤、エリキシル剤、エマルション、ゼラチン軟カプセル剤、アンプルなどの滅菌注射液、または水性もしくは非水性液体懸濁液の形態であろう。
【０１３１】
医薬製剤は、混合、造粒および圧縮、要すれば、錠剤の場合には、成分を混合、充填、および溶解して、必要に応じて、所望の経口または非経口製品とすることを含む、通常の製薬化学技術に従って製造される。
【０１３２】
上記の医薬投薬単位における本発明の薬学上有効な化合物の用量は、有効であり、無毒な量で、好ましくは、有効化合物は０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲から選択される。Ａｋｔ阻害剤を必要とするヒト患者を処置する場合には、選択された用量を好ましくは毎日１回〜６回、経口または非経口投与する。非経口投与の好ましい形態としては、局所、直腸、経皮、注射、および連続注入が含まれる。ヒト投与のための経口および／または非経口投与単位は、好ましくは有効化合物０．０５ｍｇ〜３５００ｍｇを含む。
【０１３３】
投与される最適用量は、当業者であれば容易に決定することができ、使用する特定のＡｋｔ阻害剤、調剤強度、投与様式、および疾患状態の進行によって異なる。患者の年齢、体重、食事、および投与時間を含む、処置される特定の患者に依存するさらなる因子も、用量調整の必要を生じるであろう。
【０１３４】
ヒトを含む哺乳類においてＡｋｔ阻害活性を誘導する本発明の方法は、このような活性を必要とする対象に、有効Ａｋｔ阻害量の本発明の薬学上有効な化合物を投与することを含んでなる。
【０１３５】
本発明はまた、Ａｋｔ阻害剤として用いるための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３６】
本発明はまた、治療に使用するための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３７】
本発明はまた、癌の処置に用いるための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３８】
本発明はまた、関節炎の処置に用いるための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【０１３９】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と、薬学上許容される担体とを含んでなる、Ａｋｔ阻害剤として用いるための医薬組成物を提供する。
【０１４０】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と、薬学上許容される担体をと含んでなる、癌の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０１４１】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と、薬学上許容される担体とを含んでなる、関節炎の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０１４２】
さらに、本発明の薬学上有効な化合物は、例えば癌または関節炎を処置することが知られている他の化合物またはＡｋｔ阻害剤と組み合わせて用いた場合に有用性を示すことが知られている化合物などのさらなる有効成分と共投与することができる。
【０１４３】
さらなる詳述を行わなくとも、当業者であれば、これまでの記載を用いて、本発明を最大限利用することができると考えられる。よって、以下の実施例は単に例として示すものであり、本発明の範囲を何ら限定されるものではない。
【実施例】
【０１４４】
実験の詳細
実施例１〜９の化合物は、スキーム１〜４に従って、または類似の方法によって容易に製造される。
【０１４５】
製造例１
【化９】
２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオンの製造
ａ）［（１Ｓ）−２−（３−フルオロフェニル）−１−（ヒドロキシメチル）エチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１０】
０℃で攪拌したＴＨＦ（２００ｍＬ）中、Ｎ−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−３−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン（１０ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＨ３−ＴＨＦ（８８ｍＬ、ＴＨＦ中８８ｍｍｏｌ〜１Ｍ）を加えた。１２時間後、反応をＡｃＯＨ：ＭｅＯＨ（８：５０、５８ｍＬ）で急冷し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液とＤＣＭとで分液した。次に、水相をＤＣＭで数回抽出した。合わせた有機画分を濃縮し、残渣をシリカゲルパッドに通し（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）、生成化合物（７．０ｇ、７４％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/e 270 (M+H)+.
【０１４６】
ｂ）｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１１】
２５℃にて、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中、［（１Ｓ）−２−（３−フルオロフェニル）−１−（ヒドロキシメチル）エチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（７．０ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（８．１８ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）、およびフタルイミド（４．２１ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）の溶液に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（７．５８ｍＬ、３９．０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応溶液を真空濃縮し、残渣をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で摩砕し、濾過して粗生成物（２２ｇ）を白色固体として得、これをそれ以上精製せずにそのまま用いた。LCMS (ES) m/z 399 (M+H)+.
【０１４７】
ｃ）２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
室温にて、ＤＣＭ（２００ｍＬ）中、１，１−ジメチルエチル｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（９．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（５６ｍＬ、２２６ミリモル）を加えた。１２時間後、この溶液を濾過し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で洗浄し、標題化合物（７．８ｇ、９９％）を白色ＨＣｌ塩として得た。LCMS (ES) m/z 349 (M+H)+.
【０１４８】
実施例１
【化１２】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
ａ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル
【化１３】
酢酸（２１．０３ｍｌ）中、２，５−ビス（メチルオキシ）テトラヒドロ−３−フランカルボン酸メチル（４ｇ，２１．０３ｍｍｏｌ）［Sancelme, M.; Fabre, S.; Prudhomme, M. J. Antibio. 1994 47, 7, 792に従って製造］および１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（２．０４３ｇ，２１．０３ｍｍｏｌ）の溶液を９０℃で１２０時間攪拌した。この反応混合物を濃縮した後、１Ｎ ＮａＯＨ／ＤＣＭで分液した。水相をＤＣＭで数回洗浄し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０〜７５％ＥｔＯＡｃ）により精製し、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（８６３ｍｇ、４．２１ｍｍｏｌ、収率２０％）を透明な油状物として得た。LCMS (ES) m/e 206 (M+H)+.
【０１４９】
ｂ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
【化１４】
テトラヒドロフラン（７．４０７ｍｌ）およびＭｅＯＨ（１ｍＬ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１５２ｍｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）および６Ｎ水酸化ナトリウム（２．４６９ｍｌ、１４．８１ｍｍｏｌ）の溶液を７０℃で１２時間攪拌した。この反応混合物をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相のｐＨを〜４に調整し、ＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１３６ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ、収率９６％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/e 192 (M+H)+.
【０１５０】
ｃ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化１５】
２５℃にて、ジクロロメタン（７．１１３ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１３６ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）および２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２３８ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）［製造例に従って製造］の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４９７ｍｌ、２．８５ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（３９８ｍｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、この反応混合物をシリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（２９３ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ、収率６９．９％）を透明な油状物として得た。LCMS (ES) m/e 472 (M+H)+
【０１５１】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化１６】
２５℃にて、テトラヒドロフラン（１．４４８ｍｌ）およびメタノール（１．４４８ｍｌ）中、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（２９３ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン（０．１５６ｍｌ、４．９７ｍｍｏｌ）を滴下した。１２時間後、この溶液を濃縮し、シリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ（１％ＮＨ４ＯＨ）中５〜１５％ＭｅＯＨ）により精製した。この遊離塩基を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）中の残渣に、過剰量（２ｍｌ）のエーテル中２ＭＨＣｌを加えることでＨＣｌ塩に変換し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＨＣｌ塩（１５０ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ、収率５５．３％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/z = 342 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.31 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 8.16 (br. s., 3 H) 7.69 (t, J=1.89 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 7.32 (td, J=8.02, 6.44 Hz, 1 H) 7.06 - 7.18 (m, 3 H) 7.02 (td, J=8.40, 2.15 Hz, 1 H) 6.76 (dd, J=2.91, 1.64 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 4.39 (dd, J=7.83, 5.56 Hz, 1 H) 3.71 (s, 3 H) 2.85 - 3.05 (m, 4 H).
【０１５２】
実施例２
【化１７】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
ａ）５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル
【化１８】
テトラヒドロフラン（６．８２２ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（２８０ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）［実施例１で製造］およびＮＣＳ（１８２ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）の溶液を密閉試験管にて７０℃で１２時間にわたり攪拌した。この溶液をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相をＤＣＭで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中１０〜７０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１２５．４ｍｇ、０．５２３ｍｍｏｌ、収率３８．３％）［分離できないクロロ位置異性体混合物（１５：９：１）として存在する、１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（７５．２４ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ、収率２３．０１％）および２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（８．３６ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、収率２．５６％）を伴う主成分として（後にキラルＨＰＬＣを用いて分離、工程ｄ参照］を得た。LCMS (ES) m/e 240, 242 (M, M+2)+.
【０１５３】
ｂ）５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
【化１９】
水酸化ナトリウム（２．５９ｍｌ、１５．５２ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３．４７２ｍｌ）およびメタノール（０．８６８ｍｌ）中、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１８６ｍｇ、０．７７６ｍｍｏｌ）［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルおよび２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルを伴う分離できない（１５：９：１）混合物の主成分として］の溶液を７０℃で１２時間攪拌した。この反応混合物をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相のｐＨを〜４に調整し、ＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１１１．６ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ、収率６３．７％）を白色固体として［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６６．９６ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ、収率３８．２％）および２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（７．４４ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、収率４．２５％）を伴う分離できない混合物として、これらの化合物は後にキラルＨＰＬＣを用いて分離した、工程ｄ参照］得た。LCMS (ES) m/e 225, 227 (M, M+2)+.
【０１５４】
ｃ）５−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２０】
２５℃にて、ジクロロメタン（７．１１３ｍｌ）中、５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１８６ｍｇ、０．８２４ｍｍｏｌ）［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸および２−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を伴う分離できない（１５：９：１）混合物として］および２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２７６ｍｇ、０．８２４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５７６ｍｌ、３．３０ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（４６１ｍｇ、０．９８９ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、この反応混合物をシリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、５−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（１７４ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ、収率４１．７％）［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（１０４．４ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ、収率２５．０３％）および２−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（１１．６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、収率２．７８％）を伴う分離できない混合物として、これらの化合物は後にキラルＨＰＬＣを用いて分離した。工程ｄ参照］を得た。LCMS (ES) m/e 472 (M+H)+.
【０１５５】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２１】
２５℃にて、テトラヒドロフラン（２．８６６ｍｌ）およびメタノール（２．８７ｍｌ）中、５−クロロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（２９０ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）混合物［１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドおよび１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド］を伴う分離できない混合物として］の溶液に、ヒドラジン（０．１４４ｍｌ、４．５９ｍｍｏｌ）を滴下した。１２時間後、この溶液を濃縮し、シリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ（１％ＮＨ４ＯＨ）中５〜１５％ＭｅＯＨ）により精製した。この混合物を、キラルセルＯＪ−ＨカラムとｉＰｒＯＨ／ヘプタン（０．１％ｉＰｒＮＨ２）溶媒系を用いるキラルＨＰＬＣにより精製した。これにより標題化合物の遊離塩基が得られ、これをＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解させ、過剰量の４Ｍ ＨＣｌジオキサンで処理し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの二塩酸塩（２４ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、収率９．３３％）を得た。LCMS (ES) m/z = 376, 378 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.34 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 8.09 (br. s., 3 H) 7.65 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 7.61 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 7.25 - 7.37 (m, 1 H) 7.12 (d, J=7.07 Hz, 2 H) 6.95 - 7.06 (m, 1 H) 6.86 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 6.51 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 4.30 - 4.45 (m, 1 H) 3.56 (s, 3 H) 2.92 - 3.01 (m, 4 H).
【０１５６】
実施例３
【化２２】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、実施例２の製造中（工程２（ａ）の塩素化はピラゾールもまた塩素化する）に黄色固体として製造され、これを多成分混合物から、キラルセルＯＪ−ＨカラムとｉＰｒＯＨ／ヘプタン（０．１％ｉＰｒＮＨ２）溶媒系を用いるキラルＨＰＬＣにより精製した。これにより、標題化合物の遊離塩基を得、これをＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解させ、過剰量の４Ｍ ＨＣｌジオキサンで処理し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの二塩酸塩（６ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率２．３３３％）を得た。LCMS (ES) m/z = 376, 378 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.20 (br. s., 1 H) 8.01 (br. s., 3 H) 7.75 (s, 1 H) 7.61 (br. s., 1 H) 7.29 - 7.41 (m, 1 H) 7.07 - 7.17 (m, 3 H) 7.04 (t, J=9.09 Hz, 1 H) 6.80 (br. s., 1 H) 4.39 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 3.66 (s, 3 H) 2.92 - 3.01 (m, 4 H).
【０１５７】
実施例４
【化２３】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
ａ）５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（Ａ）、２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（Ｂ）および２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（Ｃ）
【化２４】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６．８２２ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（２８０ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）［実施例１で製造］およびＮＣＳ（１８２ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）の溶液を、密閉試験管にて７０℃で１時間攪拌した。ＮＣＳ（１８２ｍｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）を追加し、３０分後、ＬＣＭＳは生成物が３成分混合物であることを示した（〜１：１．３：１）。この溶液をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相をＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中１０〜５０％ＥｔＯＡＣ）により精製し、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（６７ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ、収率１５．０５％）（Ａ）：LCMS (ES) m/e 274, 276 (M, M+2)+、２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１８１ｍｇ、０．５４１ｍｍｏｌ、収率３９．７％）（Ｂ）：LCMS (ES) m/e 274, 276 (M, M+2)+、および２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（５２ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ、収率１１．２４％）（Ｃ）：LCMS (ES) m/e 308, 310 (M, M+2)+を透明な油状物として得た。
【０１５８】
ｂ）５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
【化２５】
ＴＨＦ（２．１ｍｌ）およびメタノール（０．５２ｍｌ）中、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（７２ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（０．８７ｍｌ、５．２５ｍｍｏｌ）の溶液を７０℃で１２時間攪拌した。この反応混合物をＨ２Ｏ−ＤＣＭで分液し、水相のｐＨを〜４に調整し、ＤＭＣで数回洗浄した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６８ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ、収率９４％）を黄色油状物として得た。LCM (ES) m/e 260, 262 (M, M+2)+.
【０１５９】
ｃ）５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２６】
２５℃にて、ジクロロメタン（２．６１５ｍｌ）中、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６８ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）、２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（８８ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）［製造例１で製造］の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１８３ｍｌ、１．０４６ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１３４ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、この反応混合物をシリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０〜８０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（９０ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ、収率５９．９％）を透明な油状物として得た。LCMS (ES) m/e 541 (M+H)+.
【０１６０】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化２７】
２５℃にて、テトラヒドロフラン（８３３μｌ）およびメタノール（８３３μｌ）中、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（９０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン（４１．８μｌ、１．３３２ｍｍｏｌ）を滴下した。１２時間後、この溶液を濃縮し、シリカにドライロードし(dry loaded)、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ（１％ＮＨ４ＯＨ）中５〜１５％ＭｅＯＨ）により精製した。この遊離塩基を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）中の残渣に過剰量（２ｍｌ）のエーテル中、２Ｍ ＨＣｌを加えることでＨＣｌ塩に変換し、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＨＣｌ塩（３３ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ、収率３８．１％）を白色固体として得た。LCMS (ES) m/z = 410, 412 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.37 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 8.07 (br. s., 3 H) 7.84 (d, J=2.78 Hz, 1 H) 7.69 (dd, J=8.46, 1.89 Hz, 1 H) 7.25 - 7.41 (m, 1 H) 7.12 (d, J=8.08 Hz, 2 H) 7.04 (t, J=8.34 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=15.03, 1.89 Hz, 1 H) 4.37 (d, J=7.07 Hz, 1 H) 3.61 (d, J=2.27 Hz, 3 H) 2.83 - 3.08 (m, 4 H).
【０１６１】
実施例５
【化２８】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルの代わりに、２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（１８１ｍｇ、０．５４１ｍｍｏｌ）を用いること以外は実施例４の手順に従い、白色固体として製造された。LCMS (ES) m/z = 410, 412 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.35 (br.s., 1 H) 8.14 (br. s., 3 H) 7.67 (t, J=2.02 Hz, 1 H) 7.34 (td, J=11.05, 3.16 Hz, 1 H) 7.13 (t, J=3.79 Hz, 2 H) 7.09 - 7.19 (m, 1 H) 7.04 (t, J=8.21 Hz, 1 H) 6.59 (dd, J=10.61, 2.02 Hz, 1 H) 4.25 - 4.49 (m, 1 H) 3.54 (d, J=3.79 Hz, 3 H) 2.94 (d, J=7.33 Hz, 3 H) 2.83 - 3.06 (m, 1 H).
【０１６２】
実施例６
【化２９】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルを２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチル（５２ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）に置き換えること以外は実施例４の手順に従い、白色固体として製造された。LCMS (ES) m/z = 444, 446 (M, M+2)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.33 (br.s., 1H), 8.04 (br. s., 3 H) 7.93 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 7.34 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.11 - 7.15 (m, 2 H) 7.10 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 7.05 (t, J=8.34 Hz, 1 H) 4.28 - 4.48 (m, 1 H) 3.63 (d, J=3.79 Hz, 3 H) 2.83 - 3.07 (m, 4 H).
【０１６３】
実施例７
【化３０】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの製造
標題化合物は、２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオンを２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン［製造例１の手順に従って製造］に置き換えること以外は実施例４の手順に従い、白色固体として製造された。LCMS (ES) m/z = 428, 430 (M+H)+, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.42 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 8.12 (br. s., 3 H) 7.83 (d, J=2.78 Hz, 1 H) 7.70 (dd, J=9.85, 2.02 Hz, 1 H) 7.26 - 7.48 (m, 2 H) 7.14 (br. s., 1 H) 6.96 (dd, J=15.79, 1.89 Hz, 1 H) 4.36 (d, J=6.82 Hz, 1 H) 3.61 (d, J=2.02 Hz, 3 H) 2.86 - 3.11 (m, 4 H).
【０１６４】
実施例８
【化３１】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドの製造
ａ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル
【化３２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中、５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（１５０ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）［Effenberger, F.; Krebs, A. J. Org. Chem. 1984, 49, 4687に従って製造］、１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル（１０９ｍｇ、０．８６５ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（ａｃａｃ）３（７６ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１３．７３ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２８２ｍｇ、０．８６５ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２でパージし、密閉し、９０℃で２４時間加熱した。粗反応混合物をロードし、２５ｓ Ｂｉｏｔａｇｅカラムを用いて精製し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０〜２０％）で溶出させ、３７ｍｇ（２２％）の生成物を得た。LCMS (M+Na+): 229.0。この生成物の位置化学を１３Ｃ化学シフト分析により決定した。
【０１６５】
ｂ）１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸
【化３３】
テトラヒドロフラン（１．５ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチル（３７ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（４７．９ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２でパージし、密閉し、５０℃で２時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、１Ｎ ＬｉＯＨ（０．１７９ｍｌ、０．１７９ｍｍｏｌ）水溶液を加えた。この反応混合物を室温で一晩攪拌し、２Ｎ ＨＣｌでｐＨ３〜４まで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、３０ｍｇの粗生成物を得た。LCMS MS (M+H+): 227.0/229.0.
【０１６６】
ｃ）１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）−１−［（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）メチル］エチル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド
【化３４】
ジクロロメタン（ＤＣＭ）（１ｍｌ）中、１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）、２−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（４６．７ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）［製造例の手順に従って製造］およびＰｙＢｒｏＰ（７４．１ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ヒューニッヒ(Hunig's)塩基（０．０６９ｍｌ、０．３９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で一晩攪拌した後、この反応混合物をそのまま２５ｓ Ｂｉｏｔａｇｅカラムにロードし、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出させ、１５ｍｇ（純度〜８５％、１８％）の生成物を白色固体として得た。LCMS (M+H+): 525.2/527.2.
【０１６７】
ｄ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド
ジクロロメタン（０．２ｍＬ）と、ＭｅＯＨ（０．２ｍＬ）との混合物中、１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）−１−［（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）メチル］エチル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド（１５ｍｇ、８５％、０．０２４ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（５．８９μｌ、０．１２１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩攪拌した。白色沈殿が生じ、これを濾過し、ＤＣＭですすいだ。濾液を濃縮し、残渣をＲＰ ＨＰＬＣにより精製し、９．８ｍｇ（７９％）の生成物をＴＦＡ塩として得た。LCMS MS (M+H+): 395.2/397.2. 1HNMR (400 MHz, d-MeOH) δ 8.37 (NH, d, J = 8.8 Hz, <1H), 7.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.28-7.08 (m, 3H), 4.60-4.51 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.26-2.92 (m, 4H).
【０１６８】
実施例９
【化３５】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１．３’−ビピラゾール−３−カルボキサミドの製造
ａ）１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，２−ヒドラジンジカルボン酸ビス（１，１−ジメチルエチル）
【化３６】
−７８℃にて、テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中、５−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（２０８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）［Effenberger, F.; Krebs, A. J. Org. Chem. 1984, 49, 4687に従って製造］の溶液に、塩化イソプロピルマグネシウム（０．５５ｍｌ、１．１０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物をこの温度で３０分間攪拌した。−７８℃で、５ｍＬのＴＨＦ中、（Ｅ）−１，２−ジアゼンジカルボン酸ビス（１，１−ジメチルエチル）（２５３ｍｇ、１．１００ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応混合物を室温まで温め、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加えて、反応を急冷した。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した。合わせた有機層を塩性溶液(brine)で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＣＯ３）、濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルカラムにて精製し、１８０ｍｇ（５７．６％）の生成物を得た。LCMS MS (M+H+): 313.2.
【０１６９】
ｂ）２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボン酸エチル
【化３７】
ジクロロメタン（４ｍｌ）中、１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，２−ヒドラジンジカルボン酸ビス（１，１−ジメチルエチル）（１８０ｍｇ、０．５７６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１．１５２ｍｌ、４．６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で攪拌した。１２時間後、この反応混合物を濃縮し、その後、ＥｔＯＨに溶解させた。２，４−ジオキソペンタン酸エチル（０．０８１ｍｌ、０．５７６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１時間加熱還流した後、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ ２５ｓカラムで精製し、ＥＡ／ヘキサンで溶出させ、６３ｍｇ（４６．７％）の生成物および位置異性体を得た。LCMS (M+H+): 235.2.この位置化学を１３Ｃ化学シフト分析により決定した。
【０１７０】
ｃ）Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボキサミド
標題化合物は、８（ｂ）で１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチルを２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボン酸エチルに置き換えること以外は実施例８（ｂ）〜８（ｄ）の手順に従って製造された。最終生成物を、２Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いてＨＣｌ塩に変換した。LCMS (M+H+): 409.2/411.2. 1HNMR (400 MHz, d-MeOH) δ 8.45 (NH, d, J = 9 Hz, <1H), 7.69 (s, 1H), 7.28-7.06 (m, 3H), 6.73 (s, 1H), 4.60-4.47 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.28-2.84 (m, 4H), 2.26 (s, 3H).
【０１７１】
実施例１０−カプセル組成物
本発明を投与するための経口投与形態は、下表Ｉで示される割合で成分を含む標準的な二つ割りゼラチン硬カプセルに充填することにより製造される。
表Ｉ
成分 量
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル） ２５ ｍｇ
メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５
−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（実施例１の
化合物）
ラクトース ５５ ｍｇ
タルク １６ ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ４ ｍｇ
【０１７２】
実施例１１−注射用非経口組成物
本発明を投与するための注射形態は、水中１０容量％のプロピレングリコールにおいて１．５重量％のＮ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（実施例２の化合物）を攪拌することにより製造される。
【０１７３】
実施例１２−錠剤組成物
下表ＩＩで示されるスクロース、硫酸カルシウム二水和物、およびＡｋｔ阻害剤を混合し、１０％ゼラチン溶液を用い、示された割合で造粒する。これらの含水顆粒を篩にかけ、乾燥させ、デンプン、タルクおよびステアリン酸と混合し、篩いにかけ、打錠する。
表ＩＩ
成分 量
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル） ２０ ｍｇ
メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラ
ゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（実
施例３の化合物）
硫酸カルシウム脱水物 ３０ ｍｇ
スクロース ４ ｍｇ
デンプン ２ ｍｇ
タルク １ ｍｇ
ステアリン酸 ０．５ ｍｇ
【０１７４】
本発明の好ましい実施形態を上記で例示するが、本発明が本明細書で開示されるその厳密な説明に限定されず、また、特許請求の範囲内に入る総ての改変に対する権利が留保されているものと理解されるべきである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【化１】
［式中、
Ｑは、フェニル、置換フェニル、ベンジル、および芳香環が置換されたベンジルから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４０）−（ここで、Ｒ４０は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
Ｘ、Ｙ、およびＺは独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
Ｘ、Ｙ、およびＺの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【請求項２】
薬学上許容される塩の形態である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
下記式（ＩＩ）で表される、請求項１に記載の化合物またはその塩：
【化２】
［式中、
Ｑは、フェニル、ハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基により置換されたフェニル、ベンジル、ならびに芳香環がハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基で置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４５）−（ここで、Ｒ４５は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【請求項４】
薬学上許容される塩の形態である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
下記式（ＩＩＡ）で表される、請求項３に記載の化合物またはその塩：
【化３】
［式中、
Ｑは、フェニル、１〜２個のフルオリド置換基により置換されたフェニル、ベンジル、および芳香環が１〜２個のフルオリド置換基により置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｒ４は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲンおよび−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、かつ
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素である）］。
【請求項６】
薬学上許容される塩の形態である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド、および
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボキサミド、
から選択される、請求項１の化合物またはその塩。
【請求項８】
薬学上許容される塩の形態である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項２に記載の化合物と、薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１０】
薬学上許容される担体または希釈剤と、有効量の請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物とを含有する医薬組成物の製造方法であって、式（Ｉ）の化合物を薬学上許容される担体または希釈剤と会合させることを含んでなる、方法。
【請求項１１】
哺乳類において癌および関節炎から選択される疾患または症状を処置する、またはその重篤度を軽減する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の請求項２に記載の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１２】
哺乳類がヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳類において癌および関節炎から選択される疾患または症状を処置する、またはその重篤度を軽減する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の請求項３に記載の化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１４】
哺乳類がヒトである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌が、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌
から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌
から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
癌および関節炎から選択される疾患または症状の処置またはその重篤度の軽減に用いるための薬剤の製造における、請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１８】
哺乳類においてＡｋｔ活性を阻害する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の請求項２に記載の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１９】
哺乳類がヒトである、請求項１８の方法。
【請求項２０】
哺乳類において癌を処置する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の、
ａ）請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物および
ｂ）少なくとも一つの抗腫瘍剤
を投与することを含んでなる、方法。
【請求項２１】
少なくとも一つの抗腫瘍剤が、抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管形成阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス誘導薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤から本質的になる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がジテルペノイドおよびビンカアルカロイドから選択される抗微小管剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がジテルペノイドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がビンカアルカロイドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
少なくとも一つの抗腫瘍剤が白金配位錯体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がパクリタキセル、カルボプラチンまたはビノレルビンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がパクリタキセルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がカルボプラチンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がビノレルビンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がシグナル伝達経路阻害剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項３１】
シグナル伝達経路阻害剤が、ＶＥＧＦＲ２、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、ＢＴＫ、ＩＧＦＲ−１、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、およびｃ−ｆｍｓからなる群から選択される成長因子受容体キナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
シグナル伝達経路阻害剤が、ｒａｆｋ、ａｋｔ、およびＰＫＣ−ゼータからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
シグナル伝達経路阻害剤が、キナーゼのＳｒｃファミリーから選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
シグナル伝達経路阻害剤がｃ−ｓｒｃの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
シグナル伝達経路阻害剤が、ファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害剤から選択されるＲａｓ癌遺伝子の阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
シグナル伝達経路阻害剤が、ＰＩ３Ｋからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも一つの抗腫瘍剤が細胞周期シグナル伝達阻害剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項３８】
細胞周期シグナル伝達阻害剤が、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６群の阻害剤から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
治療に使用するための、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
癌の処置に有用な薬剤の製造のための、請求項２０に記載の医薬の組合せの使用。
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【化１】
［式中、
Ｑは、フェニル、置換フェニル、ベンジル、および芳香環が置換されたベンジルから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４０）−（ここで、Ｒ４０は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
Ｘ、Ｙ、およびＺは独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
Ｘ、Ｙ、およびＺの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【請求項２】
薬学上許容される塩の形態である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
下記式（ＩＩ）で表される、請求項１に記載の化合物またはその塩：
【化２】
［式中、
Ｑは、フェニル、ハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基により置換されたフェニル、ベンジル、ならびに芳香環がハロゲンおよびトリフルオロメチルから選択される１〜３個の置換基で置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｌは、窒素および−Ｃ（Ｈ）−から選択され、
Ｐは、窒素および−Ｃ（Ｒ４５）−（ここで、Ｒ４５は水素、−Ｃ１−Ｃ４アルキル、およびハロゲンから選択される）から選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、および−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素であり、かつ
ＰおよびＬの多くとも一つが窒素である）］。
【請求項４】
薬学上許容される塩の形態である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
下記式（ＩＩＡ）で表される、請求項３に記載の化合物またはその塩：
【化３】
［式中、
Ｑは、フェニル、１〜２個のフルオリド置換基により置換されたフェニル、ベンジル、および芳香環が１〜２個のフルオリド置換基により置換されたベンジルから選択され、
Ｒ１は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ｒ４は、水素、−Ｃ１−Ｃ２アルキル、およびハロゲンから選択され、
Ａは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、
Ｂは、−Ｃ（Ｏ）−および−Ｎ（Ｈ）−から選択され、かつ
ＸおよびＹは、独立して、窒素、−Ｃ（Ｈ）−、および−Ｃ（Ｒ２）−（ここで、Ｒ２はハロゲンおよび−Ｃ１−Ｃ４アルキルから選択される）から選択される
（ただし、ＡとＢは同一でなく、かつ
ＸおよびＹの多くとも一つが窒素である）］。
【請求項６】
薬学上許容される塩の形態である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−２，５−ジクロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−１−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド、および
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝−４’−クロロ−２’，５−ジメチル−２’Ｈ−１，３’−ビピラゾール−３−カルボキサミド、
から選択される、請求項１の化合物またはその塩。
【請求項８】
薬学上許容される塩の形態である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項２に記載の化合物と、薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１０】
薬学上許容される担体または希釈剤と、有効量の請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物とを含有する医薬組成物の製造方法であって、式（Ｉ）の化合物を薬学上許容される担体または希釈剤と会合させることを含んでなる、方法。
【請求項１１】
哺乳類において癌および関節炎から選択される疾患または症状を処置する、またはその重篤度を軽減する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の請求項２に記載の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１２】
哺乳類がヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳類において癌および関節炎から選択される疾患または症状を処置する、またはその重篤度を軽減する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の請求項３に記載の化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１４】
哺乳類がヒトである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌が、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌
から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、白血病、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）、および精巣癌
から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
癌および関節炎から選択される疾患または症状の処置またはその重篤度の軽減に用いるための薬剤の製造における、請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１８】
哺乳類においてＡｋｔ活性を阻害する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の請求項２に記載の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１９】
哺乳類がヒトである、請求項１８の方法。
【請求項２０】
哺乳類において癌を処置する方法であって、それを必要とする哺乳類に治療上有効な量の、
ａ）請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物および
ｂ）少なくとも一つの抗腫瘍剤
を投与することを含んでなる、方法。
【請求項２１】
少なくとも一つの抗腫瘍剤が、抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管形成阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス誘導薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤から本質的になる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がジテルペノイドおよびビンカアルカロイドから選択される抗微小管剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がジテルペノイドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がビンカアルカロイドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
少なくとも一つの抗腫瘍剤が白金配位錯体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がパクリタキセル、カルボプラチンまたはビノレルビンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がパクリタキセルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がカルボプラチンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がビノレルビンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも一つの抗腫瘍剤がシグナル伝達経路阻害剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項３１】
シグナル伝達経路阻害剤が、ＶＥＧＦＲ２、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、ＢＴＫ、ＩＧＦＲ−１、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、およびｃ−ｆｍｓからなる群から選択される成長因子受容体キナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
シグナル伝達経路阻害剤が、ｒａｆｋ、ａｋｔ、およびＰＫＣ−ゼータからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
シグナル伝達経路阻害剤が、キナーゼのＳｒｃファミリーから選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
シグナル伝達経路阻害剤がｃ−ｓｒｃの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
シグナル伝達経路阻害剤が、ファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害剤から選択されるＲａｓ癌遺伝子の阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
シグナル伝達経路阻害剤が、ＰＩ３Ｋからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも一つの抗腫瘍剤が細胞周期シグナル伝達阻害剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項３８】
細胞周期シグナル伝達阻害剤が、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６群の阻害剤から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
治療に使用するための、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
癌の処置に有用な薬剤の製造のための、請求項２０に記載の医薬の組合せの使用。
【公表番号】特表２０１１−５２５９２８（Ｐ２０１１−５２５９２８Ａ）
【公表日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１６５５４（Ｐ２０１１−５１６５５４）
【出願日】平成２１年６月２４日（２００９．６．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４８３７３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５８３７１
【国際公開日】平成２１年１２月３０日（２００９．１２．３０）
【出願人】（５９１００２９５７）グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (341)
【氏名又は名称原語表記】ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月２４日（２００９．６．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４８３７３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５８３７１
【国際公開日】平成２１年１２月３０日（２００９．１２．３０）
【出願人】（５９１００２９５７）グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (341)
【氏名又は名称原語表記】ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]