【課題】本発明は、アポリポタンパク質Ｂの発現を調節するための組成物および方法、ならびにより詳細には化学的に修飾されたオリゴヌクレオチドによるアポリポタンパク質Ｂの下方制御に関する。
【解決手段】薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤のセンス鎖配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤のアンチセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含んでなるｉＲＮＡ剤。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤のセンス鎖配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤のアンチセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含んでなるｉＲＮＡ剤。
【請求項２】
薬剤番号１〜１９、２４〜２６、２９、３０および３２〜４２のｉＲＮＡ剤のセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、薬剤番号１〜１９、２４〜２６、２９、３０および３２〜４２のｉＲＮＡ剤のアンチセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含んでなるｉＲＮＡ剤であって、該ｉＲＮＡ剤が、同剤とのインキュベーション後に培養ヒトＨｅｐＧ２細胞中に存在するＡｐｏＢのｍＲＮＡの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して６０％超減少させるか、あるいは細胞培養上清中に分泌されるＡｐｏＢタンパク質の量を６０％超減少させるかのうち少なくともいずれかを特徴とするｉＲＮＡ剤。
【請求項３】
薬剤番号１〜１２、１５、１７、２４、２９、３０および３２〜３５のｉＲＮＡ剤のセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、薬剤番号１〜１２、１５、１７、２４、２９、３０および３２〜３５のｉＲＮＡ剤のアンチセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含んでなるｉＲＮＡ剤であって、該ｉＲＮＡ剤が、同剤とのインキュベーション後に培養ヒトＨｅｐＧ２細胞中に存在するＡｐｏＢのｍＲＮＡの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して７０％超減少させるか、あるいは細胞培養上清中に分泌されるＡｐｏＢタンパク質の量を７０％超減少させるかのうち少なくともいずれかを特徴とするｉＲＮＡ剤。
【請求項４】
薬剤番号１〜５、７、および１１のｉＲＮＡ剤のセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、薬剤番号１〜５、７、および１１のｉＲＮＡ剤のアンチセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含んでなるｉＲＮＡ剤であって、該ｉＲＮＡ剤が、同剤とのインキュベーション後に培養ヒトＨｅｐＧ２細胞中に存在するＡｐｏＢのｍＲＮＡの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して８０％超減少させるか、あるいは細胞培養上清中に分泌されるＡｐｏＢタンパク質の量を８０％超減少させるかのうち少なくともいずれかを特徴とするｉＲＮＡ剤。
【請求項５】
センス鎖およびアンチセンス鎖からなるｉＲＮＡ剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖の各々が、薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤の配列のうちの１つとほぼ同一の少なくとも１６、１７または１８ヌクレオチドの配列からなり、鎖当たりそれぞれ１、２または３個以下のヌクレオチドが他のヌクレオチドによって置換されている（例えばアデノシンがウラシルによって置換されている）が、培養ヒトＨｅｐＧ２細胞中でのＡｐｏＢの発現を阻害する能力、ならびにＣ５７Ｂｌ／６マウスに体重１ｋｇあたり５０ｍｇまたは１００ｍｇの該ｉＲＮＡ剤を投与した後に該動物の肝臓細胞中に存在するａｐｏ−ＢのｍＲＮＡの量をｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも２０％減少させる能力を、ほぼ保持していることを特徴とするｉＲＮＡ剤。
【請求項６】
薬剤番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、または７４のｉＲＮＡ剤の群から選択されるｉＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記ｉＲＮＡ剤が、該ｉＲＮＡ剤とのインキュベーション後に培養ヒトＨｅｐＧ２細胞中に存在するＡｐｏＢのｍＲＮＡの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して５０％超減少させるか、あるいは培養ヒトＨｅｐＧ２細胞によって細胞培養上清中に分泌されるＡｐｏＢタンパク質の量を５０％超減少させるか、あるいは体重１ｋｇあたり５０ｍｇまたは１００ｍｇの投与後にＣ５７Ｂｌ／６マウスの肝臓細胞中に存在するａｐｏ−ＢのｍＲＮＡの量を、ｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも２０％減少させるかのうち少なくともいずれかの特徴を有する、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項８】
前記アンチセンスＲＮＡ鎖の長さが３０ヌクレオチド以下であり、前記ｉＲＮＡ剤の２重鎖領域の長さが１５〜３０ヌクレオチド対である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記ｉＲＮＡ剤が肝臓を起源とするマウス培養細胞中に存在するＡｐｏＢのｍＲＮＡの量をさらに減少させる、請求項１〜８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１０】
前記ｉＲＮＡ剤に生物試料中での高い安定性を付与する修飾を含んでなる、請求項１〜９のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１１】
ホスホロチオエートまたは２’−修飾ヌクレオチドを含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１２】
ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１個の５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１個の５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１個の５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド；または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１個の５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項１１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１３】
存在する全ての配列モチーフ５’−ＵＡ−３’、５’−ＣＡ−３’、５’−ＵＵ−３’、および５’−ＵＧ−３’の５’側のピリミジンが２’−修飾ヌクレオチドであるか、あるいは
センス鎖中の全ピリミジンが２’−修飾ヌクレオチドであり、かつ存在する全ての配列モチーフ５’−ＵＡ−３’および５’−ＣＡ−３’の５’側のピリミジンが２’−修飾ヌクレオチドであるか、あるいは
センス鎖中の全ピリミジンが２’−修飾ヌクレオチドであり、かつアンチセンス鎖中の存在する全ての配列モチーフ５’−ＵＡ−３’、５’−ＣＡ−３’、５’−ＵＵ−３’、および５’−ＵＧ−３’の５’側のピリミジンが２’−修飾ヌクレオチドである、請求項１２に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１４】
前記２’−修飾が、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１５】
１〜４個の対合していないヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部分を含んでなる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１６】
前記ヌクレオチド突出部分が２または３の対合していないヌクレオチドを有する、請求項１５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１７】
前記ヌクレオチド突出部分がｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’端に存在する、請求項１５または１６に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１８】
コレステロール部分を含んでなる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１９】
前記コレステロール部分がｉＲＮＡ剤のセンス鎖の３’端に結合している、請求項１８に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２０】
前記ｉＲＮＡ剤が肝臓の細胞により取り込まれるように標的化されている、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２１】
前記ｉＲＮＡ剤が消化管の細胞により取り込まれるように標的化されている、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２２】
脂質障害を有するかあるいは発症する危険があるヒト対象を治療する方法であって、ｉＲＮＡ剤を投与することからなり、該ｉＲＮＡ剤が、薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤のセンス鎖配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、薬剤番号１〜７４のｉＲＮＡ剤のアンチセンス配列のうち少なくとも１５個連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含んでなることを特徴とする方法。
【請求項２３】
前記脂質障害が高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈疾患、冠状動脈心疾患、血栓症、またはアテローム性動脈硬化症である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ｉＲＮＡ剤を、前記対象の細胞または組織中のＡｐｏＢの発現を低下させるのに充分な量投与する、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
ａ．請求項１〜２１のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤、および
ｂ．医薬として許容可能な担体
からなる医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤と、医薬として許容可能な担体を配合することからなる、医薬組成物を調製する方法。
【請求項２７】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤と、細胞を接触させることからなる、細胞中のＡｐｏＢ ＲＮＡの量を減少させる方法。
【請求項２８】
ｉｎ ｖｉｔｒｏで前記ｉＲＮＡ剤と前記細胞を接触させる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
対象においてｉｎ ｖｉｖｏで前記ｉＲＮＡ剤と前記細胞を接触させる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈疾患（ＣＡＤ）、冠状動脈心疾患、血栓症、またはアテローム性動脈硬化症であると診断されている、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜２１に記載のｉＲＮＡ剤を製造する方法であって、前記ｉＲＮＡ剤を合成することからなり、センス鎖およびアンチセンス鎖が、核酸分解に対してｉＲＮＡ剤を安定化する修飾を少なくとも１個含んでなることを特徴とする方法。
【請求項３２】
前記対象が、脂質障害を有すると診断されている、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が、高コレステロール血症、高脂血症、冠状動脈疾患、冠状動脈心疾患、血栓症、またはアテローム性動脈硬化症を有すると診断されている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象がヒトである、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ＡｐｏＢ遺伝子の発現を阻害すると考えられるｉＲＮＡ剤を評価する方法であって、
ａ．ｉＲＮＡ剤を提供する工程であって、第１鎖がＡｐｏＢのｍＲＮＡのヌクレオチド配列と充分相補的であり、第２鎖が第１鎖とハイブリダイズするのに充分な第１鎖との相補性を有することを特徴とする工程と、
ｂ．ＡｐｏＢ遺伝子を含む細胞とｉＲＮＡ剤を接触させる工程と、
ｃ．細胞とｉＲＮＡ剤を接触させる前の、または接触させていない対照細胞のＡｐｏＢ遺伝子の発現と、細胞とｉＲＮＡ剤を接触させた後のＡｐｏＢ遺伝子の発現とを比較する工程と、
ｄ．ｉＲＮＡ剤がＡｐｏＢ遺伝子の発現を阻害するのに有用であるかどうかを判定する工程であって、細胞中に存在するＡｐｏＢのＲＮＡまたは該細胞によって分泌されるタンパク質の量が、細胞とｉＲＮＡ剤を接触させる前の量より少ない場合、該ｉＲＮＡは有用であることを特徴とする工程と
からなる方法。
【請求項３６】
工程ｂ〜ｄを、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびヒト以外の実験動物におけるｉｎ ｖｉｖｏの両方で実施する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
末梢血単核細胞によるインターフェロン−α産生の活性化の際の前記ｉＲＮＡ剤の活性を測定することをさらに含む、請求項３５または３６に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図５Ｄ】

【図５Ｅ】

【図５Ｆ】

【図５Ｇ】

【図５Ｈ】

【図５Ｉ】

【図５Ｊ】

【図５Ｋ】

【図５Ｌ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図６Ｄ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【公開番号】特開２０１３−７５９０３（Ｐ２０１３−７５９０３Ａ）
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２７５８６７（Ｐ２０１２−２７５８６７）
【出願日】平成２４年１２月１８日（２０１２．１２．１８）
【分割の表示】特願２００７−５３３７２４（Ｐ２００７−５３３７２４）の分割
【原出願日】平成１７年９月２６日（２００５．９．２６）
【出願人】（５０５３６９１５８）アルナイラム　ファーマシューティカルズ，　インコーポレイテッド (51)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ　ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，　ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】