本発明は、B群連鎖球菌の接着因子をコードする核酸、B群連鎖球菌の接着因子、およびこの用途に関する。具体的には本発明は、このような接着因子であるポリペプチド、およびSEQ ID NO 11〜SEQ ID NO 20からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、ならびにワクチンの製造におけるこのようなポリペプチドの用途に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群より選択される核酸配列を含む、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチドまたはその断片をコードする単離された核酸分子：
（a）SEQ ID NO 1〜SEQ ID NO 6からなる群より選択される核酸配列と少なくとも70%が同一な核酸；
（b）（a）の核酸と本質的に相補的な核酸；
（c）（a）または（b）の核酸の少なくとも15の連続する塩基を含む核酸；
（d）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件で、（a）、（b）、または（c）のポリヌクレオチドとアニールする核酸；ならびに
（e）遺伝コードの縮重を除いて、（a）、（b）、（c）、または（d）で定義された核酸とハイブリダイズする可能性のある核酸。
【請求項２】
以下からなる群より選択される核酸配列を含む、好ましくは接着因子またはその断片をコードする単離された核酸分子：
（a）Seq ID NO 7、 Seq ID NO 8、Seq ID NO 9、またはSeq ID NO 10に記載された核酸配列と少なくとも70%が同一な核酸；
（b）（a）の核酸と本質的に相補的な核酸；
（c）（a）または（b）の核酸の少なくとも15の連続する塩基を含む核酸；
（d）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件で、（a）、（b）または（c）の核酸とアニールする核酸；ならびに
（e）遺伝コードの縮重を除いて、（a）、（b）、（c）、または（d）で定義された核酸とハイブリダイズする可能性のある核酸。
【請求項３】
同一性が少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは100%である、請求項1または2のどちらかに記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
核酸分子が、16アミノ酸を含むアミノ酸モチーフの少なくとも1個のリピートを含むフィブリノーゲン結合タンパク質をコードする、請求項1または3のどちらかに記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
コードされたフィブリノーゲン結合タンパク質が、請求項7および15のどちらかに記載で特定されるアミノ酸モチーフのリピートを19個含む、請求項4記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
核酸分子が、上皮細胞、好ましくはヒト上皮細胞と相互作用する接着因子をコードする、請求項2または3のどちらかに記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
ポリペプチドが

のアミノ酸モチーフを含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子。
【請求項８】
核酸がDNA、RNA、またはこの混合物であり、好ましくは核酸分子がゲノムDNAから単離される、請求項1〜7のいずれか一項記載の核酸。
【請求項９】
請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１０】
ベクターが、請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子のいずれかにコードされたポリペプチドの組換え体発現に適合された、請求項8記載のベクター。
【請求項１１】
請求項9または10のどちらかに記載のベクターを含む、好ましくは宿主細胞である細胞。
【請求項１２】
請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子にコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子、ならびに該ポリペプチドの断片。
【請求項１３】
Seq ID NO 11〜20からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子。
【請求項１４】
Seq ID NO 113〜205からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子。
【請求項１５】

のアミノ酸モチーフを含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子。
【請求項１６】
請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子を発現させる段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片の作製法。
【請求項１７】
適切な宿主細胞を請求項9〜10のいずれか一項記載のベクターで形質転換する段階またはトランスフェクトする段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドまたはその断片を発現する細胞の作製法。
【請求項１８】
請求項12〜15のいずれか一項で定義されたポリペプチドもしくはその断片、または請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子を含む、特にワクチンである薬学的組成物。
【請求項１９】
好ましくは、ポリカチオンポリマー、免疫刺激性デオキシヌクレオチド（ODN）、合成KLKペプチド、向神経活性化合物、ミョウバン、フロインドの完全アジュバントもしくは不完全アジュバント、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される免疫刺激物質を含むことを特徴とする、請求項18記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
薬物の製造、特に対細菌感染ワクチン製造のための、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片の使用。
【請求項２１】
請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドまたはその断片の少なくとも選択的な部分と結合する抗体、または少なくともその有効部分。
【請求項２２】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびこれらの各断片からなる群より選択される、請求項21記載の抗体。
【請求項２３】
抗体を作製するための、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片の使用。
【請求項２４】
細菌感染、特にストレプトコッカス・アガラクティエ（Streptococcus agalactiae）感染を治療または予防するための薬物を調製するための、請求項21または22のどちらかに記載の抗体の使用。
【請求項２５】
以下の段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の活性を低下もしくは阻害することが可能な拮抗物質、または請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドと結合可能な拮抗物質を同定する方法：
（a）請求項12〜15のいずれか一項記載の、単離または固定化されたポリペプチドもしくはその断片と候補拮抗物質とを、候補拮抗物質と該ポリペプチドもしくはその断片との結合を可能とする条件で、候補拮抗物質と該ポリペプチドもしくはその断片との結合に応じた検出シグナルを提供可能な成分の存在下で接触させる段階；ならびに
（b）拮抗物質と対象ポリペプチドもしくはその断片との結合に応じて発生したシグナルの有無、好ましくは、ポリペプチドもしくはその断片の活性の阻害もしくは低下を可能とする化合物の存在を示すシグナルの存在を検出する段階。
【請求項２６】
以下の段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の、活性の低下もしくは阻害を可能とする拮抗物質を同定する方法：
（a）請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片を提供する段階；
（b）請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドの相互作用パートナー、好ましくは請求項21または22のどちらかに記載の抗体を提供する段階；
（c）候補拮抗物質を提供する段階；
（d）ポリペプチド、ポリペプチドの相互作用パートナー、および候補拮抗物質を反応させる段階；ならびに
（e）候補拮抗物質がポリペプチドの活性を阻害するか、または低下させるか否かを判定する段階。
【請求項２７】
以下の段階を含む、相互作用パートナーに対する、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の、相互作用活性の低下もしくは阻害を可能とする拮抗物質を同定する方法：
（a）請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片を提供する段階；
（b）該ポリペプチドもしくはその断片に対する相互作用パートナー、好ましくは請求項21または22のどちらかに記載の抗体を提供する段階；
（c）該ポリペプチドもしくはその断片と相互作用パートナーとを相互作用させて、相互作用複合体を形成させる段階；
（d）候補拮抗物質を提供する段階；
（e）候補拮抗物質と相互作用複合体との間に競合反応が起こることを可能とする段階；ならびに
（f）候補拮抗物質が、ポリペプチドもしくはその断片と相互作用パートナーとの相互作用活性を阻害するか、または低下させるか否かを判定する段階。
【請求項２８】
請求項26または27のどちらかに記載の方法で同定されたか、または同定可能な拮抗物質。
【請求項２９】
先行する請求項のいずれか一項記載の核酸分子の存在、または先行する請求項のいずれか一項記載のポリペプチドの存在を判定する段階を含む、細菌感染、好ましくはStreptococcus agalactiae感染のインビトロ診断法。
【請求項３０】
請求項1〜8のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片をコードする核酸配列の存在、または請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の存在を判定する段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の発現に関連する疾患をインビトロで診断する方法。
【請求項３１】
支持材料、および支持材料に固定された、前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチド、または前記請求項のいずれか一項記載の核酸分子を含むアフィニティ装置。
【請求項３２】
ポリペプチドもしくはその断片の相互作用パートナーを単離および/または精製および/または同定するための、前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の使用。
【請求項３３】
ポリペプチドに対するペプチド結合を生じるための、前記請求項のいずれか一項記載の任意のポリペプチドの使用。
【請求項３４】
ペプチドがアンチカリン（anticaline）を含む群から選択される、請求項33記載の使用。
【請求項３５】
アプタマーおよびシュピーゲルマーからなる群より選択される機能性核酸の作製または生成のための、前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。
【請求項３６】
前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチドの抗原としての使用。
【請求項３７】
リボザイム、アンチセンス核酸、およびsiRNAからなる群より選択される機能性リボ核酸の作製または生成のための、請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸の使用。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群より選択される核酸配列を含む、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチドまたはその断片をコードする単離された核酸分子：
（a）SEQ ID NO 1〜SEQ ID NO 6からなる群より選択される核酸配列と少なくとも70%が同一な核酸；
（b）（a）の核酸と本質的に相補的な核酸；
（c）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件で、（a）、または（b）のポリヌクレオチドとアニールする核酸；ならびに
（d）遺伝コードの縮重を除いて、（a）、（b）、または（c）で定義された核酸とハイブリダイズする可能性のある核酸。
【請求項２】
以下からなる群より選択される核酸配列を含む、好ましくは接着因子またはその断片をコードする単離された核酸分子：
（a）Seq ID NO 7、 Seq ID NO 8、Seq ID NO 9、またはSeq ID NO 10に記載された核酸配列と少なくとも70%が同一な核酸；
（b）（a）の核酸と本質的に相補的な核酸；
（c）（a）または（b）の核酸の少なくとも15の連続する塩基を含む核酸；
（d）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件で、（a）、（b）または（c）の核酸とアニールする核酸；ならびに
（e）遺伝コードの縮重を除いて、（a）、（b）、（c）、または（d）で定義された核酸とハイブリダイズする可能性のある核酸。
【請求項３】
同一性が少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは100%である、請求項1または2のどちらかに記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
核酸分子が、16アミノ酸を含むアミノ酸モチーフの少なくとも1個のリピートを含むフィブリノーゲン結合タンパク質をコードする、請求項1または3のどちらかに記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
コードされたフィブリノーゲン結合タンパク質が、請求項7および15のどちらかに記載で特定されるアミノ酸モチーフのリピートを19個含む、請求項4記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
核酸分子が、上皮細胞、好ましくはヒト上皮細胞と相互作用する接着因子をコードする、請求項2または3のどちらかに記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
ポリペプチドが

のアミノ酸モチーフを含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子。
【請求項８】
核酸がDNA、RNA、またはこの混合物であり、好ましくは核酸分子がゲノムDNAから単離される、請求項1〜7のいずれか一項記載の核酸。
【請求項９】
請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１０】
ベクターが、請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子のいずれかにコードされたポリペプチドの組換え体発現に適合された、請求項8記載のベクター。
【請求項１１】
請求項9または10のどちらかに記載のベクターを含む、好ましくは宿主細胞である細胞。
【請求項１２】
請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子にコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子、ならびに該ポリペプチドの断片。
【請求項１３】
Seq ID NO 11〜20からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子。
【請求項１４】
Seq ID NO 113〜205からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子。
【請求項１５】

のアミノ酸モチーフを含むポリペプチド、好ましくはフィブリノーゲン結合ポリペプチド、および/または接着因子。
【請求項１６】
請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子を発現させる段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片の作製法。
【請求項１７】
適切な宿主細胞を請求項9〜10のいずれか一項記載のベクターで形質転換する段階またはトランスフェクトする段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片を発現する細胞の作製法。
【請求項１８】
請求項12〜15のいずれか一項で定義されたポリペプチドもしくはその断片、または請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸分子を含む、特にワクチンである薬学的組成物。
【請求項１９】
好ましくは、ポリカチオンポリマー、免疫刺激性デオキシヌクレオチド（ODN）、合成KLKペプチド、向神経活性化合物、ミョウバン、フロインドの完全アジュバントもしくは不完全アジュバント、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される免疫刺激物質を含むことを特徴とする、請求項18記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
薬物の製造、特に対細菌感染ワクチン製造のための、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片の使用。
【請求項２１】
請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドと特異的に結合する抗体、または少なくともその有効部分。
【請求項２２】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびこれらの各断片からなる群より選択される、請求項21記載の抗体。
【請求項２３】
抗体を作製するための、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。
【請求項２４】
細菌感染、特にストレプトコッカス・アガラクティエ（Streptococcus agalactiae）感染を治療または予防するための薬物を調製するための、請求項21または22のどちらかに記載の抗体の使用。
【請求項２５】
以下の段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の活性を低下もしくは阻害することが可能な拮抗物質、または請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドと結合可能な拮抗物質を同定する方法：
（a）請求項12〜15のいずれか一項記載の、単離または固定化されたポリペプチドもしくはその断片と候補拮抗物質とを、候補拮抗物質と該ポリペプチドもしくはその断片との結合を可能とする条件で、候補拮抗物質と該ポリペプチドもしくはその断片との結合に応じた検出シグナルを提供可能な成分の存在下で接触させる段階；ならびに
（b）拮抗物質と対象ポリペプチドもしくはその断片との結合に応じて発生したシグナルの有無、好ましくは、ポリペプチドもしくはその断片の活性の阻害もしくは低下を可能とする化合物の存在を示すシグナルの存在を検出する段階。
【請求項２６】
以下の段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の、活性の低下もしくは阻害を可能とする拮抗物質を同定する方法：
（a）請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチド、またはその断片を提供する段階；
（b）請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドの相互作用パートナー、好ましくは請求項21または22のどちらかに記載の抗体を提供する段階；
（c）候補拮抗物質を提供する段階；
（d）ポリペプチド、ポリペプチドの相互作用パートナー、および候補拮抗物質を反応させる段階；ならびに
（e）候補拮抗物質がポリペプチドの活性を阻害するか、または低下させるか否かを判定する段階。
【請求項２７】
以下の段階を含む、相互作用パートナーに対する、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の、相互作用活性の低下もしくは阻害を可能とする拮抗物質を同定する方法：
（a）請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片を提供する段階；
（b）該ポリペプチドもしくはその断片に対する相互作用パートナー、好ましくは請求項21または22のどちらかに記載の抗体を提供する段階；
（c）該ポリペプチドもしくはその断片と相互作用パートナーとを相互作用させて、相互作用複合体を形成させる段階；
（d）候補拮抗物質を提供する段階；
（e）候補拮抗物質と相互作用複合体との間に競合反応が起こることを可能とする段階；ならびに
（f）候補拮抗物質が、ポリペプチドもしくはその断片と相互作用パートナーとの相互作用活性を阻害するか、または低下させるか否かを判定する段階。
【請求項２８】
請求項26または27のどちらかに記載の方法で同定されたか、または同定可能な拮抗物質。
【請求項２９】
先行する請求項のいずれか一項記載の核酸分子の存在、または先行する請求項のいずれか一項記載のポリペプチドの存在を判定する段階を含む、細菌感染、好ましくはStreptococcus agalactiae感染のインビトロ診断法。
【請求項３０】
請求項1〜8のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片をコードする核酸配列の存在、または請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の存在を判定する段階を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の発現に関連する疾患をインビトロで診断する方法。
【請求項３１】
支持材料、および支持材料に固定された、前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチド、または前記請求項のいずれか一項記載の核酸分子を含むアフィニティ装置。
【請求項３２】
ポリペプチドもしくはその断片の相互作用パートナーを単離および/または精製および/または同定するための、前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチドもしくはその断片の使用。
【請求項３３】
ポリペプチドに対するペプチド結合を生じるための、前記請求項のいずれか一項記載の任意のポリペプチドの使用。
【請求項３４】
ペプチドがアンチカリン（anticaline）を含む群から選択される、請求項33記載の使用。
【請求項３５】
アプタマーおよびシュピーゲルマーからなる群より選択される機能性核酸の作製または生成のための、前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。
【請求項３６】
前記請求項のいずれか一項記載のポリペプチドの抗原としての使用。
【請求項３７】
リボザイム、アンチセンス核酸、およびsiRNAからなる群より選択される機能性リボ核酸の作製または生成のための、請求項1〜8のいずれか一項記載の核酸の使用。

【図２】

【図３−１】

【図３−２】

【図４−１】

【図４−２】

【図５】

【図６−１】

【図６−２】

【図７−１】

【図７−２】

【図７−３】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６−１】

【図１６−２】

【図１６−３】

【図１６−４】

【図１６−５】

【図１６−６】

【図１７−１】

【図１７−２】

【図１７−３】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【公表番号】特表２００６−５２０５８３（Ｐ２００６−５２０５８３Ａ）
【公表日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５０１２９４（Ｐ２００５−５０１２９４）
【出願日】平成１５年１０月１５日（２００３．１０．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００３／０１１４３６
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３５６１８
【国際公開日】平成１６年４月２９日（２００４．４．２９）
【出願人】（５０５１４１６５７）インターセル　アーゲー (8)
【Ｆターム（参考）】