ＣＢ１受容体阻害物質
【課題】天然物由来の素材から得られ、安全性が高いＣＢ１受容体阻害物質含有組成物及びその製造方法を提供する。
【解決手段】クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミン属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する1種以上の植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物、及びその製造方法。
【解決手段】クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミン属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する1種以上の植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物、及びその製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カンナビノイド（ＣＢ）受容体は、７回膜貫通型ドメインを持つＧたんぱく質共役型の受容体に属する。このうち、ＣＢ１受容体は、主に中枢神経系に分布するが、胃、脂肪組織、肝臓、骨格筋、膵臓などの末梢組織中にも発現していることが報告されている（非特許文献１参照）。ＣＢ２受容体は、主に免疫系の細胞に分布することが分かっている（非特許文献１参照）。ＣＢ１受容体とＣＢ２受容体は４８％の相同性を示し、ＣＢ１受容体は、ラット、マウス、ヒト間において９７〜９９％のアミノ酸配列相同性を保持している。
【０００３】
今日、肥満症は、羅患率およびそれに伴う健康リスクの増大のため、主要な公衆衛生上の問題の１つであることが認識されている。これは肥満症の増加が、冠動脈性心疾患、卒中、高血圧、２型糖尿病、脂質異常症、骨関節炎、非アルコール性脂肪肝炎、癌および呼吸器障害と相関し、死亡率の増加に関連するからである。
【０００４】
肥満症管理のための現在利用できる処方薬は、一般に満腹感を誘発する、または、食事脂肪の吸収を減少させることにより、体重を減少させる。一方、アンフェタミン、メタンフェタミンおよびフェンメトラジンなどのアドレナリン作動性減量薬は、それらの乱用のリスクのため、もはや推奨されない。さらに、フェンフルラミンおよびデクスフェンフルラミンなどのセロトニン作動性減量薬は、肺や心臓に重篤な副作用があるため、もはや使用できない。
【０００５】
ＣＢ１受容体及びそのリガンドである内在性カンナビノイドはエネルギーバランスの制御に関与している。肥満時には、ＣＢ１受容体遺伝子発現や内在性カンナビノイド量が亢進しており、ＣＢ１受容体アンタゴニスト/逆アゴニストが肥満抑制薬として機能することが示唆されている（非特許文献２、３参照）。ＣＢ１受容体アンタゴニストは、視床下部に作用して一過性に摂食量を減少させる。しかし、摂食行動への効果に比べて、体重抑制効果は持続的であることから、末梢組織への作用も示唆されている。ＣＢ１受容体アンタゴニストによる末梢組織への作用のメカニズムとしては、例えば以下のものが挙げられる。酸素消費量を増加し、骨格筋における糖取り込みを増加させる。白色脂肪組織において、脂質合成に関与する酵素遺伝子の発現を抑制するなどの働きを持つアディポカインであるアディポネクチンの遺伝子発現量を促進する。肝臓において、脂肪合成系の転写因子の発現を抑制する。これら末梢組織への作用を介して、エネルギー消費を亢進させ、インスリン感受性を維持することが示唆されているが、ＣＢ１受容体アンタゴニストの抗肥満効果における主要なメカニズムはまだ議論となっている（非特許文献１参照）。
【０００６】
また、ＣＢ２受容体は免疫系への関与が示唆されていることから、ＣＢ１受容体特異的なアンタゴニストが望ましい。
【０００７】
ＣＢ１受容体アンタゴニストは、臨床試験からヒトにおける有効性も実証されている。
【０００８】
このようにＣＢ１受容体アンタゴニストは肥満を改善し、高脂血症や糖尿病などに関わるメタボリックシンドロームの予防及び/又は改善作用が期待される。
【０００９】
ＣＢ１受容体アンタゴニストとしては、リモナバン、２環式ピラゾイルおよびイミダゾリル化合物などが知られている（特許文献１、特許文献２参照）。
【００１０】
【特許文献１】特表２００７−５０９１１３号公報
【特許文献２】特表２００６−５２４２２８号公報
【非特許文献１】Diabetes Metab Res Rev 2007;23:507-517．
【非特許文献２】FASEB Ｊ. 2005 Sep;19(11):1567-9
【非特許文献３】Cell Metab. 2008 Jan;7(1):68-78
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従来的に公知である、上記したようなＣＢ１受容体アンタゴニストは高価であり、副作用などの不都合があった。よって、安全性が高く、効果の高い、容易に入手可能なＣＢ１受容体アンタゴニスト剤が望まれている。
【００１２】
本発明は、天然物由来の素材から得られ、安全性が高いＣＢ１受容体アンタゴニスト物質を含む組成物及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、日常容易に入手又は食用とし得る天然物由来の素材である特定の植物がＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含有していることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は以下［１］〜［１１］の特徴を包含する。
［１］ クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物。
［２］ 前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、［１］の組成物。
［３］ 前記ＣＢ１受容体阻害活性を有する物質は、前記植物又はその一部からの抽出物である［１］又は［２］の組成物。
［４］ クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物又はその一部を溶媒抽出に供し、抽出画分からＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を回収することを含む、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物の製造方法。
［５］ 前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、［４］の方法。
［６］ 溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル及びアセトンからなる群より選択される1種以上である、［４］又は［５］の方法。
［７］ ［４］〜［６］のいずれかの方法によって製造される、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物。
［８］ 抗肥満効果を有する、［１］〜［３］又は［７］のいずれかの組成物。
［９］ ［１］〜［３］、［７］又は［８］のいずれかの組成物を含む、飲食品。
［10］ 肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示を付した、［９］の飲食品。
［11］ ［１］〜［３］、［７］又は［８］のいずれかの組成物を含む、医薬組成物。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の組成物は、ＣＢ１受容体の活性を有意に阻害することができる。
【００１６】
また本発明の組成物は、長い間の食経験に基づいた天然物由来の組成物であるため、副作用等の心配が少なく、安価に、長期間にわたって継続的に摂取することができる。
【００１７】
さらに、本発明の組成物は、ＣＢ１受容体の活性を阻害することによる抗肥満効果を有し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明に係るＣＢ１受容体阻害物質含有組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）及びその製造方法について説明する。
【００１９】
本発明の組成物は、クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種又は複数種由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含むことを特徴とする。
【００２０】
本発明に使用することができるクワ科イチジク属の植物としては、これに限定されるものではないが、イチジク(Ｆｉｃｕｓ ｃａｒｉｃａ)、イヌビワ（Ｆｉｃｕｓ ｅｒｅｃｔａ）、ヒメイタビ（Ｆｉｃｕｓ ｓｔｉｐｕｌａｔａ）などを挙げることができる。特に、イチジクを使用することが好ましい。
【００２１】
本発明に使用することができるチガイソ科ワカメ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）、アオワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｅｔｅｒｓｅｎｉａｎａ）、ヒロメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｕｎｄａｒｉｏｉｄｅｓ）などを挙げることができる。特にワカメを使用することが好ましい。
【００２２】
本発明に使用することができるイネ科ササ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、クマザサ（Ｓａｓａ ｖｅｉｔｃｈｉｉ）、チシマザサ（Ｓａｓａ ｋｕｒｉｌｅｎｓｉｓ）、ミヤコザサ（Ｓａｓａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ）などを挙げることができる。特にクマザサを使用することが好ましい。
【００２３】
本発明に使用することができるキク科ヨモギ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ Ｐｒｉｎｃｅｐｓ）、ニガヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｂｓｉｎｔｈｉｕｍ）、シロヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ｓｔｅｌｌｅｒｉａｎａ）などを挙げることができる。特にヨモギを使用することが好ましい。
【００２４】
本発明に使用することができるセリ科クミナム属に属する植物としては、クミン（Ｃｕｍｉｎｕｍ Ｃｙｍｉｎｕ）などを挙げることができる。特にクミンを使用することが好ましい。
【００２５】
本発明に使用することができるマメ科シャクジソウ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、レッドクローバー（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ）、シロツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｒｅｐｅｎｓ）、コメツブツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｄｕｂｉｕｍ）などを挙げることができる。特にレッドクローバーを使用することが好ましい。
【００２６】
本発明に使用することができるセリ科シシウド属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｋｅｉｓｋｅｉ）、イヌトウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｈｉｋｏｋｉａｎａ）、トウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ）などを挙げることができる。特にアシタバを使用することが好ましい。
【００２７】
本発明に使用することができるシソ科ハナハッカ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、マジョラム（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ）、オレガノ （Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）などを挙げることができる。特にマジョラムを使用することが好ましい。
【００２８】
本発明に使用することができるクロウメモドキ科ナツメ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ナツメ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ）、イヌナツメ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎａ）、サネブトナツメ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ ｖａｒ．ｓｐｉｎｏｓａ）などを挙げることができる。特にベニナツメを使用することが好ましい。ベニナツメは上記のナツメなどを乾燥させたもの全般を指す一般名称である。
【００２９】
本発明に使用することができる、キク科キク属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、キク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）、イワギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｓａｗａｄｓｋｉｉ）、シュンギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｃｏｒｏｎａｒｉｕｍ）などを挙げることができる。特にコウザンコウギクを使用することが好ましい。
【００３０】
本発明に使用することができるクワ科クワ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、マグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ）、ヤマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ）、ケグワ（Ｍｏｒｕｓ ｃａｔｈａｙａｎａ）などを挙げることができる。
【００３１】
本発明に使用することができるシソ科ハッカ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ペパーミント（ｍｅｎｔｈａ ａｒｖｅｎｓｉｓ ｖａｒ． ｐｉｐｅｒａｓｃｅｎｓ）、アップルミント（Ｍｅｎｔｈａ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）、ウォーターミント（Ｍｅｎｔｈａ ａｑｕａｔｉｃａ）などを挙げることができる。特にペパーミントを使用することが好ましい。
【００３２】
本発明に使用することができるサルノコシカケ科マイタケ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、マイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）、チョレイマイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｕｍｂｅｌｌａｔａ）、シロマイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ａｌｂｉｃａｎｓ Ｉｍａｚ．）などを挙げることができる。特にマイタケを使用することが好ましい。
【００３３】
本発明に使用することができるマツ科マツ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、アカマツ（Ｐｉｎｕｓ ｋｅｓｉｙａ）、クロマツ（Ｐｉｎｕｓ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、シロマツ（Ｐｉｎｕｓ ｂｕｎｇｅａｎａ）などを挙げることができる。
【００３４】
本発明に使用することができるショウガ科ウコン属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ガジュツ（Ｃｕｒｃｕｍａ ｚｅｄｏａｒｉａ）、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ）、マンゴージンジャー（Ｃｕｒｃｕｍａ ａｍａｄａ）などを挙げることができる。特にガジュツを使用することが好ましい。
【００３５】
本発明に使用することができるフトモモ科バンジロウ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、シジウム（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ）、テリハバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）、ストロベリーグァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｍ）などを挙げることができる。特にシジウムを使用することが好ましい。
【００３６】
本発明の組成物の素材となる上記植物は、その植物体全体を使用してもよいし、植物体の一部を使用してもよい。植物体の一部として、これに限定されるものではないが、つぼみ、葉、根、茎、花、果実、種子などを挙げることができ、本発明においてその１種以上を混合して使用することもできる。
【００３７】
本発明において、上記植物は、品種及び産地は特に制限されず、野生種であってもよいし、交配により得られる栽培品種、園芸品種などであってもよい。
【００３８】
上記「ＣＢ１受容体阻害活性を有する物質」（以下、「ＣＢ１受容体阻害物質」ともいう）とは、上記植物の植物体又はその一部に由来するＣＢ１受容体阻害活性を有する任意の物質を指す。ＣＢ１受容体阻害物質は、精製品又は粗精製品のいずれであってもよい。粗精製品には、これに限定されるものではないが、例えば、植物自体若しくはその乾燥物又はこれらの破砕物、該破砕物の懸濁液若しくは懸濁物、或いは植物体若しくはその一部又はそれらの乾燥物若しくは乾燥破砕物からの抽出物などを挙げることができる。
【００３９】
本発明において、ＣＢ１受容体阻害物質は、好ましくは上記植物又はその一部由来の抽出物である。このような抽出物は、当業者に公知の抽出方法によって得ることができ、例えば抽出方法として、有機溶媒抽出、超臨界流体抽出法、加温加圧抽出法などを挙げることができる。上記抽出方法は、それぞれを単独で用いてもよいし、複数の抽出方法を組合せて用いてもよい。
【００４０】
本発明において、特に好ましい抽出方法は溶媒抽出である。溶媒抽出は当業者に知られる一般的な手法を用いて行うことができる。具体的には、まず、各植物素材の粉砕物又は乾燥破砕物に水と有機溶媒とを添加して、室温又は加温にて抽出する。有機溶媒として、これに限定されるものではないが、例えばエタノール、メタノール、酢酸エチル、アセトンなどを使用することができる。これらの有機溶媒は２種類以上を混合して用いてもよい。添加する溶媒の量は、植物素材の重量の１〜１００倍、好ましくは５〜５０倍、例えば１０倍であり、抽出時間は、５分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間、例えば約１時間である。その後、ろ過や遠心分離などにより素材残渣を含む不溶性画分を取り除き、例えば減圧蒸発により有機溶媒画分（すなわち、抽出画分）を濃縮し、流体又は乾燥形態でＣＢ１受容体阻害物質含有抽出物を得ることができる。場合により、有機溶媒抽出後の不溶性画分について有機溶媒による抽出を繰り返すことにより、有機溶媒抽出後の沈殿から本発明のＣＢ１受容体阻害物質をさらに取得することもできる。有機溶媒画分に存在する本発明のＣＢ１受容体阻害物質をさらに精製してもよく、この場合、公知の分離、精製法を適当に組み合わせて行うことができる。例えば、液−液分配、有機溶媒沈澱、各種カラムクロマトグラフィー（例えばHPLC、シリカゲルクロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーなど）、結晶化などを使用することができる。
【００４１】
本発明のＣＢ１受容体阻害物質は、上記のようにして各植物素材から取得することができるが、本発明の組成物は、既に製品化されている各植物素材のエキス製剤などをＣＢ１受容体阻害物質として含むものであってもよい。そのようなエキス製剤としては、イチジクエキス、ワカメエキス、クマザサエキス、ヨモギエキス、クミンオイル、レッドクローバーエキス、アシタバエキス、マジョラムオイル、クワエキス、ペパーミントエキス、マイタケエキス、マツバエキス、ガジュツエキスなどを挙げることができる。
【００４２】
本発明の組成物は、上記植物由来のCB1受容体阻害活性を有する物質を含む組成物であり、また本発明の組成物は、上記植物の抽出物を含有する、CB1受容体阻害活性を有する組成物である。
【００４３】
本発明の組成物は、上記のようにして得られた本発明のＣＢ１受容体阻害物質を常法により顆粒化、カプセル化、錠剤化若しくはペースト化したものであってもよい。
【００４４】
本発明の組成物は、ＣＢ１受容体阻害活性を有する。当該活性は、公知の方法によって評価することが可能であるが、In vitroではＣＢ１受容体安定発現細胞を用いた細胞内cAMP蓄積アッセイにより評価することが可能である。当該アッセイはＣＢ１受容体阻害活性を直接測定する実験系である。さらに、ＣＢ１受容体にアゴニスト活性を有する化合物はインビボで体温低下の作用を示すことが知られている（J. Pharmacol. Exp. Ther., 1994, 270, 219-227；The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Vol. 284, No. 3, 1209-1217, 1998）。
【００４５】
よって、ＣＢ１受容体阻害活性は、本発明の組成物を前投与した後、ＣＢ１受容体アゴニスト、例えば、ＨＵ２１０を投与し、その後の体温低下を本発明の組成物が阻害するか否かを判定することにより評価することができる。
【００４６】
また、本発明の組成物は抗肥満効果を有し得る。「抗肥満効果」とは、食欲抑制作用、体重増加抑制作用、体重減少作用、体脂肪蓄積抑制作用、体脂肪減少作用などの作用を指し、肥満の予防、抑制、改善および治療に有効である効果を意味する。特に本発明の組成物は、ＣＢ１受容体阻害による抗肥満効果を有し得る。
【００４７】
すでに生体内において抗肥満効果が示されているリモナバンは、In vitroにおけるヒトＣＢ１受容体安定発現CHO細胞を用いた細胞内cAMP蓄積アッセイ（The Journal of Neuroscience,July 15,1997,17(14):5327-53333）の結果よりＣＢ１受容体阻害活性を有することが明らかとなっている。また、リモナバンは、In vivoにおける経口投与により体重増加抑制効果を有することが明らかとなっている（Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 284:R345-R353,2003）。
【００４８】
これらの結果より、In vitroにおけるＣＢ１受容体阻害活性とIn vivoにおける体重増加抑制効果とが相関関係を有することは明らかである。
【００４９】
本発明の組成物、特に好ましくはイチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツバ、ガジュツ、シジウムの低極性抽出物は、ＣＢ１受容体阻害活性を有し、当該阻害活性による体重増加抑制効果を有し得る。このような抗肥満効果を有する本発明の組成物は、インスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病及び肥満などの生活習慣病をはじめとするＣＢ１受容体が関与する疾患の治療および予防に利用し得る。
【００５０】
本発明の組成物は飲食品として提供することが可能である。本発明の飲食品はＣＢ１受容体阻害活性を有する。また、本発明の飲食品の摂取により、抗肥満効果を生じ、肥満の予防、抑制、改善および治療に有効であり得る。
【００５１】
本発明の組成物を飲食品として提供する場合には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、疾病リスク低減表示を付した食品とすることができる。疾病リスク低減表示としては、例えば肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示が挙げられる。従って、本発明の組成物は、例えば植物の抽出物を含有する肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示を付した飲食品である。
【００５２】
本発明の飲食品の形態は、特に制限されず、各種飲料、食品に加工することができる。かかる飲料、食品の例として、これに限定されるものではないが、パン、ケーキ、クレープ、ビスケットなどの菓子類のほか、スープやソース、ジャムやペースト、濃縮果汁、パウダー、ワインや酢にも使うことができる。また、ガラムマサラ、チャツネ、カレー、スープ、ピクルス、ソーセージなどにも用いることができる。味噌汁などの汁物、酢の物、炒め物、サラダ、おひたしや汁物の具、草餅などにも用いることができる。さらに、茶や酒類として飲用したり、ゼリーやガムなどの菓子類に添加・配合したりすることもできる。ドライフルーツなどの形でそのまま食したり、ヨーグルトなどの乳製品、クッキーなどの焼き菓子類、ジャムなどの加工食品に添加・配合したりすることもできる。
【００５３】
また、本発明の飲食品は、ＣＢ１受容体阻害効果を抑制しない限りにおいて、本発明のＣＢ１受容体阻害物質の他、栄養補助成分などの他の成分を含むことができる。かかる成分には、ビタミン類（例えばビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＫ、ナイアシン、パントテン酸、葉酸等）、カロチノイド（例えばβカロチン、リコピン、フコキサンチン等）、ミネラル類（例えば海藻成分、ＣＣＭ、ヘム鉄、鉄塩系、乳清カルシウム、発酵乳酸カルシウム、牛骨カルシウム、珊瑚カルシウム、卵殻カルシウム等）、各種植物体並びにその抽出物、精製物及び分画物（例えばオオバコ、クロレラ、スピルリナ、にんにく、いちょう葉、ギムネマ、杜仲の葉、しその葉、ハトムギ、大豆グロブリン、ルチン、緑茶抽出物、テアニン、ポリフェノール類、甘草、ユッカ、大豆サポニン、カフェイン、ホワトルベリーエキス、シャンピニオンエキス、ガルシニア・カンボジアエキス等）、微生物並びにその増殖因子及び微生物生産物（例えば乳酸菌、酵母、乳酸菌増殖因子等）、食物繊維及びその酵素分解物（例えばアップルファイバー、コーンファイバー、澱粉由来の食物繊維、難消化性デキストリン、グアガム酵素分解物、サツマイモ繊維、大豆繊維、海藻繊維、きのこ繊維、茶繊維、酸性多糖類、植物粘質物、小麦フスマ等）、動物体並びにその抽出物、精製物、分解物及び生産物（例えばローヤルゼリー、プロポリス、牡蠣エキス、キチン、キトサン、タウリン、コラーゲン、ゼラチン等）、各種オリゴ糖（例えばガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖、フラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、乳果オリゴ糖等）、脂質（例えば不飽和脂肪酸（ＤＨＡ、ＥＰＡ等）、リン脂質、サラトリム等）、各種蛋白質及び蛋白分解物（例えばとうもろこし蛋白、大豆蛋白、ＴＭＰ（トータルミルクプロテイン）、ラクトアルブミン、カゼイン、ホエー、グルタチオン、大豆ペプチド、卵白ペプチド、グルタミンペプチド等）、脱脂胚芽等の小麦胚芽などが挙げられる。
【００５４】
本発明の組成物を飲食品として摂取する場合には、飲食品中の有効成分としての本発明のＣＢ１受容体阻害物質の含有量は、通常、０．０１〜５０重量％、好ましくは１〜３０重量％程度であり、成人1人につき、1日当たり１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜２００ｍｇの摂取量となるように摂取すればよい。
【００５５】
本発明の組成物は、医薬組成物として提供することが可能である。本発明の医薬組成物はＣＢ１受容体阻害活性を有する。また、本発明の医薬組成物の摂取により、抗肥満効果を生じ、肥満の予防、抑制、改善および治療に有効であり得る。
【００５６】
本発明の組成物を医薬組成物として提供する場合には、本発明のＣＢ１受容体阻害物質は、経口又は非経口（例えば静注、筋注、皮下投与、腹腔内投与、直腸投与、経皮投与など）のいずれかの投与経路用に製剤化することができる。また、投与経路に応じて適当な剤形とすることができる。具体的には静注、筋注などの注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠などの経口剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水性坐剤などの各種製剤形態に調製することができる。本発明の医薬組成物は、経口剤として提供することが特に好ましい。
【００５７】
これらの各種製剤は、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、浸潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、着色剤、香味剤、及び安定化剤などを用いて、当業者に知られる公知の方法により製造することができる。
【００５８】
賦形剤としては、例えば、乳糖、果糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ソルビット及び結晶セルロースなどが、崩壊剤としては、例えば澱粉、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、炭酸マグネシウム及び合成ケイ酸マグネシウムなどが、結合剤としては、例えばメチルセルロース又はその塩、エチルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース及びポリビニルピロリドンなどが、滑沢剤としては、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール及び硬化植物油などが、その他の添加剤としては、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硝酸ソーダ及びリン酸ナトリウムなどがそれぞれ挙げられる。
【００５９】
本発明の医薬組成物における有効成分としての本発明の組成物の投与量又は摂取量は、所与の症状や用法について治療効果を与え得る量であり、その量は、動物を用いた試験、臨床試験の実施により当業者によって適宜決定されるが、投与対象の年齢、性別、体重、適用疾患及びその症状、剤形、投与方法などが考慮されるべきである。本発明の医薬組成物が経口剤である場合には、上記投与量又は摂取量は、０．０１〜２０ｍｇ／Ｋｇ／日、好ましくは０．０１〜８ｍｇ／Ｋｇ／日とすることができる。
【００６０】
上記本発明の飲食品及び医薬組成物は、上記の通り、長い間の食経験に基づいた天然物由来の成分を有効成分として含むため、副作用等の心配が少なく、安価にかつ長期間にわたって継続的に摂取することができる。
【００６１】
以下、本発明を以下の実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。
【実施例】
【００６２】
（実施例１）イチジク低極性抽出物の調製
イチジク乾燥粉末３００ｍｇに５０倍量の８０％アセトン含有水溶液を加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、減圧下乾固させて１９９．９ｍｇを得た。これを１００倍量の８０％メタノール含有水溶液に溶解し、等量のヘキサンで３度分配した。得られた８０％メタノール含有水溶液層を減圧下乾固させ、２００倍量の水に溶解後、酢酸エチルで３度分配した。酢酸エチル層を減圧下乾固させて２．８ｍｇの抽出物を得た。
【００６３】
（実施例２）ワカメ低極性抽出物の調製
ワカメ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１２．８ｍｇの抽出物を得た。
【００６４】
（実施例３）クマザサ低極性抽出物の調製
クマザサ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、５．８ｍｇの抽出物を得た。
【００６５】
（実施例４）ヨモギ低極性抽出物の調製
ヨモギ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３．３ｍｇの抽出物を得た。
【００６６】
（実施例５）クミン低極性抽出物の調製
クミン乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７．３ｍｇの抽出物を得た。
【００６７】
（実施例６）レッドクローバー低極性抽出物の調製
レッドクローバー乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、９ｍｇの抽出物を得た。
【００６８】
（実施例７）アシタバ低極性抽出物の調製
アシタバ乾燥粉末５００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１４．７ｍｇの抽出物を得た。
【００６９】
（実施例８）マジョラム低極性抽出物の調製
マジョラム乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１４．５ｍｇの抽出物を得た。
【００７０】
（実施例９）ベニナツメ低極性抽出物の調製
ベニナツメ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１．０ｍｇの抽出物を得た。
【００７１】
（実施例１０）キク低極性抽出物の調製
キク乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１５．８ｍｇの抽出物を得た。
【００７２】
（実施例１１）クワ低極性抽出物の調製
クワ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、５．１ｍｇの抽出物を得た。
【００７３】
（実施例１２）ペパーミント低極性抽出物の調製
ペパーミント乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３．１ｍｇの抽出物を得た。
【００７４】
（実施例１３）マイタケ低極性抽出物の調製
マイタケ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７．７ｍｇの抽出物を得た。
【００７５】
（実施例１４）マツバエタノール抽出物の調製
マツバ乾燥粉末１０．３ｇに２０倍量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、残渣に同量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、先ほどの上清と合わせ、減圧下乾固させて８５４．５ｍｇの抽出物を得た。
【００７６】
（実施例１５）ガジュツエタノール抽出物の調製
ガジュツ乾燥粉末１０．１ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、３８０ｍｇの抽出物を得た。
【００７７】
（実施例１６）シジウムエタノール抽出物の調製
シジウム乾燥粉末１０．５ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、６１３．２ｍｇの抽出物を得た。
【００７８】
（実施例１７）ＣＢ１安定発現細胞の樹立
ヒトＣＢ１受容体ｃＤＮＡを含んだｐｃＤＮＡ３．２プラスミドを、ＦｕＧＥＮＥ ６（Ｒｏｃｈｅ）を用いてチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）に遺伝子導入した。遺伝子導入後、この細胞を１．５ｍｇ／ｍｌ GENETICIN（ＧＩＢＣＯ）で選択し、ＧＥＮＥＴＩＣＩＮ耐性クローンを増殖させて細胞系を樹立した。同様にして、ヒトＣＢ２受容体安定発現細胞も樹立した。
【００７９】
（実施例１８）抽出物のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性及び濃度依存性の検討
実施例１〜１６で調製した各抽出物は、１００ｍｇ／ｍｌになるようにエタノールに溶解し、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を評価した。
【００８０】
実施例１７で作製したヒトＣＢ１受容体を安定発現させたCHO細胞を９６穴培養プレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％CO２条件下で１８時間程度培養した。培地には、１０％ＦＢＳ、５００U/ｍｌペニシリン・ストレプトマイシン溶液、１．５ｍｇ/ｍｌ ＧＥＮＥＴＩＣＩＮを含むα-MEM，１００mｌ／ｗｅｌｌを用いた。播種１８時間後に、実施例１〜１６で示した抽出物、ホルスコリン、ＣＢ１受容体アゴニスト（ＨＵ２１０）を以下の表１のように含有した培地と交換し、３０分培養した。
【００８１】
【表１】
【００８２】
その後、市販の測定キット（ｃＡＭＰ−ＳｃｒｅｅｎＴＭ Ｓｙｓｔｅｍ， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、細胞溶解液の回収および細胞内cAMP量の定量を行った。ＨＵ２１０添加時のホルスコリン依存性ｃＡＭＰ蓄積の抑制程度（ｃＡＭＰ量（（２）−（３））、表１参照）を１００％とし、それに対する抽出物およびHU２１０添加時のホルスコリン依存性cAMP蓄積の抑制程度（ｃＡＭＰ量（（４）−（３））、表１参照）をＣＢ１受容体アンタゴニスト活性（％）として相対的に表した。実施例１〜１６で示した抽出物の添加濃度を数段階設定し測定した結果、添加濃度依存的なＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の上昇が認められた（表２を参照）。
【００８３】
【表２】
【００８４】
（実施例１９）ＣＢ１受容体特異性の評価
実施例１８と同様に各抽出物のＣＢ２受容体アンタゴニスト活性について評価し、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性と比較することで、ＣＢ１受容体特異性を評価した。ＨＵ２１０のＫｉ値はＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体に対して、それぞれ０．０６１ｎＭ, ０．５２ｎＭである。そこでＨＵ２１０の濃度を、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性測定時は、１ｎＭ、ＣＢ２受容体アンタゴニスト活性測定時は、１０ｎMとした。実施例１〜１６で示した抽出物（最終濃度０．２ｍｇ/ｍｌで添加）のＣＢ１受容体及びＣＢ２受容体アンタゴニスト活性を測定した結果、各抽出物のＣＢ２受容体アンタゴニスト活性はＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の５０％以下であり、これら抽出物のＣＢ１受容体特異性が認められた（表３を参照）
【００８５】
【表３】
【００８６】
（実施例２０）イチジクエタノール抽出物の調製
イチジク乾燥粉末１０．３４ｇに２０倍量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、残渣に同量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、先ほどの上清と合わせ、減圧下乾固させて１．１ｇの抽出物を得た。これを１００ｍｇ／ｍｌになるようにエタノールに溶解し、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を評価した。
【００８７】
（実施例２１）ワカメエタノール抽出物の調製
ワカメ乾燥粉末５．０５ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３９．２ｍｇの抽出物を得た。
【００８８】
（実施例２２）クマザサエタノール抽出物の調製
クマザサ乾燥粉末６．１１ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１０６．３ｍｇの抽出物を得た。
【００８９】
（実施例２３）ヨモギエタノール抽出物の調製
ヨモギ乾燥粉末５．２８ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、９７．２ｍｇの抽出物を得た。
【００９０】
（実施例２４）クミンエタノール抽出物の調製
クミン乾燥粉末５．１４ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１５５７ｍｇの抽出物を得た。
【００９１】
（実施例２５）レッドクローバーエタノール抽出物の調製
レッドクローバー乾燥粉末２．０４ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７９．７ｍｇの抽出物を得た。
【００９２】
（実施例２６）アシタバエタノール抽出物の調製
アシタバ乾燥粉末５．０５ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、５７２．６ｍｇの抽出物を得た。
【００９３】
（実施例２７）マジョラムエタノール抽出物の調製
マジョラム乾燥粉末５．００ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１５６．１ｍｇの抽出物を得た。
【００９４】
（実施例２８）ベニナツメエタノール抽出物の調製
ベニナツメ乾燥粉末５．２３ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７９８．８ｍｇの抽出物を得た。
【００９５】
（実施例２９）キクエタノール抽出物の調製
キク乾燥粉末５．０３ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、４７６．６ｍｇの抽出物を得た。
【００９６】
（実施例３０）クワエタノール抽出物の調製
クワ乾燥粉末５．１６ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１４３．２ｍｇの抽出物を得た。
【００９７】
（実施例３１）ペパーミントエタノール抽出物の調製
ペパーミント乾燥粉末２．０２ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７１．３ｍｇの抽出物を得た。
【００９８】
（実施例３２）マイタケエタノール抽出物の調製
マイタケ乾燥粉末２．３８ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３６．１ｍｇの抽出物を得た。
【００９９】
（実施例３３）エタノール抽出物のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の測定
実施例１８と同様に（ＨＵ２１０の濃度（１０ｎＭ）のみ異なる）、実施例２０〜３３で示したエタノール抽出物（最終濃度は、イチジクは０．５ｍｇ/ｍｌ、ベニナツメは０．４８ｍｇ/ｍｌ、それ以外は１．０ｍｇ/ｍｌ）のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を評価した結果、イチジク、ベニナツメ、クワ、マイタケ以外のエタノール抽出物には、４０％以上のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性が認められた（表４を参照）。
【０１００】
【表４】
【０１０１】
（実施例３４）抽出物のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性のＩｎ ｖｉｖｏ評価
抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性は、マウスに抽出物を前投与した後、ＣＢ１受容体アゴニスト（ＨＵ２１０）を投与し、その後のＨＵ２１０による体温低下を抽出物が阻害するかにより評価した。実験にはＪｃＩ：ＩＣＲ系雄性マウス（５週齢）を用いた。実施例１−３，１５および２４で示した抽出物を１５％の濃度で生理食塩水もしくは水溶性ポリマー（ＰＵＲＥＢＲＩＧＨＴ）に懸濁し、１０ｍｌ／ｋｇで腹腔内に投与した（最終濃度；１５０ｍｇ／ｋｇ）。ｃｏｎｔｒｏｌ群およびｖｅｈｉｃｌｅ群には溶媒のみ投与した。３０分後に、体温測定用プローブを接続した温度計（Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ ＢＡＴ−１２）にて直腸温を測定した（この値を基準値とした。）。さらに１５分後に０．１５％ ＤＭＳＯに溶解したＨＵ２１０（１０μｇ／ｍｌ）、１％ Ｔｗｅｅｎ８０を含む生理食塩水を１０ｍｌ／ｋｇで腹腔内に投与した（最終濃度；１００μｇ／ｋｇ）。ｃｏｎｔｒｏｌ群には溶媒のみ投与した。その後３０分ごとに９０分まで、９０分後からは９０分ごとに２７０分まで直腸温を測定した。一群につき３〜５例で実験を行った。結果を図１−５に示す。
【産業上の利用可能性】
【０１０２】
本発明の組成物は、ＣＢ１受容体阻害活性および抗肥満効果を有し、インスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病及び肥満などの生活習慣病をはじめとするＣＢ１受容体が関与する疾患の治療および予防に利用し得る。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】図１は、イチジク低極性抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図２】図２は、ワカメ低極性抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図３】図３は、クマザサ低極性抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図４】図４は、ヨモギエタノール抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図５】図５は、ガジュツエタノール抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カンナビノイド（ＣＢ）受容体は、７回膜貫通型ドメインを持つＧたんぱく質共役型の受容体に属する。このうち、ＣＢ１受容体は、主に中枢神経系に分布するが、胃、脂肪組織、肝臓、骨格筋、膵臓などの末梢組織中にも発現していることが報告されている（非特許文献１参照）。ＣＢ２受容体は、主に免疫系の細胞に分布することが分かっている（非特許文献１参照）。ＣＢ１受容体とＣＢ２受容体は４８％の相同性を示し、ＣＢ１受容体は、ラット、マウス、ヒト間において９７〜９９％のアミノ酸配列相同性を保持している。
【０００３】
今日、肥満症は、羅患率およびそれに伴う健康リスクの増大のため、主要な公衆衛生上の問題の１つであることが認識されている。これは肥満症の増加が、冠動脈性心疾患、卒中、高血圧、２型糖尿病、脂質異常症、骨関節炎、非アルコール性脂肪肝炎、癌および呼吸器障害と相関し、死亡率の増加に関連するからである。
【０００４】
肥満症管理のための現在利用できる処方薬は、一般に満腹感を誘発する、または、食事脂肪の吸収を減少させることにより、体重を減少させる。一方、アンフェタミン、メタンフェタミンおよびフェンメトラジンなどのアドレナリン作動性減量薬は、それらの乱用のリスクのため、もはや推奨されない。さらに、フェンフルラミンおよびデクスフェンフルラミンなどのセロトニン作動性減量薬は、肺や心臓に重篤な副作用があるため、もはや使用できない。
【０００５】
ＣＢ１受容体及びそのリガンドである内在性カンナビノイドはエネルギーバランスの制御に関与している。肥満時には、ＣＢ１受容体遺伝子発現や内在性カンナビノイド量が亢進しており、ＣＢ１受容体アンタゴニスト/逆アゴニストが肥満抑制薬として機能することが示唆されている（非特許文献２、３参照）。ＣＢ１受容体アンタゴニストは、視床下部に作用して一過性に摂食量を減少させる。しかし、摂食行動への効果に比べて、体重抑制効果は持続的であることから、末梢組織への作用も示唆されている。ＣＢ１受容体アンタゴニストによる末梢組織への作用のメカニズムとしては、例えば以下のものが挙げられる。酸素消費量を増加し、骨格筋における糖取り込みを増加させる。白色脂肪組織において、脂質合成に関与する酵素遺伝子の発現を抑制するなどの働きを持つアディポカインであるアディポネクチンの遺伝子発現量を促進する。肝臓において、脂肪合成系の転写因子の発現を抑制する。これら末梢組織への作用を介して、エネルギー消費を亢進させ、インスリン感受性を維持することが示唆されているが、ＣＢ１受容体アンタゴニストの抗肥満効果における主要なメカニズムはまだ議論となっている（非特許文献１参照）。
【０００６】
また、ＣＢ２受容体は免疫系への関与が示唆されていることから、ＣＢ１受容体特異的なアンタゴニストが望ましい。
【０００７】
ＣＢ１受容体アンタゴニストは、臨床試験からヒトにおける有効性も実証されている。
【０００８】
このようにＣＢ１受容体アンタゴニストは肥満を改善し、高脂血症や糖尿病などに関わるメタボリックシンドロームの予防及び/又は改善作用が期待される。
【０００９】
ＣＢ１受容体アンタゴニストとしては、リモナバン、２環式ピラゾイルおよびイミダゾリル化合物などが知られている（特許文献１、特許文献２参照）。
【００１０】
【特許文献１】特表２００７−５０９１１３号公報
【特許文献２】特表２００６−５２４２２８号公報
【非特許文献１】Diabetes Metab Res Rev 2007;23:507-517．
【非特許文献２】FASEB Ｊ. 2005 Sep;19(11):1567-9
【非特許文献３】Cell Metab. 2008 Jan;7(1):68-78
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従来的に公知である、上記したようなＣＢ１受容体アンタゴニストは高価であり、副作用などの不都合があった。よって、安全性が高く、効果の高い、容易に入手可能なＣＢ１受容体アンタゴニスト剤が望まれている。
【００１２】
本発明は、天然物由来の素材から得られ、安全性が高いＣＢ１受容体アンタゴニスト物質を含む組成物及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、日常容易に入手又は食用とし得る天然物由来の素材である特定の植物がＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含有していることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は以下［１］〜［１１］の特徴を包含する。
［１］ クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物。
［２］ 前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、［１］の組成物。
［３］ 前記ＣＢ１受容体阻害活性を有する物質は、前記植物又はその一部からの抽出物である［１］又は［２］の組成物。
［４］ クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物又はその一部を溶媒抽出に供し、抽出画分からＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を回収することを含む、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物の製造方法。
［５］ 前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、［４］の方法。
［６］ 溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル及びアセトンからなる群より選択される1種以上である、［４］又は［５］の方法。
［７］ ［４］〜［６］のいずれかの方法によって製造される、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物。
［８］ 抗肥満効果を有する、［１］〜［３］又は［７］のいずれかの組成物。
［９］ ［１］〜［３］、［７］又は［８］のいずれかの組成物を含む、飲食品。
［10］ 肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示を付した、［９］の飲食品。
［11］ ［１］〜［３］、［７］又は［８］のいずれかの組成物を含む、医薬組成物。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の組成物は、ＣＢ１受容体の活性を有意に阻害することができる。
【００１６】
また本発明の組成物は、長い間の食経験に基づいた天然物由来の組成物であるため、副作用等の心配が少なく、安価に、長期間にわたって継続的に摂取することができる。
【００１７】
さらに、本発明の組成物は、ＣＢ１受容体の活性を阻害することによる抗肥満効果を有し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明に係るＣＢ１受容体阻害物質含有組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）及びその製造方法について説明する。
【００１９】
本発明の組成物は、クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種又は複数種由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含むことを特徴とする。
【００２０】
本発明に使用することができるクワ科イチジク属の植物としては、これに限定されるものではないが、イチジク(Ｆｉｃｕｓ ｃａｒｉｃａ)、イヌビワ（Ｆｉｃｕｓ ｅｒｅｃｔａ）、ヒメイタビ（Ｆｉｃｕｓ ｓｔｉｐｕｌａｔａ）などを挙げることができる。特に、イチジクを使用することが好ましい。
【００２１】
本発明に使用することができるチガイソ科ワカメ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）、アオワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｅｔｅｒｓｅｎｉａｎａ）、ヒロメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｕｎｄａｒｉｏｉｄｅｓ）などを挙げることができる。特にワカメを使用することが好ましい。
【００２２】
本発明に使用することができるイネ科ササ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、クマザサ（Ｓａｓａ ｖｅｉｔｃｈｉｉ）、チシマザサ（Ｓａｓａ ｋｕｒｉｌｅｎｓｉｓ）、ミヤコザサ（Ｓａｓａ ｎｉｐｐｏｎｉｃａ）などを挙げることができる。特にクマザサを使用することが好ましい。
【００２３】
本発明に使用することができるキク科ヨモギ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ Ｐｒｉｎｃｅｐｓ）、ニガヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｂｓｉｎｔｈｉｕｍ）、シロヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ｓｔｅｌｌｅｒｉａｎａ）などを挙げることができる。特にヨモギを使用することが好ましい。
【００２４】
本発明に使用することができるセリ科クミナム属に属する植物としては、クミン（Ｃｕｍｉｎｕｍ Ｃｙｍｉｎｕ）などを挙げることができる。特にクミンを使用することが好ましい。
【００２５】
本発明に使用することができるマメ科シャクジソウ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、レッドクローバー（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ）、シロツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｒｅｐｅｎｓ）、コメツブツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｄｕｂｉｕｍ）などを挙げることができる。特にレッドクローバーを使用することが好ましい。
【００２６】
本発明に使用することができるセリ科シシウド属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｋｅｉｓｋｅｉ）、イヌトウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｈｉｋｏｋｉａｎａ）、トウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ）などを挙げることができる。特にアシタバを使用することが好ましい。
【００２７】
本発明に使用することができるシソ科ハナハッカ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、マジョラム（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ）、オレガノ （Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）などを挙げることができる。特にマジョラムを使用することが好ましい。
【００２８】
本発明に使用することができるクロウメモドキ科ナツメ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ナツメ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ）、イヌナツメ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎａ）、サネブトナツメ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ ｖａｒ．ｓｐｉｎｏｓａ）などを挙げることができる。特にベニナツメを使用することが好ましい。ベニナツメは上記のナツメなどを乾燥させたもの全般を指す一般名称である。
【００２９】
本発明に使用することができる、キク科キク属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、キク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）、イワギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｓａｗａｄｓｋｉｉ）、シュンギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｃｏｒｏｎａｒｉｕｍ）などを挙げることができる。特にコウザンコウギクを使用することが好ましい。
【００３０】
本発明に使用することができるクワ科クワ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、マグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ）、ヤマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ）、ケグワ（Ｍｏｒｕｓ ｃａｔｈａｙａｎａ）などを挙げることができる。
【００３１】
本発明に使用することができるシソ科ハッカ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ペパーミント（ｍｅｎｔｈａ ａｒｖｅｎｓｉｓ ｖａｒ． ｐｉｐｅｒａｓｃｅｎｓ）、アップルミント（Ｍｅｎｔｈａ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）、ウォーターミント（Ｍｅｎｔｈａ ａｑｕａｔｉｃａ）などを挙げることができる。特にペパーミントを使用することが好ましい。
【００３２】
本発明に使用することができるサルノコシカケ科マイタケ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、マイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）、チョレイマイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｕｍｂｅｌｌａｔａ）、シロマイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ａｌｂｉｃａｎｓ Ｉｍａｚ．）などを挙げることができる。特にマイタケを使用することが好ましい。
【００３３】
本発明に使用することができるマツ科マツ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、アカマツ（Ｐｉｎｕｓ ｋｅｓｉｙａ）、クロマツ（Ｐｉｎｕｓ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、シロマツ（Ｐｉｎｕｓ ｂｕｎｇｅａｎａ）などを挙げることができる。
【００３４】
本発明に使用することができるショウガ科ウコン属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、ガジュツ（Ｃｕｒｃｕｍａ ｚｅｄｏａｒｉａ）、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ）、マンゴージンジャー（Ｃｕｒｃｕｍａ ａｍａｄａ）などを挙げることができる。特にガジュツを使用することが好ましい。
【００３５】
本発明に使用することができるフトモモ科バンジロウ属に属する植物としては、これに限定されるものではないが、シジウム（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ）、テリハバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）、ストロベリーグァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｍ）などを挙げることができる。特にシジウムを使用することが好ましい。
【００３６】
本発明の組成物の素材となる上記植物は、その植物体全体を使用してもよいし、植物体の一部を使用してもよい。植物体の一部として、これに限定されるものではないが、つぼみ、葉、根、茎、花、果実、種子などを挙げることができ、本発明においてその１種以上を混合して使用することもできる。
【００３７】
本発明において、上記植物は、品種及び産地は特に制限されず、野生種であってもよいし、交配により得られる栽培品種、園芸品種などであってもよい。
【００３８】
上記「ＣＢ１受容体阻害活性を有する物質」（以下、「ＣＢ１受容体阻害物質」ともいう）とは、上記植物の植物体又はその一部に由来するＣＢ１受容体阻害活性を有する任意の物質を指す。ＣＢ１受容体阻害物質は、精製品又は粗精製品のいずれであってもよい。粗精製品には、これに限定されるものではないが、例えば、植物自体若しくはその乾燥物又はこれらの破砕物、該破砕物の懸濁液若しくは懸濁物、或いは植物体若しくはその一部又はそれらの乾燥物若しくは乾燥破砕物からの抽出物などを挙げることができる。
【００３９】
本発明において、ＣＢ１受容体阻害物質は、好ましくは上記植物又はその一部由来の抽出物である。このような抽出物は、当業者に公知の抽出方法によって得ることができ、例えば抽出方法として、有機溶媒抽出、超臨界流体抽出法、加温加圧抽出法などを挙げることができる。上記抽出方法は、それぞれを単独で用いてもよいし、複数の抽出方法を組合せて用いてもよい。
【００４０】
本発明において、特に好ましい抽出方法は溶媒抽出である。溶媒抽出は当業者に知られる一般的な手法を用いて行うことができる。具体的には、まず、各植物素材の粉砕物又は乾燥破砕物に水と有機溶媒とを添加して、室温又は加温にて抽出する。有機溶媒として、これに限定されるものではないが、例えばエタノール、メタノール、酢酸エチル、アセトンなどを使用することができる。これらの有機溶媒は２種類以上を混合して用いてもよい。添加する溶媒の量は、植物素材の重量の１〜１００倍、好ましくは５〜５０倍、例えば１０倍であり、抽出時間は、５分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間、例えば約１時間である。その後、ろ過や遠心分離などにより素材残渣を含む不溶性画分を取り除き、例えば減圧蒸発により有機溶媒画分（すなわち、抽出画分）を濃縮し、流体又は乾燥形態でＣＢ１受容体阻害物質含有抽出物を得ることができる。場合により、有機溶媒抽出後の不溶性画分について有機溶媒による抽出を繰り返すことにより、有機溶媒抽出後の沈殿から本発明のＣＢ１受容体阻害物質をさらに取得することもできる。有機溶媒画分に存在する本発明のＣＢ１受容体阻害物質をさらに精製してもよく、この場合、公知の分離、精製法を適当に組み合わせて行うことができる。例えば、液−液分配、有機溶媒沈澱、各種カラムクロマトグラフィー（例えばHPLC、シリカゲルクロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーなど）、結晶化などを使用することができる。
【００４１】
本発明のＣＢ１受容体阻害物質は、上記のようにして各植物素材から取得することができるが、本発明の組成物は、既に製品化されている各植物素材のエキス製剤などをＣＢ１受容体阻害物質として含むものであってもよい。そのようなエキス製剤としては、イチジクエキス、ワカメエキス、クマザサエキス、ヨモギエキス、クミンオイル、レッドクローバーエキス、アシタバエキス、マジョラムオイル、クワエキス、ペパーミントエキス、マイタケエキス、マツバエキス、ガジュツエキスなどを挙げることができる。
【００４２】
本発明の組成物は、上記植物由来のCB1受容体阻害活性を有する物質を含む組成物であり、また本発明の組成物は、上記植物の抽出物を含有する、CB1受容体阻害活性を有する組成物である。
【００４３】
本発明の組成物は、上記のようにして得られた本発明のＣＢ１受容体阻害物質を常法により顆粒化、カプセル化、錠剤化若しくはペースト化したものであってもよい。
【００４４】
本発明の組成物は、ＣＢ１受容体阻害活性を有する。当該活性は、公知の方法によって評価することが可能であるが、In vitroではＣＢ１受容体安定発現細胞を用いた細胞内cAMP蓄積アッセイにより評価することが可能である。当該アッセイはＣＢ１受容体阻害活性を直接測定する実験系である。さらに、ＣＢ１受容体にアゴニスト活性を有する化合物はインビボで体温低下の作用を示すことが知られている（J. Pharmacol. Exp. Ther., 1994, 270, 219-227；The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Vol. 284, No. 3, 1209-1217, 1998）。
【００４５】
よって、ＣＢ１受容体阻害活性は、本発明の組成物を前投与した後、ＣＢ１受容体アゴニスト、例えば、ＨＵ２１０を投与し、その後の体温低下を本発明の組成物が阻害するか否かを判定することにより評価することができる。
【００４６】
また、本発明の組成物は抗肥満効果を有し得る。「抗肥満効果」とは、食欲抑制作用、体重増加抑制作用、体重減少作用、体脂肪蓄積抑制作用、体脂肪減少作用などの作用を指し、肥満の予防、抑制、改善および治療に有効である効果を意味する。特に本発明の組成物は、ＣＢ１受容体阻害による抗肥満効果を有し得る。
【００４７】
すでに生体内において抗肥満効果が示されているリモナバンは、In vitroにおけるヒトＣＢ１受容体安定発現CHO細胞を用いた細胞内cAMP蓄積アッセイ（The Journal of Neuroscience,July 15,1997,17(14):5327-53333）の結果よりＣＢ１受容体阻害活性を有することが明らかとなっている。また、リモナバンは、In vivoにおける経口投与により体重増加抑制効果を有することが明らかとなっている（Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 284:R345-R353,2003）。
【００４８】
これらの結果より、In vitroにおけるＣＢ１受容体阻害活性とIn vivoにおける体重増加抑制効果とが相関関係を有することは明らかである。
【００４９】
本発明の組成物、特に好ましくはイチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツバ、ガジュツ、シジウムの低極性抽出物は、ＣＢ１受容体阻害活性を有し、当該阻害活性による体重増加抑制効果を有し得る。このような抗肥満効果を有する本発明の組成物は、インスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病及び肥満などの生活習慣病をはじめとするＣＢ１受容体が関与する疾患の治療および予防に利用し得る。
【００５０】
本発明の組成物は飲食品として提供することが可能である。本発明の飲食品はＣＢ１受容体阻害活性を有する。また、本発明の飲食品の摂取により、抗肥満効果を生じ、肥満の予防、抑制、改善および治療に有効であり得る。
【００５１】
本発明の組成物を飲食品として提供する場合には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、疾病リスク低減表示を付した食品とすることができる。疾病リスク低減表示としては、例えば肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示が挙げられる。従って、本発明の組成物は、例えば植物の抽出物を含有する肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示を付した飲食品である。
【００５２】
本発明の飲食品の形態は、特に制限されず、各種飲料、食品に加工することができる。かかる飲料、食品の例として、これに限定されるものではないが、パン、ケーキ、クレープ、ビスケットなどの菓子類のほか、スープやソース、ジャムやペースト、濃縮果汁、パウダー、ワインや酢にも使うことができる。また、ガラムマサラ、チャツネ、カレー、スープ、ピクルス、ソーセージなどにも用いることができる。味噌汁などの汁物、酢の物、炒め物、サラダ、おひたしや汁物の具、草餅などにも用いることができる。さらに、茶や酒類として飲用したり、ゼリーやガムなどの菓子類に添加・配合したりすることもできる。ドライフルーツなどの形でそのまま食したり、ヨーグルトなどの乳製品、クッキーなどの焼き菓子類、ジャムなどの加工食品に添加・配合したりすることもできる。
【００５３】
また、本発明の飲食品は、ＣＢ１受容体阻害効果を抑制しない限りにおいて、本発明のＣＢ１受容体阻害物質の他、栄養補助成分などの他の成分を含むことができる。かかる成分には、ビタミン類（例えばビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＫ、ナイアシン、パントテン酸、葉酸等）、カロチノイド（例えばβカロチン、リコピン、フコキサンチン等）、ミネラル類（例えば海藻成分、ＣＣＭ、ヘム鉄、鉄塩系、乳清カルシウム、発酵乳酸カルシウム、牛骨カルシウム、珊瑚カルシウム、卵殻カルシウム等）、各種植物体並びにその抽出物、精製物及び分画物（例えばオオバコ、クロレラ、スピルリナ、にんにく、いちょう葉、ギムネマ、杜仲の葉、しその葉、ハトムギ、大豆グロブリン、ルチン、緑茶抽出物、テアニン、ポリフェノール類、甘草、ユッカ、大豆サポニン、カフェイン、ホワトルベリーエキス、シャンピニオンエキス、ガルシニア・カンボジアエキス等）、微生物並びにその増殖因子及び微生物生産物（例えば乳酸菌、酵母、乳酸菌増殖因子等）、食物繊維及びその酵素分解物（例えばアップルファイバー、コーンファイバー、澱粉由来の食物繊維、難消化性デキストリン、グアガム酵素分解物、サツマイモ繊維、大豆繊維、海藻繊維、きのこ繊維、茶繊維、酸性多糖類、植物粘質物、小麦フスマ等）、動物体並びにその抽出物、精製物、分解物及び生産物（例えばローヤルゼリー、プロポリス、牡蠣エキス、キチン、キトサン、タウリン、コラーゲン、ゼラチン等）、各種オリゴ糖（例えばガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖、フラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、乳果オリゴ糖等）、脂質（例えば不飽和脂肪酸（ＤＨＡ、ＥＰＡ等）、リン脂質、サラトリム等）、各種蛋白質及び蛋白分解物（例えばとうもろこし蛋白、大豆蛋白、ＴＭＰ（トータルミルクプロテイン）、ラクトアルブミン、カゼイン、ホエー、グルタチオン、大豆ペプチド、卵白ペプチド、グルタミンペプチド等）、脱脂胚芽等の小麦胚芽などが挙げられる。
【００５４】
本発明の組成物を飲食品として摂取する場合には、飲食品中の有効成分としての本発明のＣＢ１受容体阻害物質の含有量は、通常、０．０１〜５０重量％、好ましくは１〜３０重量％程度であり、成人1人につき、1日当たり１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜２００ｍｇの摂取量となるように摂取すればよい。
【００５５】
本発明の組成物は、医薬組成物として提供することが可能である。本発明の医薬組成物はＣＢ１受容体阻害活性を有する。また、本発明の医薬組成物の摂取により、抗肥満効果を生じ、肥満の予防、抑制、改善および治療に有効であり得る。
【００５６】
本発明の組成物を医薬組成物として提供する場合には、本発明のＣＢ１受容体阻害物質は、経口又は非経口（例えば静注、筋注、皮下投与、腹腔内投与、直腸投与、経皮投与など）のいずれかの投与経路用に製剤化することができる。また、投与経路に応じて適当な剤形とすることができる。具体的には静注、筋注などの注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠などの経口剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水性坐剤などの各種製剤形態に調製することができる。本発明の医薬組成物は、経口剤として提供することが特に好ましい。
【００５７】
これらの各種製剤は、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、浸潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、着色剤、香味剤、及び安定化剤などを用いて、当業者に知られる公知の方法により製造することができる。
【００５８】
賦形剤としては、例えば、乳糖、果糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ソルビット及び結晶セルロースなどが、崩壊剤としては、例えば澱粉、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、炭酸マグネシウム及び合成ケイ酸マグネシウムなどが、結合剤としては、例えばメチルセルロース又はその塩、エチルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース及びポリビニルピロリドンなどが、滑沢剤としては、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール及び硬化植物油などが、その他の添加剤としては、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硝酸ソーダ及びリン酸ナトリウムなどがそれぞれ挙げられる。
【００５９】
本発明の医薬組成物における有効成分としての本発明の組成物の投与量又は摂取量は、所与の症状や用法について治療効果を与え得る量であり、その量は、動物を用いた試験、臨床試験の実施により当業者によって適宜決定されるが、投与対象の年齢、性別、体重、適用疾患及びその症状、剤形、投与方法などが考慮されるべきである。本発明の医薬組成物が経口剤である場合には、上記投与量又は摂取量は、０．０１〜２０ｍｇ／Ｋｇ／日、好ましくは０．０１〜８ｍｇ／Ｋｇ／日とすることができる。
【００６０】
上記本発明の飲食品及び医薬組成物は、上記の通り、長い間の食経験に基づいた天然物由来の成分を有効成分として含むため、副作用等の心配が少なく、安価にかつ長期間にわたって継続的に摂取することができる。
【００６１】
以下、本発明を以下の実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。
【実施例】
【００６２】
（実施例１）イチジク低極性抽出物の調製
イチジク乾燥粉末３００ｍｇに５０倍量の８０％アセトン含有水溶液を加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、減圧下乾固させて１９９．９ｍｇを得た。これを１００倍量の８０％メタノール含有水溶液に溶解し、等量のヘキサンで３度分配した。得られた８０％メタノール含有水溶液層を減圧下乾固させ、２００倍量の水に溶解後、酢酸エチルで３度分配した。酢酸エチル層を減圧下乾固させて２．８ｍｇの抽出物を得た。
【００６３】
（実施例２）ワカメ低極性抽出物の調製
ワカメ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１２．８ｍｇの抽出物を得た。
【００６４】
（実施例３）クマザサ低極性抽出物の調製
クマザサ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、５．８ｍｇの抽出物を得た。
【００６５】
（実施例４）ヨモギ低極性抽出物の調製
ヨモギ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３．３ｍｇの抽出物を得た。
【００６６】
（実施例５）クミン低極性抽出物の調製
クミン乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７．３ｍｇの抽出物を得た。
【００６７】
（実施例６）レッドクローバー低極性抽出物の調製
レッドクローバー乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、９ｍｇの抽出物を得た。
【００６８】
（実施例７）アシタバ低極性抽出物の調製
アシタバ乾燥粉末５００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１４．７ｍｇの抽出物を得た。
【００６９】
（実施例８）マジョラム低極性抽出物の調製
マジョラム乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１４．５ｍｇの抽出物を得た。
【００７０】
（実施例９）ベニナツメ低極性抽出物の調製
ベニナツメ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１．０ｍｇの抽出物を得た。
【００７１】
（実施例１０）キク低極性抽出物の調製
キク乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１５．８ｍｇの抽出物を得た。
【００７２】
（実施例１１）クワ低極性抽出物の調製
クワ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、５．１ｍｇの抽出物を得た。
【００７３】
（実施例１２）ペパーミント低極性抽出物の調製
ペパーミント乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３．１ｍｇの抽出物を得た。
【００７４】
（実施例１３）マイタケ低極性抽出物の調製
マイタケ乾燥粉末３００ｍｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７．７ｍｇの抽出物を得た。
【００７５】
（実施例１４）マツバエタノール抽出物の調製
マツバ乾燥粉末１０．３ｇに２０倍量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、残渣に同量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、先ほどの上清と合わせ、減圧下乾固させて８５４．５ｍｇの抽出物を得た。
【００７６】
（実施例１５）ガジュツエタノール抽出物の調製
ガジュツ乾燥粉末１０．１ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、３８０ｍｇの抽出物を得た。
【００７７】
（実施例１６）シジウムエタノール抽出物の調製
シジウム乾燥粉末１０．５ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、６１３．２ｍｇの抽出物を得た。
【００７８】
（実施例１７）ＣＢ１安定発現細胞の樹立
ヒトＣＢ１受容体ｃＤＮＡを含んだｐｃＤＮＡ３．２プラスミドを、ＦｕＧＥＮＥ ６（Ｒｏｃｈｅ）を用いてチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）に遺伝子導入した。遺伝子導入後、この細胞を１．５ｍｇ／ｍｌ GENETICIN（ＧＩＢＣＯ）で選択し、ＧＥＮＥＴＩＣＩＮ耐性クローンを増殖させて細胞系を樹立した。同様にして、ヒトＣＢ２受容体安定発現細胞も樹立した。
【００７９】
（実施例１８）抽出物のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性及び濃度依存性の検討
実施例１〜１６で調製した各抽出物は、１００ｍｇ／ｍｌになるようにエタノールに溶解し、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を評価した。
【００８０】
実施例１７で作製したヒトＣＢ１受容体を安定発現させたCHO細胞を９６穴培養プレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％CO２条件下で１８時間程度培養した。培地には、１０％ＦＢＳ、５００U/ｍｌペニシリン・ストレプトマイシン溶液、１．５ｍｇ/ｍｌ ＧＥＮＥＴＩＣＩＮを含むα-MEM，１００mｌ／ｗｅｌｌを用いた。播種１８時間後に、実施例１〜１６で示した抽出物、ホルスコリン、ＣＢ１受容体アゴニスト（ＨＵ２１０）を以下の表１のように含有した培地と交換し、３０分培養した。
【００８１】
【表１】
【００８２】
その後、市販の測定キット（ｃＡＭＰ−ＳｃｒｅｅｎＴＭ Ｓｙｓｔｅｍ， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、細胞溶解液の回収および細胞内cAMP量の定量を行った。ＨＵ２１０添加時のホルスコリン依存性ｃＡＭＰ蓄積の抑制程度（ｃＡＭＰ量（（２）−（３））、表１参照）を１００％とし、それに対する抽出物およびHU２１０添加時のホルスコリン依存性cAMP蓄積の抑制程度（ｃＡＭＰ量（（４）−（３））、表１参照）をＣＢ１受容体アンタゴニスト活性（％）として相対的に表した。実施例１〜１６で示した抽出物の添加濃度を数段階設定し測定した結果、添加濃度依存的なＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の上昇が認められた（表２を参照）。
【００８３】
【表２】
【００８４】
（実施例１９）ＣＢ１受容体特異性の評価
実施例１８と同様に各抽出物のＣＢ２受容体アンタゴニスト活性について評価し、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性と比較することで、ＣＢ１受容体特異性を評価した。ＨＵ２１０のＫｉ値はＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体に対して、それぞれ０．０６１ｎＭ, ０．５２ｎＭである。そこでＨＵ２１０の濃度を、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性測定時は、１ｎＭ、ＣＢ２受容体アンタゴニスト活性測定時は、１０ｎMとした。実施例１〜１６で示した抽出物（最終濃度０．２ｍｇ/ｍｌで添加）のＣＢ１受容体及びＣＢ２受容体アンタゴニスト活性を測定した結果、各抽出物のＣＢ２受容体アンタゴニスト活性はＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の５０％以下であり、これら抽出物のＣＢ１受容体特異性が認められた（表３を参照）
【００８５】
【表３】
【００８６】
（実施例２０）イチジクエタノール抽出物の調製
イチジク乾燥粉末１０．３４ｇに２０倍量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、残渣に同量の１００％エタノールを加え、室温で１時間攪拌した。遠心後に上清を回収し、先ほどの上清と合わせ、減圧下乾固させて１．１ｇの抽出物を得た。これを１００ｍｇ／ｍｌになるようにエタノールに溶解し、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を評価した。
【００８７】
（実施例２１）ワカメエタノール抽出物の調製
ワカメ乾燥粉末５．０５ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３９．２ｍｇの抽出物を得た。
【００８８】
（実施例２２）クマザサエタノール抽出物の調製
クマザサ乾燥粉末６．１１ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１０６．３ｍｇの抽出物を得た。
【００８９】
（実施例２３）ヨモギエタノール抽出物の調製
ヨモギ乾燥粉末５．２８ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、９７．２ｍｇの抽出物を得た。
【００９０】
（実施例２４）クミンエタノール抽出物の調製
クミン乾燥粉末５．１４ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１５５７ｍｇの抽出物を得た。
【００９１】
（実施例２５）レッドクローバーエタノール抽出物の調製
レッドクローバー乾燥粉末２．０４ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７９．７ｍｇの抽出物を得た。
【００９２】
（実施例２６）アシタバエタノール抽出物の調製
アシタバ乾燥粉末５．０５ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、５７２．６ｍｇの抽出物を得た。
【００９３】
（実施例２７）マジョラムエタノール抽出物の調製
マジョラム乾燥粉末５．００ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１５６．１ｍｇの抽出物を得た。
【００９４】
（実施例２８）ベニナツメエタノール抽出物の調製
ベニナツメ乾燥粉末５．２３ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７９８．８ｍｇの抽出物を得た。
【００９５】
（実施例２９）キクエタノール抽出物の調製
キク乾燥粉末５．０３ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、４７６．６ｍｇの抽出物を得た。
【００９６】
（実施例３０）クワエタノール抽出物の調製
クワ乾燥粉末５．１６ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１４３．２ｍｇの抽出物を得た。
【００９７】
（実施例３１）ペパーミントエタノール抽出物の調製
ペパーミント乾燥粉末２．０２ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、７１．３ｍｇの抽出物を得た。
【００９８】
（実施例３２）マイタケエタノール抽出物の調製
マイタケ乾燥粉末２．３８ｇから実施例１と同様の抽出操作を行い、１３６．１ｍｇの抽出物を得た。
【００９９】
（実施例３３）エタノール抽出物のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の測定
実施例１８と同様に（ＨＵ２１０の濃度（１０ｎＭ）のみ異なる）、実施例２０〜３３で示したエタノール抽出物（最終濃度は、イチジクは０．５ｍｇ/ｍｌ、ベニナツメは０．４８ｍｇ/ｍｌ、それ以外は１．０ｍｇ/ｍｌ）のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を評価した結果、イチジク、ベニナツメ、クワ、マイタケ以外のエタノール抽出物には、４０％以上のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性が認められた（表４を参照）。
【０１００】
【表４】
【０１０１】
（実施例３４）抽出物のＣＢ１受容体アンタゴニスト活性のＩｎ ｖｉｖｏ評価
抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性は、マウスに抽出物を前投与した後、ＣＢ１受容体アゴニスト（ＨＵ２１０）を投与し、その後のＨＵ２１０による体温低下を抽出物が阻害するかにより評価した。実験にはＪｃＩ：ＩＣＲ系雄性マウス（５週齢）を用いた。実施例１−３，１５および２４で示した抽出物を１５％の濃度で生理食塩水もしくは水溶性ポリマー（ＰＵＲＥＢＲＩＧＨＴ）に懸濁し、１０ｍｌ／ｋｇで腹腔内に投与した（最終濃度；１５０ｍｇ／ｋｇ）。ｃｏｎｔｒｏｌ群およびｖｅｈｉｃｌｅ群には溶媒のみ投与した。３０分後に、体温測定用プローブを接続した温度計（Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ ＢＡＴ−１２）にて直腸温を測定した（この値を基準値とした。）。さらに１５分後に０．１５％ ＤＭＳＯに溶解したＨＵ２１０（１０μｇ／ｍｌ）、１％ Ｔｗｅｅｎ８０を含む生理食塩水を１０ｍｌ／ｋｇで腹腔内に投与した（最終濃度；１００μｇ／ｋｇ）。ｃｏｎｔｒｏｌ群には溶媒のみ投与した。その後３０分ごとに９０分まで、９０分後からは９０分ごとに２７０分まで直腸温を測定した。一群につき３〜５例で実験を行った。結果を図１−５に示す。
【産業上の利用可能性】
【０１０２】
本発明の組成物は、ＣＢ１受容体阻害活性および抗肥満効果を有し、インスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病及び肥満などの生活習慣病をはじめとするＣＢ１受容体が関与する疾患の治療および予防に利用し得る。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】図１は、イチジク低極性抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図２】図２は、ワカメ低極性抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図３】図３は、クマザサ低極性抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図４】図４は、ヨモギエタノール抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【図５】図５は、ガジュツエタノール抽出物のＩｎ vivoにおけるＣＢ１受容体アンタゴニスト活性の分析結果を示す。横軸はＨＵ２１０投与後の時間、縦軸は各時間の直腸温と基準値との差である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物。
【請求項２】
前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記ＣＢ１受容体阻害活性を有する物質は、前記植物又はその一部からの抽出物である請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物又はその一部を溶媒抽出に供し、抽出画分からＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を回収することを含む、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物の製造方法。
【請求項５】
前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル及びアセトンからなる群より選択される1種以上である、請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか１項記載の方法によって製造される、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物。
【請求項８】
抗肥満効果を有する、請求項１〜３又は請求項７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
請求項１〜３、７又は８のいずれか１項記載の組成物を含む、飲食品。
【請求項１０】
肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示を付した、請求項９記載の飲食品。
【請求項１１】
請求項１〜３、７又は８のいずれか１項記載の組成物を含む、医薬組成物。
【請求項１】
クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物由来のＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を含む組成物。
【請求項２】
前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記ＣＢ１受容体阻害活性を有する物質は、前記植物又はその一部からの抽出物である請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
クワ科イチジク属、チガイゾ科ワカメ属、イネ科ササ属、キク科ヨモギ属、セリ科クミナム属、マメ科シャクジソウ属、セリ科シシウド属、シソ科ハナハッカ属、クロウメモドキ科ナツメ属、キク科キク属、クワ科クワ属、シソ科ハッカ属、サルノコシカケ科マイタケ属、マツ科マツ属、ショウガ科ウコン属及びフトモモ科バンジロウ属からなる群より選択される属に属する１種以上の植物又はその一部を溶媒抽出に供し、抽出画分からＣＢ１受容体阻害活性を有する物質を回収することを含む、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物の製造方法。
【請求項５】
前記植物は、イチジク、ワカメ、クマザサ、ヨモギ、クミン、レッドクローバー、アシタバ、マジョラム、ベニナツメ、キク、クワ、ペパーミント、マイタケ、マツ、ガジュツ及びシジウムからなる群より選択される植物である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル及びアセトンからなる群より選択される1種以上である、請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか１項記載の方法によって製造される、ＣＢ１受容体阻害物質含有組成物。
【請求項８】
抗肥満効果を有する、請求項１〜３又は請求項７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
請求項１〜３、７又は８のいずれか１項記載の組成物を含む、飲食品。
【請求項１０】
肥満を治療、改善、抑制及び／又は予防するためのものである旨の表示を付した、請求項９記載の飲食品。
【請求項１１】
請求項１〜３、７又は８のいずれか１項記載の組成物を含む、医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１０−８３７９６（Ｐ２０１０−８３７９６Ａ）
【公開日】平成２２年４月１５日（２０１０．４．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２５３９７６（Ｐ２００８−２５３９７６）
【出願日】平成２０年９月３０日（２００８．９．３０）
【出願人】（０００２５３５０３）キリンホールディングス株式会社 (247)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年４月１５日（２０１０．４．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月３０日（２００８．９．３０）
【出願人】（０００２５３５０３）キリンホールディングス株式会社 (247)
【Ｆターム（参考）】
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