ＣＤ２０に対するヒトモノクローナル抗体
【課題】ヒトＢリンパ球表面抗原CD20に結合して阻害するヒトモノクローナル抗体と、該抗体の利用法を提供する。
【解決手段】V-D-J組換え及びアイソタイプ・スイッチングを起こすことにより、複数のアイソタイプのヒト抗体を産生することができる、トランスフェクトーマや非ヒトトランスジェニック動物において産生させた、ヒト抗ＣＤ２０モノクローナル抗体。また、該抗体を産生するトランスジェニック動物及びハイブリドーマ、さらに該抗体を含む医薬組成物、並びに該抗体を用いる治療法及び診断法。
【解決手段】V-D-J組換え及びアイソタイプ・スイッチングを起こすことにより、複数のアイソタイプのヒト抗体を産生することができる、トランスフェクトーマや非ヒトトランスジェニック動物において産生させた、ヒト抗ＣＤ２０モノクローナル抗体。また、該抗体を産生するトランスジェニック動物及びハイブリドーマ、さらに該抗体を含む医薬組成物、並びに該抗体を用いる治療法及び診断法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２】
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、分泌性IgA、IgD、及びIgE抗体から成る群より選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体がIgG1抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体がIgG3抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体がIgG4抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体がIgA1又はIgA2抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体がヒトCD20から、約10-5秒-1以下の解離速度定数（kd)で解離する、上記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体がヒトCD20に、約5nM以下の親和性定数（KD)で解離する、上記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、以下：
（ｉ）補体の存在下でCD20発現細胞の補体依存的細胞傷害性（CDC）を誘導することができる；
（ｉｉ）補体の存在下で、CD20及び高レベルのCD55及び／又はCD59を発現する細胞の補体依存的細胞傷害性（CDC）を誘導することができる；
（ｉｉｉ）CD20発現細胞のアポトーシスを誘導することができる；
（ｉｖ）エフェクタ細胞の存在下で、CD20発現細胞の抗体依存的細胞傷害性（ADCC）を誘導することができる；
（ｖ）CD20を発現する細胞の同型接着を誘導することができる；
（ｖｉ）CD20に結合すると、脂質ラフトに転位することができる；
（ｖｉｉ）CD20を発現する腫瘍細胞を有する対象の生存期間を延長することができる；
（ｖｉｉｉ）CD20を発現する細胞を枯渇させることができる；及び
（ｉｘ）低レベルのCD20を発現する細胞（CD20low細胞）を枯渇させることができるのうちから選択される特徴の一つ以上を有する、上記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１０】
以下：
（ｉ）少なくとも20%、そして好ましくは少なくとも30%、10μg/mlの抗体濃度で３７℃で３時間以内に、33 vol/vol %の血漿中B-CLL細胞のCDC媒介性溶解を誘導することができる；
（ｉｉ）少なくとも20%、そして好ましくは少なくとも30%、10μg/mlの抗体濃度で３７℃で３時間以内に、33 vol/vol %の全血中B-CLL細胞のCDC媒介性溶解を誘導することができる；
（ｉｉｉ）20μgの用量で、３０％を越えるDaudi細胞を注射されたSCIDマウスの50%生存率を延長することができる；及び
（ｉｖ）連続４日間１日当たり6.25mg/kgの投薬量でカニクイザルにおいて、低レベルのCD20を発現する末梢Ｂ細胞（CD20lowＢ細胞）を検出不能なレベルまで、５０日間を越えて枯渇させることができる、
から成る群より選択される特徴を一つ以上、有する、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
少なくとも20%、そして好ましくは少なくとも30%、10μg/mlのCD20抗体濃度で３７℃で３時間以内に、33 vol/vol %の血漿存在下でB-CLL細胞のCDC媒介性溶解を誘導することができる、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
それぞれ配列番号１及び配列番号３に記載された通りのヌクレオチド配列及びその保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１３】
それぞれ配列番号５及び配列番号７に記載された通りのヌクレオチド配列及びその保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１４】
それぞれ配列番号９及び配列番号１１に記載された通りのヌクレオチド配列及びその保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１５】
それぞれ配列番号２及び配列番号４に記載された通りのアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１６】
それぞれ配列番号２及び配列番号４に記載された通りのアミノ酸配列に少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同なヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１７】
それぞれ配列番号６及び配列番号８に記載された通りのアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１８】
それぞれ配列番号６及び配列番号８に記載された通りのアミノ酸配列に少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同なヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１９】
それぞれ配列番号１０及び配列番号１２に記載された通りのアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２０】
それぞれ配列番号１０及び配列番号１２に記載された通りのアミノ酸配列に少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同なヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１】
（ｉ）配列番号２、４、６、８、１０、又は１２；及び
（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されたとおりのアミノ酸配列のいずれか一つに少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同な配列、
から成る群より選択される少なくとも１つのヒト可変領域を含む、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２２】
請求項１２乃至２１のいずれか１つの抗体に規定されたヒトCD20上のエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２３】
（ｉ）位置１７２のアミノ酸残基プロリンを含まない又は必要としない；
（ｉｉ）位置１７０のアミノ酸残基アラニン又は位置１７２のプロリンを含まない又は必要としない；
（ｉｉｉ）位置１６３のアミノ酸残基アスパラギン及び位置１６６のアスパラギンを含む又は必要とする；
（ｉｖ）位置１７２のアミノ酸残基プロリンを含まない又は必要としないが、位置１６３のアミノ酸残基アスパラギン及び位置１６６のアスパラギンを含む又は必要とする；
（ｖ）位置１７０のアミノ酸残基アラニン又は位置１７２のプロリンを含まない又は必要としないが、位置１６３のアミノ酸残基アスパラギン及び位置１６６のアスパラギンを含む又は必要とする、
CD20上のエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２４】
CD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、以下の特徴：
（ｉ）変異型 P172S
CD20 （位置１７２のプロリンがセリンに変異した）に、少なくともヒトCD20に対するのと同じ親和性で結合する；
（ｉｉ）変異型AxP（位置１７０のアラニンがセリンに変異し、位置１７２のプロリンがセリンに変異した）に、少なくともヒトCD20に対するのと同じ親和性で結合する；
（ｉｉｉ）10μg/mlの抗体濃度のときに、変異型N166D（位置１６６のアスパラギンがアスパラギン酸に変異した）に対して、ヒトCD20に比較して５０％以上少ない結合を示す；又は
（ｉｖ）10μg/mlの抗体濃度のときに、変異型N163D（位置１６３のアスパラギンがアスパラギン酸に変異した）に対して、ヒトCD20に比較して５０％以上少ない結合を示す；
のうちの一つ以上を有する、抗体。
【請求項２５】
ヒトCD20の小型第一細胞外ループ中のエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２６】
CD20上の不連続なエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２７】
CD20上の不連続なエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、前記エピトープが、第一小型細胞外ループの部分と、第二細胞外ループの部分とを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２８】
CD20上の不連続なエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、前記エピトープが、小型第一細胞外ループの残基AGIYAPと、第二細胞外ループの残基MESLNFIRAHTPYIとを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２９】
請求項１１乃至２８のいずれか１つに記載された抗体の結合特徴を有する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３０】
（ｉ）配列番号１３、１４、１５、１６、１７、又は１８；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも１つのCDR配列を含む、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３１】
配列番号１５を含む、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３２】
（ｉ）配列番号１３、１４、１５、１６、１７、又は１８；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも４つのCDR配列を含む、請求項３０に記載された単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３３】
配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８を含む、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３４】
（ｉ）配列番号１９、２０、２１、２２、２３、又は２４；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも１つのCDR配列を含む、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３５】
（ｉ）配列番号１９、２０、２１、２２、２３、又は２４；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも４つのCDR配列を含む、請求項３４に記載された単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３６】
配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４を含む、請求項３４に記載された抗体。
【請求項３７】
（ｉ）配列番号２５、２６、２７、２８、２９、又は３０；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも１つのCDR配列を含む、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３８】
配列番号２７を含む、請求項３７に記載の抗体。
【請求項３９】
（ｉ）配列番号２５、２６、２７、２８、２９、又は３０；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも４つのCDR配列を含む、請求項３７に記載された抗体。
【請求項４０】
配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０を含む、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
（ｉ）配列番号１３、１９、又は２５、あるいは、配列番号１３、１９又は２５の配列の１つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉ）配列番号１４、２０、又は２６、あるいは、配列番号１４、２０、又は２６の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉｉ）配列番号１５、又は２７、あるいは、配列番号１５又は２７の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｖ）配列番号１６、あるいは、配列番号１６の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｖ）配列番号１７、あるいは、配列番号１７の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；及び
（ｖｉ）配列番号１８又は３０、あるいは、配列番号１８又は３０の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
から成る群より選択される少なくとも１つのCDRを含む、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項４２】
（ｉ）配列番号１３、１９、又は２５、あるいは、配列番号１３、１９又は２５の配列の１つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉ）配列番号１４、２０、又は２６、あるいは、配列番号１４、２０、又は２６の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉｉ）配列番号１５、又は２７、あるいは、配列番号１５又は２７の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｖ）配列番号１６、あるいは、配列番号１６の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｖ）配列番号１７、あるいは、配列番号１７の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；及び
（ｖｉ）配列番号１８又は３０、あるいは、配列番号１８又は３０の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
から成る群より選択される少なくとも４つのCDRを含む、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４３】
配列番号１５、又は２７、及び、配列番号１５又は２７の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列
から成る群より選択される１つのCDRを含む、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４４】
インタクト IgG1抗体、インタクト IgG2抗体、インタクト IgG3抗体、インタクト IgG4抗体、インタクト IgM抗体、インタクト IgA1抗体、インタクト IgA2抗体、インタクト 分泌性 IgA抗体、インタクト IgD抗体、及びインタクト IgE抗体から成る群より選択されるインタクト抗体である、上記請求項のいずれか１つに記載された抗体であって、真核細胞では糖付加されている、抗体。
【請求項４５】
抗体フラグメント又は一本鎖抗体である、上記請求項のいずれか１つに記載の抗体。
【請求項４６】
（ｉ）免疫グロブリン・ヒンジ領域ポリペプチドに融合された、請求項２４に定義された通りの重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の形の、結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）前記ヒンジ領域に融合された免疫グロブリン重鎖CH2定常領域、及び（ｉｉｉ）CH2定常領域に融合された免疫グロブリン重鎖CH3定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である、上記請求項のいずれか一つに記載された抗体。
【請求項４７】
V-(D)-J遺伝子セグメント再編成の結果、機能的ヒト重鎖導入遺伝子及び機能的ヒト軽鎖導入遺伝子が形成された、非ヒトトランスジェニック動物から得られたＢ細胞を、不死化細胞に融合させて含有するハイブリドーマにより産生される、上記請求項のいずれか１つに記載された抗体。
【請求項４８】
V-(D)-J遺伝子セグメント再編成の結果、機能的ヒト重鎖導入遺伝子及び機能的ヒト軽鎖導入遺伝子が形成された、非ヒトトランスジェニック動物から得られたＢ細胞を、不死化細胞に融合させて含むハイブリドーマであって、上記請求項のいずれか１つに記載されたモノクローナル抗体を検出可能な量、産生する、ハイブリドーマ。
【請求項４９】
それぞれ配列番号１、５、又は９及び配列番号３、７、又は１１に記載された通りのヌクレオチド配列、及び、その保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒトIgG重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされたヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項５０】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含むIgG重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生するハイブリドーマ。
【請求項５１】
ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含むトランスフェクトーマにより産生される、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載された抗体。
【請求項５２】
ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含むトランスフェクトーマであって、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載された抗体を検出可能な量、産生する、トランスフェクトーマ。
【請求項５３】
それぞれ配列番号１、５、又は９及び配列番号３、７、又は１１に記載された通りのヌクレオチド配列、及び、その保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒトIgG重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされたヒトモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマ。
【請求項５４】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含むIgG重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生するトランスフェクトーマ。
【請求項５５】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生する真核性又は原核性ホスト細胞。
【請求項５６】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生する非ヒトトランスジェニック動物又は植物。
【請求項５７】
非ヒトトランスジェニック動物のＢ細胞に抗体を産生させるように、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する前記動物を、ヒトCD20又はヒトCD20発現細胞で免疫処理するステップと、
前記Ｂ細胞を骨髄腫細胞と融合させて、ヒトCD20に対して特異的なヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を形成するステップと、
前記ハイブリドーマ、又はこのようなハイブリドーマを由来とするトランスフェクトーマからの培養上清から、CD20に特異的なヒトモノクローナル抗体を単離するステップと、
を含む、ヒトCD20に結合するヒトモノクローナル抗体を作製する方法。
【請求項５８】
前記免疫処理が、ヒトCD20をトランスフェクトしてある細胞で行われる、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
非ヒトトランスジェニック動物のＢ細胞に抗体を産生させるように、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する前記動物を、ヒトCD20をトランスフェクトしてある細胞で免疫処理するステップと、
前記動物のＢ細胞を単離するステップと、
前記Ｂ細胞を骨髄腫細胞に融合させて、ヒトCD20に特異的なヒトモノクローナル抗体を分泌する不死のハイブリドーマ細胞を形成するステップと、
前記ハイブリドーマ、又はこのようなハイブリドーマを由来とするトランスフェクトーマからの培養上清から、CD20に特異的なヒトモノクローナル抗体を単離するステップと、
により得られる、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項６０】
ヒトVH3-13/DP-44 生殖細胞系配列（配列番号５４）を由来とする重鎖可変領域アミノ酸配列と、ヒトL6/JK4-CK （配列番号５５）生殖細胞系配列を由来とする軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、単離されたヒト抗体であって、ヒトCD20に結合する、単離されたヒト抗体。
【請求項６１】
ヒトVH3-09/JH6b 生殖細胞系配列（配列番号５６）を由来とする重鎖可変領域アミノ酸配列と、ヒトVL-L6/JK5 （配列番号５７）生殖細胞系配列を由来とする軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、単離されたヒト抗体であって、ヒトCD20に結合する、単離されたヒト抗体。
【請求項６２】
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載のヒト抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項６３】
補完的な機能活性を有する、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の２つ以上のヒト抗体の組合せを含む組成物。
【請求項６４】
請求項１５に記載の第一の抗体と、請求項１９に記載の第二の抗体とを含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６５】
治療薬をさらに含む請求項６２乃至６４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６６】
放射性同位体を付着させるためのキレート・リンカをさらに含む、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体。
【請求項６７】
細胞傷害性作用薬、放射性同位体、又は薬物に連結させた、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体を含む免疫複合体。
【請求項６８】
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体と、ヒトエフェクタ細胞への結合特異性部分とを含む二重特異的分子。
【請求項６９】
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体と、ヒトFc受容体への結合特異性部分、又は、CD3などのT細胞受容体への結合特異性部分と、を含む二重特異的分子。
【請求項７０】
細胞の成長が阻害されるように、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体の有効量に前記細胞を接触させるステップを含む、CD20発現細胞の成長を阻害する方法。
【請求項７１】
CD20発現細胞の致死が起きるように、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体に前記細胞を接触させるステップを含む、CD20発現細胞を致死させる方法。
【請求項７２】
前記細胞がＢリンパ球又は腫瘍細胞である、請求項７０又は７１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項７３】
請求項１乃至４５又は６０乃至６９のいずれか１つに記載のヒト抗体、組成物、免疫複合体、又は二重特異的分子、請求項９４乃至９７のいずれか１つに記載の発現ベクタ、を、CD20発現細胞が関与する疾患又は異常を治療又は予防するために有効量、対象に投与するステップを含む、前記疾患を治療又は予防する方法。
【請求項７４】
前記疾患がＢ細胞リンパ腫である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記疾患がＢ細胞非ホジキンリンパ腫である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記疾患が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫及び成熟Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病 (CLL)／小リンパ球性リンパ腫 (SLL)、Ｂ細胞プロリンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫 (MCL)、 濾胞性リンパ腫 (FL)、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫 (MALT型、結節性及び脾性）、ヘアリーセル白血病、 びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖異常、ワルデンストレーム大グロブリン血症、及び異形成性大細胞リンパ腫 (ALCL)、から成る群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
前記疾患が濾胞性リンパ腫 (FL)である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記疾患が、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病 (CLL)／小リンパ球性リンパ腫 (SLL)である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記疾患が、リンパ腫様肉芽腫症、原発性浸出リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、縦隔大Ｂ細胞リンパ腫、重鎖疾患（γ、μ及びα疾患を含む）、免疫抑制剤による治療で誘導されるリンパ腫、例えばシクロスポリン誘導性リンパ腫、及びメトトレキセート誘導性リンパ腫、である、請求項７３に記載の方法。
【請求項８０】
請求項１乃至４５又は６０乃至６７のいずれか１つに記載の抗体、組成物、免疫複合体、又は二重特異的分子、請求項９４乃至９７のいずれか１つに記載の発現ベクタ、を、CD20発現免疫細胞が関与する免疫疾患を治療又は予防するために有効量、対象に投与するステップを含む、前記免疫疾患を治療又は予防する方法。
【請求項８１】
治療法が、自己抗原に対する抗体を産生するＢ細胞の致死を含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記疾患又は異常が、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患 (IBD)、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、腎炎、湿疹、喘息、アテローム性硬化症、白血球接着不全、多発性硬化症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年発症性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、IgAニューロパチー、IgM多発性神経炎、免疫媒介血小板減少症、例えば急性特発性血小板減少性紫斑病及び慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎(RA)、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブズ病、橋本甲状腺炎、ウェグナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性感染性単核細胞症、HIV、及び疱疹ウィルス関連疾患、から成る群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８３】
前記自己免疫疾患がリウマチ性関節炎（RA）である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病、若年発症性糖尿病、多発性硬化症、免疫媒介性血小板減少症、例えば急性特発性血小板減少紫斑病及び慢性特発性血小板減少紫斑病、溶血性貧血、筋無力症、全身性硬化症、及び尋常性天疱瘡から選択される炎症性、免疫及び／又は自己免疫異常である、請求項７３に記載の方法。
【請求項８５】
前記疾患が、炎症性腸疾患（IBD）、潰瘍性結腸炎、クローン病、及び多発性硬化症から選択される炎症性、免疫及び／又は自己免疫異常である、請求項７３に記載の方法。
【請求項８６】
別の治療薬を対象に別々に投与するステップをさらに含む、請求項７０乃至８５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８７】
前記治療薬が細胞傷害性作用薬又は放射毒性作用薬である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記治療薬が免疫抑制剤である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記治療薬が、例えばサイトカイン又はケモカインなど、免疫調節性作用薬である、請求項８６に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療薬が、ドキソルビシン、シスプラチン、ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、及びシクロホスファミドから成る群より選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９１】
前記治療薬が、抗CD25抗体、抗CD19抗体、抗CD21抗体、抗CD22抗体、抗CD37抗体、抗CD38抗体、抗IL6R抗体、抗IL8抗体、抗IL15抗体、抗IL15R抗体、抗CD4抗体、抗CD11a抗体、抗アルファ-4/ベータ-1 インテグリン (VLA4) 抗体、 CTLA4-Ig及び抗C3b(i)抗体から成る群より選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９２】
試料中のCD20抗原又はCD20発現細胞の存在を検出するためのin vitro法であって、
前記試料を、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体に、前記抗体とCD20との間の複合体形成が可能な条件下で接触させるステップと、
複合体の形成を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項９３】
試料中のCD20抗原又はCD20発現細胞の存在を検出するための、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体を含む、キット。
【請求項９４】
対象においてCD20抗原又はCD20発現細胞の存在を検出するためのin vivo法であって、
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体を、前記抗体とCD20との間の複合体形成が可能な条件下で投与するステップと、
形成された複合体を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項９５】
ヒトCD20に結合するヒト抗体の軽鎖、重鎖、又は軽鎖及び重鎖の両方の可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクタ。
【請求項９６】
ヒトCD20に結合するヒト抗体の軽鎖、重鎖、又は軽鎖及び重鎖の両方の定常をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項９５に記載の発現ベクタ。
【請求項９７】
配列番号１、５、及び９に記載された通りのヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチドを含む重鎖可変領域と、配列番号３、７、及び１１に記載された通りのヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む軽鎖可変領域とをコードするヌクレオチド配列、及び、それらの保存的改変を含む発現ベクタ。
【請求項９８】
配列番号２、６、及び１０に記載された通りのアミノ酸配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４、８、及び１２に記載された通りのアミノ酸配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とをコードするヌクレオチド配列、及び、それらの保存的配列改変を含む発現ベクタ。
【請求項９９】
請求項９５乃至９８のいずれか１つに記載の発現ベクタと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項１００】
請求項１乃至４５のいずれか１つの抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
【請求項１０１】
2F2、11B8 又は7D8に結合する抗イディオタイプ抗体。
【請求項１０２】
試料中において、CD20に対するヒトモノクローナル抗体のレベルを検出するための、請求項１００又は１０１に記載の抗イディオタイプ抗体の使用。
【請求項１】
ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２】
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、分泌性IgA、IgD、及びIgE抗体から成る群より選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体がIgG1抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体がIgG3抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体がIgG4抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体がIgA1又はIgA2抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体がヒトCD20から、約10-5秒-1以下の解離速度定数（kd)で解離する、上記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体がヒトCD20に、約5nM以下の親和性定数（KD)で解離する、上記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、以下：
（ｉ）補体の存在下でCD20発現細胞の補体依存的細胞傷害性（CDC）を誘導することができる；
（ｉｉ）補体の存在下で、CD20及び高レベルのCD55及び／又はCD59を発現する細胞の補体依存的細胞傷害性（CDC）を誘導することができる；
（ｉｉｉ）CD20発現細胞のアポトーシスを誘導することができる；
（ｉｖ）エフェクタ細胞の存在下で、CD20発現細胞の抗体依存的細胞傷害性（ADCC）を誘導することができる；
（ｖ）CD20を発現する細胞の同型接着を誘導することができる；
（ｖｉ）CD20に結合すると、脂質ラフトに転位することができる；
（ｖｉｉ）CD20を発現する腫瘍細胞を有する対象の生存期間を延長することができる；
（ｖｉｉｉ）CD20を発現する細胞を枯渇させることができる；及び
（ｉｘ）低レベルのCD20を発現する細胞（CD20low細胞）を枯渇させることができるのうちから選択される特徴の一つ以上を有する、上記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１０】
以下：
（ｉ）少なくとも20%、そして好ましくは少なくとも30%、10μg/mlの抗体濃度で３７℃で３時間以内に、33 vol/vol %の血漿中B-CLL細胞のCDC媒介性溶解を誘導することができる；
（ｉｉ）少なくとも20%、そして好ましくは少なくとも30%、10μg/mlの抗体濃度で３７℃で３時間以内に、33 vol/vol %の全血中B-CLL細胞のCDC媒介性溶解を誘導することができる；
（ｉｉｉ）20μgの用量で、３０％を越えるDaudi細胞を注射されたSCIDマウスの50%生存率を延長することができる；及び
（ｉｖ）連続４日間１日当たり6.25mg/kgの投薬量でカニクイザルにおいて、低レベルのCD20を発現する末梢Ｂ細胞（CD20lowＢ細胞）を検出不能なレベルまで、５０日間を越えて枯渇させることができる、
から成る群より選択される特徴を一つ以上、有する、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
少なくとも20%、そして好ましくは少なくとも30%、10μg/mlのCD20抗体濃度で３７℃で３時間以内に、33 vol/vol %の血漿存在下でB-CLL細胞のCDC媒介性溶解を誘導することができる、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
それぞれ配列番号１及び配列番号３に記載された通りのヌクレオチド配列及びその保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１３】
それぞれ配列番号５及び配列番号７に記載された通りのヌクレオチド配列及びその保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１４】
それぞれ配列番号９及び配列番号１１に記載された通りのヌクレオチド配列及びその保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされた、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１５】
それぞれ配列番号２及び配列番号４に記載された通りのアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１６】
それぞれ配列番号２及び配列番号４に記載された通りのアミノ酸配列に少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同なヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１７】
それぞれ配列番号６及び配列番号８に記載された通りのアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１８】
それぞれ配列番号６及び配列番号８に記載された通りのアミノ酸配列に少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同なヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１９】
それぞれ配列番号１０及び配列番号１２に記載された通りのアミノ酸配列及びその保存的配列改変を含むヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２０】
それぞれ配列番号１０及び配列番号１２に記載された通りのアミノ酸配列に少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同なヒト重鎖及びヒトカッパ軽鎖可変領域を有する、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１】
（ｉ）配列番号２、４、６、８、１０、又は１２；及び
（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されたとおりのアミノ酸配列のいずれか一つに少なくとも９０％相同、好ましくは少なくとも９５％相同、そしてより好ましくは少なくとも９８％相同、又は少なくとも９９％相同な配列、
から成る群より選択される少なくとも１つのヒト可変領域を含む、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２２】
請求項１２乃至２１のいずれか１つの抗体に規定されたヒトCD20上のエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２３】
（ｉ）位置１７２のアミノ酸残基プロリンを含まない又は必要としない；
（ｉｉ）位置１７０のアミノ酸残基アラニン又は位置１７２のプロリンを含まない又は必要としない；
（ｉｉｉ）位置１６３のアミノ酸残基アスパラギン及び位置１６６のアスパラギンを含む又は必要とする；
（ｉｖ）位置１７２のアミノ酸残基プロリンを含まない又は必要としないが、位置１６３のアミノ酸残基アスパラギン及び位置１６６のアスパラギンを含む又は必要とする；
（ｖ）位置１７０のアミノ酸残基アラニン又は位置１７２のプロリンを含まない又は必要としないが、位置１６３のアミノ酸残基アスパラギン及び位置１６６のアスパラギンを含む又は必要とする、
CD20上のエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２４】
CD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、以下の特徴：
（ｉ）変異型 P172S
CD20 （位置１７２のプロリンがセリンに変異した）に、少なくともヒトCD20に対するのと同じ親和性で結合する；
（ｉｉ）変異型AxP（位置１７０のアラニンがセリンに変異し、位置１７２のプロリンがセリンに変異した）に、少なくともヒトCD20に対するのと同じ親和性で結合する；
（ｉｉｉ）10μg/mlの抗体濃度のときに、変異型N166D（位置１６６のアスパラギンがアスパラギン酸に変異した）に対して、ヒトCD20に比較して５０％以上少ない結合を示す；又は
（ｉｖ）10μg/mlの抗体濃度のときに、変異型N163D（位置１６３のアスパラギンがアスパラギン酸に変異した）に対して、ヒトCD20に比較して５０％以上少ない結合を示す；
のうちの一つ以上を有する、抗体。
【請求項２５】
ヒトCD20の小型第一細胞外ループ中のエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２６】
CD20上の不連続なエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２７】
CD20上の不連続なエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、前記エピトープが、第一小型細胞外ループの部分と、第二細胞外ループの部分とを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２８】
CD20上の不連続なエピトープに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であって、前記エピトープが、小型第一細胞外ループの残基AGIYAPと、第二細胞外ループの残基MESLNFIRAHTPYIとを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項２９】
請求項１１乃至２８のいずれか１つに記載された抗体の結合特徴を有する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３０】
（ｉ）配列番号１３、１４、１５、１６、１７、又は１８；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも１つのCDR配列を含む、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３１】
配列番号１５を含む、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３２】
（ｉ）配列番号１３、１４、１５、１６、１７、又は１８；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも４つのCDR配列を含む、請求項３０に記載された単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３３】
配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８を含む、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３４】
（ｉ）配列番号１９、２０、２１、２２、２３、又は２４；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも１つのCDR配列を含む、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３５】
（ｉ）配列番号１９、２０、２１、２２、２３、又は２４；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも４つのCDR配列を含む、請求項３４に記載された単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３６】
配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４を含む、請求項３４に記載された抗体。
【請求項３７】
（ｉ）配列番号２５、２６、２７、２８、２９、又は３０；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも１つのCDR配列を含む、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項３８】
配列番号２７を含む、請求項３７に記載の抗体。
【請求項３９】
（ｉ）配列番号２５、２６、２７、２８、２９、又は３０；
（ｉｉ）（ｉ）に記載された配列の保存的配列改変；及び
（ｉｉｉ）ヒトCD20への結合能を保持した、（ｉ）又は（ｉｉ）に規定された配列のいずか１つのフラグメント
から成る群より選択される少なくとも４つのCDR配列を含む、請求項３７に記載された抗体。
【請求項４０】
配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０を含む、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
（ｉ）配列番号１３、１９、又は２５、あるいは、配列番号１３、１９又は２５の配列の１つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉ）配列番号１４、２０、又は２６、あるいは、配列番号１４、２０、又は２６の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉｉ）配列番号１５、又は２７、あるいは、配列番号１５又は２７の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｖ）配列番号１６、あるいは、配列番号１６の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｖ）配列番号１７、あるいは、配列番号１７の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；及び
（ｖｉ）配列番号１８又は３０、あるいは、配列番号１８又は３０の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
から成る群より選択される少なくとも１つのCDRを含む、上記請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項４２】
（ｉ）配列番号１３、１９、又は２５、あるいは、配列番号１３、１９又は２５の配列の１つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉ）配列番号１４、２０、又は２６、あるいは、配列番号１４、２０、又は２６の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｉｉ）配列番号１５、又は２７、あるいは、配列番号１５又は２７の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｉｖ）配列番号１６、あるいは、配列番号１６の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
（ｖ）配列番号１７、あるいは、配列番号１７の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；及び
（ｖｉ）配列番号１８又は３０、あるいは、配列番号１８又は３０の配列の１乃至２つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列；
から成る群より選択される少なくとも４つのCDRを含む、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４３】
配列番号１５、又は２７、及び、配列番号１５又は２７の配列の１乃至４つのアミノ酸置換、欠失又は追加を有する配列
から成る群より選択される１つのCDRを含む、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４４】
インタクト IgG1抗体、インタクト IgG2抗体、インタクト IgG3抗体、インタクト IgG4抗体、インタクト IgM抗体、インタクト IgA1抗体、インタクト IgA2抗体、インタクト 分泌性 IgA抗体、インタクト IgD抗体、及びインタクト IgE抗体から成る群より選択されるインタクト抗体である、上記請求項のいずれか１つに記載された抗体であって、真核細胞では糖付加されている、抗体。
【請求項４５】
抗体フラグメント又は一本鎖抗体である、上記請求項のいずれか１つに記載の抗体。
【請求項４６】
（ｉ）免疫グロブリン・ヒンジ領域ポリペプチドに融合された、請求項２４に定義された通りの重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の形の、結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）前記ヒンジ領域に融合された免疫グロブリン重鎖CH2定常領域、及び（ｉｉｉ）CH2定常領域に融合された免疫グロブリン重鎖CH3定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である、上記請求項のいずれか一つに記載された抗体。
【請求項４７】
V-(D)-J遺伝子セグメント再編成の結果、機能的ヒト重鎖導入遺伝子及び機能的ヒト軽鎖導入遺伝子が形成された、非ヒトトランスジェニック動物から得られたＢ細胞を、不死化細胞に融合させて含有するハイブリドーマにより産生される、上記請求項のいずれか１つに記載された抗体。
【請求項４８】
V-(D)-J遺伝子セグメント再編成の結果、機能的ヒト重鎖導入遺伝子及び機能的ヒト軽鎖導入遺伝子が形成された、非ヒトトランスジェニック動物から得られたＢ細胞を、不死化細胞に融合させて含むハイブリドーマであって、上記請求項のいずれか１つに記載されたモノクローナル抗体を検出可能な量、産生する、ハイブリドーマ。
【請求項４９】
それぞれ配列番号１、５、又は９及び配列番号３、７、又は１１に記載された通りのヌクレオチド配列、及び、その保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒトIgG重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされたヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項５０】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含むIgG重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生するハイブリドーマ。
【請求項５１】
ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含むトランスフェクトーマにより産生される、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載された抗体。
【請求項５２】
ヒト重鎖及びヒト軽鎖をコードする核酸を含むトランスフェクトーマであって、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載された抗体を検出可能な量、産生する、トランスフェクトーマ。
【請求項５３】
それぞれ配列番号１、５、又は９及び配列番号３、７、又は１１に記載された通りのヌクレオチド配列、及び、その保存的配列改変、をそれらの可変領域に含むヒトIgG重鎖及びヒトカッパ軽鎖核酸にコードされたヒトモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマ。
【請求項５４】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含むIgG重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生するトランスフェクトーマ。
【請求項５５】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生する真核性又は原核性ホスト細胞。
【請求項５６】
それぞれ配列番号２、６、又は１０及び配列番号４、８、又は１２に記載された通りのアミノ酸配列、及び、その保存的配列改変、を含む重鎖及び軽鎖可変領域を有するヒトモノクローナルを産生する非ヒトトランスジェニック動物又は植物。
【請求項５７】
非ヒトトランスジェニック動物のＢ細胞に抗体を産生させるように、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する前記動物を、ヒトCD20又はヒトCD20発現細胞で免疫処理するステップと、
前記Ｂ細胞を骨髄腫細胞と融合させて、ヒトCD20に対して特異的なヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を形成するステップと、
前記ハイブリドーマ、又はこのようなハイブリドーマを由来とするトランスフェクトーマからの培養上清から、CD20に特異的なヒトモノクローナル抗体を単離するステップと、
を含む、ヒトCD20に結合するヒトモノクローナル抗体を作製する方法。
【請求項５８】
前記免疫処理が、ヒトCD20をトランスフェクトしてある細胞で行われる、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
非ヒトトランスジェニック動物のＢ細胞に抗体を産生させるように、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する前記動物を、ヒトCD20をトランスフェクトしてある細胞で免疫処理するステップと、
前記動物のＢ細胞を単離するステップと、
前記Ｂ細胞を骨髄腫細胞に融合させて、ヒトCD20に特異的なヒトモノクローナル抗体を分泌する不死のハイブリドーマ細胞を形成するステップと、
前記ハイブリドーマ、又はこのようなハイブリドーマを由来とするトランスフェクトーマからの培養上清から、CD20に特異的なヒトモノクローナル抗体を単離するステップと、
により得られる、ヒトCD20に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体。
【請求項６０】
ヒトVH3-13/DP-44 生殖細胞系配列（配列番号５４）を由来とする重鎖可変領域アミノ酸配列と、ヒトL6/JK4-CK （配列番号５５）生殖細胞系配列を由来とする軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、単離されたヒト抗体であって、ヒトCD20に結合する、単離されたヒト抗体。
【請求項６１】
ヒトVH3-09/JH6b 生殖細胞系配列（配列番号５６）を由来とする重鎖可変領域アミノ酸配列と、ヒトVL-L6/JK5 （配列番号５７）生殖細胞系配列を由来とする軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、単離されたヒト抗体であって、ヒトCD20に結合する、単離されたヒト抗体。
【請求項６２】
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載のヒト抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項６３】
補完的な機能活性を有する、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の２つ以上のヒト抗体の組合せを含む組成物。
【請求項６４】
請求項１５に記載の第一の抗体と、請求項１９に記載の第二の抗体とを含む、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６５】
治療薬をさらに含む請求項６２乃至６４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６６】
放射性同位体を付着させるためのキレート・リンカをさらに含む、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体。
【請求項６７】
細胞傷害性作用薬、放射性同位体、又は薬物に連結させた、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体を含む免疫複合体。
【請求項６８】
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体と、ヒトエフェクタ細胞への結合特異性部分とを含む二重特異的分子。
【請求項６９】
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体と、ヒトFc受容体への結合特異性部分、又は、CD3などのT細胞受容体への結合特異性部分と、を含む二重特異的分子。
【請求項７０】
細胞の成長が阻害されるように、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体の有効量に前記細胞を接触させるステップを含む、CD20発現細胞の成長を阻害する方法。
【請求項７１】
CD20発現細胞の致死が起きるように、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体に前記細胞を接触させるステップを含む、CD20発現細胞を致死させる方法。
【請求項７２】
前記細胞がＢリンパ球又は腫瘍細胞である、請求項７０又は７１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項７３】
請求項１乃至４５又は６０乃至６９のいずれか１つに記載のヒト抗体、組成物、免疫複合体、又は二重特異的分子、請求項９４乃至９７のいずれか１つに記載の発現ベクタ、を、CD20発現細胞が関与する疾患又は異常を治療又は予防するために有効量、対象に投与するステップを含む、前記疾患を治療又は予防する方法。
【請求項７４】
前記疾患がＢ細胞リンパ腫である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記疾患がＢ細胞非ホジキンリンパ腫である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記疾患が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫及び成熟Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病 (CLL)／小リンパ球性リンパ腫 (SLL)、Ｂ細胞プロリンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫 (MCL)、 濾胞性リンパ腫 (FL)、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫 (MALT型、結節性及び脾性）、ヘアリーセル白血病、 びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖異常、ワルデンストレーム大グロブリン血症、及び異形成性大細胞リンパ腫 (ALCL)、から成る群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
前記疾患が濾胞性リンパ腫 (FL)である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記疾患が、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病 (CLL)／小リンパ球性リンパ腫 (SLL)である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記疾患が、リンパ腫様肉芽腫症、原発性浸出リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、縦隔大Ｂ細胞リンパ腫、重鎖疾患（γ、μ及びα疾患を含む）、免疫抑制剤による治療で誘導されるリンパ腫、例えばシクロスポリン誘導性リンパ腫、及びメトトレキセート誘導性リンパ腫、である、請求項７３に記載の方法。
【請求項８０】
請求項１乃至４５又は６０乃至６７のいずれか１つに記載の抗体、組成物、免疫複合体、又は二重特異的分子、請求項９４乃至９７のいずれか１つに記載の発現ベクタ、を、CD20発現免疫細胞が関与する免疫疾患を治療又は予防するために有効量、対象に投与するステップを含む、前記免疫疾患を治療又は予防する方法。
【請求項８１】
治療法が、自己抗原に対する抗体を産生するＢ細胞の致死を含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記疾患又は異常が、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患 (IBD)、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、腎炎、湿疹、喘息、アテローム性硬化症、白血球接着不全、多発性硬化症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年発症性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、IgAニューロパチー、IgM多発性神経炎、免疫媒介血小板減少症、例えば急性特発性血小板減少性紫斑病及び慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎(RA)、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブズ病、橋本甲状腺炎、ウェグナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性感染性単核細胞症、HIV、及び疱疹ウィルス関連疾患、から成る群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８３】
前記自己免疫疾患がリウマチ性関節炎（RA）である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病、若年発症性糖尿病、多発性硬化症、免疫媒介性血小板減少症、例えば急性特発性血小板減少紫斑病及び慢性特発性血小板減少紫斑病、溶血性貧血、筋無力症、全身性硬化症、及び尋常性天疱瘡から選択される炎症性、免疫及び／又は自己免疫異常である、請求項７３に記載の方法。
【請求項８５】
前記疾患が、炎症性腸疾患（IBD）、潰瘍性結腸炎、クローン病、及び多発性硬化症から選択される炎症性、免疫及び／又は自己免疫異常である、請求項７３に記載の方法。
【請求項８６】
別の治療薬を対象に別々に投与するステップをさらに含む、請求項７０乃至８５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８７】
前記治療薬が細胞傷害性作用薬又は放射毒性作用薬である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記治療薬が免疫抑制剤である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記治療薬が、例えばサイトカイン又はケモカインなど、免疫調節性作用薬である、請求項８６に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療薬が、ドキソルビシン、シスプラチン、ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、及びシクロホスファミドから成る群より選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９１】
前記治療薬が、抗CD25抗体、抗CD19抗体、抗CD21抗体、抗CD22抗体、抗CD37抗体、抗CD38抗体、抗IL6R抗体、抗IL8抗体、抗IL15抗体、抗IL15R抗体、抗CD4抗体、抗CD11a抗体、抗アルファ-4/ベータ-1 インテグリン (VLA4) 抗体、 CTLA4-Ig及び抗C3b(i)抗体から成る群より選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９２】
試料中のCD20抗原又はCD20発現細胞の存在を検出するためのin vitro法であって、
前記試料を、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体に、前記抗体とCD20との間の複合体形成が可能な条件下で接触させるステップと、
複合体の形成を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項９３】
試料中のCD20抗原又はCD20発現細胞の存在を検出するための、請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体を含む、キット。
【請求項９４】
対象においてCD20抗原又はCD20発現細胞の存在を検出するためのin vivo法であって、
請求項１乃至４５のいずれか１つに記載の抗体を、前記抗体とCD20との間の複合体形成が可能な条件下で投与するステップと、
形成された複合体を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項９５】
ヒトCD20に結合するヒト抗体の軽鎖、重鎖、又は軽鎖及び重鎖の両方の可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクタ。
【請求項９６】
ヒトCD20に結合するヒト抗体の軽鎖、重鎖、又は軽鎖及び重鎖の両方の定常をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項９５に記載の発現ベクタ。
【請求項９７】
配列番号１、５、及び９に記載された通りのヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチドを含む重鎖可変領域と、配列番号３、７、及び１１に記載された通りのヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む軽鎖可変領域とをコードするヌクレオチド配列、及び、それらの保存的改変を含む発現ベクタ。
【請求項９８】
配列番号２、６、及び１０に記載された通りのアミノ酸配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４、８、及び１２に記載された通りのアミノ酸配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とをコードするヌクレオチド配列、及び、それらの保存的配列改変を含む発現ベクタ。
【請求項９９】
請求項９５乃至９８のいずれか１つに記載の発現ベクタと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項１００】
請求項１乃至４５のいずれか１つの抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
【請求項１０１】
2F2、11B8 又は7D8に結合する抗イディオタイプ抗体。
【請求項１０２】
試料中において、CD20に対するヒトモノクローナル抗体のレベルを検出するための、請求項１００又は１０１に記載の抗イディオタイプ抗体の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１１Ｄ】
【図１１Ｅ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１２Ｄ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１３Ｄ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１８Ｄ】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図１９Ｃ】
【図１９Ｄ】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９Ａ】
【図２９Ｂ】
【図２９Ｃ】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３Ａ】
【図３３Ｂ】
【図３３Ｃ】
【図３３Ｄ】
【図３３Ｅ】
【図３３Ｆ】
【図３３Ｇ】
【図３４】
【図３５Ａ】
【図３５Ｂ】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８Ａ】
【図４８Ｂ】
【図４８Ｃ】
【図４８Ｄ】
【図４８Ｅ】
【図４９Ａ】
【図４９Ｂ】
【図４９Ｃ】
【図４９Ｄ】
【図４９Ｅ】
【図４９Ｆ】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１１Ｄ】
【図１１Ｅ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１２Ｄ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１３Ｄ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１８Ｄ】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図１９Ｃ】
【図１９Ｄ】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９Ａ】
【図２９Ｂ】
【図２９Ｃ】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３Ａ】
【図３３Ｂ】
【図３３Ｃ】
【図３３Ｄ】
【図３３Ｅ】
【図３３Ｆ】
【図３３Ｇ】
【図３４】
【図３５Ａ】
【図３５Ｂ】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８Ａ】
【図４８Ｂ】
【図４８Ｃ】
【図４８Ｄ】
【図４８Ｅ】
【図４９Ａ】
【図４９Ｂ】
【図４９Ｃ】
【図４９Ｄ】
【図４９Ｅ】
【図４９Ｆ】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【公開番号】特開２０１２−５４８５（Ｐ２０１２−５４８５Ａ）
【公開日】平成２４年１月１２日（２０１２．１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１４８９９４（Ｐ２０１１−１４８９９４）
【出願日】平成２３年７月５日（２０１１．７．５）
【分割の表示】特願２００９−１９３６７０（Ｐ２００９−１９３６７０）の分割
【原出願日】平成１５年１０月１７日（２００３．１０．１７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ペンティアム
【出願人】（５０７３１６３９８）ゲンマブ エー／エス (18)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１月１２日（２０１２．１．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年７月５日（２０１１．７．５）
【分割の表示】特願２００９−１９３６７０（Ｐ２００９−１９３６７０）の分割
【原出願日】平成１５年１０月１７日（２００３．１０．１７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ペンティアム
【出願人】（５０７３１６３９８）ゲンマブ エー／エス (18)
【Ｆターム（参考）】
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