Ｃｉｎｎａｍｏｍｉ（ケイシ）及びＰｏｒｉａ（ブクリョウ）組成物及びその利用法
本発明は中国の漢方薬のRamulus Cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる組成物を提供するものである。この組成物はフィンガープリントの特性により定義され、この特性は改良されたクロマトグラフ法により得られるものである。本発明はまた、このような組成物の様々な利用法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は2006年10月18日出願の米国仮特許出願番号第60/829,945号の優先権を主張するものである。前述の出願の全体の内容及び開示は、参照することにより本出願に組み込まれるものとする。
【背景技術】
【０００２】
本発明は中国の漢方薬Ramulus cinnamomi（中国名:桂枝）及びPoria cocos（中国名：茯苓）からなる組成物の製造方法及び使用法に関するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
伝統的な漢方薬において、身体調整治療を行うのに薬草製剤が用いられている。時には、薬草単独或いは薬草由来物が用いられる。しかし、より一般的には、「製剤」、或いは様々な特殊な薬草の特定の組み合わせが投与されている。以下の５つの薬草材料は、伝統的な漢方医学において2000年以上も利用されているものである。これらの薬草材料は様々な歴史的漢方医学書に記録されており、また、現代の科学雑誌に掲載されている様々な論文に引用されている。
【０００４】
ケイシは、Cinnamomum cassia Presl（カシア）（クスノキ科）の若い茎を乾燥させたものである。この植物は春或いは夏に採取される。採取後は天日で乾燥させ、葉を取り除く。また、ケイシは薄切りにしてもよい。この製剤は円筒状で、多数の枝を有し、長さ３０から７５ｃｍで、直径が０．３から１ｃｍの先端部を有する。表面は茶色或いは赤茶色で、縦走線、細かい縮緬皺を有し、葉、枝或いは出芽痕に斑点がある。ケイシは堅くて脆く、壊れやすい。薄切りの場合には、厚さを２から４ｍｍにする。その切り口は、樹皮部は赤茶色を示し、木部は黄白色から淡黄茶色を示す。ケイシは独特の芳香を有し、甘み或いは僅かな辛味を有する（特に樹皮部）。この製剤は混じりけのない小片であり、目に見える混入物を有さない。Cinnamomi（ケイシ）の重要な含有物は桂皮アルデヒド或いは桂皮酸である。
【０００５】
ブクリョウ（Indian Bread）は菌類の菌核粒子を乾燥させたPoria cocos（ブクリョウ）（サルノコシカケ科）である。この植物は６月から９月にかけて採取される。採取後は、積み重ねて空気乾燥させ、これを表面に縮緬皺が表れ内部の水分が蒸発するまで繰り返す。完全に乾燥した菌核粒子は「Fulingge」として知られる。乾燥させていない菌核粒子の皮を乾燥前に剥いた場合、分離した部分は「Fulingpi（皮）」及び「Fulingkuai（身）」と呼ばれる。
【０００６】
ブクリョウ（Indian Bread）は厚みがありごつごつした茶色から黒褐色の外皮を有する。また、際立ってしなびて筋を有する外皮である。その組織は堅く、圧縮されている。ブクリョウ（Indian Bread）は無臭で、味はほとんどなく、噛むと粘着性が生じる。この製剤はPoria（ブクリョウ）の混じりけのない小片で、目に見える含有物を有さない。ブクリョウ（Indian Bread）の重要な有効成分はパキマン及びブクリョウ酸である。
【０００７】
多数の米国特許及び文献が、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）等との薬草から治療薬組成物を組成する方法について教示している。多数の中国出身の研究者達が、特定の、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の組成物を用いた動物研究或いは臨床研究についての報告をしている。
【０００８】
米国特許番号第6,093,403号明細書において、２０重量％までのPoria（ブクリョウ）抽出物を含有する処方が、疾患の治療或いは予防に用いられている。疾患とは例えば、糖分のバランスにおける疾患、糖尿病、及び狭心症等の血液循環の病気が挙げられる。
【０００９】
Poria cocos wolf（ブクリョウ）は、心疾患、脳血管疾患、アルツハイマー及びうつ病の治療に用いられている。２０重量％までのPoria cocos wolf（ブクリョウ）を含有する組成物は、米国特許第5,589,182号明細書に開示されている。
【００１０】
He他は1994年に、婦人病の１００の症例における、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）組成物の臨床研究に関する論文を出版した。この婦人病とは、子宮内膜の剥脱不全が原因となる不正子宮出血、慢性的骨盤炎症、月経困難症及び小さい子宮壁内筋腫である。他の製剤（Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のボーラス：BCP）の治療を受けた患者の５０の症例と比較すると、苦痛を訴える複数の症状及び身体的症状は、２つの群の間で大きな差異は現れなかった。
【００１１】
Shi他は2000年に、子宮筋腫の患者６０人における、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）組成物の治療効果について報告した。患者は婦人科の健康診断、超音波診断及びヘマトクロームの検査を受けた。Shiの研究によると、有効率は９１．７％であると報告された。またそのうちの症例の１０％に大きな改善が見られた。治療の効果は以下のように定義された。すなわち、腫瘍が３から５ｃｍ縮小し、増加した月経の量が５０％以上減少した場合は「大きな改善あり」とされた。或いは、腫瘍が２から３ｃｍ縮小し、月経の量が２５％以上減少した場合は「改善あり」とされた。
【００１２】
本発明は、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）からなる薬草の組成物を提供するものである。この薬草の組成物は、上記のような多数の病気の症状を和らげるのに効果的である。漢方医学におけるより伝統的な慣習と対照的に、本発明は最新技術で創出されるものである。この最新技術は、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の有効成分をよりよい状態で保存することが可能である。
【００１３】
本出願を通して、様々な出版物が参照され、これらの出版物の引用は請求の範囲に先行する明細書の最後の引例内において見られる。これらの出版物の開示は、参照することにより本出願に含まれることとする。これにより、本明細書に記述され主張される発明の日付において、当業者にとって周知である最新技術がさらに十分に記述されることとなる。
【００１４】
本発明は中国の漢方薬Ramulus cinnamomi（中国名:桂枝）及びPoria cocos（中国名：茯苓）からなる組成物を提供するものである。ある実施例において、この漢方薬はカプセルとして処方される。これは米国特許第7,052,700号明細書において述べられており、参照することにより本明細書に組み込まれることとする。
【００１５】
本発明の薬草組成物は、12のピークを表示するHPLC（高速液体クロマトグラフィ）フィンガープリントにより定義される。メタノールを用いて薬草組成物を抽出し、標準品としてのペオニフロリンに対し分析をした。１２のピークは以下の特性を有する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
ある実施例において、本発明はRamulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる薬草組成物であって、（ａ）適切な有機溶媒を用いて組成物を抽出するステップ、（ｂ）クロマトグラフ分析を行うステップからなる方法にしたがう時、前記組成物が１２のピークを作り出す。ピーク１から１２の相対保持時間幅は、ペオニフロリンと比較した場合、それぞれ０．２０９から０．３１４、０．４５６から０．６８３、０．７３３から０．９９９、０．８７１から１．３０６、０．９２１から１．３８２、０．９６８から１．４５１、１．００９から１．５１４、１．０５８から１．５８７、１．１５２から１．７２８、１．６９から２．５３６、１．７７１から２．６５７、及び１．９４３から２．９１５である
【００１７】
他の実施例において、本発明はペオニフロリン及びペオノールをさらに含む。好適には、ペオニフロリンは１．２６〜１．９０％で存在し、ペオノールは０．７１〜１．０７％で存在する。
【００１８】
他の実施例において、本発明は、（ａ）Poria（ブクリョウ）の粉末を調製するステップ、（ｂ）Cortex moutan（牡丹皮）の抽出物を調製するステップ、（ｃ）Ramulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物を調製するステップ、（ｄ）Radix paeoniae alba（シャクヤク）、Semen persicae（トウニン）及びPoria（ブクリョウ）の抽出物を調製するステップ、（ｅ）ステップ（ｂ）から（ｄ）で得られた抽出物を合わせるステップ、（ｆ）Poria（ブクリョウ）の粉末をステップ（ｅ）で得られた抽出物と混合させ、微粉末にするステップ、及び（ｇ）前記微粉末をCortex moutan（牡丹皮）及びRamulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物からなる含有物質と混合させるステップからなる方法により製造される組成物を提供する。
【００１９】
また、本発明は、（ａ）Poria（ブクリョウ）の粉を調製するステップ、（ｂ）Cortex moutan（牡丹皮）の抽出物を調製するステップ、（ｃ）Ramulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物を調製するステップ、（ｄ）Radix paeoniae alba（シャクヤク）、Semen persicae（トウニン）及びPoria（ブクリョウ）の抽出物を調製するステップ、（ｅ）ステップ（ｂ）から（ｄ）で得られた抽出物を合わせるステップ、（ｆ）Poria（ブクリョウ）の粉をステップ（ｅ）で得られた抽出物と混合させ、微粉末にするステップ、及び（ｇ）前記微粉末をCortex moutan（牡丹皮）及びRamulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物からなる含有物質と混合させるステップからなる方法により製造されるRamulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる組成物の製造方法を提供する。
【００２０】
本発明はまた、医薬的に許容可能な担体及び本明細書中に記載の薬草組成物からなる医薬組成物も提供する。
【００２１】
本発明はまた、初期の月経困難症、続発性の月経困難症、不正子宮出血、慢性骨盤炎症、及び小さい子宮壁内筋腫といった病気或いは障害の治療のための薬剤の製造における本明細書中に記載の組成物の使用法も提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は中国の漢方薬の柱枝及び茯苓（Ramulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ））からなる組成物を提供する。ある実施例において、薬草組成物はカプセル状で処方される。これは米国特許第7,052,700号明細書に記載されており、この開示を参照することにより本発明に組み込むこととする。
【００２３】
ある実施形態において、本発明はRamulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる薬草組成物を提供し、前記薬草組成物は、１２のピークのフィンガープリント（図１）により定義され、このフィンガープリントは、適切な有機溶媒を用いて組成物を抽出するステップ及びクロマトグラフ分析を行うステップからなるフィンガープリント法により得られる。ある実施例において、クロマトグラフ分析は高速液体クロマトグラフィ（HPLC）である。一般に、本発明における薬草組成物は、有機溶媒のメタノールを用いて抽出される。そして、周知の従来技術の手順に従って、ペオニフロリン標準品を用いてHPLCを行った。
【００２４】
ピーク１，８，９及び１２の相対ピーク領域幅は、ペオニフロリンと比較した場合、夫々０．２５から０．８９、０．６９から１．５、０．３から０．８５、及び１．５６から３．０６である。
【００２５】
ピーク１から１２の相対保持時間幅は、ペオニフロリンと比較した場合、それぞれ０．２０９から０．３１４、０．４５６から０．６８３、０．７３３から０．９９９、０．８７１から１．３０６、０．９２１から１．３８２、０．９６８から１．４５１、１．００９から１．５１４、１．０５８から１．５８７、１．１５２から１．７２８、１．６９から２．５３６、１．７７１から２．６５７、及び１．９４３から２．９１５である。
【００２６】
本発明の薬草組成物はペオニフロリン及びペオノールをさらに含む。ある実施例において、ペオニフロリンは１．２６〜１．９０％で存在し、ペオノールは０．７１〜１．０７％で存在する。
【００２７】
本発明はまた、本明細書中に記載の薬草組成物からなる医薬組成物及び薬学的に許容可能な担体も提供する。一般に、標準的な手順に従って、薬草組成物は錠剤、カプセル、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される。
【００２８】
本発明に従って用いられる医薬組成物は、医薬品賦形剤或いは担体を含んでもよい。本明細書に用いられるように、「医薬的に許容可能な担体」という言葉は、非毒性、不活性固体、半固体或いは液体の充填剤、希釈剤、封入材料或いは製剤を意味する。医薬的に許容可能な担体とすることが可能な材料の代表例は、乳糖、ブドウ糖、及び白糖等の糖類、コーンスターチ及びジャガイモでんぷん等のでんぷん、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース等のセルロース及びその派生物、麦芽、ゼラチン、タルク、ココアバター及び座薬ワックス等の賦形剤、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ごま油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油等の油、プロピレングリコール等のグリコール、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル等のエステル、寒天、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤、純水、等張食塩水、リンガー溶液、エチルアルコール、及びリン酸緩衝液である。またこれらと同様に、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム等のその他の非毒性の相溶性のある潤滑剤、また同様に、着色剤、コーティング剤、甘味料、調味料及び香味料、保存料及び酸化防止剤もまた、薬草組成物の使用に関連する組成物中に存在することが可能である。
【００２９】
本発明はまた、病気及び障害を有する患者の治療方法を提供するものである。この方法は患者に本明細書に開示された有効量の薬草組成物を投与するステップを含む。薬剤或いは組成物の「有効量」とは、所望の生物学的反応を導くのに必要な量のことを言う。薬草あるいは薬草剤の有効成分の有効量は、特定の兆候及び／又は症状を減少させるのに必要な量である。通常の技術を有するものは、従来の方法及び技術を用いて本発明の薬草組成物の有効量を容易に想到することが可能である。
【００３０】
本発明の薬草組成物は様々な種類の病気或いは障害を治療するのに用いられる。多数の応用については、米国特許第7,052,700号明細書の中で論じられている。例えば、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルは、初期或いは続発性の月経困難症、子宮内膜の剥脱不全が原因となる不正子宮出血、炎症性の下腹部の腫瘤或いは小さい子宮壁内筋腫に伴う慢性骨盤炎症、及びその他多数の一般の骨盤障害を治療するのに用いられる。さらなる医薬的研究として、本発明の薬草組成物を用いた臨床研究と同様に前臨床研究が、米国特許第7,052,700号明細書に記載の通り行われることも可能である。
【００３１】
好適には、本発明の独創的な医薬的組成物は、経口投与も可能である。他の実施例において、医薬的組成物は、例えば吸入或いは注射によって、粘膜へと運搬される。一般に、本発明の独創的な医薬的組成物は、ヒト及び／又は他の動物へ経口で、直腸に、嚢内に、非経口で、膣経口で、腹腔内に、局所に（粉末、軟膏、或いはドロップとして）、頬内に、経口噴霧剤或いは鼻内噴霧剤として投与することができる。
【００３２】
本明細書中で記述されてきた本発明は、以下に続く実施例を参照することによりさらに容易に理解することが可能である。この実施例は本発明の特定の態様及び実施例を説明する目的にのみ含められ、本発明を限定することを意図したものではない。
【００３３】
＜実施例１＞ Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセル
本実施例は、カプセルの形状をしたCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）（Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセル）からなる薬草組成物を提供するものである。Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの製造方法は、米国特許第7,052,700号明細書に開示されており、参照することにより本明細書に組み込むものとする。Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルは、黄色がかった茶色の顆粒を含有しており、その味は僅かに苦味を有する。ある実施例において、この顆粒０．３１ｇを含有する各カプセルは、室温で２４ヶ月保存可能である。
【００３４】
ある実施例において、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルは、下記の手順により製造されてもよい。
【００３５】
＜技術的要件＞
（１）Poria（ブクリョウ）の微粉末は１００メッシュの目（内径１５０±６．６μｍ）の篩にかけられる必要がある。
【００３６】
（２）粗製ペオノールの濃度は９０％以下とすること。
【００３７】
（３）濃縮は真空条件下において行われること。
【００３８】
（４）揮発性物質は桂皮アルデヒドの存在下で試験されること。
【００３９】
（５）材料の質量平衡は±５であること。
【００４０】
＜品質管理＞
クリーム状の抽出物：クリーム状の抽出物はこげ茶色である。その相対密度は１．１５〜１．３５（６０〜７０度）でなくてはならない。ペオニフロリンの含有量は１．３６〜２．０４でなくてはならない。
【００４１】
Poria cocos（ブクリョウ）を混合した後の柔らかい粉：黄色がかった茶色であって、僅かに苦味を有する。微生物の上限：多数のバクテリアは５０００数／ｇを超えない。菌類は１００数／ｇを超えない。生きているコナダニ、コナダニの卵或いは大腸菌は検出されない。ペオニフロリンの含有量は（１．２３〜１．８７）である。
【００４２】
最終的な顆粒：黄色がかった茶色で、水分含量は６．０％以下である。
【００４３】
カプセル：無菌で、粘着性を有さない、或いは形が損傷していない。含有量の差異は±１０％以下（０．３１ｇ／カプセル）でなければならない。溶解時間は３０分以内である。水分含量は７．０％以下である。ペオニフロリンの含有量は１．２６〜１．９０％、またペオノールの含有量は０．７１〜１．０７％である。
【００４４】
＜実施例２＞ Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルのフィンガープリント法
試験はHPLC方法（中国薬局方２０００年編集、第１巻、別表６ Ｄ）およびフィンガープリント法の条件に従って実施された。
【００４５】
＜HPLC条件及びシステム適合性＞
Agilent1100液体クロマトグラフ（Alltima C18 ５μｍ、２５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍカラム）を用いる。移動相Ａは０．１％のリン酸と５％のアセトニトリル水溶液を含有する。移動相Ｂは０．１％のリン酸と５０％のアセトニトリル水溶液を含有する。流量１ｍｌ／分。検出波長２３０ｎｍ。ペオニフロリンのピークに基づき、カラムの理論段数は６０００以下である。顆粒溶出プログラムは以下の通り実施される。
【００４６】
＜標準溶液の調製＞
一定量のペオニフロリン標準品の重量を正確に量る。そして、適切な量のメタノールを加え、５０μｇ／ｍｌの溶液を作る。
【００４７】
＜試料調製＞
試料の含有物を取り出し、重量偏差試験法を行った。十分に混合させ、すりつぶして微粉末にする。混合物約０．２５ｇを正確に量り、５０％のメタノールを２５ｍｌ加える。混合物を３０分間超音波で分解し、そしてろ過する。ろ液の最初の部分を捨てる。残りのろ液を試液として集める。
【００４８】
＜分析＞
標準溶液及び試液それぞれ１０μｌをHPLCシステムに注入し、手順を進める。
【００４９】
＜結果＞
図１及び表１に示されるように、１３のピーク（１から１２番及び標準（standard）のS）が検出された。そして、相対保持時間幅が特定された。さらに、ピーク１、８、９及び１２は、相対ピーク領域（表１）の幅に対し特異的であった。このような特異性は、HPLCの複合解析に基づくものである。このHPLCは、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の組成物の様々なバッチからなるものである。
【００５０】
本明細書に示す結果により、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の組成物のいかなるバッチのHPLCクロマトグラムも、１３の特有のピークを有する。１３のピークの相対保持時間、及びピーク１，８，９及び１２の相対ピーク領域は、特定の範囲内にある。このような調整を通じ、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の再生産性及び内部品質は調整され、確実なものとなる。Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の１０の異なるバッチからなるHPLCデータは、本明細書に示されるようなフィンガープリント分析結果を示すことが確認された。
【００５１】
【表１】
【００５２】
本明細書に示されるフィンガープリント分析結果は、米国特許第7,052,700号明細書に示されるものとは異なる。米国特許第7,052,700号明細書において、HPLCの水性試料は還流抽出法により調製された。３つのCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の含有物は、２００ｍｌの蒸留水と混合され、30分間(開始時において沸騰している状態)熱還流された。溶液は冷却され、１０分間遠心分離され、０．４５μｍろ過膜でろ過された。ろ液の最初の部分は捨てられ、残りのろ液は試液として取り出された。結果として、米国特許第7,052,700号明細書では４つのクロマトグラムが示された。すなわち、１つは水溶性の成分、２つは脂溶性の成分（異なるクロマトグラフ条件及び検出波長の脂溶性の成分）、そしてもう１つはガスクロマトグラフィである。最初の３つのクロマトグラムは低い生産性を示し、互いに重複しあういくつかのピークを有している。
【００５３】
本発明において、この処理方法は、試料を抽出するのに５０％メタノールを用いるよう変更されている。重量偏差試験法に用いる試料の含有物は十分に混合され、すりつぶして微粉末にされる。メタノール２５ｍｌがこの混合物０．２５ｇに加えられる。そして、３０分間超音波で分解し、そしてろ過される。ろ液の最初の部分を捨て、そして残りのろ液を試液として集める。５０％メタノールの抽出はより多くのピークを示す結果となり、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルのより多くの組成物を明らかにするだけでなく、製品中の脂溶性及び揮発性成分をも示した。したがって、現在の方法は１つのクロマトグラムのみ生成する。このクロマトグラムは他の品質管理作業と共に用いられ、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの品質を制御する。
【００５４】
ゆえに、これら２つの方法の差異は以下の通りである。前者の還流抽出法の方法は、主に水溶性の成分を抽出する。クロマトグラム中の主なピークは製品中の水溶性の成分である。これとは対照に、本発明の方法は５０％メタノールを、揮発性成分ペオノールと同様に、より多くの水溶性成分、脂溶性成分を抽出する抽出溶媒として用いる。また、これらの化合物は１つのクロマトグラムにおいて示される。このクロマトグラムは同等の試料量に基づき、より高いペオノールのピークを示す。
【００５５】
＜実施例３＞Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルにおけるフィンガープリントの特異性、再生産性及び安定性
伝統的な漢方薬のフィンガープリントに用いられる評価パラメータは、通常、標準品に対する保持時間及び特徴的なピークの比率である。各ピークにおける相対保持時間及び相対ピーク領域は、フィンガープリントの特性解析に用いられる。標準のフィンガープリントにおいて、特徴を有するピークの相対保持時間及び相対ピーク領域が特定される。
【００５６】
このような評価パラメータは、差異によって起こる変化を排除することができる。この差異とは器具、カラム、移動相及び環境において存在するものであり、保持時間及びピーク領域を変化させる。したがって、これらのパラメータは、客観的及び包括的に用いられ、製品中の抗生物質の実際の状態及び製品の内部品質の実際の状態を示すことができる。
【００５７】
＜特異性＞
本明細書に示されるフィンガープリント特性は、本発明のCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルに特有のものである。フィンガープリントの特徴的なピークにより、開示された製造方法により製造されるCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの全てのバッチの構成物質が明らかになる。
【００５８】
＜再生産性＞
現在のフィンガープリントの基準は分析条件及び様々なバッチより収集されたデータを最適化したものより生じたものである。同じバッチの分析を繰り返し行うことにより得られた結果は、１０の異なるバッチ（表２から３）から得られたデータと同様に、現在の方法は、優れた再生産性を有するCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルを正確にフィンガープリントすることができることを示している。この結果はまた、構成物質の含有物は異なるバッチ、そして特定の幅にある全ての特徴的なピークの相対保持時間及び相対ピーク領域において同様であることを示す。
【００５９】
＜安定性＞
連続した３つのバッチのフィンガープリントは、０から１２ヶ月研究された。１２ヶ月で、特徴的なピークの明らかな変化は認められないという結果が示された。また、製品の品質の安定性と同様に、フィンガープリント分析方法（表４から６）の安定性も明らかにされた。
【００６０】
【表２】
【００６１】
【表３】
【００６２】
【表４】
【００６３】
【表５】
【００６４】
【表６】
【図面の簡単な説明】
【００６５】
図１は、本明細書中に記載のCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの組成物のHPLCフィンガープリントを示す。
【図１】
【技術分野】
【０００１】
この出願は2006年10月18日出願の米国仮特許出願番号第60/829,945号の優先権を主張するものである。前述の出願の全体の内容及び開示は、参照することにより本出願に組み込まれるものとする。
【背景技術】
【０００２】
本発明は中国の漢方薬Ramulus cinnamomi（中国名:桂枝）及びPoria cocos（中国名：茯苓）からなる組成物の製造方法及び使用法に関するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
伝統的な漢方薬において、身体調整治療を行うのに薬草製剤が用いられている。時には、薬草単独或いは薬草由来物が用いられる。しかし、より一般的には、「製剤」、或いは様々な特殊な薬草の特定の組み合わせが投与されている。以下の５つの薬草材料は、伝統的な漢方医学において2000年以上も利用されているものである。これらの薬草材料は様々な歴史的漢方医学書に記録されており、また、現代の科学雑誌に掲載されている様々な論文に引用されている。
【０００４】
ケイシは、Cinnamomum cassia Presl（カシア）（クスノキ科）の若い茎を乾燥させたものである。この植物は春或いは夏に採取される。採取後は天日で乾燥させ、葉を取り除く。また、ケイシは薄切りにしてもよい。この製剤は円筒状で、多数の枝を有し、長さ３０から７５ｃｍで、直径が０．３から１ｃｍの先端部を有する。表面は茶色或いは赤茶色で、縦走線、細かい縮緬皺を有し、葉、枝或いは出芽痕に斑点がある。ケイシは堅くて脆く、壊れやすい。薄切りの場合には、厚さを２から４ｍｍにする。その切り口は、樹皮部は赤茶色を示し、木部は黄白色から淡黄茶色を示す。ケイシは独特の芳香を有し、甘み或いは僅かな辛味を有する（特に樹皮部）。この製剤は混じりけのない小片であり、目に見える混入物を有さない。Cinnamomi（ケイシ）の重要な含有物は桂皮アルデヒド或いは桂皮酸である。
【０００５】
ブクリョウ（Indian Bread）は菌類の菌核粒子を乾燥させたPoria cocos（ブクリョウ）（サルノコシカケ科）である。この植物は６月から９月にかけて採取される。採取後は、積み重ねて空気乾燥させ、これを表面に縮緬皺が表れ内部の水分が蒸発するまで繰り返す。完全に乾燥した菌核粒子は「Fulingge」として知られる。乾燥させていない菌核粒子の皮を乾燥前に剥いた場合、分離した部分は「Fulingpi（皮）」及び「Fulingkuai（身）」と呼ばれる。
【０００６】
ブクリョウ（Indian Bread）は厚みがありごつごつした茶色から黒褐色の外皮を有する。また、際立ってしなびて筋を有する外皮である。その組織は堅く、圧縮されている。ブクリョウ（Indian Bread）は無臭で、味はほとんどなく、噛むと粘着性が生じる。この製剤はPoria（ブクリョウ）の混じりけのない小片で、目に見える含有物を有さない。ブクリョウ（Indian Bread）の重要な有効成分はパキマン及びブクリョウ酸である。
【０００７】
多数の米国特許及び文献が、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）等との薬草から治療薬組成物を組成する方法について教示している。多数の中国出身の研究者達が、特定の、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の組成物を用いた動物研究或いは臨床研究についての報告をしている。
【０００８】
米国特許番号第6,093,403号明細書において、２０重量％までのPoria（ブクリョウ）抽出物を含有する処方が、疾患の治療或いは予防に用いられている。疾患とは例えば、糖分のバランスにおける疾患、糖尿病、及び狭心症等の血液循環の病気が挙げられる。
【０００９】
Poria cocos wolf（ブクリョウ）は、心疾患、脳血管疾患、アルツハイマー及びうつ病の治療に用いられている。２０重量％までのPoria cocos wolf（ブクリョウ）を含有する組成物は、米国特許第5,589,182号明細書に開示されている。
【００１０】
He他は1994年に、婦人病の１００の症例における、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）組成物の臨床研究に関する論文を出版した。この婦人病とは、子宮内膜の剥脱不全が原因となる不正子宮出血、慢性的骨盤炎症、月経困難症及び小さい子宮壁内筋腫である。他の製剤（Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のボーラス：BCP）の治療を受けた患者の５０の症例と比較すると、苦痛を訴える複数の症状及び身体的症状は、２つの群の間で大きな差異は現れなかった。
【００１１】
Shi他は2000年に、子宮筋腫の患者６０人における、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）組成物の治療効果について報告した。患者は婦人科の健康診断、超音波診断及びヘマトクロームの検査を受けた。Shiの研究によると、有効率は９１．７％であると報告された。またそのうちの症例の１０％に大きな改善が見られた。治療の効果は以下のように定義された。すなわち、腫瘍が３から５ｃｍ縮小し、増加した月経の量が５０％以上減少した場合は「大きな改善あり」とされた。或いは、腫瘍が２から３ｃｍ縮小し、月経の量が２５％以上減少した場合は「改善あり」とされた。
【００１２】
本発明は、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）からなる薬草の組成物を提供するものである。この薬草の組成物は、上記のような多数の病気の症状を和らげるのに効果的である。漢方医学におけるより伝統的な慣習と対照的に、本発明は最新技術で創出されるものである。この最新技術は、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の有効成分をよりよい状態で保存することが可能である。
【００１３】
本出願を通して、様々な出版物が参照され、これらの出版物の引用は請求の範囲に先行する明細書の最後の引例内において見られる。これらの出版物の開示は、参照することにより本出願に含まれることとする。これにより、本明細書に記述され主張される発明の日付において、当業者にとって周知である最新技術がさらに十分に記述されることとなる。
【００１４】
本発明は中国の漢方薬Ramulus cinnamomi（中国名:桂枝）及びPoria cocos（中国名：茯苓）からなる組成物を提供するものである。ある実施例において、この漢方薬はカプセルとして処方される。これは米国特許第7,052,700号明細書において述べられており、参照することにより本明細書に組み込まれることとする。
【００１５】
本発明の薬草組成物は、12のピークを表示するHPLC（高速液体クロマトグラフィ）フィンガープリントにより定義される。メタノールを用いて薬草組成物を抽出し、標準品としてのペオニフロリンに対し分析をした。１２のピークは以下の特性を有する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
ある実施例において、本発明はRamulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる薬草組成物であって、（ａ）適切な有機溶媒を用いて組成物を抽出するステップ、（ｂ）クロマトグラフ分析を行うステップからなる方法にしたがう時、前記組成物が１２のピークを作り出す。ピーク１から１２の相対保持時間幅は、ペオニフロリンと比較した場合、それぞれ０．２０９から０．３１４、０．４５６から０．６８３、０．７３３から０．９９９、０．８７１から１．３０６、０．９２１から１．３８２、０．９６８から１．４５１、１．００９から１．５１４、１．０５８から１．５８７、１．１５２から１．７２８、１．６９から２．５３６、１．７７１から２．６５７、及び１．９４３から２．９１５である
【００１７】
他の実施例において、本発明はペオニフロリン及びペオノールをさらに含む。好適には、ペオニフロリンは１．２６〜１．９０％で存在し、ペオノールは０．７１〜１．０７％で存在する。
【００１８】
他の実施例において、本発明は、（ａ）Poria（ブクリョウ）の粉末を調製するステップ、（ｂ）Cortex moutan（牡丹皮）の抽出物を調製するステップ、（ｃ）Ramulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物を調製するステップ、（ｄ）Radix paeoniae alba（シャクヤク）、Semen persicae（トウニン）及びPoria（ブクリョウ）の抽出物を調製するステップ、（ｅ）ステップ（ｂ）から（ｄ）で得られた抽出物を合わせるステップ、（ｆ）Poria（ブクリョウ）の粉末をステップ（ｅ）で得られた抽出物と混合させ、微粉末にするステップ、及び（ｇ）前記微粉末をCortex moutan（牡丹皮）及びRamulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物からなる含有物質と混合させるステップからなる方法により製造される組成物を提供する。
【００１９】
また、本発明は、（ａ）Poria（ブクリョウ）の粉を調製するステップ、（ｂ）Cortex moutan（牡丹皮）の抽出物を調製するステップ、（ｃ）Ramulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物を調製するステップ、（ｄ）Radix paeoniae alba（シャクヤク）、Semen persicae（トウニン）及びPoria（ブクリョウ）の抽出物を調製するステップ、（ｅ）ステップ（ｂ）から（ｄ）で得られた抽出物を合わせるステップ、（ｆ）Poria（ブクリョウ）の粉をステップ（ｅ）で得られた抽出物と混合させ、微粉末にするステップ、及び（ｇ）前記微粉末をCortex moutan（牡丹皮）及びRamulus cinnamomi（ケイシ）の抽出物からなる含有物質と混合させるステップからなる方法により製造されるRamulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる組成物の製造方法を提供する。
【００２０】
本発明はまた、医薬的に許容可能な担体及び本明細書中に記載の薬草組成物からなる医薬組成物も提供する。
【００２１】
本発明はまた、初期の月経困難症、続発性の月経困難症、不正子宮出血、慢性骨盤炎症、及び小さい子宮壁内筋腫といった病気或いは障害の治療のための薬剤の製造における本明細書中に記載の組成物の使用法も提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は中国の漢方薬の柱枝及び茯苓（Ramulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ））からなる組成物を提供する。ある実施例において、薬草組成物はカプセル状で処方される。これは米国特許第7,052,700号明細書に記載されており、この開示を参照することにより本発明に組み込むこととする。
【００２３】
ある実施形態において、本発明はRamulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）からなる薬草組成物を提供し、前記薬草組成物は、１２のピークのフィンガープリント（図１）により定義され、このフィンガープリントは、適切な有機溶媒を用いて組成物を抽出するステップ及びクロマトグラフ分析を行うステップからなるフィンガープリント法により得られる。ある実施例において、クロマトグラフ分析は高速液体クロマトグラフィ（HPLC）である。一般に、本発明における薬草組成物は、有機溶媒のメタノールを用いて抽出される。そして、周知の従来技術の手順に従って、ペオニフロリン標準品を用いてHPLCを行った。
【００２４】
ピーク１，８，９及び１２の相対ピーク領域幅は、ペオニフロリンと比較した場合、夫々０．２５から０．８９、０．６９から１．５、０．３から０．８５、及び１．５６から３．０６である。
【００２５】
ピーク１から１２の相対保持時間幅は、ペオニフロリンと比較した場合、それぞれ０．２０９から０．３１４、０．４５６から０．６８３、０．７３３から０．９９９、０．８７１から１．３０６、０．９２１から１．３８２、０．９６８から１．４５１、１．００９から１．５１４、１．０５８から１．５８７、１．１５２から１．７２８、１．６９から２．５３６、１．７７１から２．６５７、及び１．９４３から２．９１５である。
【００２６】
本発明の薬草組成物はペオニフロリン及びペオノールをさらに含む。ある実施例において、ペオニフロリンは１．２６〜１．９０％で存在し、ペオノールは０．７１〜１．０７％で存在する。
【００２７】
本発明はまた、本明細書中に記載の薬草組成物からなる医薬組成物及び薬学的に許容可能な担体も提供する。一般に、標準的な手順に従って、薬草組成物は錠剤、カプセル、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される。
【００２８】
本発明に従って用いられる医薬組成物は、医薬品賦形剤或いは担体を含んでもよい。本明細書に用いられるように、「医薬的に許容可能な担体」という言葉は、非毒性、不活性固体、半固体或いは液体の充填剤、希釈剤、封入材料或いは製剤を意味する。医薬的に許容可能な担体とすることが可能な材料の代表例は、乳糖、ブドウ糖、及び白糖等の糖類、コーンスターチ及びジャガイモでんぷん等のでんぷん、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース等のセルロース及びその派生物、麦芽、ゼラチン、タルク、ココアバター及び座薬ワックス等の賦形剤、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ごま油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油等の油、プロピレングリコール等のグリコール、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル等のエステル、寒天、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤、純水、等張食塩水、リンガー溶液、エチルアルコール、及びリン酸緩衝液である。またこれらと同様に、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム等のその他の非毒性の相溶性のある潤滑剤、また同様に、着色剤、コーティング剤、甘味料、調味料及び香味料、保存料及び酸化防止剤もまた、薬草組成物の使用に関連する組成物中に存在することが可能である。
【００２９】
本発明はまた、病気及び障害を有する患者の治療方法を提供するものである。この方法は患者に本明細書に開示された有効量の薬草組成物を投与するステップを含む。薬剤或いは組成物の「有効量」とは、所望の生物学的反応を導くのに必要な量のことを言う。薬草あるいは薬草剤の有効成分の有効量は、特定の兆候及び／又は症状を減少させるのに必要な量である。通常の技術を有するものは、従来の方法及び技術を用いて本発明の薬草組成物の有効量を容易に想到することが可能である。
【００３０】
本発明の薬草組成物は様々な種類の病気或いは障害を治療するのに用いられる。多数の応用については、米国特許第7,052,700号明細書の中で論じられている。例えば、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルは、初期或いは続発性の月経困難症、子宮内膜の剥脱不全が原因となる不正子宮出血、炎症性の下腹部の腫瘤或いは小さい子宮壁内筋腫に伴う慢性骨盤炎症、及びその他多数の一般の骨盤障害を治療するのに用いられる。さらなる医薬的研究として、本発明の薬草組成物を用いた臨床研究と同様に前臨床研究が、米国特許第7,052,700号明細書に記載の通り行われることも可能である。
【００３１】
好適には、本発明の独創的な医薬的組成物は、経口投与も可能である。他の実施例において、医薬的組成物は、例えば吸入或いは注射によって、粘膜へと運搬される。一般に、本発明の独創的な医薬的組成物は、ヒト及び／又は他の動物へ経口で、直腸に、嚢内に、非経口で、膣経口で、腹腔内に、局所に（粉末、軟膏、或いはドロップとして）、頬内に、経口噴霧剤或いは鼻内噴霧剤として投与することができる。
【００３２】
本明細書中で記述されてきた本発明は、以下に続く実施例を参照することによりさらに容易に理解することが可能である。この実施例は本発明の特定の態様及び実施例を説明する目的にのみ含められ、本発明を限定することを意図したものではない。
【００３３】
＜実施例１＞ Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセル
本実施例は、カプセルの形状をしたCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）（Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセル）からなる薬草組成物を提供するものである。Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの製造方法は、米国特許第7,052,700号明細書に開示されており、参照することにより本明細書に組み込むものとする。Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルは、黄色がかった茶色の顆粒を含有しており、その味は僅かに苦味を有する。ある実施例において、この顆粒０．３１ｇを含有する各カプセルは、室温で２４ヶ月保存可能である。
【００３４】
ある実施例において、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルは、下記の手順により製造されてもよい。
【００３５】
＜技術的要件＞
（１）Poria（ブクリョウ）の微粉末は１００メッシュの目（内径１５０±６．６μｍ）の篩にかけられる必要がある。
【００３６】
（２）粗製ペオノールの濃度は９０％以下とすること。
【００３７】
（３）濃縮は真空条件下において行われること。
【００３８】
（４）揮発性物質は桂皮アルデヒドの存在下で試験されること。
【００３９】
（５）材料の質量平衡は±５であること。
【００４０】
＜品質管理＞
クリーム状の抽出物：クリーム状の抽出物はこげ茶色である。その相対密度は１．１５〜１．３５（６０〜７０度）でなくてはならない。ペオニフロリンの含有量は１．３６〜２．０４でなくてはならない。
【００４１】
Poria cocos（ブクリョウ）を混合した後の柔らかい粉：黄色がかった茶色であって、僅かに苦味を有する。微生物の上限：多数のバクテリアは５０００数／ｇを超えない。菌類は１００数／ｇを超えない。生きているコナダニ、コナダニの卵或いは大腸菌は検出されない。ペオニフロリンの含有量は（１．２３〜１．８７）である。
【００４２】
最終的な顆粒：黄色がかった茶色で、水分含量は６．０％以下である。
【００４３】
カプセル：無菌で、粘着性を有さない、或いは形が損傷していない。含有量の差異は±１０％以下（０．３１ｇ／カプセル）でなければならない。溶解時間は３０分以内である。水分含量は７．０％以下である。ペオニフロリンの含有量は１．２６〜１．９０％、またペオノールの含有量は０．７１〜１．０７％である。
【００４４】
＜実施例２＞ Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルのフィンガープリント法
試験はHPLC方法（中国薬局方２０００年編集、第１巻、別表６ Ｄ）およびフィンガープリント法の条件に従って実施された。
【００４５】
＜HPLC条件及びシステム適合性＞
Agilent1100液体クロマトグラフ（Alltima C18 ５μｍ、２５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍカラム）を用いる。移動相Ａは０．１％のリン酸と５％のアセトニトリル水溶液を含有する。移動相Ｂは０．１％のリン酸と５０％のアセトニトリル水溶液を含有する。流量１ｍｌ／分。検出波長２３０ｎｍ。ペオニフロリンのピークに基づき、カラムの理論段数は６０００以下である。顆粒溶出プログラムは以下の通り実施される。
【００４６】
＜標準溶液の調製＞
一定量のペオニフロリン標準品の重量を正確に量る。そして、適切な量のメタノールを加え、５０μｇ／ｍｌの溶液を作る。
【００４７】
＜試料調製＞
試料の含有物を取り出し、重量偏差試験法を行った。十分に混合させ、すりつぶして微粉末にする。混合物約０．２５ｇを正確に量り、５０％のメタノールを２５ｍｌ加える。混合物を３０分間超音波で分解し、そしてろ過する。ろ液の最初の部分を捨てる。残りのろ液を試液として集める。
【００４８】
＜分析＞
標準溶液及び試液それぞれ１０μｌをHPLCシステムに注入し、手順を進める。
【００４９】
＜結果＞
図１及び表１に示されるように、１３のピーク（１から１２番及び標準（standard）のS）が検出された。そして、相対保持時間幅が特定された。さらに、ピーク１、８、９及び１２は、相対ピーク領域（表１）の幅に対し特異的であった。このような特異性は、HPLCの複合解析に基づくものである。このHPLCは、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の組成物の様々なバッチからなるものである。
【００５０】
本明細書に示す結果により、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の組成物のいかなるバッチのHPLCクロマトグラムも、１３の特有のピークを有する。１３のピークの相対保持時間、及びピーク１，８，９及び１２の相対ピーク領域は、特定の範囲内にある。このような調整を通じ、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の再生産性及び内部品質は調整され、確実なものとなる。Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の１０の異なるバッチからなるHPLCデータは、本明細書に示されるようなフィンガープリント分析結果を示すことが確認された。
【００５１】
【表１】
【００５２】
本明細書に示されるフィンガープリント分析結果は、米国特許第7,052,700号明細書に示されるものとは異なる。米国特許第7,052,700号明細書において、HPLCの水性試料は還流抽出法により調製された。３つのCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）の含有物は、２００ｍｌの蒸留水と混合され、30分間(開始時において沸騰している状態)熱還流された。溶液は冷却され、１０分間遠心分離され、０．４５μｍろ過膜でろ過された。ろ液の最初の部分は捨てられ、残りのろ液は試液として取り出された。結果として、米国特許第7,052,700号明細書では４つのクロマトグラムが示された。すなわち、１つは水溶性の成分、２つは脂溶性の成分（異なるクロマトグラフ条件及び検出波長の脂溶性の成分）、そしてもう１つはガスクロマトグラフィである。最初の３つのクロマトグラムは低い生産性を示し、互いに重複しあういくつかのピークを有している。
【００５３】
本発明において、この処理方法は、試料を抽出するのに５０％メタノールを用いるよう変更されている。重量偏差試験法に用いる試料の含有物は十分に混合され、すりつぶして微粉末にされる。メタノール２５ｍｌがこの混合物０．２５ｇに加えられる。そして、３０分間超音波で分解し、そしてろ過される。ろ液の最初の部分を捨て、そして残りのろ液を試液として集める。５０％メタノールの抽出はより多くのピークを示す結果となり、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルのより多くの組成物を明らかにするだけでなく、製品中の脂溶性及び揮発性成分をも示した。したがって、現在の方法は１つのクロマトグラムのみ生成する。このクロマトグラムは他の品質管理作業と共に用いられ、Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの品質を制御する。
【００５４】
ゆえに、これら２つの方法の差異は以下の通りである。前者の還流抽出法の方法は、主に水溶性の成分を抽出する。クロマトグラム中の主なピークは製品中の水溶性の成分である。これとは対照に、本発明の方法は５０％メタノールを、揮発性成分ペオノールと同様に、より多くの水溶性成分、脂溶性成分を抽出する抽出溶媒として用いる。また、これらの化合物は１つのクロマトグラムにおいて示される。このクロマトグラムは同等の試料量に基づき、より高いペオノールのピークを示す。
【００５５】
＜実施例３＞Cinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルにおけるフィンガープリントの特異性、再生産性及び安定性
伝統的な漢方薬のフィンガープリントに用いられる評価パラメータは、通常、標準品に対する保持時間及び特徴的なピークの比率である。各ピークにおける相対保持時間及び相対ピーク領域は、フィンガープリントの特性解析に用いられる。標準のフィンガープリントにおいて、特徴を有するピークの相対保持時間及び相対ピーク領域が特定される。
【００５６】
このような評価パラメータは、差異によって起こる変化を排除することができる。この差異とは器具、カラム、移動相及び環境において存在するものであり、保持時間及びピーク領域を変化させる。したがって、これらのパラメータは、客観的及び包括的に用いられ、製品中の抗生物質の実際の状態及び製品の内部品質の実際の状態を示すことができる。
【００５７】
＜特異性＞
本明細書に示されるフィンガープリント特性は、本発明のCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルに特有のものである。フィンガープリントの特徴的なピークにより、開示された製造方法により製造されるCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの全てのバッチの構成物質が明らかになる。
【００５８】
＜再生産性＞
現在のフィンガープリントの基準は分析条件及び様々なバッチより収集されたデータを最適化したものより生じたものである。同じバッチの分析を繰り返し行うことにより得られた結果は、１０の異なるバッチ（表２から３）から得られたデータと同様に、現在の方法は、優れた再生産性を有するCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルを正確にフィンガープリントすることができることを示している。この結果はまた、構成物質の含有物は異なるバッチ、そして特定の幅にある全ての特徴的なピークの相対保持時間及び相対ピーク領域において同様であることを示す。
【００５９】
＜安定性＞
連続した３つのバッチのフィンガープリントは、０から１２ヶ月研究された。１２ヶ月で、特徴的なピークの明らかな変化は認められないという結果が示された。また、製品の品質の安定性と同様に、フィンガープリント分析方法（表４から６）の安定性も明らかにされた。
【００６０】
【表２】
【００６１】
【表３】
【００６２】
【表４】
【００６３】
【表５】
【００６４】
【表６】
【図面の簡単な説明】
【００６５】
図１は、本明細書中に記載のCinnamomi（ケイシ）及びPoria（ブクリョウ）のカプセルの組成物のHPLCフィンガープリントを示す。
【図１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ramulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）の組成物からなる顆粒を準備する方法であって、前記方法は、
（ａ）Poria（ブクリョウ）をすりつぶし微粉末にしPoria（ブクリョウ）の粉を得るステップと、
（ｂ）蒸気蒸留によりCortex moutan（牡丹皮）を抽出しペオノール抽出物を得るステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）より抽出した原料を、エタノールを用いて抽出して抽出物Ｉを得、そして前記原料を再び熱湯で抽出して抽出物ＩＩを得るステップと、
（ｄ）蒸気蒸留によりRamulus cinnamomi（ケイシ）を抽出し精油を得るステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）より抽出した原料を、エタノールを用いて抽出して抽出物ＩＩＩを得、そして前記原料を再び熱湯で抽出して抽出物ＩＶを得るステップと、
（ｆ）Radix paeoniae alba（シャクヤク）、Semen persicae（トウニン）及びPoria（ブクリョウ）を抽出し抽出物Ｖを得、そして熱湯で抽出し抽出物ＶＩを抽出するステップと、
（ｇ）抽出物Ｉ、ＩＩＩ、及びＶを合わせ、全てのエタノールを除去し液体Ａを得るステップと、
（ｈ）抽出物ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩを合わせ、合わせた抽出物を濃縮し液体Ｂを得るステップと、
（ｉ）液体Ａ及び液体Ｂを合わせ、前記液体を濃縮し、相対密度が１．１５から１．３５（６０から９０度）に等しい半固体抽出物を得るステップと、
（ｊ）ステップ（ｂ）のペオノール抽出物をエタノールに溶解し、前記溶液をβ-シクロデキストリン水溶液に加え、前記混合物がすりつぶされ乾燥されることにより含有物質Ｉを得るステップと、
（ｋ）ステップ（ｄ）の精油をβ-シクロデキストリンとエタノール中で混合し、前記混合物がすりつぶされ乾燥されることにより含有物質ＩＩを得るステップと、
（ｌ）ステップ（ａ）のPoria（ブクリョウ）の粉をステップ（ｉ）の半固体抽出物と混合し、前記混合物がすりつぶされ乾燥され微粉末になるステップと、
（ｍ）ステップ（ｌ）の微粉末を含有物質Ｉ及びＩＩと混合し、エタノールを加え練り粉状の塊を作り、及び湿潤材料を篩にかけ顆粒を得るステップと、及び、
（ｎ）前記顆粒を乾燥させ、乾燥顆粒を再度篩にかけ、Ramulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria Cocos（ブクリョウ）の最終の顆粒を得るステップからなることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記組成物はペオニフロリン及びペオノールをさらに含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ペオニフロリンは１．２６〜１．９０％で存在し、前記ペオノールは０．７１〜１．０７％で存在することを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記組成物は錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方されることを特徴とする請求項１乃至３いずれかに記載の方法。
【請求項５】
錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される前記組成物は、以下の群から選択される病気或いは障害を治療するのに用いられ、前記病気或いは障害の群は、初期の月経困難症、続発性の月経困難症、不正子宮出血、慢性骨盤炎症、及び小さい子宮壁内筋腫からなることを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項６】
錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される前記組成物は、経口で、直腸で、非経口で、膣経口で、腹腔で、局所で投与される、或いは前記組成物は経口噴霧剤或いは鼻内噴霧剤として投与されることを特徴とする請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
請求項１記載の組成物を分析する方法であって、前記方法は、
（ａ）適切な有機溶媒を用いて組成物を抽出するステップと、
（ｂ）クロマトグラフ分析を行うステップからなり、
前記分析は１２のピークを作り出すことを特徴とする方法。
【請求項８】
前記有機溶媒はメタノールであることを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記クロマトグラフ分析において、ペオニフロリンは標準品として用いられることを特徴とする請求項７又は８記載の方法。
【請求項１０】
前記クロマトグラフ分析は高速液体クロマトグラフィ（HPLC）であることを特徴とする請求項７乃至９いずれかに記載の方法。
【請求項１１】
ピーク１，８，９及び１２の相対ピーク領域幅は、ペオニフロリンと比較した場合、夫々０．２５から０．８９、０．６９から１．５、０．３から０．８５、及び１．５６から３．０６であることを特徴とする請求項７乃至１０いずれかに記載の方法。
【請求項１２】
ピーク１から１２の相対保持時間幅は、ペオニフロリンと比較した場合、それぞれ０．２０９から０．３１４、０．４５６から０．６８３、０．７３３から０．９９９、０．８７１から１．３０６、０．９２１から１．３８２、０．９６８から１．４５１、１．００９から１．５１４、１．０５８から１．５８７、１．１５２から１．７２８、１．６９から２．５３６、１．７７１から２．６５７、及び１．９４３から２．９１５であることを特徴とする請求項７乃至１１いずれかに記載の方法。
【請求項１３】
初期の月経困難症、続発性の月経困難症、不正子宮出血、慢性骨盤炎症、及び小さい子宮壁内筋腫といった病気或いは障害の治療のための薬剤の製造における請求項１乃至３いずれかに記載の方法により製造された組成物の使用法。
【請求項１４】
前記組成物は錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される請求項１３記載の使用法。
【請求項１５】
錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される前記組成物は、経口で、直腸で、非経口で、膣経口で、腹腔で、局所で投与される、或いは前記組成物は経口噴霧剤或いは鼻内噴霧剤として投与されることを特徴とする請求項１４記載の使用法。
【請求項１】
Ramulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria cocos（ブクリョウ）の組成物からなる顆粒を準備する方法であって、前記方法は、
（ａ）Poria（ブクリョウ）をすりつぶし微粉末にしPoria（ブクリョウ）の粉を得るステップと、
（ｂ）蒸気蒸留によりCortex moutan（牡丹皮）を抽出しペオノール抽出物を得るステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）より抽出した原料を、エタノールを用いて抽出して抽出物Ｉを得、そして前記原料を再び熱湯で抽出して抽出物ＩＩを得るステップと、
（ｄ）蒸気蒸留によりRamulus cinnamomi（ケイシ）を抽出し精油を得るステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）より抽出した原料を、エタノールを用いて抽出して抽出物ＩＩＩを得、そして前記原料を再び熱湯で抽出して抽出物ＩＶを得るステップと、
（ｆ）Radix paeoniae alba（シャクヤク）、Semen persicae（トウニン）及びPoria（ブクリョウ）を抽出し抽出物Ｖを得、そして熱湯で抽出し抽出物ＶＩを抽出するステップと、
（ｇ）抽出物Ｉ、ＩＩＩ、及びＶを合わせ、全てのエタノールを除去し液体Ａを得るステップと、
（ｈ）抽出物ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩを合わせ、合わせた抽出物を濃縮し液体Ｂを得るステップと、
（ｉ）液体Ａ及び液体Ｂを合わせ、前記液体を濃縮し、相対密度が１．１５から１．３５（６０から９０度）に等しい半固体抽出物を得るステップと、
（ｊ）ステップ（ｂ）のペオノール抽出物をエタノールに溶解し、前記溶液をβ-シクロデキストリン水溶液に加え、前記混合物がすりつぶされ乾燥されることにより含有物質Ｉを得るステップと、
（ｋ）ステップ（ｄ）の精油をβ-シクロデキストリンとエタノール中で混合し、前記混合物がすりつぶされ乾燥されることにより含有物質ＩＩを得るステップと、
（ｌ）ステップ（ａ）のPoria（ブクリョウ）の粉をステップ（ｉ）の半固体抽出物と混合し、前記混合物がすりつぶされ乾燥され微粉末になるステップと、
（ｍ）ステップ（ｌ）の微粉末を含有物質Ｉ及びＩＩと混合し、エタノールを加え練り粉状の塊を作り、及び湿潤材料を篩にかけ顆粒を得るステップと、及び、
（ｎ）前記顆粒を乾燥させ、乾燥顆粒を再度篩にかけ、Ramulus cinnamomi（ケイシ）及びPoria Cocos（ブクリョウ）の最終の顆粒を得るステップからなることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記組成物はペオニフロリン及びペオノールをさらに含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ペオニフロリンは１．２６〜１．９０％で存在し、前記ペオノールは０．７１〜１．０７％で存在することを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記組成物は錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方されることを特徴とする請求項１乃至３いずれかに記載の方法。
【請求項５】
錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される前記組成物は、以下の群から選択される病気或いは障害を治療するのに用いられ、前記病気或いは障害の群は、初期の月経困難症、続発性の月経困難症、不正子宮出血、慢性骨盤炎症、及び小さい子宮壁内筋腫からなることを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項６】
錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される前記組成物は、経口で、直腸で、非経口で、膣経口で、腹腔で、局所で投与される、或いは前記組成物は経口噴霧剤或いは鼻内噴霧剤として投与されることを特徴とする請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
請求項１記載の組成物を分析する方法であって、前記方法は、
（ａ）適切な有機溶媒を用いて組成物を抽出するステップと、
（ｂ）クロマトグラフ分析を行うステップからなり、
前記分析は１２のピークを作り出すことを特徴とする方法。
【請求項８】
前記有機溶媒はメタノールであることを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記クロマトグラフ分析において、ペオニフロリンは標準品として用いられることを特徴とする請求項７又は８記載の方法。
【請求項１０】
前記クロマトグラフ分析は高速液体クロマトグラフィ（HPLC）であることを特徴とする請求項７乃至９いずれかに記載の方法。
【請求項１１】
ピーク１，８，９及び１２の相対ピーク領域幅は、ペオニフロリンと比較した場合、夫々０．２５から０．８９、０．６９から１．５、０．３から０．８５、及び１．５６から３．０６であることを特徴とする請求項７乃至１０いずれかに記載の方法。
【請求項１２】
ピーク１から１２の相対保持時間幅は、ペオニフロリンと比較した場合、それぞれ０．２０９から０．３１４、０．４５６から０．６８３、０．７３３から０．９９９、０．８７１から１．３０６、０．９２１から１．３８２、０．９６８から１．４５１、１．００９から１．５１４、１．０５８から１．５８７、１．１５２から１．７２８、１．６９から２．５３６、１．７７１から２．６５７、及び１．９４３から２．９１５であることを特徴とする請求項７乃至１１いずれかに記載の方法。
【請求項１３】
初期の月経困難症、続発性の月経困難症、不正子宮出血、慢性骨盤炎症、及び小さい子宮壁内筋腫といった病気或いは障害の治療のための薬剤の製造における請求項１乃至３いずれかに記載の方法により製造された組成物の使用法。
【請求項１４】
前記組成物は錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される請求項１３記載の使用法。
【請求項１５】
錠剤、カプセル、顆粒、タブレット、懸濁液、或いはシロップの形状で処方される前記組成物は、経口で、直腸で、非経口で、膣経口で、腹腔で、局所で投与される、或いは前記組成物は経口噴霧剤或いは鼻内噴霧剤として投与されることを特徴とする請求項１４記載の使用法。
【公表番号】特表２０１０−５０６８９９（Ｐ２０１０−５０６８９９Ａ）
【公表日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３２９１６（Ｐ２００９−５３２９１６）
【出願日】平成１９年１０月１７日（２００７．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００４４８３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０９０４１０
【国際公開日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【出願人】（５０９０２０４０２）ジアングス カニオン ファーマシューティカルズ シーオー． エルティーディー． (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月１７日（２００７．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００４４８３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０９０４１０
【国際公開日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【出願人】（５０９０２０４０２）ジアングス カニオン ファーマシューティカルズ シーオー． エルティーディー． (1)
【Ｆターム（参考）】
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