ＥＰＯミメティックペプチドおよび融合タンパク質
より長い血清半減期またはより高い血清安定性を有するＥＰＭペプチド融合タンパク質を含めて、ＥＰＭペプチドが開示される。ＥＰＭペプチドまたは融合タンパク質を含む組成物、および治療または予防を必要とする患者に治療上または予防上有効な量のＥＰＭペプチドまたは融合タンパク質を投与することによって疾患を治療または予防する方法も開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ジスルフィド結合形成を実質的に低減させる、ＥＭＰ−１の少なくとも１つのシステイン残基の第１の改変と、
（ｂ）そのペプチドがＥＭＰ−１活性を示すようにする第２の改変と
を含むＥＰＭペプチド。
【請求項２】
第１の改変が、ＥＭＰ−１ペプチド配列からの少なくとも１つのシステイン残基の欠失を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項３】
第１の改変が、ＥＭＰ−１ペプチド配列からの少なくとも１つのシステイン残基の置換を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項４】
第２の改変が、ＥＭＰ−１のＣ末端アミノ酸に共有結合しているリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５】
第２の改変が、ＥＭＰ−１のＮ末端アミノ酸に共有結合しているリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項６】
第２の改変が、Ｎ末端アミノ酸に共有結合している第１のリンカー基、およびＥＭＰ−１のＣ末端アミノ酸に共有結合している第２のリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項７】
第１の改変が、少なくとも１つのシステイン残基の欠失を含み、第２の改変が、ＥＭＰ−１に共有結合している少なくとも１つのリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項８】
第１の改変が、２つのシステイン残基の欠失を含む、請求項８に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項９】
少なくとも１つのシステイン残基を置換するアミノ酸により、ペプチドの環状化が可能となる、請求項３に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１０】
アミノ酸がアスパラギン酸である、請求項１０に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１１】
第２の改変をしない場合に、第１の改変がエリスロポエチン受容体へのペプチドの結合を低減させる、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１２】
第２の改変が、エリスロポエチン受容体へのペプチドの検出可能な結合を回復させる、請求項１１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１３】
活性が、エリスロポエチン受容体に結合することである、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１４】
活性が、エリスロポエチン受容体を活性化することである、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１５】
第２のペプチドまたはタンパク質に融合された請求項１に記載のＥＰＭペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１６】
ＥＰＭペプチドが、ＥＭＰ−１と比べて、より高い血清安定性またはより長いｉｎ ｖｉｖｏでの循環半減期を示す、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
第２のペプチドまたはタンパク質が、トランスフェリン、メラノトランスフェリン、ラクトフェリン、マルトース結合タンパク質、緑色蛍光タンパク質、イムノグロブリン、免疫グロブリンのＦｃ断片、またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼである、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
第２のペプチドまたはタンパク質がトランスフェリンである、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
トランスフェリンタンパク質が低減したグリコシル化を示す、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
トランスフェリンタンパク質が低減した金属結合を示す、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
トランスフェリンタンパク質が低減した受容体結合を示す、あるいは、前記タンパク質がトランスフェリン受容体と結合しない、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンのＣ末端に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンのＮ末端に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンのＮ末端およびＣ末端に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンの少なくとも１つのループ中に挿入されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンの少なくとも２つのループ中に挿入されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
トランスフェリンタンパク質がトランスフェリン受容体に対する低減した親和性を有する、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
ＥＰＭペプチドが、リンカー基を介して第２のペプチドまたはタンパク質に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
リンカー基がペプチド鎖である、請求項２８に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
リンカー基がポリグリシンストレッチである、請求項２９に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
請求項１に記載のペプチドをコードする核酸分子。
【請求項３２】
請求項１８に記載のタンパク質をコードする核酸分子。
【請求項３３】
請求項３１または３２に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項３４】
請求項３３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３５】
請求項３１に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項３６】
コードされた融合タンパク質を発現させる条件下で、請求項３５に記載の宿主細胞を培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項３７】
コードされた融合タンパク質を発現させる条件下で、請求項３５に記載の宿主細胞を培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項３８】
細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３９】
細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
細胞が酵母細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
細胞が酵母細胞である、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
請求項３１に記載の核酸分子を含むトランスジェニック動物。
【請求項４３】
請求項４２に記載のトランスジェニック動物から融合タンパク質を単離することを含む、融合タンパク質を作製する方法。
【請求項４４】
融合タンパク質が、トランスジェニック動物の生体液から単離される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１に記載のＥＰＭペプチドおよび薬学的にされる担体を含む医薬組成物。
【請求項４６】
請求項１８に記載の融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４７】
請求項１に記載のＥＰＭペプチドの治療上または予防上有効な量を、治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、患者の疾患または疾患症状を治療または予防する方法。
【請求項４８】
請求項１８に記載の融合タンパク質の治療上または予防上有効な量を、治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、患者の疾患または疾患症状を治療または予防する方法。
【請求項４９】
患者が、多発性硬化症、脳腫瘍、皮膚癌、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎に罹患している、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
対象が、健常者と比べて赤血球産生の低下または不全を示している、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５１】
赤血球産生の低下または不全が、貧血、β−サラセミア、妊娠または月経障害、関節リウマチ、エイズ、および癌に関連している、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
患者が、ウイルス性の疾患または感染症、癌、代謝性疾患、肥満、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、移植片対宿主疾患、全身性の微生物感染、心血管疾患、精神異常、遺伝病、神経変性疾患、造血細胞の障害、内分泌系または生殖系の疾患、胃腸管疾患、糖尿病、多発性硬化症、喘息、ＨＣＶまたはＨＩＶ感染症、高血圧、高コレステロール血症、動脈硬化、関節炎、あるいはアルツハイマー病に罹患している、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５３】
リンカーが（Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ）ｙ（配列番号３２）であり、ｙが１、２、３、４、５、６、７、または８である、請求項４、５または２８のいずれか一項に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５４】
（ａ）疎水性のより低い残基による疎水性残基の置換を含むＥＭＰ−１の第１の改変と、
（ｂ）そのペプチドがＥＭＰ−１活性を示すような第２の改変と
を含む、ＥＰＭペプチド。
【請求項５５】
疎水性残基がＬｅｕ１１またはＶａｌ１４である、請求項５４に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５６】
Ｌｅｕ１１またはＶａｌ１４が、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、およびＳｅｒからなる群から選択される親水性残基で置換されている、請求項５５に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５７】
Ｌｅｕ１１が、ＧｌｕまたはＴｈｒで置換されている、請求項５６に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５８】
Ｖａｌ１４が、ＧｌｕまたはＡｓｐで置換されている、請求項５６に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５９】
アミノ酸配列がＥＭＰ−１の配列に対して逆転している、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項６０】
配列（Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ）ｙ（配列番号３２）を含み、ｙが１、２、３、４、５、６、７、または８であるペプチドリンカー。
【請求項１】
（ａ）ジスルフィド結合形成を実質的に低減させる、ＥＭＰ−１の少なくとも１つのシステイン残基の第１の改変と、
（ｂ）そのペプチドがＥＭＰ−１活性を示すようにする第２の改変と
を含むＥＰＭペプチド。
【請求項２】
第１の改変が、ＥＭＰ−１ペプチド配列からの少なくとも１つのシステイン残基の欠失を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項３】
第１の改変が、ＥＭＰ−１ペプチド配列からの少なくとも１つのシステイン残基の置換を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項４】
第２の改変が、ＥＭＰ−１のＣ末端アミノ酸に共有結合しているリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５】
第２の改変が、ＥＭＰ−１のＮ末端アミノ酸に共有結合しているリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項６】
第２の改変が、Ｎ末端アミノ酸に共有結合している第１のリンカー基、およびＥＭＰ−１のＣ末端アミノ酸に共有結合している第２のリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項７】
第１の改変が、少なくとも１つのシステイン残基の欠失を含み、第２の改変が、ＥＭＰ−１に共有結合している少なくとも１つのリンカー基の付加を含む、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項８】
第１の改変が、２つのシステイン残基の欠失を含む、請求項８に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項９】
少なくとも１つのシステイン残基を置換するアミノ酸により、ペプチドの環状化が可能となる、請求項３に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１０】
アミノ酸がアスパラギン酸である、請求項１０に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１１】
第２の改変をしない場合に、第１の改変がエリスロポエチン受容体へのペプチドの結合を低減させる、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１２】
第２の改変が、エリスロポエチン受容体へのペプチドの検出可能な結合を回復させる、請求項１１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１３】
活性が、エリスロポエチン受容体に結合することである、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１４】
活性が、エリスロポエチン受容体を活性化することである、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項１５】
第２のペプチドまたはタンパク質に融合された請求項１に記載のＥＰＭペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１６】
ＥＰＭペプチドが、ＥＭＰ−１と比べて、より高い血清安定性またはより長いｉｎ ｖｉｖｏでの循環半減期を示す、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
第２のペプチドまたはタンパク質が、トランスフェリン、メラノトランスフェリン、ラクトフェリン、マルトース結合タンパク質、緑色蛍光タンパク質、イムノグロブリン、免疫グロブリンのＦｃ断片、またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼである、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
第２のペプチドまたはタンパク質がトランスフェリンである、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
トランスフェリンタンパク質が低減したグリコシル化を示す、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
トランスフェリンタンパク質が低減した金属結合を示す、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
トランスフェリンタンパク質が低減した受容体結合を示す、あるいは、前記タンパク質がトランスフェリン受容体と結合しない、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンのＣ末端に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンのＮ末端に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンのＮ末端およびＣ末端に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンの少なくとも１つのループ中に挿入されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
ＥＰＭペプチドが、トランスフェリンの少なくとも２つのループ中に挿入されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
トランスフェリンタンパク質がトランスフェリン受容体に対する低減した親和性を有する、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
ＥＰＭペプチドが、リンカー基を介して第２のペプチドまたはタンパク質に融合されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
リンカー基がペプチド鎖である、請求項２８に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
リンカー基がポリグリシンストレッチである、請求項２９に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
請求項１に記載のペプチドをコードする核酸分子。
【請求項３２】
請求項１８に記載のタンパク質をコードする核酸分子。
【請求項３３】
請求項３１または３２に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項３４】
請求項３３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３５】
請求項３１に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項３６】
コードされた融合タンパク質を発現させる条件下で、請求項３５に記載の宿主細胞を培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項３７】
コードされた融合タンパク質を発現させる条件下で、請求項３５に記載の宿主細胞を培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項３８】
細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３９】
細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
細胞が酵母細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
細胞が酵母細胞である、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
請求項３１に記載の核酸分子を含むトランスジェニック動物。
【請求項４３】
請求項４２に記載のトランスジェニック動物から融合タンパク質を単離することを含む、融合タンパク質を作製する方法。
【請求項４４】
融合タンパク質が、トランスジェニック動物の生体液から単離される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１に記載のＥＰＭペプチドおよび薬学的にされる担体を含む医薬組成物。
【請求項４６】
請求項１８に記載の融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４７】
請求項１に記載のＥＰＭペプチドの治療上または予防上有効な量を、治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、患者の疾患または疾患症状を治療または予防する方法。
【請求項４８】
請求項１８に記載の融合タンパク質の治療上または予防上有効な量を、治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、患者の疾患または疾患症状を治療または予防する方法。
【請求項４９】
患者が、多発性硬化症、脳腫瘍、皮膚癌、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎に罹患している、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
対象が、健常者と比べて赤血球産生の低下または不全を示している、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５１】
赤血球産生の低下または不全が、貧血、β−サラセミア、妊娠または月経障害、関節リウマチ、エイズ、および癌に関連している、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
患者が、ウイルス性の疾患または感染症、癌、代謝性疾患、肥満、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、移植片対宿主疾患、全身性の微生物感染、心血管疾患、精神異常、遺伝病、神経変性疾患、造血細胞の障害、内分泌系または生殖系の疾患、胃腸管疾患、糖尿病、多発性硬化症、喘息、ＨＣＶまたはＨＩＶ感染症、高血圧、高コレステロール血症、動脈硬化、関節炎、あるいはアルツハイマー病に罹患している、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５３】
リンカーが（Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ）ｙ（配列番号３２）であり、ｙが１、２、３、４、５、６、７、または８である、請求項４、５または２８のいずれか一項に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５４】
（ａ）疎水性のより低い残基による疎水性残基の置換を含むＥＭＰ−１の第１の改変と、
（ｂ）そのペプチドがＥＭＰ−１活性を示すような第２の改変と
を含む、ＥＰＭペプチド。
【請求項５５】
疎水性残基がＬｅｕ１１またはＶａｌ１４である、請求項５４に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５６】
Ｌｅｕ１１またはＶａｌ１４が、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、およびＳｅｒからなる群から選択される親水性残基で置換されている、請求項５５に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５７】
Ｌｅｕ１１が、ＧｌｕまたはＴｈｒで置換されている、請求項５６に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５８】
Ｖａｌ１４が、ＧｌｕまたはＡｓｐで置換されている、請求項５６に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項５９】
アミノ酸配列がＥＭＰ−１の配列に対して逆転している、請求項１に記載のＥＰＭペプチド。
【請求項６０】
配列（Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ）ｙ（配列番号３２）を含み、ｙが１、２、３、４、５、６、７、または８であるペプチドリンカー。
【図１】
【図２Ａ−１】
【図２Ａ−２】
【図２Ｂ−１】
【図２Ｂ−２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２Ａ−１】
【図２Ａ−２】
【図２Ｂ−１】
【図２Ｂ−２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２００７−５１２００１（Ｐ２００７−５１２００１Ａ）
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２４８９４（Ｐ２００６−５２４８９４）
【出願日】平成１６年８月３０日（２００４．８．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２７９４９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２１５７９
【国際公開日】平成１７年３月１０日（２００５．３．１０）
【出願人】（５０４０６２４３０）バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレイション (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月３０日（２００４．８．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２７９４９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２１５７９
【国際公開日】平成１７年３月１０日（２００５．３．１０）
【出願人】（５０４０６２４３０）バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレイション (4)
【Ｆターム（参考）】
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