ＧＬＰ−１分泌促進剤
【課題】ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、又は食後高血糖、糖尿病等の疾患若しくは状態の予防及び／又は改善等に有用な物質の提供。
【解決手段】キラヤ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とするグルカゴン分泌抑制剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食後高血糖予防及び／又は改善剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とする糖尿病予防及び／又は改善剤。
【解決手段】キラヤ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とするグルカゴン分泌抑制剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食後高血糖予防及び／又は改善剤。キラヤ又はその抽出物を有効成分とする糖尿病予防及び／又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１（glucagon-like peptide-1）分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１（ＧＬＰ−１）は、内分泌ホルモンであるグルカゴンと共通の遺伝子及び前駆体から産生されるホルモンである。グルカゴンが脾島のα細胞で産生されるのに対し、ＧＬＰ−１は腸の内分泌細胞（Ｌ細胞）で産生され、その前駆体からグルカゴンとは異なったプロセシングを経て産生される。ＧＬＰ−１は糖代謝に重要な役割を果たしているインクレチン（incretin: Intestine Secretion Insulin）作用を備えたホルモンであり、栄養素の摂取によって血中に分泌され、膵β細胞に働きかけインスリン分泌を促進し、血糖値を低下させる。ＧＬＰ−１はまた、膵臓に働きかけてグルカゴン分泌を抑制することにより、肝からのブドウ糖放出を低下させ、血糖値を低下させる。他のＧＬＰ−１の作用としては、膵β細胞の増殖促進、胃排泄や胃酸分泌の抑制、及び食欲と摂食の抑制等が知られている（非特許文献１）。従って、ＧＬＰ−１の効果を高めることは、肥満、糖尿病等の生活習慣病の改善に有用である。近年では、ＧＬＰ−１補充療法やＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）アゴニストを利用した糖尿病治療法の開発も進められている。
【０００３】
ＧＬＰ−１はまた、中枢神経系に対する作用を有することが知られている。ＧＬＰ−１の食欲と摂食の抑制効果は、中枢神経系に存在するＧＬＰ−１Ｒを介するものと考えられている（非特許文献１）。また、ＧＬＰ−１Ｒ欠損マウスでは学習能力が低下する一方で、ＧＬＰ−１Ｒを過剰発現させたマウスでは記憶学習能力が向上する（非特許文献２）。培養系での実験では、ＧＬＰ−１の神経突起伸長促進作用や、神経傷害によるアポトーシスからの保護作用が観察されている（非特許文献３）。従って、ＧＬＰ−１は、神経変性を抑え、認知症等の神経変性疾患や糖尿病に伴う神経障害の改善に有用な物質としても期待されている。
【０００４】
また、ＧＬＰ−１は、糖尿病患者の血糖値制御に有用であると考えられている。ＧＬＰ−１により膵臓のグルカゴン分泌が抑制されると、肝からのブドウ糖放出が低下し、血糖が低下する。この作用は低血糖によるグルカゴン分泌と拮抗せず、またインスリン濃度に依存しないことが報告されている。ＧＬＰ−１投与により１型糖尿病患者及び２型糖尿病患者で共に、血糖を一定にするのに必要なインスリン量が減少したことも報告されている。さらにＧＬＰ−１は、中枢神経系へ作用して食欲を抑制することにより、長期的に血糖値制御に効果を発揮し得る。よって、これらの作用を介して、ＧＬＰ−１により、糖尿病やインスリン抵抗性の患者の症状を改善できる可能性がある。実際にＧＬＰ−１アナログ製剤であるExenatideやLiraglutideが糖尿病治療薬として使用されており、インスリン抵抗性改善効果があることが報告されている（非特許文献４）。
【０００５】
しかし、通常ＧＬＰ−１は非常に分解され易く、生体内での半減期は非常に短い。そのため、体外からＧＬＰ−１を投与しても、その血中濃度を一定に保つのは非常に難しい。従って、生体内でのＧＬＰ−１濃度を長時間にわたって高めるためには、外からの投与よりも内因性ＧＬＰ−１の分泌を促進することが望ましい。
【０００６】
培養系での研究から、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質として、パルミチン酸、オレイン酸、肉加水分解物（ＭＨ）、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルバコール、フォルスコリン、イオノマイシン、酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、ロイシン、イソロイシン、スキムミルク、カゼイン、レプチン、ムスカリン性受容体Ｍ１、Ｍ２がこれまでに報告されている（非特許文献５〜９）。
【０００７】
キラヤ・サポナリア（Quillaja Saponaria Mol.）はバラ科の植物で、その抽出物は、キラヤサポニン（キラヤ酸をアグリコンとするトリテルペン系の配糖体）を含有し、天然物由来の食品添加物として、飲料、化粧品などの乳化剤、起泡剤等として汎用されている。
【０００８】
キラヤ抽出物の機能としては、血中コレステロールや血中トリグリセリドの低下作用増強（特許文献１）、膵リパーゼ阻害、肥満予防、高脂血症予防又は治療、脂肪肝予防又は治療（特許文献２）、ケラチナーゼ活性阻害(特許文献３）、メチオナーゼ活性阻害（特許文献４）、ヘリコバクター・ピロリに対する抗菌作用、ウレアーゼ活性阻害作用及び胃粘膜上皮細胞への接着抑制、胃炎及び胃・十二指腸潰瘍の予防及び治療（特許文献５）、アルコール吸収抑制（特許文献６）、抗酸化（特許文献７）、抗体産生能力向上（非特許文献１０、１１）、乳牛の腸内メタンガス減少（非特許文献１２）、血中コレステロール低下（非特許文献１３、１４)、ＨＤＬ増加、白血球ＤＮＡ損傷低下、血中マロンジアルデヒド・蛋白カルボニル化減少、ＮＯ増加（非特許文献１５）が知られている。
【０００９】
また、キラヤ又はその抽出物のＧＬＰ−１に対する作用については何ら報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開2007-82403号公報
【特許文献２】特開2006-182722号公報
【特許文献３】特開2004-18508号公報
【特許文献４】特開2003-160459号公報
【特許文献５】特開平8-119872号公報
【特許文献６】特開平4-145028号公報
【特許文献７】特開昭62-243681号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Eur J Pharmacol, 2002, 440(2-3):269-279
【非特許文献２】Nat Med, 2003, 9:1173-1179
【非特許文献３】J Pharmacol Exp Ther, 2002, 302(3):881-888
【非特許文献４】医学のあゆみ, 2009, 231(7):755-758
【非特許文献５】Endocrinology, 2001, 142(10):4522-4528
【非特許文献６】Journal of Endocrinology, 2006, 191,159-170
【非特許文献７】Nutrition, 2009, 25(3):340-349
【非特許文献８】Endocrinology, 2003, 144(7):3244-3250
【非特許文献９】Diabetes, 2006, 52(2):252-259
【非特許文献１０】Can. J. microbiol. 1986,32, 414-420
【非特許文献１１】Immunobiol. 1987, 174, 347-359
【非特許文献１２】J Dairy Sci. 2009, 92(6):2809-2821
【非特許文献１３】Nutr Res. 2009, 29(5):350-354.
【非特許文献１４】Arch Pharm Res. 2003, 26(12):1042-1046.
【非特許文献１５】J Diabetes Complications. 2008, 22(5):348-356
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質の提供と、ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、あるいは高血糖、糖尿病等の疾患若しくは状態の予防及び／又は改善等に関連した当該物質の使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、ＧＬＰ−１の分泌を促進できる素材について検討したところ、キラヤ抽出物がＧＬＰ−１の分泌を促進することができることを見出した。
【００１４】
すなわち、本発明は以下を提供する。
（１）キラヤ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
（２）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（１）記載のＧＬＰ−１分泌促進剤。
（３）キラヤ又はその抽出物を有効成分とするグルカゴン分泌抑制剤。
（４）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（３）記載のグルカゴン分泌抑制剤。
（５）キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
（６）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（５）記載の食欲抑制剤。
（７）キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食後高血糖予防及び／又は改善剤。
（８）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（７）記載の食後高血糖予防及び／又は改善剤。
（９）キラヤ又はその抽出物を有効成分とする糖尿病予防及び／又は改善剤。
（１０）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、（９）記載の糖尿病予防及び／又は改善剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のＧＬＰ−１の分泌促進剤は、優れたＧＬＰ−１分泌促進するとともに、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病、インスリン抵抗性、神経障害等の疾患の予防及び／又は改善のために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】キラヤ抽出物によるNCI-H716細胞におけるＧＬＰ−１分泌促進作用。**：p < 0.01、***：p < 0.001。
【図２】キラヤ抽出物によるマウスにおけるＧＬＰ−１分泌促進作用。*：p < 0.05。
【図３】キラヤ抽出物による血糖上昇抑制作用。*** ：p < 0.001。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書において、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、食事、特に糖質又は脂質を多く含む食事を摂取することで引き起こされる生体内でのＧＬＰ−１分泌を促進することを意味する。あるいは、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、主として食後に生じる生体内でのＧＬＰ−１分泌に伴う血中ＧＬＰ−１濃度上昇を増強するか、上昇したＧＬＰ−１濃度を維持するか、又は上昇したＧＬＰ−１濃度の低下を抑制することをいう。
【００１８】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００１９】
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００２０】
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止又は遅延、あるいは個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。
【００２１】
本明細書において、「キラヤ」とは、バラ科のキラヤ・サポナリア（Quillaja Saponaria Mol.）を指し、「キラヤ抽出物」とは、キラヤから得られた抽出物を意味する。抽出物は、キラヤの任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、木質部、樹皮、地衣体、根、根茎、仮球茎、球茎、塊茎、種子、果実、菌核若しくは樹脂等、又はそれらの組み合わせからの抽出物であればよいが、このうち樹皮からの抽出物が好ましい。上記部位は、そのまま抽出工程に付されてもよく、又は粉砕、切断若しくは乾燥された後に抽出工程に付されてもよい。
【００２２】
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、本発明におけるキラヤ抽出物は、キラヤを室温（例えば、４〜５０℃）若しくは加温（室温〜溶媒沸点）下にて抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２３】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。溶剤の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び超臨界二酸化炭素；ピリジン類；油脂、ワックス等その他オイル類等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類及びその水溶液が挙げられ、アルコール類としてはエタノールが好ましい。より好ましい溶剤は、水及びエタノール水溶液である。
【００２４】
抽出のための溶剤としてエタノール水溶液を使用する場合には、アルコール類と水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましく、２０〜８０：８０〜２０がさらに好ましく、３０〜７０：７０〜３０がさらにより好ましく、４０〜６０：６０〜４０がなお好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール類濃度が４０〜６０容量％であることが好ましい。
溶剤の使用量としては、キラヤ（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましく、抽出時間としては、１分間〜１００日間が好ましく、１分間〜１０日間がより好ましい。このときの抽出温度は、０℃〜溶媒沸点、より好ましくは２０〜１００℃、さらに好ましくは５０〜１００℃、さらにより好ましくは７０〜８０℃である。
【００２５】
キラヤ抽出物を得る抽出手段は、具体的には、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の手段を用いることができる。例えば、浸漬の好適な一例として、１０〜５０℃で、１時間〜１４日間の浸漬が挙げられる。また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、１０〜１００℃（好ましくは７０〜８０℃）下、１００〜４００ｒｐｍで１〜３０分間の攪拌が挙げられる。
抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２６】
後記実施例に示すように、キラヤ抽出物は、消化管細胞からのＧＬＰ−１分泌を有意に促進する作用を有する。また後記実施例に示すように、キラヤ抽出物は、食後血糖上昇を有意に抑制する作用を有する。従って、キラヤ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進剤として有用であり、且つＧＬＰ−１分泌に関わる様々な状態の制御、例えば、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、ならびに食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のため、さらにはインスリン抵抗性、神経疾患等の疾患の予防及び／又は改善のために有用である。
すなわち、キラヤ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のために使用することができる。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００２７】
従って、本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進剤を提供する。
また本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有するグルカゴン分泌抑制剤を提供する。
また本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有する食欲抑制剤を提供する。
さらに本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有する食後高血糖予防及び／又は改善剤を提供する。
さらに本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有する糖尿病予防及び／又は改善剤を提供する。
上記本発明の剤は、本質的にキラヤ又はその抽出物から構成されていてもよい。
【００２８】
キラヤ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のための組成物、医薬、医薬部外品、飲食品若しくはその原料、又は飼料若しくはその原料に素材として配合することができ、その製造のために使用することができる。
【００２９】
上記組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。キラヤ若しくはその抽出物は、当該組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料に素材として配合され、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のための有効成分であり得る。
【００３０】
上記医薬又は医薬部外品は、キラヤ若しくはその抽出物を有効成分として含有する。当該医薬又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与形態は、経口投与でも非経口投与でもよい。例えば、経口投与形態としては、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形投薬形態、ならびにエリキシロール、シロップおよび懸濁液のような液体投薬形態が挙げられ、非経口投与形態としては、注射、輸液、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。
【００３１】
上記医薬や医薬部外品は、キラヤ若しくはその抽出物を単独で含有していてもよく、又は薬学的に許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、希釈剤、分散剤、緩衝剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該医薬や医薬部外品は、キラヤ又はその抽出物のＧＬＰ−１分泌促進作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００３２】
上記医薬又は医薬部外品は、キラヤ若しくはその抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や薬理成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該医薬又は医薬部外品におけるキラヤ若しくはその抽出物の含有量（抽出物の乾燥物換算）は、通常０．０００１〜２０質量％であり、０．００１〜１０質量％とするのが好ましく、０．０１〜５質量％とするのがより好ましい。
【００３３】
上記飲食品や飼料は、ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善等の機能を有し、当該機能を必要に応じて表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品、ペットフード等であり得る。
【００３４】
上記飲食品の種類は特に限定されない。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、コーヒー飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等、あらゆる飲料が挙げられる。食品の形態は、固形、半固形、液状等の任意の形態であってもよく、また錠剤形態、丸剤形態、タブレット、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。例えば、食品としては、パン類、麺類、パスタ、ゼリー状食品、各種スナック類、ケーキ類、菓子類、アイスクリーム類、スープ類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、その他加工食品、調味料、サプリメント等が挙げられる。上記飼料の種類も特に限定されず、任意の動物のための飼料であってよく、その形態も上記食品の場合と同様に任意の形態であり得る。
【００３５】
上記飲食品若しくは飼料、又はそれらの原料は、キラヤ若しくはその抽出物を単独で含有していてもよく、又は他の食材や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等の添加剤を組み合わせて含有していてもよい。当該飲食品若しくは飼料中のキラヤ若しくはその抽出物の含有量（抽出物の乾燥物換算）は、通常０．０００１〜１０質量％であり、０．０００１〜５質量％とするのが好ましく、０．００１〜１質量％とするのがより好ましい。
【００３６】
キラヤ若しくはその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のため、それらを必要とする対象に有効量で投与される。あるいは、キラヤ若しくはその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のため、それらを必要とする対象に有効量で摂取される。
【００３７】
投与又は摂取する対象としては、食後高血糖、糖尿病等の疾患若しくは状態に罹患している動物、その疑いのある動物、又はその危険性の高い動物が挙げられる。あるいは、投与又は摂取対象は、ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、又は食欲抑制を必要とする動物であり得る。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００３８】
好ましい投与量及び摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、ヒトに経口投与又は摂取させる場合、投与又は摂取量は、キラヤ抽出物（抽出物の乾燥物換算）として、成人１人当たり、２０μｇ〜２０００ｍｇ／日とすることが好ましく、２００μｇ〜１０００ｍｇ／日がより好ましく、２ｍｇ〜５００ｍｇ／日がさらに好ましく、２０ｍｇ〜２００ｍｇ／日がなお好ましい。経口投与又は摂取は、好ましくは毎食時或いは毎食時前に行われ、より好ましくは毎食時の４時間〜５分前に行われる。
【００３９】
あるいは、投与又は摂取する対象は、動物由来の組織、器官、細胞、又はそれらの分画物であり得る。当該組織、器官、細胞、又はそれらの分画物は、好ましくは、ＧＬＰ−１を分泌する能力を有する天然由来又は生物学的若しくは生物工学的に改変された組織、器官、細胞、又はそれらの分画物である。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００４１】
実施例１ キラヤ抽出物による細胞におけるＧＬＰ−１分泌促進作用
バラ科キラヤ（Quillaja saponaria MOLINA）樹皮の抽出物製剤（キラヤニンS-100、キラヤ抽出物２５重量％含有、丸善製薬株式会社）を、５０％エタノール水により抽出物濃度１％（ｗ／ｖ）となるように希釈し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５０％エタノール水を用いた。
ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞（ヒト結腸由来細胞；ＡＴＣＣより購入）は３７℃、５％ＣＯ2存在下で培養した。培養液は、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ウシ胎児血清含有、高グルコース；Invitrogen社）を用いた。細胞を、マトリゲル（１００μＬ/well；BD社）をコーティングした２４ウエルプレートに１×１０6cell/well（Ｎ＝４）となるように播き、ＤＭＥＭ（１０％ウシ胎児血清含有、高グルコース；Invitrogen社）培地で培養した。３日後に培地を試験サンプルを含むＫＲＢ（Krebs-Ringer bicarbonate、Sigma社）buffer・０．２％ＢＳＡに交換し、２時間培養した後、培地を回収した。培地はdiprotin-A（ＤＰＰ４阻害剤、Sigma社）及びＰＭＳＦ（Phenylmethylsulfonyl fluoride、セリンプロテアーゼ阻害剤、Sigma社）を加えた微量遠心管に回収し、浮遊した細胞を除去した後、ＧＬＰ−１定量まで−８０℃で保存した。培地中ＧＬＰ−１はGLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1(ACTIVE) ELISA KIT（LINCO Research）を用いたＥＬＩＳＡにより定量した。
結果を図１及び表１に示す。キラヤ抽出物は０．００１％以上の濃度で細胞のＧＬＰ−１分泌を有意に促進した。
【００４２】
【表１】
【００４３】
実施例２ キラヤ抽出物によるマウスにおけるＧＬＰ−１分泌促進作用
バラ科キラヤ（Quillaja saponaria MOLINA）樹皮の抽出物製剤（キラヤニンS-100、キラヤ抽出物２５重量％含有、丸善製薬株式会社）を、凍結乾燥により乾燥粉末とした。これを、５％グルコース溶液に濃度１％（ｗ／ｖ）となるように溶解し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５％グルコース溶液を用いた。
マウス（C57BL/6J雄、１２週齢）を１群９匹とし、上記で調製した５％グルコース＋１％キラヤ抽出物溶液を、ゾンデにより経口投与した（キラヤ群）。コントロール群には５％グルコース溶液を投与した。投与１０分後に深麻酔下にて開腹し、門脈より採血を行った。血液は直ちにDPPIVインヒビター（Millipore）とアプロチニン（和光純薬）を加えた微量採血管（ＥＤＴＡ入り）に回収し、採血後３０分以内に遠心し血漿を得た。血漿は直ちに液体窒素で凍結し、ＧＬＰ−１定量まで−８０℃で保存した。血漿中ＧＬＰ−１はYK160 GLP-1 EIA キット(矢内原研究所）により定量した。
結果を図２及び表２に示す。キラヤ抽出物を摂取したマウスでは、ＧＬＰ−１分泌が亢進した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
実施例３ キラヤ抽出物による血糖上昇抑制作用
バラ科キラヤ（Quillaja saponaria MOLINA）樹皮の抽出物製剤（キラヤニンS-100、キラヤ抽出物２５重量％含有、丸善製薬株式会社）を、凍結乾燥により乾燥粉末とした。これを、５％グルコース溶液に濃度１％（ｗ／ｖ）となるように溶解し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５％グルコース溶液を用いた。
マウス（C57BL/6J雄、１２週令）を１群９匹とし、上記で調製した５％グルコース＋１％キラヤ抽出物溶液を、ゾンデにより経口投与した（キラヤ群）。コントロール群には５％グルコース溶液を投与した。投与１０分後に眼窩静脈叢より採血を行い、アキュチェック（ロシュ・ダイアグノスティック）を用いて血糖値を測定した。
結果を図３及び表３に示す。キラヤ抽出物を摂取したマウスでは、グルコース投与１０分後の血糖上昇が抑制された。
【００４６】
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１（glucagon-like peptide-1）分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１（ＧＬＰ−１）は、内分泌ホルモンであるグルカゴンと共通の遺伝子及び前駆体から産生されるホルモンである。グルカゴンが脾島のα細胞で産生されるのに対し、ＧＬＰ−１は腸の内分泌細胞（Ｌ細胞）で産生され、その前駆体からグルカゴンとは異なったプロセシングを経て産生される。ＧＬＰ−１は糖代謝に重要な役割を果たしているインクレチン（incretin: Intestine Secretion Insulin）作用を備えたホルモンであり、栄養素の摂取によって血中に分泌され、膵β細胞に働きかけインスリン分泌を促進し、血糖値を低下させる。ＧＬＰ−１はまた、膵臓に働きかけてグルカゴン分泌を抑制することにより、肝からのブドウ糖放出を低下させ、血糖値を低下させる。他のＧＬＰ−１の作用としては、膵β細胞の増殖促進、胃排泄や胃酸分泌の抑制、及び食欲と摂食の抑制等が知られている（非特許文献１）。従って、ＧＬＰ−１の効果を高めることは、肥満、糖尿病等の生活習慣病の改善に有用である。近年では、ＧＬＰ−１補充療法やＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）アゴニストを利用した糖尿病治療法の開発も進められている。
【０００３】
ＧＬＰ−１はまた、中枢神経系に対する作用を有することが知られている。ＧＬＰ−１の食欲と摂食の抑制効果は、中枢神経系に存在するＧＬＰ−１Ｒを介するものと考えられている（非特許文献１）。また、ＧＬＰ−１Ｒ欠損マウスでは学習能力が低下する一方で、ＧＬＰ−１Ｒを過剰発現させたマウスでは記憶学習能力が向上する（非特許文献２）。培養系での実験では、ＧＬＰ−１の神経突起伸長促進作用や、神経傷害によるアポトーシスからの保護作用が観察されている（非特許文献３）。従って、ＧＬＰ−１は、神経変性を抑え、認知症等の神経変性疾患や糖尿病に伴う神経障害の改善に有用な物質としても期待されている。
【０００４】
また、ＧＬＰ−１は、糖尿病患者の血糖値制御に有用であると考えられている。ＧＬＰ−１により膵臓のグルカゴン分泌が抑制されると、肝からのブドウ糖放出が低下し、血糖が低下する。この作用は低血糖によるグルカゴン分泌と拮抗せず、またインスリン濃度に依存しないことが報告されている。ＧＬＰ−１投与により１型糖尿病患者及び２型糖尿病患者で共に、血糖を一定にするのに必要なインスリン量が減少したことも報告されている。さらにＧＬＰ−１は、中枢神経系へ作用して食欲を抑制することにより、長期的に血糖値制御に効果を発揮し得る。よって、これらの作用を介して、ＧＬＰ−１により、糖尿病やインスリン抵抗性の患者の症状を改善できる可能性がある。実際にＧＬＰ−１アナログ製剤であるExenatideやLiraglutideが糖尿病治療薬として使用されており、インスリン抵抗性改善効果があることが報告されている（非特許文献４）。
【０００５】
しかし、通常ＧＬＰ−１は非常に分解され易く、生体内での半減期は非常に短い。そのため、体外からＧＬＰ−１を投与しても、その血中濃度を一定に保つのは非常に難しい。従って、生体内でのＧＬＰ−１濃度を長時間にわたって高めるためには、外からの投与よりも内因性ＧＬＰ−１の分泌を促進することが望ましい。
【０００６】
培養系での研究から、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質として、パルミチン酸、オレイン酸、肉加水分解物（ＭＨ）、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルバコール、フォルスコリン、イオノマイシン、酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、ロイシン、イソロイシン、スキムミルク、カゼイン、レプチン、ムスカリン性受容体Ｍ１、Ｍ２がこれまでに報告されている（非特許文献５〜９）。
【０００７】
キラヤ・サポナリア（Quillaja Saponaria Mol.）はバラ科の植物で、その抽出物は、キラヤサポニン（キラヤ酸をアグリコンとするトリテルペン系の配糖体）を含有し、天然物由来の食品添加物として、飲料、化粧品などの乳化剤、起泡剤等として汎用されている。
【０００８】
キラヤ抽出物の機能としては、血中コレステロールや血中トリグリセリドの低下作用増強（特許文献１）、膵リパーゼ阻害、肥満予防、高脂血症予防又は治療、脂肪肝予防又は治療（特許文献２）、ケラチナーゼ活性阻害(特許文献３）、メチオナーゼ活性阻害（特許文献４）、ヘリコバクター・ピロリに対する抗菌作用、ウレアーゼ活性阻害作用及び胃粘膜上皮細胞への接着抑制、胃炎及び胃・十二指腸潰瘍の予防及び治療（特許文献５）、アルコール吸収抑制（特許文献６）、抗酸化（特許文献７）、抗体産生能力向上（非特許文献１０、１１）、乳牛の腸内メタンガス減少（非特許文献１２）、血中コレステロール低下（非特許文献１３、１４)、ＨＤＬ増加、白血球ＤＮＡ損傷低下、血中マロンジアルデヒド・蛋白カルボニル化減少、ＮＯ増加（非特許文献１５）が知られている。
【０００９】
また、キラヤ又はその抽出物のＧＬＰ−１に対する作用については何ら報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開2007-82403号公報
【特許文献２】特開2006-182722号公報
【特許文献３】特開2004-18508号公報
【特許文献４】特開2003-160459号公報
【特許文献５】特開平8-119872号公報
【特許文献６】特開平4-145028号公報
【特許文献７】特開昭62-243681号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Eur J Pharmacol, 2002, 440(2-3):269-279
【非特許文献２】Nat Med, 2003, 9:1173-1179
【非特許文献３】J Pharmacol Exp Ther, 2002, 302(3):881-888
【非特許文献４】医学のあゆみ, 2009, 231(7):755-758
【非特許文献５】Endocrinology, 2001, 142(10):4522-4528
【非特許文献６】Journal of Endocrinology, 2006, 191,159-170
【非特許文献７】Nutrition, 2009, 25(3):340-349
【非特許文献８】Endocrinology, 2003, 144(7):3244-3250
【非特許文献９】Diabetes, 2006, 52(2):252-259
【非特許文献１０】Can. J. microbiol. 1986,32, 414-420
【非特許文献１１】Immunobiol. 1987, 174, 347-359
【非特許文献１２】J Dairy Sci. 2009, 92(6):2809-2821
【非特許文献１３】Nutr Res. 2009, 29(5):350-354.
【非特許文献１４】Arch Pharm Res. 2003, 26(12):1042-1046.
【非特許文献１５】J Diabetes Complications. 2008, 22(5):348-356
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質の提供と、ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、あるいは高血糖、糖尿病等の疾患若しくは状態の予防及び／又は改善等に関連した当該物質の使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、ＧＬＰ−１の分泌を促進できる素材について検討したところ、キラヤ抽出物がＧＬＰ−１の分泌を促進することができることを見出した。
【００１４】
すなわち、本発明は以下を提供する。
（１）キラヤ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
（２）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（１）記載のＧＬＰ−１分泌促進剤。
（３）キラヤ又はその抽出物を有効成分とするグルカゴン分泌抑制剤。
（４）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（３）記載のグルカゴン分泌抑制剤。
（５）キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
（６）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（５）記載の食欲抑制剤。
（７）キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食後高血糖予防及び／又は改善剤。
（８）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である（７）記載の食後高血糖予防及び／又は改善剤。
（９）キラヤ又はその抽出物を有効成分とする糖尿病予防及び／又は改善剤。
（１０）抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、（９）記載の糖尿病予防及び／又は改善剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のＧＬＰ−１の分泌促進剤は、優れたＧＬＰ−１分泌促進するとともに、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病、インスリン抵抗性、神経障害等の疾患の予防及び／又は改善のために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】キラヤ抽出物によるNCI-H716細胞におけるＧＬＰ−１分泌促進作用。**：p < 0.01、***：p < 0.001。
【図２】キラヤ抽出物によるマウスにおけるＧＬＰ−１分泌促進作用。*：p < 0.05。
【図３】キラヤ抽出物による血糖上昇抑制作用。*** ：p < 0.001。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書において、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、食事、特に糖質又は脂質を多く含む食事を摂取することで引き起こされる生体内でのＧＬＰ−１分泌を促進することを意味する。あるいは、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、主として食後に生じる生体内でのＧＬＰ−１分泌に伴う血中ＧＬＰ−１濃度上昇を増強するか、上昇したＧＬＰ−１濃度を維持するか、又は上昇したＧＬＰ−１濃度の低下を抑制することをいう。
【００１８】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００１９】
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００２０】
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止又は遅延、あるいは個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。
【００２１】
本明細書において、「キラヤ」とは、バラ科のキラヤ・サポナリア（Quillaja Saponaria Mol.）を指し、「キラヤ抽出物」とは、キラヤから得られた抽出物を意味する。抽出物は、キラヤの任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、木質部、樹皮、地衣体、根、根茎、仮球茎、球茎、塊茎、種子、果実、菌核若しくは樹脂等、又はそれらの組み合わせからの抽出物であればよいが、このうち樹皮からの抽出物が好ましい。上記部位は、そのまま抽出工程に付されてもよく、又は粉砕、切断若しくは乾燥された後に抽出工程に付されてもよい。
【００２２】
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、本発明におけるキラヤ抽出物は、キラヤを室温（例えば、４〜５０℃）若しくは加温（室温〜溶媒沸点）下にて抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２３】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。溶剤の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び超臨界二酸化炭素；ピリジン類；油脂、ワックス等その他オイル類等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類及びその水溶液が挙げられ、アルコール類としてはエタノールが好ましい。より好ましい溶剤は、水及びエタノール水溶液である。
【００２４】
抽出のための溶剤としてエタノール水溶液を使用する場合には、アルコール類と水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましく、２０〜８０：８０〜２０がさらに好ましく、３０〜７０：７０〜３０がさらにより好ましく、４０〜６０：６０〜４０がなお好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール類濃度が４０〜６０容量％であることが好ましい。
溶剤の使用量としては、キラヤ（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましく、抽出時間としては、１分間〜１００日間が好ましく、１分間〜１０日間がより好ましい。このときの抽出温度は、０℃〜溶媒沸点、より好ましくは２０〜１００℃、さらに好ましくは５０〜１００℃、さらにより好ましくは７０〜８０℃である。
【００２５】
キラヤ抽出物を得る抽出手段は、具体的には、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の手段を用いることができる。例えば、浸漬の好適な一例として、１０〜５０℃で、１時間〜１４日間の浸漬が挙げられる。また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、１０〜１００℃（好ましくは７０〜８０℃）下、１００〜４００ｒｐｍで１〜３０分間の攪拌が挙げられる。
抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２６】
後記実施例に示すように、キラヤ抽出物は、消化管細胞からのＧＬＰ−１分泌を有意に促進する作用を有する。また後記実施例に示すように、キラヤ抽出物は、食後血糖上昇を有意に抑制する作用を有する。従って、キラヤ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進剤として有用であり、且つＧＬＰ−１分泌に関わる様々な状態の制御、例えば、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、ならびに食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のため、さらにはインスリン抵抗性、神経疾患等の疾患の予防及び／又は改善のために有用である。
すなわち、キラヤ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のために使用することができる。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００２７】
従って、本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進剤を提供する。
また本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有するグルカゴン分泌抑制剤を提供する。
また本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有する食欲抑制剤を提供する。
さらに本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有する食後高血糖予防及び／又は改善剤を提供する。
さらに本発明は、キラヤ又はその抽出物を有効成分として含有する糖尿病予防及び／又は改善剤を提供する。
上記本発明の剤は、本質的にキラヤ又はその抽出物から構成されていてもよい。
【００２８】
キラヤ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のための組成物、医薬、医薬部外品、飲食品若しくはその原料、又は飼料若しくはその原料に素材として配合することができ、その製造のために使用することができる。
【００２９】
上記組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。キラヤ若しくはその抽出物は、当該組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料に素材として配合され、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のための有効成分であり得る。
【００３０】
上記医薬又は医薬部外品は、キラヤ若しくはその抽出物を有効成分として含有する。当該医薬又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与形態は、経口投与でも非経口投与でもよい。例えば、経口投与形態としては、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形投薬形態、ならびにエリキシロール、シロップおよび懸濁液のような液体投薬形態が挙げられ、非経口投与形態としては、注射、輸液、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。
【００３１】
上記医薬や医薬部外品は、キラヤ若しくはその抽出物を単独で含有していてもよく、又は薬学的に許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、希釈剤、分散剤、緩衝剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該医薬や医薬部外品は、キラヤ又はその抽出物のＧＬＰ−１分泌促進作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００３２】
上記医薬又は医薬部外品は、キラヤ若しくはその抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や薬理成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該医薬又は医薬部外品におけるキラヤ若しくはその抽出物の含有量（抽出物の乾燥物換算）は、通常０．０００１〜２０質量％であり、０．００１〜１０質量％とするのが好ましく、０．０１〜５質量％とするのがより好ましい。
【００３３】
上記飲食品や飼料は、ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、食欲抑制、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善等の機能を有し、当該機能を必要に応じて表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品、ペットフード等であり得る。
【００３４】
上記飲食品の種類は特に限定されない。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、コーヒー飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等、あらゆる飲料が挙げられる。食品の形態は、固形、半固形、液状等の任意の形態であってもよく、また錠剤形態、丸剤形態、タブレット、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。例えば、食品としては、パン類、麺類、パスタ、ゼリー状食品、各種スナック類、ケーキ類、菓子類、アイスクリーム類、スープ類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、その他加工食品、調味料、サプリメント等が挙げられる。上記飼料の種類も特に限定されず、任意の動物のための飼料であってよく、その形態も上記食品の場合と同様に任意の形態であり得る。
【００３５】
上記飲食品若しくは飼料、又はそれらの原料は、キラヤ若しくはその抽出物を単独で含有していてもよく、又は他の食材や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等の添加剤を組み合わせて含有していてもよい。当該飲食品若しくは飼料中のキラヤ若しくはその抽出物の含有量（抽出物の乾燥物換算）は、通常０．０００１〜１０質量％であり、０．０００１〜５質量％とするのが好ましく、０．００１〜１質量％とするのがより好ましい。
【００３６】
キラヤ若しくはその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のため、それらを必要とする対象に有効量で投与される。あるいは、キラヤ若しくはその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進のため、グルカゴン分泌抑制のため、食欲抑制のため、あるいは食後高血糖、糖尿病等の疾患の予防及び／又は改善のため、それらを必要とする対象に有効量で摂取される。
【００３７】
投与又は摂取する対象としては、食後高血糖、糖尿病等の疾患若しくは状態に罹患している動物、その疑いのある動物、又はその危険性の高い動物が挙げられる。あるいは、投与又は摂取対象は、ＧＬＰ−１分泌促進、グルカゴン分泌抑制、又は食欲抑制を必要とする動物であり得る。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００３８】
好ましい投与量及び摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、ヒトに経口投与又は摂取させる場合、投与又は摂取量は、キラヤ抽出物（抽出物の乾燥物換算）として、成人１人当たり、２０μｇ〜２０００ｍｇ／日とすることが好ましく、２００μｇ〜１０００ｍｇ／日がより好ましく、２ｍｇ〜５００ｍｇ／日がさらに好ましく、２０ｍｇ〜２００ｍｇ／日がなお好ましい。経口投与又は摂取は、好ましくは毎食時或いは毎食時前に行われ、より好ましくは毎食時の４時間〜５分前に行われる。
【００３９】
あるいは、投与又は摂取する対象は、動物由来の組織、器官、細胞、又はそれらの分画物であり得る。当該組織、器官、細胞、又はそれらの分画物は、好ましくは、ＧＬＰ−１を分泌する能力を有する天然由来又は生物学的若しくは生物工学的に改変された組織、器官、細胞、又はそれらの分画物である。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００４１】
実施例１ キラヤ抽出物による細胞におけるＧＬＰ−１分泌促進作用
バラ科キラヤ（Quillaja saponaria MOLINA）樹皮の抽出物製剤（キラヤニンS-100、キラヤ抽出物２５重量％含有、丸善製薬株式会社）を、５０％エタノール水により抽出物濃度１％（ｗ／ｖ）となるように希釈し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５０％エタノール水を用いた。
ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞（ヒト結腸由来細胞；ＡＴＣＣより購入）は３７℃、５％ＣＯ2存在下で培養した。培養液は、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ウシ胎児血清含有、高グルコース；Invitrogen社）を用いた。細胞を、マトリゲル（１００μＬ/well；BD社）をコーティングした２４ウエルプレートに１×１０6cell/well（Ｎ＝４）となるように播き、ＤＭＥＭ（１０％ウシ胎児血清含有、高グルコース；Invitrogen社）培地で培養した。３日後に培地を試験サンプルを含むＫＲＢ（Krebs-Ringer bicarbonate、Sigma社）buffer・０．２％ＢＳＡに交換し、２時間培養した後、培地を回収した。培地はdiprotin-A（ＤＰＰ４阻害剤、Sigma社）及びＰＭＳＦ（Phenylmethylsulfonyl fluoride、セリンプロテアーゼ阻害剤、Sigma社）を加えた微量遠心管に回収し、浮遊した細胞を除去した後、ＧＬＰ−１定量まで−８０℃で保存した。培地中ＧＬＰ−１はGLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1(ACTIVE) ELISA KIT（LINCO Research）を用いたＥＬＩＳＡにより定量した。
結果を図１及び表１に示す。キラヤ抽出物は０．００１％以上の濃度で細胞のＧＬＰ−１分泌を有意に促進した。
【００４２】
【表１】
【００４３】
実施例２ キラヤ抽出物によるマウスにおけるＧＬＰ−１分泌促進作用
バラ科キラヤ（Quillaja saponaria MOLINA）樹皮の抽出物製剤（キラヤニンS-100、キラヤ抽出物２５重量％含有、丸善製薬株式会社）を、凍結乾燥により乾燥粉末とした。これを、５％グルコース溶液に濃度１％（ｗ／ｖ）となるように溶解し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５％グルコース溶液を用いた。
マウス（C57BL/6J雄、１２週齢）を１群９匹とし、上記で調製した５％グルコース＋１％キラヤ抽出物溶液を、ゾンデにより経口投与した（キラヤ群）。コントロール群には５％グルコース溶液を投与した。投与１０分後に深麻酔下にて開腹し、門脈より採血を行った。血液は直ちにDPPIVインヒビター（Millipore）とアプロチニン（和光純薬）を加えた微量採血管（ＥＤＴＡ入り）に回収し、採血後３０分以内に遠心し血漿を得た。血漿は直ちに液体窒素で凍結し、ＧＬＰ−１定量まで−８０℃で保存した。血漿中ＧＬＰ−１はYK160 GLP-1 EIA キット(矢内原研究所）により定量した。
結果を図２及び表２に示す。キラヤ抽出物を摂取したマウスでは、ＧＬＰ−１分泌が亢進した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
実施例３ キラヤ抽出物による血糖上昇抑制作用
バラ科キラヤ（Quillaja saponaria MOLINA）樹皮の抽出物製剤（キラヤニンS-100、キラヤ抽出物２５重量％含有、丸善製薬株式会社）を、凍結乾燥により乾燥粉末とした。これを、５％グルコース溶液に濃度１％（ｗ／ｖ）となるように溶解し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５％グルコース溶液を用いた。
マウス（C57BL/6J雄、１２週令）を１群９匹とし、上記で調製した５％グルコース＋１％キラヤ抽出物溶液を、ゾンデにより経口投与した（キラヤ群）。コントロール群には５％グルコース溶液を投与した。投与１０分後に眼窩静脈叢より採血を行い、アキュチェック（ロシュ・ダイアグノスティック）を用いて血糖値を測定した。
結果を図３及び表３に示す。キラヤ抽出物を摂取したマウスでは、グルコース投与１０分後の血糖上昇が抑制された。
【００４６】
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
【請求項２】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項１記載のＧＬＰ−１分泌促進剤。
【請求項３】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とするグルカゴン分泌抑制剤。
【請求項４】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項３記載のグルカゴン分泌抑制剤。
【請求項５】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
【請求項６】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項５記載の食欲抑制剤。
【請求項７】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食後高血糖予防及び／又は改善剤。
【請求項８】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項７記載の食後高血糖予防及び／又は改善剤。
【請求項９】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とする糖尿病予防及び／又は改善剤。
【請求項１０】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項９記載の糖尿病予防及び／又は改善剤。
【請求項１】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
【請求項２】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項１記載のＧＬＰ−１分泌促進剤。
【請求項３】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とするグルカゴン分泌抑制剤。
【請求項４】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項３記載のグルカゴン分泌抑制剤。
【請求項５】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
【請求項６】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項５記載の食欲抑制剤。
【請求項７】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とする食後高血糖予防及び／又は改善剤。
【請求項８】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項７記載の食後高血糖予防及び／又は改善剤。
【請求項９】
キラヤ又はその抽出物を有効成分とする糖尿病予防及び／又は改善剤。
【請求項１０】
抽出物が水抽出物又はエタノール水溶液抽出物である、請求項９記載の糖尿病予防及び／又は改善剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−１３１７４２（Ｐ２０１２−１３１７４２Ａ）
【公開日】平成２４年７月１２日（２０１２．７．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２８５５６８（Ｐ２０１０−２８５５６８）
【出願日】平成２２年１２月２２日（２０１０．１２．２２）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年７月１２日（２０１２．７．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月２２日（２０１０．１２．２２）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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