【課題】被験体において免疫応答を発生させること。
【解決手段】本発明は、種々の細胞型（哺乳動物、昆虫および植物の細胞を含むが、これらに限定されない）におけるＨＩＶポリペプチドの効率的な発現に関する。ＨＩＶ Ｇａｇ含有ポリペプチドをコードする合成発現カセットが記載され、ＤＮＡ免疫、パッケージング細胞株の作製、およびＥｎｖ含有タンパク質、ｔａｔ含有タンパク質またはＧａｇ含有タンパク質の生成を含む適用における発現カセットの使用もまた記載される。本発明は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法、ならびにＶＬＰの使用（抗原提示のためのビヒクルおよびＶＬＰが投与される被験体における免疫応答の刺激が挙げられるが、これらに限定されない）を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ ｅｎｖポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現カセットであって、ここで該ＨＩＶ ｅｎｖポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号７１（図５８）または配列番号７２（図５９）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する少なくとも１４４のヌクレオチドの連続する配列を含み、該ｅｎｖポリペプチドは、Ｖ１領域に隣接する配列を含むが、該Ｖ１領域自体に欠失を有するか、または、該ｅｎｖポリペプチドは、Ｖ２領域に隣接する配列を含むが、該Ｖ２領域自体に欠失を有する、発現カセット。
【請求項２】
ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現カセットであって、ここで、該Ｅｎｖポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、（Ａ）Ｘの連続するヌクレオチドであって、ここで（ｉ）該Ｘの連続するヌクレオチドが、配列番号７１のＹの連続するヌクレオチドに対して少なくとも９０％の同一性を有し、（ｉｉ）ＸがＹと等しく、そして（ｉｉｉ）Ｘが１４４ヌクレオチドである、ヌクレオチド；または（Ｂ）Ｘの連続するヌクレオチドであって、ここで（ｉ）該Ｘの連続するヌクレオチドが、配列番号７２のＹの連続するヌクレオチドに対して少なくとも９０％の同一性を有し、（ｉｉ）ＸはＹと等しく、そして（ｉｉｉ）Ｘは１４４ヌクレオチドである、ヌクレオチドを含み、該ｅｎｖポリペプチドは、Ｖ１領域に隣接する配列を含むが、該Ｖ１領域自体に欠失を有するか、または、該ｅｎｖポリペプチドは、Ｖ２領域に隣接する配列を含むが、該Ｖ２領域自体に欠失を有する、発現カセット。
【請求項３】
前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号６５（図５２）として示される配列を含む、請求項１または２のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項４】
前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号６０（図４７）および配列番号６６（図５３）からなる群より選択される、請求項１または２のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項５】
請求項１または２のいずれかに記載の発現カセットであって、ここで前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号３４（図２０のｇｐ１２０）；配列番号３７（図２４）；配列番号４０（図２７）；配列番号４３（図３０）；配列番号４６（図３３）；配列番号４９（図３６）；および配列番号７６（図６４）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項６】
前記ｅｎｖポリペプチドが、Ｖ１／Ｖ２領域に隣接する配列をさらにコードするが、該Ｖ１／Ｖ２領域において欠失を有する、請求項１または２のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項７】
請求項６に記載の発現カセットであって、前記ｅｎｖポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号５９（図４６）；配列番号６１（図４８）；配列番号６７（図５４）；および配列番号７５（図６３）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項８】
請求項６に記載の発現カセットであって、前記ｅｎｖポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号３５（図２１）；配列番号３８（図２５のｇｐ１４０）；配列番号４１（図２８）；配列番号４４（図３１）；配列番号４７（図３４）および配列番号５０（図３７）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項９】
前記ｅｎｖポリペプチドが、ｇｐ１４０ポリペプチドのｇｐ１２０ポリペプチドおよびｇｐ４１ポリペプチドへの切断を妨げる、変異した切断部位を有する、請求項１または２のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項１０】
請求項９に記載の発現カセットであって、ここで、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号５７（図４４）；配列番号６１（図４８）；配列番号６３（図５０）；配列番号３９（図２６）；配列番号４０（図２７）；配列番号４１（図２８）；配列番号４２（図２９）；配列番号４３（図３０）；配列番号４４（図３１）；配列番号４５（図３２）；配列番号４６（図３３）；配列番号４７（図３４）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項１１】
前記ｅｎｖポリペプチドが、ｇｐ１６０ ｅｎｖポリペプチドまたはその免疫原性フラグメントをコードする、請求項１または２に記載の発現カセット。
【請求項１２】
請求項１１に記載の発現カセットであって、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号６４（図５１）；配列番号６５（図５２）；配列番号６６（図５３）；配列番号６７（図５４）；配列番号６８（図５５）；配列番号７５（図６３）；配列番号７３（図６１）；配列番号４８（図３５）；配列番号４９（図３６）；配列番号５０（図３７）；配列番号７６（図６４）；および配列番号７４（図６２）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項１３】
前記ｅｎｖポリペプチドが、ｇｐ１４０ ｅｎｖポリペプチドまたはその免疫原性フラグメントをコードする、請求項１または２のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項１４】
請求項１３に記載の発現カセットであって、ここで前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号５６（図４３）；配列番号５７（図４４）；配列番号５８（図４５）；配列番号５９（図４６）；配列番号６０（図４７）；配列番号６１（図４８）；配列番号６２（図４９）；配列番号６３（図５０）；配列番号３６（図２３）；配列番号３７（図２４）；配列番号３８（図２５）；配列番号３９（図２６）；配列番号４０（図２７）；配列番号４１（図２８）；配列番号４２（図２９）；配列番号４３（図３０）；配列番号４４（図３１）；配列番号４５（図３２）；配列番号４６（図３３）；および配列番号４７（図３４）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項１５】
前記ｅｎｖポリペプチドが、ｇｐ１２０ ｅｎｖポリペプチドまたはその免疫原性フラグメントをコードする、請求項１または２のいずれかに記載の発現カセット。
【請求項１６】
請求項１５に記載の発現カセットであって、前記ｅｎｖポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号５４（図４１）；配列番号５５（図４２）；配列番号３３（図１９）；配列番号３４（図２０）；および配列番号３５（図２１）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項１７】
請求項１または２に記載の発現カセットであって、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号５５（図４２のｇｐ１２０）；配列番号６２（図４９）；配列番号６３（図５０）；および配列番号６８（図５５）からなる群より選択される、発現カセット。
【請求項１８】
選択された宿主細胞中で使用するための組換え発現系であって、請求項１〜１７のいずれかに記載の発現カセットを含み、そしてここで、前記ポリヌクレオチド配列が、該選択された宿主細胞における発現と適合性の制御エレメントに作動可能に連結されている、組換え発現系。
【請求項１９】
請求項１８に記載の組換え発現系であって、前記制御エレメントが、転写プロモーター、転写エンハンサーエレメント、転写終結シグナル、ポリアデニル化配列、翻訳開始の最適化のための配列、および翻訳終結配列からなる群より選択される、組換え発現系。
【請求項２０】
前記転写プロモーターが、ＣＭＶ、ＣＭＶ＋イントロンＡ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ−Ｌｔｒ、ＭＭＬＶ−ｌｔｒ、およびメタロチオネインからなる群より選択される、請求項１９に記載の組換え発現系。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれかに記載の発現カセットを含む細胞であって、前記ポリヌクレオチド配列が、選択された細胞における発現と適合性の制御エレメントに作動可能に連結されている、細胞。
【請求項２２】
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２３】
前記細胞が、ＢＨＫ、ＶＥＲＯ、ＨＴ１０８０、２９３、ＲＤ、ＣＯＳ−７、およびＣＨＯ細胞からなる群より選択される、請求項２２に記載の細胞。
【請求項２４】
前記細胞がＣＨＯ細胞である、請求項２３に記載の細胞。
【請求項２５】
前記細胞が、昆虫細胞、細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、初代細胞、不死化細胞、腫瘍由来細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、幹細胞、および前駆細胞からなる群より選択される、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２６】
請求項１〜１７のいずれかに記載の発現カセットを含む発現ベクターでトランスフェクトした適切な宿主細胞を含む、レンチウイルスベクターをパッケージングするために有用な細胞株であって、そしてここで、前記ポリヌクレオチド配列が、該宿主細胞における発現と適合性の制御エレメントに作動可能に連結されている、細胞株。
【請求項２７】
適切な宿主細胞が、請求項１〜２１に記載の発現カセットを含む発現ベクターでトランスフェクトされている、請求項２６に記載の細胞株。
【請求項２８】
被験体において使用するための遺伝子送達ベクターであって、ここで該ベクターが、請求項１〜１７のいずれかに記載の発現カセットを含み、そしてここで前記ポリヌクレオチド配列が、該被験体における発現と適合性の制御エレメントに作動可能に連結されている、遺伝子送達ベクター。
【請求項２９】
前記遺伝子送達ベクターが、非ウイルスベクター、ウイルスベクターおよび細菌プラスミドベクターからなる群より選択される、請求項２８に記載の遺伝子送達ベクター。
【請求項３０】
レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アルファウイルスベクターおよびポックスウイルス由来ベクターからなる群より選択される、請求項２９に記載のウイルスベクター。
【請求項３１】
前記ベクターが、真核生物層状ベクター開始系を含む、請求項３０に記載のアルファウイルスベクター。
【請求項３２】
前記ポックスウイルス由来ベクターが、ワクシニアウイルスである、請求項３０に記載のポックスウイルスベクター。
【請求項３３】
前記ベクターが粒子キャリアと会合している、請求項２８〜３２のいずれか１項に記載の遺伝子送達ビヒクル。
【請求項３４】
前記ベクターが、リポソーム調製物中にカプセル化されている、請求項２８〜３３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項３５】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の発現カセットを含む免疫応答を刺激するための組成物。
【請求項３６】
被験体における免疫応答を誘導するための医薬品の製造における請求項１〜１７のいずれか１項に記載の発現カセットの使用。
【請求項３７】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の発現カセットにより発現されるポリペプチドを生成する方法であって、該方法は、該ポリペプチドの発現を生じる条件下で宿主細胞を培養する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方法。
【請求項３８】
被験体における免疫応答を誘導するための医薬品の製造における、請求項３７に記載の方法から回収されたポリペプチドの使用。
【請求項３９】
アジュバントをさらに含む、請求項３８に記載のポリペプチドの使用。
【請求項４０】
免疫応答を刺激するための請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド配列であって、該ポリヌクレオチド配列が、被験体の組織へ直接導入された場合に、ＨＩＶポリペプチドを作動可能にコードする、ポリヌクレオチド配列。
【請求項４１】
前記ポリヌクレオチド配列が、遺伝子送達ベクターにより組織へ導入される、請求項４０に記載のポリヌクレオチド配列。
【請求項４２】
被験体における免疫応答を誘導するための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の発現カセットを含む組成物。
【請求項４３】
前記免疫応答が体液性免疫応答である、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記免疫応答が細胞性免疫応答である、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４５】
被験体における免疫応答を刺激するための組成物であって、該組成物は請求項１〜１７のいずれか１項に記載の発現カセットを含み、該組成物は感作工程において被験体に投与されるのに適し、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の発現カセットを含む該第２の組成物と組み合せてブースト工程において同じ該被験体に投与されるのに適する、組成物。
【請求項４６】
前記組成物または前記第２の組成物が、アジュバントをさらに含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記組成物および前記第２の組成物が、アジュバントをさらに含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
請求項１〜２１のいずれかに記載の発現カセットのうちの少なくとも１つによりコードされるさらなるｅｎｖポリペプチドをさらに含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４９】
免疫応答を誘導するための薬学的組成物であって、該組成物は、被験体に対する同時刺激または連続刺激に適する、請求項１〜１７にいずれか１項に記載のｅｎｖポリペプチドをコードする発現カセットを含む、組成物。
【請求項５０】
ＨＩＶの処置において使用するための、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
アジュバントをさらに含む、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５２】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成するための方法であって、該方法は、請求項２１〜２６に記載の細胞を、該ＶＬＰを生成するための条件下でインキュベートする工程を包含する、方法。
【請求項５３】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）の組成物を生成するための方法であって、該方法は、（ａ）請求項２１〜２６に記載の細胞を、該ＶＬＰを生成するための条件下でインキュベートする工程；および（ｂ）該ＶＬＰを実質的に精製して、ＶＬＰの組成物を生成する工程を包含する、方法。
【請求項５４】
明細書中に記載の発明。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図７Ｄ】

【図７Ｅ】

【図７Ｆ】

【図７Ｇ】

【図７Ｈ】

【図７Ｉ】

【図７Ｊ】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２−１】

【図２２−２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０Ａ】

【図４０Ｂ】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９】

【図６０】

【図６１Ａ】

【図６１Ｂ】

【図６２Ａ】

【図６２Ｂ】

【図６３Ａ】

【図６３Ｂ】

【図６４Ａ】

【図６４Ｂ】

【図６５】

【図６６−１】

【図６６−２】

【図６６−３】

【図６６−４】

【図６６−５】

【図６６−６】

【図６６−７】

【図６６−８】

【図６６−９】

【図６６−１０】

【図６６−１１】

【図６６−１２】

【図６６−１３】

【図６６−１４】

【図６６−１５】

【図６６−１６】

【図６６−１７】

【図６６−１８】

【図６６−１９】

【図６６−２０】

【図６６−２１】

【図６６−２２】

【図６６−２３】

【図６６−２４】

【図６６−２５】

【図６６−２６】

【図６６−２７】

【図６６−２８】

【図６６−２９】

【図６６−３０】

【図６６−３１】

【図６６−３２】

【図６７】

【図６８】

【図６９】

【図７０】

【図７１Ａ】

【図７１Ｂ】

【図７２Ａ】

【図７２Ｂ】

【図７３Ａ】

【図７３Ｂ】

【図７４Ａ】

【図７４Ｂ】

【図７５Ａ】

【図７５Ｂ】

【図７６】

【図７７】

【図７８】

【図７９】

【図８０−１】

【図８０−２】

【図８０−３】

【図８０−４】

【図８０−５】

【図８１】

【図８２】

【公開番号】特開２０１１−１９５３４（Ｐ２０１１−１９５３４Ａ）
【公開日】平成２３年２月３日（２０１１．２．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２３４０５９（Ｐ２０１０−２３４０５９）
【出願日】平成２２年１０月１８日（２０１０．１０．１８）
【分割の表示】特願２０００−５９１１９３（Ｐ２０００−５９１１９３）の分割
【原出願日】平成１１年１２月３０日（１９９９．１２．３０）
【出願人】（５９１０７６８１１）ノバルティス　バクシンズ　アンド　ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド (265)
【Ｆターム（参考）】