ＩＩ型コラーゲン産生促進剤
【課題】本発明は、効果的で安全性の高いＩＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明は、アカショウマの抽出物を含有することを特徴とする。製剤形態は種々のものが選択できる。投与量は、使用目的、年齢、体重、症状、治療効果等によって異なるが、好ましくは体重１ｋｇ当り０．０２〜２０ｍｇ、特に好ましくは、０．１〜１０ｍｇである。本発明は、軟骨組織減少の予防・改善を目的とする医薬品、医薬部外品及び食品等に有用である。
【解決手段】本発明は、アカショウマの抽出物を含有することを特徴とする。製剤形態は種々のものが選択できる。投与量は、使用目的、年齢、体重、症状、治療効果等によって異なるが、好ましくは体重１ｋｇ当り０．０２〜２０ｍｇ、特に好ましくは、０．１〜１０ｍｇである。本発明は、軟骨組織減少の予防・改善を目的とする医薬品、医薬部外品及び食品等に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アカショウマの抽出物を含有することを特徴とするＩＩ型コラーゲン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは、代表的な微繊維状のタンパク質で、皮膚、骨、軟骨、血管などの結合組織の主成分をなす細胞外マトリックスタンパク質である。哺乳類、特にヒトでは体の総タンパク質の３０％近くをコラーゲンが占める。多種類のコラーゲン分子が発見されており、これらは互いに遺伝子が異なる。最も多いＩ型は、主に皮膚、骨、腱に、ＩＩ型は軟骨に、ＩＩＩ型は血管に、ＩＶ型は基底膜に存在する。
【０００３】
軟骨は、軟骨細胞と軟骨基質で構成されており、軟骨基質は、高分子のプロテオグリカンとＩＩ型コラーゲンから出来ている。ＩＩ型コラーゲンは、軟骨湿重量の１５〜２２％、乾燥重量の約８０〜９０％を占める軟骨の主要構成成分である。コラーゲン線維は、支持体としての役割の他に、軟骨細胞の伸展、増殖及び分化を決定する重要な役割を果たしている。
【０００４】
従って、軟骨の若さを保ち健康を維持する上で、コラーゲン産生細胞によるコラーゲン産生を促進して、加齢などによるコラーゲンの減少を抑えることが望ましい。又、軟骨細胞におけるコラーゲン産生を促進させることは、変形性関節症を予防する上でも有効である。
【０００５】
上記に鑑み、軟骨の減少を予防する技術として、豚の皮膚から煮沸抽出したコラーゲンを更に精製抽出したコラーゲン（ゼラチン）を摂取する方法（特許文献１）や、軟骨形成を促進させる技術として、ＩＩ型コラーゲンの生合成に必要な成分である必須アミノ酸、ビタミンＣ、鉄、コラーゲン、α−ケトグルタル酸を摂取する方法（特許文献２）がある。又、特許文献３には、ベンゾチエピン誘導体に、特許文献４には、新規ポリペプチドにＩＩ型コラーゲン合成促進作用が示されている。
【０００６】
しかし、前述した特許文献１及び２は、ＩＩ型コラーゲンの産生を直接促進するものではない。特許文献３に記載されたベンゾチエピン誘導体は、化学合成による新規な化学物質である。又、特許文献４に記載されたポリペプチドは、遺伝子組み換え微生物を利用した新規なポリペプチドである。従って、何れも長期摂取における安全性に不安があり、又、容易に入手できるものではない。
【０００７】
【特許文献１】特開第２００５−０８９４３５号公報
【特許文献２】特開第２００７−１６１６８８号公報
【特許文献３】特開第２０００−７２６７８号公報
【特許文献４】特開表２００２−０４２４４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、直接ＩＩ型コラーゲン産生を促進するもので、容易に入手することが出来かつ長期摂取が可能な天然物由来の素材の提供を目的とする。
【０００９】
本発明に関わるアカショウマとは、ユキノシタ科チケダサシ属の植物で、学名を「Ａｓｔｉｌｂｅ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（Ｓｉｅｂ. ｅｔ Ｚｕｃｃ．）Ｍｉｑ．Ｖａｒ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ」という。日本では本州、四国、九州各地の山地に自生する高さ４０〜８０ｃｍの多年草である。古来より、下熱、解毒、消炎等の目的で漢方として用いられてきた。既に、むくみ予防剤（特許文献５）、血中コレステロール低減剤（特許文献６）、ＴＮＦ−α産生抑制剤及び一酸化窒素産生抑制剤（特許文献７）等が開示されている。
【００１０】
【特許文献５】特開第２０１０−００１２７９号公報
【特許文献６】特開第２００９−１０２４１９号公報
【特許文献７】特開第２００７−００８８１７号公報
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、アカショウマエキスが、ＩＩ型コラーゲン産生促進効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明に関わるアカショウマの抽出物は、アカショウマの根を抽出することによって得られる。抽出に用いるアカショウマは、生及び乾燥物の何れも用いることができる。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出、常温抽出等を適宜選択することができる。又、アカショウマの抽出物は、市販品を用いることもできる。
【００１３】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。これらの溶媒は、１種でも２種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、含水エタノールである。
【００１４】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。更に、濃縮乾固物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物等として用いることもできる。
【００１５】
本発明に関わるＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内において、他の成分を配合することもできる。他の成分としては、固体、液体、半固体でも良く、例えば、次のものが挙げられる。すなわち、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、香料、保存料、溶解補助剤、溶剤等である。具体的には、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロース又はその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、界面活性剤、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、オリーブ油、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等である。
【００１６】
本発明に用いるＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、医薬品、医薬部外品及び食品等として用いることができる。製剤形態は、種々のものを選択でき、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤等である。非経口用としては、注射薬、座薬等の剤型が挙げられる。
【００１７】
本発明に関わる抽出物の配合量は、製剤形態、使用目的等によって異なるが、通常、乾燥固形分として０．００１〜１００重量％、好ましくは０．０１〜５０．０重量％である。本発明に関わる抽出物の１日の投与量は、使用目的、年齢、体重、症状、治療効果等によって異なるが、体重１ｋｇ当り０．０２〜２０ｍｇ、特に好ましくは、０．１〜１０ｍｇである。製剤への添加法は、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【発明の効果】
【００１８】
本発明に関わるＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、優れたＩＩ型コラーゲン産生促進効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明は、これに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは、重量部を示し、％は重量％を示す。
【実施例１】
【００２０】
製造例１ アカショウマの熱水抽出物
アカショウマの乾燥根１００ｇに精製水２ｋｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を５．０ｇ得た。
【００２１】
製造例２ アカショウマの５０％エタノール抽出物
アカショウマの乾燥根１００ｇに精製水１ｋｇ及びエタノール１ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して５０％エタノール抽出物を４．２ｇ得た。
【００２２】
製造例３ アカショウマのエタノール抽出物
アカショウマの乾燥根１００ｇにエタノール２ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してエタノール抽出物を３．１ｇ得た。
【実施例２】
【００２３】
散剤
処方 配合量（部）
１．アカショウマの熱水抽出物（製造例１） ２０
２．乾燥コーンスターチ ３０
３．微結晶セルロース ５０
［製法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【実施例３】
【００２４】
錠剤
処方 配合量（部）
１．アカショウマのエタノール抽出物（製造例３） １
２．乾燥コーンスターチ ２９
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム ２０
４．微結晶セルロース ４０
５．ポリビニルピロリドン ７
６．タルク ３
［製法］成分１〜５を混合し、次いで１０％の水を結合剤として加えて、押出し造粒後、乾燥する。成形した顆粒に成分６を加えて混合し、打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【実施例４】
【００２５】
錠菓
処方 配合量（部）
１．アカショウマの５０％エタノール抽出物（製造例２） １．５
２．乾燥コーンスターチ ５０．０
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．４
６．香料 ０．１
［製法］成分１〜４を混合し、全量に対して１０％の水を噴霧して流動層造粒する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて混合し、打錠する。１粒１．０ｇとする。
【実施例５】
【００２６】
飲料
処方 配合量（部）
１．アカショウマの５０％エタノール抽出物（製造例２） １．０
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．精製水 ９３．８５
［製法］成分１〜４を成分５の一部の精製水に撹拌溶解する。次いで、成分５の残りの精製水を加えて混合し、９０℃に加熱して５０ｍＬのガラス瓶に充填する。
【００２７】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００２８】
実験例 アカショウマにおけるＩＩ型コラーゲン産生促進効果の確認
軟骨前駆細胞ＡＴＤＣ５をＤＭＥＭ／Ｆ−１２（１：１）（ＧＩＢＣＯ社製）＋５％ＦＢＳ中に懸濁し、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ウェルの濃度にて、１２ウェルプレートに播種した。細胞播種２日後、培養液を分化誘導培地（ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（１：１）（ＧＩＢＣＯ社製）＋５％ＦＢＳ＋１％ＩＴＳ（ＧＩＢＣＯ社製））に置換え、分化を開始した。ＩＴＳとは、Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ−Ｓｅｌｅｎｉｕｍ−ＧＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（１００×）のことである。分化開始７日目に無血清のＤＭＥＭ／Ｆ−１２（１：１）培地に交換し、水溶性アカショウマエキス（ビーエイチエヌ社製）を添加した。水溶性アカショウマエキスとは、アカショウマの５０％エタノール抽出物から、水不溶性の成分を除去したエキスである。比較として、変形性関節症に対する効果が確認されているＳＡＭｅ、及びＩ型コラーゲンの産生促進効果が認められているコラーゲントリペプチド(ゼライス社製)の添加群を設けた。試料添加２４時間後、ＴＲＩＺＯＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを基に、ＲＴ−ＰＣＲ法によりＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡの発現量を測定した。ＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ ｑＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いた。ＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨの発現量にて規格化し、比較を行った。尚、各遺伝子の発現の測定に使用したプライマーは、次の通りである。
【００２９】
ＩＩ型コラーゲン用のプライマーセット
ＧＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＡＡＡ （配列番号１）
ＴＣＧＣＣＡＴＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡ （配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＧＡＧＡＡＡＣＣＴＧＣＣＡＡＧＴＡＴＧ （配列番号３）
ＣＣＣＴＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＴＴＣＡ （配列番号４）
【００３０】
定量化は、ΔΔＣｔ法にて行い、試料未添加時のＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現量に対するアカショウマエキス添加時のＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現量を算出した。表１に示す通り、アカショウマエキスを添加することにより、軟骨前駆細胞ＡＴＤＣ５におけるＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現の上昇が認められた。ＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡの発現は、添加するアカショウマエキスの濃度に依存しており、未添加時と比較して、３０μｇ／ｍＬ添加時には約１．６倍の発現上昇が認められた。又、変形性関節症改善物質として既知であるＳＡＭｅや線維芽細胞にてＩ型コラーゲンの産生促進効果が認められているコラーゲントリペプチドよりも効果が高く、アカショウマエキスが、ＩＩ型コラーゲン産生促進剤として極めて優れることが判明した。
【００３１】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明に関わるアカショウマの抽出物を含有することを特徴とするＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、各剤の目的に対して優れた改善効果を発揮する。よって、軟骨組織減少の予防・改善を目的とする医薬品、医薬部外品及び食品等に有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アカショウマの抽出物を含有することを特徴とするＩＩ型コラーゲン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは、代表的な微繊維状のタンパク質で、皮膚、骨、軟骨、血管などの結合組織の主成分をなす細胞外マトリックスタンパク質である。哺乳類、特にヒトでは体の総タンパク質の３０％近くをコラーゲンが占める。多種類のコラーゲン分子が発見されており、これらは互いに遺伝子が異なる。最も多いＩ型は、主に皮膚、骨、腱に、ＩＩ型は軟骨に、ＩＩＩ型は血管に、ＩＶ型は基底膜に存在する。
【０００３】
軟骨は、軟骨細胞と軟骨基質で構成されており、軟骨基質は、高分子のプロテオグリカンとＩＩ型コラーゲンから出来ている。ＩＩ型コラーゲンは、軟骨湿重量の１５〜２２％、乾燥重量の約８０〜９０％を占める軟骨の主要構成成分である。コラーゲン線維は、支持体としての役割の他に、軟骨細胞の伸展、増殖及び分化を決定する重要な役割を果たしている。
【０００４】
従って、軟骨の若さを保ち健康を維持する上で、コラーゲン産生細胞によるコラーゲン産生を促進して、加齢などによるコラーゲンの減少を抑えることが望ましい。又、軟骨細胞におけるコラーゲン産生を促進させることは、変形性関節症を予防する上でも有効である。
【０００５】
上記に鑑み、軟骨の減少を予防する技術として、豚の皮膚から煮沸抽出したコラーゲンを更に精製抽出したコラーゲン（ゼラチン）を摂取する方法（特許文献１）や、軟骨形成を促進させる技術として、ＩＩ型コラーゲンの生合成に必要な成分である必須アミノ酸、ビタミンＣ、鉄、コラーゲン、α−ケトグルタル酸を摂取する方法（特許文献２）がある。又、特許文献３には、ベンゾチエピン誘導体に、特許文献４には、新規ポリペプチドにＩＩ型コラーゲン合成促進作用が示されている。
【０００６】
しかし、前述した特許文献１及び２は、ＩＩ型コラーゲンの産生を直接促進するものではない。特許文献３に記載されたベンゾチエピン誘導体は、化学合成による新規な化学物質である。又、特許文献４に記載されたポリペプチドは、遺伝子組み換え微生物を利用した新規なポリペプチドである。従って、何れも長期摂取における安全性に不安があり、又、容易に入手できるものではない。
【０００７】
【特許文献１】特開第２００５−０８９４３５号公報
【特許文献２】特開第２００７−１６１６８８号公報
【特許文献３】特開第２０００−７２６７８号公報
【特許文献４】特開表２００２−０４２４４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、直接ＩＩ型コラーゲン産生を促進するもので、容易に入手することが出来かつ長期摂取が可能な天然物由来の素材の提供を目的とする。
【０００９】
本発明に関わるアカショウマとは、ユキノシタ科チケダサシ属の植物で、学名を「Ａｓｔｉｌｂｅ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（Ｓｉｅｂ. ｅｔ Ｚｕｃｃ．）Ｍｉｑ．Ｖａｒ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ」という。日本では本州、四国、九州各地の山地に自生する高さ４０〜８０ｃｍの多年草である。古来より、下熱、解毒、消炎等の目的で漢方として用いられてきた。既に、むくみ予防剤（特許文献５）、血中コレステロール低減剤（特許文献６）、ＴＮＦ−α産生抑制剤及び一酸化窒素産生抑制剤（特許文献７）等が開示されている。
【００１０】
【特許文献５】特開第２０１０−００１２７９号公報
【特許文献６】特開第２００９−１０２４１９号公報
【特許文献７】特開第２００７−００８８１７号公報
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、アカショウマエキスが、ＩＩ型コラーゲン産生促進効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明に関わるアカショウマの抽出物は、アカショウマの根を抽出することによって得られる。抽出に用いるアカショウマは、生及び乾燥物の何れも用いることができる。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出、常温抽出等を適宜選択することができる。又、アカショウマの抽出物は、市販品を用いることもできる。
【００１３】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。これらの溶媒は、１種でも２種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、含水エタノールである。
【００１４】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。更に、濃縮乾固物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物等として用いることもできる。
【００１５】
本発明に関わるＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内において、他の成分を配合することもできる。他の成分としては、固体、液体、半固体でも良く、例えば、次のものが挙げられる。すなわち、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、香料、保存料、溶解補助剤、溶剤等である。具体的には、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロース又はその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、界面活性剤、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、オリーブ油、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等である。
【００１６】
本発明に用いるＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、医薬品、医薬部外品及び食品等として用いることができる。製剤形態は、種々のものを選択でき、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤等である。非経口用としては、注射薬、座薬等の剤型が挙げられる。
【００１７】
本発明に関わる抽出物の配合量は、製剤形態、使用目的等によって異なるが、通常、乾燥固形分として０．００１〜１００重量％、好ましくは０．０１〜５０．０重量％である。本発明に関わる抽出物の１日の投与量は、使用目的、年齢、体重、症状、治療効果等によって異なるが、体重１ｋｇ当り０．０２〜２０ｍｇ、特に好ましくは、０．１〜１０ｍｇである。製剤への添加法は、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【発明の効果】
【００１８】
本発明に関わるＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、優れたＩＩ型コラーゲン産生促進効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明は、これに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは、重量部を示し、％は重量％を示す。
【実施例１】
【００２０】
製造例１ アカショウマの熱水抽出物
アカショウマの乾燥根１００ｇに精製水２ｋｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を５．０ｇ得た。
【００２１】
製造例２ アカショウマの５０％エタノール抽出物
アカショウマの乾燥根１００ｇに精製水１ｋｇ及びエタノール１ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して５０％エタノール抽出物を４．２ｇ得た。
【００２２】
製造例３ アカショウマのエタノール抽出物
アカショウマの乾燥根１００ｇにエタノール２ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してエタノール抽出物を３．１ｇ得た。
【実施例２】
【００２３】
散剤
処方 配合量（部）
１．アカショウマの熱水抽出物（製造例１） ２０
２．乾燥コーンスターチ ３０
３．微結晶セルロース ５０
［製法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【実施例３】
【００２４】
錠剤
処方 配合量（部）
１．アカショウマのエタノール抽出物（製造例３） １
２．乾燥コーンスターチ ２９
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム ２０
４．微結晶セルロース ４０
５．ポリビニルピロリドン ７
６．タルク ３
［製法］成分１〜５を混合し、次いで１０％の水を結合剤として加えて、押出し造粒後、乾燥する。成形した顆粒に成分６を加えて混合し、打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【実施例４】
【００２５】
錠菓
処方 配合量（部）
１．アカショウマの５０％エタノール抽出物（製造例２） １．５
２．乾燥コーンスターチ ５０．０
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．４
６．香料 ０．１
［製法］成分１〜４を混合し、全量に対して１０％の水を噴霧して流動層造粒する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて混合し、打錠する。１粒１．０ｇとする。
【実施例５】
【００２６】
飲料
処方 配合量（部）
１．アカショウマの５０％エタノール抽出物（製造例２） １．０
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．精製水 ９３．８５
［製法］成分１〜４を成分５の一部の精製水に撹拌溶解する。次いで、成分５の残りの精製水を加えて混合し、９０℃に加熱して５０ｍＬのガラス瓶に充填する。
【００２７】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００２８】
実験例 アカショウマにおけるＩＩ型コラーゲン産生促進効果の確認
軟骨前駆細胞ＡＴＤＣ５をＤＭＥＭ／Ｆ−１２（１：１）（ＧＩＢＣＯ社製）＋５％ＦＢＳ中に懸濁し、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ウェルの濃度にて、１２ウェルプレートに播種した。細胞播種２日後、培養液を分化誘導培地（ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（１：１）（ＧＩＢＣＯ社製）＋５％ＦＢＳ＋１％ＩＴＳ（ＧＩＢＣＯ社製））に置換え、分化を開始した。ＩＴＳとは、Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ−Ｓｅｌｅｎｉｕｍ−ＧＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（１００×）のことである。分化開始７日目に無血清のＤＭＥＭ／Ｆ−１２（１：１）培地に交換し、水溶性アカショウマエキス（ビーエイチエヌ社製）を添加した。水溶性アカショウマエキスとは、アカショウマの５０％エタノール抽出物から、水不溶性の成分を除去したエキスである。比較として、変形性関節症に対する効果が確認されているＳＡＭｅ、及びＩ型コラーゲンの産生促進効果が認められているコラーゲントリペプチド(ゼライス社製)の添加群を設けた。試料添加２４時間後、ＴＲＩＺＯＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを基に、ＲＴ−ＰＣＲ法によりＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡの発現量を測定した。ＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ ｑＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いた。ＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨの発現量にて規格化し、比較を行った。尚、各遺伝子の発現の測定に使用したプライマーは、次の通りである。
【００２９】
ＩＩ型コラーゲン用のプライマーセット
ＧＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＡＡＡ （配列番号１）
ＴＣＧＣＣＡＴＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡ （配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＧＡＧＡＡＡＣＣＴＧＣＣＡＡＧＴＡＴＧ （配列番号３）
ＣＣＣＴＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＴＴＣＡ （配列番号４）
【００３０】
定量化は、ΔΔＣｔ法にて行い、試料未添加時のＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現量に対するアカショウマエキス添加時のＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現量を算出した。表１に示す通り、アカショウマエキスを添加することにより、軟骨前駆細胞ＡＴＤＣ５におけるＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現の上昇が認められた。ＩＩ型コラーゲンｍＲＮＡの発現は、添加するアカショウマエキスの濃度に依存しており、未添加時と比較して、３０μｇ／ｍＬ添加時には約１．６倍の発現上昇が認められた。又、変形性関節症改善物質として既知であるＳＡＭｅや線維芽細胞にてＩ型コラーゲンの産生促進効果が認められているコラーゲントリペプチドよりも効果が高く、アカショウマエキスが、ＩＩ型コラーゲン産生促進剤として極めて優れることが判明した。
【００３１】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明に関わるアカショウマの抽出物を含有することを特徴とするＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、各剤の目的に対して優れた改善効果を発揮する。よって、軟骨組織減少の予防・改善を目的とする医薬品、医薬部外品及び食品等に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アカショウマの抽出物を含有することを特徴とするＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項１】
アカショウマの抽出物を含有することを特徴とするＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
【公開番号】特開２０１１−２１３６９４（Ｐ２０１１−２１３６９４Ａ）
【公開日】平成２３年１０月２７日（２０１１．１０．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−８５９６０（Ｐ２０１０−８５９６０）
【出願日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１０月２７日（２０１１．１０．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
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