ＩＳＬＥＴ１＋系統に入るように細胞を誘導する方法およびそれを拡大する方法
本発明は、Islet 1+（Isl1+）系統に入るように細胞を誘導するための方法、およびislet 1+系統の細胞を拡大するための方法に関する。本発明の1局面は、islet 1+系統に入るように細胞を誘導する方法、より特には、Isl1+系統に入り、内皮系統、平滑筋系統、または心臓系統などの複数の異なる系統に沿って分化することができるIsl1+前駆体となるように細胞を誘導する方法に関する。特に、本発明の1態様は、細胞においてwntシグナル伝達経路を阻害することによって、細胞がIsl1+系統に入るように誘導する方法に関する。本発明の別の局面は、Isl1+前駆体においてwntシグナル伝達経路を活性化させることによって、Isl1+前駆体などのIsl1+系統の細胞を拡大する方法に関する。本発明の別の局面は、心血管疾患の治療的および予防的処置のための、被験体におけるisl1+系統の細胞の使用に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、islet 1+系統に入るように細胞を誘導するための方法：
i．間葉細胞フィーダー層の存在下で細胞を培養する工程；
ii．該細胞および／または該間葉細胞フィーダー層と少なくとも1つのwnt阻害剤とを接触させる工程であって、該wnt阻害剤が該細胞においてWntシグナル伝達経路を阻害する、工程；および
iii．islet 1+系統へ該細胞が入ることを促進するのに十分な期間、該細胞を培養する工程；
ここで、該細胞におけるWnt経路の阻害によって、該細胞がislet 1+系統に入るよう誘導される。
【請求項２】
islet 1+系統に入った細胞が多能性islet 1+前駆体である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
多能性islet 1+前駆体がNkx2.5およびflk1についても陽性である、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
多能性islet 1+前駆体が、内皮系統、心臓系統、平滑筋系統、筋細胞系統、神経系統、自律神経系統へ、多系統分化することができる、請求項1、2、または3記載の方法。
【請求項５】
多能性islet 1+前駆体が、内皮系統、心臓系統、および平滑筋系統へ分化することができる、請求項1、2、3、または4記載の方法。
【請求項６】
多能性islet 1+前駆体が、Islet 1 mRNAまたはIslet 1タンパク質の発現について陽性である、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
細胞が前駆体である、請求項1記載の方法。
【請求項８】
前駆体が中胚葉前駆体である、請求項1または7記載の方法。
【請求項９】
中胚葉前駆体が遺伝子操作された前駆体である、請求項1、7、または8記載の方法。
【請求項１０】
遺伝子操作された前駆体が、少なくとも1つのwnt阻害剤をコードする核酸配列を含み、該wnt阻害剤をコードする核酸配列が、調節配列またはプロモーター配列へ機能的に連結されている、請求項1、7、8、または9記載の方法。
【請求項１１】
遺伝子操作された前駆体が、レポーター遺伝子をコードする核酸配列を含み、該レポーター遺伝子をコードする核酸配列が、調節配列へ機能的に連結されている、請求項1、7、8、または9記載の方法。
【請求項１２】
Wnt経路がWnt/β-カテニンシグナル伝達経路である、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
間葉細胞フィーダー層が、心臓間葉細胞（CMC）フィーダー層である、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
間葉細胞フィーダー層が、遺伝子操作された間葉細胞フィーダー層である、請求項1または13記載の方法。
【請求項１５】
遺伝子操作された間葉細胞フィーダー層が、少なくとも1つのwnt阻害剤をコードする核酸配列を含み、該wnt阻害剤をコードする核酸配列が、調節配列へ機能的に連結されている、請求項1または14記載の方法。
【請求項１６】
wnt阻害剤が、核酸、タンパク質、小分子、抗体、またはアプタマーである、請求項1、10、14、または15記載の方法。
【請求項１７】
wnt阻害剤が、タンパク質もしくはそのフラグメントをコードする核酸、小阻害性核酸分子（small inhibitory nucleic acid molecule）、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスオリゴ核酸（ODN）、PNA、DNA、または核酸アナログである、請求項1、10、14、15、または16記載の方法。
【請求項１８】
核酸が、DNA、RNA、または核酸アナログである、請求項16または17記載の方法。
【請求項１９】
核酸アナログが、ペプチド−核酸（PNA）、pcPNA、固定化（locked）核酸（LNA）、およびそれらのアナログを含む、請求項16または17記載の方法。
【請求項２０】
wnt阻害剤がWntまたはWnt3を阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
wnt阻害剤が、Wls/Evi、Frizzled、Dsh（disheveled）、LRP-5、LRP-6、Dally、Dally-like、PAR1、β-カテニニン（β-cateninin）、TCF、lef-1、またはFrodoを阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
wnt阻害剤がWls/Eviを阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
wnt阻害剤が、Wls/EviのRNA転写産物を阻害するRNAi剤である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
RNAi剤がSEQ ID NO：1（siWLS-A）またはSEQ ID NO：2（siWLS-B）に対応する、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
wnt阻害剤が、Dickkopf-1（DKK1）、WIF-1、cerberus、分泌型frizzled関連タンパク質（sFRP）、sFRP-1、sFRP-2、18型コラーゲン（XVIII型コラーゲン）、エンドスタチン、カルボキシペプチダーゼZ、受容体チロシンキナーゼ、corin、Dgl、Dapper、百日咳毒素、naked、Frz関連タンパク質、または細胞内ドメインを欠くLRPからなる群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
wnt阻害剤がβ-カテニニンを阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
β-カテニンのインヒビターが、タンパク質ホスファターゼ2A（PP2A）、chibby、promtin 52、Nemo/LNKキナーゼ、MHG homobox因子、XSox17、HBP1、APC、Axin、disabled-2（dab-2）、およびgruncho（grg）からなる群より選択される、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
wnt阻害剤が、GSK-3および／またはGSK3βの活性および／または発現を増加させる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
wnt阻害剤がGSK3βのペプチドである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
wnt阻害剤が、GSK3βペプチド、PKB経路を活性化する薬剤、またはウォルタンニン（wortannin）からなる群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
wnt阻害剤がDKK1のペプチドである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
細胞が幹細胞または前駆細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項３３】
幹細胞が、多能性幹細胞；胚性幹（ES）細胞、生後幹細胞、成体幹細胞、または胚様体からなる幹細胞の群より選択される、請求項1または32記載の方法。
【請求項３４】
前駆細胞が中胚葉前駆細胞である、請求項1または32記載の方法。
【請求項３５】
細胞が組織から誘導されるかまたは得られる、請求項1、32、33、または34記載の方法。
【請求項３６】
組織がヒト組織である、請求項1、32、33、34、または35記載の方法。
【請求項３７】
組織が、胚、胎児、生後、または成体の組織である、請求項1、32、33、34、35、または36記載の方法。
【請求項３８】
組織が、心臓組織、線維芽細胞、心臓線維芽細胞、循環内皮前駆体、膵臓、肝臓、脂肪組織、骨髄、腎臓、膀胱、口蓋、臍帯、羊水、皮膚組織、皮膚、筋肉、脾臓、胎盤、骨、神経組織、または上皮組織である、請求項1または請求項32〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
組織が心臓組織である、請求項1または請求項32〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
組織が、後天性もしくは先天性の心臓欠損（cardiac heart defect）、疾患、障害、または機能不全を有する被験体由来である、請求項1または請求項32〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項４１】
細胞が哺乳動物細胞である、請求項1または請求項32〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
細胞が遺伝子操作された細胞である、請求項1または請求項32〜41のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物がヒトである、請求項41記載の方法。
【請求項４４】
哺乳動物がげっ歯動物である、請求項41記載の方法。
【請求項４５】
げっ歯動物がマウスまたはラットである、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
マウスまたはラットが遺伝子操作されたマウスである、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
Islet 1+前駆体の集団を拡大するための方法であって、該方法が、Islet 1+前駆体と少なくとも1つのwnt活性化剤とを接触させる工程であって、該wnt活性化剤が該Islet 1+前駆体においてWntシグナル伝達を増加させる、工程、および、該Islet 1+前駆体の複製に十分な期間培養する工程であって、該Islet 1+前駆体の集団が増加される、工程を含む、方法。
【請求項４８】
islet 1+前駆体が請求項1〜46のいずれか一項記載の方法によって得られる、請求項47記載の方法。
【請求項４９】
islet 1+前駆体をフィーダー層の存在下で培養することをさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項５０】
フィーダー層が間葉フィーダー層である、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
フィーダー層が、遺伝子操作された間葉フィーダー層である、請求項49および50記載の方法。
【請求項５２】
遺伝子操作された間葉フィーダー層が、少なくとも1つのwnt活性化剤をコードする核酸を含み、該wnt活性化剤をコードする核酸が、調節配列またはプロモーター配列へ機能的に連結されている、請求項49、50、および51記載の方法。
【請求項５３】
islet 1+前駆体が、遺伝子操作されたislet 1+前駆体である、請求項47記載の方法。
【請求項５４】
遺伝子操作されたislet 1+前駆体が、少なくとも1つのwnt活性化剤をコードする核酸配列を含む、請求項47または53記載の方法。
【請求項５５】
遺伝子操作されたislet 1+前駆体が、レポーター遺伝子をコードする核酸配列を含み、該レポーター遺伝子をコードする核酸が、調節配列へ機能的に連結されている、請求項47、53、または54記載の方法。
【請求項５６】
拡大されたIslet 1+前駆体を分化させる工程をさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項５７】
Islet 1+前駆体を分化させる工程が、islet 1+前駆体の分化を可能にするのに十分な時間、islet 1+前駆体と1つまたは複数の分化誘導剤とを接触させる工程を含む、請求項56記載の方法。
【請求項５８】
islet 1+前駆体がNkx2.5およびflk1についても陽性である、請求項47〜57のいずれか一項記載の方法。
【請求項５９】
Wnt経路がWnt/β-カテニンシグナル伝達経路である、請求項47記載の方法。
【請求項６０】
wnt活性化剤が、核酸、タンパク質、小分子、抗体、またはアプタマーである、請求項47〜59のいずれか一項記載の方法。
【請求項６１】
wnt活性化剤が、タンパク質もしくはそのフラグメントをコードする核酸、小阻害性核酸分子、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスオリゴ核酸（ODN）、PNA、DNA、または核酸アナログである、請求項47〜60のいずれか一項記載の方法。
【請求項６２】
核酸が、DNA、RNA、または核酸アナログである、請求項60または61記載の方法。
【請求項６３】
核酸アナログが、ペプチド−核酸（PNA）、pcPNA、固定化核酸（LNA）、ならびにそれらのアナログおよび誘導体を含む、請求項61または62記載の方法。
【請求項６４】
wnt活性化剤がGSK3の発現および／または活性を阻害する、請求項47〜63のいずれか一項記載の方法。
【請求項６５】
GSK3がGSK3βである、請求項64記載の方法。
【請求項６６】
wnt活性化剤が、6-ブロモインジルビン-3'-オキシム（BIO）またはそのアナログである、請求項47〜65のいずれか一項記載の方法。
【請求項６７】
BIOアナログが、BIOのアセトキシムアナログまたは1-アザケンパウリン（1-Azakenpaulline）またはその機能的アナログである、請求項66記載の方法。
【請求項６８】
wnt活性化剤が、SEQ ID NO：3またはその機能的フラグメントを含むGSK3βのペプチドインヒビターである、請求項47〜67のいずれか一項記載の方法。
【請求項６９】
wnt活性化剤が、リチウム、LiCl、レチノイン酸、Ro31-8220、またはそれらのアナログである、請求項47〜68のいずれか一項記載の方法。
【請求項７０】
wnt活性化剤が、wntおよび／もしくはwnt3aまたはそれらのホモログの発現および／または活性を増加させる、請求項47〜59のいずれか一項記載の方法。
【請求項７１】
wnt活性化剤が、Wls/Evi、Frizzled、Dsh（disheveled）、LRP-5、LRP-6、Dally、Dally-like、PAR1、β-カテニニン、TCF、lef-1、またはFrodoであるか、またはこれらからなる群の発現および／または生物学的活性を増加させる、請求項47〜69のいずれか一項記載の方法。
【請求項７２】
wnt活性化剤が、Dickkopf-1（DKK1）、WIF-1、cerbertus、分泌型frizzled関連タンパク質（sFRP）、sFRP-1、sFRP-2、18型コラーゲン（XVIII型コラーゲン）、エンドスタチン、カルボキシペプチダーゼZ、受容体チロシンキナーゼ、corin、Dgl、Dapper、百日咳毒素、naked、Frz関連タンパク質、細胞内ドメインを欠くLRP、APC、Axin、dab-2、gruncho、PP2A、chibby、pontin 52、およびNemo/LNKキナーゼからなる群の発現および／または生物学的活性を阻害する、請求項47〜71のいずれか一項記載の方法。
【請求項７３】
wnt活性化剤が、β-カテニンまたはその生物学的に活性なフラグメントもしくはホモログである、請求項47〜72のいずれか一項記載の方法。
【請求項７４】
β-カテニンのホモログが、安定化β-カテニンホモログである、請求項73記載の方法。
【請求項７５】
安定化β-カテニンホモログが、D32Y、D32G、S33F、S33Y、G34E、S37C、S37F、T41I、S45Yからなる群より選択されるいずれかのアミノ酸変化を有するβ-カテニン、およびアミノ酸AA1-173が欠失しているβ-カテニンである、請求項74記載の方法。
【請求項７６】
wnt活性化剤が、β-カテニニン発現を活性化および／または安定化する、請求項47〜75のいずれか一項記載の方法。
【請求項７７】
wnt活性化剤が、Frodo、TCF、pitz2、Pretin 52、legless（lgs）、pygopus（pygo）、hyrax/parafnomin、およびLKB1/XEEK1の群より選択される、請求項47〜76のいずれか一項記載の方法。
【請求項７８】
細胞増殖または複製を促進する1つまたは複数の薬剤と共にislet 1+前駆体を培養する工程をさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項７９】
分化を阻害する1つまたは複数の薬剤と共にislet 1+前駆体を培養する工程をさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項８０】
islet 1+前駆体が続いて低温保存される、請求項1〜79のいずれか一項記載の方法。
【請求項８１】
核酸が、ベクターによって前駆細胞または間葉細胞フィーダー層へ送達される、請求項14〜15または51〜55のいずれか一項記載の方法。
【請求項８２】
ベクターがウイルスベクターである、請求項81記載の方法。
【請求項８３】
ベクターが非ウイルスベクターまたは裸の核酸である、請求項82記載の方法。
【請求項８４】
ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターからなる群より選択される、請求項81または82記載の方法。
【請求項８５】
ベクターが、調節配列またはプロモーター配列へ機能的に連結された核酸を含む、請求項81記載の方法。
【請求項８６】
調節配列が誘導性プロモーターである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項８７】
プロモーターが組織特異的プロモーターである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項８８】
ベクターが、誘導性プロモーターへ機能的に連結されたwnt活性化剤をコードする核酸、および、異なる誘導性プロモーターへ機能的に連結されたwnt阻害剤をコードする核酸を含む、請求項85記載の方法。
【請求項８９】
wnt阻害剤へ機能的に連結された誘導性プロモーターが、wnt活性化剤へ機能的に連結された誘導性プロモーターと反対に調節される、請求項88記載の方法。
【請求項９０】
請求項1〜46および／または47〜89のいずれか一項記載の方法によって製造されたクローン細胞株。
【請求項９１】
細胞が続いて低温保存される、請求項90記載のクローン細胞株。
【請求項９２】
被験体における心臓機能を増強する方法であって、該方法が、請求項1記載の方法によって製造されたおよび／または請求項47に記載の方法によって拡大されたislet 1+前駆体を含む組成物を該被験体へ投与する工程であって、islet 1+前駆体を含む該組成物が該被験体において心臓機能を増強する工程を含む、方法。
【請求項９３】
（i）被験体から細胞を得る工程；
（ii）請求項1に従って、Islet 1+系統へ該細胞が入ることを促進する工程；
（iii）請求項47記載の方法に従って、工程（ii）由来のislet 1+前駆体を拡大する工程；および
（iv）不十分な心臓機能を特徴とする障害を治療するのに有効な量で、工程（iii）由来のislet 1+前駆体またはそれらの子孫を被験体へ移植する工程
としてさらに定義される、請求項92記載の方法。
【請求項９４】
islet 1+前駆体またはそれらの子孫を被験体へ移植する前に、工程（iii）由来のislet 1+前駆体を所望の心臓系統へ分化させる追加の工程をさらに含む、請求項93記載の方法。
【請求項９５】
被験体が不十分な心臓機能を特徴とする障害に苦しんでいる、請求項94記載の方法。
【請求項９６】
障害が、うっ血性心不全、心筋梗塞、組織虚血、心虚血、血管疾患、後天性心疾患、先天性心疾患、アテローム性動脈硬化（arthlerscloerisis）、心筋症、機能不全性伝導系、機能不全性冠状動脈、肺性心高血圧、高血圧である、請求項95記載の方法。
【請求項９７】
分化が、内皮系統、平滑筋系統、神経細胞系統、筋細胞系統、および心臓系統からなる群より選択される多系統への分化を含む、請求項94記載の方法。
【請求項９８】
分化が、心血管系血管前駆体；心血管系筋肉前駆体；心筋細胞プレカーサー細胞；原始心筋細胞を含む分化心筋細胞；結節（ペースメーカー）心筋細胞；伝導心筋細胞；収縮性心筋細胞、心房心筋細胞、心室筋細胞、および冠状心房樹（coronary atrial tree）の細胞のうち、少なくとも1つの表現型を有する細胞へのIslet 1+前駆体の分化を含む、請求項98記載の方法。
【請求項９９】
被験体が哺乳動物である、請求項92記載の方法。
【請求項１００】
哺乳動物がヒトである、請求項100記載の方法。
【請求項１０１】
被験体が心筋梗塞を経験している、請求項92記載の方法。
【請求項１０２】
被験体が心不全を有するかまたは心不全の危険性がある、請求項92記載の方法。
【請求項１０３】
心不全が後天性心不全である、請求項102記載の方法。
【請求項１０４】
心不全が、アテローム性動脈硬化、心筋症、うっ血性心不全、心筋梗塞、心臓の虚血性疾患、心房性（artial）および心室性不整脈、高血圧性血管疾患、末梢血管疾患と関連する、請求項102記載の方法。
【請求項１０５】
被験体が先天性心疾患を有する、請求項92記載の方法。
【請求項１０６】
被験体が、高血圧；血流障害；症候性不整脈；肺高血圧；関節硬化（arthrosclerosis）；伝導系における機能不全；冠状動脈における機能不全；冠状動脈樹における機能不全、および冠状動脈コラテリゼーション（colaterization）からなる群より選択される状態を有する、請求項92記載の方法。
【請求項１０７】
心臓機能を増強することが、心不全を治療または予防する方法である、請求項92記載の方法。
【請求項１０８】
組成物が、心内膜心筋、心筋外膜（epimyocardial）、心室内、冠動脈内、後洞（retrosinus）、動脈内、心膜内、または静脈内投与経路を介して投与される、請求項92記載の方法。
【請求項１０９】
組成物を被験体の脈管構造へ投与する、請求項92記載の方法。
【請求項１１０】
細胞が、組成物が投与されるのと同一の被験体から採取される、請求項92記載の方法。
【請求項１１１】
被験体へ移植される前に、細胞において少なくとも1つの遺伝子の発現が変更されるように、細胞が遺伝子操作される、請求項92記載の方法。
【請求項１１２】
レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質、酵素、耐性遺伝子、または選択マーカーである、請求項11記載の方法。
【請求項１１３】
被験体における心血管疾患または障害の治療または予防ための、請求項1記載の方法によって製造されたおよび／または請求項47記載の方法によって拡大されたIsl+系統の細胞。
【請求項１１４】
被験体が哺乳動物である、請求項113記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１５】
被験体がヒトである、請求項113または114記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１６】
哺乳動物細胞である、請求項113記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１７】
哺乳動物細胞である、請求項113または116記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１８】
被験体が心筋梗塞を経験している、請求項113〜117のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１９】
被験体が心不全を有するかまたは心不全の危険性がある、請求項113〜118のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２０】
心不全が後天性心不全である、請求項119記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２１】
心不全が、アテローム性動脈硬化、心筋症、うっ血性心不全、心筋梗塞、心臓の虚血性疾患、心房性（artial）および心室性不整脈、高血圧性血管疾患、末梢血管疾患と関連する、請求項119または120記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２２】
被験体が先天性心疾患を有する、請求項113〜121のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２３】
被験体が、高血圧；血流障害；症候性不整脈；肺高血圧；関節硬化（arthrosclerosis）；伝導系における機能不全；冠状動脈における機能不全；冠状動脈樹における機能不全、および冠状動脈コラテリゼーションからなる群より選択される状態を有する、請求項113〜122のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２４】
細胞においてwntシグナル伝達を阻害し、Isl1+系統に入るように該細胞を誘導するための、wnt阻害剤の使用。
【請求項１２５】
細胞が請求項32〜46のいずれか一項に従って定義される、請求項124記載のwnt阻害剤。
【請求項１２６】
wnt阻害剤が請求項16〜31のいずれか一項に従って定義される、請求項124記載のwnt阻害剤。
【請求項１２７】
isl1+前駆体においてwntシグナル伝達を活性化し、該Isl1+前駆体の複製を誘導するための、wnt活性化剤の使用。
【請求項１２８】
isl1+前駆体が、請求項2〜6または53〜58のいずれか一項に従って定義される、請求項127記載のwnt活性化剤。
【請求項１２９】
isl1+前駆体が、請求項1〜46または124〜126のいずれか一項記載の方法によって製造される、請求項127記載のwnt活性化剤。
【請求項１３０】
請求項60〜77のいずれか一項に従って定義される、請求項127記載のwnt活性化剤。
【請求項１】
以下の工程を含む、islet 1+系統に入るように細胞を誘導するための方法：
i．間葉細胞フィーダー層の存在下で細胞を培養する工程；
ii．該細胞および／または該間葉細胞フィーダー層と少なくとも1つのwnt阻害剤とを接触させる工程であって、該wnt阻害剤が該細胞においてWntシグナル伝達経路を阻害する、工程；および
iii．islet 1+系統へ該細胞が入ることを促進するのに十分な期間、該細胞を培養する工程；
ここで、該細胞におけるWnt経路の阻害によって、該細胞がislet 1+系統に入るよう誘導される。
【請求項２】
islet 1+系統に入った細胞が多能性islet 1+前駆体である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
多能性islet 1+前駆体がNkx2.5およびflk1についても陽性である、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
多能性islet 1+前駆体が、内皮系統、心臓系統、平滑筋系統、筋細胞系統、神経系統、自律神経系統へ、多系統分化することができる、請求項1、2、または3記載の方法。
【請求項５】
多能性islet 1+前駆体が、内皮系統、心臓系統、および平滑筋系統へ分化することができる、請求項1、2、3、または4記載の方法。
【請求項６】
多能性islet 1+前駆体が、Islet 1 mRNAまたはIslet 1タンパク質の発現について陽性である、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
細胞が前駆体である、請求項1記載の方法。
【請求項８】
前駆体が中胚葉前駆体である、請求項1または7記載の方法。
【請求項９】
中胚葉前駆体が遺伝子操作された前駆体である、請求項1、7、または8記載の方法。
【請求項１０】
遺伝子操作された前駆体が、少なくとも1つのwnt阻害剤をコードする核酸配列を含み、該wnt阻害剤をコードする核酸配列が、調節配列またはプロモーター配列へ機能的に連結されている、請求項1、7、8、または9記載の方法。
【請求項１１】
遺伝子操作された前駆体が、レポーター遺伝子をコードする核酸配列を含み、該レポーター遺伝子をコードする核酸配列が、調節配列へ機能的に連結されている、請求項1、7、8、または9記載の方法。
【請求項１２】
Wnt経路がWnt/β-カテニンシグナル伝達経路である、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
間葉細胞フィーダー層が、心臓間葉細胞（CMC）フィーダー層である、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
間葉細胞フィーダー層が、遺伝子操作された間葉細胞フィーダー層である、請求項1または13記載の方法。
【請求項１５】
遺伝子操作された間葉細胞フィーダー層が、少なくとも1つのwnt阻害剤をコードする核酸配列を含み、該wnt阻害剤をコードする核酸配列が、調節配列へ機能的に連結されている、請求項1または14記載の方法。
【請求項１６】
wnt阻害剤が、核酸、タンパク質、小分子、抗体、またはアプタマーである、請求項1、10、14、または15記載の方法。
【請求項１７】
wnt阻害剤が、タンパク質もしくはそのフラグメントをコードする核酸、小阻害性核酸分子（small inhibitory nucleic acid molecule）、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスオリゴ核酸（ODN）、PNA、DNA、または核酸アナログである、請求項1、10、14、15、または16記載の方法。
【請求項１８】
核酸が、DNA、RNA、または核酸アナログである、請求項16または17記載の方法。
【請求項１９】
核酸アナログが、ペプチド−核酸（PNA）、pcPNA、固定化（locked）核酸（LNA）、およびそれらのアナログを含む、請求項16または17記載の方法。
【請求項２０】
wnt阻害剤がWntまたはWnt3を阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
wnt阻害剤が、Wls/Evi、Frizzled、Dsh（disheveled）、LRP-5、LRP-6、Dally、Dally-like、PAR1、β-カテニニン（β-cateninin）、TCF、lef-1、またはFrodoを阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
wnt阻害剤がWls/Eviを阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
wnt阻害剤が、Wls/EviのRNA転写産物を阻害するRNAi剤である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
RNAi剤がSEQ ID NO：1（siWLS-A）またはSEQ ID NO：2（siWLS-B）に対応する、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
wnt阻害剤が、Dickkopf-1（DKK1）、WIF-1、cerberus、分泌型frizzled関連タンパク質（sFRP）、sFRP-1、sFRP-2、18型コラーゲン（XVIII型コラーゲン）、エンドスタチン、カルボキシペプチダーゼZ、受容体チロシンキナーゼ、corin、Dgl、Dapper、百日咳毒素、naked、Frz関連タンパク質、または細胞内ドメインを欠くLRPからなる群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
wnt阻害剤がβ-カテニニンを阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
β-カテニンのインヒビターが、タンパク質ホスファターゼ2A（PP2A）、chibby、promtin 52、Nemo/LNKキナーゼ、MHG homobox因子、XSox17、HBP1、APC、Axin、disabled-2（dab-2）、およびgruncho（grg）からなる群より選択される、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
wnt阻害剤が、GSK-3および／またはGSK3βの活性および／または発現を増加させる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
wnt阻害剤がGSK3βのペプチドである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
wnt阻害剤が、GSK3βペプチド、PKB経路を活性化する薬剤、またはウォルタンニン（wortannin）からなる群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
wnt阻害剤がDKK1のペプチドである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
細胞が幹細胞または前駆細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項３３】
幹細胞が、多能性幹細胞；胚性幹（ES）細胞、生後幹細胞、成体幹細胞、または胚様体からなる幹細胞の群より選択される、請求項1または32記載の方法。
【請求項３４】
前駆細胞が中胚葉前駆細胞である、請求項1または32記載の方法。
【請求項３５】
細胞が組織から誘導されるかまたは得られる、請求項1、32、33、または34記載の方法。
【請求項３６】
組織がヒト組織である、請求項1、32、33、34、または35記載の方法。
【請求項３７】
組織が、胚、胎児、生後、または成体の組織である、請求項1、32、33、34、35、または36記載の方法。
【請求項３８】
組織が、心臓組織、線維芽細胞、心臓線維芽細胞、循環内皮前駆体、膵臓、肝臓、脂肪組織、骨髄、腎臓、膀胱、口蓋、臍帯、羊水、皮膚組織、皮膚、筋肉、脾臓、胎盤、骨、神経組織、または上皮組織である、請求項1または請求項32〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
組織が心臓組織である、請求項1または請求項32〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
組織が、後天性もしくは先天性の心臓欠損（cardiac heart defect）、疾患、障害、または機能不全を有する被験体由来である、請求項1または請求項32〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項４１】
細胞が哺乳動物細胞である、請求項1または請求項32〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
細胞が遺伝子操作された細胞である、請求項1または請求項32〜41のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物がヒトである、請求項41記載の方法。
【請求項４４】
哺乳動物がげっ歯動物である、請求項41記載の方法。
【請求項４５】
げっ歯動物がマウスまたはラットである、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
マウスまたはラットが遺伝子操作されたマウスである、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
Islet 1+前駆体の集団を拡大するための方法であって、該方法が、Islet 1+前駆体と少なくとも1つのwnt活性化剤とを接触させる工程であって、該wnt活性化剤が該Islet 1+前駆体においてWntシグナル伝達を増加させる、工程、および、該Islet 1+前駆体の複製に十分な期間培養する工程であって、該Islet 1+前駆体の集団が増加される、工程を含む、方法。
【請求項４８】
islet 1+前駆体が請求項1〜46のいずれか一項記載の方法によって得られる、請求項47記載の方法。
【請求項４９】
islet 1+前駆体をフィーダー層の存在下で培養することをさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項５０】
フィーダー層が間葉フィーダー層である、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
フィーダー層が、遺伝子操作された間葉フィーダー層である、請求項49および50記載の方法。
【請求項５２】
遺伝子操作された間葉フィーダー層が、少なくとも1つのwnt活性化剤をコードする核酸を含み、該wnt活性化剤をコードする核酸が、調節配列またはプロモーター配列へ機能的に連結されている、請求項49、50、および51記載の方法。
【請求項５３】
islet 1+前駆体が、遺伝子操作されたislet 1+前駆体である、請求項47記載の方法。
【請求項５４】
遺伝子操作されたislet 1+前駆体が、少なくとも1つのwnt活性化剤をコードする核酸配列を含む、請求項47または53記載の方法。
【請求項５５】
遺伝子操作されたislet 1+前駆体が、レポーター遺伝子をコードする核酸配列を含み、該レポーター遺伝子をコードする核酸が、調節配列へ機能的に連結されている、請求項47、53、または54記載の方法。
【請求項５６】
拡大されたIslet 1+前駆体を分化させる工程をさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項５７】
Islet 1+前駆体を分化させる工程が、islet 1+前駆体の分化を可能にするのに十分な時間、islet 1+前駆体と1つまたは複数の分化誘導剤とを接触させる工程を含む、請求項56記載の方法。
【請求項５８】
islet 1+前駆体がNkx2.5およびflk1についても陽性である、請求項47〜57のいずれか一項記載の方法。
【請求項５９】
Wnt経路がWnt/β-カテニンシグナル伝達経路である、請求項47記載の方法。
【請求項６０】
wnt活性化剤が、核酸、タンパク質、小分子、抗体、またはアプタマーである、請求項47〜59のいずれか一項記載の方法。
【請求項６１】
wnt活性化剤が、タンパク質もしくはそのフラグメントをコードする核酸、小阻害性核酸分子、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスオリゴ核酸（ODN）、PNA、DNA、または核酸アナログである、請求項47〜60のいずれか一項記載の方法。
【請求項６２】
核酸が、DNA、RNA、または核酸アナログである、請求項60または61記載の方法。
【請求項６３】
核酸アナログが、ペプチド−核酸（PNA）、pcPNA、固定化核酸（LNA）、ならびにそれらのアナログおよび誘導体を含む、請求項61または62記載の方法。
【請求項６４】
wnt活性化剤がGSK3の発現および／または活性を阻害する、請求項47〜63のいずれか一項記載の方法。
【請求項６５】
GSK3がGSK3βである、請求項64記載の方法。
【請求項６６】
wnt活性化剤が、6-ブロモインジルビン-3'-オキシム（BIO）またはそのアナログである、請求項47〜65のいずれか一項記載の方法。
【請求項６７】
BIOアナログが、BIOのアセトキシムアナログまたは1-アザケンパウリン（1-Azakenpaulline）またはその機能的アナログである、請求項66記載の方法。
【請求項６８】
wnt活性化剤が、SEQ ID NO：3またはその機能的フラグメントを含むGSK3βのペプチドインヒビターである、請求項47〜67のいずれか一項記載の方法。
【請求項６９】
wnt活性化剤が、リチウム、LiCl、レチノイン酸、Ro31-8220、またはそれらのアナログである、請求項47〜68のいずれか一項記載の方法。
【請求項７０】
wnt活性化剤が、wntおよび／もしくはwnt3aまたはそれらのホモログの発現および／または活性を増加させる、請求項47〜59のいずれか一項記載の方法。
【請求項７１】
wnt活性化剤が、Wls/Evi、Frizzled、Dsh（disheveled）、LRP-5、LRP-6、Dally、Dally-like、PAR1、β-カテニニン、TCF、lef-1、またはFrodoであるか、またはこれらからなる群の発現および／または生物学的活性を増加させる、請求項47〜69のいずれか一項記載の方法。
【請求項７２】
wnt活性化剤が、Dickkopf-1（DKK1）、WIF-1、cerbertus、分泌型frizzled関連タンパク質（sFRP）、sFRP-1、sFRP-2、18型コラーゲン（XVIII型コラーゲン）、エンドスタチン、カルボキシペプチダーゼZ、受容体チロシンキナーゼ、corin、Dgl、Dapper、百日咳毒素、naked、Frz関連タンパク質、細胞内ドメインを欠くLRP、APC、Axin、dab-2、gruncho、PP2A、chibby、pontin 52、およびNemo/LNKキナーゼからなる群の発現および／または生物学的活性を阻害する、請求項47〜71のいずれか一項記載の方法。
【請求項７３】
wnt活性化剤が、β-カテニンまたはその生物学的に活性なフラグメントもしくはホモログである、請求項47〜72のいずれか一項記載の方法。
【請求項７４】
β-カテニンのホモログが、安定化β-カテニンホモログである、請求項73記載の方法。
【請求項７５】
安定化β-カテニンホモログが、D32Y、D32G、S33F、S33Y、G34E、S37C、S37F、T41I、S45Yからなる群より選択されるいずれかのアミノ酸変化を有するβ-カテニン、およびアミノ酸AA1-173が欠失しているβ-カテニンである、請求項74記載の方法。
【請求項７６】
wnt活性化剤が、β-カテニニン発現を活性化および／または安定化する、請求項47〜75のいずれか一項記載の方法。
【請求項７７】
wnt活性化剤が、Frodo、TCF、pitz2、Pretin 52、legless（lgs）、pygopus（pygo）、hyrax/parafnomin、およびLKB1/XEEK1の群より選択される、請求項47〜76のいずれか一項記載の方法。
【請求項７８】
細胞増殖または複製を促進する1つまたは複数の薬剤と共にislet 1+前駆体を培養する工程をさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項７９】
分化を阻害する1つまたは複数の薬剤と共にislet 1+前駆体を培養する工程をさらに含む、請求項47記載の方法。
【請求項８０】
islet 1+前駆体が続いて低温保存される、請求項1〜79のいずれか一項記載の方法。
【請求項８１】
核酸が、ベクターによって前駆細胞または間葉細胞フィーダー層へ送達される、請求項14〜15または51〜55のいずれか一項記載の方法。
【請求項８２】
ベクターがウイルスベクターである、請求項81記載の方法。
【請求項８３】
ベクターが非ウイルスベクターまたは裸の核酸である、請求項82記載の方法。
【請求項８４】
ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターからなる群より選択される、請求項81または82記載の方法。
【請求項８５】
ベクターが、調節配列またはプロモーター配列へ機能的に連結された核酸を含む、請求項81記載の方法。
【請求項８６】
調節配列が誘導性プロモーターである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項８７】
プロモーターが組織特異的プロモーターである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項８８】
ベクターが、誘導性プロモーターへ機能的に連結されたwnt活性化剤をコードする核酸、および、異なる誘導性プロモーターへ機能的に連結されたwnt阻害剤をコードする核酸を含む、請求項85記載の方法。
【請求項８９】
wnt阻害剤へ機能的に連結された誘導性プロモーターが、wnt活性化剤へ機能的に連結された誘導性プロモーターと反対に調節される、請求項88記載の方法。
【請求項９０】
請求項1〜46および／または47〜89のいずれか一項記載の方法によって製造されたクローン細胞株。
【請求項９１】
細胞が続いて低温保存される、請求項90記載のクローン細胞株。
【請求項９２】
被験体における心臓機能を増強する方法であって、該方法が、請求項1記載の方法によって製造されたおよび／または請求項47に記載の方法によって拡大されたislet 1+前駆体を含む組成物を該被験体へ投与する工程であって、islet 1+前駆体を含む該組成物が該被験体において心臓機能を増強する工程を含む、方法。
【請求項９３】
（i）被験体から細胞を得る工程；
（ii）請求項1に従って、Islet 1+系統へ該細胞が入ることを促進する工程；
（iii）請求項47記載の方法に従って、工程（ii）由来のislet 1+前駆体を拡大する工程；および
（iv）不十分な心臓機能を特徴とする障害を治療するのに有効な量で、工程（iii）由来のislet 1+前駆体またはそれらの子孫を被験体へ移植する工程
としてさらに定義される、請求項92記載の方法。
【請求項９４】
islet 1+前駆体またはそれらの子孫を被験体へ移植する前に、工程（iii）由来のislet 1+前駆体を所望の心臓系統へ分化させる追加の工程をさらに含む、請求項93記載の方法。
【請求項９５】
被験体が不十分な心臓機能を特徴とする障害に苦しんでいる、請求項94記載の方法。
【請求項９６】
障害が、うっ血性心不全、心筋梗塞、組織虚血、心虚血、血管疾患、後天性心疾患、先天性心疾患、アテローム性動脈硬化（arthlerscloerisis）、心筋症、機能不全性伝導系、機能不全性冠状動脈、肺性心高血圧、高血圧である、請求項95記載の方法。
【請求項９７】
分化が、内皮系統、平滑筋系統、神経細胞系統、筋細胞系統、および心臓系統からなる群より選択される多系統への分化を含む、請求項94記載の方法。
【請求項９８】
分化が、心血管系血管前駆体；心血管系筋肉前駆体；心筋細胞プレカーサー細胞；原始心筋細胞を含む分化心筋細胞；結節（ペースメーカー）心筋細胞；伝導心筋細胞；収縮性心筋細胞、心房心筋細胞、心室筋細胞、および冠状心房樹（coronary atrial tree）の細胞のうち、少なくとも1つの表現型を有する細胞へのIslet 1+前駆体の分化を含む、請求項98記載の方法。
【請求項９９】
被験体が哺乳動物である、請求項92記載の方法。
【請求項１００】
哺乳動物がヒトである、請求項100記載の方法。
【請求項１０１】
被験体が心筋梗塞を経験している、請求項92記載の方法。
【請求項１０２】
被験体が心不全を有するかまたは心不全の危険性がある、請求項92記載の方法。
【請求項１０３】
心不全が後天性心不全である、請求項102記載の方法。
【請求項１０４】
心不全が、アテローム性動脈硬化、心筋症、うっ血性心不全、心筋梗塞、心臓の虚血性疾患、心房性（artial）および心室性不整脈、高血圧性血管疾患、末梢血管疾患と関連する、請求項102記載の方法。
【請求項１０５】
被験体が先天性心疾患を有する、請求項92記載の方法。
【請求項１０６】
被験体が、高血圧；血流障害；症候性不整脈；肺高血圧；関節硬化（arthrosclerosis）；伝導系における機能不全；冠状動脈における機能不全；冠状動脈樹における機能不全、および冠状動脈コラテリゼーション（colaterization）からなる群より選択される状態を有する、請求項92記載の方法。
【請求項１０７】
心臓機能を増強することが、心不全を治療または予防する方法である、請求項92記載の方法。
【請求項１０８】
組成物が、心内膜心筋、心筋外膜（epimyocardial）、心室内、冠動脈内、後洞（retrosinus）、動脈内、心膜内、または静脈内投与経路を介して投与される、請求項92記載の方法。
【請求項１０９】
組成物を被験体の脈管構造へ投与する、請求項92記載の方法。
【請求項１１０】
細胞が、組成物が投与されるのと同一の被験体から採取される、請求項92記載の方法。
【請求項１１１】
被験体へ移植される前に、細胞において少なくとも1つの遺伝子の発現が変更されるように、細胞が遺伝子操作される、請求項92記載の方法。
【請求項１１２】
レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質、酵素、耐性遺伝子、または選択マーカーである、請求項11記載の方法。
【請求項１１３】
被験体における心血管疾患または障害の治療または予防ための、請求項1記載の方法によって製造されたおよび／または請求項47記載の方法によって拡大されたIsl+系統の細胞。
【請求項１１４】
被験体が哺乳動物である、請求項113記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１５】
被験体がヒトである、請求項113または114記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１６】
哺乳動物細胞である、請求項113記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１７】
哺乳動物細胞である、請求項113または116記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１８】
被験体が心筋梗塞を経験している、請求項113〜117のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１１９】
被験体が心不全を有するかまたは心不全の危険性がある、請求項113〜118のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２０】
心不全が後天性心不全である、請求項119記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２１】
心不全が、アテローム性動脈硬化、心筋症、うっ血性心不全、心筋梗塞、心臓の虚血性疾患、心房性（artial）および心室性不整脈、高血圧性血管疾患、末梢血管疾患と関連する、請求項119または120記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２２】
被験体が先天性心疾患を有する、請求項113〜121のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２３】
被験体が、高血圧；血流障害；症候性不整脈；肺高血圧；関節硬化（arthrosclerosis）；伝導系における機能不全；冠状動脈における機能不全；冠状動脈樹における機能不全、および冠状動脈コラテリゼーションからなる群より選択される状態を有する、請求項113〜122のいずれか一項記載のIsl+系統の細胞。
【請求項１２４】
細胞においてwntシグナル伝達を阻害し、Isl1+系統に入るように該細胞を誘導するための、wnt阻害剤の使用。
【請求項１２５】
細胞が請求項32〜46のいずれか一項に従って定義される、請求項124記載のwnt阻害剤。
【請求項１２６】
wnt阻害剤が請求項16〜31のいずれか一項に従って定義される、請求項124記載のwnt阻害剤。
【請求項１２７】
isl1+前駆体においてwntシグナル伝達を活性化し、該Isl1+前駆体の複製を誘導するための、wnt活性化剤の使用。
【請求項１２８】
isl1+前駆体が、請求項2〜6または53〜58のいずれか一項に従って定義される、請求項127記載のwnt活性化剤。
【請求項１２９】
isl1+前駆体が、請求項1〜46または124〜126のいずれか一項記載の方法によって製造される、請求項127記載のwnt活性化剤。
【請求項１３０】
請求項60〜77のいずれか一項に従って定義される、請求項127記載のwnt活性化剤。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図２Ｆ】
【図２Ｇ】
【図２Ｈ】
【図２Ｉ】
【図２Ｊ】
【図２Ｋ】
【図２Ｌ】
【図２Ｍ】
【図２Ｎ】
【図２Ｏ】
【図２Ｐ】
【図３−１】
【図３−２】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図５Ｅ】
【図５Ｆ】
【図５Ｇ】
【図５Ｈ】
【図５Ｉ】
【図５Ｊ】
【図５Ｋ】
【図５Ｌ】
【図５Ｍ】
【図５Ｎ】
【図５Ｏ】
【図５Ｐ】
【図５Ｑ】
【図５Ｒ】
【図５Ｓ】
【図５Ｔ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図６Ｃ】
【図６Ｄ】
【図６Ｅ】
【図６Ｆ】
【図６Ｇ】
【図６Ｈ】
【図６Ｉ】
【図６Ｊ】
【図６Ｋ】
【図６Ｌ】
【図６Ｍ】
【図６Ｎ】
【図６Ｏ】
【図６Ｐ】
【図６Ｑ】
【図６Ｒ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図７Ｃ】
【図７Ｄ】
【図７Ｅ】
【図７Ｆ】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図８Ｃ】
【図８Ｄ】
【図８Ｅ】
【図８Ｆ】
【図８Ｇ】
【図８Ｈ】
【図８Ｉ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１２Ｄ】
【図１２Ｅ】
【図１２Ｆ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１３Ｄ】
【図１３Ｅ】
【図１３Ｆ】
【図１３Ｇ】
【図１３Ｈ】
【図１３Ｉ】
【図１３Ｊ】
【図１４】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図２Ｆ】
【図２Ｇ】
【図２Ｈ】
【図２Ｉ】
【図２Ｊ】
【図２Ｋ】
【図２Ｌ】
【図２Ｍ】
【図２Ｎ】
【図２Ｏ】
【図２Ｐ】
【図３−１】
【図３−２】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図５Ｅ】
【図５Ｆ】
【図５Ｇ】
【図５Ｈ】
【図５Ｉ】
【図５Ｊ】
【図５Ｋ】
【図５Ｌ】
【図５Ｍ】
【図５Ｎ】
【図５Ｏ】
【図５Ｐ】
【図５Ｑ】
【図５Ｒ】
【図５Ｓ】
【図５Ｔ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図６Ｃ】
【図６Ｄ】
【図６Ｅ】
【図６Ｆ】
【図６Ｇ】
【図６Ｈ】
【図６Ｉ】
【図６Ｊ】
【図６Ｋ】
【図６Ｌ】
【図６Ｍ】
【図６Ｎ】
【図６Ｏ】
【図６Ｐ】
【図６Ｑ】
【図６Ｒ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図７Ｃ】
【図７Ｄ】
【図７Ｅ】
【図７Ｆ】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図８Ｃ】
【図８Ｄ】
【図８Ｅ】
【図８Ｆ】
【図８Ｇ】
【図８Ｈ】
【図８Ｉ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１２Ｄ】
【図１２Ｅ】
【図１２Ｆ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１３Ｄ】
【図１３Ｅ】
【図１３Ｆ】
【図１３Ｇ】
【図１３Ｈ】
【図１３Ｉ】
【図１３Ｊ】
【図１４】
【公表番号】特表２０１０−５１７５７８（Ｐ２０１０−５１７５７８Ａ）
【公表日】平成２２年５月２７日（２０１０．５．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４９２６１（Ｐ２００９−５４９２６１）
【出願日】平成２０年２月８日（２００８．２．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３４４９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０９８１８４
【国際公開日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【出願人】（５９２０１７６３３）ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション (177)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年５月２７日（２０１０．５．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月８日（２００８．２．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３４４９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０９８１８４
【国際公開日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【出願人】（５９２０１７６３３）ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション (177)
【Ｆターム（参考）】
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