Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸凍結乾燥製剤及び化粧料
【課題】安定なＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の粉末製剤を提供する。
【解決手段】Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸とＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを含有する水溶液の凍結乾燥製剤。
【解決手段】Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸とＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを含有する水溶液の凍結乾燥製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸を化粧料に安定に配合する技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
アスコルビン酸は過酸化脂質抑制、コラーゲン形成促進、メラニン形成遅延、免疫機能増強等の作用があり、従来から化粧料等の分野で使われている。しかしながら、アスコルビン酸は、経時安定性が悪く脂溶性も乏しいため、細胞膜を透過しにくく、細胞内への蓄積量が限られ、十分な生理作用が得られない。 Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸であるＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸及びその塩、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸及びその塩、あるいはＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸を正常ヒト成人乳房表皮角化細胞に適用した場合、Ｌ−アスコルビン酸あるいは前記以外のＬ−アスコルビン酸の誘導体（Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸塩、６−Ｏ−ピバロイル−Ｌ−アスコルビン酸−３−リン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸塩、２−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２，６−ジパルミチン酸）を適用した場合と比べて、細胞内へのアスコルビン酸の蓄積量が３．７倍〜２０倍以上になることが知られている（特許文献１：特開平１０−２９８１７４号公報）。しかしながら、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸は、低温時は水への溶解性が低く、また、処方中で徐々に加水分解され、変色、変臭がおきたり、沈殿物が析出したりするため、長期安定性を保つことが困難である。変色、変臭は高温保存において促進され、沈殿物は冷所および高温保存の両方において促成される。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸の粉末そのものは、冷所保存が必要であり、冷所保存しない場合は、分解が徐々に進行し、特に高温保存で促進され、長期保存できないという欠点がある。
【０００３】
凍結乾燥製剤に関しては、リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムの水溶液を凍結乾燥することにより、水易溶性リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムを製造する方法（特許文献２：特開平５−２０８９８３号公報）、アシル化アスコルビン酸類と界面活性剤の水分散液を凍結乾燥して得られる水易分散性粉末組成物（特許文献３：特開平７−１９６４３５号公報）、糖アルコール、親水性界面活性剤、脂肪酸及びそのエステル、高級アルコール、ビタミン類を含有する水中油エマルションを凍結乾燥して得られる水易分散性粉末組成物（特許文献４：特開平１０−１３０１２４号公報）、リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムの水溶液を凍結乾燥して得られる水易溶性リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムを含有する粉体と化粧水からなる二剤タイプの化粧料（特許文献５：特開平１０−２７９４２３号公報）、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩とサイクロデキストリンの混合溶液を凍結乾燥して得られる水に易溶性の粉末状化粧料添加剤（特許文献６：特開２００４−３１５４２９号公報）が知られているが、何れも溶解性に主眼が置かれ、アスコルビン酸誘導体の安定性向上を意図したものではない。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸塩と低吸湿性のオリゴ糖と糖アルコールと水溶性高分子の水溶液を凍結乾燥することにより、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸塩を安定化する技術が知られているが（特許文献７：特開２００４−１４９４６８号公報）、本願発明とはアスコルビン酸誘導体の種類が異なる。
本発明者らはＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸を化粧料に安定に配合する技術開発について鋭意研究を継続しており、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸と二糖類又はデキストリンを含有する凍結乾燥製剤の特許を取得した（特許文献８：特許第４４９５７４８号）。この技術により、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸を常温で安定に保存できるようになり、皮膚外用剤としての使用性に優れるものとなったが吸湿すると潮解する傾向にあり、水分透過性の低い容器、例えばガラス容器に保存する必要があった。ガラス容器は一般的に価格が高く、プラスチック容器と比べると細部の加工がしにくいためデザイン性が限られる場合がある。そのため、容器素材を選ばずに種々の容器に保存可能な、安定な製剤が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−２９８１７４号公報
【特許文献２】特開平５−２０８９８３号公報
【特許文献３】特開平７−１９６４３５号公報
【特許文献４】特開平１０−１３０１２４号公報
【特許文献５】特開平１０−２７９４２３号公報
【特許文献６】特開２００４−３１５４２９号公報
【特許文献７】特開２００４−１４９４６８号公報
【特許文献８】特許第４４９５７４８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
安定なＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の粉末製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸とアラニルグルタミンを含有する水溶液の凍結乾燥製剤。
（２）（１）に記載の凍結乾燥製剤と水性の製剤とからなる皮膚外用剤であって、該凍結乾燥製剤を使用時に該水性の製剤に溶解して使用することを特徴とする皮膚外用剤。
（３）化粧料であることを特徴とする（２）記載の皮膚外用剤。
【発明の効果】
【０００７】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の安定な凍結乾燥製剤を提供することができた。
本凍結乾燥製剤は粉末状態にて安定しており、溶解性が良好であるので使用時に化粧液などの溶液に溶解して使用することができる。剤型としては、例えば、１回使用量分の粉末を分封し、同様に１回使用量に相当する液状組成に溶解して使用する。
本凍結乾燥製剤は吸湿しても外観や性質が変化しないので、容器素材の水分透過性の許容範囲が広く、容器選択の自由度が高い。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩としては、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ミリスチン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ミリスチン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ミリスチン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸マグネシウム等が挙げられる。
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸はＬ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩またはＬ−アスコルビン酸−２−リン酸ナトリウム塩を出発原料として合成することができる。例えば、Ｌ−アスコルビン酸マグネシウムを室温で濃酸に溶解し、脂肪酸を添加、攪拌後、２４時間放置し、反応混合物を氷水に注入し、沈殿物をジエチルエーテルで抽出し、適宜精製して得ることができる。
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩は市販品を購入して使用することができる。市販品としては昭和電工(株)製のアプレシエ(R)（Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム）を購入して使用することができる。
【０００９】
本発明に用いるアラニルグルタミンはアラニンのカルボキシル基とグルタミンのアミノ基がペプチド結合したジペプチドであり、次の式（Ｉ）の化学構造の化合物である。
【化１】
アラニルグルタミンは化学合成法（特開平６−２３４７１５号公報）、酵素法（ＷＯ２００５／０５２１７７号）により製造することができる。
化学合成法としては例えば、Ｌ−グルタミンと２−Ｄ−クロロプロピオニルクロリドを反応させてＮ−（２−Ｄ−クロロ）プロピオニル−Ｌ−グルタミンを合成し、次いで、アンモニア水と反応させてＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを合成する方法が挙げられる。
酵素法としては例えば、ジケトピペラジンからジペプチドを生産する能力を有するミクロバクテリウムルテオラム株の凍結融解菌体懸濁液にアラニンとグルタミンが縮合したジケトピペラジンを混合し、アラニルグルタミンを製造する方法が挙げられる。
アラニルグルタミンは市販品を購入して使用することができる。市販品としては協和発酵バイオ(株)製を購入して使用することができる。
【００１０】
本発明の凍結乾燥製剤はＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩とアラニルグルタミンを水に溶解し、凍結乾燥することにより得られる。水溶液中のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩とアラニルグルタミンの重量比は１０：１〜１：５が好ましい。さらに好ましくは２：１〜１：２が好ましい。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の重量がアラニルグルタミンの重量の１０倍より大きいと、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の安定性が十分に得られない場合がある。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の重量がアラニルグルタミンの重量の１／５に満たないと、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の安定性は確保できるが、必要量以上の配合はアラニルグルタミンの価格が高いことから経済的でない。凍結乾燥する水溶液の溶質（Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩とアラニルグルタミン）と水の重量比は１：３〜１：３０が好ましい。溶質の重量に対して水の重量が３倍に満たないと、溶質が十分に溶解しない恐れがあり、３０倍より大きいと凍結乾燥の効率が悪い。
また、凍結乾燥する水溶液に、本発明の効果を損なわない範囲で、ｐＨ調整剤や増粘剤等の溶質を添加することができる。スクロースなどの二糖類やデキストリンと混合して用いることもできる。
凍結乾燥の条件は凍結乾燥する水溶液をバイヤルに充填し、約−６０℃〜−４０℃で凍結後、真空度を約１〜１０パスカル（Ｐａ）にして、約−４０℃〜２５℃まで昇温しながら、真空乾燥する。
真空乾燥後、窒素充填すると、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の酸化を防ぐので望ましい。
【００１１】
本発明の凍結乾燥製剤は、使用時に水性の製剤（水、あるいは化粧水、美容液、ジェル、乳液等の製剤）に溶解して使用する皮膚外用剤とすることができる。また、本発明の凍結乾燥製剤を水分含有量の低い他の化粧品基剤と混合したものを、使用時に水性の製剤（水、あるいは化粧水、美容液、ジェル、乳液等の製剤）に溶解して使用する皮膚外用剤とすることもできる。
本発明の凍結乾燥製剤を溶解する水性の製剤の粘度が低いほど凍結乾燥製剤の溶解性は良く、Ｂ型粘度計で１０００ｍＰａ・ｓ以下が望ましい。粘度の高い水性製剤と混合する場合は、粘度の低い製剤(水など)で溶解した後、粘度の高い製剤に混合して使用することが望ましい。
本発明の凍結乾燥製剤は、水性の製剤に溶解して使用するが、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（以下ＡＰＰＳと呼ぶ）濃度は０．１％〜５％になるように溶解することが望ましい。ＡＰＰＳ濃度が０．１％に満たないとＡＰＰＳの過酸化脂質抑制、コラーゲン形成促進、メラニン形成遅延、免疫機能増強等の効果が期待できず、ＡＰＰＳ濃度が５％より大きいとべたつき感が強くなり、好ましくない。
【実施例】
【００１２】
（実施例１）
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とアラニルグルタミンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとアラニルグルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５をバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとアラニルグルタミンの凍結乾燥製剤を得た。アラニルグルタミンはＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを用いた。
【００１３】
（比較例１)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とヒドロキシプロリンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとヒドロキシプロリン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとヒドロキシプロリンの凍結乾燥製剤を得た。
【００１４】
（比較例２)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とシトルリンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとシトルリン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとシトルリンの凍結乾燥製剤を得た。
【００１５】
（比較例３)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とグリシンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとグリシン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとグリシンの凍結乾燥製剤を得た。
【００１６】
（比較例４)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とスクロースの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとスクロース５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとスクロースの凍結乾燥製剤を得た。
【００１７】
（比較例５)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とマルトースの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとマルトース５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとマルトースの凍結乾燥製剤を得た。
【００１８】
（比較例６)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とトレハロースの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとトレハロース５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとトレハロースの凍結乾燥製剤を得た。
【００１９】
(比較例７)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．１ｇのＡＰＰＳの凍結乾燥製剤を得た。
【００２０】
試験例１
[凍結乾燥製剤中のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの安定性]
実施例１及び比較例１〜７の凍結乾燥製剤をガラス容器に入れ密閉した状態で５０℃に２８日間保存し、ＡＰＰＳ量を高速液体クロマトグラフィーにて測定し、保存開始時のＡＰＰＳ含有量を１００％として残存率を求めた。
【００２１】
ＡＰＰＳの５０℃保存２８日後の残存率に応じて、以下の基準によりＡＰＰＳの安定性を評価した。結果を表１に示す。
◎：ＡＰＰＳ残存率 ９５％以上 安定性が極めて良い
○：ＡＰＰＳ残存率 ９０％以上 ９５％未満 安定性が良い
△：ＡＰＰＳ残存率 ８５％以上 ９０％未満 安定性が悪い
×：ＡＰＰＳ残存率 ８５％未満 安定性が極めて悪い
【００２２】
液体クロマトグラフィー分析条件
分析カラム：イナートシル ＯＤＳ−３ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ
カラム槽温度：４０℃
溶離液：０．０３Ｍ リン酸水素二カリウム：ＴＨＦ＝６５：３５
溶離液流量：０．７ｍＬ／ｍｉｎ 試料注入量：２０μＬ
検出器：ＵＶ ２６５ｎｍ
【００２３】
【表１】
【００２４】
アラニルグルタミンを配合した凍結乾燥製剤である実施例１、スクロースを配合した凍結乾燥製剤である比較例４のＡＰＰＳの５０℃２８日間保存後の残存率は９５％以上であり、安定性が極めて良かった。アラニルグルタミンはジペプチドであるが、アミノ酸単体であるヒドロキシプロリン（比較例１）、シトルリン（比較例２）、グリシン（比較例３）について試験したところ、いずれの凍結乾燥製剤のＡＰＰＳの５０℃２８日間保存後の残存率は９０％未満であり、安定性が悪かった。スクロースと同様に二糖類であるマルトース（比較例５）、トレハロース（比較例６）について試験した結果、ＡＰＰＳの５０℃２８日間保存後の残存率は９０％以上９５％未満であり、スクロースと比べて安定性がやや劣る。
アラニルグルタミンを配合した凍結乾燥製剤である実施例１の凍結乾燥製剤は、従来技術であるスクロースを配合した凍結乾燥製剤である比較例４と同等以上に５０℃２８日間保存後のＡＰＰＳ残存率が高く、安定性が極めて良好であることが確認できた。
【００２５】
試験例２
[凍結乾燥製剤の溶解性]
凍結乾燥製剤の水への溶解性を評価し、使用時に水性の製剤に溶解して使用する皮膚外用剤として適しているか調べた。
５０℃２８日間保存した凍結乾燥製剤３００ｍｇに、水１０ｇを加えてフタをして、上下に１０回振り混ぜた。水への溶解性を以下の基準により評価した。
○：完全に溶解している
×：溶け残りがある
【００２６】
結果を表１に示した。
アラニルグルタミンを配合した実施例１、シトルリンを配合した比較例２、二糖類を配合した比較例４〜６、賦形剤なしの比較例７はいずれも溶解性に優れていた。アミノ酸であるヒドロキシプロリン、グリシンを配合した比較例１，３は溶解性が悪かった。
本発明のアラニルグルタミンを配合した実施例１は、使用時に水性の製剤に溶解して使用する皮膚外用剤として優れている。
【００２７】
試験例３
[凍結乾燥製剤の外観]
５０℃２８日間保存後の凍結乾燥製剤の外観を以下の基準により評価した。
○：開始時と変化が無い
△：わずかに褐変している
×：明らかに褐変している
結果を表１に示した。アラニルグルタミンを配合した実施例１は外観の色の変化がなかった。
【００２８】
試験例１〜３から、本発明のアラニルグルタミンを配合した実施例１の凍結乾燥製剤、比較例４に示した凍結乾燥製剤は、密閉容器に保存した場合に非常に安定であることが確認できた。
【００２９】
試験例４
[高温多湿度環境下での凍結乾燥製剤の外観の評価]
次に、高温多湿度環境下での影響を調べた。実施例１及び比較例１〜７の凍結乾燥製剤をガラス容器に入れ蓋を開けた状態で４０℃７５％ＲＨの環境下に１日置き、潮解性を以下の基準により評価した。
○：変化なし
×：潮解している
【００３０】
結果を表２に示す。
【表２】
アラニルグルタミンを配合した実施例１、アミノ酸を配合した比較例１〜３及び賦形剤なしの比較例７については高温多湿度環境下において潮解しなかった。しかしながら、二糖類を配合した比較例４〜６については１日で潮解した。アラニルグルタミンを配合した実施例１は、耐湿性に優れると考え、プラスチック容器の適用性を評価することにした。
【００３１】
本発明の実施例１の凍結乾燥製剤と比較例４の凍結乾燥製剤について、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）容器に保存した場合の安定性を、以下に示す試験例５〜７で評価した。３検体ずつ評価し、平均した。尚、ＰＥＮ容器は、ガラス容器よりも密閉性に劣り水分を透過しやすい材質ではあるが、成型しやすく安価なため、吸湿を問題としない化粧品や医薬品、食品については汎用容器として流通している。
【００３２】
試験例５
[凍結乾燥製剤中のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの高温多湿度下での安定性]
実施例１と比較例４の凍結乾燥製剤をＰＥＮ容器に入れ、蓋をして４０℃７５％ＲＨの環境下で１ヶ月間保存し、ＡＰＰＳ量を高速液体クロマトグラフィーにて測定し、保存開始時の含有量を１００％として残存率を求めた。
【００３３】
ＡＰＰＳの４０℃７５％ＲＨの環境下で１４日保存後の残存率に応じて、試験例1と同様の基準によりＡＰＰＳの安定性を評価した。結果を表３に示す。
【表３】
実施例1、比較例４はいずれも１４日目のＡＰＰＳの残存率が高かった。尚、実施例１については１ヶ月後も９９％の残存率を維持した。
【００３４】
試験例６
[凍結乾燥製剤の吸湿による重量変化、外観の評価]
実施例１と比較例４の凍結乾燥製剤を４０℃７５％ＲＨの環境下、ＰＥＮ容器に入れ、蓋をして１４日後の凍結乾燥製剤の重量を測定し、開始時からの重量変化を百分率で表し吸湿増量（％）とした。
【００３５】
さらに、潮解性について試験例４と同様の基準により評価し、外観(色)は試験例３と同様の基準により評価した。
【００３６】
結果を表３に示す。実施例１の１４日目の吸湿増量は０．０２０７％、比較例４の吸湿増量は０．０２０７％であり、４０℃７５％ＲＨの環境下では、どちらもほぼ同じレベルで吸湿していることがわかる。
アラニルグルタミンを配合した実施例１については１４日間、高温多湿の環境下に置いても固形の状態を保ち潮解しなかった。しかしながら、スクロースを配合した比較例４については高温多湿の環境下では、蓋を閉めた保存であっても１４日目で潮解しており固形の状態を保つことができなかった。
色については、スクロースを配合した比較例４の凍結乾燥製剤は、高温多湿環境下の保存で褐色に変化したが、アラニルグルタミンを配合した実施例１は、１４日間高温多湿環境下に保存しても色が変化しなかった。
試験期間１４日経過後において、比較例４は潮解、外観変色、水溶性不良を示している。更に、１ヶ月経過後では、ＡＰＰＳ残存率においても、比較例４は低下することが確認された。
これらのことから、スクロースを配合した比較例４の凍結乾燥製剤は、吸湿すると、潮解したり外観(色）が激しく変化したりするので、品質を維持するために密閉性の高い容器での保存が必須であるのに対し、アラニルグルタミンを配合した実施例１は、吸湿環境下でも品質が著しく低下しないので、ガラス製などの必ずしも密閉性の高い容器に保存しなくても良いことがわかった。
【００３７】
試験例７
[吸湿した凍結乾燥製剤の溶解性]
吸湿した凍結乾燥製剤について、水への溶解性を評価し、吸湿した状態で使用時に水性の製剤に溶解して使用する皮膚外用剤と成りうるか調べた。
４０℃７５％ＲＨの環境下、ＰＥＮ容器に入れ、蓋をして１４日間保存した凍結乾燥製剤１５０ｍｇを１０ｍＬ入り試料瓶に量り取り、水５ｇを加えてフタをして、上下に１０回振り混ぜた。水への溶解性を以下の基準により評価した。
○：完全に溶解している
×：溶け残りがある
【００３８】
結果を表３に示した。
アラニルグルタミンを配合した実施例１は溶解性に優れていた。しかしながら、スクロースを配合した比較例４は溶解性が悪かった。
スクロースを配合した比較例４は、吸湿前は水へ完全に溶解したが、吸湿し潮解して固形の状態を保つことができなくなったものは、溶解試験で溶け残りが生じた（評価は×）。試験例３において、５０℃２８日間保存したスクロース配合品の水への溶解性の評価は○であったから、スクロースを配合した凍結乾燥製剤（比較例４）は吸湿して潮解すると水への溶解が遅くなることがわかった。
凍結乾燥製剤はそのままか或いは水分含有量の低い製剤に含有させた皮膚外用剤にした場合でも、使用時に水または水性の製剤に溶解して使用する。このため、使用時の溶解性は重要である。
本発明品であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを配合した凍結乾燥製剤は、ＡＰＰＳ残存率、溶解性、外観、及び「吸湿した状態でのＡＰＰＳ残存率、溶解性、外観」の全てにおいて優れていた。吸湿しないように密封容器（ガラス容器）での保存が望まれるスクロース配合の凍結乾燥製剤に対し、本発明品であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを配合した凍結乾燥製剤は、吸湿しても安定性が高いので、ガラス容器のみならずプラスチック容器での保存性能も優れるものである。
【００３９】
処方例１
第１剤
ＡＰＰＳ２．８６ｇとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇとした。この水溶液５．２５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して得られたＡＰＰＳとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの凍結乾燥製剤０．４５ｇ
第２剤
下記組成の化粧水 ４．５５ｇ
成分 質量％
グリセリン ２．０
１，２−ペンタンジオール ５．０
トリメチルグリシン ０．５
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０００１
クエン酸ナトリウム 適量
クエン酸 適量
精製水 残余
使用時に第１剤を第２剤に溶解する。溶解時のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの濃度は３質量％である。
【００４０】
処方例２
第１剤
ＡＰＰＳ２．８６ｇとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇとした。この水溶液１．７５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して得られたＡＰＰＳとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの凍結乾燥製剤０．１５ｇ
第２剤
下記組成の乳液 ４．８５ｇ
成分 質量％
グリセリン ５．０
ジプロピレングリコール １０．０
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０００１
キサンタンガム ０．１
スクワラン ５．０
ジメチコン １．０
ホホバ油 １．０
ラウロイルグルタミン酸ジ（フィトステリル/オクチルドデシル）１．０
ステアリン酸ソルビタン ０．２
ヤシ油脂肪酸スクロース ０．１
ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油 ０．５
カルボマーＫ ０．０５
精製水 残余
使用時に第１剤を第２剤に溶解する。溶解時のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの濃度は１質量％である。
【００４１】
処方例３
第１剤
ＡＰＰＳ２．８６ｇとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇとした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して得られたＡＰＰＳとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの凍結乾燥製剤０．３ｇ
第２剤
下記組成の美容液 ４．９７ｇ
成分 質量％
グリセリン ８．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
ジプロピレングリコール ５．０
ヒアルロン酸ナトリウム ０．００１
スクレロチウムガム ０．０１
ジメチコン １．０
マカデミアナッツ油 ０．５
マカデミアナッツ脂肪酸フィトステリル ０．５
水添レシチン ０．５
ステアリン酸ポリグリセリル-１０ ０．５
エタノール ５．０
精製水 残余
使用時に第１剤を第２剤に溶解する。溶解時のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの濃度は２質量％である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸を化粧料に安定に配合する技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
アスコルビン酸は過酸化脂質抑制、コラーゲン形成促進、メラニン形成遅延、免疫機能増強等の作用があり、従来から化粧料等の分野で使われている。しかしながら、アスコルビン酸は、経時安定性が悪く脂溶性も乏しいため、細胞膜を透過しにくく、細胞内への蓄積量が限られ、十分な生理作用が得られない。 Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸であるＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸及びその塩、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸及びその塩、あるいはＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸を正常ヒト成人乳房表皮角化細胞に適用した場合、Ｌ−アスコルビン酸あるいは前記以外のＬ−アスコルビン酸の誘導体（Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸塩、６−Ｏ−ピバロイル−Ｌ−アスコルビン酸−３−リン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸塩、２−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２，６−ジパルミチン酸）を適用した場合と比べて、細胞内へのアスコルビン酸の蓄積量が３．７倍〜２０倍以上になることが知られている（特許文献１：特開平１０−２９８１７４号公報）。しかしながら、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸は、低温時は水への溶解性が低く、また、処方中で徐々に加水分解され、変色、変臭がおきたり、沈殿物が析出したりするため、長期安定性を保つことが困難である。変色、変臭は高温保存において促進され、沈殿物は冷所および高温保存の両方において促成される。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸の粉末そのものは、冷所保存が必要であり、冷所保存しない場合は、分解が徐々に進行し、特に高温保存で促進され、長期保存できないという欠点がある。
【０００３】
凍結乾燥製剤に関しては、リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムの水溶液を凍結乾燥することにより、水易溶性リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムを製造する方法（特許文献２：特開平５−２０８９８３号公報）、アシル化アスコルビン酸類と界面活性剤の水分散液を凍結乾燥して得られる水易分散性粉末組成物（特許文献３：特開平７−１９６４３５号公報）、糖アルコール、親水性界面活性剤、脂肪酸及びそのエステル、高級アルコール、ビタミン類を含有する水中油エマルションを凍結乾燥して得られる水易分散性粉末組成物（特許文献４：特開平１０−１３０１２４号公報）、リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムの水溶液を凍結乾燥して得られる水易溶性リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウムを含有する粉体と化粧水からなる二剤タイプの化粧料（特許文献５：特開平１０−２７９４２３号公報）、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩とサイクロデキストリンの混合溶液を凍結乾燥して得られる水に易溶性の粉末状化粧料添加剤（特許文献６：特開２００４−３１５４２９号公報）が知られているが、何れも溶解性に主眼が置かれ、アスコルビン酸誘導体の安定性向上を意図したものではない。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸塩と低吸湿性のオリゴ糖と糖アルコールと水溶性高分子の水溶液を凍結乾燥することにより、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸塩を安定化する技術が知られているが（特許文献７：特開２００４−１４９４６８号公報）、本願発明とはアスコルビン酸誘導体の種類が異なる。
本発明者らはＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸を化粧料に安定に配合する技術開発について鋭意研究を継続しており、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸と二糖類又はデキストリンを含有する凍結乾燥製剤の特許を取得した（特許文献８：特許第４４９５７４８号）。この技術により、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸を常温で安定に保存できるようになり、皮膚外用剤としての使用性に優れるものとなったが吸湿すると潮解する傾向にあり、水分透過性の低い容器、例えばガラス容器に保存する必要があった。ガラス容器は一般的に価格が高く、プラスチック容器と比べると細部の加工がしにくいためデザイン性が限られる場合がある。そのため、容器素材を選ばずに種々の容器に保存可能な、安定な製剤が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−２９８１７４号公報
【特許文献２】特開平５−２０８９８３号公報
【特許文献３】特開平７−１９６４３５号公報
【特許文献４】特開平１０−１３０１２４号公報
【特許文献５】特開平１０−２７９４２３号公報
【特許文献６】特開２００４−３１５４２９号公報
【特許文献７】特開２００４−１４９４６８号公報
【特許文献８】特許第４４９５７４８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
安定なＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の粉末製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸とアラニルグルタミンを含有する水溶液の凍結乾燥製剤。
（２）（１）に記載の凍結乾燥製剤と水性の製剤とからなる皮膚外用剤であって、該凍結乾燥製剤を使用時に該水性の製剤に溶解して使用することを特徴とする皮膚外用剤。
（３）化粧料であることを特徴とする（２）記載の皮膚外用剤。
【発明の効果】
【０００７】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の安定な凍結乾燥製剤を提供することができた。
本凍結乾燥製剤は粉末状態にて安定しており、溶解性が良好であるので使用時に化粧液などの溶液に溶解して使用することができる。剤型としては、例えば、１回使用量分の粉末を分封し、同様に１回使用量に相当する液状組成に溶解して使用する。
本凍結乾燥製剤は吸湿しても外観や性質が変化しないので、容器素材の水分透過性の許容範囲が広く、容器選択の自由度が高い。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩としては、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ミリスチン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ミリスチン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ラウリン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ミリスチン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−ステアリン酸マグネシウム等が挙げられる。
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸はＬ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩またはＬ−アスコルビン酸−２−リン酸ナトリウム塩を出発原料として合成することができる。例えば、Ｌ−アスコルビン酸マグネシウムを室温で濃酸に溶解し、脂肪酸を添加、攪拌後、２４時間放置し、反応混合物を氷水に注入し、沈殿物をジエチルエーテルで抽出し、適宜精製して得ることができる。
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩は市販品を購入して使用することができる。市販品としては昭和電工(株)製のアプレシエ(R)（Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム）を購入して使用することができる。
【０００９】
本発明に用いるアラニルグルタミンはアラニンのカルボキシル基とグルタミンのアミノ基がペプチド結合したジペプチドであり、次の式（Ｉ）の化学構造の化合物である。
【化１】
アラニルグルタミンは化学合成法（特開平６−２３４７１５号公報）、酵素法（ＷＯ２００５／０５２１７７号）により製造することができる。
化学合成法としては例えば、Ｌ−グルタミンと２−Ｄ−クロロプロピオニルクロリドを反応させてＮ−（２−Ｄ−クロロ）プロピオニル−Ｌ−グルタミンを合成し、次いで、アンモニア水と反応させてＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを合成する方法が挙げられる。
酵素法としては例えば、ジケトピペラジンからジペプチドを生産する能力を有するミクロバクテリウムルテオラム株の凍結融解菌体懸濁液にアラニンとグルタミンが縮合したジケトピペラジンを混合し、アラニルグルタミンを製造する方法が挙げられる。
アラニルグルタミンは市販品を購入して使用することができる。市販品としては協和発酵バイオ(株)製を購入して使用することができる。
【００１０】
本発明の凍結乾燥製剤はＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩とアラニルグルタミンを水に溶解し、凍結乾燥することにより得られる。水溶液中のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩とアラニルグルタミンの重量比は１０：１〜１：５が好ましい。さらに好ましくは２：１〜１：２が好ましい。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の重量がアラニルグルタミンの重量の１０倍より大きいと、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の安定性が十分に得られない場合がある。Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の重量がアラニルグルタミンの重量の１／５に満たないと、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の安定性は確保できるが、必要量以上の配合はアラニルグルタミンの価格が高いことから経済的でない。凍結乾燥する水溶液の溶質（Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩とアラニルグルタミン）と水の重量比は１：３〜１：３０が好ましい。溶質の重量に対して水の重量が３倍に満たないと、溶質が十分に溶解しない恐れがあり、３０倍より大きいと凍結乾燥の効率が悪い。
また、凍結乾燥する水溶液に、本発明の効果を損なわない範囲で、ｐＨ調整剤や増粘剤等の溶質を添加することができる。スクロースなどの二糖類やデキストリンと混合して用いることもできる。
凍結乾燥の条件は凍結乾燥する水溶液をバイヤルに充填し、約−６０℃〜−４０℃で凍結後、真空度を約１〜１０パスカル（Ｐａ）にして、約−４０℃〜２５℃まで昇温しながら、真空乾燥する。
真空乾燥後、窒素充填すると、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸及びその塩の酸化を防ぐので望ましい。
【００１１】
本発明の凍結乾燥製剤は、使用時に水性の製剤（水、あるいは化粧水、美容液、ジェル、乳液等の製剤）に溶解して使用する皮膚外用剤とすることができる。また、本発明の凍結乾燥製剤を水分含有量の低い他の化粧品基剤と混合したものを、使用時に水性の製剤（水、あるいは化粧水、美容液、ジェル、乳液等の製剤）に溶解して使用する皮膚外用剤とすることもできる。
本発明の凍結乾燥製剤を溶解する水性の製剤の粘度が低いほど凍結乾燥製剤の溶解性は良く、Ｂ型粘度計で１０００ｍＰａ・ｓ以下が望ましい。粘度の高い水性製剤と混合する場合は、粘度の低い製剤(水など)で溶解した後、粘度の高い製剤に混合して使用することが望ましい。
本発明の凍結乾燥製剤は、水性の製剤に溶解して使用するが、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（以下ＡＰＰＳと呼ぶ）濃度は０．１％〜５％になるように溶解することが望ましい。ＡＰＰＳ濃度が０．１％に満たないとＡＰＰＳの過酸化脂質抑制、コラーゲン形成促進、メラニン形成遅延、免疫機能増強等の効果が期待できず、ＡＰＰＳ濃度が５％より大きいとべたつき感が強くなり、好ましくない。
【実施例】
【００１２】
（実施例１）
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とアラニルグルタミンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとアラニルグルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５をバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとアラニルグルタミンの凍結乾燥製剤を得た。アラニルグルタミンはＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを用いた。
【００１３】
（比較例１)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とヒドロキシプロリンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとヒドロキシプロリン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとヒドロキシプロリンの凍結乾燥製剤を得た。
【００１４】
（比較例２)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とシトルリンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとシトルリン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとシトルリンの凍結乾燥製剤を得た。
【００１５】
（比較例３)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とグリシンの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとグリシン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとグリシンの凍結乾燥製剤を得た。
【００１６】
（比較例４)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とスクロースの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとスクロース５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとスクロースの凍結乾燥製剤を得た。
【００１７】
（比較例５)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とマルトースの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとマルトース５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとマルトースの凍結乾燥製剤を得た。
【００１８】
（比較例６)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）とトレハロースの水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇとトレハロース５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．３ｇのＡＰＰＳとトレハロースの凍結乾燥製剤を得た。
【００１９】
(比較例７)
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウム（アプレシエ(R)）水溶液の凍結乾燥製剤。
ＡＰＰＳ２．８６ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇにした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して約０．１ｇのＡＰＰＳの凍結乾燥製剤を得た。
【００２０】
試験例１
[凍結乾燥製剤中のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの安定性]
実施例１及び比較例１〜７の凍結乾燥製剤をガラス容器に入れ密閉した状態で５０℃に２８日間保存し、ＡＰＰＳ量を高速液体クロマトグラフィーにて測定し、保存開始時のＡＰＰＳ含有量を１００％として残存率を求めた。
【００２１】
ＡＰＰＳの５０℃保存２８日後の残存率に応じて、以下の基準によりＡＰＰＳの安定性を評価した。結果を表１に示す。
◎：ＡＰＰＳ残存率 ９５％以上 安定性が極めて良い
○：ＡＰＰＳ残存率 ９０％以上 ９５％未満 安定性が良い
△：ＡＰＰＳ残存率 ８５％以上 ９０％未満 安定性が悪い
×：ＡＰＰＳ残存率 ８５％未満 安定性が極めて悪い
【００２２】
液体クロマトグラフィー分析条件
分析カラム：イナートシル ＯＤＳ−３ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ
カラム槽温度：４０℃
溶離液：０．０３Ｍ リン酸水素二カリウム：ＴＨＦ＝６５：３５
溶離液流量：０．７ｍＬ／ｍｉｎ 試料注入量：２０μＬ
検出器：ＵＶ ２６５ｎｍ
【００２３】
【表１】
【００２４】
アラニルグルタミンを配合した凍結乾燥製剤である実施例１、スクロースを配合した凍結乾燥製剤である比較例４のＡＰＰＳの５０℃２８日間保存後の残存率は９５％以上であり、安定性が極めて良かった。アラニルグルタミンはジペプチドであるが、アミノ酸単体であるヒドロキシプロリン（比較例１）、シトルリン（比較例２）、グリシン（比較例３）について試験したところ、いずれの凍結乾燥製剤のＡＰＰＳの５０℃２８日間保存後の残存率は９０％未満であり、安定性が悪かった。スクロースと同様に二糖類であるマルトース（比較例５）、トレハロース（比較例６）について試験した結果、ＡＰＰＳの５０℃２８日間保存後の残存率は９０％以上９５％未満であり、スクロースと比べて安定性がやや劣る。
アラニルグルタミンを配合した凍結乾燥製剤である実施例１の凍結乾燥製剤は、従来技術であるスクロースを配合した凍結乾燥製剤である比較例４と同等以上に５０℃２８日間保存後のＡＰＰＳ残存率が高く、安定性が極めて良好であることが確認できた。
【００２５】
試験例２
[凍結乾燥製剤の溶解性]
凍結乾燥製剤の水への溶解性を評価し、使用時に水性の製剤に溶解して使用する皮膚外用剤として適しているか調べた。
５０℃２８日間保存した凍結乾燥製剤３００ｍｇに、水１０ｇを加えてフタをして、上下に１０回振り混ぜた。水への溶解性を以下の基準により評価した。
○：完全に溶解している
×：溶け残りがある
【００２６】
結果を表１に示した。
アラニルグルタミンを配合した実施例１、シトルリンを配合した比較例２、二糖類を配合した比較例４〜６、賦形剤なしの比較例７はいずれも溶解性に優れていた。アミノ酸であるヒドロキシプロリン、グリシンを配合した比較例１，３は溶解性が悪かった。
本発明のアラニルグルタミンを配合した実施例１は、使用時に水性の製剤に溶解して使用する皮膚外用剤として優れている。
【００２７】
試験例３
[凍結乾燥製剤の外観]
５０℃２８日間保存後の凍結乾燥製剤の外観を以下の基準により評価した。
○：開始時と変化が無い
△：わずかに褐変している
×：明らかに褐変している
結果を表１に示した。アラニルグルタミンを配合した実施例１は外観の色の変化がなかった。
【００２８】
試験例１〜３から、本発明のアラニルグルタミンを配合した実施例１の凍結乾燥製剤、比較例４に示した凍結乾燥製剤は、密閉容器に保存した場合に非常に安定であることが確認できた。
【００２９】
試験例４
[高温多湿度環境下での凍結乾燥製剤の外観の評価]
次に、高温多湿度環境下での影響を調べた。実施例１及び比較例１〜７の凍結乾燥製剤をガラス容器に入れ蓋を開けた状態で４０℃７５％ＲＨの環境下に１日置き、潮解性を以下の基準により評価した。
○：変化なし
×：潮解している
【００３０】
結果を表２に示す。
【表２】
アラニルグルタミンを配合した実施例１、アミノ酸を配合した比較例１〜３及び賦形剤なしの比較例７については高温多湿度環境下において潮解しなかった。しかしながら、二糖類を配合した比較例４〜６については１日で潮解した。アラニルグルタミンを配合した実施例１は、耐湿性に優れると考え、プラスチック容器の適用性を評価することにした。
【００３１】
本発明の実施例１の凍結乾燥製剤と比較例４の凍結乾燥製剤について、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）容器に保存した場合の安定性を、以下に示す試験例５〜７で評価した。３検体ずつ評価し、平均した。尚、ＰＥＮ容器は、ガラス容器よりも密閉性に劣り水分を透過しやすい材質ではあるが、成型しやすく安価なため、吸湿を問題としない化粧品や医薬品、食品については汎用容器として流通している。
【００３２】
試験例５
[凍結乾燥製剤中のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの高温多湿度下での安定性]
実施例１と比較例４の凍結乾燥製剤をＰＥＮ容器に入れ、蓋をして４０℃７５％ＲＨの環境下で１ヶ月間保存し、ＡＰＰＳ量を高速液体クロマトグラフィーにて測定し、保存開始時の含有量を１００％として残存率を求めた。
【００３３】
ＡＰＰＳの４０℃７５％ＲＨの環境下で１４日保存後の残存率に応じて、試験例1と同様の基準によりＡＰＰＳの安定性を評価した。結果を表３に示す。
【表３】
実施例1、比較例４はいずれも１４日目のＡＰＰＳの残存率が高かった。尚、実施例１については１ヶ月後も９９％の残存率を維持した。
【００３４】
試験例６
[凍結乾燥製剤の吸湿による重量変化、外観の評価]
実施例１と比較例４の凍結乾燥製剤を４０℃７５％ＲＨの環境下、ＰＥＮ容器に入れ、蓋をして１４日後の凍結乾燥製剤の重量を測定し、開始時からの重量変化を百分率で表し吸湿増量（％）とした。
【００３５】
さらに、潮解性について試験例４と同様の基準により評価し、外観(色)は試験例３と同様の基準により評価した。
【００３６】
結果を表３に示す。実施例１の１４日目の吸湿増量は０．０２０７％、比較例４の吸湿増量は０．０２０７％であり、４０℃７５％ＲＨの環境下では、どちらもほぼ同じレベルで吸湿していることがわかる。
アラニルグルタミンを配合した実施例１については１４日間、高温多湿の環境下に置いても固形の状態を保ち潮解しなかった。しかしながら、スクロースを配合した比較例４については高温多湿の環境下では、蓋を閉めた保存であっても１４日目で潮解しており固形の状態を保つことができなかった。
色については、スクロースを配合した比較例４の凍結乾燥製剤は、高温多湿環境下の保存で褐色に変化したが、アラニルグルタミンを配合した実施例１は、１４日間高温多湿環境下に保存しても色が変化しなかった。
試験期間１４日経過後において、比較例４は潮解、外観変色、水溶性不良を示している。更に、１ヶ月経過後では、ＡＰＰＳ残存率においても、比較例４は低下することが確認された。
これらのことから、スクロースを配合した比較例４の凍結乾燥製剤は、吸湿すると、潮解したり外観(色）が激しく変化したりするので、品質を維持するために密閉性の高い容器での保存が必須であるのに対し、アラニルグルタミンを配合した実施例１は、吸湿環境下でも品質が著しく低下しないので、ガラス製などの必ずしも密閉性の高い容器に保存しなくても良いことがわかった。
【００３７】
試験例７
[吸湿した凍結乾燥製剤の溶解性]
吸湿した凍結乾燥製剤について、水への溶解性を評価し、吸湿した状態で使用時に水性の製剤に溶解して使用する皮膚外用剤と成りうるか調べた。
４０℃７５％ＲＨの環境下、ＰＥＮ容器に入れ、蓋をして１４日間保存した凍結乾燥製剤１５０ｍｇを１０ｍＬ入り試料瓶に量り取り、水５ｇを加えてフタをして、上下に１０回振り混ぜた。水への溶解性を以下の基準により評価した。
○：完全に溶解している
×：溶け残りがある
【００３８】
結果を表３に示した。
アラニルグルタミンを配合した実施例１は溶解性に優れていた。しかしながら、スクロースを配合した比較例４は溶解性が悪かった。
スクロースを配合した比較例４は、吸湿前は水へ完全に溶解したが、吸湿し潮解して固形の状態を保つことができなくなったものは、溶解試験で溶け残りが生じた（評価は×）。試験例３において、５０℃２８日間保存したスクロース配合品の水への溶解性の評価は○であったから、スクロースを配合した凍結乾燥製剤（比較例４）は吸湿して潮解すると水への溶解が遅くなることがわかった。
凍結乾燥製剤はそのままか或いは水分含有量の低い製剤に含有させた皮膚外用剤にした場合でも、使用時に水または水性の製剤に溶解して使用する。このため、使用時の溶解性は重要である。
本発明品であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを配合した凍結乾燥製剤は、ＡＰＰＳ残存率、溶解性、外観、及び「吸湿した状態でのＡＰＰＳ残存率、溶解性、外観」の全てにおいて優れていた。吸湿しないように密封容器（ガラス容器）での保存が望まれるスクロース配合の凍結乾燥製剤に対し、本発明品であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンを配合した凍結乾燥製剤は、吸湿しても安定性が高いので、ガラス容器のみならずプラスチック容器での保存性能も優れるものである。
【００３９】
処方例１
第１剤
ＡＰＰＳ２．８６ｇとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇとした。この水溶液５．２５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して得られたＡＰＰＳとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの凍結乾燥製剤０．４５ｇ
第２剤
下記組成の化粧水 ４．５５ｇ
成分 質量％
グリセリン ２．０
１，２−ペンタンジオール ５．０
トリメチルグリシン ０．５
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０００１
クエン酸ナトリウム 適量
クエン酸 適量
精製水 残余
使用時に第１剤を第２剤に溶解する。溶解時のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの濃度は３質量％である。
【００４０】
処方例２
第１剤
ＡＰＰＳ２．８６ｇとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇとした。この水溶液１．７５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して得られたＡＰＰＳとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの凍結乾燥製剤０．１５ｇ
第２剤
下記組成の乳液 ４．８５ｇ
成分 質量％
グリセリン ５．０
ジプロピレングリコール １０．０
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０００１
キサンタンガム ０．１
スクワラン ５．０
ジメチコン １．０
ホホバ油 １．０
ラウロイルグルタミン酸ジ（フィトステリル/オクチルドデシル）１．０
ステアリン酸ソルビタン ０．２
ヤシ油脂肪酸スクロース ０．１
ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油 ０．５
カルボマーＫ ０．０５
精製水 残余
使用時に第１剤を第２剤に溶解する。溶解時のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの濃度は１質量％である。
【００４１】
処方例３
第１剤
ＡＰＰＳ２．８６ｇとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン５．７２ｇを水８０ｇに溶解し、全量を水で１００ｇとした。この水溶液３．５ｇをバイヤルに充填し、凍結乾燥して得られたＡＰＰＳとＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの凍結乾燥製剤０．３ｇ
第２剤
下記組成の美容液 ４．９７ｇ
成分 質量％
グリセリン ８．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
ジプロピレングリコール ５．０
ヒアルロン酸ナトリウム ０．００１
スクレロチウムガム ０．０１
ジメチコン １．０
マカデミアナッツ油 ０．５
マカデミアナッツ脂肪酸フィトステリル ０．５
水添レシチン ０．５
ステアリン酸ポリグリセリル-１０ ０．５
エタノール ５．０
精製水 残余
使用時に第１剤を第２剤に溶解する。溶解時のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸三ナトリウムの濃度は２質量％である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸とアラニルグルタミンを含有する水溶液の凍結乾燥製剤。
【請求項２】
請求項１に記載の凍結乾燥製剤と水性の製剤とからなる皮膚外用剤であって、該凍結乾燥製剤を使用時に該水性の製剤に溶解して使用することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項３】
化粧料であることを特徴とする請求項２記載の皮膚外用剤。
【請求項１】
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−脂肪酸とアラニルグルタミンを含有する水溶液の凍結乾燥製剤。
【請求項２】
請求項１に記載の凍結乾燥製剤と水性の製剤とからなる皮膚外用剤であって、該凍結乾燥製剤を使用時に該水性の製剤に溶解して使用することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項３】
化粧料であることを特徴とする請求項２記載の皮膚外用剤。
【公開番号】特開２０１２−１７３０４（Ｐ２０１２−１７３０４Ａ）
【公開日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１５６２９５（Ｐ２０１０−１５６２９５）
【出願日】平成２２年７月９日（２０１０．７．９）
【出願人】（５９３１０６９１８）株式会社ファンケル (310)
【出願人】（３９００１０２０５）第一ファインケミカル株式会社 (23)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月９日（２０１０．７．９）
【出願人】（５９３１０６９１８）株式会社ファンケル (310)
【出願人】（３９００１０２０５）第一ファインケミカル株式会社 (23)
【Ｆターム（参考）】
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