ＭＳＨのアゴニストであるトリペプチド複合体
本発明は、エナンチオマー又はジアステレオマー、ならびにラセミ混合物を含むそれらの混合物の形での、Ａ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＮＨ2という一般式Ｉを満たすトリペプチド複合体であって、式中、Ａは、ＨＯＯＣ−Ｒという一般式ＩＩのモノカルボン酸に対応する基であり（式中、Ｒは、一つ又は複数の不飽和、有利には１〜６の不飽和を含み得る、ヒドロキシル基により場合によっては置換された直鎖型又は分岐型のＣ1〜Ｃ24の脂肪族基、およびリポ酸又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸である）、同一のもの又は異なるものであるＡＡ１、ＡＡ２およびＡＡ３は、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つがＰｈｅ、有利にはＤＰｈｅであることを条件として、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｔｒｐ、Ｎａｐ、ＴｐｉおよびＴｉｃの中から選択されたアミノ酸を互いに独立して表している、トリペプチド複合体に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のＭＳＨのアゴニストであるトリペプチド複合体、また、治療および美容におけるその応用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アルファ−ＭＳＨは、解熱、抗炎症および色素沈着といったきわめて数多くの生理学的活性を有するものとして知られている、人体が自然に産生する物質である。
【０００３】
伝達物質として、アルファ−ＭＳＨは、各々が７つの膜貫通ドメインを有する五つの既に開示された受容体を含む、複数の特異的受容体を有している。皮膚では、前述の活性には、「メラノコルチン−１」受容体（ＭＣ−１ｒ）が介入する。ここで、アルファ−ＭＳＨの結合は、自身がアデニリルシクラーゼを刺激し、かくして環状アデノシン一リン酸（又はｃＡＭＰ）を産生する、（Ｇγｓタイプのサブユニットαを有する）プロテインＧの活性化を誘発する。
【０００４】
ｃＡＭＰの産生は、細胞の遺伝子のＤＮＡレベルでｃＡＭＰに対する応答エレメントに結合する能力をもつタンパク質（又はＣＲＥＢ）をリン酸化反応により活性化させる、プロテインキナーゼＡの活性化を誘発する。こうして、伝達物質の発現が誘導され、これらの伝達物質はそのとき標的細胞に対しその効果を及ぼす。
【０００５】
哺乳動物では、皮膚および体毛の着色は、メラニンという共通の色素カテゴリに起因する。皮膚の中でのこれらのメラニンの産生は、表皮基底膜および毛包の中に局在している細胞であるメラノサイトにより行われる。メラニンの合成はチロシナーゼという酵素の活性により制御される。アルファ−ＭＳＨがその受容体ＭＣ−１へ結合することによって、この酵素（ならびに関連酵素ＴＲＰ−１およびＴＲＰ−２）の産生が刺激される。チロシナーゼによるメラニンの産生は、細胞小器官であるプレメラノソームの内部で起こる。ひとたびメラニンで満たされると、これらの細胞小器官はメラノソームと呼ばれ、メラノサイトの樹状突起を介して隣接細胞であるケラチノサイトまで移送される。こうしてメラニンは表皮内に分布し、その褐色化および保護を行う。
【０００６】
抗ラジカルの特性と太陽光線を吸収する特性とを有するものとして認められている天然色素であるメラニンは、皮膚の生理学的な保護作用物質である。人間の体内でこの色素の産生を刺激できる化合物は、皮膚美容学においては存在しない。
【０００７】
その上、アルファ−ＭＳＨの抗炎症効果の機序は完全に解明されていないが、数多くの実験事実により、アルファ−ＭＳＨがＭＣ−１受容体に結合することでＮＯＳｉ（又はＮＯＳ２）、ＮＦΚＢの誘発を阻害し、ｍＲＮＡの発現とそれに続く抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の産生を誘発すると考えられている。このサイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α又はＩＮＦγといった炎症性サイトカインの放出に対抗する。
【０００８】
表皮の細胞集団の９５％を構成するケラチノサイトは、ＩＬ−１を蓄積しているとみなされており、その細胞表面にＭＣ−１受容体を有する。かくして、これらの受容体へのアルファ−ＭＳＨの結合は、局所的な炎症現象の調節を可能にする。
【０００９】
アルファ−ＭＳＨは、アセチル−Ｓｅｒ1−Ｔｙｒ2−Ｓｅｒ3−Ｍｅｔ4−Ｇｌｕ5−Ｈｉｓ6−Ｐｈｅ7−Ａｒｇ8−Ｔｒｐ9−Ｇｌｙ10−Ｌｙｓ11−Ｐｒｏ12−Ｖａｌ13−ＮＨ2（つまりＳｅｒ＝セリン、Ｔｙｒ＝チロシン、Ｍｅｔ＝メチオニン、Ｇｌｕ＝グルタミン酸、Ｈｉｓ＝ヒスチジン、Ｐｈｅ＝フェニルアラニン、Ａｒｇ＝アルギニン、Ｔｒｐ＝トリプトファン、Ｇｌｙ＝グリシン、Ｌｙｓ＝リジン、Ｐｒｏ＝プロリンおよびＶａｌ＝バリン）という構造のトリデカペプチドである。非常に数多くの科学的研究作業により、ヘプタペプチド４〜１０にメラノサイト刺激（ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｅ）効果があり（Ｈａｓｋｅｌｌ−Ｌｕｅｖａｎｏ他 Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９７，４０，２１３３−２１３９）、トリペプチド１１〜１３に抗炎症効果がある（Ｈｉｌｔｚ Ｍ．ＥとＬｉｐｔｏｎ Ｊ．Ｍ． Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １９９０，１１，９７９−９８２）ものとして従来記載されている、アルファ−ＭＳＨの活性配列が立証された。
【特許文献１】米国特許第５６７４８３９号明細書
【特許文献２】米国特許第６０５４５５６号明細書
【特許文献３】仏国特許出願公開第２８３５５２８号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
さらに、近年の研究作業の結果、さまざまな出願人が環状構造を記載している特許を出願している（Ｈｒｕｂｙ他 米国特許第５６７４８３９号明細書および米国特許第６０５４５５６号明細書）。なお、基本となるテトラペプチド配列を有するヘキサペプチドである「メリタン（ｍｅｌｉｔａｎｅ）（登録商標）」（仏国特許出願公開第２８３５５２８号明細書）（Ａｃ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ2）は、α−ＭＳＨのアゴニストとして市販されている。しかしながら、この化合物は、高分子量のものであり、従って非常に制限された治療的又は美容的活性を有する。実際、そのサイズのため、最適化が困難であり、その生物学的利用能は制限されている。その上、それは高価で調製が困難である。
【００１１】
反面、テトラペプチドＰｈ（ＣＨ2）3ＣＯ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐは、アルファ−ＭＳＨのアゴニストとして非常に大きな活性を有する（Ｋｏｉｋｏｖ他 Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１３ （２００３），２６４７〜２６５０頁）。このテトラペプチド配列は生物学的活性を有する最小断片として識別されてきており、これまでのところテトラペプチドのサイズについての他の修正は全く記載も示唆もされたことがない。ところが、このテトラペプチドのサイズおよび分子量はなお大きすぎるものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
驚くべきことに、発明者らは、Ｎ末端がパルミトイル化されたトリペプチドには、α−ＭＳＨの有意なアゴニスト活性をなおも示すものがあるということを発見した。これらのアゴニストは非常に低い分子量を有し、従って最適化が容易であり、優れた生物学的利用能をもち、調製が非常に容易である。
【００１３】
従って、本発明は、エナンチオマー又はジアステレオマー、ならびにラセミ混合物を含むこれらの混合物の形での、下記の一般式Ｉを満たすトリペプチド複合体に関する。
Ａ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＮＨ2 （Ｉ）
式中、Ａは下記の一般式ＩＩのモノカルボン酸に対応する基であり、
ＨＯＯＣ−Ｒ （ＩＩ）
式中、Ｒは、
−一つ又は複数の不飽和、有利には１〜６の不飽和を含み得る、ヒドロキシル基によって場合によっては置換された直鎖型又は分岐型のＣ1−Ｃ24の脂肪族基、
−リポ酸又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸、
であり、
同一のもの又は異なるものであるＡＡ１、ＡＡ２およびＡＡ３は、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つがＰｈｅ、有利にはＤＰｈｅであることを条件として、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｔｒｐ、Ｎａｐ、ＴｐｉおよびＴｉｃの中から選択されたアミノ酸を互いに独立して表す。
【００１４】
式（Ｉ）のトリペプチド複合体の中のアミノ酸は、別途規定のない限り立体配置Ｄ、Ｌ又はＤＬを取り得る。
【００１５】
かくして、式（Ｉ）のトリペプチド複合体は一つ又は複数の不斉炭素原子を有し得る。従ってこれらは、エナンチオマー又はジアステレオマーの形で存在することができる。これらのエナンチオマー、ジアステレオマーならびにラセミ混合物を含めたこれらの混合物は、本発明の一部を成す。
【００１６】
本発明の枠内では以下のような意味がある：
−Ａｌａ、アラニン、
−Ｐｈｅ、フェニルアラニン、
−Ｔｒｐ、トリプトファン、
−Ａｒｇ、アルギニン、
−Ｎａｐ、ナフチルアラニン、
−Ｔｐｉ、テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸、
−Ｔｉｃ、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、
−Ｏｒｎ、オルニチン、
−Ｈｉｓ、ヒスチジン、および
−Ｌｙｓ、リジン。
【００１７】
同様に、本発明の目的である上述のトリペプチド複合体が、ＮＨ2末端の形態で（つまりアミド基を有する形で）得られるということも明示される。
【００１８】
本発明に従ったトリペプチド複合体は、式ＩＩの酸に塩又はエステルの形で結合している。本発明に従った複合は、式ＩＩの酸の酸性官能基とアミノ酸の酸性官能基を反応させることにより実施され得、さらには式ＩＩの酸のヒドロキシル基の存在を利用することも可能である。
【００１９】
本発明はこれらの複合全体、ならびに非官能性複合体に関する。複合は物理的なもの又は化学的なものである。
【００２０】
有利には、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つ、有利には二つが、Ａｒｇ、Ｈｉｓ又はＴｒｐから成る群から選択される。
【００２１】
有利には、ＡＡ２はＤＰｈｅである。
【００２２】
有利には、ＡＡ２又はＡＡ３はＡｒｇである。
【００２３】
有利には、ＡＡ１はＨｉｓである。
【００２４】
有利には、ＡＡ２がＡｒｇであり、また、ＡＡ３がＴｒｐである場合には、ＡＡ１はＤＰｈｅ又はＰｈｅではない。
【００２５】
有利には、式（ＩＩ）の酸は多価不飽和脂肪酸、すなわち１〜６個の不飽和を含む脂肪酸である。さらに有利には、これはオメガ−３脂肪酸である。
【００２６】
これらのオメガ−３脂肪酸としては、特にα−リノレン酸、セルボン酸、ティムノドン酸およびピノレン酸が挙げられる。セルボン酸、ティムノドン酸およびピノレン酸は同様に、それぞれ４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＣ）、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、および５，９，１２−オクタデカトリエン酸の呼称でも知られている。
【００２７】
Ａが一般式（ＩＩ）のモノカルボン酸のラジカルである場合には、これを酢酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヒドロキシデセン酸およびデセン酸、そして特にトランス−１０−ヒドロキシ−Δ２−デセン酸およびトランス−オキソ−９−デセン−２−酸の中から有利には選択し得る。
【００２８】
有利には、式（ＩＩ）の酸は、リポ酸（Ｌｉｐ）又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸（Ｐｂｕ）の中から選択された酸である。
【００２９】
有利には、Ａはパルミチン酸（Ｐａｌｍ）に対応する基である。
【００３０】
本発明のトリペプチド複合体としては、Ａが上述の定義を有するものとして、
ａ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
ｂ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
から成る群から選択されたトリペプチド複合体を挙げることができる。
【００３１】
本発明のトリペプチド複合体としては、
１）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
２）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
３）Ｐｂｕ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
４）Ｌｉｐ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
から成る群から選択されたトリペプチド複合体を挙げることができる。
【００３２】
本発明の目的であるトリペプチド複合体は、当業者にとって既知の任意の方法に従って、有利には従来の化学合成又は酵素合成により得ることができる。
【００３３】
本発明はさらに、本発明に従ったトリペプチド複合体、および場合によっては美容的又は薬学的に受容可能な賦形剤を含む、美容用、皮膚科用又は薬学用組成物、又は食品サプリメントに関するものである。
【００３４】
トリペプチド複合体は、局所適用による美容的又は薬学的な利用のために投与することができる。これらは同様に、食品サプリメント内、つまり栄養補助食品の分野で、経口で利用可能である。
【００３５】
本発明に従ったトリペプチド複合体は、好ましくは局所適用により投与される。
【００３６】
美容用、薬学用又は皮膚科用組成物は、このタイプの投与のためのものとして通常知られている形態、すなわち有効成分の特性および到達性を向上させるべく特に皮膚への浸透を可能にする賦形剤を伴うローション、フォーム、ジェル、分散物、スプレー、美容液、パック、全身用乳液、ポマード、溶液、エマルジョン、ジェル又はクリームなどの形態をとり得る。これらの組成物は殆どの場合、本発明に従ったトリペプチド複合体の他に、一般に水又は例えばアルコール、エーテルもしくはグリコールなどの溶媒をベースとした生理学的に受容可能な溶剤を含む。これらの複合体は同様に、界面活性剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、増粘剤、相補的もしくは場合によっては相乗的な効果を導くその他の有効成分、微量元素、精油、香料、着色料、コラーゲン、化学フィルターもしくは無機フィルター、又は保湿剤、又は温泉水をも含み得る。
【００３７】
局所用の美容用組成物においては、本発明に従ったトリペプチド複合体は、１０-8Ｍ〜１０-3Ｍの間、有利には１０-7Ｍ〜１０-5Ｍの間に含まれる濃度で含まれ得る。
【００３８】
本発明はさらに、有利には癌を治療すること、糖尿病患者の慢性的病巣および創傷、静脈瘤性潰瘍、外科的創傷を癒合させること、線状皮膚萎縮、特に皮膚のアレルギー、炎症性反応、メラニン形成障害、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、白斑、紅斑、特に光誘起性の紅斑、炎症性脱毛症、ぜんそくを治療又は予防すること、又は肥満症を治療することを目的とした医薬品として利用するための、本発明に従ったトリペプチド複合体又は本発明に従った薬学用組成物に関する。
【００３９】
本発明はさらに、癌を治療すること、糖尿病患者の慢性的病巣および創傷、静脈瘤性潰瘍、外科的創傷を癒合させること、線状皮膚萎縮、特に皮膚のアレルギー、炎症性反応、メラニン形成障害、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、白斑、紅斑、特に光誘起性の紅斑、炎症性脱毛、ぜんそくを治療又は予防すること、又は肥満症を治療することを目的とした医薬品の製造のために本発明に従ったトリペプチド複合体を利用することに関するものである。
【００４０】
本発明はさらに、表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、メラニン細胞刺激剤（ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｅ）および／又は紅斑防止薬として、本発明に従った美容用組成物を利用することに関する。
【００４１】
最後に、本発明は、表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、本発明に従った美容用組成物を皮膚に塗布することを含む、美容的処置方法に関する。
【００４２】
以下の例は制限的意味なく例示を目的として示したものである。
【実施例１】
【００４３】
本発明に従った２つのトリペプチドの調製
利用する化学薬品は以下のものである：
α−Ｆｍｏｃ基によりＮ末端が保護されたアミノ酸である、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（ＴｒＴ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨは、ＳＥＮＮ ｃｈｅｍｉｃａｌｓおよびＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈから購入した。
【００４４】
カップリング剤であるＨＢＴＵ（２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル−ウロニウムのヘキサフルオロリン酸塩）は、ＳＥＮＮ ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。
【００４５】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、アセトニトリル、エチルエーテル、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ピペリジン、無水酢酸は、Ｒｉｅｄｅｌ ｄｅ Ｈａｅｎ、Ｃａｒｌｏ Ｅｒｂａ又はＡｃｒｏｓ ｏｒｇａｎｉｃｓから購入し、精製せずに利用した。
【００４６】
塩化アセチル、無水酢酸、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリイソプロピルシラン、塩化ベンゼンスルホニル、３−ピリジンプロピオン酸、酪酸、ヘキサン酸、３−シクロヘキシル−プロピオン酸、プロピオン酸、安息香酸、トランス桂皮酸、パルミチン酸、塩化ｐ−トルエンスルホニル、３，３’−ジフェニルプロピオン酸、ヘキサノン酸、ミリスチン酸、アダマンチルカルボン酸、インドール−３−酢酸、（２−ピリド−３−イル）チアゾール−４−カルボン酸、３−チオフェン酢酸、２−チオフェン酢酸、２−ベンズイミダゾールプロピオン酸、４−ビフェニル酢酸、４−ピリジル酢酸、α−メチル−ｐ−（２−チエニル）フェニル酢酸（スプロフェン）およびα−メチル−４−（２−メチルプロピル）−ベンゼン酢酸（イブプロフェン）を、Ａｌｄｒｉｃｈ又はＡｖｏｃａｄｏから購入した。全ての試薬および化学薬品はＡＣＳ品質のものであり、別途精製すること無く利用した。
【００４７】
Ｓｙｎｐｈａｓｅ、ポリアミド、Ｄシリーズ、Ｒｉｎｋアミドのランタン及びＳｙｎｐｈａｓｅ、ポリスチレン、Ｄシリーズ、ヒドロキシトリチルのランタンは、Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ，Ｐｔｙにより提供された。
【００４８】
競合結合試験のために利用した［125Ｉ］−ＮＤＰ−ＭＳＨを、Ｔａｔｒｏ他の論文（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １９８７，１２１，１９００）に記載された手順に従って調製した。
【００４９】
固相ペプチド合成を、自動合成装置ＡＣＴ４９６ΩでＦｍｏｃ法を利用して行った。各ウェルを、１５０ｍｇのＰＳ−Ｒｉｎｋアミド樹脂で満たした。該樹脂を、ＤＣＭ内で３０分間膨脹させた。脱保護およびカップリング段階は、所望の配列の合成が完了するまで実施した。カップリング段階については、各反応キュベットに、Ｎ−メチルピロリドンに溶解した、Ｎ末端がＦｍｏｃ基で保護されたアミノ酸の０．５Ｍ溶液４００μｌ、ＤＭＦに溶解したＮ−メチルモルホリンの０．５Ｍ溶液４００μｌ、およびＤＭＦに溶解したＨＢＴＵの０．５Ｍ溶液４００μｌという三つの溶液を連続して添加した。カップリング時間は９０分であった。２０分間の脱保護段階は、１．２ｍｌのＤＭＦ／ピペリジン（ｖ／ｖが８０／２０の溶液）を利用して実施した。各段階の間で、ＤＭＦで２回、ＤＣＭで１回、メタノールで１回、そしてＤＭＦで１回の、計５回、１．５ｍｌで洗浄を行った。
【００５０】
側鎖の脱保護およびペプチドの切り出しは、ウェルあたり１．５ｍｌの切り出し混合物（トリフルオロ酢酸／水／トリイソプロピルシラン、ｖ／ｖ／ｖが９５／２．５／２．５）を用いて、自動装置の９６のリアクターのブロック内で２時間実施した。ろ過による樹脂の除去の後、切り出し混合物を真空遠心分離機Ｊｏｕａｎ ＲＣ１０−１０で濃縮した。ペプチドをジエチルエーテル中に沈殿させ、遠心分離によりペレットにし、エーテルを除去した。この傾瀉作業を、冷たいジエチルエーテルを用いて反復した。粗ペプチドを、０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリル／水（ｖ／ｖが５０／５０）の中に可溶化させた。次に−８０℃で試料を冷凍し、凍結乾燥させた。この作業を二回反復した。
【００５１】
分析用と同じ溶媒系を利用して、二波長（２１４および２５４ｎｍ）検出器およびデルタパックＣ18カートリッジを伴うＷａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａｐｒｅｐシステムを用いて、逆相液体クロマトグラフィーにより、５０ｍｇの粗ペプチドの試料を精製した。
【００５２】
逆相ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳにより、単純ペプチドを分析した。凍結乾燥させた化合物上に、０．１％のＴＦＡを含む５００μｌのアセトニトリル／水（ｖ／ｖが５０／５０）を入れた。各管から１０μｌをＨＰＬＣおよびＬＣ／ＥＳＩ＋ＭＳの分析のために採取した。
【００５３】
Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９０ ＨＰＬＣシステムおよびＷａｔｅｒｓ ９９６フォトダイオードアレイ検出器、および５０×４．６ｍｍのＭｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｓｐｅｅｄ ＲＯＤ Ｃ１８カラム上で、ＨＰＬＣ分析を実施した。５ｍｌ／分の流量、および１００％のＢから１００％のＣまでの３分間の濃度勾配を用いた（溶離液Ｂ：水／０．５％ＴＦＡ、溶離液Ｃ：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）。純度の推定値は２１４ｎｍで検出されたピークの面積の百分率に基づくものである。
【００５４】
ＬＣ／ＭＳシステムは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＩＩ分光計（エレクトロスプレーによるイオン化モード、ＥＳＩ＋）と組み合わせたＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９０ ＨＰＬＣシステムで構成した。全ての分析は、Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８カラム、３．５μｍ、２．１×３０ｍｍを用いて実施した。６００μｌ／分の流量、および１００％のＢから１００％のＣまでの３分間の濃度勾配を用いた（溶離液Ｂ：水／０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｃ：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）。
【００５５】
エレクトロスプレー正イオンモードによる質量スペクトルを１００ｍｌ／分の溶媒流量で得た。噴霧化ガスおよび乾燥ガスの両方に窒素を用いた。０．１-Sの間隔で４００〜１４００ｍ／ｚの読取モードでデータを獲得した。１０回の読取値を加算して最終的なスペクトルを作成した。
【００５６】
モノアイソトピック質量を用いて、全ての化合物の分子量を計算した（Ｃ＝１２．０００、Ｈ＝１．００７、Ｎ＝１４．００３、Ｏ＝１５．９９４、Ｓ＝３１．９７２）。
【００５７】
合成した二つのトリペプチドについての結果を、下の表１にまとめた。
【００５８】
表１：トリペプチド合成の分析結果
【表１】
【実施例２】
【００５９】
本発明に従った２つのトリペプチド複合体の生物学的特性
この研究においては、ＥＣ50の値を決定するために、メラニンを産生する能力をもつメラノサイトの細胞系であるヒト細胞系Ｍ４Ｂｅ（Ｊａｃｕｂｏｖｉｃｈ他 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． １９７９，７，５９−６４）を利用した。
【００６０】
１０％のＦＣＳ、１ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および１０-4ｇ／ｍｌのストレプトマイシンを加えたダルベッコ変法イーグル培地の中で細胞を維持した。
【００６１】
全ての細胞系を５％のＣＯ2雰囲気下で３７℃に維持し、細胞培地を二日毎に新しくした。ペプチドと接触させる２４時間前に、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，デンマーク）上に細胞を播種した。
【００６２】
プレスクリーニングに、Ｃｌｏｕｄｍａｎ Ｓ９１マウスの黒色腫細胞系（Ｙａｓｕｍｕｒａ他 Ｓｃｉｅｎｃｅ． １５４，１１８６〜１１８９頁）を用いた。１０％のウマ血清、２％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、１ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および１０-4ｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｅｕｒｏｂｉｏ，Ｌｅｓ Ｕｌｉｓ，フランス）と共に、ＨＡＭ Ｆ１０中で細胞を維持した。全ての細胞系を５％のＣＯ2雰囲気下で３７℃に維持し、細胞培地を二日毎に新しくした。ペプチドと接触させる２４時間前に、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，デンマーク）上に細胞を播種した。
【００６３】
ｃＡＭＰの測定：
前日に播種した細胞を、１０-4Ｍのアデニン（Ｓｉｇｍａ）と共に１時間手短にインキュベートし、次に１０-4Ｍのイソブチル−１−メチルキサンチン（Ｓｉｇｍａ）、１０-4Ｍの４−［（３−ブトキシ−４−メトキシフェニル）メチル］−２−イミダゾリジノン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、および１０-7Ｍの本発明に従ったトリペプチドと共に、Ｋｒｅｂｓ Ｒｉｎｇｅｒ Ｈｅｐｅｓの培地中で１０分間インキュベートした。
【００６４】
その後、メーカーの手順に従って細胞溶解を実施した。
【００６５】
メーカーの指示事項に従って競合結合試験キット（ＲＰＮ２２５，Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いてｃＡＭＰ含有量を測定した。各々の独立した実験を少なくとも３回を２セット実施した。
【００６６】
かくして、ｃＡＭＰの誘発について、５０ｎＭの濃度の本発明に従った１つのトリペプチドをテストし、該誘発は、α−ＭＳＨ（５０ｎＭ）によって誘発されたｃＡＭＰ産生の応答に基づいて計算した。結果を下の表２に示した。
【００６７】
表２：Ｃｌｏｕｄｍａｎ Ｓ９１マウスの黒色腫細胞系での本発明に従ったトリペプチドのｃＡＭＰの誘発（５０ｎＭの「メリタン（登録商標）」（１）の最大応答に対する百分率で表されたデータ）
【表２】
【００６８】
ＥＣ50の決定：
曲線を調整し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）内の非線形回帰を用いてＥＣ50の値を決定した。各ＥＣ50の値は、少なくとも２セットの独立した実験の平均である。
【００６９】
結合研究：ＩＣ50の決定
ＭＣ1−Ｒに対するαＭＳＨの結合親和性を、［125Ｉ］−ＮＤＰ−ＭＳＨとの競合研究により決定した。トランスフェクトしたＣｏｓ−１細胞をダルベッコ変法イーグル培地、０．２％のＢＳＡ、０．３ｍＭのフェナントロリン緩衝液中で２４時間インキュベートした。５．８×１０-11Ｍの濃度で放射性標識したリガンドと共に２４ウェルプレート上に１０5の細胞を播種した。さまざまな濃度のリガンドと共に２４℃で２時間インキュベートした後、洗浄を実施し、放射能を測定する。
【００７０】
本発明に従った２つのトリペプチドのＥＣ50を下の表３にまとめ、メリタン（登録商標）およびα−ＭＳＨのＥＣ50と比較した。
【００７１】
表３：Ｍ４Ｂｅ細胞内でのｃＡＭＰの産生についてα−ＭＳＨと比較した、本発明の二つのトリペプチドのＥＣ50
【表３】
【００７２】
結果は、１４７％のｃＡＭＰの誘発を示すＰａｌｍ−トリペプチド１［Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2］で得られたものと一致している。
【００７３】
最も重要で最も驚くべき結果は、ＭＣ1受容体に対する、パルミトイル化したトリペプチドの活性にある。この研究で、我々はα−ＭＳＨ配列のトリペプチドのＣ末端のパルミトイル化が、ｃＡＭＰの産生を誘発する一方でＭＣ1受容体に対して活性な化合物を誘導するということを示した。これらの分子は、α−ＭＳＨアゴニストの配列の最小配列として文献中に記述されているものの一部分しか有していない。
【００７４】
興味深いことに、トリプトファン残基の除去により、ナノモルの範囲（ＥＣ50＝２．３ｎＭ）の活性を示すトリペプチド１が生成した。Ａｒｇが欠如しているトリペプチド２は、ＥＣ50が１７．３ｎＭである比較的低い効力を示した。これらのトリペプチドは、ＭＣ1Ｒに対するα−ＭＳＨの強力な活性を有するリガンドを設計するための優れたリーダー分子である。これらの結果は同様に、α−ＭＳＨの類似体のＮ末端上の疎水鎖、特にパルミトイル基の存在が、α−ＭＳＨの受容体ＭＣ1の活性化のための重要な構造的要素であることをも示している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のＭＳＨのアゴニストであるトリペプチド複合体、また、治療および美容におけるその応用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アルファ−ＭＳＨは、解熱、抗炎症および色素沈着といったきわめて数多くの生理学的活性を有するものとして知られている、人体が自然に産生する物質である。
【０００３】
伝達物質として、アルファ−ＭＳＨは、各々が７つの膜貫通ドメインを有する五つの既に開示された受容体を含む、複数の特異的受容体を有している。皮膚では、前述の活性には、「メラノコルチン−１」受容体（ＭＣ−１ｒ）が介入する。ここで、アルファ−ＭＳＨの結合は、自身がアデニリルシクラーゼを刺激し、かくして環状アデノシン一リン酸（又はｃＡＭＰ）を産生する、（Ｇγｓタイプのサブユニットαを有する）プロテインＧの活性化を誘発する。
【０００４】
ｃＡＭＰの産生は、細胞の遺伝子のＤＮＡレベルでｃＡＭＰに対する応答エレメントに結合する能力をもつタンパク質（又はＣＲＥＢ）をリン酸化反応により活性化させる、プロテインキナーゼＡの活性化を誘発する。こうして、伝達物質の発現が誘導され、これらの伝達物質はそのとき標的細胞に対しその効果を及ぼす。
【０００５】
哺乳動物では、皮膚および体毛の着色は、メラニンという共通の色素カテゴリに起因する。皮膚の中でのこれらのメラニンの産生は、表皮基底膜および毛包の中に局在している細胞であるメラノサイトにより行われる。メラニンの合成はチロシナーゼという酵素の活性により制御される。アルファ−ＭＳＨがその受容体ＭＣ−１へ結合することによって、この酵素（ならびに関連酵素ＴＲＰ−１およびＴＲＰ−２）の産生が刺激される。チロシナーゼによるメラニンの産生は、細胞小器官であるプレメラノソームの内部で起こる。ひとたびメラニンで満たされると、これらの細胞小器官はメラノソームと呼ばれ、メラノサイトの樹状突起を介して隣接細胞であるケラチノサイトまで移送される。こうしてメラニンは表皮内に分布し、その褐色化および保護を行う。
【０００６】
抗ラジカルの特性と太陽光線を吸収する特性とを有するものとして認められている天然色素であるメラニンは、皮膚の生理学的な保護作用物質である。人間の体内でこの色素の産生を刺激できる化合物は、皮膚美容学においては存在しない。
【０００７】
その上、アルファ−ＭＳＨの抗炎症効果の機序は完全に解明されていないが、数多くの実験事実により、アルファ−ＭＳＨがＭＣ−１受容体に結合することでＮＯＳｉ（又はＮＯＳ２）、ＮＦΚＢの誘発を阻害し、ｍＲＮＡの発現とそれに続く抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の産生を誘発すると考えられている。このサイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α又はＩＮＦγといった炎症性サイトカインの放出に対抗する。
【０００８】
表皮の細胞集団の９５％を構成するケラチノサイトは、ＩＬ−１を蓄積しているとみなされており、その細胞表面にＭＣ−１受容体を有する。かくして、これらの受容体へのアルファ−ＭＳＨの結合は、局所的な炎症現象の調節を可能にする。
【０００９】
アルファ−ＭＳＨは、アセチル−Ｓｅｒ1−Ｔｙｒ2−Ｓｅｒ3−Ｍｅｔ4−Ｇｌｕ5−Ｈｉｓ6−Ｐｈｅ7−Ａｒｇ8−Ｔｒｐ9−Ｇｌｙ10−Ｌｙｓ11−Ｐｒｏ12−Ｖａｌ13−ＮＨ2（つまりＳｅｒ＝セリン、Ｔｙｒ＝チロシン、Ｍｅｔ＝メチオニン、Ｇｌｕ＝グルタミン酸、Ｈｉｓ＝ヒスチジン、Ｐｈｅ＝フェニルアラニン、Ａｒｇ＝アルギニン、Ｔｒｐ＝トリプトファン、Ｇｌｙ＝グリシン、Ｌｙｓ＝リジン、Ｐｒｏ＝プロリンおよびＶａｌ＝バリン）という構造のトリデカペプチドである。非常に数多くの科学的研究作業により、ヘプタペプチド４〜１０にメラノサイト刺激（ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｅ）効果があり（Ｈａｓｋｅｌｌ−Ｌｕｅｖａｎｏ他 Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９７，４０，２１３３−２１３９）、トリペプチド１１〜１３に抗炎症効果がある（Ｈｉｌｔｚ Ｍ．ＥとＬｉｐｔｏｎ Ｊ．Ｍ． Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １９９０，１１，９７９−９８２）ものとして従来記載されている、アルファ−ＭＳＨの活性配列が立証された。
【特許文献１】米国特許第５６７４８３９号明細書
【特許文献２】米国特許第６０５４５５６号明細書
【特許文献３】仏国特許出願公開第２８３５５２８号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
さらに、近年の研究作業の結果、さまざまな出願人が環状構造を記載している特許を出願している（Ｈｒｕｂｙ他 米国特許第５６７４８３９号明細書および米国特許第６０５４５５６号明細書）。なお、基本となるテトラペプチド配列を有するヘキサペプチドである「メリタン（ｍｅｌｉｔａｎｅ）（登録商標）」（仏国特許出願公開第２８３５５２８号明細書）（Ａｃ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ2）は、α−ＭＳＨのアゴニストとして市販されている。しかしながら、この化合物は、高分子量のものであり、従って非常に制限された治療的又は美容的活性を有する。実際、そのサイズのため、最適化が困難であり、その生物学的利用能は制限されている。その上、それは高価で調製が困難である。
【００１１】
反面、テトラペプチドＰｈ（ＣＨ2）3ＣＯ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐは、アルファ−ＭＳＨのアゴニストとして非常に大きな活性を有する（Ｋｏｉｋｏｖ他 Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１３ （２００３），２６４７〜２６５０頁）。このテトラペプチド配列は生物学的活性を有する最小断片として識別されてきており、これまでのところテトラペプチドのサイズについての他の修正は全く記載も示唆もされたことがない。ところが、このテトラペプチドのサイズおよび分子量はなお大きすぎるものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
驚くべきことに、発明者らは、Ｎ末端がパルミトイル化されたトリペプチドには、α−ＭＳＨの有意なアゴニスト活性をなおも示すものがあるということを発見した。これらのアゴニストは非常に低い分子量を有し、従って最適化が容易であり、優れた生物学的利用能をもち、調製が非常に容易である。
【００１３】
従って、本発明は、エナンチオマー又はジアステレオマー、ならびにラセミ混合物を含むこれらの混合物の形での、下記の一般式Ｉを満たすトリペプチド複合体に関する。
Ａ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＮＨ2 （Ｉ）
式中、Ａは下記の一般式ＩＩのモノカルボン酸に対応する基であり、
ＨＯＯＣ−Ｒ （ＩＩ）
式中、Ｒは、
−一つ又は複数の不飽和、有利には１〜６の不飽和を含み得る、ヒドロキシル基によって場合によっては置換された直鎖型又は分岐型のＣ1−Ｃ24の脂肪族基、
−リポ酸又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸、
であり、
同一のもの又は異なるものであるＡＡ１、ＡＡ２およびＡＡ３は、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つがＰｈｅ、有利にはＤＰｈｅであることを条件として、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｔｒｐ、Ｎａｐ、ＴｐｉおよびＴｉｃの中から選択されたアミノ酸を互いに独立して表す。
【００１４】
式（Ｉ）のトリペプチド複合体の中のアミノ酸は、別途規定のない限り立体配置Ｄ、Ｌ又はＤＬを取り得る。
【００１５】
かくして、式（Ｉ）のトリペプチド複合体は一つ又は複数の不斉炭素原子を有し得る。従ってこれらは、エナンチオマー又はジアステレオマーの形で存在することができる。これらのエナンチオマー、ジアステレオマーならびにラセミ混合物を含めたこれらの混合物は、本発明の一部を成す。
【００１６】
本発明の枠内では以下のような意味がある：
−Ａｌａ、アラニン、
−Ｐｈｅ、フェニルアラニン、
−Ｔｒｐ、トリプトファン、
−Ａｒｇ、アルギニン、
−Ｎａｐ、ナフチルアラニン、
−Ｔｐｉ、テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸、
−Ｔｉｃ、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、
−Ｏｒｎ、オルニチン、
−Ｈｉｓ、ヒスチジン、および
−Ｌｙｓ、リジン。
【００１７】
同様に、本発明の目的である上述のトリペプチド複合体が、ＮＨ2末端の形態で（つまりアミド基を有する形で）得られるということも明示される。
【００１８】
本発明に従ったトリペプチド複合体は、式ＩＩの酸に塩又はエステルの形で結合している。本発明に従った複合は、式ＩＩの酸の酸性官能基とアミノ酸の酸性官能基を反応させることにより実施され得、さらには式ＩＩの酸のヒドロキシル基の存在を利用することも可能である。
【００１９】
本発明はこれらの複合全体、ならびに非官能性複合体に関する。複合は物理的なもの又は化学的なものである。
【００２０】
有利には、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つ、有利には二つが、Ａｒｇ、Ｈｉｓ又はＴｒｐから成る群から選択される。
【００２１】
有利には、ＡＡ２はＤＰｈｅである。
【００２２】
有利には、ＡＡ２又はＡＡ３はＡｒｇである。
【００２３】
有利には、ＡＡ１はＨｉｓである。
【００２４】
有利には、ＡＡ２がＡｒｇであり、また、ＡＡ３がＴｒｐである場合には、ＡＡ１はＤＰｈｅ又はＰｈｅではない。
【００２５】
有利には、式（ＩＩ）の酸は多価不飽和脂肪酸、すなわち１〜６個の不飽和を含む脂肪酸である。さらに有利には、これはオメガ−３脂肪酸である。
【００２６】
これらのオメガ−３脂肪酸としては、特にα−リノレン酸、セルボン酸、ティムノドン酸およびピノレン酸が挙げられる。セルボン酸、ティムノドン酸およびピノレン酸は同様に、それぞれ４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＣ）、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、および５，９，１２−オクタデカトリエン酸の呼称でも知られている。
【００２７】
Ａが一般式（ＩＩ）のモノカルボン酸のラジカルである場合には、これを酢酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヒドロキシデセン酸およびデセン酸、そして特にトランス−１０−ヒドロキシ−Δ２−デセン酸およびトランス−オキソ−９−デセン−２−酸の中から有利には選択し得る。
【００２８】
有利には、式（ＩＩ）の酸は、リポ酸（Ｌｉｐ）又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸（Ｐｂｕ）の中から選択された酸である。
【００２９】
有利には、Ａはパルミチン酸（Ｐａｌｍ）に対応する基である。
【００３０】
本発明のトリペプチド複合体としては、Ａが上述の定義を有するものとして、
ａ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
ｂ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
から成る群から選択されたトリペプチド複合体を挙げることができる。
【００３１】
本発明のトリペプチド複合体としては、
１）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
２）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
３）Ｐｂｕ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
４）Ｌｉｐ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
から成る群から選択されたトリペプチド複合体を挙げることができる。
【００３２】
本発明の目的であるトリペプチド複合体は、当業者にとって既知の任意の方法に従って、有利には従来の化学合成又は酵素合成により得ることができる。
【００３３】
本発明はさらに、本発明に従ったトリペプチド複合体、および場合によっては美容的又は薬学的に受容可能な賦形剤を含む、美容用、皮膚科用又は薬学用組成物、又は食品サプリメントに関するものである。
【００３４】
トリペプチド複合体は、局所適用による美容的又は薬学的な利用のために投与することができる。これらは同様に、食品サプリメント内、つまり栄養補助食品の分野で、経口で利用可能である。
【００３５】
本発明に従ったトリペプチド複合体は、好ましくは局所適用により投与される。
【００３６】
美容用、薬学用又は皮膚科用組成物は、このタイプの投与のためのものとして通常知られている形態、すなわち有効成分の特性および到達性を向上させるべく特に皮膚への浸透を可能にする賦形剤を伴うローション、フォーム、ジェル、分散物、スプレー、美容液、パック、全身用乳液、ポマード、溶液、エマルジョン、ジェル又はクリームなどの形態をとり得る。これらの組成物は殆どの場合、本発明に従ったトリペプチド複合体の他に、一般に水又は例えばアルコール、エーテルもしくはグリコールなどの溶媒をベースとした生理学的に受容可能な溶剤を含む。これらの複合体は同様に、界面活性剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、増粘剤、相補的もしくは場合によっては相乗的な効果を導くその他の有効成分、微量元素、精油、香料、着色料、コラーゲン、化学フィルターもしくは無機フィルター、又は保湿剤、又は温泉水をも含み得る。
【００３７】
局所用の美容用組成物においては、本発明に従ったトリペプチド複合体は、１０-8Ｍ〜１０-3Ｍの間、有利には１０-7Ｍ〜１０-5Ｍの間に含まれる濃度で含まれ得る。
【００３８】
本発明はさらに、有利には癌を治療すること、糖尿病患者の慢性的病巣および創傷、静脈瘤性潰瘍、外科的創傷を癒合させること、線状皮膚萎縮、特に皮膚のアレルギー、炎症性反応、メラニン形成障害、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、白斑、紅斑、特に光誘起性の紅斑、炎症性脱毛症、ぜんそくを治療又は予防すること、又は肥満症を治療することを目的とした医薬品として利用するための、本発明に従ったトリペプチド複合体又は本発明に従った薬学用組成物に関する。
【００３９】
本発明はさらに、癌を治療すること、糖尿病患者の慢性的病巣および創傷、静脈瘤性潰瘍、外科的創傷を癒合させること、線状皮膚萎縮、特に皮膚のアレルギー、炎症性反応、メラニン形成障害、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、白斑、紅斑、特に光誘起性の紅斑、炎症性脱毛、ぜんそくを治療又は予防すること、又は肥満症を治療することを目的とした医薬品の製造のために本発明に従ったトリペプチド複合体を利用することに関するものである。
【００４０】
本発明はさらに、表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、メラニン細胞刺激剤（ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｅ）および／又は紅斑防止薬として、本発明に従った美容用組成物を利用することに関する。
【００４１】
最後に、本発明は、表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、本発明に従った美容用組成物を皮膚に塗布することを含む、美容的処置方法に関する。
【００４２】
以下の例は制限的意味なく例示を目的として示したものである。
【実施例１】
【００４３】
本発明に従った２つのトリペプチドの調製
利用する化学薬品は以下のものである：
α−Ｆｍｏｃ基によりＮ末端が保護されたアミノ酸である、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（ＴｒＴ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨは、ＳＥＮＮ ｃｈｅｍｉｃａｌｓおよびＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈから購入した。
【００４４】
カップリング剤であるＨＢＴＵ（２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル−ウロニウムのヘキサフルオロリン酸塩）は、ＳＥＮＮ ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。
【００４５】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール、アセトニトリル、エチルエーテル、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ピペリジン、無水酢酸は、Ｒｉｅｄｅｌ ｄｅ Ｈａｅｎ、Ｃａｒｌｏ Ｅｒｂａ又はＡｃｒｏｓ ｏｒｇａｎｉｃｓから購入し、精製せずに利用した。
【００４６】
塩化アセチル、無水酢酸、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリイソプロピルシラン、塩化ベンゼンスルホニル、３−ピリジンプロピオン酸、酪酸、ヘキサン酸、３−シクロヘキシル−プロピオン酸、プロピオン酸、安息香酸、トランス桂皮酸、パルミチン酸、塩化ｐ−トルエンスルホニル、３，３’−ジフェニルプロピオン酸、ヘキサノン酸、ミリスチン酸、アダマンチルカルボン酸、インドール−３−酢酸、（２−ピリド−３−イル）チアゾール−４−カルボン酸、３−チオフェン酢酸、２−チオフェン酢酸、２−ベンズイミダゾールプロピオン酸、４−ビフェニル酢酸、４−ピリジル酢酸、α−メチル−ｐ−（２−チエニル）フェニル酢酸（スプロフェン）およびα−メチル−４−（２−メチルプロピル）−ベンゼン酢酸（イブプロフェン）を、Ａｌｄｒｉｃｈ又はＡｖｏｃａｄｏから購入した。全ての試薬および化学薬品はＡＣＳ品質のものであり、別途精製すること無く利用した。
【００４７】
Ｓｙｎｐｈａｓｅ、ポリアミド、Ｄシリーズ、Ｒｉｎｋアミドのランタン及びＳｙｎｐｈａｓｅ、ポリスチレン、Ｄシリーズ、ヒドロキシトリチルのランタンは、Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ，Ｐｔｙにより提供された。
【００４８】
競合結合試験のために利用した［125Ｉ］−ＮＤＰ−ＭＳＨを、Ｔａｔｒｏ他の論文（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １９８７，１２１，１９００）に記載された手順に従って調製した。
【００４９】
固相ペプチド合成を、自動合成装置ＡＣＴ４９６ΩでＦｍｏｃ法を利用して行った。各ウェルを、１５０ｍｇのＰＳ−Ｒｉｎｋアミド樹脂で満たした。該樹脂を、ＤＣＭ内で３０分間膨脹させた。脱保護およびカップリング段階は、所望の配列の合成が完了するまで実施した。カップリング段階については、各反応キュベットに、Ｎ−メチルピロリドンに溶解した、Ｎ末端がＦｍｏｃ基で保護されたアミノ酸の０．５Ｍ溶液４００μｌ、ＤＭＦに溶解したＮ−メチルモルホリンの０．５Ｍ溶液４００μｌ、およびＤＭＦに溶解したＨＢＴＵの０．５Ｍ溶液４００μｌという三つの溶液を連続して添加した。カップリング時間は９０分であった。２０分間の脱保護段階は、１．２ｍｌのＤＭＦ／ピペリジン（ｖ／ｖが８０／２０の溶液）を利用して実施した。各段階の間で、ＤＭＦで２回、ＤＣＭで１回、メタノールで１回、そしてＤＭＦで１回の、計５回、１．５ｍｌで洗浄を行った。
【００５０】
側鎖の脱保護およびペプチドの切り出しは、ウェルあたり１．５ｍｌの切り出し混合物（トリフルオロ酢酸／水／トリイソプロピルシラン、ｖ／ｖ／ｖが９５／２．５／２．５）を用いて、自動装置の９６のリアクターのブロック内で２時間実施した。ろ過による樹脂の除去の後、切り出し混合物を真空遠心分離機Ｊｏｕａｎ ＲＣ１０−１０で濃縮した。ペプチドをジエチルエーテル中に沈殿させ、遠心分離によりペレットにし、エーテルを除去した。この傾瀉作業を、冷たいジエチルエーテルを用いて反復した。粗ペプチドを、０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリル／水（ｖ／ｖが５０／５０）の中に可溶化させた。次に−８０℃で試料を冷凍し、凍結乾燥させた。この作業を二回反復した。
【００５１】
分析用と同じ溶媒系を利用して、二波長（２１４および２５４ｎｍ）検出器およびデルタパックＣ18カートリッジを伴うＷａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａｐｒｅｐシステムを用いて、逆相液体クロマトグラフィーにより、５０ｍｇの粗ペプチドの試料を精製した。
【００５２】
逆相ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳにより、単純ペプチドを分析した。凍結乾燥させた化合物上に、０．１％のＴＦＡを含む５００μｌのアセトニトリル／水（ｖ／ｖが５０／５０）を入れた。各管から１０μｌをＨＰＬＣおよびＬＣ／ＥＳＩ＋ＭＳの分析のために採取した。
【００５３】
Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９０ ＨＰＬＣシステムおよびＷａｔｅｒｓ ９９６フォトダイオードアレイ検出器、および５０×４．６ｍｍのＭｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｓｐｅｅｄ ＲＯＤ Ｃ１８カラム上で、ＨＰＬＣ分析を実施した。５ｍｌ／分の流量、および１００％のＢから１００％のＣまでの３分間の濃度勾配を用いた（溶離液Ｂ：水／０．５％ＴＦＡ、溶離液Ｃ：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）。純度の推定値は２１４ｎｍで検出されたピークの面積の百分率に基づくものである。
【００５４】
ＬＣ／ＭＳシステムは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＩＩ分光計（エレクトロスプレーによるイオン化モード、ＥＳＩ＋）と組み合わせたＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９０ ＨＰＬＣシステムで構成した。全ての分析は、Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８カラム、３．５μｍ、２．１×３０ｍｍを用いて実施した。６００μｌ／分の流量、および１００％のＢから１００％のＣまでの３分間の濃度勾配を用いた（溶離液Ｂ：水／０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｃ：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）。
【００５５】
エレクトロスプレー正イオンモードによる質量スペクトルを１００ｍｌ／分の溶媒流量で得た。噴霧化ガスおよび乾燥ガスの両方に窒素を用いた。０．１-Sの間隔で４００〜１４００ｍ／ｚの読取モードでデータを獲得した。１０回の読取値を加算して最終的なスペクトルを作成した。
【００５６】
モノアイソトピック質量を用いて、全ての化合物の分子量を計算した（Ｃ＝１２．０００、Ｈ＝１．００７、Ｎ＝１４．００３、Ｏ＝１５．９９４、Ｓ＝３１．９７２）。
【００５７】
合成した二つのトリペプチドについての結果を、下の表１にまとめた。
【００５８】
表１：トリペプチド合成の分析結果
【表１】
【実施例２】
【００５９】
本発明に従った２つのトリペプチド複合体の生物学的特性
この研究においては、ＥＣ50の値を決定するために、メラニンを産生する能力をもつメラノサイトの細胞系であるヒト細胞系Ｍ４Ｂｅ（Ｊａｃｕｂｏｖｉｃｈ他 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． １９７９，７，５９−６４）を利用した。
【００６０】
１０％のＦＣＳ、１ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および１０-4ｇ／ｍｌのストレプトマイシンを加えたダルベッコ変法イーグル培地の中で細胞を維持した。
【００６１】
全ての細胞系を５％のＣＯ2雰囲気下で３７℃に維持し、細胞培地を二日毎に新しくした。ペプチドと接触させる２４時間前に、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，デンマーク）上に細胞を播種した。
【００６２】
プレスクリーニングに、Ｃｌｏｕｄｍａｎ Ｓ９１マウスの黒色腫細胞系（Ｙａｓｕｍｕｒａ他 Ｓｃｉｅｎｃｅ． １５４，１１８６〜１１８９頁）を用いた。１０％のウマ血清、２％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、１ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および１０-4ｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｅｕｒｏｂｉｏ，Ｌｅｓ Ｕｌｉｓ，フランス）と共に、ＨＡＭ Ｆ１０中で細胞を維持した。全ての細胞系を５％のＣＯ2雰囲気下で３７℃に維持し、細胞培地を二日毎に新しくした。ペプチドと接触させる２４時間前に、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，デンマーク）上に細胞を播種した。
【００６３】
ｃＡＭＰの測定：
前日に播種した細胞を、１０-4Ｍのアデニン（Ｓｉｇｍａ）と共に１時間手短にインキュベートし、次に１０-4Ｍのイソブチル−１−メチルキサンチン（Ｓｉｇｍａ）、１０-4Ｍの４−［（３−ブトキシ−４−メトキシフェニル）メチル］−２−イミダゾリジノン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、および１０-7Ｍの本発明に従ったトリペプチドと共に、Ｋｒｅｂｓ Ｒｉｎｇｅｒ Ｈｅｐｅｓの培地中で１０分間インキュベートした。
【００６４】
その後、メーカーの手順に従って細胞溶解を実施した。
【００６５】
メーカーの指示事項に従って競合結合試験キット（ＲＰＮ２２５，Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いてｃＡＭＰ含有量を測定した。各々の独立した実験を少なくとも３回を２セット実施した。
【００６６】
かくして、ｃＡＭＰの誘発について、５０ｎＭの濃度の本発明に従った１つのトリペプチドをテストし、該誘発は、α−ＭＳＨ（５０ｎＭ）によって誘発されたｃＡＭＰ産生の応答に基づいて計算した。結果を下の表２に示した。
【００６７】
表２：Ｃｌｏｕｄｍａｎ Ｓ９１マウスの黒色腫細胞系での本発明に従ったトリペプチドのｃＡＭＰの誘発（５０ｎＭの「メリタン（登録商標）」（１）の最大応答に対する百分率で表されたデータ）
【表２】
【００６８】
ＥＣ50の決定：
曲線を調整し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）内の非線形回帰を用いてＥＣ50の値を決定した。各ＥＣ50の値は、少なくとも２セットの独立した実験の平均である。
【００６９】
結合研究：ＩＣ50の決定
ＭＣ1−Ｒに対するαＭＳＨの結合親和性を、［125Ｉ］−ＮＤＰ−ＭＳＨとの競合研究により決定した。トランスフェクトしたＣｏｓ−１細胞をダルベッコ変法イーグル培地、０．２％のＢＳＡ、０．３ｍＭのフェナントロリン緩衝液中で２４時間インキュベートした。５．８×１０-11Ｍの濃度で放射性標識したリガンドと共に２４ウェルプレート上に１０5の細胞を播種した。さまざまな濃度のリガンドと共に２４℃で２時間インキュベートした後、洗浄を実施し、放射能を測定する。
【００７０】
本発明に従った２つのトリペプチドのＥＣ50を下の表３にまとめ、メリタン（登録商標）およびα−ＭＳＨのＥＣ50と比較した。
【００７１】
表３：Ｍ４Ｂｅ細胞内でのｃＡＭＰの産生についてα−ＭＳＨと比較した、本発明の二つのトリペプチドのＥＣ50
【表３】
【００７２】
結果は、１４７％のｃＡＭＰの誘発を示すＰａｌｍ−トリペプチド１［Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2］で得られたものと一致している。
【００７３】
最も重要で最も驚くべき結果は、ＭＣ1受容体に対する、パルミトイル化したトリペプチドの活性にある。この研究で、我々はα−ＭＳＨ配列のトリペプチドのＣ末端のパルミトイル化が、ｃＡＭＰの産生を誘発する一方でＭＣ1受容体に対して活性な化合物を誘導するということを示した。これらの分子は、α−ＭＳＨアゴニストの配列の最小配列として文献中に記述されているものの一部分しか有していない。
【００７４】
興味深いことに、トリプトファン残基の除去により、ナノモルの範囲（ＥＣ50＝２．３ｎＭ）の活性を示すトリペプチド１が生成した。Ａｒｇが欠如しているトリペプチド２は、ＥＣ50が１７．３ｎＭである比較的低い効力を示した。これらのトリペプチドは、ＭＣ1Ｒに対するα−ＭＳＨの強力な活性を有するリガンドを設計するための優れたリーダー分子である。これらの結果は同様に、α−ＭＳＨの類似体のＮ末端上の疎水鎖、特にパルミトイル基の存在が、α−ＭＳＨの受容体ＭＣ1の活性化のための重要な構造的要素であることをも示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エナンチオマー又はジアステレオマー、ならびにラセミ混合物を含むこれらの混合物の形での、下記の一般式Ｉを満たすトリペプチド複合体であって、
Ａ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＮＨ2 （Ｉ）
式中、Ａは下記の一般式ＩＩのモノカルボン酸に対応する基であり、
ＨＯＯＣ−Ｒ （ＩＩ）
式中、Ｒは、
−一つ又は複数の不飽和、有利には１〜６の不飽和を含み得る、ヒドロキシル基によ
り場合によっては置換された直鎖型又は分岐型のＣ1〜Ｃ24の脂肪族基、
−リポ酸又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸、
であり、
同一のもの又は異なるものであるＡＡ１、ＡＡ２およびＡＡ３は、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つがＰｈｅ、有利にはＤＰｈｅであることを条件として、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｔｒｐ、Ｎａｐ、ＴｐｉおよびＴｉｃの中から選択されたアミノ酸を互いに独立して表す、トリペプチド複合体。
【請求項２】
Ａがパルミチン酸に対応する基であることを特徴とする、請求項１に記載のトリペプチド複合体。
【請求項３】
ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つが、Ａｒｇ、Ｈｉｓ又はＴｒｐから成る群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載のトリペプチド複合体。
【請求項４】
ＡＡ２がＤＰｈｅであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項５】
ＡＡ２又はＡＡ３がＡｒｇであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項６】
ＡＡ１がＨｉｓであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項７】
Ａが請求項１又は２に記載の定義を有するとき、
ａ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
ｂ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
という式のトリペプチド複合体により構成される群から選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項８】
１）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
２）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
３）Ｐｂｕ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
４）Ｌｉｐ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
から選択されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体、および場合によっては美容的又は薬学的に受容可能な賦形剤を含むことを特徴とする、美容用、皮膚科用又は薬学用組成物。
【請求項１０】
有利には癌を治療すること、糖尿病患者の慢性的病巣および創傷、静脈瘤性潰瘍、外科的創傷を癒合させること、線状皮膚萎縮、特に皮膚のアレルギー、炎症性反応、メラニン形成障害、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、白斑、紅斑、特に光誘起性の紅斑、炎症性脱毛症、ぜんそくを治療又は予防すること、又は肥満症を治療することを目的とした医薬品としての、請求項１〜８のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体又は請求項９に記載の薬学用組成物。
【請求項１１】
表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、メラニン細胞刺激剤（ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｅ）および／又は紅斑防止薬としての、請求項９に記載の美容用組成物の利用方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の美容用組成物を皮膚へ塗布することを含む、表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、美容的処置方法。
【請求項１】
エナンチオマー又はジアステレオマー、ならびにラセミ混合物を含むこれらの混合物の形での、下記の一般式Ｉを満たすトリペプチド複合体であって、
Ａ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＮＨ2 （Ｉ）
式中、Ａは下記の一般式ＩＩのモノカルボン酸に対応する基であり、
ＨＯＯＣ−Ｒ （ＩＩ）
式中、Ｒは、
−一つ又は複数の不飽和、有利には１〜６の不飽和を含み得る、ヒドロキシル基によ
り場合によっては置換された直鎖型又は分岐型のＣ1〜Ｃ24の脂肪族基、
−リポ酸又はその還元型であるジヒドロリポ酸、Ｎ−リポイル−リジン又はフェニル酪酸、
であり、
同一のもの又は異なるものであるＡＡ１、ＡＡ２およびＡＡ３は、ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つがＰｈｅ、有利にはＤＰｈｅであることを条件として、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｔｒｐ、Ｎａｐ、ＴｐｉおよびＴｉｃの中から選択されたアミノ酸を互いに独立して表す、トリペプチド複合体。
【請求項２】
Ａがパルミチン酸に対応する基であることを特徴とする、請求項１に記載のトリペプチド複合体。
【請求項３】
ＡＡ１、ＡＡ２又はＡＡ３のうちの少なくとも一つが、Ａｒｇ、Ｈｉｓ又はＴｒｐから成る群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載のトリペプチド複合体。
【請求項４】
ＡＡ２がＤＰｈｅであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項５】
ＡＡ２又はＡＡ３がＡｒｇであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項６】
ＡＡ１がＨｉｓであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項７】
Ａが請求項１又は２に記載の定義を有するとき、
ａ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
ｂ）Ａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
という式のトリペプチド複合体により構成される群から選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項８】
１）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
２）Ｐａｌｍ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ2、
３）Ｐｂｕ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
４）Ｌｉｐ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｒｇ−ＮＨ2、
から選択されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体、および場合によっては美容的又は薬学的に受容可能な賦形剤を含むことを特徴とする、美容用、皮膚科用又は薬学用組成物。
【請求項１０】
有利には癌を治療すること、糖尿病患者の慢性的病巣および創傷、静脈瘤性潰瘍、外科的創傷を癒合させること、線状皮膚萎縮、特に皮膚のアレルギー、炎症性反応、メラニン形成障害、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、白斑、紅斑、特に光誘起性の紅斑、炎症性脱毛症、ぜんそくを治療又は予防すること、又は肥満症を治療することを目的とした医薬品としての、請求項１〜８のいずれか一つに記載のトリペプチド複合体又は請求項９に記載の薬学用組成物。
【請求項１１】
表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、メラニン細胞刺激剤（ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｅ）および／又は紅斑防止薬としての、請求項９に記載の美容用組成物の利用方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の美容用組成物を皮膚へ塗布することを含む、表皮のメラニン化を促進するため、皮膚の自然な日焼けを得るため、顔、首および手のシワの治癒的および予防的処置のため、又は日光の紫外線（ＵＶＡ−ＵＶＢ）に対する完全な保護を行うための、美容的処置方法。
【公表番号】特表２００８−５０２５９９（Ｐ２００８−５０２５９９Ａ）
【公表日】平成２０年１月３１日（２００８．１．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１２２８１（Ｐ２００７−５１２２８１）
【出願日】平成１７年５月１０日（２００５．５．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００１１６５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１６０６７
【国際公開日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【出願人】（５００４７０４８２）サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック（セーエヌエールエス） (25)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ （ＣＮＲＳ）
【出願人】（５０６３７６９９７）
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＥＵＲＯＰＥＥＮ ＤＥ ＢＩＯＬＯＧＩＥ ＣＥＬＬＵＬＡＩＲＥ
【出願人】（５０４４６２３１９）ユニヴェルシテ ドゥ モンぺリエ アン (9)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＤＥ ＭＯＮＴＰＥＬＬＩＥＲ １
【出願人】（５０６０７５２５２）ユニベルシテ モンペリエ ドゥー (7)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＭＯＮＴＰＥＬＬＩＥＲ ＩＩ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１月３１日（２００８．１．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月１０日（２００５．５．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００１１６５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１６０６７
【国際公開日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【出願人】（５００４７０４８２）サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック（セーエヌエールエス） (25)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ （ＣＮＲＳ）
【出願人】（５０６３７６９９７）
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＥＵＲＯＰＥＥＮ ＤＥ ＢＩＯＬＯＧＩＥ ＣＥＬＬＵＬＡＩＲＥ
【出願人】（５０４４６２３１９）ユニヴェルシテ ドゥ モンぺリエ アン (9)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＤＥ ＭＯＮＴＰＥＬＬＩＥＲ １
【出願人】（５０６０７５２５２）ユニベルシテ モンペリエ ドゥー (7)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＭＯＮＴＰＥＬＬＩＥＲ ＩＩ
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]