【課題】神経系細胞の発生・分化に重要な役割を果たす、ヒトNotch およびDelta 遺伝子、およびそれらのコードするタンパク質、並びに該タンパク質の抗原決定基を含むか機能的に活性であるそのフラグメントを提供する。
【解決手段】遺伝子工学的手法により作製した、以下の遺伝子およびタンパク質。（１）ヒトNotch 、Delta、Serrate の各遺伝子、およびそれらのコードするタンパク質。（２）トポリズミックタンパク質へのホモタイピックまたはヘテロタイピック結合を媒介する、トポリスミック遺伝子によりコードされる“トポリズミックタンパク質 ”のフラグメント（“接着フラグメント”）。（３）ヒトNotch および接着フラグメントに対する抗体。（４）上記タンパク質、またはフラグメントを利用した薬剤送達方法。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の核酸によりコードされる精製されたヒトNotchタンパク質であって、前記第１の核酸が、ヒトＤＮＡまたはｃＤＮＡから得られ、(a)ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６０９を指定されたプラスミドｈＮ３ｋ、または(b)ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６１１を指定されたプラスミドｈＮ５ｋ中に含まれるヒトNotch配列またはその相補配列からなる第２の核酸にハイブリダイズし得、前記タンパク質が、Deltaタンパク質と結合でき、Serrateタンパク質と結合でき、またはヒトNotchタンパク質に特異的な抗体と結合できる、精製されたヒトNotchタンパク質。
【請求項２】
図２３に示されるアミノ酸配列（配列番号３２）、または図２４に示されるアミノ酸配列（配列番号３４）を含む精製されたタンパク質。
【請求項３】
精製されたタンパク質であって、
ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６０９を指定されたプラスミドｈＮ３ｋ中に含まれるヒトNotchＤＮＡ配列によってコードされるか、または
ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６１１を指定されたプラスミドｈＮ５ｋ中に含まれるヒトNotchＤＮＡ配列によってコードされる、
Notchアミノ酸配列を含むタンパク質。
【請求項４】
少なくとも77のアミノ酸からなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載のヒトNotchタンパク質の精製されたフラグメント。
【請求項５】
請求項１に記載のヒトNotchタンパク質のフラグメントであり、該フラグメントがDeltaタンパク質、Serrateタンパク質、またはヒトNotchタンパク質に特異的な抗体と結合できる、精製されたタンパク質。
【請求項６】
前記フラグメントが、ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６０９を指定されたプラスミドｈＮ３ｋ、またはＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６１１を指定されたプラスミドｈＮ５ｋに含まれるヒトｃＤＮＡ配列によってコードされるヒトNotchタンパク質配列の一部である、請求項４に記載のフラグメントまたは請求項５に記載のタンパク質フラグメント。
【請求項７】
ヒトNotchタンパク質の細胞外ドメインからなる、該タンパク質のフラグメント、または
ヒトNotchタンパク質の細胞内ドメインからなる、該タンパク質のフラグメント、または
ヒトNotchタンパク質の細胞外および膜貫通ドメインからなる、該タンパク質のフラグメント、または
ヒトNotchタンパク質のｃｄｃ１０繰返しを含む領域からなる、該タンパク質のフラグメント、または
ヒトNotchタンパク質のＥＧＦ相同繰返しからなる、該タンパク質の領域、または
ヒトNotchタンパク質のNotch/lin-12繰返しからなる、該タンパク質の領域、
を含む、請求項４記載のフラグメントまたは請求項５記載のタンパク質フラグメント。
【請求項８】
前記細胞内ドメインの配列及びｃｄｃ１０繰返しを含む領域の配列が、ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６０９を指定されたプラスミドｈＮ３ｋの一部によりコードされるか、またはＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６１１を指定されたプラスミドｈＮ５ｋの一部によりコードされる、請求項７に記載のフラグメント。
【請求項９】
ヒトNotchタンパク質の上皮増殖因子様繰返し１１および１２を含む、請求項４記載のフラグメントまたは請求項５記載のタンパク質フラグメント。
【請求項１０】
ヒトNotchタンパク質の上皮成長因子様繰返しを欠失しているか、またはその一部を欠失している、請求項４に記載のフラグメントまたは請求項５に記載のタンパク質フラグメント。
【請求項１１】
第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたDeltaタンパク質またはSerrateタンパク質とin vitroで結合できることにより特徴づけられる、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質、または請求項４記載のフラグメント、あるいは請求項５記載のタンパク質フラグメント。
【請求項１２】
本質的に該タンパク質の細胞内ドメインからなるか、または
本質的に該タンパク質の細胞外ドメインからなるか、または
本質的に該タンパク質の細胞外及び膜貫通ドメインからなる、
請求項４記載のフラグメントまたは請求項５記載のタンパク質フラグメント。
【請求項１３】
ヒトNotchに特異的な抗体により結合され得る、請求項２または３に記載のタンパク質、または請求項４記載のフラグメント、あるいは請求項５記載のタンパク質フラグメント。
【請求項１４】
第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたDeltaタンパク質またはSerrateタンパク質とin vitroで結合できることにより特徴づけられ、上皮成長因子様繰返し７〜９、もしくは上皮成長因子様繰返し１７〜２６、または上皮成長因子様繰返し７〜９及び上皮成長因子様繰返し１７〜３０、もしくは上皮成長因子様繰返し１〜１０及び上皮成長因子様繰返し１３〜３６を含まない、請求項１〜３のいずれか1項に記載のヒトNotchタンパク質の精製されたフラグメント。
【請求項１５】
前記タンパク質の配列内の１つ以上のアミノ酸残基が、機能的に同等に作用してサイレント変更を生じさせる類似の極性の別のアミノ酸に置換される、前記タンパク質のアミノ酸配列を有し、第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたDeltaまたはSerrateタンパク質とin vitroで結合できる、請求項1〜３のいずれか１項に記載のヒトNotchタンパク質の誘導体。
【請求項１６】
前記フラグメントの配列内の１つ以上のアミノ酸残基が、機能的に同等に作用してサイレント変更を生じさせる類似の極性の別のアミノ酸に置換される、前記フラグメントのアミノ酸配列を有し、第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたDeltaまたはSerrateタンパク質とin vitroで結合できる、請求項４〜１０、１２及び１４のいずれか１項に記載のフラグメントの誘導体。
【請求項１７】
前記タンパク質またはフラグメントの配列内の１つ以上のアミノ酸残基が、機能的に同等に作用してサイレント変更を生じさせる類似の極性の別のアミノ酸に置換される、前記タンパク質またはフラグメントのアミノ酸配列を有し、第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたDeltaまたはSerrateタンパク質とin vitroで結合できる、請求項１１または１３に記載のタンパク質またはフラグメントの誘導体。
【請求項１８】
異種タンパク質配列に結合した、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項４〜１０、１２及び１４のいずれか１項に記載のフラグメント、請求項１１または１３に記載のタンパク質またはフラグメント、あるいは請求項１５〜１７のいずれか1項に記載の誘導体を含むキメラタンパク質。
【請求項１９】
図２３に示されるヌクレオチド配列（配列番号３１）または図２４に示されるヌクレオチド配列（配列番号３３）を含む、精製された核酸。
【請求項２０】
ＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６０９を指定されたプラスミドｈＮ３ｋ中、またはＡＴＣＣに寄託されて受託番号６８６１１を指定されたプラスミドｈＮ５ｋ中に含まれるヒトNotch cDNAを含む精製された核酸、あるいはそれらに相補的なヌクレオチド配列。
【請求項２１】
図２３（配列番号３２）または図２４（配列番号３４）に示されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、精製された核酸。
【請求項２２】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質をコードするか、または
請求項４〜１０、１２及び１４のいずれか１項に記載のフラグメントをコードするか、または
請求項１１または１３記載のタンパク質またはフラグメントをコードするか、または
請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の誘導体をコードするか、または
請求項１８に記載のキメラタンパク質をコードする、
精製された核酸。
【請求項２３】
請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の核酸を含む核酸ベクター。
【請求項２４】
請求項２３記載の核酸ベクターで形質転換された組換え細胞。
【請求項２５】
タンパク質、フラグメント、誘導体またはキメラタンパク質が発現されるように、請求項２４記載の組換え細胞を増殖させる工程、及び発現されたタンパク質、フラグメント、誘導体またはキメラタンパク質を単離する工程、を包含する請求項１〜３のいずれか１項に記載のヒトNotchタンパク質、請求項４〜１０、１２及び１４のいずれか１項に記載のフラグメント、請求項１１または１３記載のタンパク質またはフラグメント、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の誘導体、または請求項１８に記載のキメラタンパク質を製造する方法。
【請求項２６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のヒトNotchタンパク質、請求項４〜１０、１２及び１４のいずれか１項に記載のフラグメント、または請求項１１または１３に記載のタンパク質またはフラグメントと結合する、ヒトNotchに特異的な抗体。
【請求項２７】
モノクローナル抗体である、請求項２６に記載の抗体。
【請求項２８】
ポリクローナル抗体である、請求項２６に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体のイディオタイプを含む、請求項２６に記載の抗体のフラグメントまたは誘導体。
【請求項３０】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項４〜１０、１２及び１４のいずれか１項に記載のフラグメント、請求項１１または１３に記載のタンパク質またはフラグメント、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の誘導体、または請求項１８に記載のキメラタンパク質で宿主動物を免疫する工程、及び前記タンパク質、フラグメント、誘導体またはキメラタンパク質と結合する抗体を選択する工程を含む、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の抗体を製造する方法。
【請求項３１】
(a) ヒトヌクレオチド配列を含む核酸を含むサンプルを、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の核酸またはそれらの一部を含む核酸プローブと、ハイブリダイゼーションが生じ得る条件下で、接触させる工程、
(b) 該プローブにハイブリダイズする該サンプル中の核酸を単離する工程、
を包含する、ヒトNotch核酸を単離する方法。
【請求項３２】
前記サンプルが、図２３（配列番号３１）または図２４（配列番号３３）に示されるＤＮＡ配列を含むヒトNotch ｃＤＮＡを含む、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
Notchタンパク質を発現している細胞への薬剤の送達方法であって、該方法がNotch発現細胞を、分子が該細胞に送達されるように該分子にin vitroで暴露する工程を含み、ここで該分子が、薬剤に結合した(a) Deltaタンパク質、(b) Deltaフラグメント、または(c) Deltaタンパク質またはフラグメントの誘導体を含み、Deltaタンパク質、フラグメントまたは誘導体は、第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたNotchタンパク質とin vitroで結合できることにより特徴づけられ、前記誘導体は、前記Deltaタンパク質又はDeltaフラグメントの配列内の１つ以上のアミノ酸残基が、機能的に同等に作用してサイレント変更を生じさせる類似の極性の別のアミノ酸によって置換される、前記Deltaタンパク質又はDeltaフラグメントのアミノ酸配列を有する、前記送達方法。
【請求項３４】
薬剤をNotchタンパク質を発現する細胞に送達する方法に使用する薬物の製造における、薬剤に結合した(a)Deltaタンパク質、(b) Deltaフラグメント、または(c) Deltaタンパク質又はフラグメントの誘導体を含む分子の使用であって、ここでDeltaタンパク質、フラグメントまたは誘導体は、第１細胞の表面上に発現されるとき、第２細胞の表面上に発現されたNotchタンパク質とin vitroで結合できることにより特徴づけられ、前記分子が細胞に送達されるようにNotch発現細胞を前記分子に暴露する工程を含み、前記誘導体は、前記Deltaタンパク質またはDeltaフラグメントの配列内の１つ以上のアミノ酸残基が、機能的に同等に作用してサイレント変更を生じさせる類似の極性の別のアミノ酸によって置換される、前記Deltaタンパク質またはDeltaフラグメントのアミノ酸配列を有する、前記使用。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６ａ】

【図６ｂ】

【図７】

【図８】

【図９ａ】

【図９ｂ】

【図９ｃ】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３ａ】

【図１３ｂ】

【図１３ｃ】

【図１３ｄ】

【図１３ｅ】

【図１３ｆ】

【図１４】

【図１５ａ】

【図１５ｂ】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３ａ】

【図２３ｂ】

【図２３ｃ】

【図２３ｄ】

【図２３ｅ】

【図２３ｆ】

【図２３ｇ】

【図２３ｈ】

【図２３ｉ】

【図２３ｊ】

【図２３ｋ】

【図２３ｌ】

【図２３ｍ】

【図２３ｎ】

【図２３ｏ】

【図２３ｐ】

【図２３ｑ】

【図２４ａ】

【図２４ｂ】

【図２４ｃ】

【図２４ｄ】

【図２４ｅ】

【図２４ｆ】

【図２４ｇ】

【図２５ａ】

【図２５ｂ】

【図２５ｃ】

【公開番号】特開２００７−３３０２５８（Ｐ２００７−３３０２５８Ａ）
【公開日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１８２６８４（Ｐ２００７−１８２６８４）
【出願日】平成１９年７月１１日（２００７．７．１１）
【分割の表示】特願平４−５１０６６８の分割
【原出願日】平成４年５月１日（１９９２．５．１）
【出願人】（５０３１８８８２９）エール　ユニバーシティー (6)
【出願人】（５９３０８０６８５）インディアナ　ユニバーシティ　ファンデーション (5)
【Ｆターム（参考）】