ＰＰＡＲ活性化剤
【課題】本発明は、新規ＰＰＡＲ活性化剤を提供することを課題とする。
【解決手段】ブドウ果汁またはワイン製造残渣を発酵させて得られる発酵物を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤。
【解決手段】ブドウ果汁またはワイン製造残渣を発酵させて得られる発酵物を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブドウ果汁またはワイン製造残渣を原料として利用したＰＰＡＲ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＰＡＲは核内受容体ファミリーに属するサブファミリーであり、ＰＰＡＲα、β／δおよびγの３種類のサブタイプで構成されている。また、ＰＰＡＲγについてはスプライシングの相違によりγ１およびγ２という２種のアイソフォームが存在する。各サブタイプの生理的機能は近年詳細に検討され、未解明の部分はあるものの、その概要が明らかにされている（非特許文献１、２参照）。
【０００３】
各サブタイプの遺伝子発現の組織特異性については、ＰＰＡＲαは代謝の活発な組織、即ち肝臓、心臓、腎臓、筋肉で高発現をしており、ＰＰＡＲβ／δは組織普遍的に発現がみられる。これに対し、ＰＰＡＲγはアイソフォームにより発現が異なり、γ１は心臓、筋肉、結腸、腎臓、膵臓、脾臓を含む多くの組織、γ２はγ１よりも３０アミノ残基だけ長く、主に脂肪組織、γ３はマクロファージ，大腸，白色脂肪組織で発現している。
【０００４】
各サブタイプの機能は重複する部分はあるが、各々固有の機能も有することが判明している。
【０００５】
ＰＰＡＲαは脂質代謝の調節に関与し、血中トリグリセリド・ＬＤＬコレステロールの低減、血中ＨＤＬコレステロールの向上作用を有する。また、動脈硬化巣の形成に関るＮＦ−κＢ、ＡＰ１の活性発現抑制作用を有する。従って、ＰＰＡＲα活性化剤は高脂血症・動脈硬化に対する予防・治療効果を有する。ＰＰＡＲδの生理的機能については、未だ不明の部分が多いが、脂質代謝の活性化に基づく血中脂質低減作用、排卵誘発並びに肥満阻止作用が推測されている。
【０００６】
ＰＰＡＲγに関しては小型脂肪細胞の分化誘導を行い、脂肪細胞のインスリン感受性を維持し、脂肪分解を抑制し、血中への遊離脂肪酸の分泌を低減することで、遊離脂肪酸に基づく末梢組織でのインスリン抵抗性を抑制する。また、脂肪細胞並びに筋肉、肝臓などの末梢組織においてグルコースの取込み、代謝を促進する。また、エネルギー消費に関るＵＣＰ２の脂肪細胞における発現を亢進する。従い、ＰＰＡＲγ活性化剤は糖尿病並びに肥満に対する予防・治療効果を有する。
【０００７】
また、ＰＰＡＲγは脂質代謝に関与し、その活性化剤は血中トリクリセリドおよび遊離脂肪酸の低減作用を発現することで、高脂血症の予防・治療効果を有する。更に、ＰＰＡＲγは血圧維持に関与するエンドセリン、ＰＡＩ−１などの因子の産生に関ることで、その活性化剤は高血圧症に対する予防・治療効果を有すること、炎症に関るＴＮＦαの脂肪細胞におけるＰＰＡＲγによる産生阻害、マクロファージにおけるＰＰＡＲγのＮＦ−κＢを介したアポトーシス誘導への関与、ＭＭＰ−９の活性阻止、ＮＯ産生抑制などに関与することで、その活性化剤は炎症性腸疾患などの炎症に対する予防・治療効果を有することが期待されている。
【０００８】
また最近、ＰＰＡＲγがアミロイドβの代謝に関与することが報告され、その活性化剤がアルツハイマー病の予防・治療効果を有する可能性も示唆されている（非特許文献１、２参照）。
【０００９】
ＰＰＡＲ活性化剤、特にＰＰＡＲγ活性化剤は、糖尿病などの重要な各種疾患に対して予防・治療効果が期待されることを受けて、多くの合成医薬品が開発され、ピオグリタゾンなど既に製品として臨床応用されるようになっている。
【００１０】
また、顕著な活性を有さずとも、副作用の回避が期待され、長期の摂取が可能であることが期待されるＰＰＡＲ活性作用を有する食品由来の天然物が探索され、次のような化合物が発見されている。
【００１１】
多価不飽和脂肪酸である、エイコサペンタエン酸、脂肪酸の代謝物である９−ＨＯＤＥ、１３−ＨＯＤＥ（非特許文献３、４参照）、ブドウ由来成分であるレスベラトロール（非特許文献５参照）、ヨモギ由来成分であるカフェ酸、クロロゲン酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸、４，５−ジカフェオイルキナ酸およびクロロゲニン酸メチル（特許文献１参照）、ウコン由来成分であるクルクミン（特許文献２参照）などが報告されている。
【００１２】
一方、脂質代謝に関して効果が期待される食品のうち、ワインが特に注目されている。ワインに含有されるポリフェノール成分が健康に良いという情報はテレビ、新聞を中心とするメディアに取り上げられ、消費者にも着実に浸透し、「喫煙率や脂肪の摂取量も高いフランス人が、動脈硬化性疾患による死亡率が低く、長生きできるのは何故かという疑問に対して、ワインを良く飲むためだと報告された」ことが話題（『フレンチ・パラドックス』）となり、ワインブームの端緒となった。それ以降、ぶどうに含まれる様々な成分と、それらが体にもたらす効果が研究されてきた。
【００１３】
しかしながら、ブドウ自体や果汁の活用状況と比較して、ブドウ果汁またはワイン製造後のブドウ搾りかす、オリ液、オリ搾りかすなどの残渣を活用した取り組みの規模は小さく、一部が肥料や健康食品サプリメントの原料として利用されているものの、殆どが未利用であるのが現状である。
【特許文献１】特開２００３−３４６３６号公報
【特許文献２】特開２００３−１２８５３９号公報
【非特許文献１】ｄ．Ａｂｒａｍｏ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．，２００５年，３９１巻，ｐ６９３−６９８
【非特許文献２】Ｓａｓｔｒｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．，２００５年，１０３巻，ｐ４４３−４４８
【非特許文献３】Ｗｉｌｌｓｏｎ−ＴＭ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００年，４３巻，ｐ５２７−５５０
【非特許文献４】Ｌｅｈｒｋｅ−Ｍ ＆ Ｌａｚａｒ−ＭＡ，Ｃｅｌｌ，２００５年，１２３巻，ｐ９９３−９９９
【非特許文献５】井上裕康、ビタミン、２００４年、７８巻、ｐ６２１−６２３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
この様に、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の多くが未活用であり、経済的な損失となっている。従って、ぶどう果樹生産振興とタイアップした植物性資源（ブドウ果汁またはワイン製造過程で排出されるぶどうの搾りかす、種、オリなど）の持続的な活用は農業の発展にも大きく貢献することになる。
【００１５】
また、上記より、ＰＰＡＲ活性化剤はＰＰＡＲが関与する病態や疾患、例えば、インスリン抵抗性を改善し、糖尿病をはじめ、高インスリン血症、脂質代謝異常、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧病、動脈硬化病などを予防または改善できるので、メタボリックシンドロームを予防または改善し得る。さらにＰＰＡＲが関与するアルツハイマー病または炎症性疾患を予防または改善する効果を有する。
【００１６】
本発明は、新規ＰＰＡＲ活性化剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、種々の食品からＰＰＡＲ活性について鋭意探索した結果、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物に高いＰＰＡＲアゴニスト活性があることを見出し、さらに研究をすすめ本発明を完成させた。
【００１８】
本発明は、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含有するＰＰＡＲ活性化剤に関する。
【００１９】
また本発明は、上記のＰＰＡＲ活性化能を有するブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含むインスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病、肥満などのメタボリックシンドロームおよびアルツハイマー病や炎症性疾患などの予防および／または改善用組成物に関する。本発明は、より具体的には、
〔１〕ブドウ果汁またはワイン製造残渣を発酵させて得られる発酵物を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤、
〔２〕発酵が酢酸発酵である上記〔１〕記載の活性化剤、
〔３〕発酵が乳酸発酵である上記〔１〕記載の活性化剤、
〔４〕メタボリックシンドロームの予防または改善用である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の活性化剤、
〔５〕インスリン抵抗性症候群、高脂血症もしくは糖尿病の予防または改善用である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の活性化剤、
〔６〕アルツハイマー症の予防または改善用である請求項１〜３のいずれかに記載の活性化剤、
〔７〕炎症性疾患の予防または改善用である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の活性化剤、
〔８〕飲食用であることを特徴とする上記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の活性化剤、および
〔９〕非ヒト動物用であることを特徴とする上記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の活性化剤、
を提供するものである。
さらに本発明は、以下に関する。
〔１０〕ＰＰＡＲ活性化剤または、メタボリックシンドロームもしくはアルツハイマー病あるいは炎症性疾患の予防または改善用組成物を製造するためのブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物の使用、および
〔１１〕ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含むＰＰＡＲ活性化剤を、個体（患者など）へ投与する工程を含むことを特徴とするメタボリックシンドローム、アルツハイマー病または炎症性疾患の予防または改善方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性化作用を有するので、メタボリックシンドロームやアルツハイマー症、あるいは炎症性疾患を予防または改善し得る。また、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、メタボリックシンドロームに係わる例えば、糖尿病（特にインスリン非依存性糖尿病またはＩＩ型糖尿病）をはじめ、高インスリン血病、脂質代謝異常疾患、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧症、動脈硬化病などの症状、病態または疾患などを予防または改善し得る。
加えて、従来産業廃棄物として廃棄されていたブドウ果汁またはワイン製造残渣の有効な利用範囲が広がれば、農産業の振興に役立ち、地域経済の活性化に資する事ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
本発明によって、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物がＰＰＡＲアゴニストであることが見出された。本発明は、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含有するＰＰＡＲ活性化剤を提供する。
【００２２】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲアゴニスト活性を有し、ＰＰＡＲを介して、肝臓・脂肪細胞・骨格筋などの組織において脂質および糖代謝を調節することで、肥満、インスリン抵抗性症候群、高脂血症および糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームの予防および／または改善に用いることができる。さらに本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、アルツハイマー症や炎症性疾患の予防または改善に用いることもできる。
【００２３】
ＰＰＡＲ活性化作用は、例えば、ＰＰＡＲリガンド結合領域とＧＡＬ４との融合タンパクに対する結合をルシフェラーゼの発現で評価するレポーター・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁）や、ＰＰＡＲリガンド結合領域を含むタンパクを用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８１３〜８１９頁）などにより測定することができる。
【００２４】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲα、γ、δの内、少なくとも１種以上のＰＰＡＲに対し、活性化作用を有していればよいが、とりわけＰＰＡＲγおよび／またはδに対して活性化作用を有する。
【００２５】
本発明の係るＰＰＡＲ活性化剤は、肥満、インスリン抵抗性症候群、高脂血症および糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームの予防または改善に有用であるが、インスリン抵抗性症候群、高脂血症および糖尿病などを予防または改善することも可能である。
インスリン抵抗性症候群としては、組織や細胞などでのインスリンの働きが低下したために生じる症状、疾患または病態などが挙げられる。インスリン抵抗性症候群には、例えば、糖尿病、肥満、高インスリン血病、脂質代謝異常疾患、高血圧症、動脈硬化病などが含まれる。糖尿病としては、例えば、インスリン抵抗性糖尿病またはＩＩ型糖尿病などが好ましく挙げられる。また、糖尿病には、耐糖能異常も含まれる。肥満としては、例えば内臓脂肪型肥満や皮下脂肪型肥満などが挙げられるが、好ましくは内臓脂肪型肥満である。脂質代謝異常疾患としては、例えば、高脂血病、高コレステロール血病、高ＬＤＬコレステロール血病、低ＬＤＬコレステロール血病、高トリグリセリド血病などが挙げられる。
【００２６】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性が抑制または低下などしたために生じる炎症性の症状、疾患または病態などの予防または改善に有用である。炎症性の疾患としては、具体的には、例えば炎症性腸疾患などが好ましく挙げられる。
【００２７】
ブドウ果汁またはワイン製造残渣は、ブドウ果汁またはワイン製造時に排出される残渣であれば特に限定されない。残渣としては、例えば、ブドウを圧搾して果汁を搾り出した（搾汁）後のブドウ搾りかす、ワイン醸造後の沈殿部分であるオリ液、オリ液を圧搾したオリ搾りかすなどが挙げられる。原料となるブドウ品種は、特に限定されないが、ワインに使用されるブドウ品種が好ましい。好ましいブドウ品種としては、例えば、キャンベル、ツヴァイゲルト・レーベ、ナイヤガラ、ケルナー、ミュラー・トゥルガウなどが挙げられる。本発明においては、それらの残渣は、単独で用いることもできるし、あるいは、２種以上を組み合わせて同時に用いることもできる。
【００２８】
発酵物は、残渣をそのまま、または残渣に加水し、それに菌（好ましくは、発酵菌）を添加して、約２０〜４５℃、好ましくは約２５〜４０℃の温度下で、約３〜７２時間発酵させることにより得ることができる。発酵としては、例えば、酵母菌を添加するアルコール発酵、乳酸菌を添加する乳酸発酵、酢酸菌を添加する酢酸発酵、酪酸菌を添加する酪酸発酵などが挙げられる。好ましくは乳酸発酵、酢酸発酵が望ましい。発酵に先立ち、残渣は殺菌されるのが好ましい。殺菌方法としては、医薬または食品分野で使用される方法が好ましく、例えば加熱殺菌などが好ましく挙げられる。残渣は、ミルまたはマスコロイダーなどの粉砕機で粉砕または磨砕されるのが好ましい。加水は、残渣１質量部に対して、水（例えば、水道水、精製水、蒸留水、ミネラルウォーターなど）約１〜２０質量部程度が好ましい。水は、粉砕または磨砕の前または後に加えてもよく、あるいは粉砕または磨砕の前および後に加えてもよい。また残渣は乾燥されたのち上記粉砕機で粉砕されてもよい。発酵溶液は、通常ｐＨ約３〜７、好ましくは約４．５〜７に調整されるのが望ましい。また、発酵溶液には、発酵を促進させるために、例えば、ブドウ糖などの発酵促進剤の添加を行っても良い。
【００２９】
乳酸発酵のための菌種としては、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＨＯＫＫＡＩＤＯ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ、ＬａｃｔｏＢａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓなどのラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属；Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｒａｖｉｅａｅなどのラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓなどのペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属；Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓなどのリューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属；Ｏｅｎｏｃｃｏｃｃｕｓ ｏｅｎｉなどのオエノコッカス（Ｏｅｎｏｃｃｏｃｃｕｓ）属；または、Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ ｋｉｍｃｈｉｉなどのワイセラ（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）属などが挙げられる。また、酢酸発酵のための菌種としては、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｒａｎｕｍなどのアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属などが挙げられる。
菌の添加量は、菌の種類によっても異なるが、培養開始時の菌数が、約１．０×１０5〜１．０×１０7ｃｆｕ／ｍＬ程度が好ましく、とりわけ約１．０×１０6〜１．０×１０7ｃｆｕ／ｍＬ程度が好ましい。
【００３０】
また本発明係るＰＰＡＲ活性化剤は、生理学的に許容される添加物とともにメタボリックシンドローム、アルツハイマー病、または炎症性疾患の予防もしくは改善用組成物とすることができる。かかる組成物は、例えば、飲食用もしくは動物用が含まれる。該組成物は、「予防剤」、「改善剤」、「飲食用組成物」、「飲料」、「食品」または「飼料」などと表記することもできる。
【００３１】
なお、本発明における「予防」または「改善」には、完全な予防効果または改善効果を有する場合に限定されず、部分的な効果を有する場合であってもよい。
【００３２】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤または上記組成物は、生理学的に許容される添加物、例えば、担体、賦形剤、あるいは希釈剤などと混合し、組成物として経口、あるいは非経口的に投与することができる。経口用組成物としては、顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、溶剤、乳剤、あるいは懸濁剤などの剤型とすることができる。非経口用組成物としては、外用薬剤などの剤型を選択することができる。外用薬剤としては、経鼻投与剤、あるいは軟膏剤、液剤、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、パップ剤などを挙げることができる。本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤または上記組成物は、主成分であるブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含むように、上記の剤型とすることができる。上記剤型は、公知の製剤技術を使用し、製造できる。
【００３３】
例えば、経口投与用の錠剤は、賦形剤、崩壊剤、結合剤、および滑沢剤などを加えて混合し、圧縮整形することにより製造することができる。賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプン、あるいはマンニトールなどが挙げられる。崩壊剤としては、例えば、炭酸カルシウムやカルボキシメチルセルロースカルシウムなどが挙げられる。結合剤としては、例えば、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、あるいはポリビニルピロリドンが挙げられる。滑沢剤としては、タルクやステアリン酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００３４】
錠剤は、マスキングや、腸溶性製剤とするために、白糖などによる糖衣や公知のコーティングを施すことができる。コーティング剤には、例えば、エチルセルロースやポリオキシエチレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートなどを用いることができる。
【００３５】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤の投与量は、投与方法、病状、患者の年齢などによって変化し得るが、大人では、通常、固形分換算して１日当たり約０．１〜２０００ｍｇ、好ましくは約１〜２００ｍｇ程度である。
【００３６】
また、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、種々の形態の飲料、スナック類、乳製品、調味料、でんぷん加工製品、加工肉製品などあらゆる飲食品に適宜配合することができる。
【００３７】
飲食品としては、例えば、飲料が好ましく挙げられる。飲料としては、茶系飲料、清涼飲料、果実飲料、野菜飲料、発泡性飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、またはアルコール性飲料などを挙げることができる。また、飲食品としては、液状、固形状、粉末状の嗜好飲料類、調味料および香辛料類、もしくは調理加工食品、および、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品などを挙げることができる。本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤を含む飲食品は、上述の各種疾患、症状または病態を予防または改善し得る。
【００３８】
飲食品には、その種類に応じて種々の添加物を配合することができる。添加物としては、食品衛生上許容される成分であれば特に制限されず、例えば、ブドウ糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、還元型アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ビタミンＥ、還元型グルタチン、トコトリエノール、カロチン、カロチノイド、リコピン、カテキン、イソフラボン、フラボノイド類、ポリフェノール、コウジ酸、ビタミンＡ、ビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12、ビタミンＤ、ナイアシン、パントテン酸、葉酸カルシウム、アルブミン、イコサペント酸（ＥＰＡ）、イヌリン、オリゴ糖、オルニチン、果糖、Ｌ−カルニチン、還元麦芽糖、乳酸オリゴマー、γ−アミノ酪酸、絹タンパク、グルコマンナン、クレアチン、ゲルマニウム、コエンザイムＱ１０、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、植物繊維、食物繊維、ゼラチン、チオクト酸、デキストリン、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、乳清、乳糖、ホスファチジルセリン、リノール酸、リノレン酸などの食品添加物、マグネシウム、亜鉛、クロム、セレン、カリウムなどが挙げられる。
【００３９】
本発明に係る活性化剤を飲食品に適用する場合の添加量としては、飲食品に対して、固形分換算して約０．１〜１００質量％であるのが好ましい。
【００４０】
また本発明は、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤もしくは上記組成物を個体（例えば、患者など）へ投与する工程を含む、上述の各種疾患の予防または改善方法を提供する。
【００４１】
本発明の予防または改善方法の対象となる個体は、上述の各種疾患を発症し得る生物であれば特に制限されないが、好ましくはヒトである。
【００４２】
さらに本発明は、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤もしくは上記組成物の製造のためのブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物の使用を包含する。
【実施例】
【００４３】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕
キャンベル種由来のワイン製造残渣（ブドウ搾りかす）に２倍量の加水を行い、ミル（セレンディピターＭＫＣＡ６−３；増幸産業株式会社製）で粉砕した。粉砕物に更に２倍量の加水および６％となるようにブドウ糖を添加し、次いでＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＨＯＫＫＡＩＤＯ）を１．０×１０7ｃｆｕ／ｍＬとなるよう添加し、３５℃にて４８時間乳酸発酵を行った。
【００４４】
〔実施例２〕
ＰＰＡＲ活性化試験：ＰＰＡＲ活性はＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）を指標に検討した。すなわち、サル由来ＣＶ−１細胞株を２×１０５／ｗｅｌｌ となるよう６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに播種し、ＤＭＥＭ［Ｄｏｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ；１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）］中で１日培養した。Ｇａｌ４のＤＮＡ結合ドメイン（Ｇａｌ４−ＤＢＤ）およびＰＰＡＲδのリガンド結合ドメイン（ＰＰＡＲδ−ＬＢＤ）のキメラタンパク発現プラスミド（ｐＧａｌ４ＤＢＤ／ＰＰＡＲδＬＢＤ）、Ｇａｌ４応答配列（配列番号：ＣＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＡＣＴＣＣＧ）およびホタルルシフェラーゼ遺伝子を含むレポータープラスミド（ｐＧａｌ４−Ｌｕｃ）、およびウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の上流にＣＭＶ（ｃｙｔｏｍｅｇａｒｏｖｉｒｕｓ）プロモーターを連結した内部標準プラスミド（ｐＧＬ４．７５ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ；Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を同時に各々１μｇ、０．９μｇ、０．１μｇ／ｗｅｌｌとなるようトランスフェクション試薬（ＦｕＧＥＮＥ ＨＤ；Ｒｏｃｈｅ社製）と共に加え、前記培養した細胞にプラスミドを導入した。この操作をＰＰＡＲγに対応するプラスミド（ｐＧａｌ４ＤＢＤ／ＰＰＡＲγＬＢＤ）を用いて同様に行った。その後形質転換細胞をトリプシンによりはがし、細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）にて洗浄後、９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに再度播種した。この際、培養液を被験物質を含むＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。ＰＢＳにて細胞を洗浄後、デュアルルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いてホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼ活性を各々測定した。すなわち細胞溶解液で細胞を溶解し、ルシフェリンを含む基質溶液を加え、プレートリーダー（ＡＲＶＯ ＭＸ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製）にてホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼの発光量を各々測定した。なお、ＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）は以下のように定義した。
【００４５】
ＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）＝（Ｇａｌ４−Ｌｕｃによるホタルルシフェラーゼ活性）／（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶによるウミシイタケルシフェラーゼ活性）
【００４６】
上記に示すＰＰＡＲ活性化試験を用い、実施例１の乳酸発酵液上澄のルシフェラーゼ活性を測定した。乳酸発酵液上澄は精製水にて溶解希釈したものを最終濃度２０％（ｖ／ｖ）となるよう培地に添加した。コントロール（ネガティブコントロール）として精製水を添加した群を、またＰＰＡＲδ、ＰＰＡＲγの陽性対照（ポジティブコントロール）として各々ＧＷ５０１５１６（１μＭ，Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）、Ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ（１０μＭ，Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）をＤＭＳＯ終濃度０．５％（ｖ／ｖ）となるよう添加した群をそれぞれ作成した。
【００４７】
評価の結果、表１に示すように、ワイン製造残渣由来の乳酸発酵液はルシフェラーゼ活性を示した。なお、各ルシフェラーゼ活性値は、コントロール（精製水）におけるルシフェラーゼ活性を１．０とし、それに対する相対値で示す。
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上説明したように、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性作用を有するので、メタボリックシンドロームやアルツハイマー症あるいは炎症性疾患を予防または改善し得る。また、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、メタボリックシンドロームに係わるインスリン抵抗性症候群をはじめ、例えば、糖尿病（特にインスリン非依存性糖尿病またはＩＩ型糖尿病）、高インスリン血症、脂質代謝異常疾患、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧症、動脈硬化症などの症状、病態または疾患、内臓脂肪型肥満に高血糖（糖尿病）、高血圧、高脂血病などを予防または改善し得る。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブドウ果汁またはワイン製造残渣を原料として利用したＰＰＡＲ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＰＡＲは核内受容体ファミリーに属するサブファミリーであり、ＰＰＡＲα、β／δおよびγの３種類のサブタイプで構成されている。また、ＰＰＡＲγについてはスプライシングの相違によりγ１およびγ２という２種のアイソフォームが存在する。各サブタイプの生理的機能は近年詳細に検討され、未解明の部分はあるものの、その概要が明らかにされている（非特許文献１、２参照）。
【０００３】
各サブタイプの遺伝子発現の組織特異性については、ＰＰＡＲαは代謝の活発な組織、即ち肝臓、心臓、腎臓、筋肉で高発現をしており、ＰＰＡＲβ／δは組織普遍的に発現がみられる。これに対し、ＰＰＡＲγはアイソフォームにより発現が異なり、γ１は心臓、筋肉、結腸、腎臓、膵臓、脾臓を含む多くの組織、γ２はγ１よりも３０アミノ残基だけ長く、主に脂肪組織、γ３はマクロファージ，大腸，白色脂肪組織で発現している。
【０００４】
各サブタイプの機能は重複する部分はあるが、各々固有の機能も有することが判明している。
【０００５】
ＰＰＡＲαは脂質代謝の調節に関与し、血中トリグリセリド・ＬＤＬコレステロールの低減、血中ＨＤＬコレステロールの向上作用を有する。また、動脈硬化巣の形成に関るＮＦ−κＢ、ＡＰ１の活性発現抑制作用を有する。従って、ＰＰＡＲα活性化剤は高脂血症・動脈硬化に対する予防・治療効果を有する。ＰＰＡＲδの生理的機能については、未だ不明の部分が多いが、脂質代謝の活性化に基づく血中脂質低減作用、排卵誘発並びに肥満阻止作用が推測されている。
【０００６】
ＰＰＡＲγに関しては小型脂肪細胞の分化誘導を行い、脂肪細胞のインスリン感受性を維持し、脂肪分解を抑制し、血中への遊離脂肪酸の分泌を低減することで、遊離脂肪酸に基づく末梢組織でのインスリン抵抗性を抑制する。また、脂肪細胞並びに筋肉、肝臓などの末梢組織においてグルコースの取込み、代謝を促進する。また、エネルギー消費に関るＵＣＰ２の脂肪細胞における発現を亢進する。従い、ＰＰＡＲγ活性化剤は糖尿病並びに肥満に対する予防・治療効果を有する。
【０００７】
また、ＰＰＡＲγは脂質代謝に関与し、その活性化剤は血中トリクリセリドおよび遊離脂肪酸の低減作用を発現することで、高脂血症の予防・治療効果を有する。更に、ＰＰＡＲγは血圧維持に関与するエンドセリン、ＰＡＩ−１などの因子の産生に関ることで、その活性化剤は高血圧症に対する予防・治療効果を有すること、炎症に関るＴＮＦαの脂肪細胞におけるＰＰＡＲγによる産生阻害、マクロファージにおけるＰＰＡＲγのＮＦ−κＢを介したアポトーシス誘導への関与、ＭＭＰ−９の活性阻止、ＮＯ産生抑制などに関与することで、その活性化剤は炎症性腸疾患などの炎症に対する予防・治療効果を有することが期待されている。
【０００８】
また最近、ＰＰＡＲγがアミロイドβの代謝に関与することが報告され、その活性化剤がアルツハイマー病の予防・治療効果を有する可能性も示唆されている（非特許文献１、２参照）。
【０００９】
ＰＰＡＲ活性化剤、特にＰＰＡＲγ活性化剤は、糖尿病などの重要な各種疾患に対して予防・治療効果が期待されることを受けて、多くの合成医薬品が開発され、ピオグリタゾンなど既に製品として臨床応用されるようになっている。
【００１０】
また、顕著な活性を有さずとも、副作用の回避が期待され、長期の摂取が可能であることが期待されるＰＰＡＲ活性作用を有する食品由来の天然物が探索され、次のような化合物が発見されている。
【００１１】
多価不飽和脂肪酸である、エイコサペンタエン酸、脂肪酸の代謝物である９−ＨＯＤＥ、１３−ＨＯＤＥ（非特許文献３、４参照）、ブドウ由来成分であるレスベラトロール（非特許文献５参照）、ヨモギ由来成分であるカフェ酸、クロロゲン酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸、４，５−ジカフェオイルキナ酸およびクロロゲニン酸メチル（特許文献１参照）、ウコン由来成分であるクルクミン（特許文献２参照）などが報告されている。
【００１２】
一方、脂質代謝に関して効果が期待される食品のうち、ワインが特に注目されている。ワインに含有されるポリフェノール成分が健康に良いという情報はテレビ、新聞を中心とするメディアに取り上げられ、消費者にも着実に浸透し、「喫煙率や脂肪の摂取量も高いフランス人が、動脈硬化性疾患による死亡率が低く、長生きできるのは何故かという疑問に対して、ワインを良く飲むためだと報告された」ことが話題（『フレンチ・パラドックス』）となり、ワインブームの端緒となった。それ以降、ぶどうに含まれる様々な成分と、それらが体にもたらす効果が研究されてきた。
【００１３】
しかしながら、ブドウ自体や果汁の活用状況と比較して、ブドウ果汁またはワイン製造後のブドウ搾りかす、オリ液、オリ搾りかすなどの残渣を活用した取り組みの規模は小さく、一部が肥料や健康食品サプリメントの原料として利用されているものの、殆どが未利用であるのが現状である。
【特許文献１】特開２００３−３４６３６号公報
【特許文献２】特開２００３−１２８５３９号公報
【非特許文献１】ｄ．Ａｂｒａｍｏ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．，２００５年，３９１巻，ｐ６９３−６９８
【非特許文献２】Ｓａｓｔｒｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．，２００５年，１０３巻，ｐ４４３−４４８
【非特許文献３】Ｗｉｌｌｓｏｎ−ＴＭ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００年，４３巻，ｐ５２７−５５０
【非特許文献４】Ｌｅｈｒｋｅ−Ｍ ＆ Ｌａｚａｒ−ＭＡ，Ｃｅｌｌ，２００５年，１２３巻，ｐ９９３−９９９
【非特許文献５】井上裕康、ビタミン、２００４年、７８巻、ｐ６２１−６２３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
この様に、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の多くが未活用であり、経済的な損失となっている。従って、ぶどう果樹生産振興とタイアップした植物性資源（ブドウ果汁またはワイン製造過程で排出されるぶどうの搾りかす、種、オリなど）の持続的な活用は農業の発展にも大きく貢献することになる。
【００１５】
また、上記より、ＰＰＡＲ活性化剤はＰＰＡＲが関与する病態や疾患、例えば、インスリン抵抗性を改善し、糖尿病をはじめ、高インスリン血症、脂質代謝異常、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧病、動脈硬化病などを予防または改善できるので、メタボリックシンドロームを予防または改善し得る。さらにＰＰＡＲが関与するアルツハイマー病または炎症性疾患を予防または改善する効果を有する。
【００１６】
本発明は、新規ＰＰＡＲ活性化剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、種々の食品からＰＰＡＲ活性について鋭意探索した結果、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物に高いＰＰＡＲアゴニスト活性があることを見出し、さらに研究をすすめ本発明を完成させた。
【００１８】
本発明は、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含有するＰＰＡＲ活性化剤に関する。
【００１９】
また本発明は、上記のＰＰＡＲ活性化能を有するブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含むインスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病、肥満などのメタボリックシンドロームおよびアルツハイマー病や炎症性疾患などの予防および／または改善用組成物に関する。本発明は、より具体的には、
〔１〕ブドウ果汁またはワイン製造残渣を発酵させて得られる発酵物を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤、
〔２〕発酵が酢酸発酵である上記〔１〕記載の活性化剤、
〔３〕発酵が乳酸発酵である上記〔１〕記載の活性化剤、
〔４〕メタボリックシンドロームの予防または改善用である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の活性化剤、
〔５〕インスリン抵抗性症候群、高脂血症もしくは糖尿病の予防または改善用である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の活性化剤、
〔６〕アルツハイマー症の予防または改善用である請求項１〜３のいずれかに記載の活性化剤、
〔７〕炎症性疾患の予防または改善用である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の活性化剤、
〔８〕飲食用であることを特徴とする上記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の活性化剤、および
〔９〕非ヒト動物用であることを特徴とする上記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の活性化剤、
を提供するものである。
さらに本発明は、以下に関する。
〔１０〕ＰＰＡＲ活性化剤または、メタボリックシンドロームもしくはアルツハイマー病あるいは炎症性疾患の予防または改善用組成物を製造するためのブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物の使用、および
〔１１〕ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含むＰＰＡＲ活性化剤を、個体（患者など）へ投与する工程を含むことを特徴とするメタボリックシンドローム、アルツハイマー病または炎症性疾患の予防または改善方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性化作用を有するので、メタボリックシンドロームやアルツハイマー症、あるいは炎症性疾患を予防または改善し得る。また、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、メタボリックシンドロームに係わる例えば、糖尿病（特にインスリン非依存性糖尿病またはＩＩ型糖尿病）をはじめ、高インスリン血病、脂質代謝異常疾患、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧症、動脈硬化病などの症状、病態または疾患などを予防または改善し得る。
加えて、従来産業廃棄物として廃棄されていたブドウ果汁またはワイン製造残渣の有効な利用範囲が広がれば、農産業の振興に役立ち、地域経済の活性化に資する事ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
本発明によって、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物がＰＰＡＲアゴニストであることが見出された。本発明は、ブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含有するＰＰＡＲ活性化剤を提供する。
【００２２】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲアゴニスト活性を有し、ＰＰＡＲを介して、肝臓・脂肪細胞・骨格筋などの組織において脂質および糖代謝を調節することで、肥満、インスリン抵抗性症候群、高脂血症および糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームの予防および／または改善に用いることができる。さらに本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、アルツハイマー症や炎症性疾患の予防または改善に用いることもできる。
【００２３】
ＰＰＡＲ活性化作用は、例えば、ＰＰＡＲリガンド結合領域とＧＡＬ４との融合タンパクに対する結合をルシフェラーゼの発現で評価するレポーター・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁）や、ＰＰＡＲリガンド結合領域を含むタンパクを用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８１３〜８１９頁）などにより測定することができる。
【００２４】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲα、γ、δの内、少なくとも１種以上のＰＰＡＲに対し、活性化作用を有していればよいが、とりわけＰＰＡＲγおよび／またはδに対して活性化作用を有する。
【００２５】
本発明の係るＰＰＡＲ活性化剤は、肥満、インスリン抵抗性症候群、高脂血症および糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームの予防または改善に有用であるが、インスリン抵抗性症候群、高脂血症および糖尿病などを予防または改善することも可能である。
インスリン抵抗性症候群としては、組織や細胞などでのインスリンの働きが低下したために生じる症状、疾患または病態などが挙げられる。インスリン抵抗性症候群には、例えば、糖尿病、肥満、高インスリン血病、脂質代謝異常疾患、高血圧症、動脈硬化病などが含まれる。糖尿病としては、例えば、インスリン抵抗性糖尿病またはＩＩ型糖尿病などが好ましく挙げられる。また、糖尿病には、耐糖能異常も含まれる。肥満としては、例えば内臓脂肪型肥満や皮下脂肪型肥満などが挙げられるが、好ましくは内臓脂肪型肥満である。脂質代謝異常疾患としては、例えば、高脂血病、高コレステロール血病、高ＬＤＬコレステロール血病、低ＬＤＬコレステロール血病、高トリグリセリド血病などが挙げられる。
【００２６】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性が抑制または低下などしたために生じる炎症性の症状、疾患または病態などの予防または改善に有用である。炎症性の疾患としては、具体的には、例えば炎症性腸疾患などが好ましく挙げられる。
【００２７】
ブドウ果汁またはワイン製造残渣は、ブドウ果汁またはワイン製造時に排出される残渣であれば特に限定されない。残渣としては、例えば、ブドウを圧搾して果汁を搾り出した（搾汁）後のブドウ搾りかす、ワイン醸造後の沈殿部分であるオリ液、オリ液を圧搾したオリ搾りかすなどが挙げられる。原料となるブドウ品種は、特に限定されないが、ワインに使用されるブドウ品種が好ましい。好ましいブドウ品種としては、例えば、キャンベル、ツヴァイゲルト・レーベ、ナイヤガラ、ケルナー、ミュラー・トゥルガウなどが挙げられる。本発明においては、それらの残渣は、単独で用いることもできるし、あるいは、２種以上を組み合わせて同時に用いることもできる。
【００２８】
発酵物は、残渣をそのまま、または残渣に加水し、それに菌（好ましくは、発酵菌）を添加して、約２０〜４５℃、好ましくは約２５〜４０℃の温度下で、約３〜７２時間発酵させることにより得ることができる。発酵としては、例えば、酵母菌を添加するアルコール発酵、乳酸菌を添加する乳酸発酵、酢酸菌を添加する酢酸発酵、酪酸菌を添加する酪酸発酵などが挙げられる。好ましくは乳酸発酵、酢酸発酵が望ましい。発酵に先立ち、残渣は殺菌されるのが好ましい。殺菌方法としては、医薬または食品分野で使用される方法が好ましく、例えば加熱殺菌などが好ましく挙げられる。残渣は、ミルまたはマスコロイダーなどの粉砕機で粉砕または磨砕されるのが好ましい。加水は、残渣１質量部に対して、水（例えば、水道水、精製水、蒸留水、ミネラルウォーターなど）約１〜２０質量部程度が好ましい。水は、粉砕または磨砕の前または後に加えてもよく、あるいは粉砕または磨砕の前および後に加えてもよい。また残渣は乾燥されたのち上記粉砕機で粉砕されてもよい。発酵溶液は、通常ｐＨ約３〜７、好ましくは約４．５〜７に調整されるのが望ましい。また、発酵溶液には、発酵を促進させるために、例えば、ブドウ糖などの発酵促進剤の添加を行っても良い。
【００２９】
乳酸発酵のための菌種としては、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＨＯＫＫＡＩＤＯ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ、ＬａｃｔｏＢａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓなどのラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属；Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｒａｖｉｅａｅなどのラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓなどのペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属；Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓなどのリューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属；Ｏｅｎｏｃｃｏｃｃｕｓ ｏｅｎｉなどのオエノコッカス（Ｏｅｎｏｃｃｏｃｃｕｓ）属；または、Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ ｋｉｍｃｈｉｉなどのワイセラ（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）属などが挙げられる。また、酢酸発酵のための菌種としては、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｒａｎｕｍなどのアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属などが挙げられる。
菌の添加量は、菌の種類によっても異なるが、培養開始時の菌数が、約１．０×１０5〜１．０×１０7ｃｆｕ／ｍＬ程度が好ましく、とりわけ約１．０×１０6〜１．０×１０7ｃｆｕ／ｍＬ程度が好ましい。
【００３０】
また本発明係るＰＰＡＲ活性化剤は、生理学的に許容される添加物とともにメタボリックシンドローム、アルツハイマー病、または炎症性疾患の予防もしくは改善用組成物とすることができる。かかる組成物は、例えば、飲食用もしくは動物用が含まれる。該組成物は、「予防剤」、「改善剤」、「飲食用組成物」、「飲料」、「食品」または「飼料」などと表記することもできる。
【００３１】
なお、本発明における「予防」または「改善」には、完全な予防効果または改善効果を有する場合に限定されず、部分的な効果を有する場合であってもよい。
【００３２】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤または上記組成物は、生理学的に許容される添加物、例えば、担体、賦形剤、あるいは希釈剤などと混合し、組成物として経口、あるいは非経口的に投与することができる。経口用組成物としては、顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、溶剤、乳剤、あるいは懸濁剤などの剤型とすることができる。非経口用組成物としては、外用薬剤などの剤型を選択することができる。外用薬剤としては、経鼻投与剤、あるいは軟膏剤、液剤、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、パップ剤などを挙げることができる。本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤または上記組成物は、主成分であるブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物を含むように、上記の剤型とすることができる。上記剤型は、公知の製剤技術を使用し、製造できる。
【００３３】
例えば、経口投与用の錠剤は、賦形剤、崩壊剤、結合剤、および滑沢剤などを加えて混合し、圧縮整形することにより製造することができる。賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプン、あるいはマンニトールなどが挙げられる。崩壊剤としては、例えば、炭酸カルシウムやカルボキシメチルセルロースカルシウムなどが挙げられる。結合剤としては、例えば、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、あるいはポリビニルピロリドンが挙げられる。滑沢剤としては、タルクやステアリン酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００３４】
錠剤は、マスキングや、腸溶性製剤とするために、白糖などによる糖衣や公知のコーティングを施すことができる。コーティング剤には、例えば、エチルセルロースやポリオキシエチレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートなどを用いることができる。
【００３５】
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤の投与量は、投与方法、病状、患者の年齢などによって変化し得るが、大人では、通常、固形分換算して１日当たり約０．１〜２０００ｍｇ、好ましくは約１〜２００ｍｇ程度である。
【００３６】
また、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、種々の形態の飲料、スナック類、乳製品、調味料、でんぷん加工製品、加工肉製品などあらゆる飲食品に適宜配合することができる。
【００３７】
飲食品としては、例えば、飲料が好ましく挙げられる。飲料としては、茶系飲料、清涼飲料、果実飲料、野菜飲料、発泡性飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、またはアルコール性飲料などを挙げることができる。また、飲食品としては、液状、固形状、粉末状の嗜好飲料類、調味料および香辛料類、もしくは調理加工食品、および、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品などを挙げることができる。本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤を含む飲食品は、上述の各種疾患、症状または病態を予防または改善し得る。
【００３８】
飲食品には、その種類に応じて種々の添加物を配合することができる。添加物としては、食品衛生上許容される成分であれば特に制限されず、例えば、ブドウ糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、還元型アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ビタミンＥ、還元型グルタチン、トコトリエノール、カロチン、カロチノイド、リコピン、カテキン、イソフラボン、フラボノイド類、ポリフェノール、コウジ酸、ビタミンＡ、ビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12、ビタミンＤ、ナイアシン、パントテン酸、葉酸カルシウム、アルブミン、イコサペント酸（ＥＰＡ）、イヌリン、オリゴ糖、オルニチン、果糖、Ｌ−カルニチン、還元麦芽糖、乳酸オリゴマー、γ−アミノ酪酸、絹タンパク、グルコマンナン、クレアチン、ゲルマニウム、コエンザイムＱ１０、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、植物繊維、食物繊維、ゼラチン、チオクト酸、デキストリン、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、乳清、乳糖、ホスファチジルセリン、リノール酸、リノレン酸などの食品添加物、マグネシウム、亜鉛、クロム、セレン、カリウムなどが挙げられる。
【００３９】
本発明に係る活性化剤を飲食品に適用する場合の添加量としては、飲食品に対して、固形分換算して約０．１〜１００質量％であるのが好ましい。
【００４０】
また本発明は、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤もしくは上記組成物を個体（例えば、患者など）へ投与する工程を含む、上述の各種疾患の予防または改善方法を提供する。
【００４１】
本発明の予防または改善方法の対象となる個体は、上述の各種疾患を発症し得る生物であれば特に制限されないが、好ましくはヒトである。
【００４２】
さらに本発明は、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤もしくは上記組成物の製造のためのブドウ果汁またはワイン製造残渣の発酵物の使用を包含する。
【実施例】
【００４３】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕
キャンベル種由来のワイン製造残渣（ブドウ搾りかす）に２倍量の加水を行い、ミル（セレンディピターＭＫＣＡ６−３；増幸産業株式会社製）で粉砕した。粉砕物に更に２倍量の加水および６％となるようにブドウ糖を添加し、次いでＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＨＯＫＫＡＩＤＯ）を１．０×１０7ｃｆｕ／ｍＬとなるよう添加し、３５℃にて４８時間乳酸発酵を行った。
【００４４】
〔実施例２〕
ＰＰＡＲ活性化試験：ＰＰＡＲ活性はＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）を指標に検討した。すなわち、サル由来ＣＶ−１細胞株を２×１０５／ｗｅｌｌ となるよう６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに播種し、ＤＭＥＭ［Ｄｏｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ；１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）］中で１日培養した。Ｇａｌ４のＤＮＡ結合ドメイン（Ｇａｌ４−ＤＢＤ）およびＰＰＡＲδのリガンド結合ドメイン（ＰＰＡＲδ−ＬＢＤ）のキメラタンパク発現プラスミド（ｐＧａｌ４ＤＢＤ／ＰＰＡＲδＬＢＤ）、Ｇａｌ４応答配列（配列番号：ＣＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＡＣＴＣＣＧ）およびホタルルシフェラーゼ遺伝子を含むレポータープラスミド（ｐＧａｌ４−Ｌｕｃ）、およびウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の上流にＣＭＶ（ｃｙｔｏｍｅｇａｒｏｖｉｒｕｓ）プロモーターを連結した内部標準プラスミド（ｐＧＬ４．７５ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ；Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を同時に各々１μｇ、０．９μｇ、０．１μｇ／ｗｅｌｌとなるようトランスフェクション試薬（ＦｕＧＥＮＥ ＨＤ；Ｒｏｃｈｅ社製）と共に加え、前記培養した細胞にプラスミドを導入した。この操作をＰＰＡＲγに対応するプラスミド（ｐＧａｌ４ＤＢＤ／ＰＰＡＲγＬＢＤ）を用いて同様に行った。その後形質転換細胞をトリプシンによりはがし、細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）にて洗浄後、９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに再度播種した。この際、培養液を被験物質を含むＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。ＰＢＳにて細胞を洗浄後、デュアルルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いてホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼ活性を各々測定した。すなわち細胞溶解液で細胞を溶解し、ルシフェリンを含む基質溶液を加え、プレートリーダー（ＡＲＶＯ ＭＸ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製）にてホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼの発光量を各々測定した。なお、ＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）は以下のように定義した。
【００４５】
ＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）＝（Ｇａｌ４−Ｌｕｃによるホタルルシフェラーゼ活性）／（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶによるウミシイタケルシフェラーゼ活性）
【００４６】
上記に示すＰＰＡＲ活性化試験を用い、実施例１の乳酸発酵液上澄のルシフェラーゼ活性を測定した。乳酸発酵液上澄は精製水にて溶解希釈したものを最終濃度２０％（ｖ／ｖ）となるよう培地に添加した。コントロール（ネガティブコントロール）として精製水を添加した群を、またＰＰＡＲδ、ＰＰＡＲγの陽性対照（ポジティブコントロール）として各々ＧＷ５０１５１６（１μＭ，Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）、Ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ（１０μＭ，Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）をＤＭＳＯ終濃度０．５％（ｖ／ｖ）となるよう添加した群をそれぞれ作成した。
【００４７】
評価の結果、表１に示すように、ワイン製造残渣由来の乳酸発酵液はルシフェラーゼ活性を示した。なお、各ルシフェラーゼ活性値は、コントロール（精製水）におけるルシフェラーゼ活性を１．０とし、それに対する相対値で示す。
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上説明したように、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性作用を有するので、メタボリックシンドロームやアルツハイマー症あるいは炎症性疾患を予防または改善し得る。また、本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、メタボリックシンドロームに係わるインスリン抵抗性症候群をはじめ、例えば、糖尿病（特にインスリン非依存性糖尿病またはＩＩ型糖尿病）、高インスリン血症、脂質代謝異常疾患、肥満（特に内臓脂肪型肥満）、高血圧症、動脈硬化症などの症状、病態または疾患、内臓脂肪型肥満に高血糖（糖尿病）、高血圧、高脂血病などを予防または改善し得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブドウ果汁またはワイン製造残渣を発酵させて得られる発酵物を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項２】
発酵が酢酸発酵である請求項１記載の活性化剤。
【請求項３】
発酵が乳酸発酵である請求項１記載の活性化剤。
【請求項４】
メタボリックシンドロームの予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項５】
インスリン抵抗性症候群、高脂血症もしくは糖尿病の予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項６】
アルツハイマー症の予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項７】
炎症性疾患の予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項８】
飲食用であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項９】
非ヒト動物用であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項１】
ブドウ果汁またはワイン製造残渣を発酵させて得られる発酵物を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤。
【請求項２】
発酵が酢酸発酵である請求項１記載の活性化剤。
【請求項３】
発酵が乳酸発酵である請求項１記載の活性化剤。
【請求項４】
メタボリックシンドロームの予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項５】
インスリン抵抗性症候群、高脂血症もしくは糖尿病の予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項６】
アルツハイマー症の予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項７】
炎症性疾患の予防または改善用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項８】
飲食用であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の活性化剤。
【請求項９】
非ヒト動物用であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の活性化剤。
【公開番号】特開２００９−２４２２６７（Ｐ２００９−２４２２６７Ａ）
【公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−８８８７２（Ｐ２００８−８８８７２）
【出願日】平成２０年３月２９日（２００８．３．２９）
【出願人】（５９１１７４７３７）北海道ワイン株式会社 (1)
【出願人】（５９７１７７６５５）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２９日（２００８．３．２９）
【出願人】（５９１１７４７３７）北海道ワイン株式会社 (1)
【出願人】（５９７１７７６５５）
【Ｆターム（参考）】
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