Ｓ−１００β結合蛋白質とその利用
【課題】神経変性疾患治療薬のスクリーニング方法などの提供
【解決手段】Ｓ−１００β結合蛋白質を用いる神経変性疾患治療薬のスクリーニング方法、治療薬、診断、疾患動物モデルなど。
【効果】本発明の蛋白質は、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、Ｓ−１００βの情報伝達に関与しているので、Ｓ−１００βとの結合を阻害する物質やＳ−１００βの情報伝達を阻害する物質のスクリーニングに有用である。また、本発明の蛋白質、該蛋白質をコードするDNA、該DNAのアンチセンスDNA、該蛋白質に対する抗体は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患などの治療に有用である。さらに上記疾患であるかどうかの診断や疾患動物モデルの作製に有用である。
【解決手段】Ｓ−１００β結合蛋白質を用いる神経変性疾患治療薬のスクリーニング方法、治療薬、診断、疾患動物モデルなど。
【効果】本発明の蛋白質は、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、Ｓ−１００βの情報伝達に関与しているので、Ｓ−１００βとの結合を阻害する物質やＳ−１００βの情報伝達を阻害する物質のスクリーニングに有用である。また、本発明の蛋白質、該蛋白質をコードするDNA、該DNAのアンチセンスDNA、該蛋白質に対する抗体は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患などの治療に有用である。さらに上記疾患であるかどうかの診断や疾患動物モデルの作製に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ−１００β結合蛋白質を用いた神経変性疾患などの予防・治療薬のスクリーニング方法、該スクリーニング方法で得られうる化合物、Ｓ−１００β結合蛋白質もしくはその抗体もしくは該蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的なDNAを含有する医薬組成物などに関する。
【背景技術】
【０００２】
中枢神経系の実質を構成する細胞には神経細胞とグリア細胞があり、細胞数はグリア細胞が神経細胞よりはるかに多い。グリア細胞は神経細胞の働きを支持する役割を担っている。グリア細胞の一種であるアストロサイトは、神経細胞の支持細胞として細胞外のイオンおよび神経伝達物質の恒常性維持（非特許文献１；Pharmacology and function, pp. 193-228, Academic Press, Inc., (1993)）や神経栄養因子の供給（非特許文献２；Pharmacology and function, pp. 267-308, Academic Press, Inc., (1993)）などの機能を有していることから、脳機能を制御する重要な役割を演じていると考えられる。
【０００３】
従来、神経変性疾患（アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症など）の成因は主に神経細胞の異常にあると考えられてきた。しかし、近年神経細胞を取り囲むグリア細胞、特にアストロサイトの機能的異常にあるとの考えが有力になってきた。
【０００４】
Ｓ−１００β（配列番号３７で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）はアストロサイト特異的タンパク質であり、カルシウム結合部位を有し細胞内カルシウム濃度の調節、種々の細胞骨格蛋白と結合し細胞の形態変化や神経伝達物質の遊離等に関与している（非特許文献３；TIBS, 13, 437-443, (1988)）。Ｓ−１００βはアストロサイトの活性化により産生され細胞外に放出される。放出されたＳ−１００βは、神経細胞に対し栄養因子的な作用および傷害因子的な作用（非特許文献４；Progress in Neurobiology, 46, 71-82, (1995)）を示し、またアストロサイトに対しては増殖促進作用や誘導型一酸化窒素合成酵素の発現作用を有することが報告されている（非特許文献５；J. Biological Chemistry, 271, 2543-2547, (1996)）。
【０００５】
また、Ｓ−１００βは脳傷害時、活性化されたアストロサイトにおいて過剰発現することが知られている。アルツハイマー患者の脳内でＳ−１００β量が増加しており（非特許文献６；Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 7611-7615, (1989)）、その増加量はアルツハイマー患者の脳における老人斑密度と相関があることが報告されている(非特許文献７；J. Neurosci. Res., 39, 398-404, (1994))。さらにアルツハイマー患者の脳における老人斑近傍にはＳ−１００βの過剰発現を伴った活性化したアストロサイトが存在し、その発現強度は神経の異常突起伸展との間に相関が見られることが報告されている（非特許文献８；J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55, 273-279, (1996)）。その他にも、脳卒中（非特許文献９；Stroke, 30, 1190-1195, (1999)）、頭部外傷（非特許文献１０；Neurosurgery, 45, 477-483, (1999)）、多発性硬化症（非特許文献１１；Acta Neurol Scand, 96, 142-144, (1997)）、ダウン症（非特許文献１２；J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 116, 281-285, (1998)）などの患者の血清中もしくは脳髄液中でＳ−１００β量の増加がみられる。
【０００６】
このようにＳ−１００βと神経変性疾患との関連は強く示唆されている。また、Ｓ−１００β結合蛋白質として、後期糖化反応生成物受容体（RAGE）を初めとする種々の蛋白質が知られているが（非特許文献１３；Mol Cell Biol, 23, 4870-81, (2003), 非特許文献１４；J. Biochem, 116, 121-127, (1994)）、その特異的な結合蛋白質およびＳ−１００βによる細胞内情報伝達系に関与する分子等、その詳細な作用メカニズムは未だ明らかではない。
【０００７】
【非特許文献１】Pharmacology and function, pp. 193-228, Academic Press, Inc., (1993)
【非特許文献２】Pharmacology and function, pp. 267-308, Academic Press, Inc., (1993)
【非特許文献３】TIBS, 13, 437-443, (1988)
【非特許文献４】Progress in Neurobiology, 46, 71-82, (1995)
【非特許文献５】J. Biological Chemistry, 271, 2543-2547, (1996)
【非特許文献６】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 7611-7615, (1989)
【非特許文献７】J. Neurosci. Res., 39, 398-404, (1994)
【非特許文献８】J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55, 273-279, (1996)
【非特許文献９】Stroke, 30, 1190-1195, (1999)
【非特許文献１０】Neurosurgery, 45, 477-483, (1999)
【非特許文献１１】Acta Neurol Scand, 96, 142-144, (1997)
【非特許文献１２】J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 116, 281-285, (1998)
【非特許文献１３】Mol Cell Biol, 23, 4870-81, (2003)
【非特許文献１４】J. Biochem, 116, 121-127, (1994)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
先に示したように、Ｓ−１００β結合蛋白質として種々の蛋白質が知られている。しかし、特異的な情報伝達分子であるＳ−１００β結合蛋白質を利用した神経変性疾患などの予防・治療作用を有する物質のスクリーニング方法、Ｓ−１００β結合蛋白質もしくはその抗体もしくは該蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的なDNAを含有する医薬組成物などについては現在知られておらず、該スクリーニング方法、該医薬組成物などを提供することが課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ウェスト-ウェスタン法によりＳ−１００β結合蛋白質を同定し、更に、これらの蛋白質がＳ−１００β（配列番号３７で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）の情報伝達に関与することを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は、（１）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを用いることを特徴とする、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、（２）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量と被験化合物の非存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を比較することからなる（１）に記載の方法、（３）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離されるＳ−１００βの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離されるＳ−１００βの量と被験化合物の非存在下で遊離されるＳ−１００βの量を比較することからなる（１）に記載の方法、（４）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を用いることを特徴とする、Ｓ−１００βによる該細胞における活性を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、（５）Ｓ−１００βの活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞に被験化合物の存在下あるいは非存在下でＳ−１００βを接触させ、Ｓ−１００βの活性を測定し、被験化合物の存在下と非存在下の活性を比較することからなる（４）に記載の方法、（６）神経変性疾患の予防および／または治療用化合物を探索するための（１）または（４）に記載のスクリーニング方法、（７）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（６）に記載のスクリーニング方法、（８）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを含有する、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、（９）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を含有する、Ｓ−１００βによる該細胞における活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、（１０）（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩、（１１）（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩を含有してなる医薬組成物、（１２）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質、または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAを含有してなる医薬組成物、（１３）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAを含有してなる医薬組成物、（１４）神経変性疾患の予防および／または治療剤である（１１）乃至（１３）記載の医薬組成物、（１５）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（１４）に記載の医薬組成物、（１６）（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法、（１７）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法、（１８）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法、（１９）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（１６）乃至（１８）に記載の方法、（２０）神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の使用、（２１）神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの使用、（２２）神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの使用、（２３）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（２０）乃至（２２）に記載の使用、（２４）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断剤、（２５）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（２４）に記載の剤、（２６）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断方法、（２７）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（２６）に記載の方法、（２８）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質のゲノムが、該蛋白質とＳ−１００βとの結合が変化されているように改変されている非ヒト動物疾患モデル、（２９）該蛋白質とＳ−１００βとの結合が、（a）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の過剰発現：(b)配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の変異蛋白質の発現：(c)配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の欠失：あるいは(d)配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の低下：の結果として変化されている（２８）記載の非ヒト動物疾患モデルなどに関する。
【００１１】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列としては、該アミノ酸配列を含有する蛋白質（以下、本発明の蛋白質と呼ぶこともある）が、Ｓ−１００β（配列番号３７で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）との結合活性を有していれば如何なるアミノ酸配列であっても良い。
【００１２】
また、本発明の蛋白質としては、例えば、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列からなるもの以外に、その一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が欠失したもの、その一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が他のアミノ酸と置換したもの、そのアミノ酸配列に数個のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が付加または挿入されたもの、およびそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するものも含まれる。上記のようにアミノ酸配列が欠失、置換、付加または挿入されている場合、その位置は特に限定されない。
【００１３】
また、本発明の蛋白質としては、その構成アミノ酸がカルボキシル基を持っていても良く、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されていても良い。エステルには、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルなどのアルキル基、フェニル、ナフチルなどのアリル基、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのシクロアルキル基などによりエステル化されたものが含まれる。また、構成アミノ酸のアミノ基がホルミル基、アセチル基などで保護されていても良い。また、糖鎖が結合しているものなども本発明の蛋白質に含まれる。
【００１４】
本発明の蛋白質の部分ペプチド（以下、本発明の部分ペプチドと呼ぶこともある）としては、上記の本発明の蛋白質の部分ペプチドであって、上記の本発明の蛋白質と同様の性質を有するものであればいずれのペプチドでも良い。例えば、本発明の蛋白質のアミノ酸配列のうち少なくとも１０個以上、好ましくは３０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用いられる。また、本発明の部分ペプチドとしては、そのアミノ酸配列中の一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が欠失したもの、その一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が他のアミノ酸と置換したもの、そのアミノ酸配列に数個のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が付加または挿入されたもの、およびそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するものも含まれる。上記のようにアミノ酸配列が欠失、置換、付加または挿入されている場合、その位置は特に限定されない。
【００１５】
また、本発明の部分ペプチドとしては、その構成アミノ酸がカルボキシル基を持っていても良く、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されていても良い。エステルには、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルなどのアルキル基、フェニル、ナフチルなどのアリル基、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのシクロアルキル基などによりエステル化されたものが含まれる。また、構成アミノ酸のアミノ基がホルミル基、アセチル基などで保護されていても良い。また、糖鎖が結合しているものなども本発明の部分ペプチドに含まれる。本発明の部分ペプチドは抗体作製のための抗原としても用いることができる。また、本発明の部分ペプチドは、本発明の蛋白質とＳ−１００βとの結合を阻害する化合物のスクリーニングに用いることもできる。
【００１６】
本発明で用いるＳ−１００βとしては、配列番号３７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質以外に、実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドが含まれ、配列番号３７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白と同様の性質を有するものであればいずれの蛋白質あるいはペプチドでも良い。また、配列番号３７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白と同様の性質を有するものであればこれらのアミドもしくはエステルもしくは塩も好適に用いることができる。
【００１７】
本発明の蛋白質および本発明の部分ペプチドの塩としては、酸（無機酸や有機酸など）または塩基（アルカリ金属塩など）などとの塩が用いられるが、生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸など）との塩、または有機酸（蟻酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、クエン酸、蓚酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、安息香酸など）との塩などが用いられる。
【００１８】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするポリヌクレオチド（DNAまたはRNA）（以下、本発明のポリヌクレオチドと呼ぶこともある）としては、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。よく知られているように、ひとつのアミノ酸をコードするコドンは１〜６種類（例えば、Ｍｅｔは１種類、Ｌｅｕは６種類）知られている。従って、蛋白質やペプチドのアミノ酸配列を変えることなくｃＤＮＡの塩基配列を変えることができる。そのような塩基配列置換によって、蛋白質やペプチドの生産性が向上することがある。本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ゲノムDNA、cDNA、合成DNA、RNA、DNA-RNAハイブリッドのいずれでもよい。
【００１９】
本発明の蛋白質をコードするDNA（以下、本発明のDNAと呼ぶこともある）としては、配列番号３８乃至７３および１０３乃至１２１からなる群から選択される配列番号で表される塩基配列を有するDNA以外に、該DNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の蛋白質と実質的に同じ性質を有する蛋白質をコードするDNAであればいかなるものであってもよい。そのようなDNAとしては、配列番号３８乃至７３および１０３乃至１２１からなる群から選択される配列番号で表される塩基配列と約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を有するDNAなどが挙げられる。ハイブリダイゼーションは、公知の方法、例えば、Molecular Cloning（Sambrook, J., Fritsch, E. F.およびManiatis, T. 著、Cold Spring Harbor Laboratory Pressより1989年に発刊）またはCurrent Protocol in Molecular Biology（F.M.Ausubelら編、John Wiley & Sons, Inc.より発刊）に記載の方法などに従って行うことができる。ストリンジェントな条件としては、例えば、６５℃でのハイブリダイゼーション、および0.1 X SSC, 0.1%のSDSを含む緩衝液による６５℃での洗浄処理を挙げることができる。
【００２０】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAは、化学合成によって、または本発明の蛋白質または部分ペプチドの一部をコードする合成DNAプライマーを用いてPCR法によって増幅することによって、あるいは本発明の蛋白質または部分ペプチドの一部をコードする合成DNAをプローブとしたハイブリダイゼーション法によって得ることができる。また、最近では、ヒトの種々の組織のｃＤＮＡライブラリーが市販されており、これらを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができる。本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAをPCR法あるいはハイブリダイゼーション法によって取得するために使用する組織としては、ヒトの組織中、Ｓ−１００βが作用すると考えられる組織、好ましくは脳である。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、Molecular Cloning（Sambrook, J., Fritsch, E. F.およびManiatis, T. 著、Cold Spring Harbor Laboratory Pressより1989年に発刊）またはGene, 10, 63 (1980)に記載の方法に従って行うことができる。このようにして得られたDNAは、該ＤＮＡを含有するベクターＤＮＡを適当な宿主に導入し、これを増殖させることによって、必要量得ることができる。
【００２１】
本発明の蛋白質または部分ペプチドを取得する方法としては、
（１）生体または培養細胞から精製単離する方法、
（２）ペプチド合成する方法、または
（３）遺伝子組み換え技術を用いて生産する方法、
などが挙げられるが、工業的には（３）に記載した方法が好ましい。
【００２２】
遺伝子組み換え技術を用いて蛋白質またはペプチドを生産するための発現系（宿主−ベクター系）としては、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞および哺乳動物細胞の発現系が挙げられる。
【００２３】
例えば、大腸菌で発現させる場合には、成熟蛋白部分をコードするＤＮＡの５’末端に開始コドン（ＡＴＧ）を付加し、得られたｃＤＮＡを、適当なプロモーター（例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、λＰＬプロモーター、Ｔ７プロモーター等）の下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター（例えば、pBR322、pUC18、pUC19等）に挿入して発現ベクターを作製する。次に、この発現ベクターで形質転換した大腸菌（例えば、E. Coli DH1、E. Coli JM109、E. Coli HB101株等）を適当な培地で培養して、その菌体より目的とする蛋白質またはペプチドを得ることができる。また、バクテリアのシグナルペプチド（例えば、ｐｅｌＢのシグナルペプチド）を利用すれば、ペリプラズム中に目的とする蛋白質またはペプチドを分泌することもできる。さらに、他のポリペプチドとのフュージョン・プロテイン（fusion protein）を生産することもできる。
【００２４】
また、哺乳動物細胞で発現させる場合には、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを適当なベクター（例えば、レトロウイルスベクター、パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロモーター（例えば、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、メタロチオネインプロモーター等）の下流に挿入して発現ベクターを作製する。次に、得られた発現ベクターで適当な哺乳動物細胞（例えば，サルＣＯＳ−１細胞、ＣＯＳ−７細胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、マウスＬ細胞等）を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養することによって、本発明の蛋白質または部分ペプチドが発現される。さらに、その他のポリペプチド、例えば抗体の定常領域（Fc portion）をコードするｃＤＮＡ断片と連結することによって、フュージョン・プロテイン（fusion protein）を生産することもできる。
【００２５】
また、昆虫細胞で発現させる場合には、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを適当なプロモーター（ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーター等）の下流に接続し、昆虫細胞で機能するウイルスベクターに挿入して発現ベクターを作製する。昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Ｓｆ細胞）が用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（ＢｍＮ細胞）などが用いられる。Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）、Ｓｆ２１細胞（Vaughn,J.L.，イン・ヴィボ（In Vivo），1977年，第13巻，ｐ213−217）が用いられる。昆虫としては、カイコの幼虫などが用いられる。昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー（Bio/Technology），1988年，第6巻，ｐ47−55に記載の方法に従って行うことができる。
【００２６】
また、酵母で発現させる場合には、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを適当なプロモーター（PHO5プロモーター、PGKプロモーター、GAPプロモーター、ADHプロモーター等）の下流に接続し、酵母で機能するベクター（pSH19、pSH15等）に挿入して発現ベクターを作製する。次に、この発現ベクターで形質転換した酵母（例えば、サッカロミセス・セレビシエAH22, AH22R-, 20B-12、シゾサッカロミセス・ポンベNCYC1913、ピッキア・パストリスKM71等）を適当な培地で培養して、目的とする蛋白質またはペプチドを得ることができる。以上のようにして得られた蛋白質またはペプチドは、一般的な生化学的方法によって単離精製することができる。
【００２７】
本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質または部分ペプチドを認識しうる抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれであってもよい。本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質または部分ペプチドを抗原として、公知の方法により製造することができる。本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質と結合してこれを中和することができるので、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬として用いることもできる。
【００２８】
本発明のDNAのアンチセンスDNAまたはRNAは、本発明のDNAを上記のようなベクターのアンチセンス領域に挿入することでアンチセンスDNAまたはRNAを製造することができる。このようなアンチセンスDNAまたはRNAは、細胞中の本発明の蛋白質のレベルを下げることができるので、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬として有用である。
【００２９】
本発明は、本発明の蛋白質または部分ペプチドを用いることを特徴とする、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬のスクリーニング方法に関する。Ｓ−１００βとの結合を阻害する化合物のスクリーニングは、例えば、以下の方法により行なうことが出来る。すなわち、本発明の蛋白質または部分ペプチドを本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体を用いて固相（例えばEIAプレートなど）に固定化する。あるいは本発明の蛋白質または部分ペプチドにTag（例えばHis-Tag、GSTなど）を付けたものを固相に固定化する。これに、被験化合物とビオチンなどで標識したＳ−１００βを加えて反応させる。本発明の蛋白質または部分ペプチドとＳ−１００βとの結合の阻害の結果として遊離したＳ−１００βを、ビオチンなどの標識体を検出する市販のキットまたはＳ−１００βに対する抗体を用いて、検出、定量する。Ｓ−１００βを遊離させる化合物を、本発明の蛋白質または部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物として選択する。また、Ｓ−１００βを固相に固定化し、これに被験化合物と本発明の蛋白質または部分ペプチドあるいは本発明の蛋白質または部分ペプチドにTagを付けたものを加えて反応させてもよい。Ｓ−１００βを固相へ固定化する際には、例えばビオチンで標識したＳ−１００βとアビジンで標識した固相が好ましく用いられる。ここに被験化合物を加え、遊離する本発明の蛋白質または部分ペプチドを本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体またはTagに対する抗体で検出、定量する。本発明の蛋白質または部分ペプチドを遊離させる化合物を結合阻害剤として選択する。
【００３０】
本発明は、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAで形質転換された形質転換体を用いることを特徴とする、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬のスクリーニング方法に関する。Ｓ−１００βの活性を阻害する化合物のスクリーニングは例えば、以下の方法により行なうことが出来る。すなわち、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAで形質転換された形質転換体を上記の方法により作製する。該形質転換体（例えばU373MG細胞など）を培養プレートに撒き、増殖させる。ここに被験化合物とＳ−１００β（例えばカルボキシメチル化Ｓ−１００βなど）を加えて培養する。２４時間後の培養上清を回収し、例えば、Ｓ−１００β刺激の結果として産生されるMCP-1を、市販のMCP-1測定キットなどを用いて定量する。MCP-1量を減少させる化合物をＳ−１００βの情報伝達を阻害する化合物として選択する。
【００３１】
本発明のスクリーニング方法により得られる化合物、または本発明の蛋白質または部分ペプチド、または本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は通常、全身的または局所的に、一般的には経口または非経口の形で投与される。好ましくは、経口投与、静脈内投与および脳室内投与である。
【００３２】
投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人一人あたり、一回につき、１００μｇから１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回経口投与されるかまたは、成人一人あたり、一回につき、１０μｇから１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回非経口投与される。もちろん前記したように、投与量は種々の条件により変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて必要な場合もある。
【００３３】
本発明化合物を投与する際には、経口投与のための固体組成物、液体組成物およびその他の組成物、非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤等として用いられる。
【００３４】
経口投与のための固体組成物には、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。カプセルには、ソフトカプセルおよびハードカプセルが含まれる。
【００３５】
このような固体組成物においては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤（例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコール酸カルシウム等）、安定化剤（ヒト血清アルブミン、ラクトース等）、溶解補助剤（アルギニン、アスパラギン酸等）を含有していてもよい。
【００３６】
錠剤または丸剤は、必要により白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等の胃溶性あるいは腸溶性のフィルムで被膜してもよいし、また２以上の層で被膜してもよい。さらにゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも包含される。
【００３７】
経口投与のための液体組成物は、薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般に用いられる不活性な希釈剤（例えば、精製水、エタノール等）を含んでいてもよい。この様な組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
【００３８】
経口投与のためのその他の組成物としては、ひとつまたはそれ以上の活性物質を含み、それ自体公知の方法により処方されるスプレー剤が含まれる。この組成物は不活性な希釈剤以外に亜硫酸水素ナトリウムのような安定剤と等張性を与えるような安定化剤、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムあるいはクエン酸のような等張剤を含有していてもよい。スプレー剤の製造方法は、例えば米国特許第2,868,691号および同第3,095,355号明細書に詳しく記載されている。
【００３９】
本発明による非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性または非水性の溶液剤、懸濁剤としては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤と混合される。水性の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水および生理食塩水が挙げられる。非水性の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（登録商標）等が挙げられる。
【００４０】
このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ラクトース等）、溶解補助剤（例えば、アルギニン、アスパラギン酸等）のような補助剤を含んでいてもよい。
【００４１】
本発明のDNAまたは本発明のDNAのアンチセンスDNAをＳ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療に使用する場合は、該DNAまたは該アンチセンスDNAを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、定法に従って、ヒトや哺乳動物に投与することができる。本発明のDNAまたは本発明のDNAのアンチセンスDNAは、そのままで、あるいは細胞への導入を促進するための補助剤（リポソーム、HVJリポソームなど）などの生理学的に認められる担体とともに製剤化して用いることができる。
【００４２】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的なDNAは、例えば、プローブとして使用することにより、本発明の蛋白質をコードするDNAまたはmRNAを検出することができるので、Ｓ−１００βが関連する疾患、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患を検査する試薬として有用である。また、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質を検出することができるので、上記疾患を検査する試薬として用いることができる。本発明の蛋白質あるいは本発明の蛋白質をコードするmRNAの過剰発現が検出された場合は、アルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患である可能性が高いと診断することができる。
【００４３】
本発明のスクリーニング用キットは、本発明の蛋白質または部分ペプチドを含有するが、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体を含んでいても良い。また、本発明のスクリーニング用キットは、本発明の蛋白質または部分ペプチドを産生する能力を有する細胞（好ましくは、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAで形質転換された形質転換体（例えば動物細胞など）を含有するものも含まれる。
【００４４】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを用いて、野生型または変異配列を有する該蛋白質または該部分ペプチドを過剰発現する動物（トランスジェニック動物と呼ばれる）、該蛋白質を発現しない動物（ノックアウト動物と呼ばれる）、または該蛋白質の発現が低下した動物を作製することができる。トランスジェニック動物、ノックアウト動物などは当業者によく知られている方法により作製することができる。
【発明の効果】
【００４５】
本発明の蛋白質は、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、Ｓ−１００βの情報伝達に関与しているので、Ｓ−１００βとの結合を阻害する物質やＳ−１００βの情報伝達を阻害する物質のスクリーニングに有用である。また、該スクリーニングで得られうる化合物、該蛋白質、該蛋白質をコードするDNA、該DNAのアンチセンスDNA、該蛋白質に対する抗体は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患などの予防および/または治療に有用である。また、上記疾患であるかどうかの診断や疾患動物モデルの作製に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるものではない。
実施例1
ウェスト-ウェスタン法によるＳ−１００β結合蛋白質の同定
【００４７】
cDNAライブラリーの構築およびウェスト-ウェスタン法は、細胞工学別冊8新細胞工学実験プロトコールに記載されている方法に従って行った。すなわち、ヒト脳由来mRNAを調製し、逆転写酵素を用いてcDNAを合成した後、大腸菌由来DNAポリメラーゼ、DNAリガーゼ、RNase Hを用い第2鎖の合成を行った。合成終了後、T4 DNAポリメラーゼにより平滑化を行った。平滑化終了後、EcoRIリンカーライゲーションを行い、EcoRIおよびアルカリフォスファターゼ処理を行ったラムダgt11にT4リガーゼによりライゲーションを行った。ライゲージョン終了後、Gigapack（ストラタジーン社製）を用いてインビトロパッケージングを行った。パッケージング終了後、LE392に感染させ、タイターを確認し（3x106 インディペンデントクローン）、ライブラリーの増幅を行った。
【００４８】
ウェスト-ウェスタン法は、ライブラリーをイソプロピル-β-D-ガラクトピラノシドにて誘導後、150mm シャーレ1枚当たり5x104プラーク発現させ、PVDF膜に転写させた。転写後、10％ブロックエース（雪印社製）にてブロッキング後、１０μｇ/ｍＬのＳ−１００βおよび1mM カルシウムを含むトリス緩衝液に室温にて1時間インキュベーションを行った。インキュベーション終了後、リン酸緩衝液でPVDF膜を洗浄後、S100抗体と室温にて１時間インキュベーションを行った。インキュベーション終了後、リン酸緩衝液にて洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合させたイムノグロブリン抗体とインキュベーションを行った。次に、再びリン酸緩衝液でPVDF膜を洗浄後、ECL plus（アマシャムファルマシア社製）を用いて陽性クローンの検出を行った。陽性クローンは、SM緩衝液に単離したのち、シークエンスにより同定を行った。RP3-495010 (NCBI ID: AL031121、同定したアミノ酸配列を配列番号１に、塩基配列を配列番号３８に示す)、RP11-160O5（NCBI ID：AC015821、同定したアミノ酸配列を配列番号２に、塩基配列を配列番号３９に示す）、RP11-67G7（NCBI ID：AC011291、同定したアミノ酸配列を配列番号３に、塩基配列を配列番号４０に示す）、RP1-287021（NCBI ID：AL136319、同定したアミノ酸配列を配列番号４に、塩基配列を配列番号４１に示す）、RP3-509I19（NCBI ID：AL121834、同定したアミノ酸配列を配列番号５に、塩基配列を配列番号４２に示す）、CTC-286C20（NCBI ID：AC027314、同定したアミノ酸配列を配列番号６に、塩基配列を配列番号４３に示す）、RP11-444D3（NCBI ID：AL087322、同定したアミノ酸配列を配列番号７に、塩基配列を配列番号４４に示す）、ZNF140-like protein（NCBI ID：AF155656、同定したアミノ酸配列を配列番号８に、塩基配列を配列番号４５に示す）、RP11-451G1（NCBI ID：AC013727、同定したアミノ酸配列を配列番号９に、塩基配列を配列番号４６に示す）、RP4-550H1（NCBI ID：AL035420、同定したアミノ酸配列を配列番号１０に、塩基配列を配列番号４７に示す）、FLJ12991（NCBI ID：AK023053、同定したアミノ酸配列を配列番号１１に、塩基配列を配列番号４８に示す）、FLJ22382（NCBI ID：AK026035、同定したアミノ酸配列を配列番号１２に、塩基配列を配列番号４９に示す）、IMAGE4423166（NCBI ID：BC033161、同定したアミノ酸配列を配列番号１３に、塩基配列を配列番号５０に示す）、IMAGE5261213（NCBI ID：BC036485、同定したアミノ酸配列を配列番号１４に、塩基配列を配列番号５１に示す）、FLJ41109（NCBI ID：AK123104、同定したアミノ酸配列を配列番号１５に、塩基配列を配列番号５２に示す）、FLJ42709（NCBI ID：AK124699、同定したアミノ酸配列を配列番号１６に、塩基配列を配列番号５３に示す）、SEC14-like2（NCBI ID：BC048337、同定したアミノ酸配列を配列番号１７に、塩基配列を配列番号５４に示す）、DKFZp313P011（NCBI ID：AL832467、同定したアミノ酸配列を配列番号１８に、塩基配列を配列番号５５に示す）、IMAGE2823852（NCBI ID：BC001102、同定したアミノ酸配列を配列番号１９に、塩基配列を配列番号５６に示す）、FLJ34134（NCBI ID：AK091453、同定したアミノ酸配列を配列番号２０に、塩基配列を配列番号５７に示す）、Precerebellin（NCBI ID：M58583、同定したアミノ酸配列を配列番号２１に、塩基配列を配列番号５８に示す）、FLJ13673（NCBI ID：AK02375、同定したアミノ酸配列を配列番号２２に、塩基配列を配列番号５９に示す）、Small glutamine-rich tetratricopeptide（NCBI ID：BC000390、同定したアミノ酸配列を配列番号２３に、塩基配列を配列番号６０に示す）、NT2RI2006071（NCBI ID：AK056262、同定したアミノ酸配列を配列番号２４に、塩基配列を配列番号６１に示す）、FLJ20542（NCBI ID：NM_017871、同定したアミノ酸配列を配列番号２５に、塩基配列を配列番号６２に示す）、KIAA0627（DDBJ ID：AB014527、同定したアミノ酸配列を配列番号２６に、塩基配列を配列番号６３に示す）、DKFZp451G202（NCBI ID：AL831955、同定したアミノ酸配列を配列番号２７に、塩基配列を配列番号６４に示す）、Zinc finger protein 3115BP（NCBI ID：AJ132592、同定したアミノ酸配列を配列番号２８に、塩基配列を配列番号６５に示す）、FLJ43968（NCBI ID：AK125956、同定したアミノ酸配列を配列番号２９に、塩基配列を配列番号６６に示す）、CGI-043（NCBI ID:AF151801、同定したアミノ酸配列を配列番号３０に、塩基配列を配列番号６７に示す）、DKFZp761H0421（NCBI ID:AL831813、同定したアミノ酸配列を配列番号３１に、塩基配列を配列番号６８に示す）、POGZ1（NCBI ID:NM_015100、同定したアミノ酸配列を配列番号３２に、塩基配列を配列番号６９に示す）、CUB/Sushi1 multiple domain1 protein（NCBI ID:AF333704、同定したアミノ酸配列を配列番号３３に、塩基配列を配列番号７０に示す）、FLJ12587（DDBJ ID：BD286600、同定したアミノ酸配列を配列番号３４に、塩基配列を配列番号７１に示す）、Catenin binding protein（NCBI ID：NM_014412、同定したアミノ酸配列を配列番号３５に、塩基配列を配列番号７２に示す）、MGC15730（NCBI ID:NM_032880、同定したアミノ酸配列を配列番号３６に、塩基配列を配列番号７３に示す）、MGC40157（NCBI ID:BC027986、同定したアミノ酸配列を配列番号８４に、塩基配列を配列番号１０３に示す）、FLJ35113(NCBI ID:AK092432、同定したアミノ酸配列を配列番号８５に、塩基配列を配列番号１０４に示す）、SNO oncogene（NCBI ID：X15219、同定したアミノ酸配列を配列番号８６に、塩基配列を配列番号１０５に示す）、FLJ42213（NCBI ID: AK124207、同定したアミノ酸配列を配列番号８７に、塩基配列を配列番号１０６に示す）、FLJ35109（NCBI ID：AK092428、同定したアミノ酸配列を配列番号８８に、塩基配列を配列番号１０７に示す）、Basic transcription factor 3（NCBI ID：BC008062、同定したアミノ酸配列を配列番号８９に、塩基配列を配列番号１０８に示す）、C11orf23（NCBI ID:NM_018312、同定したアミノ酸配列を配列番号９０に、塩基配列を配列番号１０９に示す）、NAC transcription factor（NCBI ID：AK090650、同定したアミノ酸配列を配列番号９１に、塩基配列を配列番号１１０に示す）、Sequence 23787 from Patent WO02068579（NCBI ID：CQ737853、同定したアミノ酸配列を配列番号９２に、塩基配列を配列番号１１１に示す）、Sterile alpha motif domain 6（NCBI ID：BC012981、同定したアミノ酸配列を配列番号９３に、塩基配列を配列番号１１２に示す）、CGI-024（NCBI ID：AF132958、同定したアミノ酸配列を配列番号９４に、塩基配列を配列番号１１３に示す）、TRIB2 homolog 2（NCBI ID: NM_021643、同定したアミノ酸配列を配列番号９５に、塩基配列を配列番号１１４に示す）、Fukutin related protein（NCBI ID：NM_024301、同定したアミノ酸配列を配列番号９６に、塩基配列を配列番号１１５に示す）、ZNF37A（NCBI ID: AJ492195、同定したアミノ酸配列を配列番号９７に、塩基配列を配列番号１１６に示す）、FLJ45802（NCBI ID:AK127702、同定したアミノ酸配列を配列番号９８に、塩基配列を配列番号１１７に示す）、KIAA0293（NCBI ID：AB006631、同定したアミノ酸配列を配列番号９９に、塩基配列を配列番号１１８に示す）、Transcription factor 20（NCBI ID：NM_005650、同定したアミノ酸配列を配列番号１００に、塩基配列を配列番号１１９に示す）、Tetratricopeptide repeat3（NCBI ID: D83077、同定したアミノ酸配列を配列番号１０１に、塩基配列を配列番号１２０に示す）およびBAP28（NCBI ID：XM_375853、同定したアミノ酸配列を配列番号１０２に、塩基配列を配列番号１２１に示す）をＳ−１００β結合蛋白質として同定した。
【００４９】
実施例２
SiRNAを用いたＳ−１００β結合蛋白質の機能解析
【００５０】
10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地で培養したU373MG細胞を1ウェルあたり7.5x104個で24穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養した。次に、SiRNAとオリゴフェクタミン混合液を調製し、常法に従い遺伝子導入を行った。この時使用したSiRNAのセンス鎖の配列は次に示す。
陰性対照：５’−ＧＣＧ ＣＧＣ ＵＵＵ ＧＵＡ ＧＧＡ ＵＵＣ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７４）
カテニン結合蛋白質：５’−ＧＡＧ ＵＡＣ ＧＵＧ ＡＵＧ ＣＣＣ ＵＵＡ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号７５）
ＣＧＩ−０４３：５’−ＧＡＣ ＵＧＧ ＡＣＡ ＧＣＡ ＵＣＧ ＵＵＧ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７６）
ＤＫＦＺｐ７６１Ｈ０４２１：５’−ＧＵＡ ＣＵＡ ＣＣＡ ＵＧＣ ＵＡＡ ＧＡＡ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号７７）
ＰＯＧＺ１：５’−ＧＣＵ ＧＣＣ ＡＣＵ ＧＵＧ ＧＡＡ ＵＣＵ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７８）
ＣＵＢ／Ｓｕｓｈｉ１：５’−ＧＣＵ ＣＣＡ ＵＧＵ ＧＧＵ ＧＧＡ ＣＡＵ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号７９）
ＦＬＪ１２５８７：５’−ＧＧＡ ＣＡＣ ＡＣＵ ＧＣＵ ＧＧＡ ＣＣＵ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号８０）
ＭＧＣ１５７３０：５’−ＧＵＧ ＵＡＡ ＣＵＵ ＣＡＡ ＧＡＣ ＡＧＡ ＵｄＴｄＴ−３’（配列番号８１）
【００５１】
遺伝子導入終了後、10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地に交換し、３７℃で24時間培養した。次に無血清のダルベッコ改変培地に交換し、24時間培養を行った後、無血清のダルベッコ改変培地に１０μｍｏｌ／Ｌのカルボキシメチル化-リコンビナントS100を加えた培地に交換しU373MG細胞を刺激した。刺激後、24時間後の培養上清を回収しR&D社製MCP-1(monocyte chemotactic protein 1)測定キットを用いてMCP-1の定量を行った。
【００５２】
S100結合蛋白質に対するSiRNAをU373MG細胞に導入することにより、カルボキシルメチル-S100（CM-S100）刺激によるMCP1の産生における影響を調べた結果を表１に示した。カテニン結合蛋白質、DKFZp761H0421、POGZ1、CUB/Sushi1、CGI-043においては、MCP-1の産生を抑制した。一方、DKFZp451G202、FLJ12587、MGC15730においては、MCP-1の産生を増強させた。
【００５３】
実施例３
強制発現系を用いたＳ−１００β結合蛋白質の機能解析
【００５４】
10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地で培養したU373MG細胞を1ウェルあた
り7.5x104個で24穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養した。次に、pCIベクター（プロメガ社）に全長オープンリーディングフレームに組み込み、リポフェクタミン（インビトロジェン社）により遺伝子導入を行った。
【００５５】
遺伝子導入終了後、10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地に交換し、３７℃で24時間培養した。次に無血清のダルベッコ改変培地に交換し、48時間培養を行った後、無血清のダルベッコ改変培地に１０μｍｏｌ／Ｌのカルボキシメチル化-リコンビナントS100を加えた培地に交換しU373MG細胞を刺激した。刺激後、24時間後の培養上清を回収しR&D社製MCP-1測定キットを用いてMCP-1の定量を行った。
【００５６】
S100結合蛋白質をU373MG細胞に強制発現させることにより、カルボキシルメチル-S100刺激によるMCP-1の産生に対する影響を調べた結果を表２に示す。FLJ12587、MGC15730はMCP-1の産生を抑制した．
【００５７】
実施例４
RT-PCR法を用いた疾患組織でのＳ−１００β結合蛋白質の発現解析
【００５８】
ヒトtotal RNA 1μgよりスーパースクリプトＩＩＩ（インビトロジェン社製，18080-051）を用いてcDNAを調製した。用いたRNAは、Total RNA（ヒト健常人黒質（Ambion社製：#6866，Lot#024P011003023A）、ヒトパーキンソン病黒質（Ambion社製：#6288，Lot#083P010103399A）、ヒト健常人大脳皮質（Ambion社製：#6870，Lot#013P011202039A）、ヒト 筋萎縮性側索硬化症 大脳皮質（Ambion社製：#6156，Lot#083P010103146A）、ヒト アルツハイマー病 大脳皮質（Biochain社製：#R1236035Alz，Lot#A508435）である。cDNA調製後、カテニン結合蛋白質、CGI-043、POGZ1、CUB／Sushi1、DKFZp761H0421、FLJ12587、MGC15730に関しては、オープンリーディングフレームについてPCRを行い、アガロースゲルに電気泳動を行うことにより半定量を行った。また、POGZ1に関しては、
5’-TGT GTC GCT ATA GCA CCT GCT GTT CTC GAG-3’ （配列番号８２）
5’-TCAAATCTCCATCAGATCTAGGTCAGCTTC-3’ （配列番号８３）
のプライマーを用いてPCRを行った。
【００５９】
種々の疾患組織におけるＳ−１００β結合蛋白質のmRNA発現量の評価を行った結果、ヒトパーキンソン病黒質においてFLJ12587のmRNA量の減少が認められた。また、ヒト筋萎縮性側索硬化症大脳皮質において、DKFZp761H0421のmRNA量の増加が認められた。さらに、ヒトアルツハイマー病大脳皮質において、POGZ1、DKFZp761H0421、MGC15730のmRNA量の増加が認められた（図１―４）。
【００６０】
実施例５
SiRNAを用いたＳ−１００β結合蛋白質BAP28およびFukutin related protein (FKRP)の機能解析
【００６１】
10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地で培養したU373MG細胞を1ウェルあたり4x104個で24穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養した。次に、SiRNAとQiagen社製トランスメッセンジャートランスフェクション試薬混合液を調製し、常法に従い遺伝子導入を行った。この時使用したSiRNAのセンス鎖の配列は次に示す。
陰性対照：５’−ＧＣＧ ＣＧＣ ＵＵＵ ＧＵＡ ＧＧＡ ＵＵＣ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７４）
ＢＡＰ２８：５’−ＧＣＡ ＧＡＵ ＵＧＡ ＧＡＡ ＧＡＡ ＣＵＧ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号１２２）
ＦＫＲＰ：５’−ＧＣＡ ＡＣＣ ＡＣＵ ＵＧＣ ＡＣＧ ＵＧＧ ＡｄＴｄＴ−３’（配列番号１２３）
【００６２】
遺伝子導入終了後、10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地に交換し、３７℃で24時間培養した。次に無血清のダルベッコ改変培地に交換し、24時間培養を行った後、無血清のダルベッコ改変培地に１０μｍｏｌ／Ｌのカルボキシメチル化-リコンビナントS100または、0.3ng/mLリコンビナントIL1βを加えた培地に交換しU373MG細胞を刺激した。刺激後、24時間後の培養上清を回収しR&D社製MCP-1(monocyte chemotactic protein 1)測定キットを用いてMCP-1の定量を行った。
【００６３】
S100結合蛋白質に対するSiRNAをU373MG細胞に導入することにより、カルボキシルメチル-S100（CM-S100）刺激によるMCP1の産生における影響を調べた結果を表３に示した。BAP28、FKRPにおいて、MCP-1の産生を抑制した。一方、BAP28は、リコンビナントIL1β刺激によるMCP1の産生を抑制しなかった（表４）。
【００６４】
【００６５】
実施例６
RT-PCR法を用いた疾患組織でのＳ−１００β結合蛋白質FKRPの発現解析
【００６６】
ヒトtotal RNA 1μgよりスーパースクリプトＩＩＩ（インビトロジェン社製，18080-051）を用いてcDNAを調製した。用いたRNAは、ヒト健常人大脳皮質（Ambion社製：#6870，Lot#013P011202039A）、ヒト 筋萎縮性側索硬化症 大脳皮質（Ambion社製：#6156，Lot#083P010103146A）、ヒト アルツハイマー病 大脳皮質（Biochain社製：#R1236035Alz，Lot#A508435）である。cDNA調製後、PCRを行い、アガロースゲルに電気泳動を行うことにより半定量を行った。また、FKRPの増幅には下記のプライマーを使用してPCRを行った。
【００６７】
5’-GGT GCA GCT GCT GGA CTT GAC CTT C-3’ （配列番号１２４）
5’-TCA GCC GCT TCC CGT CAG ACT CAG C-3’ （配列番号１２５）
【００６８】
種々の疾患組織におけるＳ−１００β結合蛋白質のmRNA発現量の評価を行った結果、ヒト筋萎縮性側索硬化症大脳皮質およびヒトアルツハイマー病大脳皮質において、FKRPのmRNA量の増加が認められた（図５）。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明の蛋白質は、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、さらに、Ｓ−１００βの情報伝達に関与しているので、Ｓ−１００βとの結合を阻害する物質やＳ−１００βの情報伝達を阻害する物質のスクリーニングに有用である。また、該スクリーニングによって得られうる化合物、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体、または本発明のDNAのアンチセンスDNAは、Ｓ−１００βが関与する疾患の予防および/または治療に有用である。Ｓ−１００βが関与する疾患としては、神経変性疾患（アルツハイマー病、クロイツフェルトヤコブ病、パーキンソン病、ハンチントン病、オリーブ橋小脳萎縮症、筋萎縮性側索硬化症等）、ダウン症、ボクサー症、進行性核上麻痺、星状膠細胞腫、脳卒中や脳外傷後の神経機能障害、多発性硬化症、痴呆、精神分裂症、てんかん、不安、嘔吐、偏頭痛、心的外傷後ストレス障害（PTSD）、神経細胞死、うつ病、睡眠障害、食欲不振などの摂食障害、尿失禁、低酸素症、脳梗塞、脳腫瘍、高酸素痙攣および高酸素毒症、炎症性もしくは神経障害性疼痛、髄膜炎などが挙げられる。また、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体、または本発明のDNAまたはそのアンチセンスDNAは、上記疾患であるかどうかの診断や疾患動物モデルの作製に有用である。また、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、さらに、Ｓ−１００βの情報伝達を制御している本発明の蛋白質については、本発明の蛋白質または部分ペプチドまたは本発明のDNAを、Ｓ−１００βが関与する上記の疾患の予防および/または治療に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】健常人およびパーキンソン病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質FLJ12587のmRNA発現量を示す（N:健常人、PARK:パーキンソン病）。
【図２】健常人、筋萎縮性側索硬化症およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質DKFZp761H0421のmRNA発現量を示す（N:健常人、ALS:筋萎縮性側索硬化症、Alz:アルツハイマー病）。
【図３】健常人およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質POGZ1のmRNA発現量を示す（N:健常人、Alz:アルツハイマー病）。
【図４】健常人およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質MGC15730のmRNA発現量を示す（N:健常人、Alz:アルツハイマー病）。
【図５】健常人、筋萎縮性側索硬化症およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質FKRPのmRNA発現量を示す（N:健常人、ALS:筋萎縮性側索硬化症、Alz:アルツハイマー病）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ−１００β結合蛋白質を用いた神経変性疾患などの予防・治療薬のスクリーニング方法、該スクリーニング方法で得られうる化合物、Ｓ−１００β結合蛋白質もしくはその抗体もしくは該蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的なDNAを含有する医薬組成物などに関する。
【背景技術】
【０００２】
中枢神経系の実質を構成する細胞には神経細胞とグリア細胞があり、細胞数はグリア細胞が神経細胞よりはるかに多い。グリア細胞は神経細胞の働きを支持する役割を担っている。グリア細胞の一種であるアストロサイトは、神経細胞の支持細胞として細胞外のイオンおよび神経伝達物質の恒常性維持（非特許文献１；Pharmacology and function, pp. 193-228, Academic Press, Inc., (1993)）や神経栄養因子の供給（非特許文献２；Pharmacology and function, pp. 267-308, Academic Press, Inc., (1993)）などの機能を有していることから、脳機能を制御する重要な役割を演じていると考えられる。
【０００３】
従来、神経変性疾患（アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症など）の成因は主に神経細胞の異常にあると考えられてきた。しかし、近年神経細胞を取り囲むグリア細胞、特にアストロサイトの機能的異常にあるとの考えが有力になってきた。
【０００４】
Ｓ−１００β（配列番号３７で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）はアストロサイト特異的タンパク質であり、カルシウム結合部位を有し細胞内カルシウム濃度の調節、種々の細胞骨格蛋白と結合し細胞の形態変化や神経伝達物質の遊離等に関与している（非特許文献３；TIBS, 13, 437-443, (1988)）。Ｓ−１００βはアストロサイトの活性化により産生され細胞外に放出される。放出されたＳ−１００βは、神経細胞に対し栄養因子的な作用および傷害因子的な作用（非特許文献４；Progress in Neurobiology, 46, 71-82, (1995)）を示し、またアストロサイトに対しては増殖促進作用や誘導型一酸化窒素合成酵素の発現作用を有することが報告されている（非特許文献５；J. Biological Chemistry, 271, 2543-2547, (1996)）。
【０００５】
また、Ｓ−１００βは脳傷害時、活性化されたアストロサイトにおいて過剰発現することが知られている。アルツハイマー患者の脳内でＳ−１００β量が増加しており（非特許文献６；Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 7611-7615, (1989)）、その増加量はアルツハイマー患者の脳における老人斑密度と相関があることが報告されている(非特許文献７；J. Neurosci. Res., 39, 398-404, (1994))。さらにアルツハイマー患者の脳における老人斑近傍にはＳ−１００βの過剰発現を伴った活性化したアストロサイトが存在し、その発現強度は神経の異常突起伸展との間に相関が見られることが報告されている（非特許文献８；J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55, 273-279, (1996)）。その他にも、脳卒中（非特許文献９；Stroke, 30, 1190-1195, (1999)）、頭部外傷（非特許文献１０；Neurosurgery, 45, 477-483, (1999)）、多発性硬化症（非特許文献１１；Acta Neurol Scand, 96, 142-144, (1997)）、ダウン症（非特許文献１２；J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 116, 281-285, (1998)）などの患者の血清中もしくは脳髄液中でＳ−１００β量の増加がみられる。
【０００６】
このようにＳ−１００βと神経変性疾患との関連は強く示唆されている。また、Ｓ−１００β結合蛋白質として、後期糖化反応生成物受容体（RAGE）を初めとする種々の蛋白質が知られているが（非特許文献１３；Mol Cell Biol, 23, 4870-81, (2003), 非特許文献１４；J. Biochem, 116, 121-127, (1994)）、その特異的な結合蛋白質およびＳ−１００βによる細胞内情報伝達系に関与する分子等、その詳細な作用メカニズムは未だ明らかではない。
【０００７】
【非特許文献１】Pharmacology and function, pp. 193-228, Academic Press, Inc., (1993)
【非特許文献２】Pharmacology and function, pp. 267-308, Academic Press, Inc., (1993)
【非特許文献３】TIBS, 13, 437-443, (1988)
【非特許文献４】Progress in Neurobiology, 46, 71-82, (1995)
【非特許文献５】J. Biological Chemistry, 271, 2543-2547, (1996)
【非特許文献６】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 7611-7615, (1989)
【非特許文献７】J. Neurosci. Res., 39, 398-404, (1994)
【非特許文献８】J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55, 273-279, (1996)
【非特許文献９】Stroke, 30, 1190-1195, (1999)
【非特許文献１０】Neurosurgery, 45, 477-483, (1999)
【非特許文献１１】Acta Neurol Scand, 96, 142-144, (1997)
【非特許文献１２】J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 116, 281-285, (1998)
【非特許文献１３】Mol Cell Biol, 23, 4870-81, (2003)
【非特許文献１４】J. Biochem, 116, 121-127, (1994)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
先に示したように、Ｓ−１００β結合蛋白質として種々の蛋白質が知られている。しかし、特異的な情報伝達分子であるＳ−１００β結合蛋白質を利用した神経変性疾患などの予防・治療作用を有する物質のスクリーニング方法、Ｓ−１００β結合蛋白質もしくはその抗体もしくは該蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的なDNAを含有する医薬組成物などについては現在知られておらず、該スクリーニング方法、該医薬組成物などを提供することが課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ウェスト-ウェスタン法によりＳ−１００β結合蛋白質を同定し、更に、これらの蛋白質がＳ−１００β（配列番号３７で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）の情報伝達に関与することを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は、（１）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを用いることを特徴とする、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、（２）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量と被験化合物の非存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を比較することからなる（１）に記載の方法、（３）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離されるＳ−１００βの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離されるＳ−１００βの量と被験化合物の非存在下で遊離されるＳ−１００βの量を比較することからなる（１）に記載の方法、（４）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を用いることを特徴とする、Ｓ−１００βによる該細胞における活性を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、（５）Ｓ−１００βの活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞に被験化合物の存在下あるいは非存在下でＳ−１００βを接触させ、Ｓ−１００βの活性を測定し、被験化合物の存在下と非存在下の活性を比較することからなる（４）に記載の方法、（６）神経変性疾患の予防および／または治療用化合物を探索するための（１）または（４）に記載のスクリーニング方法、（７）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（６）に記載のスクリーニング方法、（８）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを含有する、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、（９）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を含有する、Ｓ−１００βによる該細胞における活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、（１０）（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩、（１１）（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩を含有してなる医薬組成物、（１２）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質、または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAを含有してなる医薬組成物、（１３）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAを含有してなる医薬組成物、（１４）神経変性疾患の予防および／または治療剤である（１１）乃至（１３）記載の医薬組成物、（１５）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（１４）に記載の医薬組成物、（１６）（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法、（１７）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法、（１８）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法、（１９）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（１６）乃至（１８）に記載の方法、（２０）神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、（１）または（４）記載のスクリーニング方法または（８）または（９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の使用、（２１）神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの使用、（２２）神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの使用、（２３）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（２０）乃至（２２）に記載の使用、（２４）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断剤、（２５）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（２４）に記載の剤、（２６）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断方法、（２７）神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である（２６）に記載の方法、（２８）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質のゲノムが、該蛋白質とＳ−１００βとの結合が変化されているように改変されている非ヒト動物疾患モデル、（２９）該蛋白質とＳ−１００βとの結合が、（a）配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の過剰発現：(b)配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の変異蛋白質の発現：(c)配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の欠失：あるいは(d)配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の低下：の結果として変化されている（２８）記載の非ヒト動物疾患モデルなどに関する。
【００１１】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列としては、該アミノ酸配列を含有する蛋白質（以下、本発明の蛋白質と呼ぶこともある）が、Ｓ−１００β（配列番号３７で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）との結合活性を有していれば如何なるアミノ酸配列であっても良い。
【００１２】
また、本発明の蛋白質としては、例えば、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列からなるもの以外に、その一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が欠失したもの、その一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が他のアミノ酸と置換したもの、そのアミノ酸配列に数個のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が付加または挿入されたもの、およびそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するものも含まれる。上記のようにアミノ酸配列が欠失、置換、付加または挿入されている場合、その位置は特に限定されない。
【００１３】
また、本発明の蛋白質としては、その構成アミノ酸がカルボキシル基を持っていても良く、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されていても良い。エステルには、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルなどのアルキル基、フェニル、ナフチルなどのアリル基、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのシクロアルキル基などによりエステル化されたものが含まれる。また、構成アミノ酸のアミノ基がホルミル基、アセチル基などで保護されていても良い。また、糖鎖が結合しているものなども本発明の蛋白質に含まれる。
【００１４】
本発明の蛋白質の部分ペプチド（以下、本発明の部分ペプチドと呼ぶこともある）としては、上記の本発明の蛋白質の部分ペプチドであって、上記の本発明の蛋白質と同様の性質を有するものであればいずれのペプチドでも良い。例えば、本発明の蛋白質のアミノ酸配列のうち少なくとも１０個以上、好ましくは３０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用いられる。また、本発明の部分ペプチドとしては、そのアミノ酸配列中の一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が欠失したもの、その一部のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が他のアミノ酸と置換したもの、そのアミノ酸配列に数個のアミノ酸（好ましくは１−１０個、より好ましくは１−５個）が付加または挿入されたもの、およびそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するものも含まれる。上記のようにアミノ酸配列が欠失、置換、付加または挿入されている場合、その位置は特に限定されない。
【００１５】
また、本発明の部分ペプチドとしては、その構成アミノ酸がカルボキシル基を持っていても良く、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されていても良い。エステルには、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルなどのアルキル基、フェニル、ナフチルなどのアリル基、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのシクロアルキル基などによりエステル化されたものが含まれる。また、構成アミノ酸のアミノ基がホルミル基、アセチル基などで保護されていても良い。また、糖鎖が結合しているものなども本発明の部分ペプチドに含まれる。本発明の部分ペプチドは抗体作製のための抗原としても用いることができる。また、本発明の部分ペプチドは、本発明の蛋白質とＳ−１００βとの結合を阻害する化合物のスクリーニングに用いることもできる。
【００１６】
本発明で用いるＳ−１００βとしては、配列番号３７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質以外に、実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドが含まれ、配列番号３７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白と同様の性質を有するものであればいずれの蛋白質あるいはペプチドでも良い。また、配列番号３７で表されるアミノ酸配列からなる蛋白と同様の性質を有するものであればこれらのアミドもしくはエステルもしくは塩も好適に用いることができる。
【００１７】
本発明の蛋白質および本発明の部分ペプチドの塩としては、酸（無機酸や有機酸など）または塩基（アルカリ金属塩など）などとの塩が用いられるが、生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸など）との塩、または有機酸（蟻酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、クエン酸、蓚酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、安息香酸など）との塩などが用いられる。
【００１８】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするポリヌクレオチド（DNAまたはRNA）（以下、本発明のポリヌクレオチドと呼ぶこともある）としては、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。よく知られているように、ひとつのアミノ酸をコードするコドンは１〜６種類（例えば、Ｍｅｔは１種類、Ｌｅｕは６種類）知られている。従って、蛋白質やペプチドのアミノ酸配列を変えることなくｃＤＮＡの塩基配列を変えることができる。そのような塩基配列置換によって、蛋白質やペプチドの生産性が向上することがある。本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ゲノムDNA、cDNA、合成DNA、RNA、DNA-RNAハイブリッドのいずれでもよい。
【００１９】
本発明の蛋白質をコードするDNA（以下、本発明のDNAと呼ぶこともある）としては、配列番号３８乃至７３および１０３乃至１２１からなる群から選択される配列番号で表される塩基配列を有するDNA以外に、該DNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の蛋白質と実質的に同じ性質を有する蛋白質をコードするDNAであればいかなるものであってもよい。そのようなDNAとしては、配列番号３８乃至７３および１０３乃至１２１からなる群から選択される配列番号で表される塩基配列と約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を有するDNAなどが挙げられる。ハイブリダイゼーションは、公知の方法、例えば、Molecular Cloning（Sambrook, J., Fritsch, E. F.およびManiatis, T. 著、Cold Spring Harbor Laboratory Pressより1989年に発刊）またはCurrent Protocol in Molecular Biology（F.M.Ausubelら編、John Wiley & Sons, Inc.より発刊）に記載の方法などに従って行うことができる。ストリンジェントな条件としては、例えば、６５℃でのハイブリダイゼーション、および0.1 X SSC, 0.1%のSDSを含む緩衝液による６５℃での洗浄処理を挙げることができる。
【００２０】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAは、化学合成によって、または本発明の蛋白質または部分ペプチドの一部をコードする合成DNAプライマーを用いてPCR法によって増幅することによって、あるいは本発明の蛋白質または部分ペプチドの一部をコードする合成DNAをプローブとしたハイブリダイゼーション法によって得ることができる。また、最近では、ヒトの種々の組織のｃＤＮＡライブラリーが市販されており、これらを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができる。本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAをPCR法あるいはハイブリダイゼーション法によって取得するために使用する組織としては、ヒトの組織中、Ｓ−１００βが作用すると考えられる組織、好ましくは脳である。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、Molecular Cloning（Sambrook, J., Fritsch, E. F.およびManiatis, T. 著、Cold Spring Harbor Laboratory Pressより1989年に発刊）またはGene, 10, 63 (1980)に記載の方法に従って行うことができる。このようにして得られたDNAは、該ＤＮＡを含有するベクターＤＮＡを適当な宿主に導入し、これを増殖させることによって、必要量得ることができる。
【００２１】
本発明の蛋白質または部分ペプチドを取得する方法としては、
（１）生体または培養細胞から精製単離する方法、
（２）ペプチド合成する方法、または
（３）遺伝子組み換え技術を用いて生産する方法、
などが挙げられるが、工業的には（３）に記載した方法が好ましい。
【００２２】
遺伝子組み換え技術を用いて蛋白質またはペプチドを生産するための発現系（宿主−ベクター系）としては、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞および哺乳動物細胞の発現系が挙げられる。
【００２３】
例えば、大腸菌で発現させる場合には、成熟蛋白部分をコードするＤＮＡの５’末端に開始コドン（ＡＴＧ）を付加し、得られたｃＤＮＡを、適当なプロモーター（例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、λＰＬプロモーター、Ｔ７プロモーター等）の下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター（例えば、pBR322、pUC18、pUC19等）に挿入して発現ベクターを作製する。次に、この発現ベクターで形質転換した大腸菌（例えば、E. Coli DH1、E. Coli JM109、E. Coli HB101株等）を適当な培地で培養して、その菌体より目的とする蛋白質またはペプチドを得ることができる。また、バクテリアのシグナルペプチド（例えば、ｐｅｌＢのシグナルペプチド）を利用すれば、ペリプラズム中に目的とする蛋白質またはペプチドを分泌することもできる。さらに、他のポリペプチドとのフュージョン・プロテイン（fusion protein）を生産することもできる。
【００２４】
また、哺乳動物細胞で発現させる場合には、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを適当なベクター（例えば、レトロウイルスベクター、パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロモーター（例えば、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、メタロチオネインプロモーター等）の下流に挿入して発現ベクターを作製する。次に、得られた発現ベクターで適当な哺乳動物細胞（例えば，サルＣＯＳ−１細胞、ＣＯＳ−７細胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、マウスＬ細胞等）を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養することによって、本発明の蛋白質または部分ペプチドが発現される。さらに、その他のポリペプチド、例えば抗体の定常領域（Fc portion）をコードするｃＤＮＡ断片と連結することによって、フュージョン・プロテイン（fusion protein）を生産することもできる。
【００２５】
また、昆虫細胞で発現させる場合には、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを適当なプロモーター（ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーター等）の下流に接続し、昆虫細胞で機能するウイルスベクターに挿入して発現ベクターを作製する。昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Ｓｆ細胞）が用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（ＢｍＮ細胞）などが用いられる。Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）、Ｓｆ２１細胞（Vaughn,J.L.，イン・ヴィボ（In Vivo），1977年，第13巻，ｐ213−217）が用いられる。昆虫としては、カイコの幼虫などが用いられる。昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー（Bio/Technology），1988年，第6巻，ｐ47−55に記載の方法に従って行うことができる。
【００２６】
また、酵母で発現させる場合には、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを適当なプロモーター（PHO5プロモーター、PGKプロモーター、GAPプロモーター、ADHプロモーター等）の下流に接続し、酵母で機能するベクター（pSH19、pSH15等）に挿入して発現ベクターを作製する。次に、この発現ベクターで形質転換した酵母（例えば、サッカロミセス・セレビシエAH22, AH22R-, 20B-12、シゾサッカロミセス・ポンベNCYC1913、ピッキア・パストリスKM71等）を適当な培地で培養して、目的とする蛋白質またはペプチドを得ることができる。以上のようにして得られた蛋白質またはペプチドは、一般的な生化学的方法によって単離精製することができる。
【００２７】
本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質または部分ペプチドを認識しうる抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれであってもよい。本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質または部分ペプチドを抗原として、公知の方法により製造することができる。本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質と結合してこれを中和することができるので、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬として用いることもできる。
【００２８】
本発明のDNAのアンチセンスDNAまたはRNAは、本発明のDNAを上記のようなベクターのアンチセンス領域に挿入することでアンチセンスDNAまたはRNAを製造することができる。このようなアンチセンスDNAまたはRNAは、細胞中の本発明の蛋白質のレベルを下げることができるので、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬として有用である。
【００２９】
本発明は、本発明の蛋白質または部分ペプチドを用いることを特徴とする、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬のスクリーニング方法に関する。Ｓ−１００βとの結合を阻害する化合物のスクリーニングは、例えば、以下の方法により行なうことが出来る。すなわち、本発明の蛋白質または部分ペプチドを本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体を用いて固相（例えばEIAプレートなど）に固定化する。あるいは本発明の蛋白質または部分ペプチドにTag（例えばHis-Tag、GSTなど）を付けたものを固相に固定化する。これに、被験化合物とビオチンなどで標識したＳ−１００βを加えて反応させる。本発明の蛋白質または部分ペプチドとＳ−１００βとの結合の阻害の結果として遊離したＳ−１００βを、ビオチンなどの標識体を検出する市販のキットまたはＳ−１００βに対する抗体を用いて、検出、定量する。Ｓ−１００βを遊離させる化合物を、本発明の蛋白質または部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物として選択する。また、Ｓ−１００βを固相に固定化し、これに被験化合物と本発明の蛋白質または部分ペプチドあるいは本発明の蛋白質または部分ペプチドにTagを付けたものを加えて反応させてもよい。Ｓ−１００βを固相へ固定化する際には、例えばビオチンで標識したＳ−１００βとアビジンで標識した固相が好ましく用いられる。ここに被験化合物を加え、遊離する本発明の蛋白質または部分ペプチドを本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体またはTagに対する抗体で検出、定量する。本発明の蛋白質または部分ペプチドを遊離させる化合物を結合阻害剤として選択する。
【００３０】
本発明は、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAで形質転換された形質転換体を用いることを特徴とする、Ｓ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療薬のスクリーニング方法に関する。Ｓ−１００βの活性を阻害する化合物のスクリーニングは例えば、以下の方法により行なうことが出来る。すなわち、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAで形質転換された形質転換体を上記の方法により作製する。該形質転換体（例えばU373MG細胞など）を培養プレートに撒き、増殖させる。ここに被験化合物とＳ−１００β（例えばカルボキシメチル化Ｓ−１００βなど）を加えて培養する。２４時間後の培養上清を回収し、例えば、Ｓ−１００β刺激の結果として産生されるMCP-1を、市販のMCP-1測定キットなどを用いて定量する。MCP-1量を減少させる化合物をＳ−１００βの情報伝達を阻害する化合物として選択する。
【００３１】
本発明のスクリーニング方法により得られる化合物、または本発明の蛋白質または部分ペプチド、または本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は通常、全身的または局所的に、一般的には経口または非経口の形で投与される。好ましくは、経口投与、静脈内投与および脳室内投与である。
【００３２】
投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人一人あたり、一回につき、１００μｇから１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回経口投与されるかまたは、成人一人あたり、一回につき、１０μｇから１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回非経口投与される。もちろん前記したように、投与量は種々の条件により変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて必要な場合もある。
【００３３】
本発明化合物を投与する際には、経口投与のための固体組成物、液体組成物およびその他の組成物、非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤等として用いられる。
【００３４】
経口投与のための固体組成物には、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。カプセルには、ソフトカプセルおよびハードカプセルが含まれる。
【００３５】
このような固体組成物においては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤（例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコール酸カルシウム等）、安定化剤（ヒト血清アルブミン、ラクトース等）、溶解補助剤（アルギニン、アスパラギン酸等）を含有していてもよい。
【００３６】
錠剤または丸剤は、必要により白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等の胃溶性あるいは腸溶性のフィルムで被膜してもよいし、また２以上の層で被膜してもよい。さらにゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも包含される。
【００３７】
経口投与のための液体組成物は、薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般に用いられる不活性な希釈剤（例えば、精製水、エタノール等）を含んでいてもよい。この様な組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
【００３８】
経口投与のためのその他の組成物としては、ひとつまたはそれ以上の活性物質を含み、それ自体公知の方法により処方されるスプレー剤が含まれる。この組成物は不活性な希釈剤以外に亜硫酸水素ナトリウムのような安定剤と等張性を与えるような安定化剤、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムあるいはクエン酸のような等張剤を含有していてもよい。スプレー剤の製造方法は、例えば米国特許第2,868,691号および同第3,095,355号明細書に詳しく記載されている。
【００３９】
本発明による非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性または非水性の溶液剤、懸濁剤としては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤と混合される。水性の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水および生理食塩水が挙げられる。非水性の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（登録商標）等が挙げられる。
【００４０】
このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ラクトース等）、溶解補助剤（例えば、アルギニン、アスパラギン酸等）のような補助剤を含んでいてもよい。
【００４１】
本発明のDNAまたは本発明のDNAのアンチセンスDNAをＳ−１００βが関連する疾患の予防および/または治療に使用する場合は、該DNAまたは該アンチセンスDNAを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、定法に従って、ヒトや哺乳動物に投与することができる。本発明のDNAまたは本発明のDNAのアンチセンスDNAは、そのままで、あるいは細胞への導入を促進するための補助剤（リポソーム、HVJリポソームなど）などの生理学的に認められる担体とともに製剤化して用いることができる。
【００４２】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的なDNAは、例えば、プローブとして使用することにより、本発明の蛋白質をコードするDNAまたはmRNAを検出することができるので、Ｓ−１００βが関連する疾患、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患を検査する試薬として有用である。また、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体は、本発明の蛋白質を検出することができるので、上記疾患を検査する試薬として用いることができる。本発明の蛋白質あるいは本発明の蛋白質をコードするmRNAの過剰発現が検出された場合は、アルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患である可能性が高いと診断することができる。
【００４３】
本発明のスクリーニング用キットは、本発明の蛋白質または部分ペプチドを含有するが、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体を含んでいても良い。また、本発明のスクリーニング用キットは、本発明の蛋白質または部分ペプチドを産生する能力を有する細胞（好ましくは、本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAで形質転換された形質転換体（例えば動物細胞など）を含有するものも含まれる。
【００４４】
本発明の蛋白質または部分ペプチドをコードするDNAを用いて、野生型または変異配列を有する該蛋白質または該部分ペプチドを過剰発現する動物（トランスジェニック動物と呼ばれる）、該蛋白質を発現しない動物（ノックアウト動物と呼ばれる）、または該蛋白質の発現が低下した動物を作製することができる。トランスジェニック動物、ノックアウト動物などは当業者によく知られている方法により作製することができる。
【発明の効果】
【００４５】
本発明の蛋白質は、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、Ｓ−１００βの情報伝達に関与しているので、Ｓ−１００βとの結合を阻害する物質やＳ−１００βの情報伝達を阻害する物質のスクリーニングに有用である。また、該スクリーニングで得られうる化合物、該蛋白質、該蛋白質をコードするDNA、該DNAのアンチセンスDNA、該蛋白質に対する抗体は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症などの神経変性疾患などの予防および/または治療に有用である。また、上記疾患であるかどうかの診断や疾患動物モデルの作製に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるものではない。
実施例1
ウェスト-ウェスタン法によるＳ−１００β結合蛋白質の同定
【００４７】
cDNAライブラリーの構築およびウェスト-ウェスタン法は、細胞工学別冊8新細胞工学実験プロトコールに記載されている方法に従って行った。すなわち、ヒト脳由来mRNAを調製し、逆転写酵素を用いてcDNAを合成した後、大腸菌由来DNAポリメラーゼ、DNAリガーゼ、RNase Hを用い第2鎖の合成を行った。合成終了後、T4 DNAポリメラーゼにより平滑化を行った。平滑化終了後、EcoRIリンカーライゲーションを行い、EcoRIおよびアルカリフォスファターゼ処理を行ったラムダgt11にT4リガーゼによりライゲーションを行った。ライゲージョン終了後、Gigapack（ストラタジーン社製）を用いてインビトロパッケージングを行った。パッケージング終了後、LE392に感染させ、タイターを確認し（3x106 インディペンデントクローン）、ライブラリーの増幅を行った。
【００４８】
ウェスト-ウェスタン法は、ライブラリーをイソプロピル-β-D-ガラクトピラノシドにて誘導後、150mm シャーレ1枚当たり5x104プラーク発現させ、PVDF膜に転写させた。転写後、10％ブロックエース（雪印社製）にてブロッキング後、１０μｇ/ｍＬのＳ−１００βおよび1mM カルシウムを含むトリス緩衝液に室温にて1時間インキュベーションを行った。インキュベーション終了後、リン酸緩衝液でPVDF膜を洗浄後、S100抗体と室温にて１時間インキュベーションを行った。インキュベーション終了後、リン酸緩衝液にて洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合させたイムノグロブリン抗体とインキュベーションを行った。次に、再びリン酸緩衝液でPVDF膜を洗浄後、ECL plus（アマシャムファルマシア社製）を用いて陽性クローンの検出を行った。陽性クローンは、SM緩衝液に単離したのち、シークエンスにより同定を行った。RP3-495010 (NCBI ID: AL031121、同定したアミノ酸配列を配列番号１に、塩基配列を配列番号３８に示す)、RP11-160O5（NCBI ID：AC015821、同定したアミノ酸配列を配列番号２に、塩基配列を配列番号３９に示す）、RP11-67G7（NCBI ID：AC011291、同定したアミノ酸配列を配列番号３に、塩基配列を配列番号４０に示す）、RP1-287021（NCBI ID：AL136319、同定したアミノ酸配列を配列番号４に、塩基配列を配列番号４１に示す）、RP3-509I19（NCBI ID：AL121834、同定したアミノ酸配列を配列番号５に、塩基配列を配列番号４２に示す）、CTC-286C20（NCBI ID：AC027314、同定したアミノ酸配列を配列番号６に、塩基配列を配列番号４３に示す）、RP11-444D3（NCBI ID：AL087322、同定したアミノ酸配列を配列番号７に、塩基配列を配列番号４４に示す）、ZNF140-like protein（NCBI ID：AF155656、同定したアミノ酸配列を配列番号８に、塩基配列を配列番号４５に示す）、RP11-451G1（NCBI ID：AC013727、同定したアミノ酸配列を配列番号９に、塩基配列を配列番号４６に示す）、RP4-550H1（NCBI ID：AL035420、同定したアミノ酸配列を配列番号１０に、塩基配列を配列番号４７に示す）、FLJ12991（NCBI ID：AK023053、同定したアミノ酸配列を配列番号１１に、塩基配列を配列番号４８に示す）、FLJ22382（NCBI ID：AK026035、同定したアミノ酸配列を配列番号１２に、塩基配列を配列番号４９に示す）、IMAGE4423166（NCBI ID：BC033161、同定したアミノ酸配列を配列番号１３に、塩基配列を配列番号５０に示す）、IMAGE5261213（NCBI ID：BC036485、同定したアミノ酸配列を配列番号１４に、塩基配列を配列番号５１に示す）、FLJ41109（NCBI ID：AK123104、同定したアミノ酸配列を配列番号１５に、塩基配列を配列番号５２に示す）、FLJ42709（NCBI ID：AK124699、同定したアミノ酸配列を配列番号１６に、塩基配列を配列番号５３に示す）、SEC14-like2（NCBI ID：BC048337、同定したアミノ酸配列を配列番号１７に、塩基配列を配列番号５４に示す）、DKFZp313P011（NCBI ID：AL832467、同定したアミノ酸配列を配列番号１８に、塩基配列を配列番号５５に示す）、IMAGE2823852（NCBI ID：BC001102、同定したアミノ酸配列を配列番号１９に、塩基配列を配列番号５６に示す）、FLJ34134（NCBI ID：AK091453、同定したアミノ酸配列を配列番号２０に、塩基配列を配列番号５７に示す）、Precerebellin（NCBI ID：M58583、同定したアミノ酸配列を配列番号２１に、塩基配列を配列番号５８に示す）、FLJ13673（NCBI ID：AK02375、同定したアミノ酸配列を配列番号２２に、塩基配列を配列番号５９に示す）、Small glutamine-rich tetratricopeptide（NCBI ID：BC000390、同定したアミノ酸配列を配列番号２３に、塩基配列を配列番号６０に示す）、NT2RI2006071（NCBI ID：AK056262、同定したアミノ酸配列を配列番号２４に、塩基配列を配列番号６１に示す）、FLJ20542（NCBI ID：NM_017871、同定したアミノ酸配列を配列番号２５に、塩基配列を配列番号６２に示す）、KIAA0627（DDBJ ID：AB014527、同定したアミノ酸配列を配列番号２６に、塩基配列を配列番号６３に示す）、DKFZp451G202（NCBI ID：AL831955、同定したアミノ酸配列を配列番号２７に、塩基配列を配列番号６４に示す）、Zinc finger protein 3115BP（NCBI ID：AJ132592、同定したアミノ酸配列を配列番号２８に、塩基配列を配列番号６５に示す）、FLJ43968（NCBI ID：AK125956、同定したアミノ酸配列を配列番号２９に、塩基配列を配列番号６６に示す）、CGI-043（NCBI ID:AF151801、同定したアミノ酸配列を配列番号３０に、塩基配列を配列番号６７に示す）、DKFZp761H0421（NCBI ID:AL831813、同定したアミノ酸配列を配列番号３１に、塩基配列を配列番号６８に示す）、POGZ1（NCBI ID:NM_015100、同定したアミノ酸配列を配列番号３２に、塩基配列を配列番号６９に示す）、CUB/Sushi1 multiple domain1 protein（NCBI ID:AF333704、同定したアミノ酸配列を配列番号３３に、塩基配列を配列番号７０に示す）、FLJ12587（DDBJ ID：BD286600、同定したアミノ酸配列を配列番号３４に、塩基配列を配列番号７１に示す）、Catenin binding protein（NCBI ID：NM_014412、同定したアミノ酸配列を配列番号３５に、塩基配列を配列番号７２に示す）、MGC15730（NCBI ID:NM_032880、同定したアミノ酸配列を配列番号３６に、塩基配列を配列番号７３に示す）、MGC40157（NCBI ID:BC027986、同定したアミノ酸配列を配列番号８４に、塩基配列を配列番号１０３に示す）、FLJ35113(NCBI ID:AK092432、同定したアミノ酸配列を配列番号８５に、塩基配列を配列番号１０４に示す）、SNO oncogene（NCBI ID：X15219、同定したアミノ酸配列を配列番号８６に、塩基配列を配列番号１０５に示す）、FLJ42213（NCBI ID: AK124207、同定したアミノ酸配列を配列番号８７に、塩基配列を配列番号１０６に示す）、FLJ35109（NCBI ID：AK092428、同定したアミノ酸配列を配列番号８８に、塩基配列を配列番号１０７に示す）、Basic transcription factor 3（NCBI ID：BC008062、同定したアミノ酸配列を配列番号８９に、塩基配列を配列番号１０８に示す）、C11orf23（NCBI ID:NM_018312、同定したアミノ酸配列を配列番号９０に、塩基配列を配列番号１０９に示す）、NAC transcription factor（NCBI ID：AK090650、同定したアミノ酸配列を配列番号９１に、塩基配列を配列番号１１０に示す）、Sequence 23787 from Patent WO02068579（NCBI ID：CQ737853、同定したアミノ酸配列を配列番号９２に、塩基配列を配列番号１１１に示す）、Sterile alpha motif domain 6（NCBI ID：BC012981、同定したアミノ酸配列を配列番号９３に、塩基配列を配列番号１１２に示す）、CGI-024（NCBI ID：AF132958、同定したアミノ酸配列を配列番号９４に、塩基配列を配列番号１１３に示す）、TRIB2 homolog 2（NCBI ID: NM_021643、同定したアミノ酸配列を配列番号９５に、塩基配列を配列番号１１４に示す）、Fukutin related protein（NCBI ID：NM_024301、同定したアミノ酸配列を配列番号９６に、塩基配列を配列番号１１５に示す）、ZNF37A（NCBI ID: AJ492195、同定したアミノ酸配列を配列番号９７に、塩基配列を配列番号１１６に示す）、FLJ45802（NCBI ID:AK127702、同定したアミノ酸配列を配列番号９８に、塩基配列を配列番号１１７に示す）、KIAA0293（NCBI ID：AB006631、同定したアミノ酸配列を配列番号９９に、塩基配列を配列番号１１８に示す）、Transcription factor 20（NCBI ID：NM_005650、同定したアミノ酸配列を配列番号１００に、塩基配列を配列番号１１９に示す）、Tetratricopeptide repeat3（NCBI ID: D83077、同定したアミノ酸配列を配列番号１０１に、塩基配列を配列番号１２０に示す）およびBAP28（NCBI ID：XM_375853、同定したアミノ酸配列を配列番号１０２に、塩基配列を配列番号１２１に示す）をＳ−１００β結合蛋白質として同定した。
【００４９】
実施例２
SiRNAを用いたＳ−１００β結合蛋白質の機能解析
【００５０】
10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地で培養したU373MG細胞を1ウェルあたり7.5x104個で24穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養した。次に、SiRNAとオリゴフェクタミン混合液を調製し、常法に従い遺伝子導入を行った。この時使用したSiRNAのセンス鎖の配列は次に示す。
陰性対照：５’−ＧＣＧ ＣＧＣ ＵＵＵ ＧＵＡ ＧＧＡ ＵＵＣ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７４）
カテニン結合蛋白質：５’−ＧＡＧ ＵＡＣ ＧＵＧ ＡＵＧ ＣＣＣ ＵＵＡ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号７５）
ＣＧＩ−０４３：５’−ＧＡＣ ＵＧＧ ＡＣＡ ＧＣＡ ＵＣＧ ＵＵＧ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７６）
ＤＫＦＺｐ７６１Ｈ０４２１：５’−ＧＵＡ ＣＵＡ ＣＣＡ ＵＧＣ ＵＡＡ ＧＡＡ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号７７）
ＰＯＧＺ１：５’−ＧＣＵ ＧＣＣ ＡＣＵ ＧＵＧ ＧＡＡ ＵＣＵ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７８）
ＣＵＢ／Ｓｕｓｈｉ１：５’−ＧＣＵ ＣＣＡ ＵＧＵ ＧＧＵ ＧＧＡ ＣＡＵ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号７９）
ＦＬＪ１２５８７：５’−ＧＧＡ ＣＡＣ ＡＣＵ ＧＣＵ ＧＧＡ ＣＣＵ ＣｄＴｄＴ−３’（配列番号８０）
ＭＧＣ１５７３０：５’−ＧＵＧ ＵＡＡ ＣＵＵ ＣＡＡ ＧＡＣ ＡＧＡ ＵｄＴｄＴ−３’（配列番号８１）
【００５１】
遺伝子導入終了後、10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地に交換し、３７℃で24時間培養した。次に無血清のダルベッコ改変培地に交換し、24時間培養を行った後、無血清のダルベッコ改変培地に１０μｍｏｌ／Ｌのカルボキシメチル化-リコンビナントS100を加えた培地に交換しU373MG細胞を刺激した。刺激後、24時間後の培養上清を回収しR&D社製MCP-1(monocyte chemotactic protein 1)測定キットを用いてMCP-1の定量を行った。
【００５２】
S100結合蛋白質に対するSiRNAをU373MG細胞に導入することにより、カルボキシルメチル-S100（CM-S100）刺激によるMCP1の産生における影響を調べた結果を表１に示した。カテニン結合蛋白質、DKFZp761H0421、POGZ1、CUB/Sushi1、CGI-043においては、MCP-1の産生を抑制した。一方、DKFZp451G202、FLJ12587、MGC15730においては、MCP-1の産生を増強させた。
【００５３】
実施例３
強制発現系を用いたＳ−１００β結合蛋白質の機能解析
【００５４】
10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地で培養したU373MG細胞を1ウェルあた
り7.5x104個で24穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養した。次に、pCIベクター（プロメガ社）に全長オープンリーディングフレームに組み込み、リポフェクタミン（インビトロジェン社）により遺伝子導入を行った。
【００５５】
遺伝子導入終了後、10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地に交換し、３７℃で24時間培養した。次に無血清のダルベッコ改変培地に交換し、48時間培養を行った後、無血清のダルベッコ改変培地に１０μｍｏｌ／Ｌのカルボキシメチル化-リコンビナントS100を加えた培地に交換しU373MG細胞を刺激した。刺激後、24時間後の培養上清を回収しR&D社製MCP-1測定キットを用いてMCP-1の定量を行った。
【００５６】
S100結合蛋白質をU373MG細胞に強制発現させることにより、カルボキシルメチル-S100刺激によるMCP-1の産生に対する影響を調べた結果を表２に示す。FLJ12587、MGC15730はMCP-1の産生を抑制した．
【００５７】
実施例４
RT-PCR法を用いた疾患組織でのＳ−１００β結合蛋白質の発現解析
【００５８】
ヒトtotal RNA 1μgよりスーパースクリプトＩＩＩ（インビトロジェン社製，18080-051）を用いてcDNAを調製した。用いたRNAは、Total RNA（ヒト健常人黒質（Ambion社製：#6866，Lot#024P011003023A）、ヒトパーキンソン病黒質（Ambion社製：#6288，Lot#083P010103399A）、ヒト健常人大脳皮質（Ambion社製：#6870，Lot#013P011202039A）、ヒト 筋萎縮性側索硬化症 大脳皮質（Ambion社製：#6156，Lot#083P010103146A）、ヒト アルツハイマー病 大脳皮質（Biochain社製：#R1236035Alz，Lot#A508435）である。cDNA調製後、カテニン結合蛋白質、CGI-043、POGZ1、CUB／Sushi1、DKFZp761H0421、FLJ12587、MGC15730に関しては、オープンリーディングフレームについてPCRを行い、アガロースゲルに電気泳動を行うことにより半定量を行った。また、POGZ1に関しては、
5’-TGT GTC GCT ATA GCA CCT GCT GTT CTC GAG-3’ （配列番号８２）
5’-TCAAATCTCCATCAGATCTAGGTCAGCTTC-3’ （配列番号８３）
のプライマーを用いてPCRを行った。
【００５９】
種々の疾患組織におけるＳ−１００β結合蛋白質のmRNA発現量の評価を行った結果、ヒトパーキンソン病黒質においてFLJ12587のmRNA量の減少が認められた。また、ヒト筋萎縮性側索硬化症大脳皮質において、DKFZp761H0421のmRNA量の増加が認められた。さらに、ヒトアルツハイマー病大脳皮質において、POGZ1、DKFZp761H0421、MGC15730のmRNA量の増加が認められた（図１―４）。
【００６０】
実施例５
SiRNAを用いたＳ−１００β結合蛋白質BAP28およびFukutin related protein (FKRP)の機能解析
【００６１】
10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地で培養したU373MG細胞を1ウェルあたり4x104個で24穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養した。次に、SiRNAとQiagen社製トランスメッセンジャートランスフェクション試薬混合液を調製し、常法に従い遺伝子導入を行った。この時使用したSiRNAのセンス鎖の配列は次に示す。
陰性対照：５’−ＧＣＧ ＣＧＣ ＵＵＵ ＧＵＡ ＧＧＡ ＵＵＣ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号７４）
ＢＡＰ２８：５’−ＧＣＡ ＧＡＵ ＵＧＡ ＧＡＡ ＧＡＡ ＣＵＧ ＧｄＴｄＴ−３’（配列番号１２２）
ＦＫＲＰ：５’−ＧＣＡ ＡＣＣ ＡＣＵ ＵＧＣ ＡＣＧ ＵＧＧ ＡｄＴｄＴ−３’（配列番号１２３）
【００６２】
遺伝子導入終了後、10％ウシ胎児血清を含有したダルベッコ改変培地に交換し、３７℃で24時間培養した。次に無血清のダルベッコ改変培地に交換し、24時間培養を行った後、無血清のダルベッコ改変培地に１０μｍｏｌ／Ｌのカルボキシメチル化-リコンビナントS100または、0.3ng/mLリコンビナントIL1βを加えた培地に交換しU373MG細胞を刺激した。刺激後、24時間後の培養上清を回収しR&D社製MCP-1(monocyte chemotactic protein 1)測定キットを用いてMCP-1の定量を行った。
【００６３】
S100結合蛋白質に対するSiRNAをU373MG細胞に導入することにより、カルボキシルメチル-S100（CM-S100）刺激によるMCP1の産生における影響を調べた結果を表３に示した。BAP28、FKRPにおいて、MCP-1の産生を抑制した。一方、BAP28は、リコンビナントIL1β刺激によるMCP1の産生を抑制しなかった（表４）。
【００６４】
【００６５】
実施例６
RT-PCR法を用いた疾患組織でのＳ−１００β結合蛋白質FKRPの発現解析
【００６６】
ヒトtotal RNA 1μgよりスーパースクリプトＩＩＩ（インビトロジェン社製，18080-051）を用いてcDNAを調製した。用いたRNAは、ヒト健常人大脳皮質（Ambion社製：#6870，Lot#013P011202039A）、ヒト 筋萎縮性側索硬化症 大脳皮質（Ambion社製：#6156，Lot#083P010103146A）、ヒト アルツハイマー病 大脳皮質（Biochain社製：#R1236035Alz，Lot#A508435）である。cDNA調製後、PCRを行い、アガロースゲルに電気泳動を行うことにより半定量を行った。また、FKRPの増幅には下記のプライマーを使用してPCRを行った。
【００６７】
5’-GGT GCA GCT GCT GGA CTT GAC CTT C-3’ （配列番号１２４）
5’-TCA GCC GCT TCC CGT CAG ACT CAG C-3’ （配列番号１２５）
【００６８】
種々の疾患組織におけるＳ−１００β結合蛋白質のmRNA発現量の評価を行った結果、ヒト筋萎縮性側索硬化症大脳皮質およびヒトアルツハイマー病大脳皮質において、FKRPのmRNA量の増加が認められた（図５）。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明の蛋白質は、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、さらに、Ｓ−１００βの情報伝達に関与しているので、Ｓ−１００βとの結合を阻害する物質やＳ−１００βの情報伝達を阻害する物質のスクリーニングに有用である。また、該スクリーニングによって得られうる化合物、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体、または本発明のDNAのアンチセンスDNAは、Ｓ−１００βが関与する疾患の予防および/または治療に有用である。Ｓ−１００βが関与する疾患としては、神経変性疾患（アルツハイマー病、クロイツフェルトヤコブ病、パーキンソン病、ハンチントン病、オリーブ橋小脳萎縮症、筋萎縮性側索硬化症等）、ダウン症、ボクサー症、進行性核上麻痺、星状膠細胞腫、脳卒中や脳外傷後の神経機能障害、多発性硬化症、痴呆、精神分裂症、てんかん、不安、嘔吐、偏頭痛、心的外傷後ストレス障害（PTSD）、神経細胞死、うつ病、睡眠障害、食欲不振などの摂食障害、尿失禁、低酸素症、脳梗塞、脳腫瘍、高酸素痙攣および高酸素毒症、炎症性もしくは神経障害性疼痛、髄膜炎などが挙げられる。また、本発明の蛋白質または部分ペプチドに対する抗体、または本発明のDNAまたはそのアンチセンスDNAは、上記疾患であるかどうかの診断や疾患動物モデルの作製に有用である。また、Ｓ−１００βとの結合活性を有し、さらに、Ｓ−１００βの情報伝達を制御している本発明の蛋白質については、本発明の蛋白質または部分ペプチドまたは本発明のDNAを、Ｓ−１００βが関与する上記の疾患の予防および/または治療に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】健常人およびパーキンソン病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質FLJ12587のmRNA発現量を示す（N:健常人、PARK:パーキンソン病）。
【図２】健常人、筋萎縮性側索硬化症およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質DKFZp761H0421のmRNA発現量を示す（N:健常人、ALS:筋萎縮性側索硬化症、Alz:アルツハイマー病）。
【図３】健常人およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質POGZ1のmRNA発現量を示す（N:健常人、Alz:アルツハイマー病）。
【図４】健常人およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質MGC15730のmRNA発現量を示す（N:健常人、Alz:アルツハイマー病）。
【図５】健常人、筋萎縮性側索硬化症およびアルツハイマー病組織におけるＳ−１００β結合蛋白質FKRPのmRNA発現量を示す（N:健常人、ALS:筋萎縮性側索硬化症、Alz:アルツハイマー病）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを用いることを特徴とする、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。
【請求項２】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量と被験化合物の非存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を比較することからなる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離されるＳ−１００βの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離されるＳ−１００βの量と被験化合物の非存在下で遊離されるＳ−１００βの量を比較することからなる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を用いることを特徴とする、Ｓ−１００βによる該細胞における活性を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。
【請求項５】
Ｓ−１００βの活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞に被験化合物の存在下あるいは非存在下でＳ−１００βを接触させ、Ｓ−１００βの活性を測定し、被験化合物の存在下と非存在下の活性を比較することからなる請求項４に記載の方法。
【請求項６】
神経変性疾患の予防および／または治療用化合物を探索するための請求項１または４に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項６に記載のスクリーニング方法。
【請求項８】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを含有する、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット。
【請求項９】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を含有する、Ｓ−１００βによる該細胞における活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット。
【請求項１０】
請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩。
【請求項１１】
請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩を含有してなる医薬組成物。
【請求項１２】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質、または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAを含有してなる医薬組成物。
【請求項１３】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAを含有してなる医薬組成物。
【請求項１４】
神経変性疾患の予防および／または治療剤である請求項１１乃至１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１７】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１８】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１９】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項１６乃至１８に記載の方法。
【請求項２０】
神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の使用。
【請求項２１】
神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの使用。
【請求項２２】
神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの使用。
【請求項２３】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項２０乃至２２に記載の使用。
【請求項２４】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断剤。
【請求項２５】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項２４に記載の剤。
【請求項２６】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断方法。
【請求項２７】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質のゲノムが、該蛋白質とＳ−１００βとの結合が変化されているように改変されている非ヒト動物疾患モデル。
【請求項２９】
該蛋白質とＳ−１００βとの結合が、
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の過剰発現：
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の変異蛋白質の発現：
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の欠失：あるいは
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の低下
の結果として変化されている請求項２５記載の非ヒト動物疾患モデル。
【請求項１】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを用いることを特徴とする、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。
【請求項２】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量と被験化合物の非存在下で遊離される配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドの量を比較することからなる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、被験化合物の存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、被験化合物の非存在下で配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βを接触させ、遊離されるＳ−１００βの量を測定し、被験化合物の存在下で遊離されるＳ−１００βの量と被験化合物の非存在下で遊離されるＳ−１００βの量を比較することからなる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を用いることを特徴とする、Ｓ−１００βによる該細胞における活性を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。
【請求項５】
Ｓ−１００βの活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞に被験化合物の存在下あるいは非存在下でＳ−１００βを接触させ、Ｓ−１００βの活性を測定し、被験化合物の存在下と非存在下の活性を比較することからなる請求項４に記載の方法。
【請求項６】
神経変性疾患の予防および／または治療用化合物を探索するための請求項１または４に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項６に記載のスクリーニング方法。
【請求項８】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを含有する、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドとＳ−１００βとの結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット。
【請求項９】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を含有する、Ｓ−１００βによる該細胞における活性発現を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット。
【請求項１０】
請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩。
【請求項１１】
請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩を含有してなる医薬組成物。
【請求項１２】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質、または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAを含有してなる医薬組成物。
【請求項１３】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAを含有してなる医薬組成物。
【請求項１４】
神経変性疾患の予防および／または治療剤である請求項１１乃至１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１７】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１８】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物における神経変性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１９】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項１６乃至１８に記載の方法。
【請求項２０】
神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、請求項１または４記載のスクリーニング方法または請求項８または９記載のスクリーニング用キットを用いて得られた化合物またはその塩の使用。
【請求項２１】
神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチド、または該蛋白質をコードするDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAの使用。
【請求項２２】
神経変性疾患の予防および／または治療剤を製造するための、配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体、または該蛋白質をコードするDNAまたは該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAに相補的または実質的に相補的なDNAを含有するアンチセンスDNAの使用。
【請求項２３】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項２０乃至２２に記載の使用。
【請求項２４】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断剤。
【請求項２５】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項２４に記載の剤。
【請求項２６】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質の部分ペプチドをコードするDNAもしくは該DNAに相補的または実質的に相補的なDNA、または該蛋白質または該蛋白質の部分ペプチドに対する抗体を用いることを特徴とする神経変性疾患の診断方法。
【請求項２７】
神経変性疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病または筋萎縮性側索硬化症である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質のゲノムが、該蛋白質とＳ−１００βとの結合が変化されているように改変されている非ヒト動物疾患モデル。
【請求項２９】
該蛋白質とＳ−１００βとの結合が、
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の過剰発現：
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の変異蛋白質の発現：
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の欠失：あるいは
配列番号１乃至３６および８４乃至１０２からなる群から選択される配列番号で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質の発現の低下
の結果として変化されている請求項２５記載の非ヒト動物疾患モデル。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００７−１４７２８２（Ｐ２００７−１４７２８２Ａ）
【公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２１７４４２（Ｐ２００４−２１７４４２）
【出願日】平成１６年７月２６日（２００４．７．２６）
【出願人】（０００１８５９８３）小野薬品工業株式会社 (180)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年７月２６日（２００４．７．２６）
【出願人】（０００１８５９８３）小野薬品工業株式会社 (180)
【Ｆターム（参考）】
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