ＴＣＲ複合体またはその構成要素（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβまたはＣＤ３ε）に特異的に結合する一本鎖融合タンパク質が、その組成物および使用方法とともに提供される。本発明は、上記一本鎖融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドおよび発現ベクター、固形臓器移植片の拒絶を減少させるためかまたは自己免疫疾患を処置するための方法、ならびにＴ細胞活性化を検出するための方法を提供する。上記固形臓器移植片の拒絶を減少させるため方法は、固形臓器移植レシピエントに、有効量の本発明中に提供される融合タンパク質を投与する工程を包含する。上記自己免疫疾患を処置するための方法は、その必要のある患者に、有効量の本発明中に提供される融合タンパク質を投与する工程を包含する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ末端からカルボキシ末端に向かって：
（ａ）ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメイン、
（ｂ）リンカーポリペプチド、
（ｃ）必要に応じて、
（ｉ）２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、および２３４から２３８位における１つ以上の置換または欠失；
（ｉｉ）２３４から２３８位における１つ以上の置換または欠失、および２５３、３１０、３１８、３２０、３２２または３３１位における少なくとも１つの置換；または
（ｉｉｉ）２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、２３４から２３８位における１つ以上の置換または欠失、および２５３、３１０、３１８、３２０、３２２または３３１位における少なくとも１つの置換
を含む免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチド、および
（ｄ）免疫グロブリンＣ_Ｈ３領域ポリペプチド
を含む一本鎖融合タンパク質であって、ここで、該融合タンパク質は、サイトカイン放出を誘導しないか、または最小限の検出可能なサイトカイン放出を誘導し、該免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域内のアミノ酸残基は、ＥＵナンバリングシステムによってナンバリングされる、一本鎖融合タンパク質。
【請求項２】
前記結合ドメインが、前記ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
前記ＴＣＲ複合体またはその構成要素が、ＴＣＲα、ＴＣＲβまたはＣＤ３εである、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記ｓｃＦｖが、配列番号２５８〜２６４に示されているアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
前記リンカーが、免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
前記免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドが、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ、少なくとも１つのシステインが変異したヒトＩｇＧ１ヒンジ、または野生型マウスＩＧＨＧ２ｃヒンジである、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
前記免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドが、（ａ）配列番号２１２〜２１８、３００および３７９〜４３４または（ｂ）配列番号１０のアミノ酸３〜１７に示されているアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、および２３４から２３８位における１つ以上の置換または欠失を含む免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
２３４〜２３８位における１つ以上の置換または欠失、および２５３、３１０、３１８、３２０、３２２または３３１位における少なくとも１つの置換を含む免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドが、２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、２３４から２３８位における１つ以上の置換または欠失、および２５３、３１０、３１８、３２０、３２２または３３１位における少なくとも１つの置換を含む、請求項８に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
２９７位における前記アミノ酸置換が、ＡｓｎからＡｌａへの置換である、請求項１〜８および１０のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
前記免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドが：
（ｉ）２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、および２３４、２３５、２３６または２３７位における１つのアミノ酸置換；
（ｉｉ）２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、および２３４〜２３７位の２つにおけるアミノ酸置換；
（ｉｉｉ）２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、および２３４〜２３７位の３つにおけるアミノ酸置換；
（ｉｖ）２９７位のアスパラギンにおけるアミノ酸置換、２３４、２３５および２３７位におけるアミノ酸置換、ならびに２３６位におけるアミノ酸欠失；
（ｖ）２３４〜２３７位の３つにおけるアミノ酸置換、ならびに３１８、３２０および３２２位におけるアミノ酸置換；または
（ｖｉ）２３４〜２３７位の３つにおけるアミノ酸置換、２３６位におけるアミノ酸欠失、ならびに３１８、３２０および３２２位におけるアミノ酸置換
を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
配列番号１０２〜１０４ ７５および３７５〜３７８のいずれか１つに示されているような免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
前記免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドが、ヒトＩｇＧ２ Ｃ_Ｈ２領域ポリペプチドであり、前記免疫グロブリンＣ_Ｈ３領域ポリペプチドが、ヒトＩｇＧ２ Ｃ_Ｈ３領域ポリペプチドである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
前記免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドが、ヒトＩｇＧ４ Ｃ_Ｈ２領域ポリペプチドであり、前記免疫グロブリンＣ_Ｈ３領域ポリペプチドが、ヒトＩｇＧ４ Ｃ_Ｈ３領域ポリペプチドである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
前記融合タンパク質が、免疫グロブリンＣ_Ｈ２領域ポリペプチドを含まない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
配列番号１１〜１６、７４、１０１および３０７〜３０９のいずれか１つに示されているような配列を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
配列番号８０〜９７、２６５〜２９９、３０４および３０６のいずれか１つ、最初の２２アミノ酸のリーダー配列を有しない配列番号２３４、２３６、２３８、２４０のいずれか１つ、または最初の２０アミノ酸のリーダー配列を有しない配列番号３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５および３２７のいずれか１つに示されているような配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
前記融合タンパク質がさらに、Ｔ細胞を活性化させないか、または最小限に活性化させる、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
前記融合タンパク質がさらに、カルシウム流動の誘導、Ｔ細胞レセプターシグナル伝達経路内の分子のリン酸化の誘導、同種抗原に対するＴ細胞応答の阻止、抗原に対するメモリーＴ細胞応答の阻止および前記ＴＣＲ複合体の下方調節から選択される活性のうちの少なくとも１つを有する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の融合タンパク質、および薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤を含む、組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の薬学的組成物を含む、単位用量形態。
【請求項２３】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
発現制御配列に作動可能に連結された請求項２３に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項２５】
固形臓器移植片の拒絶を減少させる方法であって、固形臓器移植レシピエントに、有効量の、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項２１に記載の組成物および請求項２２に記載の単位用量形態を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
自己免疫疾患を処置するための方法であって、その必要のある患者に、有効量の、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項２１に記載の組成物および請求項２２に記載の単位用量形態を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２７】
前記自己免疫疾患が、炎症性腸疾患である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記炎症性腸疾患が、クローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記自己免疫疾患が、真性糖尿病、喘息または関節炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメインを含むタンパク質によって誘導されたサイトカイン放出を検出するための方法であって：
（ａ）マイトジェンで刺激されたＴ細胞を準備する工程、
（ｂ）工程（ａ）の刺激されたＴ細胞を、ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメインを含む該タンパク質で処理する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）において処理された、該刺激されたＴ細胞からのサイトカインの放出を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項３１】
ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメインを含むタンパク質によって誘導されたＴ細胞活性化を検出するための方法であって：
（ａ）マイトジェンで刺激されたＴ細胞を準備する工程、
（ｂ）工程（ａ）の刺激されたＴ細胞を、ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメインを含む該タンパク質で処理する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）において処理された、該刺激されたＴ細胞の活性化を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項３２】
ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメインを含む前記タンパク質が、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の融合タンパク質である、請求項３０または請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ＴＣＲ複合体またはその構成要素に特異的に結合する結合ドメインを含む前記タンパク質が、抗体である、請求項３０または請求項３１に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２６Ｃ】

【図２６Ｄ】

【図２６Ｅ】

【図２６Ｆ】

【図２６Ｇ】

【図２６Ｈ】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０Ａ】

【図３０Ｂ】

【図３０Ｃ】

【図３１Ａ】

【図３１Ｂ】

【図３１Ｃ】

【図３２Ａ】

【図３２Ｂ】

【図３２Ｃ】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３３Ｃ】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３４Ｃ】

【図３５Ａ】

【図３５Ｂ】

【図３５Ｃ】

【図３６Ａ】

【図３６Ｂ】

【図３６Ｃ】

【図３７Ａ】

【図３７Ｂ】

【図３７Ｃ】

【図３８Ａ】

【図３８Ｂ】

【図３８Ｃ】

【図３９Ａ】

【図３９Ｂ】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【公表番号】特表２０１２−５０４９７０（Ｐ２０１２−５０４９７０Ａ）
【公表日】平成２４年３月１日（２０１２．３．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３１２３６（Ｐ２０１１−５３１２３６）
【出願日】平成２１年１０月９日（２００９．１０．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６０２８６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０４２９０４
【国際公開日】平成２２年４月１５日（２０１０．４．１５）
【出願人】（５１１０８４９０２）エマージェント　プロダクト　デベロップメント　シアトル，　エルエルシー (3)
【Ｆターム（参考）】