ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物の新規用途
【課題】血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の効率のよい製造方法の提供、ならびに虚血性疾患および血管透過性亢進を伴う疾患の治療法の提供。
【解決手段】細胞または細胞画分を、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる培地において培養することを含んでなる、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法、ならびにＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を被験者に投与することを含んでなる、虚血性疾患の治療法および血管透過性亢進を伴う疾患における血管透過性の改善法。
【解決手段】細胞または細胞画分を、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる培地において培養することを含んでなる、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法、ならびにＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を被験者に投与することを含んでなる、虚血性疾患の治療法および血管透過性亢進を伴う疾患における血管透過性の改善法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の背景】
発明の分野
本発明は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の体外分化・増幅法に関するものである。さらに、本発明は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた虚血性疾患または血管透過性の亢進を伴う疾患の治療法に関するものである。
【０００２】
背景技術
虚血性心疾患や慢性閉塞性動脈硬化症患者に対しては、生活習慣の改善勧告に加え、薬物療法や運動療法などが行われる。FontaneIII度またはIV度の重症患者に対しては、血管造影を行った後に経血管的な血管形成術、さらには外科的なバイパス手術が試みられる。これらの一連の方法は確立された有効な治療法であるが、一定の確率（３０〜４０％）で、拡張した血管やバイパスの再狭窄や閉塞が見られる。特に、Buerger病として知られる閉塞性血栓血管炎（ＴＡＯ）の患者のように、器質的な血栓の内径が小さい場合には、血管形成術やバイパス手術は再狭窄を起しやすいため、施行不可能である。このような患者に対しては、新たな治療法が必要となっている（最新医学、57巻、１号、2002）。
【０００３】
胎児の血管形成には、血管発生と血管新生の２つの段階があるとされている。血管発生は、血管内皮前駆細胞（ＥＰＣ；Endothelial Progenitor Cell）が目的部位で分化しながら血管を形成する過程とされる。分化した、または分化しつつある血管内皮細胞（ＥＣ；Endothelial Cell）は血管腔を形成し、お互いに融合されて血管叢を形成する。これに対し、血管新生は、既成の血管が刺激を受け、細胞の増殖・遊走を経て新たな血管を作り出す過程をいう。つまり、胎児血管形成は血管発生に始まり、後に血管新生がなされて完了することになる。一方で、成体においては、創傷治癒、癌などの病的血管形成、または子宮卵巣などでの生理的血管形成には、既存血管から新たな血管を作り出す血管新生の機序だけが存在すると考えられていた。ところが、最近になって血管内皮前駆細胞が成体血液中で発見され、胎児内だけでなく、成体においても同じ機構（血管新生と血管発生の機序）で血管形成がなされることが判明した（最新医学、57巻、１号、2002）。
【０００４】
ヒト血管内皮前駆細胞は、末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血、臍帯血または骨髄のＣＤ３４＋細胞、ＡＣ１３３＋細胞もしくはＦｌｋ−１＋細胞（ＶＥＧＦＲ２細胞とも呼ばれ、ヒト由来である場合にはＫＤＲ＋細胞とも呼ばれる）またはこれらの細胞を含む単核球画分から得られることが知られており（Blood 95: 952, 2000; J. Clin. Invest. 105: 1527, 2000; Pro. Nat. Acad. Sci. USA 97: 3422, 2000）、よって、これらの細胞または細胞画分は血管内皮前駆細胞の供給源として用いることができる。
【０００５】
循環器領域では、虚血部位の血管新生療法や動脈硬化部位の血管内皮再生療法として、増殖させた血管内皮前駆細胞を投与する方法（細胞医療）が考えられている。Kalkaらにより、成人末梢血を培養して血管内皮細胞を得た後、これを利用して免疫不全マウスの下肢虚血モデルにヒト血管内皮前駆細胞を投与すると、新生血管の増加がもたらされ、虚血筋肉組織内の血流改善が促進されることが確認された(Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000)。この療法は免疫不全ラットの心筋梗塞モデルにも応用され、組織学的に新生血管の増生および心筋壊死の現象を誘導し、心筋の機能改善にも役割を果たすことが判明している(Circulation 103: 634-637, 2001)。この血管内皮前駆細胞治療の最大の利点は、自分の細胞を末梢血液から採取して治療に応用できるところにある。よって、血管内皮前駆細胞治療は倫理面でも免疫学的にも問題がなく、血管内皮前駆細胞の前駆細胞としての増殖・分化を利用した強力かつ生理的な先進的治療として注目されている。しかし、成人末梢血由来の血管内皮前駆細胞には量的な制限があるため、この治療法を臨床的に実用化するためには効率の良い血管内皮前駆細胞の増幅法の確立が必要とされている（最新医学、57巻、１号、2002）。
【０００６】
血管内皮前駆細胞を投与する細胞医療以外の試みとして、心血管領域においては、血管新生に対するプラスの因子であるＶＥＧＦの遺伝子や蛋白質を利用した血管新生療法の基礎的・臨床的研究が急速に進んでいる。しかし、ＶＥＧＦによって形成された血管は、正常のものに比べて透過性が高く、穴の空きやすい脆弱な管であることが判明し、問題も指摘されている（最新医学、57巻、１号、2002；血管生物学、児玉龍彦ら、講談社、1997）。
【０００７】
前記血管透過性の亢進を伴う疾患としては、例えば、糖尿病の合併症である糖尿病性細小血管症（例えば、網膜症、腎症、神経障害など）および糖尿病性大血管症（例えば、虚血性心疾患、脳血管障害、閉塞性動脈硬化症など）が知られている。細小血管症は、細小血管壁を構成する血管内皮細胞および該細胞を支持する基底膜の弾力性および強度の喪失、血管透過性の亢進に起因するものとされている（最新医学、57巻、６号、2002）。その他、脳卒中および脳挫傷などの後に起こる血管性脳浮腫、脳虚血および低酸素血症などの後に起こる細胞毒性脳浮腫、全身浮腫、網膜浮腫、肺水腫、糖尿病などの疾患においても血管透過性の亢進が観察されており、いずれの疾患も重篤であることから、血管透過性の改善法およびそのための治療剤の開発が望まれている。
【０００８】
ＴＧＦβ（Transforming Growth Factor-β）は強力な細胞増殖抑制因子であり、多くの細胞の機能や増殖を抑制することが知られている。ＴＧＦβ１の細胞増殖阻害作用は、細胞周期のＧ１期からＳ期への移行が阻害されることによる。これは、細胞周期を制御する因子の一つであるＲｂ蛋白質がＴＧＦβの作用により低リン酸化状態に維持されるためである。Ｇ１期からＳ期への移行に関与するＲｂ蛋白質のリン酸化は、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）とこれに結合するサイクリンとによって調節されている。ＴＧＦβはＣｄｋ４の合成を抑制し、また、Ｃｄｋの下流で作用するとＣｄｋ２−サイクリンＥ複合体の活性を抑制する。さらに、ＴＧＦβはＣｄｋインヒビターであるp21cip/WAF1やp15INK4Bなどの発現を促進し、結果的にp27Kip1の活性を促進することが知られている。これらの一連の反応によって、ＴＧＦβによる細胞周期の停止が起こると考えられている（J. Lab. Clin. Med. 128: 355-360, 1996）。このような作用は、２種類のセリン/スレオニンキナーゼ型レセプター（Ｉ型とＩＩ型）を介したものであり、ＴＧＦβのＩ型レセプターとしてはＡＬＫ−５（activin receptor-like kinases-5）が同定されている。
【０００９】
ＴＧＦβと血管内皮細胞との関係では、ＡＬＫ−５のノックアウトマウスにおいて重篤な血管の発達異常が報告され、ＴＧＦβの血管形成への関与が明らかとなっている (非特許文献１：EMBO, 20: 1663-1673, 2001)。細胞を利用したin vitro実験においては、ＴＧＦβは、ＶＥＧＦのレセプターであるＦｌｋ−１の遺伝子発現に対して抑制的に働くことが報告されている (非特許文献２：J. Biol. Chem. 271; 11500-11505, 1996)。しかし、そのＴＧＦβによる血管形成メカニズムについては不明なところが多い。幾つかの研究グループにより、ＴＧＦβが、細胞外基質、基質分解酵素の産生、および接着因子の発現亢進を介して血管新生誘導に関与することが報告されているが(非特許文献３：Genes Dev. 10: 2462-2477, 1996；非特許文献４：Jpn. J. Cancer Res. 84: 589-593, 1993)、反対に、ＴＧＦβ阻害により血管新生が亢進するという報告もみられる (非特許文献５：Cell Growth & Differ. 1; 367-374, 1990)。さらに、血管内皮細胞及び平滑筋細胞はともに血管内皮前駆細胞から発生することが知られているが、それらの分化に対するＴＧＦβシグナルの関与は明らかとされていない。
【００１０】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物としては多種多様なものが知られており、例えば、次のＰＣＴ国際公開パンフレットに記載されたものを挙げることができる：ＷＯ９９／０５１０９、ＷＯ９９／５１６２３、ＷＯ００／４４７４３、ＷＯ００／５５１２９、ＷＯ０１／６２７５６、ＷＯ０１／７２７３７（特許文献１）、ＷＯ０１／７６６０４、ＷＯ０２／４０４６２、ＷＯ０２／４０４６７、ＷＯ０２／４０４６８、ＷＯ０２／４０４８６、ＷＯ０２／４０４７６、ＷＯ０２／５５０７７、ＷＯ０２／６６４６２、ＷＯ０２／０６２７５３、ＷＯ０２／０６２７７６、ＷＯ０２／０６２７８７、ＷＯ０２／０６２７９３、ＷＯ０２／０６２７９４、ＷＯ０２／０９４８３３、およびＷＯ０２／１０１３１。
【００１１】
【非特許文献１】
EMBO, 20: 1663-1673, 2001
【非特許文献２】
J. Biol. Chem. 271; 11500-11505, 1996
【非特許文献３】
Genes Dev. 10: 2462-2477, 1996
【非特許文献４】
Jpn. J. Cancer Res. 84: 589-593, 1993
【非特許文献５】
Cell Growth & Differ. 1; 367-374, 1990
【特許文献１】
国際公開第０１／７２７３７号パンフレット
【００１２】
【発明の概要】
本発明者らは、まず、ＴＧＦβ中和抗体を用いてＴＧＦβ阻害による血管内皮細胞の増幅を行なうことが出来るか否かを、マウス胚幹細胞（ＥＳ細胞）から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を用いた血管内皮細胞分化系（Yamashita et al., Nature 408: 92-96, 2000）にて検討した。しかし、ＴＧＦβ中和抗体にそのような活性を見出すことはできなかった。通常、レセプターが細胞に発現している場合、リガンドがなくとも微量のシグナルが恒常的に伝達されることが知られている。また、細胞が産生するＴＧＦβが該細胞の受容体に結合してシグナルが伝達される場合、細胞外から中和抗体などでそのシグナルを阻害するのは困難であることも知られている。そこで、細胞内に伝達されるＴＧＦβシグナルをキナーゼ阻害活性を有する化合物を用いて抑制した場合の効果について検討したところ、以下のような現象が見られた。
【００１３】
（１）ＴＧＦβ阻害化合物は、平滑筋細胞への分化に比較して、血管内皮細胞への分化を促進した。
（２）ＴＧＦβ阻害化合物は血管内皮細胞の細胞増殖に対し促進的に作用した。
（３）ＴＧＦβ阻害化合物は接着因子であるClaudin-5の発現を亢進させ、細胞間接着性を亢進させた。
（４）ＴＧＦβ阻害化合物は、ＥＳ細胞由来の血管内皮前駆細胞だけでなく、ヒト末梢血単核球に対しても作用し、血管内皮前駆細胞の増殖および分化を促進した。
（５）ＴＧＦβ阻害化合物は血管新生を促進した。
【００１４】
これらの現象は、分子構造において骨格の異なるＴＧＦβ阻害低分子化合物について観察されており、従って、ＴＧＦβ阻害化合物に共通な現象であることも示された。
【００１５】
本発明者らは、上記の現象に基づき、血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の体外分化／増幅法に関して、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の体外分化／増幅に有効であるとの知見を得た。さらに、本発明者らは、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、虚血性疾患および血管透過性の亢進を伴う疾患の治療剤として有効であるとの知見を得た。本発明はこれら知見に基づくものである。
【００１６】
従って、本発明の第一の目的は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の効率の良い製造方法を提供することにある。そして、本発明による血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法は、細胞または細胞画分を、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる培地において培養することを含んでなるものである。
【００１７】
本発明の第二の目的は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた虚血性疾患の治療のための医薬組成物および血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物を提供することにある。そして、本発明による虚血性疾患治療用の医薬組成物は、本発明による製造方法により製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞、あるいは、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなるものである。さらに、本発明による、血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物は、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなるものである。
【００１８】
本発明の第三の目的は、本発明による方法により製造された血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞を用いたティッシュエンジニアリング技術を提供することにある。
【００１９】
本発明により、血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の製造効率が改善され、また、虚血性疾患および血管透過性の亢進を伴う疾患の新たな治療法およびそのための医薬が提供される。
【００２０】
【発明の具体的説明】
本発明による血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法においては、細胞または細胞画分が、ＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる培地において培養される。
【００２１】
本明細書において、「ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物」または「ＴＧＦβ阻害化合物」とは、ＴＧＦβ阻害活性、すなわち、サイトカインの一種であるＴＧＦβの、細胞内または組織内における活性を阻害する作用を有する化合物をいう。ＴＧＦβ阻害活性は、当業者に公知の方法、例えば、J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998)に記載の方法、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットに記載の方法などにより測定することができる。
【００２２】
前記細胞または細胞画分は、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞に分化しうるものであればよく、特に制限されないが、好ましくはＦｌｋ−１＋細胞、単核球画分、ＣＤ３４＋細胞、またはＡＣ１３３＋細胞とされる。前記Ｆｌｋ−１＋細胞は、胚幹細胞から得られたものであることが好ましい。前記ＣＤ３４＋細胞およびＡＣ１３３＋細胞は、単核球画分から得られたものであることが好ましい。前記単核球画分は、末梢血または臍帯血から得られたものであることが好ましく、さらに、該末梢血は、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものであることが好ましい。
【００２３】
前記培地は、細胞の分化を可能とするものであればよく、特に制限されない。このような培地としては多種多様なものが当技術分野において知られており、また、多くのものが市販されている。よって、当業者は、培養に用いる細胞または細胞画分の種類および目的とする分化細胞の種類に応じて、適切な培地を選択または調製することができる。前記培地は、好ましくは血管内皮前駆細胞分化用の培地または血管内皮細胞分化用の培地とされる。
【００２４】
前記培地へのＴＧＦβ阻害化合物の添加量は特に制限されるものではないが、好ましくは０．１〜５０μＭ、より好ましくは０．５〜２０μＭとされる。
【００２５】
本発明の好ましい実施態様によれば、前記培地は、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の増殖を促進する少なくとも一種のサイトカインを含んでなるものとされ、このようなサイトカインは、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択することができる。さらに、前記培地は、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインを含んでなるものとされ、さらに好ましくは、これらに加えてｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦを含んでなるものとされる。
【００２６】
他の培養条件は、一般に細胞の増殖を目的として用いられる条件であればよく、特に制限されない。すなわち、培地への細胞または細胞画分の添加量、培養温度、ＣＯ２濃度、培養期間などの条件は、当業者が適宜設定することができる。培養温度は、好ましくは約３７℃とされる。また、必要に応じて、ＣＯ２濃度を調節してもよく、好ましくは約５％とすることができる。
【００２７】
上記の方法により得られた血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞は、虚血性疾患を治療する目的で、背景技術の項で説明したような細胞医療において利用することができる。
【００２８】
従って、本発明によれば、治療上有効な量の、本発明による方法によって製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞を被験者に投与することを含んでなる、虚血性疾患の治療方法が提供される。被験者は、好ましくは哺乳動物とされ、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とされる。
【００２９】
前記虚血性疾患としては、例えば、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害（例えば、脳卒中、脳梗塞など）、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患（例えば、閉塞性動脈硬化症など）、虚血性心疾患（例えば、虚血性心筋症、心筋梗塞症、虚血性心不全など）などが挙げられる。
【００３０】
本発明による方法によって製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞は、細胞医療の分野において一般に用いられる投与経路および治療上有効量で投与することができる。よって、投与経路は特に制限されるものではないが、好ましくは非経口投与、より好ましくは皮下投与、静脈内投与、冠血管カテーテル投与、筋肉内投与、または心筋内投与とされる。治療上有効量もまた特に制限されるものではなく、被験者の状態、例えば、患者の年齢、体重、性別、疾患の相違、症状の程度などを考慮して適宜決定される。
【００３１】
また、本発明によれば、虚血性疾患治療用医薬の製造のための、本発明による方法により製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞の使用が提供される。
【００３２】
さらに、本発明によれば、本発明による方法により製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物が提供される。この医薬組成物は、上述の投与経路および投与量に応じて、または細胞医療における周知技術に従い、当業者によって適宜製造されうる。
【００３３】
ＴＧＦβ阻害化合物は、ex vivoだけでなく、in vivoにおいても血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞の分化および増幅を促進する。よって、ＴＧＦβ阻害化合物を被験者に直接投与することによっても、虚血性疾患を治療することが可能である。また、ＴＧＦβ阻害化合物の直接投与により、血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善することも可能である。
【００３４】
従って、本発明によれば、治療上有効な量のＴＧＦβ阻害化合物を被験者に投与することを含んでなる、虚血性疾患の治療方法または血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善する方法が提供される。被験者は、好ましくは哺乳動物とされ、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とされる。
【００３５】
また、本発明によれば、虚血性疾患治療用医薬または血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬の製造のための、ＴＧＦβ阻害化合物の使用が提供される。
【００３６】
さらに、本発明によれば、ＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物または血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物が提供される。
【００３７】
前記虚血性疾患としては、例えば、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害（例えば、脳卒中、脳梗塞など）、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患（例えば、閉塞性動脈硬化症など）、虚血性心疾患（例えば、虚血性心筋症、心筋梗塞症、虚血性心不全など）などが挙げられる。
【００３８】
前記血管透過性の亢進を伴う疾患としては、例えば、糖尿病の合併症である糖尿病性細小血管症（例えば、網膜症、腎症、神経障害など）および糖尿病性大血管症（例えば、虚血性心疾患、脳血管障害、閉塞性動脈硬化症など）、血管性脳浮腫（脳卒中および脳挫傷などの後に起こることが知られている）、細胞毒性脳浮腫（脳虚血および低酸素血症などの後に起こることが知られている）、全身浮腫、網膜浮腫、肺水腫、糖尿病などが挙げられる。
【００３９】
ＴＧＦβ阻害化合物は、経口および非経口（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与、経皮投与）のいずれかの投与経路で投与することができる。従って、ＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる医薬組成物は、投与経路に応じた適当な剤型に製剤化される。具体的には、経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散在、顆粒剤、シロップ剤などが挙げられ、非経口剤としては、注射剤、座剤、テープ剤、軟膏剤などが挙げられる。
【００４０】
これらの各種製剤は、通常用いられている賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、希釈剤などを用いて常法により製造することができる。
【００４１】
賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ソルビット、結晶セルロースなどが、崩壊剤としては、例えば、デンプン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン末、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、デキストリンなどが、結合剤としては例えばジメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが、滑沢剤としては、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、硬化植物油などがそれぞれ挙げられる。
【００４２】
また、上記注射剤は、必要により緩衝剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、等張化剤、保存剤などを添加して製造することができる。
【００４３】
本発明によるＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる医薬組成物において、ＴＧＦβ阻害化合物の含有量は、その剤型に応じて異なるが、通常全組成物中０．５〜５０重量％、好ましくは１〜２０重量％である。
【００４４】
ＴＧＦβ阻害化合物の投与量は、患者の年齢、体重、性別、疾患の相違、症状の程度などを考慮して、個々の場合に応じて適宜決定されるが、例えば０．１〜１００mg/kg、好ましくは０．１〜３０mg/kgの範囲であり、これを１日１回または数回に分けて投与する。
【００４５】
本発明の好ましい実施態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物の虚血性疾患治療用途において、ＴＧＦβ阻害化合物は、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の増殖を促進する少なくとも一種のサイトカインとともに併用され、このようなサイトカインは、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択することができる。さらに、ＴＧＦβ阻害化合物と併用されるサイトカインは、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインとされる。さらに好ましくは、ＴＧＦβ阻害化合物と併用されるサイトカインは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカイン、ならびにｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦとされる。従って、ＴＧＦβ阻害化合物の虚血性疾患治療用途において、ＴＧＦβ阻害化合物はこのようなサイトカインとともに投与され、医薬組成物中に含まれ、または医薬の製造において使用される。
【００４６】
本発明による血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法により製造されたこれらの細胞は、ティッシュエンジニアリングにおいて使用することができる。例えば、これらの血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞を用いることにより、血管を製造してこれをバイパス手術に使用することができ、あるいは、血管または血管を含む組織を製造してこれを治療のための移植手術に使用することができる。
【００４７】
式（Ｉ）のＴＧＦβ阻害化合物
本発明の好ましい態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物は、本発明者らによりＴＧＦβ阻害活性を有することが確認されている下記の式（Ｉ）で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物とされる：
【化２２】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化２３】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化２４】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化２５】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化２６】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化２７】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物において、基または基の一部としての「アルキル」、「アルコキシ」、および「アルケニル」という語は、基が直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルコキシ基、およびアルケニル基を意味する。
【００４９】
また、式（Ｉ）の化合物において、基または基の一部としての「アルキルカルボニル」、「アルコキシカルボニル」、および「アルケニルカルボニルオキシ」という語は、基が直鎖または分枝鎖のアルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、およびアルケニルカルボニルオキシ基を意味する。
【００５０】
従って、式（Ｉ）の化合物において、例えば、基または基の一部としての「Ｃ１−１０アルキル」および「Ｃ１−１０アルコキシ」という場合は、基が直鎖または分枝鎖の炭素数１〜１０のアルキル基およびアルコキシ基を意味する。
【００５１】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−１０アルキル」は、好ましくはＣ１−８アルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル、さらに好ましくはＣ１−４アルキルである。「Ｃ１−８アルキル」は、好ましくはＣ１−６アルキル、より好ましくはＣ１−４アルキルである。「Ｃ１−６アルキル」は、好ましくはＣ１−４アルキル、より好ましくはＣ１−２アルキルである。「Ｃ１−４アルキル」は、好ましくはＣ１−２アルキルである。
【００５２】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−１０アルコキシ」は、好ましくはＣ１−８アルコキシ、より好ましくはＣ１−６アルコキシ、さらに好ましくはＣ１−４アルコキシである。「Ｃ１−８アルコキシ」は、好ましくはＣ１−６アルコキシ、より好ましくはＣ１−４アルコキシである。「Ｃ１−４アルコキシ」は、好ましくはＣ１−２アルコキシである。
【００５３】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ２−８アルケニル」は、好ましくはＣ２−６アルケニル、より好ましくはＣ２−４アルケニルである。「Ｃ２−６アルケニル」は、好ましくはＣ２−４アルケニルである。
【００５４】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−４アルキルカルボニル」は、好ましくはＣ１−２アルキルカルボニルである。
【００５５】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−６アルコキシカルボニル」は、好ましくはＣ１−４アルコキシカルボニル、より好ましくはＣ１−２アルコキシカルボニルである。
【００５６】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ」は、好ましくはＣ２−４アルケニルカルボニルオキシである。
【００５７】
上記Ｃ１−１０アルキルの例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル等が挙げられる。
【００５８】
上記Ｃ１−１０アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００５９】
上記Ｃ２−６アルケニルの例としては、アリル基、ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基が挙げられる。
【００６０】
上記Ｃ１−４アルキルカルボニルの例としては、アルデヒド基、メチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニル、ｉ−ブチルカルボニル、ｓ−ブチルカルボニルが挙げられる。
【００６１】
上記Ｃ１−６アルコキシカルボニルの例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、ｉ−プロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、ｉ−ブトキシカルボニル、ｓ−ブトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
【００６２】
上記Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシの例としては、アリルカルボニルオキシ、ブテニルカルボニルオキシ、ペンテニルカルボニルオキシ、ヘキセニルカルボニルオキシが挙げられる。
【００６３】
式（Ｉ）の化合物において「により置換されていてもよいアルキル」とは、アルキル上の１またはそれ以上の水素原子が１またはそれ以上の置換基（同一または異なっていてもよい）により置換されたアルキルおよび非置換アルキルを意味する。置換基の最大数はアルキル上の置換可能な水素原子の数に依存して決定できることは当業者に明らかであろう。これらはアルキル基以外であって置換可能な基を有する基、例えば、アルコキシ、アルケニル、フェニル、フェニルカルボニル、ナフチル等についても同様である。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。
【００６５】
式（Ｉ）の化合物において、「不飽和の炭素環」および「不飽和の複素環」とは、二重結合等の不飽和結合を１以上有する炭素環および複素環を意味する。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物において「飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基」は、好ましくは飽和または不飽和の６員炭素環であることができる。飽和または不飽和の５または６員炭素環の例としては、フェニル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物において「飽和または不飽和の５または６員の複素環式基」は、飽和または不飽和の５または６員の単環性複素環式基を意味する。すなわち、飽和または不飽和の５または６員複素環は、１〜３個、好ましくは１または２個の異種原子を含み、残りの環員原子が炭素原子である複素環であることができる。複素環式基は、酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される異種原子を１個以上含む。複素環基の例としては、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、ピリダジル、ピリミジル、モルホリニル、モルホリノ、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾイル、イソチアゾリルおよびピラジルが挙げられる。
【００６８】
また、この複素環式基は、必要に応じて、Ｃ１−６アルキル基、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００６９】
飽和または不飽和の３〜６員炭素環式基は、好ましくは、飽和または不飽和の３〜５員炭素環式基、より好ましくは飽和または不飽和の３員炭素環式基であることができる。
【００７０】
飽和または不飽和の３〜６員複素環式基は、酸素原子、窒素原子、および硫黄原子から選択される異種原子（好ましくは酸素原子）を１個以上含む。好ましくは、飽和または不飽和の３〜６員複素環式基は、異種原子を１または２個含み、残りの環員原子が炭素原子である複素環式基であることができる。飽和または不飽和の３〜６員複素環は、好ましくは、飽和または不飽和の３〜５員複素環式基、より好ましくは飽和または不飽和の３員複素環式基であることができる。
【００７１】
飽和または不飽和の炭素環式基および複素環式基は、他の飽和または不飽和の炭素環式基もしくは複素環式基と縮合して二環式基、好ましくは飽和または不飽和の９〜１２員の二環性炭素環式基または複素環式基、を形成していてもよい。このような二環式基としては、ナフチル、キノリル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、１，４−ベンゾオキサニル、インダニル、インドリル、および１，２，３，４−テトラヒドロナフチルが挙げられる。
【００７２】
本発明の好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、Ｃ１−６アルキル基、および下式(i)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
【化２８】
（これらの式において、
式(i)におけるアルキル鎖の部分は、水酸基、または−ＯＲｅ基（ここでＲｅはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよく（好ましくはこのアルキル鎖の部分は、水酸基により置換されているか、または置換されておらず）、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよく、
Ｈａｌはハロゲン原子を表し、
ｎは１〜４の整数を表す）。
【００７３】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、式(i)〜(iv)からなる群より選択されるいずれかの基を表す場合には、Ａは、前記式(a1)〜(a3)のいずれかの基を表し、より好ましくは式(a1)基を表す。
【００７４】
本発明のより好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、Ｃ１−６アルキル基、および下式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
【００７５】
【化２９】
（これらの式において、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよく、
ｎ１は２〜４の整数を表す）。
【００７６】
Ｒ１およびＲ２の少なくともいずれか一方が、前記(iv)である場合には、好ましくは、Ｒ２４とＲ２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成し（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、例えば、モルホリンを形成することができる。
【００７７】
Ｒ１およびＲ２の少なくともいずれか一方が、Ｃ１−６アルキル基である場合には、Ｃ１−６アルキルは好ましくはＣ１−４アルキル、より好ましくはメチルまたはエチル、最も好ましくはメチルである。
【００７８】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和（好ましくは不飽和）の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい。このように、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とが炭素環式基または複素環式基を形成する場合には、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６のいずれか１つの組み合わせの位置において環式基を形成しても良いが、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６のいずれか２以上の位置において、それぞれ環式基を形成してもよい。この場合、式(a1)の炭素環と共に、三環式基を形成することができる。
【００７９】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、該式(a1)におけるＲ３〜Ｒ６の少なくとも１つは水素原子以外の基である。
【００８０】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２がＣ１−６アルキル基である場合に、該式(a1)におけるＲ３〜Ｒ６の少なくとも１つは水素原子以外の基である。
【００８１】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ７は、水素原子、飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または式(a1-i)または(a1-ii)の基、のいずれかの基を表す。
ここで、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基は、好ましくは、Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニル基、飽和の５または６員の炭素環式基、または、不飽和の５または６員の複素環式基を表す。
【００８２】
好ましくは、該式(a1)中のＲ７は、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、式(a1-i)の基、または式(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８３】
別の好ましい実施態様によれば、式(a1)におけるＲ７は、フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、または式(a1-i)または(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８４】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２がＣ１−６アルキル基である場合に、該式(a1)におけるＲ７は、式(a1-i)または(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８５】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ８は、好ましくは、非置換Ｃ１−８アルキル基、フェニル基により置換されたＣ１−４アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表す。
【００８６】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ９およびＲ１０は、好ましくは、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、飽和の５または６員炭素環式基、ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基、またはナフチル基を表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００８７】
Ａが式(a2)である場合において、Ｒ１１およびＲ１２は、好ましくは、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、飽和の５または６員炭素環式基、またはフェニル基を表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよい（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００８８】
より好ましくは、Ｒ１１およびＲ１２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成し（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。Ｒ１１およびＲ１２は、例えば、飽和の６員複素環式基を形成することができる。
【００８９】
Ａが式(a3)である場合において、好ましくは、Ｒ１３およびＲ１４が水素原子であって、Ｒ１５およびＲ１６が、同一または異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−３アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表す。
より好ましくは、Ｒ１３およびＲ１４が水素原子であって、Ｒ１５が、Ｃ１−４アルキル基を表し、Ｒ１６が、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、またはＣ１−３アルキルカルボニル基を表す。
【００９０】
ここでＲ１６がＣ１−３アルキルカルボニル基を表す場合には、Ｒ１６は−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ３６で表すことができる。このとき、Ｒ３６はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、またはｉ−プロピル基であることができ、好ましくはＲ３４はメチル基である。
【００９１】
Ａが式(a4)である場合において、好ましくは、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、およびＲ２１は、前記した通りであって、かつ、Ｒ１９が、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表すか、または
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）。
【００９２】
本発明のより好ましい実施態様によれば、上記の場合に、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、およびＲ２１は、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−６アルキル基により置換されていてもよいフェニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基（ここでフェニル基は水酸基、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基によりさらに置換されていてもよい）、
ニトロ基、または、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい。
【００９３】
Ｒ１７またはＲ２１が置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基である場合には、好ましくは、これらは−Ｃ＝Ｃ(Ｒ２６)(Ｒ２７)で表すことができる。ここで、Ｒ２６およびＲ２７は、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、Ｃ１−４アルコキシカルボニル基、またはフェニル基を表し、より好ましくは、Ｒ２６およびＲ２７は、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−２アルコキシカルボニル基、またはフェニル基を表す。
【００９４】
Ｒ１７またはＲ２１がフェニル基により置換されていてもよいアミノ基である場合には、好ましくは、これらは下記式で表すことができる
【化３０】
（上記式中、
Ｒ２８〜Ｒ３２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、またはＣ１−４アルキル基を表し、より好ましくは、Ｒ２８〜Ｒ３２は全て水素原子を表す）。
【００９５】
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、炭素環式基または複素環式基を形成することができる場合には、式(a4)の炭素環と共に、二環式基、例えばナフチル、インドール、ベンズイミダゾール、キノリン等の基を形成することができる。
例えば、該二環式基がインドール環の形態である場合、式(a4)は下記式で表すことができる。
【化３１】
（上記式中、
Ｒ３３〜Ｒ３５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、Ｃ１−２アルキルカルボニル、Ｃ１−２アルコキシカルボニル基またはＣ１−４アルキル基を表し、より好ましくは、Ｒ３５は水素原子を表す）。
【００９６】
ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）。
【００９７】
本発明の好ましい実施態様によれば、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、より好ましくは−Ｏ−、または−Ｃ(＝Ｏ)−を表す。
【００９８】
本発明の好ましい実施態様によれば、
ＸがＣＨを表し、かつＺが−Ｏ−を表す場合には、Ａは式(a1)〜(a4)の基から選択され、
ＸがＮを表し、かつＺが−Ｏ−を表す場合には、Ａは式(a1)であり、または
ＸがＣＨを表し、かつＺが−Ｃ(＝Ｏ)−を表す場合には、Ａは式(a1)である。
【００９９】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（１００）の化合物であることができる。
【化３２】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１０１およびＲ１０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し：
Ｒ１０３〜Ｒ１０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ１０３とＲ１０４、Ｒ１０４とＲ１０５、およびＲ１０５とＲ１０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１０８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表す］。
【０１００】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（１００）において、Ｒ１０３〜Ｒ１０６の少なくとも一つは、水素原子以外の基であり、かつ、Ｒ１０８は、非置換Ｃ１−８アルキル基、フェニル基により置換されたＣ１−４アルキル基、Ｃ２−８アルケニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表す。
【０１０１】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（２００）の化合物であることができる。
【化３３】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ２０１およびＲ２０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ２０３〜Ｒ２０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ２０３とＲ２０４、Ｒ２０４とＲ２０５、およびＲ２０５とＲ２０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ２０９およびＲ２１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ２０９とＲ２１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい］。
【０１０２】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（２００）において、
Ｒ２０３〜Ｒ２０６の少なくとも一つが水素原子以外の基であり、かつ
Ｒ２０９とＲ２１０とが、その少なくとも一方が水素原子であって、他方が水素原子、Ｃ１−４アルキル基、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、またはナフチルを表すか、または
Ｒ２０９とＲ２１０とが、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成する（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよく、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）］。
【０１０３】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（３００）の化合物であることができる。
【化３４】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ３０１およびＲ３０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ３０３〜Ｒ３０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３０３とＲ３０４、Ｒ３０４とＲ３０５、およびＲ３０５とＲ３０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ３１１およびＲ３１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ３１１とＲ３１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい］。
【０１０４】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（３００）において、
Ｒ３０３〜Ｒ３０６の少なくとも一つが水素原子以外の基であり、かつ
Ｒ３１１とＲ３１２とが、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成する（この複素環式基は、１以上の異種原子をさらに含んでいてもよく、かつ、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）。
【０１０５】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（４００）の化合物であることができる。
【化３５】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ４０１およびＲ４０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ４１３およびＲ４１４は、水素原子を表し、
Ｒ４１５は、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表し、
Ｒ４１６は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表す］。
【０１０６】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（４００）において、
Ｒ４１５は、Ｃ１−６アルキル基、さらに好ましくはメチル基、エチル基、特に好ましくはメチル基を表し、
Ｒ４１６は、水素原子、ハロゲン原子、またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す。
【０１０７】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（５００）の化合物であることができる。
【化３６】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ５０１およびＲ５０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ５１７、Ｒ５１８、Ｒ５２０および、Ｒ５２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ５１７とＲ５１８、または、Ｒ５２０とＲ５２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ５１９は、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表すか、または
Ｒ５１８とＲ５１９、または、Ｒ５１９とＲ５２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、Ｒ５１７基が結合している６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【０１０８】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（５００）において、
Ｒ５１９は、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表す。
【０１０９】
式（Ｉ）の化合物は、塩の形態とすることができ、これを治療および医薬用途に用いる場合には薬学上許容される塩とすることができる。好ましい例としては、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩のようなアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルキルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩、フマル酸、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、アスコルビン酸塩のような有機酸塩、およびグリシン塩、フェニルアラニン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩などが挙げられる。
【０１１０】
式（Ｉ）の化合物は、溶媒和物とすることができる。このような溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、メタノール和物、エタノール和物）、およびエーテル和物（例えば、ジエチルエーテル和物）が挙げられる。
【０１１１】
式（Ｉ）のＴＧＦβ阻害化合物の製造
式（Ｉ）の化合物は、例えば、スキーム１からスキーム１３に従って製造できる。式（Ｉ）の化合物の合成に必要な出発物質は市販されているか、または常法によって容易に製造できる。なお、スキーム中のＲ１〜Ｒ３６は上記において定義された内容と同義である。
【０１１２】
下記スキーム中において、中間体であるキノロン誘導体は、例えば、ＷＯ９７／１７３２９号等に従って合成することができる。
また、４−クロロキノリン誘導体は、例えば、Org. Synth. Col. Vol.3, 272 (1955), Acta Chim. Hung., 112, 241 (1983) またはＷＯ９８／４７８７３号に記載されているような慣用方法に従って合成することができる。
４−クロロキナゾリン誘導体は、J. Am. Chem. Soc., 68, 1299 (1946), J. Am. Chem. Soc., 68, 1305 (1946) や小竹監修、大有機化学、１７巻、１５０頁、朝倉書店（１９６７年発行）に記載されているような慣用方法に従って合成することができる。
【０１１３】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１およびスキーム２に従って製造することができる。
スキーム１：
【化３７】
【０１１４】
スキーム２：
【化３８】
【０１１５】
目的とする４−フェノキシキノリン誘導体、４−アニリノキノリン誘導体、または相当するキナゾリン誘導体は、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体または相当するアニリン誘導体に対して、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体を作用させることによって合成することができる。なお上記スキーム１において塩素化剤としては塩化ホスホリルが挙げられる。
【０１１６】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物（特にオルトケトン類の化合物）は、例えば、下記スキーム３に従って製造することができる。
スキーム３：
【化３９】
【０１１７】
このスキームにおいては、下記のような３通りの経路により、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる：
（ｉ） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体または相当するアニリン誘導体を作用させることにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる（上記工程(1)）；
（ii） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトブロモフェノール誘導体または相当するオルトブロモアニリン誘導体と反応させ（上記工程(2)）、次いで、金属塩基（例えばｎ−ブチルリチウム）を用いてブロム部位を極性転換し、発生したアニオンと酸クロリドを反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる；
（iii） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体と反応させる（上記工程(4)）。次いで、そこにアルキル化剤（例えばメチルマグネシウムブロミド）を反応させて（上記工程(5)）、生成したアルコールを酸化する（上記工程(6)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる。
【０１１８】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物（特にアミド化合物）は、例えば、下記スキーム４に従って製造することができる。
スキーム４：
【化４０】
【０１１９】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシ安息香酸エステル誘導体または相当するオルトアミノ安息香酸エステル誘導体を作用させ、エステル型の式（Ｉ）の化合物を製造することができる（上記工程(1)）。次いで、該エステル型の化合物をアルカリを用いて加水分解し（上記工程(2)）、縮合剤（例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）を用いてアミンと反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２０】
式（Ｉ）において、７位に所望の置換基を有する化合物は、例えば、下記スキーム５に従って製造することができる。
スキーム５：
【化４１】
【０１２１】
用意した７−ベンジルオキシ−４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体あるいは相当するアニリン誘導体を作用させる（上記工程(1)）。次いで、この得られた中間体３に、酸を用いてベンジル基を脱保護して（上記工程(2)）、得られた中間体４を塩基存在下アルキル化剤（例えば１ブロモ−２−クロロエタン）と反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２２】
式（Ｉ）において Ｚが−Ｃ(＝Ｏ)−である化合物は、例えば、下記スキーム６に従って製造することができる。
スキーム６：
【化４２】
【０１２３】
用意した４−キノロン誘導体または相当するキナゾロン誘導体に対して、臭素化剤（例えば臭化ホスホリル）を作用させる（上記工程(1)）。次いで、金属塩基（例えばｎ−ブチルリチウム）を用いてブロム部位を極性転換して、発生したアニオンと酸クロリドを反応させる（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる。
【０１２４】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつそのＲ２１が置換されていてもよいアルケニル基である化合物は、例えば、下記スキーム７に従って製造することができる。
スキーム７：
【化４３】
【０１２５】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(1)）、次いで、リンイリドと反応させる（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２６】
式（Ｉ）において、Ａが式(a2）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム８に従って製造することができる。
スキーム８：
【化４４】
【０１２７】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体を作用させて（上記工程(1)）、次いで、アミン（Ｒ１１Ｒ１２ＮＨ）と反応させ、イミン形成後に還元する（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２８】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつその置換基としてフェニル基により置換されたアミノ基を有する化合物は、例えば、下記スキーム９に従って製造することができる。
スキーム９：
【化４５】
【０１２９】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトニトロフェノール誘導体または相当するオルトニトロアニリン誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いで、ニトロ基を還元し（上記工程(ii)）、フェニルボロン酸誘導体と反応させる（上記工程(iii)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１３０】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつその置換基として窒素を含む５員環複素環式基を有する化合物は、例えば、下記スキーム１０に従って製造することができる。
スキーム１０：
【化４６】
【０１３１】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、５−ヒドロキシインドール誘導体または相当する５−アミノインドール誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いでそのアミノ基を、アルキル化剤（例えばヨウ化メチル）を用いてアルキル化するか、またはアシル化剤（例えば塩化アセチル）を用いてアシル化することにより（上記工程(ii)）、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１３２】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１１によっても製造することができる。
スキーム１１：
【化４７】
【０１３３】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシ−６−ニトロベンズアルデヒド誘導体または相当する５−アミノ−２−ニトロベンズアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いでそのホルミル基を還元する（上記工程(ii)）。次に、得られた化合物のニトロ基を還元して（上記工程(iii)）、そこにカルボニル化剤（例えばトリホスゲン）を作用させる（上記工程(iv)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３４】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１２によっても製造することができる。
スキーム１２：
【化４８】
【０１３５】
アニソール誘導体を、ルイス酸存在下酸クロリドと作用させ（上記工程(i)）、そのメトキシ基を脱保護する（上記工程(ii)）。次いで、これを、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において作用させる（上記工程(iii)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３６】
式（Ｉ）において、Ａがピリジン環、すなわち式(a3）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１３に従って製造することができる。
スキーム１３：
【化４９】
【０１３７】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシピリジン誘導体または相当する３−アミノピリジン誘導体を作用させる（上記工程(i)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３８】
あるいは、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシ−２−ピリジンカルボアルデヒド誘導体または相当する３−アミノ−２−ピリジンカルボアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(ii)）、次いでアルキル化剤（例えばメチルマグネシウムブロミド）を反応させる（上記工程(iii)）。次に、得られたアルコール性化合物を酸化する（上記工程(iv)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３９】
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物
本発明の他の好ましい態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物は、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットにおいてＴＧＦβ阻害活性を有することが確認されている下記の式（ＩＩ）で示される化合物またはその塩とされる：
【０１４０】
【化５０】
【０１４１】
｛上記式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【０１４２】
本発明の好ましい実施態様によれば、上記式（ＩＩ）の化合物としては、Ｒ１が、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１が５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を２個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２がＨ、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−ＰｈまたはＮＨ−Ｃ１−６アルキルであり；かつ
Ｒ３がＣＯ２Ｈ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキルチオ、ＳＯ２−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＯＮＨ２、ＣＯＮＨＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、またはＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルである）である化合物は除かれる。
【０１４３】
式（ＩＩ）の点線で示されている二重結合は、互変体環型の化合物を表す。Ｘ１またはＸ２のいずれかが炭素であるとき、この二重結合は炭素またはヘテロ原子のいずれかに対するものであり得ると理解される。Ｘ１およびＸ２の両者が炭素であるとき、この二重結合はＸ１またはＸ２のいずれかに対するものであり得る。Ｘ１およびＸ２の両者がヘテロ原子であるとき、この二重結合は置換されていないヘテロ原子に対するものである。
【０１４４】
好ましくは、Ｒ１は置換されていてもよいナフチルまたはフェニルである。より好ましくは、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオおよびフェニルからなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を２個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニル（＝Ｏにより置換されていてもよい）であり、例えば、Ｒ１は、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリニル、ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾリル、ベンゾ［１，２，５］チアジアゾリル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ［１，４］オキサジニル−３−オンまたはベンゾオキサゾリル−２−オンを表す。
【０１４５】
好ましくは、Ｒ２は水素以外のものである。Ｒ２が水素以外であるとき、それはピリジル環の窒素に対してオルトに位置するのが好ましい。Ｒ２は、好ましくはメチルである。
【０１４６】
好ましくは、Ｒ３はＣＯ２Ｈ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＮまたはテトラゾールである。
【０１４７】
好ましくは、Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ’であり、ここで、Ｒ”は水素、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルである（ただし、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方はＮまたはＮＲ”である）か、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮであり、他方がＯである。より好ましくは、Ｘ１およびＸ２の一方はＮであり、他方はＮＲ”である。
【０１４８】
好ましくは各Ｒ”は水素である。
【０１４９】
式（ＩＩ）の化合物は、好ましくは８００未満、より好ましくは６００未満の分子量を有する。
【０１５０】
式（ＩＩ）の具体的化合物としては、以下の化合物およびその塩が挙げられる：
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノール、
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−メチル−ベンズアミド、
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−メトキシ−ベンズアミド、
２−｛４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−［４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝−ピリジン、
［４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−フェノキシ］−酢酸、
４−［４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
６−［２−（４−シアノフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−キノキサリン、および
６−［２−（４−カルボキシアミドフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−キノキサリン。
【０１５１】
式（ＩＩ）の化合物の安定な塩としては、限定されるものではないが、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、および硝酸塩などの無機酸との塩、またはリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルミチン酸塩、サリチル酸塩、およびステアリン酸塩などの有機酸との塩が挙げられる。治療または医薬用途においては、これらの塩は薬学上許容されるものとすることが好ましい。
【０１５２】
式（ＩＩ）の化合物のいくつかは水性溶媒および有機溶媒などの溶媒から結晶化または再結晶させることができる。このような場合、溶媒和物を形成してもよい。前記溶媒和物には、水和物ならびに凍結乾燥などの過程で生じ得る種々の水分量を含んだ化合物をはじめとする化学量論溶媒和物が含まれる。治療または医薬用途においては、これらの溶媒和物は薬学上許容されるものとすることが好ましい。
【０１５３】
式（ＩＩ）の化合物の幾つかは、光学異性体、例えばジアステレオ異性体およびあらゆる比率での異性体混合物（例えば、ラセミ混合物）の形態で存在し得る。本発明では、このような総ての形態、特に純粋な異性体を用いることができる。種々の異性体は、常法によりあるものを他のものから分離または分割することもでき、あるいはいずれかの所定の異性体を従来の合成法または立体特異的または不斉合成により得ることもできる。
【０１５４】
式（ＩＩ）の化合物は医薬組成物としての使用が意図されることから、実質的に純粋な形態とすることが好ましく、例えば、少なくとも６０重量％の純度、より好ましくは少なくとも７５重量％の純度、さらに好ましくは少なくとも８５重量％の純度、さらに好ましくは少なくとも９８重量％の純度とされる。式（ＩＩ）の化合物の、医薬組成物で用いられるより純粋な形態を調製するために、純度の低い化合物調製物を用いてもよく、このような化合物調製物は、好ましくは少なくとも１重量％、より好ましくは少なくとも５重量％、さらに好ましくは１０〜５９重量％の式（ＩＩ）の化合物またはその誘導体を含んでいなければならない。
式（ＩＩ）の化合物において「Ｃ１−６アルキル」とは、単独であれ、より大きな基、例えばＣ１−６アルコキシの一部であれ、その鎖長が限定されない限り、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルをはじめとする、１〜６個の炭素原子の直鎖または分枝鎖の基を意味する。
【０１５５】
式（ＩＩ）の化合物において、Ｃ１−６ハロアルキル基は１以上のハロ原子、ＣＦ３をはじめとする特定のＣ１−６ハロアルキル基を含んでもよい。
【０１５６】
式（ＩＩ）の化合物において「ハロ」または「ハロゲン」とは、塩素、フッ素、ヨウ素および臭素元素に由来する基を意味するのに互換的に用いる。
【０１５７】
式（ＩＩ）の化合物において「シクロアルキル」とは、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルをはじめとする、好ましくは炭素３〜７個の環式基を意味するのに用いる。
【０１５８】
式（ＩＩ）の化合物において「アリール」とは、５〜１４員の置換または非置換芳香環、または限定されるものではないがフェニル、ナフチルをはじめ、二環もしくは三環を含む環構造を意味するのに用いる。
【０１５９】
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物の製造
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物は、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットに記載の方法に従って製造することができる。
【０１６０】
【実施例】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に記載の態様に限定されるものではない。
【０１６１】
例１：ＴＧＦβ阻害化合物の製造
化合物１：
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ベンズアミド
【０１６２】
【化５１】
国際公開第０１／７２７３７号パンフレットの「Example 17」に記載されている方法に従って、表題の化合物を合成した。
【０１６３】
化合物２：
｛４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−フェニル｝−メタノール
【０１６４】
【化５２】
【０１６５】
１−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（２．０４ｇ）、テレフタルアルデヒド酸メチル（１０ｍｌ）、酢酸アンモニウム（３．０８ｇ）をＴＨＦ／メタノール（１０ｍｌ／２ｍｌ）に溶解し、６０℃にて１８時間撹拌した。室温に冷却後、減圧下にて溶媒を留去し、残渣に炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をクロロホルム−メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸メチルを得た（１．７２ｇ、収率５６％）。
【０１６６】
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸メチル（１．７２ｇ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解し、−７８℃に冷却し、１Ｍ ＤＩＢＡＬ溶液（２０ｍｌ）をゆっくり加えた。−７８℃にて１時間撹拌した後、反応液に水を加えた。酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をクロロホルム−メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（１．５８ｇ、収率９９％）。
【０１６７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．４７（ｓ，３Ｈ），４．６３（ｓ，２Ｈ），５．９３（ｓ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６−７．０９（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．２９（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）： ３８６（Ｍ＋１）＋
【０１６８】
化合物３：
１−［２−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］−１−エタノン
【０１６９】
【化５３】
【０１７０】
４−クロロ−６，７−ジメトキシキノリン（１００ｍｇ）、４，５−ジメチル−２−ヒドロキシアセトフェノン（２２０ｍｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（１６４ｍｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（６ｍｌ）に懸濁し、１２０℃にて２４時間撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（３４ｍｇ、収率２２％）。
【０１７１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ）， ２．２６（ｓ，３Ｈ）， ２．４０（ｓ，３Ｈ）， ３．９７（ｓ，３Ｈ）， ３．９８（ｓ，３Ｈ）， ６．３３（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）：３５２（Ｍ＋１）＋
【０１７２】
化合物４：
４−［（２−ヨード−６−メチル−３−ピリジル）オキシ］−６，７−ジメトキシキノリン
【０１７３】
【化５４】
【０１７４】
４−クロロ−６，７−ジメトキシキノリン（２２９ｍｇ）、３−ヒドロキシ−２−ヨード−６−メチルピリジン（４８６ｍｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（３９０ｍｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（５ｍｌ）に懸濁し、１４０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、アセトン−クロロホルム系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（４７ｍｇ、収率１１％）。
【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．６２（ｓ，３Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）：４２３（Ｍ＋１）＋
【０１７６】
化合物５：
１−｛２−［７−（２−イミダゾール−１−イルエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノン
【０１７７】
【化５５】
【０１７８】
７−ベンジルオキシ−４−クロロ−６−メトキシキノリン（１．５０ｇ）、２−ヒドロキシ−４，５−ジメチルアセトフェノン（３．６３ｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．７１ｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（３０ｍｌ）に懸濁し、１２０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した後、クロロホルム層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、１−［２−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノンを得た（１．１０ｇ、収率３７％）。
【０１７９】
１−［２−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１．１０ｇ）をメタンスルホン酸（０．８５ｍｌ）とトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）の混合溶液に懸濁し、７０℃にて１．０時間撹拌した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣に水を加え、炭酸水素ナトリウム粉末で中和した後、クロロホルムで抽出した。次いで、クロロホルム層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、１−［２−（７−ヒドロキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１５０ｍｇ）および１−ブロモ−２−クロロエタン（７００ｍｇ）を得た（収率８３％）。
【０１８０】
１−［２−（７−ヒドロキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１５０ｍｇ）、１−ブロモ−２−クロロエタン（１９１ｍｇ）、炭酸カリウム（３０７ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に懸濁し、室温にて一晩撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、１−｛２−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノンを得た（１２２ｍｇ、収率６８％）。
【０１８１】
１−｛２−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノン（５２ｍｇ）、イミダゾール（４９ｍｇ）、炭酸カリウム（９０ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に懸濁し、８０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をメタノール−クロロホルム系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（２９ｍｇ、収率５２％）。
【０１８２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３−ｄ１，４００ＭＨｚ）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ， １Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｍ，２Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）： ４３２（Ｍ＋＋１）
【０１８３】
例２：化合物１〜５のＴＧＦβ阻害活性
J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998)に記載の方法に準じて、化合物１〜５のＴＧＦβシグナル抑制作用を評価した。
【０１８４】
具体的には、ルシフェラーゼ遺伝子の上流に、プロモーターとしてＴＧＦβシグナル伝達因子であるＳｍａｄの結合配列をタンデムに４個繋げたものをレポーター遺伝子（(SBE)4-Luc）として用いた。このレポーター遺伝子を、ヒト肺ガン上皮細胞（A549）（ATCCより入手可能）に導入して、安定的に発現可能な細胞株を構築した。
【０１８５】
この細胞に、被験化合物と、ＴＧＦβ−１（２ｎｇ／ｍｌ）とを添加して４時間培養した。なおここで被験化合物としては、前記例で合成した本発明による化合物をそれぞれ使用した。培養後、細胞のルシフェラーゼ活性を化学発光法（Steady Glo(商標） Luciferase assay system, プロメガ）により測定した。
【０１８６】
同様にして、ＴＧＦβのみを添加して細胞を培養した場合と、ＴＧＦβおよび被験化合物のいずれも添加しないで培養した場合（コントロール）とについてもルシフェラーゼ活性を測定した。
【０１８７】
これらの測定結果に基づいて、下記の式に従ってＴＧＦβ阻害率（％）を算出した。
【０１８８】
ＴＧＦβ阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×１００
［式中、Ａ、ＢおよびＣはそれぞれ下記を意味する：
Ａ： ＴＧＦβ１を添加し、かつ被験化合物は添加しない場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）
Ｂ： ＴＧＦβ１および被験化合物の両方を添加した場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）
Ｃ： ＴＧＦβ１および被験化合物を共に添加しない場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）］
【０１８９】
試験は、被験化合物の濃度３μＭおよび１０μＭの場合についてそれぞれ行った。
【０１９０】
結果は、表１に示されるとおりであった。
結果に示されるように、本発明による化合物がＴＧＦβの作用に拮抗する活性を有することが明らかとなった。
【０１９１】
【表１】
【０１９２】
例３：血管内皮細胞の細胞増殖に対するＴＧＦβ阻害化合物の促進作用
ＥＳ細胞から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を内皮細胞に分化させる過程においてＴＧＦβ阻害化合物を作用させ、血管内皮細胞の細胞増殖に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果を検討した。実験方法及び培養は、前述のYamashitaらの方法（Nature 408: 92-96, 2000）に従った。
【０１９３】
すなわち、1×104個のＥＳ細胞（クローン名：ＣＣＥ細胞）をＥＳ細胞分化用培地（αＭＥＭ (GIBCO)、５０μＭ ２−メルカプトエタノール (GIBCO) 、５０Ｕ／ｍｌ ペニシリン／ストレプトマイシン(GIBCO)、１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）） に懸濁後、10cm collagen IV-coated plate (IWAKI)上に播種し、５％ＣＯ２存在下、３７℃にて４日間培養を行った。４日後、分化したＦｌｋ−１陽性細胞を含む細胞集団より、PE-conjugatedマウス抗Ｆｌｋ−１抗体（Pharmingen）を結合させた後、ＭＡＣＳカラムを用いてＦｌｋ−１陽性細胞を分取した。こうして得た1×104個のＦｌｋ−１陽性細胞を、被験物質として化合物１（１μＭ）、化合物４（５μＭ）または化合物３（５μＭ）を含む血管分化用培地（αＭＥＭ、５０μＭ ２−メルカプトエタノール、５０Ｕ／ｍｌ ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％ＦＣＳ、３０ｎｇ／ｍｌ ＶＥＧＦ−Ａ (R&D)）に懸濁して、フィブロネクチンコートを行った２４穴組織培養用プレート（IWAKI）上に播種し、３７℃で３日間培養することにより内皮細胞へと分化させ、被験物質の効果を検討した。
【０１９４】
３日後、細胞の特徴付けのために以下の方法に従って免疫染色を実施した。細胞をプレートに固定化させるため、上清を吸引後、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を加え、室温で５〜１０分間静置した。細胞固定化後、ＰＢＳで２回洗浄し、０．３％Ｈ２Ｏ２／メタノールを加え、室温で２０〜３０分間静置し、脱色させた。脱色後、ＰＢＳで２回洗浄し、その後２％スキムミルク／ＰＢＳを加え、室温で３０分間静置し、ブロッキングを施した。その後、１次抗体として２％スキムミルクで２００倍に希釈したラット抗PECAM1抗体（Mec13.3: Pharmingen）及び３００倍希釈したマウス抗平滑筋アクチン−α（ＳＭＡ−α）抗体（1A4: Sigma）を加え、室温で２時間インキュベートした。２時間のインキュベート後、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、さらに２次抗体として２％スキムミルクでそれぞれ２００倍希釈したヤギ抗マウスIgG-HRP（Zymed）とヤギ抗ラットIgG-Alkali Phosphatase (AP)（Zymed）を加え、室温で２時間インキュベートした。２時間のインキュベート後、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、その後０．０２５％ＤＡＢを含むＰＢＳ−Ｔを加え、室温で１０〜２０分間静置した。ＳＭＡ−α染色用のＨＲＰ発色は、０．１５％Ｈ２Ｏ２／ＰＢＳ−Ｔを加えることによって行い、適当な発色（茶色）が得られたところでＰＢＳ−Ｔで２回洗浄し、反応を停止させた。さらに、NBT/BCIP stock solution（Roche）を含むＡＰ液（100mM Tris (pH9.5)、100mM NaCl、50mM MgCl2、5mM Levamisole）を加えることにより、ＡＰ染色（ＰＥＣＡＭ１用）を施した。適当な発色（紫色）が得られたところで、ＰＢＳ−Ｔで２回洗浄し、反応を停止させた。検体は、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて再度固定化させた後、保存した。
【０１９５】
その結果、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物の共存群では、いずれの化合物においても明確な細胞数の増加が認められた。骨格の異なる化合物で同じ結果が得られたことより、本作用はＴＧＦβ阻害化合物に共通の現象であることが示唆された。以上のことより、ＴＧＦβ阻害化合物は、血管内皮細胞の細胞増殖に対して促進的に働くことが明らかとなった。
【０１９６】
例４：ＴＧＦβ阻害化合物のもつ血管内皮細胞分化促進作用
ＥＳ細胞から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を内皮細胞に分化させる過程にＴＧＦβ阻害化合物を作用させ、ＴＧＦβ阻害化合物の血管内皮細胞分化に対する効果を検討した。実験方法及び培養は例３の方法に従って行ったが、ただし、後半の培養（血管分化用培地での培養）に供したＦｌｋ−１陽性細胞の細胞数は1×103個とした。被験物質としては化合物１を用い、後半の培養より終濃度１μＭで添加した。
【０１９７】
まず、例３によって得られた免疫染色データにより、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物共存下で培養したものは、紫で染色された内皮細胞コロニーが顕著に増加し、さらにそのコロニーも大きいことが分かる。
【０１９８】
次に、下記の表１は、本例における培養により出現したコロニーを、免疫染色データおよび形態に基づいて、３つの集団（シート状にコロニーを形成した血管内皮細胞群、分散してコロニーを形成した血管内皮細胞群、平滑筋コロニー群）に分類し、コロニーの内訳をまとめたものである。
【０１９９】
【表２】
【０２００】
表１から明らかなように、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物共存下で培養したものでは、シート状の血管内皮細胞のコロニー形成率が増加し、反対に分散型の血管内皮細胞コロニーおよび平滑筋コロニーの形成率が減少していた。この結果より、ＴＧＦβ阻害化合物には、平滑筋細胞への分化に比較し、血管内皮細胞への分化を促進させる作用があることが明らかとなった。
【０２０１】
例５：ＴＧＦβ阻害化合物の細胞間接着性亢進作用
例３により得られた培養細胞の写真を高倍率で拡大したところ、ＶＥＧＦのみで培養した血管内皮細胞シートでは、細胞と細胞の境界線が不鮮明であったのに対し、ＴＧＦβ阻害化合物を含む条件で培養した血管内皮細胞シートでは、細胞と細胞の境界線が明瞭であった。ＶＥＧＦ単独で培養した細胞での結果は、ＶＥＧＦ投与により形成された血管は脆弱で、血管透過性が高い（細胞間接着性が弱い）というin vivoでの知見と一致するものであった。一方で、ＴＧＦβ阻害化合物共存下における結果は、ＴＧＦβ阻害化合物が脆弱な（細胞間接着性が弱い）血管を正常化させることを示唆するものであった。
【０２０２】
例６：ＴＧＦβ阻害化合物添加によるClaudin5蛋白質の発現亢進
ＴＧＦβ阻害化合物として化合物１を用い、例３の実験条件に従って形成された４日目の内皮細胞シートに対し、抗Claudin5染色を実施した。免疫染色は例３の方法に従って行った。抗Claudin5抗体はZymedより入手したものを使用した。
【０２０３】
その結果、ＶＥＧＦのみで培養した内皮細胞シートの染色に比し、ＴＧＦβ阻害化合物添加により形成されたシートは強く染色され、顕著にClaudin5蛋白質が発現亢進していることが明らかとなった。このことより、例５で観察された血管内皮シート内の細胞間接着性亢進は、Claudin5の発現亢進を介したものであることが示唆された。
【０２０４】
例７：血管内皮前駆細胞培養に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果
ヒト末梢血単核球を血管内皮前駆細胞へ分化・増幅させる培養を行い、そこへＴＧＦβ阻害化合物を添加することにより、ＴＧＦβ阻害化合物の血管内皮前駆細胞の分化・増幅培養に対する効果を検討した。被験物質としては、化合物１、２、４および５を用いた。培養はKalkaらの方法（Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000）に従い、培養３日目から被験物質を添加した。
【０２０５】
すなわち、健常人ボランティアの末梢血２００ｍｌをリン酸緩衝生理食塩水で２倍に希釈した後、リンホプレップ（d=1.077；第一化学薬品社より購入）に重層して、密度勾配比重遠心（４００×ｇ、２５分間）を行い、単核球画分を得た。この画分をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄後、混入した赤血球を除くために溶血し、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。こうして得た単核球を５％のＦＣＳを添加したＥＧＭ−２培地（購入時に添付されてきたＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１、アスコルビン酸、およびＧＡ−１０００を添加。Clonetics社製）に懸濁して、あらかじめフィブロネクチンコートを行った２４穴組織培養用プレート（Falcon社製）に、５０００個/ｍｍ２、総培地量５００μｌとなるように播種し、５％ＣＯ２存在下、３７℃にて培養を開始した。被験物質は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；和光純薬社製）に溶解し、３日目に添加した（被験物質終濃度１０μＭ、ＤＭＳＯ終濃度０．０５％）。４日目に、接着していない細胞と培養上清を静かに除き、被験物質をそれぞれ１０μＭの濃度となるように懸濁した新しいＥＧＭ−２培地５００μｌを添加した。さらに、５％ＣＯ２存在下、３７℃にて３日間培養（計７日間培養）した後、培養上清を除き、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬ（１０μｇ／ｍｌ）（Molecular Probes社製）を溶解した新しいＥＧＭ−２培地を添加し、３７℃で２時間培養を行い、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬを取り込ませた。その後、上清を除去し、洗浄および固定化を行なった後、１００倍希釈したＦＩＴＣ標識化ＵＥＡ−１（Sigma社製）を添加し、室温で１時間反応させ、洗浄した。その後、それぞれのウェルを蛍光顕微鏡で観察した。陽性対照にはヒト臍帯静脈内皮細胞（Clonetics社より入手）を用い、陰性対照にBalb/c 3T3細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）より入手）を用いた。顕微鏡観察において、倍率２００倍で５視野観察し、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬの取り込みおよびＦＩＴＣ標識化ＵＥＡ−１染色の二重染色像が確認された紡錘形細胞を血管内皮前駆細胞として、その細胞数を数えた。
【０２０６】
結果を図１に示した。図１から明らかなように、被験物質はいずれも、１０μＭの濃度で血管内皮前駆細胞数を増加させた。
【０２０７】
例８：ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物のin vivo血管新生促進作用
ＴＧＦβ阻害化合物の血管新生に対する作用を評価するため、マトリゲル・プラグ・アッセイを実施した。１ｍｌのマトリゲル（BD Biosciences Bedford, MA）に４００ｎｇのhuman basic FGF（R&D）、５０μｇのheparin（アヴェンティス・ファーマ株式会社）および被験物質としての化合物１（終濃度１μＭ）（もしくはＤＭＳＯ）を氷上で加え、調製されたゲルをBL/6マウスの下腹部皮下に０．２ｍｌずつ注射した。６〜８日後、マトリゲル中に陥入した血管を実体顕微鏡で観察した。
【０２０８】
その結果、ｂＦＧＦ単独の対照と比較し、ＴＧＦβ阻害化合物を含むマトリゲル内において、顕著な血管数の増加が認められ、ＴＧＦβ阻害化合物に血管新生促進作用があることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、血管内皮前駆細胞の増幅培養に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果を示す図である。
【０００１】
【発明の背景】
発明の分野
本発明は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の体外分化・増幅法に関するものである。さらに、本発明は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた虚血性疾患または血管透過性の亢進を伴う疾患の治療法に関するものである。
【０００２】
背景技術
虚血性心疾患や慢性閉塞性動脈硬化症患者に対しては、生活習慣の改善勧告に加え、薬物療法や運動療法などが行われる。FontaneIII度またはIV度の重症患者に対しては、血管造影を行った後に経血管的な血管形成術、さらには外科的なバイパス手術が試みられる。これらの一連の方法は確立された有効な治療法であるが、一定の確率（３０〜４０％）で、拡張した血管やバイパスの再狭窄や閉塞が見られる。特に、Buerger病として知られる閉塞性血栓血管炎（ＴＡＯ）の患者のように、器質的な血栓の内径が小さい場合には、血管形成術やバイパス手術は再狭窄を起しやすいため、施行不可能である。このような患者に対しては、新たな治療法が必要となっている（最新医学、57巻、１号、2002）。
【０００３】
胎児の血管形成には、血管発生と血管新生の２つの段階があるとされている。血管発生は、血管内皮前駆細胞（ＥＰＣ；Endothelial Progenitor Cell）が目的部位で分化しながら血管を形成する過程とされる。分化した、または分化しつつある血管内皮細胞（ＥＣ；Endothelial Cell）は血管腔を形成し、お互いに融合されて血管叢を形成する。これに対し、血管新生は、既成の血管が刺激を受け、細胞の増殖・遊走を経て新たな血管を作り出す過程をいう。つまり、胎児血管形成は血管発生に始まり、後に血管新生がなされて完了することになる。一方で、成体においては、創傷治癒、癌などの病的血管形成、または子宮卵巣などでの生理的血管形成には、既存血管から新たな血管を作り出す血管新生の機序だけが存在すると考えられていた。ところが、最近になって血管内皮前駆細胞が成体血液中で発見され、胎児内だけでなく、成体においても同じ機構（血管新生と血管発生の機序）で血管形成がなされることが判明した（最新医学、57巻、１号、2002）。
【０００４】
ヒト血管内皮前駆細胞は、末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血、臍帯血または骨髄のＣＤ３４＋細胞、ＡＣ１３３＋細胞もしくはＦｌｋ−１＋細胞（ＶＥＧＦＲ２細胞とも呼ばれ、ヒト由来である場合にはＫＤＲ＋細胞とも呼ばれる）またはこれらの細胞を含む単核球画分から得られることが知られており（Blood 95: 952, 2000; J. Clin. Invest. 105: 1527, 2000; Pro. Nat. Acad. Sci. USA 97: 3422, 2000）、よって、これらの細胞または細胞画分は血管内皮前駆細胞の供給源として用いることができる。
【０００５】
循環器領域では、虚血部位の血管新生療法や動脈硬化部位の血管内皮再生療法として、増殖させた血管内皮前駆細胞を投与する方法（細胞医療）が考えられている。Kalkaらにより、成人末梢血を培養して血管内皮細胞を得た後、これを利用して免疫不全マウスの下肢虚血モデルにヒト血管内皮前駆細胞を投与すると、新生血管の増加がもたらされ、虚血筋肉組織内の血流改善が促進されることが確認された(Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000)。この療法は免疫不全ラットの心筋梗塞モデルにも応用され、組織学的に新生血管の増生および心筋壊死の現象を誘導し、心筋の機能改善にも役割を果たすことが判明している(Circulation 103: 634-637, 2001)。この血管内皮前駆細胞治療の最大の利点は、自分の細胞を末梢血液から採取して治療に応用できるところにある。よって、血管内皮前駆細胞治療は倫理面でも免疫学的にも問題がなく、血管内皮前駆細胞の前駆細胞としての増殖・分化を利用した強力かつ生理的な先進的治療として注目されている。しかし、成人末梢血由来の血管内皮前駆細胞には量的な制限があるため、この治療法を臨床的に実用化するためには効率の良い血管内皮前駆細胞の増幅法の確立が必要とされている（最新医学、57巻、１号、2002）。
【０００６】
血管内皮前駆細胞を投与する細胞医療以外の試みとして、心血管領域においては、血管新生に対するプラスの因子であるＶＥＧＦの遺伝子や蛋白質を利用した血管新生療法の基礎的・臨床的研究が急速に進んでいる。しかし、ＶＥＧＦによって形成された血管は、正常のものに比べて透過性が高く、穴の空きやすい脆弱な管であることが判明し、問題も指摘されている（最新医学、57巻、１号、2002；血管生物学、児玉龍彦ら、講談社、1997）。
【０００７】
前記血管透過性の亢進を伴う疾患としては、例えば、糖尿病の合併症である糖尿病性細小血管症（例えば、網膜症、腎症、神経障害など）および糖尿病性大血管症（例えば、虚血性心疾患、脳血管障害、閉塞性動脈硬化症など）が知られている。細小血管症は、細小血管壁を構成する血管内皮細胞および該細胞を支持する基底膜の弾力性および強度の喪失、血管透過性の亢進に起因するものとされている（最新医学、57巻、６号、2002）。その他、脳卒中および脳挫傷などの後に起こる血管性脳浮腫、脳虚血および低酸素血症などの後に起こる細胞毒性脳浮腫、全身浮腫、網膜浮腫、肺水腫、糖尿病などの疾患においても血管透過性の亢進が観察されており、いずれの疾患も重篤であることから、血管透過性の改善法およびそのための治療剤の開発が望まれている。
【０００８】
ＴＧＦβ（Transforming Growth Factor-β）は強力な細胞増殖抑制因子であり、多くの細胞の機能や増殖を抑制することが知られている。ＴＧＦβ１の細胞増殖阻害作用は、細胞周期のＧ１期からＳ期への移行が阻害されることによる。これは、細胞周期を制御する因子の一つであるＲｂ蛋白質がＴＧＦβの作用により低リン酸化状態に維持されるためである。Ｇ１期からＳ期への移行に関与するＲｂ蛋白質のリン酸化は、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）とこれに結合するサイクリンとによって調節されている。ＴＧＦβはＣｄｋ４の合成を抑制し、また、Ｃｄｋの下流で作用するとＣｄｋ２−サイクリンＥ複合体の活性を抑制する。さらに、ＴＧＦβはＣｄｋインヒビターであるp21cip/WAF1やp15INK4Bなどの発現を促進し、結果的にp27Kip1の活性を促進することが知られている。これらの一連の反応によって、ＴＧＦβによる細胞周期の停止が起こると考えられている（J. Lab. Clin. Med. 128: 355-360, 1996）。このような作用は、２種類のセリン/スレオニンキナーゼ型レセプター（Ｉ型とＩＩ型）を介したものであり、ＴＧＦβのＩ型レセプターとしてはＡＬＫ−５（activin receptor-like kinases-5）が同定されている。
【０００９】
ＴＧＦβと血管内皮細胞との関係では、ＡＬＫ−５のノックアウトマウスにおいて重篤な血管の発達異常が報告され、ＴＧＦβの血管形成への関与が明らかとなっている (非特許文献１：EMBO, 20: 1663-1673, 2001)。細胞を利用したin vitro実験においては、ＴＧＦβは、ＶＥＧＦのレセプターであるＦｌｋ−１の遺伝子発現に対して抑制的に働くことが報告されている (非特許文献２：J. Biol. Chem. 271; 11500-11505, 1996)。しかし、そのＴＧＦβによる血管形成メカニズムについては不明なところが多い。幾つかの研究グループにより、ＴＧＦβが、細胞外基質、基質分解酵素の産生、および接着因子の発現亢進を介して血管新生誘導に関与することが報告されているが(非特許文献３：Genes Dev. 10: 2462-2477, 1996；非特許文献４：Jpn. J. Cancer Res. 84: 589-593, 1993)、反対に、ＴＧＦβ阻害により血管新生が亢進するという報告もみられる (非特許文献５：Cell Growth & Differ. 1; 367-374, 1990)。さらに、血管内皮細胞及び平滑筋細胞はともに血管内皮前駆細胞から発生することが知られているが、それらの分化に対するＴＧＦβシグナルの関与は明らかとされていない。
【００１０】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物としては多種多様なものが知られており、例えば、次のＰＣＴ国際公開パンフレットに記載されたものを挙げることができる：ＷＯ９９／０５１０９、ＷＯ９９／５１６２３、ＷＯ００／４４７４３、ＷＯ００／５５１２９、ＷＯ０１／６２７５６、ＷＯ０１／７２７３７（特許文献１）、ＷＯ０１／７６６０４、ＷＯ０２／４０４６２、ＷＯ０２／４０４６７、ＷＯ０２／４０４６８、ＷＯ０２／４０４８６、ＷＯ０２／４０４７６、ＷＯ０２／５５０７７、ＷＯ０２／６６４６２、ＷＯ０２／０６２７５３、ＷＯ０２／０６２７７６、ＷＯ０２／０６２７８７、ＷＯ０２／０６２７９３、ＷＯ０２／０６２７９４、ＷＯ０２／０９４８３３、およびＷＯ０２／１０１３１。
【００１１】
【非特許文献１】
EMBO, 20: 1663-1673, 2001
【非特許文献２】
J. Biol. Chem. 271; 11500-11505, 1996
【非特許文献３】
Genes Dev. 10: 2462-2477, 1996
【非特許文献４】
Jpn. J. Cancer Res. 84: 589-593, 1993
【非特許文献５】
Cell Growth & Differ. 1; 367-374, 1990
【特許文献１】
国際公開第０１／７２７３７号パンフレット
【００１２】
【発明の概要】
本発明者らは、まず、ＴＧＦβ中和抗体を用いてＴＧＦβ阻害による血管内皮細胞の増幅を行なうことが出来るか否かを、マウス胚幹細胞（ＥＳ細胞）から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を用いた血管内皮細胞分化系（Yamashita et al., Nature 408: 92-96, 2000）にて検討した。しかし、ＴＧＦβ中和抗体にそのような活性を見出すことはできなかった。通常、レセプターが細胞に発現している場合、リガンドがなくとも微量のシグナルが恒常的に伝達されることが知られている。また、細胞が産生するＴＧＦβが該細胞の受容体に結合してシグナルが伝達される場合、細胞外から中和抗体などでそのシグナルを阻害するのは困難であることも知られている。そこで、細胞内に伝達されるＴＧＦβシグナルをキナーゼ阻害活性を有する化合物を用いて抑制した場合の効果について検討したところ、以下のような現象が見られた。
【００１３】
（１）ＴＧＦβ阻害化合物は、平滑筋細胞への分化に比較して、血管内皮細胞への分化を促進した。
（２）ＴＧＦβ阻害化合物は血管内皮細胞の細胞増殖に対し促進的に作用した。
（３）ＴＧＦβ阻害化合物は接着因子であるClaudin-5の発現を亢進させ、細胞間接着性を亢進させた。
（４）ＴＧＦβ阻害化合物は、ＥＳ細胞由来の血管内皮前駆細胞だけでなく、ヒト末梢血単核球に対しても作用し、血管内皮前駆細胞の増殖および分化を促進した。
（５）ＴＧＦβ阻害化合物は血管新生を促進した。
【００１４】
これらの現象は、分子構造において骨格の異なるＴＧＦβ阻害低分子化合物について観察されており、従って、ＴＧＦβ阻害化合物に共通な現象であることも示された。
【００１５】
本発明者らは、上記の現象に基づき、血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の体外分化／増幅法に関して、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の体外分化／増幅に有効であるとの知見を得た。さらに、本発明者らは、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、虚血性疾患および血管透過性の亢進を伴う疾患の治療剤として有効であるとの知見を得た。本発明はこれら知見に基づくものである。
【００１６】
従って、本発明の第一の目的は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の効率の良い製造方法を提供することにある。そして、本発明による血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法は、細胞または細胞画分を、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる培地において培養することを含んでなるものである。
【００１７】
本発明の第二の目的は、ＴＧＦβ阻害化合物を用いた虚血性疾患の治療のための医薬組成物および血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物を提供することにある。そして、本発明による虚血性疾患治療用の医薬組成物は、本発明による製造方法により製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞、あるいは、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなるものである。さらに、本発明による、血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物は、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなるものである。
【００１８】
本発明の第三の目的は、本発明による方法により製造された血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞を用いたティッシュエンジニアリング技術を提供することにある。
【００１９】
本発明により、血管内皮前駆細胞および血管内皮細胞の製造効率が改善され、また、虚血性疾患および血管透過性の亢進を伴う疾患の新たな治療法およびそのための医薬が提供される。
【００２０】
【発明の具体的説明】
本発明による血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法においては、細胞または細胞画分が、ＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる培地において培養される。
【００２１】
本明細書において、「ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物」または「ＴＧＦβ阻害化合物」とは、ＴＧＦβ阻害活性、すなわち、サイトカインの一種であるＴＧＦβの、細胞内または組織内における活性を阻害する作用を有する化合物をいう。ＴＧＦβ阻害活性は、当業者に公知の方法、例えば、J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998)に記載の方法、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットに記載の方法などにより測定することができる。
【００２２】
前記細胞または細胞画分は、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞に分化しうるものであればよく、特に制限されないが、好ましくはＦｌｋ−１＋細胞、単核球画分、ＣＤ３４＋細胞、またはＡＣ１３３＋細胞とされる。前記Ｆｌｋ−１＋細胞は、胚幹細胞から得られたものであることが好ましい。前記ＣＤ３４＋細胞およびＡＣ１３３＋細胞は、単核球画分から得られたものであることが好ましい。前記単核球画分は、末梢血または臍帯血から得られたものであることが好ましく、さらに、該末梢血は、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものであることが好ましい。
【００２３】
前記培地は、細胞の分化を可能とするものであればよく、特に制限されない。このような培地としては多種多様なものが当技術分野において知られており、また、多くのものが市販されている。よって、当業者は、培養に用いる細胞または細胞画分の種類および目的とする分化細胞の種類に応じて、適切な培地を選択または調製することができる。前記培地は、好ましくは血管内皮前駆細胞分化用の培地または血管内皮細胞分化用の培地とされる。
【００２４】
前記培地へのＴＧＦβ阻害化合物の添加量は特に制限されるものではないが、好ましくは０．１〜５０μＭ、より好ましくは０．５〜２０μＭとされる。
【００２５】
本発明の好ましい実施態様によれば、前記培地は、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の増殖を促進する少なくとも一種のサイトカインを含んでなるものとされ、このようなサイトカインは、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択することができる。さらに、前記培地は、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインを含んでなるものとされ、さらに好ましくは、これらに加えてｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦを含んでなるものとされる。
【００２６】
他の培養条件は、一般に細胞の増殖を目的として用いられる条件であればよく、特に制限されない。すなわち、培地への細胞または細胞画分の添加量、培養温度、ＣＯ２濃度、培養期間などの条件は、当業者が適宜設定することができる。培養温度は、好ましくは約３７℃とされる。また、必要に応じて、ＣＯ２濃度を調節してもよく、好ましくは約５％とすることができる。
【００２７】
上記の方法により得られた血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞は、虚血性疾患を治療する目的で、背景技術の項で説明したような細胞医療において利用することができる。
【００２８】
従って、本発明によれば、治療上有効な量の、本発明による方法によって製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞を被験者に投与することを含んでなる、虚血性疾患の治療方法が提供される。被験者は、好ましくは哺乳動物とされ、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とされる。
【００２９】
前記虚血性疾患としては、例えば、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害（例えば、脳卒中、脳梗塞など）、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患（例えば、閉塞性動脈硬化症など）、虚血性心疾患（例えば、虚血性心筋症、心筋梗塞症、虚血性心不全など）などが挙げられる。
【００３０】
本発明による方法によって製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞は、細胞医療の分野において一般に用いられる投与経路および治療上有効量で投与することができる。よって、投与経路は特に制限されるものではないが、好ましくは非経口投与、より好ましくは皮下投与、静脈内投与、冠血管カテーテル投与、筋肉内投与、または心筋内投与とされる。治療上有効量もまた特に制限されるものではなく、被験者の状態、例えば、患者の年齢、体重、性別、疾患の相違、症状の程度などを考慮して適宜決定される。
【００３１】
また、本発明によれば、虚血性疾患治療用医薬の製造のための、本発明による方法により製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞の使用が提供される。
【００３２】
さらに、本発明によれば、本発明による方法により製造された血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物が提供される。この医薬組成物は、上述の投与経路および投与量に応じて、または細胞医療における周知技術に従い、当業者によって適宜製造されうる。
【００３３】
ＴＧＦβ阻害化合物は、ex vivoだけでなく、in vivoにおいても血管内皮前駆細胞および／または血管内皮細胞の分化および増幅を促進する。よって、ＴＧＦβ阻害化合物を被験者に直接投与することによっても、虚血性疾患を治療することが可能である。また、ＴＧＦβ阻害化合物の直接投与により、血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善することも可能である。
【００３４】
従って、本発明によれば、治療上有効な量のＴＧＦβ阻害化合物を被験者に投与することを含んでなる、虚血性疾患の治療方法または血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善する方法が提供される。被験者は、好ましくは哺乳動物とされ、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とされる。
【００３５】
また、本発明によれば、虚血性疾患治療用医薬または血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬の製造のための、ＴＧＦβ阻害化合物の使用が提供される。
【００３６】
さらに、本発明によれば、ＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物または血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物が提供される。
【００３７】
前記虚血性疾患としては、例えば、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害（例えば、脳卒中、脳梗塞など）、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患（例えば、閉塞性動脈硬化症など）、虚血性心疾患（例えば、虚血性心筋症、心筋梗塞症、虚血性心不全など）などが挙げられる。
【００３８】
前記血管透過性の亢進を伴う疾患としては、例えば、糖尿病の合併症である糖尿病性細小血管症（例えば、網膜症、腎症、神経障害など）および糖尿病性大血管症（例えば、虚血性心疾患、脳血管障害、閉塞性動脈硬化症など）、血管性脳浮腫（脳卒中および脳挫傷などの後に起こることが知られている）、細胞毒性脳浮腫（脳虚血および低酸素血症などの後に起こることが知られている）、全身浮腫、網膜浮腫、肺水腫、糖尿病などが挙げられる。
【００３９】
ＴＧＦβ阻害化合物は、経口および非経口（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与、経皮投与）のいずれかの投与経路で投与することができる。従って、ＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる医薬組成物は、投与経路に応じた適当な剤型に製剤化される。具体的には、経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散在、顆粒剤、シロップ剤などが挙げられ、非経口剤としては、注射剤、座剤、テープ剤、軟膏剤などが挙げられる。
【００４０】
これらの各種製剤は、通常用いられている賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、希釈剤などを用いて常法により製造することができる。
【００４１】
賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ソルビット、結晶セルロースなどが、崩壊剤としては、例えば、デンプン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン末、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、デキストリンなどが、結合剤としては例えばジメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが、滑沢剤としては、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、硬化植物油などがそれぞれ挙げられる。
【００４２】
また、上記注射剤は、必要により緩衝剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、等張化剤、保存剤などを添加して製造することができる。
【００４３】
本発明によるＴＧＦβ阻害化合物を含んでなる医薬組成物において、ＴＧＦβ阻害化合物の含有量は、その剤型に応じて異なるが、通常全組成物中０．５〜５０重量％、好ましくは１〜２０重量％である。
【００４４】
ＴＧＦβ阻害化合物の投与量は、患者の年齢、体重、性別、疾患の相違、症状の程度などを考慮して、個々の場合に応じて適宜決定されるが、例えば０．１〜１００mg/kg、好ましくは０．１〜３０mg/kgの範囲であり、これを１日１回または数回に分けて投与する。
【００４５】
本発明の好ましい実施態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物の虚血性疾患治療用途において、ＴＧＦβ阻害化合物は、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の増殖を促進する少なくとも一種のサイトカインとともに併用され、このようなサイトカインは、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択することができる。さらに、ＴＧＦβ阻害化合物と併用されるサイトカインは、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインとされる。さらに好ましくは、ＴＧＦβ阻害化合物と併用されるサイトカインは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカイン、ならびにｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦとされる。従って、ＴＧＦβ阻害化合物の虚血性疾患治療用途において、ＴＧＦβ阻害化合物はこのようなサイトカインとともに投与され、医薬組成物中に含まれ、または医薬の製造において使用される。
【００４６】
本発明による血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法により製造されたこれらの細胞は、ティッシュエンジニアリングにおいて使用することができる。例えば、これらの血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞を用いることにより、血管を製造してこれをバイパス手術に使用することができ、あるいは、血管または血管を含む組織を製造してこれを治療のための移植手術に使用することができる。
【００４７】
式（Ｉ）のＴＧＦβ阻害化合物
本発明の好ましい態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物は、本発明者らによりＴＧＦβ阻害活性を有することが確認されている下記の式（Ｉ）で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物とされる：
【化２２】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化２３】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化２４】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化２５】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化２６】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化２７】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物において、基または基の一部としての「アルキル」、「アルコキシ」、および「アルケニル」という語は、基が直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルコキシ基、およびアルケニル基を意味する。
【００４９】
また、式（Ｉ）の化合物において、基または基の一部としての「アルキルカルボニル」、「アルコキシカルボニル」、および「アルケニルカルボニルオキシ」という語は、基が直鎖または分枝鎖のアルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、およびアルケニルカルボニルオキシ基を意味する。
【００５０】
従って、式（Ｉ）の化合物において、例えば、基または基の一部としての「Ｃ１−１０アルキル」および「Ｃ１−１０アルコキシ」という場合は、基が直鎖または分枝鎖の炭素数１〜１０のアルキル基およびアルコキシ基を意味する。
【００５１】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−１０アルキル」は、好ましくはＣ１−８アルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル、さらに好ましくはＣ１−４アルキルである。「Ｃ１−８アルキル」は、好ましくはＣ１−６アルキル、より好ましくはＣ１−４アルキルである。「Ｃ１−６アルキル」は、好ましくはＣ１−４アルキル、より好ましくはＣ１−２アルキルである。「Ｃ１−４アルキル」は、好ましくはＣ１−２アルキルである。
【００５２】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−１０アルコキシ」は、好ましくはＣ１−８アルコキシ、より好ましくはＣ１−６アルコキシ、さらに好ましくはＣ１−４アルコキシである。「Ｃ１−８アルコキシ」は、好ましくはＣ１−６アルコキシ、より好ましくはＣ１−４アルコキシである。「Ｃ１−４アルコキシ」は、好ましくはＣ１−２アルコキシである。
【００５３】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ２−８アルケニル」は、好ましくはＣ２−６アルケニル、より好ましくはＣ２−４アルケニルである。「Ｃ２−６アルケニル」は、好ましくはＣ２−４アルケニルである。
【００５４】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−４アルキルカルボニル」は、好ましくはＣ１−２アルキルカルボニルである。
【００５５】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ１−６アルコキシカルボニル」は、好ましくはＣ１−４アルコキシカルボニル、より好ましくはＣ１−２アルコキシカルボニルである。
【００５６】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ」は、好ましくはＣ２−４アルケニルカルボニルオキシである。
【００５７】
上記Ｃ１−１０アルキルの例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル等が挙げられる。
【００５８】
上記Ｃ１−１０アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００５９】
上記Ｃ２−６アルケニルの例としては、アリル基、ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基が挙げられる。
【００６０】
上記Ｃ１−４アルキルカルボニルの例としては、アルデヒド基、メチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニル、ｉ−ブチルカルボニル、ｓ−ブチルカルボニルが挙げられる。
【００６１】
上記Ｃ１−６アルコキシカルボニルの例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、ｉ−プロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、ｉ−ブトキシカルボニル、ｓ−ブトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
【００６２】
上記Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシの例としては、アリルカルボニルオキシ、ブテニルカルボニルオキシ、ペンテニルカルボニルオキシ、ヘキセニルカルボニルオキシが挙げられる。
【００６３】
式（Ｉ）の化合物において「により置換されていてもよいアルキル」とは、アルキル上の１またはそれ以上の水素原子が１またはそれ以上の置換基（同一または異なっていてもよい）により置換されたアルキルおよび非置換アルキルを意味する。置換基の最大数はアルキル上の置換可能な水素原子の数に依存して決定できることは当業者に明らかであろう。これらはアルキル基以外であって置換可能な基を有する基、例えば、アルコキシ、アルケニル、フェニル、フェニルカルボニル、ナフチル等についても同様である。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。
【００６５】
式（Ｉ）の化合物において、「不飽和の炭素環」および「不飽和の複素環」とは、二重結合等の不飽和結合を１以上有する炭素環および複素環を意味する。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物において「飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基」は、好ましくは飽和または不飽和の６員炭素環であることができる。飽和または不飽和の５または６員炭素環の例としては、フェニル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物において「飽和または不飽和の５または６員の複素環式基」は、飽和または不飽和の５または６員の単環性複素環式基を意味する。すなわち、飽和または不飽和の５または６員複素環は、１〜３個、好ましくは１または２個の異種原子を含み、残りの環員原子が炭素原子である複素環であることができる。複素環式基は、酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される異種原子を１個以上含む。複素環基の例としては、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、ピリダジル、ピリミジル、モルホリニル、モルホリノ、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾイル、イソチアゾリルおよびピラジルが挙げられる。
【００６８】
また、この複素環式基は、必要に応じて、Ｃ１−６アルキル基、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００６９】
飽和または不飽和の３〜６員炭素環式基は、好ましくは、飽和または不飽和の３〜５員炭素環式基、より好ましくは飽和または不飽和の３員炭素環式基であることができる。
【００７０】
飽和または不飽和の３〜６員複素環式基は、酸素原子、窒素原子、および硫黄原子から選択される異種原子（好ましくは酸素原子）を１個以上含む。好ましくは、飽和または不飽和の３〜６員複素環式基は、異種原子を１または２個含み、残りの環員原子が炭素原子である複素環式基であることができる。飽和または不飽和の３〜６員複素環は、好ましくは、飽和または不飽和の３〜５員複素環式基、より好ましくは飽和または不飽和の３員複素環式基であることができる。
【００７１】
飽和または不飽和の炭素環式基および複素環式基は、他の飽和または不飽和の炭素環式基もしくは複素環式基と縮合して二環式基、好ましくは飽和または不飽和の９〜１２員の二環性炭素環式基または複素環式基、を形成していてもよい。このような二環式基としては、ナフチル、キノリル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、１，４−ベンゾオキサニル、インダニル、インドリル、および１，２，３，４−テトラヒドロナフチルが挙げられる。
【００７２】
本発明の好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、Ｃ１−６アルキル基、および下式(i)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
【化２８】
（これらの式において、
式(i)におけるアルキル鎖の部分は、水酸基、または−ＯＲｅ基（ここでＲｅはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよく（好ましくはこのアルキル鎖の部分は、水酸基により置換されているか、または置換されておらず）、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよく、
Ｈａｌはハロゲン原子を表し、
ｎは１〜４の整数を表す）。
【００７３】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、式(i)〜(iv)からなる群より選択されるいずれかの基を表す場合には、Ａは、前記式(a1)〜(a3)のいずれかの基を表し、より好ましくは式(a1)基を表す。
【００７４】
本発明のより好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、Ｃ１−６アルキル基、および下式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
【００７５】
【化２９】
（これらの式において、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、
Ｒ２２とＲ２３、またはＲ２４とＲ２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよく、
ｎ１は２〜４の整数を表す）。
【００７６】
Ｒ１およびＲ２の少なくともいずれか一方が、前記(iv)である場合には、好ましくは、Ｒ２４とＲ２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成し（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、例えば、モルホリンを形成することができる。
【００７７】
Ｒ１およびＲ２の少なくともいずれか一方が、Ｃ１−６アルキル基である場合には、Ｃ１−６アルキルは好ましくはＣ１−４アルキル、より好ましくはメチルまたはエチル、最も好ましくはメチルである。
【００７８】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和（好ましくは不飽和）の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい。このように、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とが炭素環式基または複素環式基を形成する場合には、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６のいずれか１つの組み合わせの位置において環式基を形成しても良いが、Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６のいずれか２以上の位置において、それぞれ環式基を形成してもよい。この場合、式(a1)の炭素環と共に、三環式基を形成することができる。
【００７９】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、該式(a1)におけるＲ３〜Ｒ６の少なくとも１つは水素原子以外の基である。
【００８０】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２がＣ１−６アルキル基である場合に、該式(a1)におけるＲ３〜Ｒ６の少なくとも１つは水素原子以外の基である。
【００８１】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ７は、水素原子、飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または式(a1-i)または(a1-ii)の基、のいずれかの基を表す。
ここで、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基は、好ましくは、Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニル基、飽和の５または６員の炭素環式基、または、不飽和の５または６員の複素環式基を表す。
【００８２】
好ましくは、該式(a1)中のＲ７は、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、式(a1-i)の基、または式(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８３】
別の好ましい実施態様によれば、式(a1)におけるＲ７は、フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、または式(a1-i)または(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８４】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、Ｒ１およびＲ２がＣ１−６アルキル基である場合に、該式(a1)におけるＲ７は、式(a1-i)または(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８５】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ８は、好ましくは、非置換Ｃ１−８アルキル基、フェニル基により置換されたＣ１−４アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表す。
【００８６】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ９およびＲ１０は、好ましくは、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、飽和の５または６員炭素環式基、ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基、またはナフチル基を表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００８７】
Ａが式(a2)である場合において、Ｒ１１およびＲ１２は、好ましくは、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、飽和の５または６員炭素環式基、またはフェニル基を表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよい（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００８８】
より好ましくは、Ｒ１１およびＲ１２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成し（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。Ｒ１１およびＲ１２は、例えば、飽和の６員複素環式基を形成することができる。
【００８９】
Ａが式(a3)である場合において、好ましくは、Ｒ１３およびＲ１４が水素原子であって、Ｒ１５およびＲ１６が、同一または異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−３アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表す。
より好ましくは、Ｒ１３およびＲ１４が水素原子であって、Ｒ１５が、Ｃ１−４アルキル基を表し、Ｒ１６が、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、またはＣ１−３アルキルカルボニル基を表す。
【００９０】
ここでＲ１６がＣ１−３アルキルカルボニル基を表す場合には、Ｒ１６は−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ３６で表すことができる。このとき、Ｒ３６はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、またはｉ−プロピル基であることができ、好ましくはＲ３４はメチル基である。
【００９１】
Ａが式(a4)である場合において、好ましくは、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、およびＲ２１は、前記した通りであって、かつ、Ｒ１９が、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表すか、または
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）。
【００９２】
本発明のより好ましい実施態様によれば、上記の場合に、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、およびＲ２１は、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−６アルキル基により置換されていてもよいフェニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基（ここでフェニル基は水酸基、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基によりさらに置換されていてもよい）、
ニトロ基、または、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい。
【００９３】
Ｒ１７またはＲ２１が置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基である場合には、好ましくは、これらは−Ｃ＝Ｃ(Ｒ２６)(Ｒ２７)で表すことができる。ここで、Ｒ２６およびＲ２７は、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、Ｃ１−４アルコキシカルボニル基、またはフェニル基を表し、より好ましくは、Ｒ２６およびＲ２７は、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ１−２アルコキシカルボニル基、またはフェニル基を表す。
【００９４】
Ｒ１７またはＲ２１がフェニル基により置換されていてもよいアミノ基である場合には、好ましくは、これらは下記式で表すことができる
【化３０】
（上記式中、
Ｒ２８〜Ｒ３２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、またはＣ１−４アルキル基を表し、より好ましくは、Ｒ２８〜Ｒ３２は全て水素原子を表す）。
【００９５】
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、炭素環式基または複素環式基を形成することができる場合には、式(a4)の炭素環と共に、二環式基、例えばナフチル、インドール、ベンズイミダゾール、キノリン等の基を形成することができる。
例えば、該二環式基がインドール環の形態である場合、式(a4)は下記式で表すことができる。
【化３１】
（上記式中、
Ｒ３３〜Ｒ３５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、Ｃ１−２アルキルカルボニル、Ｃ１−２アルコキシカルボニル基またはＣ１−４アルキル基を表し、より好ましくは、Ｒ３５は水素原子を表す）。
【００９６】
ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）。
【００９７】
本発明の好ましい実施態様によれば、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、より好ましくは−Ｏ−、または−Ｃ(＝Ｏ)−を表す。
【００９８】
本発明の好ましい実施態様によれば、
ＸがＣＨを表し、かつＺが−Ｏ−を表す場合には、Ａは式(a1)〜(a4)の基から選択され、
ＸがＮを表し、かつＺが−Ｏ−を表す場合には、Ａは式(a1)であり、または
ＸがＣＨを表し、かつＺが−Ｃ(＝Ｏ)−を表す場合には、Ａは式(a1)である。
【００９９】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（１００）の化合物であることができる。
【化３２】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１０１およびＲ１０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し：
Ｒ１０３〜Ｒ１０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ１０３とＲ１０４、Ｒ１０４とＲ１０５、およびＲ１０５とＲ１０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１０８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表す］。
【０１００】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（１００）において、Ｒ１０３〜Ｒ１０６の少なくとも一つは、水素原子以外の基であり、かつ、Ｒ１０８は、非置換Ｃ１−８アルキル基、フェニル基により置換されたＣ１−４アルキル基、Ｃ２−８アルケニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表す。
【０１０１】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（２００）の化合物であることができる。
【化３３】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ２０１およびＲ２０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ２０３〜Ｒ２０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ２０３とＲ２０４、Ｒ２０４とＲ２０５、およびＲ２０５とＲ２０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ２０９およびＲ２１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ２０９とＲ２１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい］。
【０１０２】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（２００）において、
Ｒ２０３〜Ｒ２０６の少なくとも一つが水素原子以外の基であり、かつ
Ｒ２０９とＲ２１０とが、その少なくとも一方が水素原子であって、他方が水素原子、Ｃ１−４アルキル基、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、またはナフチルを表すか、または
Ｒ２０９とＲ２１０とが、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成する（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよく、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）］。
【０１０３】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（３００）の化合物であることができる。
【化３４】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ３０１およびＲ３０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ３０３〜Ｒ３０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３０３とＲ３０４、Ｒ３０４とＲ３０５、およびＲ３０５とＲ３０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ３１１およびＲ３１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ３１１とＲ３１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい］。
【０１０４】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（３００）において、
Ｒ３０３〜Ｒ３０６の少なくとも一つが水素原子以外の基であり、かつ
Ｒ３１１とＲ３１２とが、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成する（この複素環式基は、１以上の異種原子をさらに含んでいてもよく、かつ、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）。
【０１０５】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（４００）の化合物であることができる。
【化３５】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ４０１およびＲ４０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ４１３およびＲ４１４は、水素原子を表し、
Ｒ４１５は、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表し、
Ｒ４１６は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−８アルコキシ基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表す］。
【０１０６】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（４００）において、
Ｒ４１５は、Ｃ１−６アルキル基、さらに好ましくはメチル基、エチル基、特に好ましくはメチル基を表し、
Ｒ４１６は、水素原子、ハロゲン原子、またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す。
【０１０７】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（５００）の化合物であることができる。
【化３６】
［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ５０１およびＲ５０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ５１７、Ｒ５１８、Ｒ５２０および、Ｒ５２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ５１７とＲ５１８、または、Ｒ５２０とＲ５２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ５１９は、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表すか、または
Ｒ５１８とＲ５１９、または、Ｒ５１９とＲ５２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、Ｒ５１７基が結合している６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【０１０８】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（５００）において、
Ｒ５１９は、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表す。
【０１０９】
式（Ｉ）の化合物は、塩の形態とすることができ、これを治療および医薬用途に用いる場合には薬学上許容される塩とすることができる。好ましい例としては、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩のようなアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルキルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩、フマル酸、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、アスコルビン酸塩のような有機酸塩、およびグリシン塩、フェニルアラニン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩などが挙げられる。
【０１１０】
式（Ｉ）の化合物は、溶媒和物とすることができる。このような溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、メタノール和物、エタノール和物）、およびエーテル和物（例えば、ジエチルエーテル和物）が挙げられる。
【０１１１】
式（Ｉ）のＴＧＦβ阻害化合物の製造
式（Ｉ）の化合物は、例えば、スキーム１からスキーム１３に従って製造できる。式（Ｉ）の化合物の合成に必要な出発物質は市販されているか、または常法によって容易に製造できる。なお、スキーム中のＲ１〜Ｒ３６は上記において定義された内容と同義である。
【０１１２】
下記スキーム中において、中間体であるキノロン誘導体は、例えば、ＷＯ９７／１７３２９号等に従って合成することができる。
また、４−クロロキノリン誘導体は、例えば、Org. Synth. Col. Vol.3, 272 (1955), Acta Chim. Hung., 112, 241 (1983) またはＷＯ９８／４７８７３号に記載されているような慣用方法に従って合成することができる。
４−クロロキナゾリン誘導体は、J. Am. Chem. Soc., 68, 1299 (1946), J. Am. Chem. Soc., 68, 1305 (1946) や小竹監修、大有機化学、１７巻、１５０頁、朝倉書店（１９６７年発行）に記載されているような慣用方法に従って合成することができる。
【０１１３】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１およびスキーム２に従って製造することができる。
スキーム１：
【化３７】
【０１１４】
スキーム２：
【化３８】
【０１１５】
目的とする４−フェノキシキノリン誘導体、４−アニリノキノリン誘導体、または相当するキナゾリン誘導体は、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体または相当するアニリン誘導体に対して、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体を作用させることによって合成することができる。なお上記スキーム１において塩素化剤としては塩化ホスホリルが挙げられる。
【０１１６】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物（特にオルトケトン類の化合物）は、例えば、下記スキーム３に従って製造することができる。
スキーム３：
【化３９】
【０１１７】
このスキームにおいては、下記のような３通りの経路により、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる：
（ｉ） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体または相当するアニリン誘導体を作用させることにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる（上記工程(1)）；
（ii） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトブロモフェノール誘導体または相当するオルトブロモアニリン誘導体と反応させ（上記工程(2)）、次いで、金属塩基（例えばｎ−ブチルリチウム）を用いてブロム部位を極性転換し、発生したアニオンと酸クロリドを反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる；
（iii） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体と反応させる（上記工程(4)）。次いで、そこにアルキル化剤（例えばメチルマグネシウムブロミド）を反応させて（上記工程(5)）、生成したアルコールを酸化する（上記工程(6)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる。
【０１１８】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物（特にアミド化合物）は、例えば、下記スキーム４に従って製造することができる。
スキーム４：
【化４０】
【０１１９】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシ安息香酸エステル誘導体または相当するオルトアミノ安息香酸エステル誘導体を作用させ、エステル型の式（Ｉ）の化合物を製造することができる（上記工程(1)）。次いで、該エステル型の化合物をアルカリを用いて加水分解し（上記工程(2)）、縮合剤（例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）を用いてアミンと反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２０】
式（Ｉ）において、７位に所望の置換基を有する化合物は、例えば、下記スキーム５に従って製造することができる。
スキーム５：
【化４１】
【０１２１】
用意した７−ベンジルオキシ−４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体あるいは相当するアニリン誘導体を作用させる（上記工程(1)）。次いで、この得られた中間体３に、酸を用いてベンジル基を脱保護して（上記工程(2)）、得られた中間体４を塩基存在下アルキル化剤（例えば１ブロモ−２−クロロエタン）と反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２２】
式（Ｉ）において Ｚが−Ｃ(＝Ｏ)−である化合物は、例えば、下記スキーム６に従って製造することができる。
スキーム６：
【化４２】
【０１２３】
用意した４−キノロン誘導体または相当するキナゾロン誘導体に対して、臭素化剤（例えば臭化ホスホリル）を作用させる（上記工程(1)）。次いで、金属塩基（例えばｎ−ブチルリチウム）を用いてブロム部位を極性転換して、発生したアニオンと酸クロリドを反応させる（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる。
【０１２４】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつそのＲ２１が置換されていてもよいアルケニル基である化合物は、例えば、下記スキーム７に従って製造することができる。
スキーム７：
【化４３】
【０１２５】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(1)）、次いで、リンイリドと反応させる（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２６】
式（Ｉ）において、Ａが式(a2）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム８に従って製造することができる。
スキーム８：
【化４４】
【０１２７】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体を作用させて（上記工程(1)）、次いで、アミン（Ｒ１１Ｒ１２ＮＨ）と反応させ、イミン形成後に還元する（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２８】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつその置換基としてフェニル基により置換されたアミノ基を有する化合物は、例えば、下記スキーム９に従って製造することができる。
スキーム９：
【化４５】
【０１２９】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトニトロフェノール誘導体または相当するオルトニトロアニリン誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いで、ニトロ基を還元し（上記工程(ii)）、フェニルボロン酸誘導体と反応させる（上記工程(iii)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１３０】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつその置換基として窒素を含む５員環複素環式基を有する化合物は、例えば、下記スキーム１０に従って製造することができる。
スキーム１０：
【化４６】
【０１３１】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、５−ヒドロキシインドール誘導体または相当する５−アミノインドール誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いでそのアミノ基を、アルキル化剤（例えばヨウ化メチル）を用いてアルキル化するか、またはアシル化剤（例えば塩化アセチル）を用いてアシル化することにより（上記工程(ii)）、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１３２】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１１によっても製造することができる。
スキーム１１：
【化４７】
【０１３３】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシ−６−ニトロベンズアルデヒド誘導体または相当する５−アミノ−２−ニトロベンズアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いでそのホルミル基を還元する（上記工程(ii)）。次に、得られた化合物のニトロ基を還元して（上記工程(iii)）、そこにカルボニル化剤（例えばトリホスゲン）を作用させる（上記工程(iv)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３４】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１２によっても製造することができる。
スキーム１２：
【化４８】
【０１３５】
アニソール誘導体を、ルイス酸存在下酸クロリドと作用させ（上記工程(i)）、そのメトキシ基を脱保護する（上記工程(ii)）。次いで、これを、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において作用させる（上記工程(iii)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３６】
式（Ｉ）において、Ａがピリジン環、すなわち式(a3）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１３に従って製造することができる。
スキーム１３：
【化４９】
【０１３７】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシピリジン誘導体または相当する３−アミノピリジン誘導体を作用させる（上記工程(i)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３８】
あるいは、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシ−２−ピリジンカルボアルデヒド誘導体または相当する３−アミノ−２−ピリジンカルボアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(ii)）、次いでアルキル化剤（例えばメチルマグネシウムブロミド）を反応させる（上記工程(iii)）。次に、得られたアルコール性化合物を酸化する（上記工程(iv)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３９】
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物
本発明の他の好ましい態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物は、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットにおいてＴＧＦβ阻害活性を有することが確認されている下記の式（ＩＩ）で示される化合物またはその塩とされる：
【０１４０】
【化５０】
【０１４１】
｛上記式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【０１４２】
本発明の好ましい実施態様によれば、上記式（ＩＩ）の化合物としては、Ｒ１が、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１が５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を２個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２がＨ、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−ＰｈまたはＮＨ−Ｃ１−６アルキルであり；かつ
Ｒ３がＣＯ２Ｈ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキルチオ、ＳＯ２−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＯＮＨ２、ＣＯＮＨＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、またはＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルである）である化合物は除かれる。
【０１４３】
式（ＩＩ）の点線で示されている二重結合は、互変体環型の化合物を表す。Ｘ１またはＸ２のいずれかが炭素であるとき、この二重結合は炭素またはヘテロ原子のいずれかに対するものであり得ると理解される。Ｘ１およびＸ２の両者が炭素であるとき、この二重結合はＸ１またはＸ２のいずれかに対するものであり得る。Ｘ１およびＸ２の両者がヘテロ原子であるとき、この二重結合は置換されていないヘテロ原子に対するものである。
【０１４４】
好ましくは、Ｒ１は置換されていてもよいナフチルまたはフェニルである。より好ましくは、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオおよびフェニルからなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を２個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニル（＝Ｏにより置換されていてもよい）であり、例えば、Ｒ１は、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリニル、ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾリル、ベンゾ［１，２，５］チアジアゾリル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ［１，４］オキサジニル−３−オンまたはベンゾオキサゾリル−２−オンを表す。
【０１４５】
好ましくは、Ｒ２は水素以外のものである。Ｒ２が水素以外であるとき、それはピリジル環の窒素に対してオルトに位置するのが好ましい。Ｒ２は、好ましくはメチルである。
【０１４６】
好ましくは、Ｒ３はＣＯ２Ｈ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＮまたはテトラゾールである。
【０１４７】
好ましくは、Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ’であり、ここで、Ｒ”は水素、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルである（ただし、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方はＮまたはＮＲ”である）か、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮであり、他方がＯである。より好ましくは、Ｘ１およびＸ２の一方はＮであり、他方はＮＲ”である。
【０１４８】
好ましくは各Ｒ”は水素である。
【０１４９】
式（ＩＩ）の化合物は、好ましくは８００未満、より好ましくは６００未満の分子量を有する。
【０１５０】
式（ＩＩ）の具体的化合物としては、以下の化合物およびその塩が挙げられる：
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノール、
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−メチル−ベンズアミド、
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−メトキシ−ベンズアミド、
２−｛４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−［４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝−ピリジン、
［４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−フェノキシ］−酢酸、
４−［４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
６−［２−（４−シアノフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−キノキサリン、および
６−［２−（４−カルボキシアミドフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−キノキサリン。
【０１５１】
式（ＩＩ）の化合物の安定な塩としては、限定されるものではないが、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、および硝酸塩などの無機酸との塩、またはリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルミチン酸塩、サリチル酸塩、およびステアリン酸塩などの有機酸との塩が挙げられる。治療または医薬用途においては、これらの塩は薬学上許容されるものとすることが好ましい。
【０１５２】
式（ＩＩ）の化合物のいくつかは水性溶媒および有機溶媒などの溶媒から結晶化または再結晶させることができる。このような場合、溶媒和物を形成してもよい。前記溶媒和物には、水和物ならびに凍結乾燥などの過程で生じ得る種々の水分量を含んだ化合物をはじめとする化学量論溶媒和物が含まれる。治療または医薬用途においては、これらの溶媒和物は薬学上許容されるものとすることが好ましい。
【０１５３】
式（ＩＩ）の化合物の幾つかは、光学異性体、例えばジアステレオ異性体およびあらゆる比率での異性体混合物（例えば、ラセミ混合物）の形態で存在し得る。本発明では、このような総ての形態、特に純粋な異性体を用いることができる。種々の異性体は、常法によりあるものを他のものから分離または分割することもでき、あるいはいずれかの所定の異性体を従来の合成法または立体特異的または不斉合成により得ることもできる。
【０１５４】
式（ＩＩ）の化合物は医薬組成物としての使用が意図されることから、実質的に純粋な形態とすることが好ましく、例えば、少なくとも６０重量％の純度、より好ましくは少なくとも７５重量％の純度、さらに好ましくは少なくとも８５重量％の純度、さらに好ましくは少なくとも９８重量％の純度とされる。式（ＩＩ）の化合物の、医薬組成物で用いられるより純粋な形態を調製するために、純度の低い化合物調製物を用いてもよく、このような化合物調製物は、好ましくは少なくとも１重量％、より好ましくは少なくとも５重量％、さらに好ましくは１０〜５９重量％の式（ＩＩ）の化合物またはその誘導体を含んでいなければならない。
式（ＩＩ）の化合物において「Ｃ１−６アルキル」とは、単独であれ、より大きな基、例えばＣ１−６アルコキシの一部であれ、その鎖長が限定されない限り、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルをはじめとする、１〜６個の炭素原子の直鎖または分枝鎖の基を意味する。
【０１５５】
式（ＩＩ）の化合物において、Ｃ１−６ハロアルキル基は１以上のハロ原子、ＣＦ３をはじめとする特定のＣ１−６ハロアルキル基を含んでもよい。
【０１５６】
式（ＩＩ）の化合物において「ハロ」または「ハロゲン」とは、塩素、フッ素、ヨウ素および臭素元素に由来する基を意味するのに互換的に用いる。
【０１５７】
式（ＩＩ）の化合物において「シクロアルキル」とは、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルをはじめとする、好ましくは炭素３〜７個の環式基を意味するのに用いる。
【０１５８】
式（ＩＩ）の化合物において「アリール」とは、５〜１４員の置換または非置換芳香環、または限定されるものではないがフェニル、ナフチルをはじめ、二環もしくは三環を含む環構造を意味するのに用いる。
【０１５９】
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物の製造
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物は、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットに記載の方法に従って製造することができる。
【０１６０】
【実施例】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に記載の態様に限定されるものではない。
【０１６１】
例１：ＴＧＦβ阻害化合物の製造
化合物１：
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ベンズアミド
【０１６２】
【化５１】
国際公開第０１／７２７３７号パンフレットの「Example 17」に記載されている方法に従って、表題の化合物を合成した。
【０１６３】
化合物２：
｛４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−フェニル｝−メタノール
【０１６４】
【化５２】
【０１６５】
１−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（２．０４ｇ）、テレフタルアルデヒド酸メチル（１０ｍｌ）、酢酸アンモニウム（３．０８ｇ）をＴＨＦ／メタノール（１０ｍｌ／２ｍｌ）に溶解し、６０℃にて１８時間撹拌した。室温に冷却後、減圧下にて溶媒を留去し、残渣に炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をクロロホルム−メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸メチルを得た（１．７２ｇ、収率５６％）。
【０１６６】
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸メチル（１．７２ｇ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解し、−７８℃に冷却し、１Ｍ ＤＩＢＡＬ溶液（２０ｍｌ）をゆっくり加えた。−７８℃にて１時間撹拌した後、反応液に水を加えた。酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をクロロホルム−メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（１．５８ｇ、収率９９％）。
【０１６７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．４７（ｓ，３Ｈ），４．６３（ｓ，２Ｈ），５．９３（ｓ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６−７．０９（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．２９（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）： ３８６（Ｍ＋１）＋
【０１６８】
化合物３：
１−［２−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］−１−エタノン
【０１６９】
【化５３】
【０１７０】
４−クロロ−６，７−ジメトキシキノリン（１００ｍｇ）、４，５−ジメチル−２−ヒドロキシアセトフェノン（２２０ｍｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（１６４ｍｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（６ｍｌ）に懸濁し、１２０℃にて２４時間撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（３４ｍｇ、収率２２％）。
【０１７１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ）， ２．２６（ｓ，３Ｈ）， ２．４０（ｓ，３Ｈ）， ３．９７（ｓ，３Ｈ）， ３．９８（ｓ，３Ｈ）， ６．３３（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）：３５２（Ｍ＋１）＋
【０１７２】
化合物４：
４−［（２−ヨード−６−メチル−３−ピリジル）オキシ］−６，７−ジメトキシキノリン
【０１７３】
【化５４】
【０１７４】
４−クロロ−６，７−ジメトキシキノリン（２２９ｍｇ）、３−ヒドロキシ−２−ヨード−６−メチルピリジン（４８６ｍｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（３９０ｍｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（５ｍｌ）に懸濁し、１４０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、アセトン−クロロホルム系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（４７ｍｇ、収率１１％）。
【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．６２（ｓ，３Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）：４２３（Ｍ＋１）＋
【０１７６】
化合物５：
１−｛２−［７−（２−イミダゾール−１−イルエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノン
【０１７７】
【化５５】
【０１７８】
７−ベンジルオキシ−４−クロロ−６−メトキシキノリン（１．５０ｇ）、２−ヒドロキシ−４，５−ジメチルアセトフェノン（３．６３ｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．７１ｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（３０ｍｌ）に懸濁し、１２０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した後、クロロホルム層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、１−［２−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノンを得た（１．１０ｇ、収率３７％）。
【０１７９】
１−［２−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１．１０ｇ）をメタンスルホン酸（０．８５ｍｌ）とトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）の混合溶液に懸濁し、７０℃にて１．０時間撹拌した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣に水を加え、炭酸水素ナトリウム粉末で中和した後、クロロホルムで抽出した。次いで、クロロホルム層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、１−［２−（７−ヒドロキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１５０ｍｇ）および１−ブロモ−２−クロロエタン（７００ｍｇ）を得た（収率８３％）。
【０１８０】
１−［２−（７−ヒドロキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１５０ｍｇ）、１−ブロモ−２−クロロエタン（１９１ｍｇ）、炭酸カリウム（３０７ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に懸濁し、室温にて一晩撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、１−｛２−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノンを得た（１２２ｍｇ、収率６８％）。
【０１８１】
１−｛２−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノン（５２ｍｇ）、イミダゾール（４９ｍｇ）、炭酸カリウム（９０ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に懸濁し、８０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をメタノール−クロロホルム系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（２９ｍｇ、収率５２％）。
【０１８２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３−ｄ１，４００ＭＨｚ）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ， １Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｍ，２Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）： ４３２（Ｍ＋＋１）
【０１８３】
例２：化合物１〜５のＴＧＦβ阻害活性
J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998)に記載の方法に準じて、化合物１〜５のＴＧＦβシグナル抑制作用を評価した。
【０１８４】
具体的には、ルシフェラーゼ遺伝子の上流に、プロモーターとしてＴＧＦβシグナル伝達因子であるＳｍａｄの結合配列をタンデムに４個繋げたものをレポーター遺伝子（(SBE)4-Luc）として用いた。このレポーター遺伝子を、ヒト肺ガン上皮細胞（A549）（ATCCより入手可能）に導入して、安定的に発現可能な細胞株を構築した。
【０１８５】
この細胞に、被験化合物と、ＴＧＦβ−１（２ｎｇ／ｍｌ）とを添加して４時間培養した。なおここで被験化合物としては、前記例で合成した本発明による化合物をそれぞれ使用した。培養後、細胞のルシフェラーゼ活性を化学発光法（Steady Glo(商標） Luciferase assay system, プロメガ）により測定した。
【０１８６】
同様にして、ＴＧＦβのみを添加して細胞を培養した場合と、ＴＧＦβおよび被験化合物のいずれも添加しないで培養した場合（コントロール）とについてもルシフェラーゼ活性を測定した。
【０１８７】
これらの測定結果に基づいて、下記の式に従ってＴＧＦβ阻害率（％）を算出した。
【０１８８】
ＴＧＦβ阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×１００
［式中、Ａ、ＢおよびＣはそれぞれ下記を意味する：
Ａ： ＴＧＦβ１を添加し、かつ被験化合物は添加しない場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）
Ｂ： ＴＧＦβ１および被験化合物の両方を添加した場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）
Ｃ： ＴＧＦβ１および被験化合物を共に添加しない場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）］
【０１８９】
試験は、被験化合物の濃度３μＭおよび１０μＭの場合についてそれぞれ行った。
【０１９０】
結果は、表１に示されるとおりであった。
結果に示されるように、本発明による化合物がＴＧＦβの作用に拮抗する活性を有することが明らかとなった。
【０１９１】
【表１】
【０１９２】
例３：血管内皮細胞の細胞増殖に対するＴＧＦβ阻害化合物の促進作用
ＥＳ細胞から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を内皮細胞に分化させる過程においてＴＧＦβ阻害化合物を作用させ、血管内皮細胞の細胞増殖に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果を検討した。実験方法及び培養は、前述のYamashitaらの方法（Nature 408: 92-96, 2000）に従った。
【０１９３】
すなわち、1×104個のＥＳ細胞（クローン名：ＣＣＥ細胞）をＥＳ細胞分化用培地（αＭＥＭ (GIBCO)、５０μＭ ２−メルカプトエタノール (GIBCO) 、５０Ｕ／ｍｌ ペニシリン／ストレプトマイシン(GIBCO)、１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）） に懸濁後、10cm collagen IV-coated plate (IWAKI)上に播種し、５％ＣＯ２存在下、３７℃にて４日間培養を行った。４日後、分化したＦｌｋ−１陽性細胞を含む細胞集団より、PE-conjugatedマウス抗Ｆｌｋ−１抗体（Pharmingen）を結合させた後、ＭＡＣＳカラムを用いてＦｌｋ−１陽性細胞を分取した。こうして得た1×104個のＦｌｋ−１陽性細胞を、被験物質として化合物１（１μＭ）、化合物４（５μＭ）または化合物３（５μＭ）を含む血管分化用培地（αＭＥＭ、５０μＭ ２−メルカプトエタノール、５０Ｕ／ｍｌ ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％ＦＣＳ、３０ｎｇ／ｍｌ ＶＥＧＦ−Ａ (R&D)）に懸濁して、フィブロネクチンコートを行った２４穴組織培養用プレート（IWAKI）上に播種し、３７℃で３日間培養することにより内皮細胞へと分化させ、被験物質の効果を検討した。
【０１９４】
３日後、細胞の特徴付けのために以下の方法に従って免疫染色を実施した。細胞をプレートに固定化させるため、上清を吸引後、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を加え、室温で５〜１０分間静置した。細胞固定化後、ＰＢＳで２回洗浄し、０．３％Ｈ２Ｏ２／メタノールを加え、室温で２０〜３０分間静置し、脱色させた。脱色後、ＰＢＳで２回洗浄し、その後２％スキムミルク／ＰＢＳを加え、室温で３０分間静置し、ブロッキングを施した。その後、１次抗体として２％スキムミルクで２００倍に希釈したラット抗PECAM1抗体（Mec13.3: Pharmingen）及び３００倍希釈したマウス抗平滑筋アクチン−α（ＳＭＡ−α）抗体（1A4: Sigma）を加え、室温で２時間インキュベートした。２時間のインキュベート後、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、さらに２次抗体として２％スキムミルクでそれぞれ２００倍希釈したヤギ抗マウスIgG-HRP（Zymed）とヤギ抗ラットIgG-Alkali Phosphatase (AP)（Zymed）を加え、室温で２時間インキュベートした。２時間のインキュベート後、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、その後０．０２５％ＤＡＢを含むＰＢＳ−Ｔを加え、室温で１０〜２０分間静置した。ＳＭＡ−α染色用のＨＲＰ発色は、０．１５％Ｈ２Ｏ２／ＰＢＳ−Ｔを加えることによって行い、適当な発色（茶色）が得られたところでＰＢＳ−Ｔで２回洗浄し、反応を停止させた。さらに、NBT/BCIP stock solution（Roche）を含むＡＰ液（100mM Tris (pH9.5)、100mM NaCl、50mM MgCl2、5mM Levamisole）を加えることにより、ＡＰ染色（ＰＥＣＡＭ１用）を施した。適当な発色（紫色）が得られたところで、ＰＢＳ−Ｔで２回洗浄し、反応を停止させた。検体は、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて再度固定化させた後、保存した。
【０１９５】
その結果、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物の共存群では、いずれの化合物においても明確な細胞数の増加が認められた。骨格の異なる化合物で同じ結果が得られたことより、本作用はＴＧＦβ阻害化合物に共通の現象であることが示唆された。以上のことより、ＴＧＦβ阻害化合物は、血管内皮細胞の細胞増殖に対して促進的に働くことが明らかとなった。
【０１９６】
例４：ＴＧＦβ阻害化合物のもつ血管内皮細胞分化促進作用
ＥＳ細胞から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を内皮細胞に分化させる過程にＴＧＦβ阻害化合物を作用させ、ＴＧＦβ阻害化合物の血管内皮細胞分化に対する効果を検討した。実験方法及び培養は例３の方法に従って行ったが、ただし、後半の培養（血管分化用培地での培養）に供したＦｌｋ−１陽性細胞の細胞数は1×103個とした。被験物質としては化合物１を用い、後半の培養より終濃度１μＭで添加した。
【０１９７】
まず、例３によって得られた免疫染色データにより、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物共存下で培養したものは、紫で染色された内皮細胞コロニーが顕著に増加し、さらにそのコロニーも大きいことが分かる。
【０１９８】
次に、下記の表１は、本例における培養により出現したコロニーを、免疫染色データおよび形態に基づいて、３つの集団（シート状にコロニーを形成した血管内皮細胞群、分散してコロニーを形成した血管内皮細胞群、平滑筋コロニー群）に分類し、コロニーの内訳をまとめたものである。
【０１９９】
【表２】
【０２００】
表１から明らかなように、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物共存下で培養したものでは、シート状の血管内皮細胞のコロニー形成率が増加し、反対に分散型の血管内皮細胞コロニーおよび平滑筋コロニーの形成率が減少していた。この結果より、ＴＧＦβ阻害化合物には、平滑筋細胞への分化に比較し、血管内皮細胞への分化を促進させる作用があることが明らかとなった。
【０２０１】
例５：ＴＧＦβ阻害化合物の細胞間接着性亢進作用
例３により得られた培養細胞の写真を高倍率で拡大したところ、ＶＥＧＦのみで培養した血管内皮細胞シートでは、細胞と細胞の境界線が不鮮明であったのに対し、ＴＧＦβ阻害化合物を含む条件で培養した血管内皮細胞シートでは、細胞と細胞の境界線が明瞭であった。ＶＥＧＦ単独で培養した細胞での結果は、ＶＥＧＦ投与により形成された血管は脆弱で、血管透過性が高い（細胞間接着性が弱い）というin vivoでの知見と一致するものであった。一方で、ＴＧＦβ阻害化合物共存下における結果は、ＴＧＦβ阻害化合物が脆弱な（細胞間接着性が弱い）血管を正常化させることを示唆するものであった。
【０２０２】
例６：ＴＧＦβ阻害化合物添加によるClaudin5蛋白質の発現亢進
ＴＧＦβ阻害化合物として化合物１を用い、例３の実験条件に従って形成された４日目の内皮細胞シートに対し、抗Claudin5染色を実施した。免疫染色は例３の方法に従って行った。抗Claudin5抗体はZymedより入手したものを使用した。
【０２０３】
その結果、ＶＥＧＦのみで培養した内皮細胞シートの染色に比し、ＴＧＦβ阻害化合物添加により形成されたシートは強く染色され、顕著にClaudin5蛋白質が発現亢進していることが明らかとなった。このことより、例５で観察された血管内皮シート内の細胞間接着性亢進は、Claudin5の発現亢進を介したものであることが示唆された。
【０２０４】
例７：血管内皮前駆細胞培養に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果
ヒト末梢血単核球を血管内皮前駆細胞へ分化・増幅させる培養を行い、そこへＴＧＦβ阻害化合物を添加することにより、ＴＧＦβ阻害化合物の血管内皮前駆細胞の分化・増幅培養に対する効果を検討した。被験物質としては、化合物１、２、４および５を用いた。培養はKalkaらの方法（Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000）に従い、培養３日目から被験物質を添加した。
【０２０５】
すなわち、健常人ボランティアの末梢血２００ｍｌをリン酸緩衝生理食塩水で２倍に希釈した後、リンホプレップ（d=1.077；第一化学薬品社より購入）に重層して、密度勾配比重遠心（４００×ｇ、２５分間）を行い、単核球画分を得た。この画分をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄後、混入した赤血球を除くために溶血し、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。こうして得た単核球を５％のＦＣＳを添加したＥＧＭ−２培地（購入時に添付されてきたＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１、アスコルビン酸、およびＧＡ−１０００を添加。Clonetics社製）に懸濁して、あらかじめフィブロネクチンコートを行った２４穴組織培養用プレート（Falcon社製）に、５０００個/ｍｍ２、総培地量５００μｌとなるように播種し、５％ＣＯ２存在下、３７℃にて培養を開始した。被験物質は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；和光純薬社製）に溶解し、３日目に添加した（被験物質終濃度１０μＭ、ＤＭＳＯ終濃度０．０５％）。４日目に、接着していない細胞と培養上清を静かに除き、被験物質をそれぞれ１０μＭの濃度となるように懸濁した新しいＥＧＭ−２培地５００μｌを添加した。さらに、５％ＣＯ２存在下、３７℃にて３日間培養（計７日間培養）した後、培養上清を除き、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬ（１０μｇ／ｍｌ）（Molecular Probes社製）を溶解した新しいＥＧＭ−２培地を添加し、３７℃で２時間培養を行い、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬを取り込ませた。その後、上清を除去し、洗浄および固定化を行なった後、１００倍希釈したＦＩＴＣ標識化ＵＥＡ−１（Sigma社製）を添加し、室温で１時間反応させ、洗浄した。その後、それぞれのウェルを蛍光顕微鏡で観察した。陽性対照にはヒト臍帯静脈内皮細胞（Clonetics社より入手）を用い、陰性対照にBalb/c 3T3細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）より入手）を用いた。顕微鏡観察において、倍率２００倍で５視野観察し、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬの取り込みおよびＦＩＴＣ標識化ＵＥＡ−１染色の二重染色像が確認された紡錘形細胞を血管内皮前駆細胞として、その細胞数を数えた。
【０２０６】
結果を図１に示した。図１から明らかなように、被験物質はいずれも、１０μＭの濃度で血管内皮前駆細胞数を増加させた。
【０２０７】
例８：ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物のin vivo血管新生促進作用
ＴＧＦβ阻害化合物の血管新生に対する作用を評価するため、マトリゲル・プラグ・アッセイを実施した。１ｍｌのマトリゲル（BD Biosciences Bedford, MA）に４００ｎｇのhuman basic FGF（R&D）、５０μｇのheparin（アヴェンティス・ファーマ株式会社）および被験物質としての化合物１（終濃度１μＭ）（もしくはＤＭＳＯ）を氷上で加え、調製されたゲルをBL/6マウスの下腹部皮下に０．２ｍｌずつ注射した。６〜８日後、マトリゲル中に陥入した血管を実体顕微鏡で観察した。
【０２０８】
その結果、ｂＦＧＦ単独の対照と比較し、ＴＧＦβ阻害化合物を含むマトリゲル内において、顕著な血管数の増加が認められ、ＴＧＦβ阻害化合物に血管新生促進作用があることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、血管内皮前駆細胞の増幅培養に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞または細胞画分を、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる培地において培養することを含んでなる、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法。
【請求項２】
細胞または細胞画分がＦｌｋ−１＋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｆｌｋ−１＋細胞が胚幹細胞から得られたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
細胞または細胞画分が単核球画分である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
単核球画分が末梢血または臍帯血から得られたものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
末梢血がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
細胞または細胞画分がＣＤ３４＋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＣＤ３４＋細胞が末梢血または臍帯血由来の単核球画分から得られたものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
末梢血がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細胞または細胞画分がＡＣ１３３＋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＡＣ１３３＋細胞が末梢血または臍帯血由来の単核球画分から得られたものである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
末梢血がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
培地が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインをさらに含んでなるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
培地が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインを含んでなるものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
培地が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカイン、ならびにｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦを含んでなるものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（Ｉ）の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である、請求項１に記載の方法：
【化１】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化２】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化３】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化４】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化５】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化６】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【請求項１７】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である、請求項１に記載の方法：
【化７】
｛式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法により製造された血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１９】
虚血性疾患が、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患、および虚血性心疾患からなる群より選択されるものである、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項２１】
虚血性疾患が、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患、および虚血性心疾患からなる群より選択されるものである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインをさらに含んでなる、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインを含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカイン、ならびにｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦを含んでなる、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２０に記載の医薬組成物：
【化８】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化９】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化１０】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化１１】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化１２】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化１３】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【請求項２６】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２０に記載の医薬組成物：
【化１４】
｛式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【請求項２７】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる、血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物。
【請求項２８】
血管透過性の亢進を伴う疾患が、糖尿病性細小血管症、糖尿病性大血管症、血管性脳浮腫、細胞毒性脳浮腫、全身浮腫、網膜浮腫、肺水腫、および糖尿病からなる群より選択されるものである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２７に記載の医薬組成物：
【化１５】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化１６】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化１７】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化１８】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化１９】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化２０】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【請求項３０】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２７に記載の医薬組成物：
【化２１】
｛式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【請求項１】
細胞または細胞画分を、ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる培地において培養することを含んでなる、血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞の製造方法。
【請求項２】
細胞または細胞画分がＦｌｋ−１＋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｆｌｋ−１＋細胞が胚幹細胞から得られたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
細胞または細胞画分が単核球画分である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
単核球画分が末梢血または臍帯血から得られたものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
末梢血がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
細胞または細胞画分がＣＤ３４＋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＣＤ３４＋細胞が末梢血または臍帯血由来の単核球画分から得られたものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
末梢血がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細胞または細胞画分がＡＣ１３３＋細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＡＣ１３３＋細胞が末梢血または臍帯血由来の単核球画分から得られたものである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
末梢血がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを投与したヒトから得られたものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
培地が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインをさらに含んでなるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
培地が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインを含んでなるものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
培地が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカイン、ならびにｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦを含んでなるものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（Ｉ）の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である、請求項１に記載の方法：
【化１】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化２】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化３】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化４】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化５】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化６】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【請求項１７】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である、請求項１に記載の方法：
【化７】
｛式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法により製造された血管内皮前駆細胞または血管内皮細胞を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１９】
虚血性疾患が、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患、および虚血性心疾患からなる群より選択されるものである、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる、虚血性疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項２１】
虚血性疾患が、外傷、移植時の拒絶反応、虚血性脳血管障害、虚血性腎疾患、虚血性肺疾患、感染症に関連する虚血性疾患、四肢の虚血性疾患、および虚血性心疾患からなる群より選択されるものである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦα、ＨＧＦ、およびＩＧＦ−１からなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインをさらに含んでなる、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカインを含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｅからなる群より選択される少なくとも一種のサイトカイン、ならびにｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１およびＥＧＦを含んでなる、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２０に記載の医薬組成物：
【化８】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化９】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化１０】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化１１】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化１２】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化１３】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【請求項２６】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２０に記載の医薬組成物：
【化１４】
｛式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【請求項２７】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物を含んでなる、血管透過性の亢進を伴う疾患において血管透過性を改善するための医薬組成物。
【請求項２８】
血管透過性の亢進を伴う疾患が、糖尿病性細小血管症、糖尿病性大血管症、血管性脳浮腫、細胞毒性脳浮腫、全身浮腫、網膜浮腫、肺水腫、および糖尿病からなる群より選択されるものである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２７に記載の医薬組成物：
【化１５】
［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ２)ｍ−Ｒａで表し｛ここでＲａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲｂＲｃ（ＲｂおよびＲｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基を表し、ＲｂとＲｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲｄ基（ここでＲｄはＣ１−４アルキル基またはＣ１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化１６】
（上記式(a1)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルコキシ基、
Ｃ２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ３とＲ４、Ｒ４とＲ５、およびＲ５とＲ６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化１７】
（上記式において、
Ｒ８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル基、
Ｃ２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ９とＲ１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化１８】
（上記式(a2)において、
Ｒ３〜Ｒ６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ１１およびＲ１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ１１とＲ１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化１９】
（上記式(a3)において、
Ｒ１３〜Ｒ１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ１３とＲ１４、およびＲ１４とＲ１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化２０】
（上記式(a4)において、
Ｒ１７〜Ｒ２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ１−６アルキル基、
Ｃ１−８アルコキシ基、
Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル基、
Ｃ１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ１７とＲ１８、または、Ｒ２０とＲ２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ１８とＲ１９、または、Ｒ１９とＲ２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【請求項３０】
ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物が、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２７に記載の医薬組成物：
【化２１】
｛式中、Ｒ１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＳＯＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）ｎＮＨ２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、または（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ１およびＸ２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ１およびＸ２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【図１】
【公開番号】特開２００６−２１７８０１（Ｐ２００６−２１７８０１Ａ）
【公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００３−７５４７（Ｐ２００３−７５４７）
【出願日】平成１５年１月１５日（２００３．１．１５）
【出願人】（０００２５３５０３）麒麟麦酒株式会社 (247)
【出願人】（８９９００００２４）株式会社東京大学ＴＬＯ (50)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１月１５日（２００３．１．１５）
【出願人】（０００２５３５０３）麒麟麦酒株式会社 (247)
【出願人】（８９９００００２４）株式会社東京大学ＴＬＯ (50)
【Ｆターム（参考）】
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