【課題】新規な可逆的に終止されるリボヌクレオチド、および核酸を配列決定するためにこれらの新規なヌクレオチドを使用するための方法を提供すること。
【解決手段】本開示は、ＤＮＡ配列決定反応用の試薬として使用され得る、新規な可逆的に終止されるリボヌクレオチドを提供する。本開示のヌクレオチドを用いて核酸を配列決定する方法もまた、提供される。本発明の一局面は、式ＳＭ−ＢＡＳＥを有するリボヌクレオシドに関し、ここで、ＳＭはリボースであり、ＢＡＳＥはピリミジンまたはプリンであり、そしてこのリボースは、そのリボースの２’位に可逆的な鎖終止部分を含む。ＢＡＳＥは、例えば、アデニン、グアニン、シトシンまたはウラシルであり得る。 （もっと読む）

【課題】リコンビナーゼ−ポリメラーゼ増幅（ＲＰＡ）と称するＤＮＡの増幅方法を提供すること。
【解決手段】本開示において、リコンビナーゼおよび関連するタンパク質の特性を利用し、ＤＮＡポリメラーゼ反応の配列特異的なプライミングを可能にする単鎖相同性ＤＮＡを有する二本鎖ＤＮＡ侵入する、標的ＤＮＡのＲＰＡに関連する新規な方法を記載する。開示する方法は、熱サイクリングまたは好熱性酵素を必要とせず、したがって、他の増幅方法よりも容易で手ごろな実施および携帯性を提供するという利点を有する。さらに、ＲＰＡ反応のリアルタイムモニタリングを可能にする条件、光を用いてＲＰＡ反応を調節する方法、あるいは、増幅種の性質をゲル電気泳動の必要なく測定する方法、ＲＰＡ反応におけるシグナル対ノイズ比を改善および最適化する方法、ならびにオリゴヌクレオチドプライマー機能を最適化する方法等を開示する。 （もっと読む）

【課題】改善されたリコンビナーゼ依存性ＤＮＡ増幅方法を提供すること。
【解決手段】ＲＰＡと称するＤＮＡの増幅方法であって、以下の工程を含む。第１に、リコンビナーゼ因子を第１および第２の核酸プライマーと接触させ、第１および第２の核タンパク質プライマーを形成する。第２に、第１および第２の核タンパク質プライマーを二本鎖標的配列に接触させて、前記第１の鎖の第１の部分に第１の二本鎖構造を形成させ、そして前記第２の鎖の第２の部分に二本鎖構造を形成させ、前記第１の核酸プライマーおよび前記第２の核酸プライマーの３’末端が、所与の鋳型ＤＮＡ分子で互いに向かって配向される。第３に、前記第１および第２の核タンパク質プライマーの３’末端はＤＮＡポリメラーゼによって伸長され、第１および第２の二本鎖核酸ならびに核酸の第１および第２の被置換鎖を生成させる。最後に、第２および第３の工程を所望の増幅度に達するまで反復する。 （もっと読む）

本発明は、新規の、多様な、ハイブリッドおよび作成されたレコンビナーゼ酵素、ならびにＤＮＡ増幅アッセイを行うための、関連組換え因子をともなうそのような蛋白質の使用を、その特色とする。また、本発明は、ＤＮＡ増幅アッセイにおける異なる生化学的活性を有する異なるレコンビナーゼ「系」、ならびに負荷因子、一本鎖ＤＮＡ結合蛋白質（ＳＳＢ）、および使用される密集剤の量についての異なる要求も、その特色とする。さらに詳しくは、本発明は、Ｔ６、Ｒｂ６９、Ａｅｈｌ、およびＫＶＰ４０ハイブリッドおよび作成蛋白質の使用、およびそのような蛋白質のレコンビナーゼポリメラーゼ増幅アッセイにおける使用に関する。
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本開示は、ＤＮＡ配列決定反応用の試薬として使用され得る、新規な可逆的に終止されるリボヌクレオチドを提供する。本開示のヌクレオチドを用いて核酸を配列決定する方法もまた、提供される。本発明の一局面は、式ＳＭ−ＢＡＳＥを有するリボヌクレオシドに関し、ここで、ＳＭはリボースであり、ＢＡＳＥはピリミジンまたはプリンであり、そしてこのリボースは、そのリボースの２’位に可逆的な鎖終止部分を含む。ＢＡＳＥは、例えば、アデニン、グアニン、シトシンまたはウラシルであり得る。
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本開示において、リコンビナーゼおよび関連するタンパク質の特性を利用し、ＤＮＡポリメラーゼ反応の配列特異的なプライミングを可能にする単鎖相同性ＤＮＡを有する二本鎖ＤＮＡ侵入する、標的ＤＮＡのリコンビナーゼ−ポリメラーゼ増幅（ＲＰＡ）に関連する新規な方法を記載する。開示する方法は、熱サイクリングまたは好熱性酵素を必要とせず、したがって、他の増幅方法よりも容易で手ごろな実施および携帯性を提供するという利点を有する。さらに、ＲＰＡ反応のリアルタイムモニタリングを可能にする条件、光を用いてＲＰＡ反応を調節する方法、あるいは、増幅種の性質をゲル電気泳動の必要なく測定する方法、ＲＰＡ反応におけるシグナル対ノイズ比を改善および最適化する方法、オリゴヌクレオチドプライマー機能を最適化する方法、キャリーオーバー混入物を防除する方法、ならびに配列特異的第３の「特異性」プローブを用いる方法を開示する。
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