本発明は核酸の分析法を提供する。ポリメラーゼ反応の際に、二価金属イオンの非存在下では、核酸鋳型とヌクレオチドとポリメラーゼとの閉鎖複合体を形成できる。これを用いて、閉鎖複合体における次の鋳型ヌクレオチドと相補的な標識ヌクレオチドを捕捉する。標識を検出すれば、この次の正しいヌクレオチドを同定できる。同定は、複合体の一部としてその場で、或いは二価金属イオンの添加によって反応サイクルが完了したときに複合体から色素を溶出させる際に実施できる。こうして、ＤＮＡのヌクレオチドを順次同定し、ＤＮＡ配列を効率的に決定することができる。この方法は、１種類の鋳型核酸分子にも、ＰＣＲ産物又はクローンのような同一又は略同一の配列の集合体にも適用できる。多数の鋳型を（特に固体担体に固定化した場合）パラレルに配列決定することができる。 （もっと読む）

末端リン酸を標識したヌクレオチドの核酸ポリメラーゼの基質としての利用に基づいて試料の核酸を配列決定する方法を記載する。提供される方法は、末端リン酸に比色用色素、化学ルミネセンス部分若しくは蛍光部分、又は質量タグ若しくは電気化学的タグを結合させたヌクレオシドポリリン酸、ジデオキシヌクレオシドポリリン酸、又はデオキシヌクレオシドポリリン酸類似体を用いる。核酸ポリメラーゼが基質としてこの類似体を用いると、リン酸転移の無機ポリリン酸副生物に酵素賦活型標識が存在することになる。ホスファターゼによるリン酸転移のポリリン酸生成物の開裂から、ここに結合した標識に検出可能な変化を生ずる。幾つかの例では、標識ポリリン酸を標識を介して直接検出して、核酸についての情報を提供することができる。ポリメラーゼ検定がホスファターゼの存在下で行われる場合には、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成の実時間監視及び標的核酸の特性決定の簡便な方法が提供される。 （もっと読む）

本発明は、標識基質又は基質類似体を使用してターゲットを検出する改善方法に関する。本方法は、酵素触媒反応で基質又は基質類似体を反応させて、このような基質又は基質類似体が反応した場合にのみ独立に検出可能なシグナルを伴う標識成分を生じさせるステップを含む。本発明は特に、核酸ポリメラーゼのための基質として末端リン酸標識ヌクレオチドを使用することを元に、試料中の核酸を検出する方法を記載している。本発明により提供される方法は、末端リン酸に結合している比色染料、化学発光又は蛍光成分、質量タグ又は電気化学タグを有するポリリン酸ヌクレオシド、ポリリン酸ジデオキシヌクレオシド又はポリリン酸デオキシヌクレオシド類似体を利用する。核酸ポリメラーゼが基質としてこの類似体を使用すると、酵素活性可能な標識は、ホスホリル転移による無機ポリリン酸副産物に存在することになる。ホスファターゼによるホスホリル転移からのポリリン酸生成物の分解により、その上に結合している標識に検出可能な変化が生じる。ホスファターゼの存在下にポリメラーゼアッセイを行うと、ターゲット核酸のＤＮＡ又はＲＮＡ合成及び検出をリアルタイム監視するための簡便な方法が得られる。 （もっと読む）