アルキル連結ヌクレオチド組成物
アルキル連結ヌクレオチドを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物およびヌクレオチドアフィニティー媒体が提供されている。そのリンカーは、一般に、疎水性リンカーであり、これは、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれより長い炭素鎖であり得る。また、本発明には、アルキル連結ヌクレオチド、ヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する方法、およびそれらをアフィニティークロマトグラフィーに使用する方法およびスクリーニング方法が含まれる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ヌクレオチドアフィニティー媒体およびそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
アフィニティークロマトグラフィーで使用する配位子（例えば、ヌクレオチド）を調製する以前の方法は、典型的には、そのプリン環上のＮ６アミノ基を解して、またはリボース部分の水酸基を経由して、そのヌクレオチドを固体マトリックスとカップリングする。しかしながら、これらの配位子は、通常、この固体マトリックス上の配位子の立体障害または配向のために、アフィニティークロマトグラフィーに常に有効な配位子ではない。タンパク質（例えば、キナーゼ）を結合する一部のヌクレオチドの分子構造の研究は、これらの発見を裏付けている。
【０００３】
最近では、代替的な方法において、ヌクレオチドであるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は、アミノフェニル部分を経由して、ＡＴＰのガンマ−リン酸基を通って、間接的にアフィニティー樹脂にカップリングされた。ＡＴＰのガンマ−リン酸に結合されたアミノフェニル基を経由した樹脂へのＡＴＰの結合は、初期のヌクレオチドアフィニティー媒体よりも有利である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、依然として、アフィニティークロマトグラフィー方法およびスクリーニング方法で使用するのに適当なヌクレオチドアフィニティー媒体の合成にさらに効率的な方法を開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、アルキル連結ヌクレオチド組成物（これには、アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体）に関する：
１実施態様では、アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を有する：
【０００６】
【化２３】
【０００７】
ここで：Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１のいずれかであり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換または非置換基またはそれらの基の組合せであり、該置換または非置換基は、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基から選択される；Ｒ２は、置換または非置換基またはそれらの基の組合せであり、該置換または非置換基は、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基またはヘテロアリール基から選択される；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。
【０００８】
また、本発明には、アルキル連結ヌクレオチド組成物を合成する方法が含まれ、該組成物は、アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体を含有し、該アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体は、以下の一般式を有する：
【０００９】
【化２４】
【００１０】
該方法は、以下の一般工程を包含する：（ａ）適当なカップリング緩衝液中にて、少なくとも１個のリンカーを固体支持体またはタグにカップリングする工程であって、ここで、該リンカーは、Ｒ２またはＲ１とＲ２との組合せであり；（ｂ）該カップリング工程後、該固体支持体に残っている反応性部位を末端キャップ化する工程；および（ｃ）ヌクレオチドの末端ホスフェートまたはチオホスフェート基を、該固体支持体またはタグにカップリングした該リンカーと反応させる工程であって、ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。
【００１１】
また、本発明には、試験化合物をスクリーニングする方法が含まれ、該方法は、以下の工程を包含する：（ａ）プロテオームを、以下の一般式を含むヌクレオチドアフィニティー媒体と接触させる工程：
【００１２】
【化２５】
【００１３】
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１であり；（ｂ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体を緩衝液で洗浄し、それにより、該プロテオームの非特異的に結合した成分を該ヌクレオチドアフィニティー媒体から溶出しそして該プロテオームの特異的成分は、該ヌクレオチドアフィニティー媒体に結合したままである工程；（ｃ）該プロテオームの特異的成分に結合した該ヌクレオチドアフィニティー媒体を少なくとも１種の試験化合物と接触させる工程；（ｄ）該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該ヌクレオチドアフィニティー媒体成分を溶出する工程；および（ｅ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体から該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該成分を同定する工程。
【００１４】
本明細書中で記述したアルキル連結ヌクレオチド組成物およびアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体は、例えば、プロテオームまたは組合せライブラリをスクリーニングするために、また、化合物（例えば、タンパク質）を精製するために、アフィニティークロマトグラフィー方法における、例えば、アフィニティー配位子として、特に有用である。さらに、本発明は、以前に達成されたものよりも、このようなアルキル連結ヌクレオチドおよびヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する効率的な方法を包含する。
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明の特徴および他の詳細は、本発明の工程として、または本発明の一部の組合せとして、いずれかとして、今ここで、さらに詳しく記述し、そして請求の範囲で指摘する。本発明の特定の実施態様は、本発明の限定ではなく例示の目的で示されていることが分かる。本発明の原則的な特徴は、本発明の範囲から逸脱することなく、種々の実施態様で使用できる。
【００１６】
本発明は、以下の一般式を含むアルキル連結ヌクレオチド組成物に関する：
【００１７】
【化２６】
【００１８】
ここで、Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。
【００１９】
このような置換アルキル基または非置換アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、およびそれらの組合せは、当業者が理解しているように、直鎖または分枝鎖であり得る。
【００２０】
本明細書中で使用する「ヘテロアリール」との用語は、少なくとも１個の芳香環構造を含むアルキル基であり、ここで、該芳香環の少なくとも１個の原子の１個またはそれ以上は、炭素以外の元素（例えば、イオウ、窒素または酸素）である。ヘテロ芳香族化合物の例には、ピリジン、ピリミジン、オキサゾール、キノリン、チオフェンおよびフランが挙げられる。
【００２１】
ヘテロ原子（Ｋ）は、好ましくは、窒素原子（Ｎ）、酸素原子（Ｏ）またはイオウ原子（Ｓ）である。好ましくは、このヘテロ原子（Ｋ）は、窒素原子である。
【００２２】
アルキル連結ヌクレオチドはまた、本明細書中にて、配位子またはアフィニティー配位子と呼ばれている。
【００２３】
固体支持体またはタグがアルキル連結ヌクレオチドがアルキル連結ヌクレオチドの分離に適当であるように、この固体支持体またはタグには、アルキル連結ヌクレオチドが結合され、必要に応じて、未結合化合物からアルキル連結ヌクレオチドに結合された化合物（例えば、タンパク質）はまた、本明細書中にて、「ヌクレオチドアフィニティー媒体」または「アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体」と呼ばれている。
【００２４】
固体支持体（Ｙ）は、任意の適当な支持体、例えば、樹脂または特定の物質（例えば、ビードまたは粒子）であり得る。あるいは、固体支持体は、連続固体表面（例えば、プレート、チップ、ウェル、チャンネル、カラムまたはチューブ）であり得る。固体支持体の材料は、当業者が理解するように、任意の適当な物質、化合物または重合体である。例には、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロース、ポリスチレン、熱応答性重合体（例えば、Ｌｅｅら（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６２：３０１−３１１；Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９６）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２９：８９８７−８９；およびＯｓａｄａ ａｎｄ Ｋｈｏｋｈｌｏｖ著（２００１）Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｇｅｌｓ ａｎｄ Ｎｅｔｗｏｒｌａ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている）およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
１実施態様では、固体支持体（Ｙ）は、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂である。ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）は、アクリルアミド樹脂であり、これは、アリルデキストランを架橋モノマーＮ，Ｎ’−メチレン−ビスアクリルアミドと重合することにより、生成される。
【００２６】
他の実施態様では、固体支持体（Ｙ）は、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂である。ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）は、メタクリレート誘導体であり、これは、メタクリル酸グリシジル、ペンタエリスリトールジメチルメタクリレートおよびポリエチレングリコールを共重合することにより、生成される。
【００２７】
１実施態様では、固体支持体（Ｙ）は、ビーズ状にしたアガロースである。適当なビーズ状アガロースの一例には、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースがある。ビーズ状アガロース（例えば、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース）は、例えば、当業者が理解するように、架橋調製物であり得る。架橋調製物は、一般に、良好な化学的および物理的安定性を有することが認められている。適当な固体支持体の選択は、固体支持体の公知の特性および固体支持体を使用する方法から、当業者に明らかである。アガロースは、以下の基本的な構造を有する直鎖重合体である：
【００２８】
【化２７】
【００２９】
ここで、ｖは、少なくとも１である。アガロースのこの基本的な構造の異形は、当業者に認められている。固体支持体（例えば、アガロース）の調製および使用は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ ａｎｄ Ａｎｆｉｎｓｅｎ，「Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」 ｉｎ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｎｅｌｌら著（ＣＡ：Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｎｃ．），４０：２５９−２７８（１９７１）を参照；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）。
【００３０】
本明細書中で使用するタグとは、このアルキル連結ヌクレオチドの明確な検出または捕捉用に提供された試薬である。例えば、限定するものではないが、適当なタグには、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン、蛍光体または発色団がある。このアルキル連結ヌクレオチドの検出または捕捉は、当該技術分野で標準的な技術を使用する。例えば、ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドは、アビジン、ストレプトアビジンまたは関連したアビジン誘導体を使用して、捕捉できる。このビオチン−アビジン相互作用は、非常に特異的である。ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドを検出または捕捉するのに使用されるアビジン共役試薬は、溶解性（例えば、抗体）であり得るか、または微粒子物質（例えば、ビーズ状アガロースまたは磁化粒子）または連続表面（例えば、アビジンで被覆したプレートまたはウェル）であり得る。ハプテンで標識したアルキル連結ヌクレオチドの検出および捕捉は、例えば、ハプテン特異的抗体を使用して、達成できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的検出方法は、当業者に容易に理解できる。
【００３１】
保護基は、当該技術分野で周知であり、そして標準的である。保護基の選択は、その反応性基の特性、その化合物を使用する条件および望ましい機能に依存している。これらは、当業者に容易に理解できる（一般に、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」 Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ著（ＮＹ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）３版（１９９９）を参照；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）。保護基は、反応性基（例えば、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、カルボニル基、スルフヒドリル基およびホスフェート基）を選択的に保護するのに使用される。
【００３２】
Ｒ１は、共有結合であり得るか、またはＲ１が共有結合ではないとき、Ｒ１はまた、本明細書中にて、リンカーまたはリンカーアームと呼ばれる。Ｒ２はまた、本明細書中にて、リンカーまたはリンカーアームと呼ばれる。リンカーは、任意の適当なアルキル、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、置換、非置換、直鎖または分枝基、またはそれらの組合せから選択できる。一般に、このリンカーは、疎水性リンカーである。例えば、このリンカーは、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれより長い炭素鎖であり得る。さらに、本発明で使用されるリンカーは、当業者が理解するように、非常に疎水性または中程度に疎水性であり得る。あるいは、疎水性リンカーが使用できる。
【００３３】
１実施態様では、Ｒ１は、以下を含む：
【００３４】
【化２８】
【００３５】
ここで、Ｑ＝０またはＮＨ２＋である。
【００３６】
他の実施態様では、Ｒ１は、以下を含む：
【００３７】
【化２９】
【００３８】
ここで、Ｑ＝ＯまたはＮＨ２＋であり；Ｒ４は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；そしてＲ５は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００３９】
１実施態様では、Ｒ２は、以下を含む：
【００４０】
【化３０】
【００４１】
ここで、Ｒ３は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００４２】
適当なリンカーの例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００４３】
【化３１】
【００４４】
【化３２】
【００４５】
さらに、リンカー（例えば、上記のもの）は、（例えば、縮合反応を介して）、他のリンカーに結合でき、さらに大きいおよび／または長いリンカーを形成する。例えば、リンカーは、直鎖配置でのリンカーの直列合成により、形成できる。これは、例えば、以下のように表わすことができる：
（Ｙ）ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｋ−Ｒ７−Ｚ
ここで、Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１であり；Ｌ１およびＬ２は、リンカー（例えば、上記例で提供されたもの）であり、それらは、同一または異なるリンカーであり得る；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体である。上記例で示されているように、２個のリンカーは、直列に合成できるが、しかしながら、２個、３個またはそれ以上のリンカーを直列に合成できることが分かる。あるいは、分枝配置のリンカーが合成できる。この場合もやはり、これらのリンカーは、同一または異なり得る。異なるリンカーは、当業者が理解しているように、それらの異なる疎水性または親水性に従って、選択できる。
【００４６】
それに加えて、またはその代わりに、例えば、Ｙが固体支持体のとき、１種より多い種類のリンカーにより、Ｙには、１個より多いヌクレオチドが結合できる。
【００４７】
この場合もやはり、当業者が理解しているように、それらの異なる疎水性または親水性に従って、選択できる。それゆえ、例えば、Ｙが固体支持体のとき、類似または異なる疎水性（または親水性）を有するリンカーにより、この固体支持体には、１個より多いヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体（これは、同一のヌクレオチドまたは異なるヌクレオチド（例えば、ＡＴＰのみ、またはＡＭＰおよびＡＤＰの混合物など））に結合できる。これらのアフィニティー媒体に適当な合成方法の例は、実施例で提供されている。
【００４８】
本発明のある実施態様では、Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェート基またはチオホスフェート基であり、そしてｎ≧１である。使用され得る適当なホスフェート基またはチオホスフェート基の例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００４９】
【化３３】
【００５０】
当業者が理解するように、ホスフェート基またはチオホスフェート基はまた、イオン化変異体または塩形状で存在できる。本発明のある実施態様では、ｎは、≧１、≧２、≧３または≧４である。例えば、ｎは、１、２、３または４であり得る。ｎ≧１のとき、ホスフェート基またはチオホスフェート基の任意の組合せが使用され得る。
【００５１】
本発明の他の実施態様では、Ｒ７は、ホスフェート基模倣物である。例えば、ある実施態様では、Ｒ７は、その主鎖に４個〜８個の炭素を含有し必要に応じてヘテロ原子を含有するカルボン酸である。適当なカルボン酸の例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００５２】
【化３４】
【００５３】
従って、ある実施態様では、これらのアルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下から選択される一般式を有する：
【００５４】
【化３５】
【００５５】
【化３６】
【００５６】
本発明に従って使用され得る他のホスフェート基には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００５７】
【化３７】
【００５８】
ここで、ＶおよびＷは、Ｈまたはヘテロ原子（例えば、ＮＨ２またはＯＨ）であり得る；
【００５９】
【化３８−１】
【００６０】
ここで、ＶおよびＷは、Ｈまたはヘテロ原子（例えば、ＮＨ２またはＯＨ）であり得る；
【００６１】
【化３８−２】
【００６２】
ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書中で述べるように、天然に生じるか天然に生じないものであり得る。さらに、このヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業者に標準的な技術を使用して、生物学的または合成的に誘導できる。適当なヌクレオシドには、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）およびそれらの誘導体および類似物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
ヌクレオチドは、少なくとも１個のホスフェート基（またはチオホスフェート基）（例えば、モノホスフェート基、ジホスフェート基またはトリホスフェート基）を有するヌクレオシドである。このヌクレオチドは、ホスフェート基またはチオホスフェート基、または両者の組合せを有し得る。ホスフェート基またはチオホスフェート基の数は、少なくとも１個であり、１個、２個、３個またはそれ以上であり得る。このようなヌクレオチドは、しばしば、当業者が理解するように、略語（例えば、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、ＧＭＰ、ＧＤＰ、ＧＴＰなど）で呼ばれる。
【００６４】
１実施態様では、このヌクレオチドは、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンまたはウリジンのモノホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートである。
【００６５】
ヌクレオシドおよびヌクレオチド誘導体および類似物もまた、本発明に含まれる。ヌクレオシド誘導体および類似物の単離または合成は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、達成される：
【００６６】
【表１】
【００６７】
【表２】
【００６８】
これらの全ての教示内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【００６９】
１実施態様では、本発明は、アルキル連結アデノシンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７０】
【化３９】
【００７１】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００７２】
他の１実施態様では、本発明は、アルキル連結グアノシンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７３】
【化４０】
【００７４】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００７５】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結チミジンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７６】
【化４１】
【００７７】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００７８】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結シチジンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７９】
【化４２】
【００８０】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００８１】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結ウリジンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００８２】
【化４３】
【００８３】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００８４】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結アデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００８５】
【化４４】
【００８６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００８７】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結グアノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００８８】
【化４５】
【００８９】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９０】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結チミジンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００９１】
【化４６】
【００９２】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９３】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結シチジンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００９４】
【化４７】
【００９５】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９６】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結ウリジンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００９７】
【化４８】
【００９８】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９９】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２’−デオキシアデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１００】
【化４９】
【０１０１】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１０２】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結３’−デオキシアデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１０３】
【化５０】
【０１０４】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１０５】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２’−デオキシ−２’−アミノ−アデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１０６】
【化５１】
【０１０７】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１０８】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結３’−デオキシ−３’−アミノ−アデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１０９】
【化５２】
【０１１０】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１１１】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結アデノシン誘導体であるＡｒｉｓｔｅｒｏｍｙｃｉｎを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１１２】
【化５３】
【０１１３】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１１４】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結ＡＴＰ誘導体であるＮｅｐｌａｎｏｃｉｎを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１１５】
【化５４】
【０１１６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１１７】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２’，３’−ジデオキシ−３’−オキソアデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１１８】
【化５５】
【０１１９】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１２０】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２−、６−または８−置換アデノシン誘導体を包含する。これらの置換アデノシン誘導体は、それらの対応する臭化物（その２位置および８位置に対して）または塩化物（その６位置に対して）と適当なアミン（これには、例えば、アリルアミン、ベンジルアミン、ｔ−ブチルアミン、２−メトキシエチルアミンおよびジエチルアミンが挙げられる）とを縮合することにより、製造できる。例えば、Ｈａｌｂｆｉｎｇｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：５３２５−３７およびｖａｎ Ｔｉｌｂｕｒｇら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：１３９３−４００を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている。アルキル連結８−置換アデノシンの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１２１】
【化５６】
【０１２２】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり、そしてＲ９は、アミンである。
【０１２３】
追加実施態様では、本発明は、アルキル連結ホルマイシンＡを包含する。アルキル連結ホルマイシンＡの一例は、以下で示す：
【０１２４】
【化５７】
【０１２５】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１２６】
追加実施態様では、本発明は、アルキル連結４−デアザホルマイシンを包含する。４−デアザホルマイシンＡの合成は、Ｋｏｕｒａｆａｌｏｓら（２００３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：６４６６−６９で記述されており、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。アルキル連結４−デアザホルマイシンＡの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１２７】
【化５８】
【０１２８】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１２９】
ある実施態様では、本発明は、アザまたはデアザアデノシン誘導体を包含する。８−アザ、８−アザ−１−デアザ、８−アザ−３−デアザ、１−デアザ、３−デアザおよび１，７−デアザアデノシン誘導体の合成は、Ｆｒａｎｃｈｅｔｔｉら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７，３５３４およびＳｅｅｌａら（１９９１）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ７４：１０４８で記述されている。これらの誘導体は、糖ハロゲン化物であるβ−ｄ−リボフラノース−１−アセテート−２，３，５−トリベンゾエート（Ｋｒａｙｂｉｌｌら（２００２）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２４：１２１１８およびＳａｎｅｙｏｓｈｉら（１９７９）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２７：２５１８を参照）およびＳｎＣｌ４と反応されて、追加アデノシン誘導体を形成できる。このような１誘導体の一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３０】
【化５９】
【０１３１】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１３２】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結プリンリボシドを包含する。アルキル連結プリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３３】
【化６０】
【０１３４】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１３５】
本発明はまた、アルキル連結６−メルカプトプリンリボシドを提供する。アルキル連結６−メルカプトプリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３６】
【化６１】
【０１３７】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１３８】
本発明はまた、アルキル連結６−クロロプリンリボシドを提供する。アルキル連結６−クロロプリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３９】
【化６２】
【０１４０】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１４１】
本発明はまた、アルキル連結６−メチルプリンリボシドを提供する。この６−メチルプリンリボシドは、６−クロロプリンリボシドとグリニャール試薬である塩化メチルマグネシウムとを反応させて６−メチルプリンリボシドを得ることにより、合成され得る（Ｈｏｃｅｋ ａｎｄ Ｄｖｏｒａｋｏｖａ（２００３）Ｊ：Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ．６８：５７７３−６であって、その内容は、本明細書中で参考として援用されている）。アルキル連結６−メチルプリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１４２】
【化６３】
【０１４３】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１４４】
他の実施態様では、本発明は、そのリボース基をリボース模倣物で置き換えたアルキル連結アデノシン誘導体を包含する。このようなアルキル連結誘導体の一般構造の一例は、以下である：
【０１４５】
【化６４】
【０１４６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり、そしてＲ８は、リボース模倣物である。ある実施態様では、このリボース模倣物は、アルキル基、Ｃ４〜Ｃ７シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、アリールまたはヘテロアリール基である。例えば、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４２５４−６３を参照（その内容は、本明細書中で参考として援用されている）。他の適当なリボース模倣物の例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【０１４７】
【化６５】
【０１４８】
【化６６】
【０１４９】
他の実施態様では、これは、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結ヌクレオチドである：
【０１５０】
【化６７】
【０１５１】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１５２】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結グアノシンを包含する：
【０１５３】
【化６８】
【０１５４】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１５５】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結グアノシンを包含する：
【０１５６】
【化６９】
【０１５７】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１５８】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結シチジンを包含する：
【０１５９】
【化７０】
【０１６０】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１６１】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結チミジンを包含する：
【０１６２】
【化７１】
【０１６３】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１６４】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結ウリジンを包含する：
【０１６５】
【化７２】
【０１６６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１６７】
また、本発明には、以下の一般式を含むγ−アルキル連結ヌクレオチド三リン酸が含まれる：
【０１６８】
【化７３】
【０１６９】
【化７４】
【０１７０】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１７１】
また、本発明には、以下の一般式を含むγ−アルキル連結ヌクレオチド類似物が含まれる：
【０１７２】
【化７５】
【０１７３】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結アデノシン三リン酸を包含する：
【０１７４】
【化７６】
【０１７５】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１７６】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結グアノシン三リン酸を包含する：
【０１７７】
【化７７】
【０１７８】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１７９】
他の実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結シチジン三リン酸を包含する：
【０１８０】
【化７８】
【０１８１】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１８２】
さらに他の実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結チミジン三リン酸を包含する：
【０１８３】
【化７９】
【０１８４】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１８５】
他の実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結ウリジン三リン酸を包含する：
【０１８６】
【化８０】
【０１８７】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１８８】
（アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体の合成）
また、本発明には、以下の一般式を含むアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する方法が含まれる：
【０１８９】
【化８１】
【０１９０】
該方法は、以下の一般工程を包含する：（ａ）適当なカップリング緩衝液中にて、少なくとも１個のリンカーを固体支持体またはタグにカップリングする工程であって、ここで、該リンカーは、Ｒ２またはＲ１とＲ２との組合せであり；（ｂ）該カップリング工程後、該固体支持体に残っている反応性部位を末端キャップ化する工程；および（ｃ）ヌクレオチドの末端ホスフェートまたはチオホスフェート基を、該固体支持体またはタグにカップリングした該リンカーと反応させる工程であって、ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基またはそれらの組合せの間の共有結合であり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。本明細書中の他の箇所で記述したように、固体支持体は、任意の適当な支持体、例えば、樹脂または特定の物質（例えば、ビードまたは粒子）であり得る。あるいは、固体支持体は、連続固体表面（例えば、プレート、チップ、ウェル、チャンネル、カラムまたはチューブ）であり得る。固体支持体の材料は、当業者が理解するように、任意の適当な物質、化合物または重合体である。例には、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロース、ポリスチレンおよびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
さらに、本明細書中で使用するタグとは、このアルキル連結ヌクレオチドの明確な検出または捕捉用に提供された試薬である。例えば、限定するものではないが、適当なタグには、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン、蛍光体または発色団がある。このアルキル連結ヌクレオチドの検出または捕捉は、当該技術分野で標準的な技術を使用する。例えば、ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドは、アビジン、ストレプトアビジンまたは関連したアビジン誘導体を使用して、捕捉できる。このビオチン−アビジン相互作用は、非常に特異的である。ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドを検出または捕捉するのに使用されるアビジン共役試薬は、溶解性（例えば、抗体）であり得るか、または微粒子物質（例えば、ビーズ状アガロースまたは磁化粒子）または連続表面（例えば、アビジンで被覆したプレートまたはウェル）であり得る。ハプテンで標識したアルキル連結ヌクレオチドの検出および捕捉は、例えば、ハプテン特異的抗体を使用して、達成できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的検出方法は、当業者に容易に理解できる。
【０１９２】
ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書中で述べるように、天然に生じるか天然に生じないものであり得る。さらに、このヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業者に標準的な技術を使用して、生物学的または合成的に誘導できる。適当なヌクレオシドには、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９３】
１実施態様では、このヌクレオチドは、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンまたはウリジンまたはそれらの類似物の一リン酸、二リン酸、三リン酸または四リン酸である。ある実施態様では、このヌクレオチドのホスフェート部分は、変性されている。例えば、Ｐｉｃｈｅｒら（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５１：１４５３−６０；Ｉｎｇａｌｌら（ｌ９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：２１３−２０；Ｇｅｎｄｒｏｎら（２０００）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：２２３９−４７；およびＸｕら、（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：５６９４−７０９を参照（これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている）。
【０１９４】
他の実施態様では、このヌクレオチドのホスフェート部分は、ホスフェート基模倣物で置き換えられている。例えば、ある実施態様では、これらのアルキル連結ヌクレオチド組成物は、その主鎖に４個〜８個の炭素を含有し必要に応じてヘテロ原子を含有するカルボン酸を含む。これらのヌクレオチド誘導体を製造するには、２’，３’−イソプロピリデンアデノシンは、環状無水物と反応され、次いで、そのアセトニドは、脱保護される。２’，３’−イソプロピリデンと反応され得る環状無水物の例には、無水ジグリコール酸、無水コハク酸、無水グルタル酸および無水マレイン酸が挙げられるが、任意の適当な求電子試薬は、使用され得る。アデノシンの５’−ヒドロキシルの官能基はまた、フタルイミドとの光延反応に続いてヒドラジン分解により、第一級アミンに変換され得る。例えば、Ｂｒｅｓｓｉら（２００１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４：２０８０−９３およびＨｅｒｆｏｒｔｈら（２００２）Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．４：３０２−１４を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０１９５】
他のホスフェート基模倣物は、本発明に従って、使用され得る。例えば、ＡＴＰ類似物は、２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンと４−クロロスルホニル安息香酸とを反応させて次式を有するＡＴＰ類似物を得ることにより、製造できる：
【０１９６】
【化８２】
【０１９７】
このベンゼン環は、水酸基またはアミン基で置換できる。例えば、Ｒｏｓｓｅら（１９９７）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．８０：６５３を参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０１９８】
他の例では、２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンは、塩化スルファモイルと反応され、そのスルホンアミドは、カルボン酸と共役され（例えば、マロン酸ベンジルまたはマロン酸ｔ−ブチル）、次いで、１段階または２段階で脱保護されて、以下の構造を有するＡＴＰ類似物が得られる：
【０１９９】
【化８３】
【０２００】
マロン酸ｔ−ブチルとの共役の後、１段階だけの酸性脱保護が実行される。マロン酸ベンジルとの共役の後、そのベンジル基の触媒水素化およびアセトニド基の酸性開裂が実行される。モノ保護マロネートに加えて、モノ保護スクシレートまたはグルタメートが使用できる。それに加えて、このスルホンアミドは、他の求電子試薬（例えば、ブロモ酢酸）と反応されて、ホスフェート基模倣物を得ることができる。このスルホンアミドをリンカーに連結するには、アミノ酸もまた、使用できる。Ｋｏｒｏｎｉａｋら（２００３）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９３：１４５を参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２０１】
さらに他の例では、ＡＴＰ類似物は、アデノシン−５’−カルボン酸をβ−アラニンと共役して以下の構造を有するＡＴＰ類似物を形成することにより、製造される：
【０２０２】
【化８４】
【０２０３】
他のアミノカルボン酸は、使用できる。それに加えて、アデノシン−５’−カルボン酸は、アミノ酸またはペプチドと共役できる。Ｌｏｏｇら（２０００）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４８０：２４４；およびＰａｒａｎｇら（２００２）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９３：１４５を参照；これらの両方の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２０４】
本発明のアルキル連結ヌクレオチド組成物で使用され得るホスフェート基模倣物の他の非限定的な例には、以下が挙げられる：
【０２０５】
【化８５−１】
【０２０６】
ここで、ＶおよびＷは、ヘテロ原子（例えば、ＮＨ２またはＯＨ）であり得る：
【０２０７】
【化８５−２】
【０２０８】
このアルキル連結ヌクレオチドのリボース部分は、変性または置換され得る。例えば、４−ペンテン−１−オールの酸化およびアセトニド保護により、中間体が得られ、これは、古典的な光延条件下にて、このアデノシンと反応できる。アルコールとアデノシンＮ９との間の光延反応は、十分に確立されている。例えば、Ｃｈａｎｇら（１９９９）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：３６１−７５。次いで、このアセトニドを脱保護すると、リン酸化および樹脂リンカーアームの組合せとの結合の準備となる第一配位子が生じる。同じ中間体の第一級アルコールはまた、そのアルデヒドに酸化でき、続いて、アセトニド脱保護および閉環される。第二級ヒドロキシルよりも第一級ヒドロキシルを選択的に保護し、光延反応し、そして第一級ヒドロキルシを脱保護すると、第二配位子が得られる。
【０２０９】
本発明の組成物中で使用され得るヌクレオシド類似物の非限定的な例には、２’−デオキシ−アデノシン、３’−デオキシ−アデノシン、２’−デオキシ−２’−アミノ−アデノシン、３’−デオキシ−３’−アミノ−アデノシン、ホルマイシンＡ、４−デアザホルマイシンＡ、アリステロマイシン、ネプラノマイシンＡ、プリンリボシド、６−メルカプトプリンリボシド、６−クロロプリンリボシド、６−メチルプリンリボシドおよび２’、３’−ジデオキシ−３’−オキソアデノシンが挙げられる。例えば、Ｇｕｒａｎｏｗｓｋｉら（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０：１１０；Ｙａｇｉｎｕｍａら（１９８１）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２３：３５９；Ｒｏｂｉｎｓら（１９８３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０５：４０５９；Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（１９８４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９：５３５３；Ｄｅ Ｃｌｅｒｑら（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３６：２５６７；Ｈｕｒｙｎら（１９８９）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３０：６２５９；Ｆｒａｎｃｈｅｔｔｉら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：３５３４；Ｖａｎ Ｃａｌｅｎｂｅｒｇｈら（１９９４）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｅｍ．Ａｃｔａ．７７：６３１；Ｃｏｗａｒｔら（１９９９）Ｊ：Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６４：２２４０；Ｈｏｃｅｋ ａｎｄ Ｄｖｏｒａｋｏｖａ（２００３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：５７７３；およびＫｏｕｒａｆａｌｏｓら（２００３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：６４６６−６９を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２１０】
さらに他の実施態様では、このヌクレオシドまたはヌクレオチドは、２−、６−または８−置換アデノシン誘導体である。このような誘導体は、それらの対応する臭化物（その２位置および８位置に対して）または塩化物（その６位置に対して）と適当なアミン（例えば、アリルアミン、ベンジルアミン、ｔ−ブチルアミン、２−メトキシエチルアミン、ジエチルアミン）とを縮合することにより、製造され得る。例えば、Ｈａｌｂｆｉｎｇｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：５３２５−３７およびｖａｎ Ｔｉｌｂｕｒｇら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：１３９３を参照。
【０２１１】
ある実施態様では、これらの組成物は、リボース模倣物を含有する。例えば、このヌクレオシドまたはヌクレオチドのリボースは、アルキル基、Ｃ４〜Ｃ７シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基で置換される。これは、ジオールのモノチトリレーション（ｍｏｎｏｔｉｔｒｙｌａｔｉｏｎ）に続いて、アデノシンとの光延反応およびチトリル化したアルコールの脱保護により、達成され得る。例えば、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５、４２５４を参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２１２】
他のリボース模倣物およびそれらの合成は、例えば、以下で記述されている：Ｌｅｅら（１９６１）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８３：１９０６；Ｉｍａｚａｗａ（１９７８）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３：３０４４；Ｒｏｂｉｎｓら（１９８４）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２５：３６７；Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎら（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：２１３１−３７；Ｗｕら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４４：６７０５；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔら（１９８９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２：１７４３−４９；Ｓｅｃｒｉｓｔら（１９９１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：２３６１−６６；Ｓｅｃｒｉｓｔら（１９９２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：５３３−３８；Ｈｏｌｌｅｔｚら（１９９４）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ８：７８９；Ｃｈｏｉら（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２５：３６７；Ｍｅｉｅｒら（１９９９）Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １８：９０７−１２；Ｍｅｉｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：１６１５−２４；ａｎｄ Ｃｈｏｏら、（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６：３８９−９８。
【０２１３】
アルキル連結ヌクレオチドを含有するアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体の合成は、一般に、３段階で行われる：第一に、そのリンカー（または複数のリンカー）は、固体支持体（これはまた、本明細書中にて、一般に、樹脂とも呼ばれている）に結合される；第二に、この固体支持体上の任意の残留している活性部位は、適当な試薬（例えば、エタノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオールまたはグリシン）を使用して末端キャップ化される；そして第三に、そのリンカーアームは、特別なアフィニティー配位子（例えば、ヌクレオチド（例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）））と反応されて、それにより、ヌクレオチドアフィニティー媒体を生成する。
【０２１４】
リンカーを介したヌクレオチドへのタグ（例えば、ビオチン）の結合は、当該技術分野で標準的である技術を使用する。例えば、ビオチンは、結合したリンカーアームを使用して、合成できる；このような化合物は、当業者に公知であり、そして既に結合した異なるリンカーアームと共に市販されている；例えば、
【０２１５】
【化８６】
【０２１６】
ビオチンタグに結合されたアルキル連結ヌクレオチドを合成するには、その水溶性ビオチンリンカー錯体は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）および１−メチルイミダゾールと反応したヌクレオチドと反応される。
【０２１７】
保護基を有するアルキル連結ヌクレオチドの合成は、当該技術分野で公知の技術を使用する。典型的には、このリンカー（例えば、ジアミンリンカー）は、非対称的に保護されて（すなわち、一端で保護されて）、水溶性半保護ジアミンリンカーを形成する。このリンカーの未保護末端は、当業者に理解されるように、このヌクレオチドとＥＤＣおよび１−メチルイミダゾールとを反応させることにより調製されたヌクレオチドと反応される。
【０２１８】
本明細書中で既に記述したように、その固体支持体またはタグがアルキル連結ヌクレオチド、および必要に応じて、アルキル連結ヌクレオチドに結合された化合物（例えば、タンパク質）の分離に適当であるように固体支持体またはタグに結合されたアルキル連結ヌクレオチドはまた、本明細書中にて、「ヌクレオチドアフィニティー媒体」または「アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体」と呼ばれている。
【０２１９】
一般に、このリンカーは、当業者に理解されるように、任意の適当なカップリング緩衝液中にて、この固体支持体に結合される。例えば、このカップリング緩衝液は、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）には、ｐＨを８〜９に調節した０．１Ｍまたは０．２Ｍリン酸ナトリウム、または１，１’−カルボニルジイミダゾール活性化（ＣＤＩ）−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）には、ｐＨを１０に調節した０．１Ｍまたは０．２Ｍリン酸ナトリウムであり得る。あるいは、ｐＨを８〜９に調節した０．０１Ｍ〜０．１Ｍボレートは、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）をカップリングするのに使用でき、またはｐＨを１０に調節した０．０１Ｍ〜０．１Ｍボレートは、ＣＤＩ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）をカップリングするのに使用できる。例えば、リンカーは、室温で、炭酸水素ナトリウムカップリング緩衝液（例えば、以下の実施例で使用されているように、０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ＝８．２）中にて、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースと反応できる。ＣＤＩ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースとの反応には、そのリンカーは、例えば、室温で、例えば、当業者に理解されるように、０．０５Ｍ ＮａＨＣＯ３−Ｎａ２ＣＯ３カップリング緩衝液中にて、この樹脂と反応できる。典型的には、この固体支持体は、次いで、水で洗浄される。
【０２２０】
この固体支持体は、次いで、その固体支持体上の残りの活性部位をブロックするために末端キャップ化され、これは、任意の適当な試薬（例えば、エタノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオールまたはグリシン）を使って、実行できる。例示のために、末端キャップ化は、室温で、約１時間にわたって、この固体支持体を１Ｍエタノールアミン（ｐＨ＝８．９）と反応させることにより、達成できる。この固体支持体は、次いで、典型的には、１Ｍ ＮａＣｌおよび水で洗浄される。
【０２２１】
このヌクレオチドは、当業者に理解されるように、また、実施例で記述されているように、次いで、適当な条件下にて、この固体支持体上のリンカーアームと反応される。
【０２２２】
固体支持体またはタグ（ヌクレオチドアフィニティー媒体）に結合されたアルキル連結ヌクレオチドは、一旦、調製されると、任意の適当な緩衝液中で保存される。例えば、０．１Ｍ Ｋ２ＨＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４緩衝液（ｐＨ＝７．４）は、防腐剤として、０．０２％ナトリウムアジドを含有する。
【０２２３】
イソ尿素およびカーバメート連鎖の合成方法は、当該技術分野で標準的である（一般に、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎら、「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｌｉｇａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９２を参照；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）。例えば、臭化シアン活性化アガロースの使用（一般に、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ ａｎｄ Ａｎｆｉｎｓｅｎ、「Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」、ｉｎ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｎｅｌｌら著（ＣＡ：Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｎｃ．），４０：２５９−２７８（１９７１）；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）により、適当なイソ尿素が合成されるのに対して、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース６Ｂ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）を使用すると、適当なカーバメート連鎖が得られる。あるいは、適当な樹脂の水酸基は、中間体として炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルを使用して、適当な脱離基に変換でき、カーバメート連鎖を調製するか、または有機塩化スルホニルを使用して、親水性置換に対して樹脂水酸基を活性化して、炭素−窒素結合を調製する。
【０２２４】
以下の実施例において固体支持体に結合されたアルキル連結ヌクレオチドは、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース４Ｂ（Ｓｉｇｍａ）、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース６Ｂ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂、Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ樹脂またはＵｌｔｒｏｇｅｌ樹脂を使って、製造した。他の適当な固体支持体は、当業者に容易に理解され、これらには、例えば、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロースおよびポリスチレン、およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２５】
使用前、当業者に理解されるように、標準的なプロトコルに従って、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、１ｍＭ ＨＣｌおよび水で洗浄されるのに対して、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、氷冷水で洗浄される。
【０２２６】
γ−ホスフェート連結ヌクレオチドアフィニティー配位子の化学合成の一例は、図１〜５で図示されている。例示の目的のために、このヌクレオチドは、ＡＴＰである。
【０２２７】
図１は、中間体ＩＡの化学的な形成を図示している。臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、ジアミノ疎水性リンカーと反応されて、樹脂結合リンカー（中間体ＩＡ）を形成する。
【０２２８】
代替樹脂を使用して、図２は、中間体ＩＢの化学的な形成を図示している。ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、ジアミノ疎水性リンカーと反応されて、樹脂結合リンカー（中間体ＩＢ）を形成する。
【０２２９】
中間体ＩＩの化学的な形成（これは、それの樹脂との結合の調製でのヌクレオチドの変性である）は、図３で図示されている。このヌクレオチドは、水溶性カルボジイミド（例えば、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ））と反応されて、Ｏ−ホスホリルチオ尿素を形成する。このＯ−ホスホリルチオ尿素は、適当な求核性化合物（例えば、１−メチルイミダゾール）と反応されて、中間体ＩＩを形成する。
【０２３０】
ヌクレオチドアフィニティー媒体の合成の最終工程は、図４および５で図示されている。具体的には、図４は、ヌクレオチドアフィニティー媒体の化学的な形成の一例を図示している。中間体ＩＡおよびＩＩは、混ぜ合わされて、固体支持体に結合された最終アルキル連結ヌクレオチドを形成する。他の例では、図５で示されているように、中間体ＩＢおよびＩＩは、混ぜ合わされて、固体支持体に結合された最終アルキル連結ヌクレオチドを形成する。
【０２３１】
１実施態様では、アルキル連結ヌクレオチドを使った固体支持体の装填は、変えることができる。このことは、固体支持体の必ずしも全ての反応部位がアルキル連結ヌクレオチドと反応されることを意味している。例えば、アルキル連結ヌクレオチドを使った固体支持体の装填は、５〜２５％の範囲であり得、このことは、反応部位の５〜２５％がアルキル連結ヌクレオチドと反応されることを意味する。あるいは、このアルキル連結ヌクレオチドの装填は、２０〜５０％、４０〜６５％、６０〜８０％または７５〜１００％の範囲である。この固体支持体のうちアルキル連結ヌクレオチドと反応していない反応部位は、適当なら、適当な試薬を使用して、キャップ化できる。
【０２３２】
（アルキル連結ヌクレオチド組成物の用途）
また、本発明には、化合物（例えば、プロテオーム）をスクリーニングする方法が含まれ、該方法は、以下の工程を包含する：（ａ）プロテオームを、以下の一般式を含むヌクレオチドアフィニティー媒体と接触させる工程：
【０２３３】
【化８７】
【０２３４】
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１であり；（ｂ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体を緩衝液で洗浄し、それにより、該プロテオームの非特異的に結合した成分を該ヌクレオチドアフィニティー媒体から溶出しそして該プロテオームの特異的成分は、該ヌクレオチドアフィニティー媒体に結合したままである工程；（ｃ）該プロテオームの特異的成分に結合した該ヌクレオチドアフィニティー媒体を少なくとも１種の試験化合物と接触させる工程；（ｄ）該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該ヌクレオチドアフィニティー媒体成分を溶出する工程；および（ｅ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体から該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該成分を同定する工程。
【０２３５】
試験化合物は、当業者に理解されるように、有機または無機、天然に生じるか天然に生じないものである任意の化合物であり得る。例えば、この試験化合物は、組合せライブラリまたは化学ライブラリに由来の化合物であり得る。さらに、この試験化合物は、単細胞有機体、多細胞有機体、または多細胞有機体の器官または組織から抽出された化合物であり得る。このような有機体の例には、細菌、藻類、真菌、植物、魚類、両生類、哺乳動物などが挙げられるが、これらに限定されない。この試験化合物は、当業者に理解されるように、単一化合物であり得、あるいは、化合物の混合物であり得る。
【０２３６】
本明細書中の他の箇所で記述したように、固体支持体は、任意の適当な支持体、例えば、樹脂または特定の物質（例えば、ビードまたは粒子）であり得る。あるいは、固体支持体は、連続固体表面（例えば、プレート、チップ、ウェル、チャンネル、カラムまたはチューブ）であり得る。固体支持体の材料は、当業者が理解するように、任意の適当な物質、化合物または重合体である。例には、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロース、ポリスチレンおよびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３７】
さらに、「タグ」との用語は、本明細書中で使用されているが、このアルキル連結ヌクレオチドの明確な検出または捕捉用に提供された試薬である。例えば、限定するものではないが、適当なタグには、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン、蛍光体または発色団がある。このアルキル連結ヌクレオチドの検出または捕捉は、当該技術分野で標準的な技術を使用する。例えば、ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドは、アビジン、ストレプトアビジンまたは関連したアビジン誘導体を使用して、捕捉できる。このビオチン−アビジン相互作用は、非常に特異的である。ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドを検出または捕捉するのに使用されるアビジン共役試薬は、溶解性（例えば、抗体）であり得るか、または微粒子物質（例えば、ビーズ状アガロースまたは磁化粒子）または連続表面（例えば、アビジンで被覆したプレートまたはウェル）であり得る。ハプテンで標識したアルキル連結ヌクレオチドの検出および捕捉は、例えば、ハプテン特異的抗体を使用して、達成できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的検出方法は、当業者に容易に理解できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的な検出は、標識したアルキル連結ヌクレオチドと標的タンパク質との間の特定の相互作用の存在または不在を容易に決定するような技術に有用である。あるいは、蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的な検出は、試験化合物と標的タンパク質に結合した標識したアルキル連結ヌクレオチドとの間の特定の相互作用の存在または不在を容易に決定するような技術に有用である。さらに、ある化合物に対するアフィニティー配位子の親和性または親和力のリンカー特異的効果は、蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドを使用して、モニターできる。例えば、リンカーは、例えば、立体障害または静電相互作用を介して相互作用する化合物に対するアルキル連結ヌクレオチドの選択性、親和性または親和力に影響を与えることができる。これらのリンカー特異的効果は、ヌクレオチドに結合されたどのリンカーがヌクレオチドと標的タンパク質または化合物との相互作用に特異的に影響を与えるかを視覚的に検出することにより、アッセイまたはモニターできる。このようなリンカーは、タンパク質または標的化合物のサブセットを選択的に結合するヌクレオチドアフィニティー媒体を調製するのに使用できる。
【０２３８】
本明細書中の他の箇所で記述したように、ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書中で述べるように、天然に生じるか天然に生じないものであり得る。さらに、このヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業者に標準的な技術を使用して、生物学的または合成的に誘導できる。適当なヌクレオシドには、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）およびそれらの誘導体および類似物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３９】
１実施態様では、このヌクレオチドは、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンまたはウリジンまたはそれらの類似物の一リン酸、二リン酸、三リン酸または四リン酸である。
【０２４０】
本発明のアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体は、例えば、当業者に公知の方法を使用して、アフィニティークロマトグラフィーで使用できる。例えば、ＷＯ００／６３６９４（これは、２０００年４月１２日に出願された）および米国特許第５，５３６，８２２（これは、１９９４年３月４日に出願された）を参照；これらの教示内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２４１】
このヌクレオチドアフィニティー媒体およびアルキル連結ヌクレオチドは、ヌクレオチドに結合する生体化合物の検出および精製に有用である。例えば、γ−ホスフェート連結アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は、キナーゼのような化合物（これらは、ＡＴＰに結合することが知られている）を検出し精製するのにの使用できる。具体的には、アルキル連結ヌクレオチド（例えば、ＡＴＰ）は、固体支持体またはタグに結合でき、引き続いて、プロテオームまたはその一部に接触または混合できる。プロテオームの非特異的に相互作用する成分は、一般に、当業者に容易に理解されるように、適当な緩衝液で洗浄することにより、除去される。
【０２４２】
さらに、このアルキル連結ヌクレオチドは、そのアルキル連結ヌクレオチドにより捕捉されたタンパク質と特異的に相互作用する化学化合物をスクリーニングするのに使用できる。引き続いて、このタンパク質は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、同定できる。
【０２４３】
あるいは、このアルキル連結ヌクレオチドは、このヌクレオチドに特異的に結合する化学化合物を検出し単離するのに使用できる例えば、アルキル連結ヌクレオチドは、組合せライブラリと混合できる。このアルキル連結ヌクレオチドと特異的に相互作用する組合せライブラリの化合物は、例えば、１種またはそれ以上の適当な緩衝液で洗浄することにより、非特異的に相互作用する化合物から分離できる。引き続いて、この特異的に相互作用する化合物は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、同定できる。
【０２４４】
あるいは、ヌクレオチドと相互作用することが公知である化合物の競争物が同定できる。例えば、アルキル連結ヌクレオチドは、公知の相互作用化合物（例えば、タンパク質）と混合でき、それらの結合が起こる。次いで、この公知化合物に結合されたアルキル連結ヌクレオチドには、他の化合物または化合物のライブラリ（例えば、組合せライブラリ）を加えることができる。もし、１種またはそれ以上の異なる化合物がこのヌクレオチドと競争できる（それゆえ、第一結合化合物を置換できる）なら、この公知化合物が放出され、その競争化合物は、引き続いて、同定できる。このような化合物は、有用な生物学的または薬理学的阻害剤であり得る。
【実施例】
【０２４５】
本発明は、さらに、以下の実施例で例示されるが、これらは、いずれの様式でも、限定するものとは解釈されない。説明を簡単にする目的のために、固体支持体は、一般に、以下で表わされる：
【０２４６】
【化８８】
【０２４７】
ここで、一般に、固体支持体上の水酸基は、適当な試薬（例えば、臭化シアン）と反応して臭化シアン活性化固体支持体を形成するのに利用可能である。この固体支持体は、上記の任意の固体支持体であり得る。
【０２４８】
（実施例１）
以下の一般構造は、実施例１で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２４９】
【化８９】
【０２５０】
１，３−ジアミノ−２−プロパノール１ｇをカップリング緩衝液３０ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＥＩＲＯＳＥ（登録商標）２ｇと混ぜ合わせることにより、このリンカーアームを樹脂に結合した。その反応は、室温で、約３時間進行した。
【０２５１】
ＡＴＰ（５００ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１０３．５ｍｇおよびＥＤＣ（１７２．５ｍｇ）を水２０ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子であるＡＴＰを樹脂に結合するために調製した。
【０２５２】
最後に、この活性化アフィニティー配位子に４−ジメチルアミノピリジン１１１ｍｇを加え、そして調製した樹脂と混ぜ合わせ、その反応を、室温で、約１２〜１８時間または一晩継続することにより、ヌクレオチドアフィニティー媒体を調製した。
【０２５３】
（実施例２）
以下の一般構造は、実施例２で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２５４】
【化９０】
【０２５５】
まず、カップリング緩衝液３０ｍＬに１，３−ジアミノ−２−プロパノール１ｇを加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２ｇと混ぜ合わせることにより、このリンカーを樹脂に結合した。その反応は、約３時間進行した。カップリング緩衝液３０ｍＬにヨード酢酸１．５ｇを加え、そのｐＨを９．８に調節し、この樹脂と混ぜ合わせることにより、この樹脂の第二反応を実行した。これを、室温で、約１時間、さらに反応させた。この樹脂とのさらなる反応において、水２０ｍＬにＥＤＣ（５００ｍｇ）を加え、この樹脂と混ぜ合わせた。反応は、さらに３０分間進行した。引き続いて、１，３−ジアミノ−２−プロパノール１ｇをカップリング緩衝液３０ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせた。反応を、さらに約１時間継続した。
【０２５６】
ＡＴＰ（５００ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１０３．５ｍｇおよびＥＤＣ（１７２．５ｍｇ）を水２０ｍＬに加え、その反応を約２時間進行させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２５７】
最後に、調製したアフィニティー配位子に４−ジメチルアミノピリジン１１１ｍｇを加え、そして樹脂と混ぜ合わせた。反応を、室温で、約１２〜１８時間または一晩進行させた。
【０２５８】
（実施例３〜８）
以下の一般構造は、実施例３〜８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２５９】
【化９１】
【０２６０】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０２６１】
（実施例１３）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２５０ｍｇをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約２時間反応させた。
【０２６２】
ＡＴＰ（３００ｍｇ）、ＥＤＣ（１０４ｍｇ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド６２ｍｇを水７ｍＬに加え、室温で９０分間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２６３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２６４】
（実施例４）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２５０ｍｇをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２６５】
ＡＴＰ（６９０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール５１３μＬおよびＥＤＣ（１２００ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２６６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２６７】
（実施例５）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン７５０ｍｇをカップリング緩衝液７．５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．４２５ｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２６８】
ＡＴＰ（１３７８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１０２７μＬおよびＥＤＣ（２４００ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２６９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７０】
（実施例６）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２２５ｍｇをカップリング緩衝液１．５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２８５ｍｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２７１】
ＡＴＰ（５５０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１０μＬおよびＥＤＣ（９６０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２７２】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７３】
（実施例７）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン１５０ｍｇをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そのｐＨをｐＨ８．４に調節し、次いで、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５７１ｍｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２７４】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール８２０μＬおよびＥＤＣ（１９２０ｍｇ）を水１０ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２７５】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７６】
（実施例８）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２５０ｍｇをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２．５ｍＬと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２７７】
ＡＴＰ（６９０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール５１３μＬおよびＥＤＣ（１２００ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２７８】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７９】
（実施例９〜２８）
以下の一般構造は、実施例９〜２８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２８０】
【化９２】
【０２８１】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０２８２】
実施例９〜１６の全てについて、１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン７００μＬをカップリング緩衝液１０ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。反応した樹脂３００ｍｇのアリコートを実施例９〜１６で使用した。
【０２８３】
（実施例９）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド５８ｍｇおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２８４】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２８５】
（実施例１０）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２８６】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２８７】
（実施例１１）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２９０ｍｇおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２８８】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２８９】
（実施例１２）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９０】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２９１】
（実施例１３）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド５８ｍｇおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９２】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０２９３】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド５８ｍｇおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９４】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２９５】
（実施例１４）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９６】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０２９７】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９８】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２９９】
（実施例１５）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２９０ｍｇおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３００】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０３０１】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２９０ｍｇおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０２】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３０３】
（実施例１６）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０４】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０３０５】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０６】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３０７】
（実施例１７）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン５００μＬをカップリング緩衝液１０ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３０８】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水８ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０９】
このアフィニティー配位子を調製した樹脂と混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１０】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３１１】
このアフィニティー配位子を調製した樹脂と混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１２】
（実施例１８）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン２００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３１３】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３１４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１５】
（実施例１９）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３１６】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３１７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１８】
（実施例２０）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン２５０μＬをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３１９】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール８２μＬおよびＥＤＣ（１９２ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２１】
あるいは、ＡＴＰ（２５０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１９５μＬおよびＥＤＣ（４３０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２２】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２３】
（実施例２１）
エタノールアミン７５μＬおよび１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン７５μＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３２４】
ＡＴＰ（４１５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１２５μＬおよびＥＤＣ（２９０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２５】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２６】
（実施例２２）
エタノールアミン１３５μＬおよび１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１５μＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３２７】
ＡＴＰ（４１５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１２５μＬおよびＥＤＣ（２９０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２８】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２９】
（実施例２３）
エタノールアミン１４２．５μＬおよび１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン７．５μＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３０】
ＡＴＰ（４１５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１２５μＬおよびＥＤＣ（２９０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３３１】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３３２】
（実施例２４）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３３】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール８２μＬおよびＥＤＣ（１９２ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３３４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３３５】
（実施例２５）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３６】
ＡＴＰ（１３８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１０３μＬおよびＥＤＣ（２４０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３３７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３３８】
（実施例２６）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３９】
ＡＴＰ（１３８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３４０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３４１】
（実施例２７）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３４２】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０４μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３４３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３４４】
（実施例２８）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３４５】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３４６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３４７】
（実施例２９〜３６）
以下の一般構造は、実施例２９〜３６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３４８】
【化９３】
【０３４９】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０３５０】
（実施例２９）
１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５７１ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３５１】
ＡＴＰ（５００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１０μＬおよびＥＤＣ（９６０ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３５２】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３５３】
（実施例３０）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３５４】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５．２５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３５５】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３５６】
（実施例３１）
１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３５７】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５．２５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３５８】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３５９】
（実施例３２）
１，１０−ジアミノデカン２１９ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．８７５ｍＬをカップリング緩衝液３．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６０】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３６１】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３６２】
（実施例３３）
１，１０−ジアミノデカン２１９ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．８７５ｍＬをカップリング緩衝液３．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６３】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３６４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３６５】
（実施例３４）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６６】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３６７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３６８】
（実施例３５）
１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６９】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３７０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３７１】
（実施例３６）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３７２】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３７３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３７４】
（実施例３７）
以下の一般構造は、実施例３７で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３７５】
【化９４】
【０３７６】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０３７７】
１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３７８】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３７９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３８０】
（実施例３８）
以下の一般構造は、実施例３８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３８１】
【化９５】
【０３８２】
２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５．５］ウンデカン−３，９−ジプロパンアミン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３８３】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３８４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３８５】
（実施例３９）
以下の一般構造は、実施例３９で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３８６】
【化９６】
【０３８７】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３８８】
ＧＴＰ（３９ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３８９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３９０】
（実施例４０）
以下の一般構造は、実施例４０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３９１】
【化９７】
【０３９２】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３９３】
ＩＴＰ（４３ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３９４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３９５】
（実施例４１）
以下の一般構造は、実施例４１で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３９６】
【化９８】
【０３９７】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３９８】
ＣＴＰ（４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３９９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４００】
（実施例４２）
以下の一般構造は、実施例４２で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４０１】
【化９９】
【０４０２】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４０３】
ＴＴＰ（３６ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４０４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４０５】
（実施例４３）
以下の一般構造は、実施例４３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４０６】
【化１００】
【０４０７】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４０８】
ＵＴＰ（３７ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４０９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４１０】
（実施例４４〜４８）
以下の一般構造は、実施例４４〜４８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４１１】
【化１０１】
【０４１２】
（実施例４４）
１，１０−ジアミノデカン１８７．５ｍｇ、エタノールアミン６２．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４１３】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４１４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４１５】
（実施例４５）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４１６】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４１７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４１８】
（実施例４６）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、エタノールアミン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４１９】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４２０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４２１】
（実施例４７）
１，１０−ジアミノデカン２５ｍｇ、エタノールアミン２２５μＬおよび１，４−ジオキサン４ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４２２】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４２３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４２４】
（実施例４８）
１，１０−ジアミノデカン８３ｍｇ、エタノールアミン１６７μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４２５】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４２６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４２７】
（実施例４９〜５０）
以下の一般構造は、実施例４９〜５０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４２８】
【化１０２】
【０４２９】
（実施例４９）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４３０】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４３１】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４３２】
（実施例５０）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４３３】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４３４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４３５】
（実施例５１）
以下の一般構造は、実施例５１で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４３６】
【化１０３】
【０４３７】
１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４３８】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４３９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４４０】
（実施例５２〜５３）
以下の一般構造は、実施例５２〜５３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４４１】
【化１０４】
【０４４２】
（実施例５２）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサウンデカン６２．５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４４３】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４４４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４４５】
（実施例５３）
１，１０−ジアミノデカン３１．５ｍｇ、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサウンデカン９３．７５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４４６】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４４７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４４８】
（実施例５４〜５６）
以下の一般構造は、実施例５４〜５６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４４９】
【化１０５】
【０４５０】
実施例５４〜５６については、記述したヌクレオチドアフィニティー媒体を調製する際に使用するために、各リンカーアーム１００ｍｇ：１，１０−ジアミノデカン；１，９−ジアミノノナン；および１，６−ジアミノヘキサンの混合物を調製した。
【０４５１】
（実施例５４）
リンカーアーム（上記）の混合物１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４５２】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４５３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４５４】
（実施例５５）
リンカーアーム（上記）の混合物６２．５ｍｇ、エタノールアミン６２．５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４５５】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４５６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４５７】
（実施例５６）
リンカーアーム（上記）の混合物３１．２５ｍｇ、エタノールアミン９３．７５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４５８】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４５９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４６０】
（実施例５７）
以下の一般構造は、実施例５７で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４６１】
【化１０６】
【０４６２】
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４６３】
ＡＴＰ（１６０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４６４】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４６５】
（実施例５８）
以下の一般構造は、実施例５８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４６６】
【化１０７】
【０４６７】
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４６８】
ＡＤＰ（１８８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４６９】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４７０】
（ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）およびＴＯＹＯＰＥＲＬ（登録商標）樹脂の一般手順）
ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）およびＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂は、一般に、２０％エタノール中で保存される。この樹脂を水２容量、３０％アセトン１容量、７０％アセトン１容量および無水アセトン５容量で洗浄した後、その樹脂を無水アセトン２．５ｍＬに移す。１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇを加え、その樹脂を、室温で、約１時間反応させる。約１時間後、この樹脂を無水アセトン５容量、７０％アセトン１容量、３０％アセトン１容量および水２容量で洗浄する。１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍｌを適当なカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そしてこの樹脂と混ぜ合わせる。この樹脂を、４℃で、一晩反応させる。次いで、この樹脂を１Ｍ ＮａＣｌ（３容量）および水２容量で洗浄する。残りの任意の反応部位を末端キャップ化するために、この樹脂に１Ｍエタノールアミン溶液（ｐＨ＝８．９）５ｍＬを加え、その樹脂を、室温で、約１時間反応させる。引き続いて、この樹脂を１Ｍ ＮａＣｌ（３容量）および水２容量で洗浄する。ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加え、そして約１時間反応させた後、この樹脂と混ぜ合わせる。この樹脂を一晩反応させる。最後に、この樹脂を１Ｍ ＮａＣｌ（３容量）および水２容量で洗浄し、そして保存用緩衝液に移す。
【０４７１】
（実施例５９〜６４）
以下の一般構造は、実施例５９〜６４で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４７２】
【化１０８】
【０４７３】
（実施例５９）
ＨＲ Ｓ−３００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４７４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４７５】
（実施例６０）
ＨＲ Ｓ−３００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４７６】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４７７】
（実施例６１）
ＨＲ Ｓ−３００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、エタノールアミン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４７８】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４７９】
（実施例６２）
ＨＲ Ｓ−４００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４８０】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８１】
（実施例６３）
ＨＲ Ｓ−４００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４８２】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８３】
（実施例６４）
ＨＲ Ｓ−４００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、エタノールアミン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４８４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８５】
（実施例６５〜７０）
以下の一般構造は、実施例６５〜７０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４８６】
【化１０９】
【０４８７】
（実施例６５）
ＨＷ−６５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４８８】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８９】
（実施例６６）
ＨＷ−６５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４９０】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９１】
（実施例６７）
ＨＷ−６５Ｓ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４９２】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９３】
（実施例６８）
ＨＷ−６５Ｓ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４９４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９５】
（実施例６９）
ＨＷ−７５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４９６】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９７】
（実施例７０）
ＨＷ−７５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４９８】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９９】
ＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂の手順は、この樹脂にヒドロキシ官能性（これは、塩化トレシル（有機塩化スルホニル）で予め活性化されている）が付けられて臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）または１，１’−カルボニルジイミダゾール活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）と類似しているので、他のＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂の手順とは異なる。
【０５００】
（実施例７１〜７２）
以下の一般構造は、実施例７１〜７２で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５０１】
【化１１０】
【０５０２】
（実施例７１）
約１０分間にわたって、１ｍＭ ＨＣｌ（１５ｍＬ）中にてＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂０．５ｇを膨潤させることにより、この樹脂を調製する。次いで、この樹脂を１ｍＭ ＨＣｌ（２容量）および水１容量で洗浄する。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液（０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ＝７．４５）４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０５０３】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５０４】
（実施例７２）
約１０分間にわたって、１ｍＭ ＨＣｌ（１５ｍＬ）中にてＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂０．５ｇを膨潤させることにより、この樹脂を調製する。次いで、この樹脂を１ｍＭ ＨＣｌ（２容量）および水１容量で洗浄する。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液（０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ＝７．４５）４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０５０５】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５０６】
（実施例７３）
以下の一般構造は、実施例７３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５０７】
【化１１１】
【０５０８】
３−［４−（３−アミノプロピル）−フェニル］−プロピルアミン１９０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．５ｍＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５０９】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５１０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５１１】
（実施例７４）
以下の一般構造は、実施例７４で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５１２】
【化１１２】
【０５１３】
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−メチル−ヘキサン−１，６−ジアミン１９０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．７５ｍＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５１４】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５１５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５１６】
（実施例７５）
以下の一般構造は、実施例７５で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５１７】
【化１１３】
【０５１８】
６−アミノ−２−（４−アミノ−ブチルアミノ）−ヘキサン酸メチルエステル３５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．４ｍＬをカップリング緩衝液５．６ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５１９】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５２０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５２１】
（実施例７６）
以下の一般構造は、実施例７６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５２２】
【化１１４】
【０５２３】
７−（２−アミノ−３−フェニル−プロポキシ）−ヘプチルアミン２６０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．０ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５２４】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５２５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５２６】
（実施例７７）
以下の一般構造は、実施例７７で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５２７】
【化１１５】
【０５２８】
スペルミジン１０５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０５２９】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５３０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５３１】
（実施例７８）
以下の一般構造は、実施例７８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５３２】
【化１１６】
【０５３３】
ビス（３−アミノプロピル）−エチレンジアミン１２７ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０５３４】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５３５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５３６】
（実施例７９）
以下の一般構造は、実施例７９で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５３７】
【化１１７】
【０５３８】
以下のようにして、１，１０−ジヨード−デカ−５−エンを調製する：９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（１当量）を、０℃で、無水ＴＨＦに加え、続いて、１，５，９−デカトリエン（４当量）を加える。その反応物を室温まで温め、そして１．５時間攪拌する。得られた溶液を−２０℃まで冷却し、そしてナトリウムメトキシド（２当量）を加え、続いて、ヨウ素（２当量）を加える。その反応混合物を、−２０℃で、１．５時間攪拌し、室温まで温め、さらに１時間攪拌する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製する。その適当な画分をプールし、そして真空中で濃縮して、１，１０−ジヨード−デカ−５−エンを得る。
【０５３９】
この１，１０−ジヨード−デカ−５−エン（１当量）を、室温で、無水アセトンに溶解し、続いて、カリウムフタルイミド（４．０当量）を加える。その反応混合物を完結するまで攪拌し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして真空中で濃縮する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジフタルイミド−デカ−５−エンを得る。
【０５４０】
この１，１０−ジフタルイミド−デカ−５−エン（１当量）およびヒドラジン（２当量）を、エタノール中にて、還流状態で攪拌する。その反応混合物を室温まで冷却し、得られた固形物を濾過により除去する。その濾液をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジアミノ−デカ−５−エンを得る。
【０５４１】
このリンカーアーム２００ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．５ｍｌをカップリング緩衝液３ｍｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ５００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約４時間進行させる。ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０ｍｌおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍｌに加え、１時間反応させ、次いで、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を一晩反応させる。
【０５４２】
（実施例８０）
以下の一般構造は、実施例８０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５４３】
【化１１８】
【０５４４】
無水エーテル中で、窒素雰囲気下にて、マグネシウム（１．２当量）を攪拌し、そして触媒量のヨウ素を加える。その混合物を還流状態まで加熱し、そして４−ブロモメチルピリジン（１当量）を加える。その反応物を、グリニャール試薬の形成が完結するまで攪拌し、そして９−フタルイミドノナール（１．５当量）を加える。その反応混合物を完結するまで攪拌し、塩化アンモニウムでクエンチし、ブラインで抽出し、そして真空中で濃縮する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１−ヒドロキシ−１−（４−ピリジニル）−１０−フタルイミドデカンを得る。
【０５４５】
攪拌しながら、１−ヒドロキシ−１−（４−ピリジニル）−１０−フタルイミドデカン（１当量）をＴＨＦに溶解する。その溶液にフタルイミド（１．５当量）およびトリフェニルホスフィン（２．１当量）を加え、得られた混合物を０℃まで冷却する。上記溶液にジイソプロピルアゾジカルボキシレート（２．０当量）を滴下し、その反応物を完結するまで攪拌する。得られた固形物を濾過により除き、その濾液を真空中で濃縮する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジフタルイミド−１−ピリジニルデカンを得る。
【０５４６】
１，１０−ジフタルイミド−１−ピリジニルデカン（１当量）およびヒドラジン（２当量）を、エタノール中にて、還流状態で攪拌する。その反応混合物を室温まで冷却し、得られた固形物を濾過により除去する。その濾液をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジアミノ−１−ピリジニルデカンを得る。
【０５４７】
このリンカーアーム２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．５ｍｌをカップリング緩衝液３ｍｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ５００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約４時間進行させる。ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０ｍｌおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍｌに加え、約１時間反応させ、次いで、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を一晩反応させる。
【０５４８】
（実施例８１〜８３）
以下の一般構造は、実施例８１〜８３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５４９】
【化１１９】
【０５５０】
これらの実施例には、ＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）４Ｂ（Ｓｉｇｍａ）を使用する。
【０５５１】
（実施例８１）
２，５−ジアミノピリジン５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２ｍＬをカップリング緩衝液０．８ｍＬに加え、そしてＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５５２】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７４μＬおよびＥＤＣ（１７２ｍｇ）を水１．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５５３】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５５４】
（実施例８２）
２，５−ジアミノピリジン４０ｍｇ、エタノールアミン１０μＬおよび１，４−ジオキサン０．２ｍＬをカップリング緩衝液０．８ｍＬに加え、そしてＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５５５】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７４μＬおよびＥＤＣ（１７２ｍｇ）を水１．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５５６】
（実施例８３）
２，５−ジアミノピリジン３０ｍｇ、エタノールアミン２０μＬおよび１，４−ジオキサン０．２ｍＬをカップリング緩衝液０．８ｍＬに加え、そしてＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５５７】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７４μＬおよびＥＤＣ（１７２ｍｇ）を水１．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５５８】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５５９】
（実施例８４〜８９）
以下の一般構造は、実施例８４〜８９で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５６０】
【化１２０】
【０５６１】
これらの実施例には、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）４Ｂ（Ｓｉｇｍａ）を使用する。
【０５６２】
（実施例８４）
１，１０−ジアミノデカン１１２．５ｍｇ、グリシン１２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５６３】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５６４】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５６５】
（実施例８５）
１，１０−ジアミノデカン９３．７５ｍｇ、グリシン３１．２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５６６】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５６７】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５６８】
（実施例８６）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、グリシン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５６９】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５７１】
（実施例８７）
１，１０−ジアミノデカン１１２．５ｍｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５７２】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７３】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５７４】
（実施例８８）
１，１０−ジアミノデカン９８．７５ｍｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン３１．２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５７５】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７６】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５７７】
（実施例８９）
１，１０−ジアミノデカン６２．２５ｍｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン６２．２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液 ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５７８】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７９】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５８０】
（実施例９０〜９６）
以下の一般構造は、実施例９０〜９６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５８１】
【化１２１】
【０５８２】
これらの実施例には、Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ樹脂ＧＦ ２０００Ｍ（ＢｉｏＳｅｐｒａ）またはＵｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ２２（ＢｉｏＳｅｐｒａ）樹脂を使用する。これらの樹脂の一般手順は、上記ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）およびＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）について記述した手順と同じである。
【０５８３】
（実施例９０）
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ ＧＦ ２０００Ｍ樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５８４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５８５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５８６】
（実施例９１）
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ ＧＦ ２０００Ｍ樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン１６５ｍｇ、エタノールアミン８５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５８７】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５８８】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５８９】
（実施例９２）
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ ＧＦ ２０００Ｍ樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン８２ｍｇ、エタノールアミン１６８μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９０】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５９１】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５９２】
（実施例９３）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９３】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５９４】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５９５】
（実施例９４）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン１６５ｍｇ、エタノールアミン８５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９６】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５９７】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５９８】
（実施例９５）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン８２ｍｇ、エタノールアミン１６８μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９９】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０６００】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０６０１】
（実施例９６）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン２５ｍｇ、エタノールアミン２２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０６０２】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０６０３】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０６０４】
（実施例９７）
以下の構造は、実施例９７で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６０５】
【化１２２】
【０６０６】
１，１０−ジアミノデカン１３．５ｍｇ、エタノールアミン１３．５μおよび１，４−ジオキサン１０５μＬをカップリング緩衝液４１９μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１０５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。アデニル−イミド−ジホスフェート（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）２９ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６０７】
（実施例９８）
以下の構造は、実施例９８で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６０８】
【化１２３】
【０６０９】
１，１０−ジアミノデカン１３．５ｍｇ、エタノールアミン１３．５μおよび１，４−ジオキサン１０５μＬをカップリング緩衝液４１９μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１０５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。β，γ−メチレン−ＡＴＰ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）３０ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６１０】
（実施例９９）
以下の構造は、実施例９９で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６１１】
【化１２４】
【０６１２】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μおよび１，４−ジオキサン１２５μＬをカップリング緩衝液５００μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。アデノシン−５’−スクシレート（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｓ，ＭＯ）２０ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６１３】
（実施例１００）
以下の構造は、実施例１００で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６１４】
【化１２５】
【０６１５】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μおよび１，４−ジオキサン１２５μＬをカップリング緩衝液５００μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。２−デオキシ−ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｓ，ＭＯ）２９ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６１６】
（実施例１０１〜１０５）
実施例１０１〜１０５のアルキル連結ヌクレオチド組成物を３段階で製造する：このアデノシン誘導体を調製し、ホスホリル化し、次いで、この樹脂−リンカーアーム組合せに結合する。実施例９９〜１０３の各々について、これらのアデノシン誘導体を、以下のようにして、ホスホリル化する。これらのアデノシン誘導体をリン酸トリメチル（５〜１２ｍＬ）に溶解し、そして約０℃まで冷却する。１０分間攪拌した後、オキシ塩化リン（１．８当量）を滴下する。その反応混合物を、０℃で、６時間攪拌する。トリブチルアミン（５．４当量）を加え、続いて、直ちに、０．５Ｍピロリン酸トリブチルアンモニウム（４当量）を加え、そして攪拌をさらに１５分間継続する。０．２Ｍ炭酸水素トリエチルアンモニウム（４０〜５０ｍＬ）を加えることにより、この反応をクエンチする。次いで、その反応混合物を、室温で、１５時間攪拌し、次いで、凍結乾燥する。次いで、その粗調製物をＳｅｐｈａｄｅｘ ＤＥＡＥ−２５−イオン交換樹脂で精製し、そしてＴＥＡＢ緩衝液の勾配（０．０５Ｍ〜０．５Ｍ）に従って、水で溶出する。次いで、適当な画分を合わせる。
【０６１７】
（実施例１０１）
以下の構造は、実施例１０１で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６１８】
【化１２６】
【０６１９】
６−クロロプリンリボシド１．０１６ｇおよびメチルアミン（エチルアルコール中で３３％）８．８２ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約２２時間にわたって、９０℃まで加熱する。この反応容器を、氷浴中にて、約３０分間冷却して、固形沈殿物を形成させる。この沈殿物を濾過し、そして氷冷エチルアルコール（３×２５ｍＬ）で洗浄し、そして乾燥して、収率６６％で、０．６６ｇのＮ６−メチルアデノシンを得る。
【０６２０】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子２０２ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６２１】
（実施例１０２）
以下の構造は、実施例１０２で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６２２】
【化１２７】
【０６２３】
６−クロロプリンリボシド５４７ｍｇ、２−メトキシエチルアミン０．８８２ｍＬおよびエチルアルコール５．０ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約２２時間にわたって、９０℃まで加熱する。次いで、この配位子をシリカゲルクロマトグラフィー（これは、８：１の塩化メチレン：メタノールを使用する）で精製して、Ｎ６−（２−メトキシエチル）−アデノシン（０．６１ｇ、収率９８％）を得る。
【０６２４】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１５４ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６２５】
（実施例１０３）
以下の構造は、実施例１０３で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６２６】
【化１２８】
【０６２７】
６−クロロプリンリボシド４７３ｍｇ、２−ベンジルアミン０．５４ｍＬ、トリエチルアミン０．６９ｍＬおよびエチルアルコール５．０ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約１８時間にわたって、９０℃まで加熱する。この反応容器を、氷浴中にて、約３０分間冷却して、固形沈殿物を形成させる。この沈殿物を濾過し、そして氷冷エチルアルコール（３×２５ｍＬ）で洗浄し、そして乾燥して、０．５１ｇのＮ６−ベンジルアデノシンを得る（収率８６％）。
【０６２８】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１６０．８ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６２９】
（実施例１０４）
以下の構造は、実施例１０４で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６３０】
【化１２９】
【０６３１】
２−クロロアデノシン４００ｍｇ、２−ベンジルアミン０．４２ｍＬおよびトリエチルアミン０．５４ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約９６時間にわたって、９０℃まで加熱する。次いで、この配位子をシリカゲルクロマトグラフィー（これは、２０：１の塩化メチレン：メタノールを使用する）で精製して、０．１１ｇのＮ６−ベンジルアデノシン（２２％）を得る。
【０６３２】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１２０ｍｇ、１−メチルイミダゾール６７．５μｌおよびＥＤＣ（１５７．５ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６３３】
（実施例１０５）
以下の構造は、実施例１０５で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６３４】
【化１３０】
【０６３５】
８−ブロモアデノシン５０７ｍｇ、２−メトキシエチルアミン０．６３１ｍＬおよびエチルアルコール５．０ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約１６８時間にわたって、９０℃まで加熱する。次いで、この配位子をシリカゲルクロマトグラフィー（これは、４：１の塩化メチレン：メタノールを使用する）で精製して、０．５２ｇのＮ６−（２−メトキシエチル）−アデノシン（９９％）を得る。
【０６３６】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１５７．２ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６３７】
本発明は、その好ましい実施態様に関連して特に示され記述されているものの、当業者は、添付の請求の範囲に含まれる本発明の範囲から逸脱することなく、形式および詳細において種々の変更を行い得ることを理解する。
【０６３８】
本明細書中で引用された種々の刊行物、特許出願および特許の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【図面の簡単な説明】
【０６３９】
【図１】図１は、臭化シアンで活性化したビーズ状アガロースおよびリンカーを使用する化合物中間体ＩＡの合成の概略図である。
【図２】図２は、１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）で活性化したビーズ状アガロースおよびリンカーを使用する化合物中間体ＩＢの合成の概略図である。
【図３】図３は、化合物中間体ＩＩの合成の概略図である。
【図４】図４は、反応成分として中間体ＩＡおよびＩＩを使用するγ−ホスフェート連結ＡＴＰの合成の概略図である。
【図５】図５は、反応成分として中間体ＩＢおよびＩＩを使用するγ−ホスフェート連結ＡＴＰの合成の概略図である。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ヌクレオチドアフィニティー媒体およびそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
アフィニティークロマトグラフィーで使用する配位子（例えば、ヌクレオチド）を調製する以前の方法は、典型的には、そのプリン環上のＮ６アミノ基を解して、またはリボース部分の水酸基を経由して、そのヌクレオチドを固体マトリックスとカップリングする。しかしながら、これらの配位子は、通常、この固体マトリックス上の配位子の立体障害または配向のために、アフィニティークロマトグラフィーに常に有効な配位子ではない。タンパク質（例えば、キナーゼ）を結合する一部のヌクレオチドの分子構造の研究は、これらの発見を裏付けている。
【０００３】
最近では、代替的な方法において、ヌクレオチドであるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は、アミノフェニル部分を経由して、ＡＴＰのガンマ−リン酸基を通って、間接的にアフィニティー樹脂にカップリングされた。ＡＴＰのガンマ−リン酸に結合されたアミノフェニル基を経由した樹脂へのＡＴＰの結合は、初期のヌクレオチドアフィニティー媒体よりも有利である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、依然として、アフィニティークロマトグラフィー方法およびスクリーニング方法で使用するのに適当なヌクレオチドアフィニティー媒体の合成にさらに効率的な方法を開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、アルキル連結ヌクレオチド組成物（これには、アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体）に関する：
１実施態様では、アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を有する：
【０００６】
【化２３】
【０００７】
ここで：Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１のいずれかであり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換または非置換基またはそれらの基の組合せであり、該置換または非置換基は、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基から選択される；Ｒ２は、置換または非置換基またはそれらの基の組合せであり、該置換または非置換基は、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基またはヘテロアリール基から選択される；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。
【０００８】
また、本発明には、アルキル連結ヌクレオチド組成物を合成する方法が含まれ、該組成物は、アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体を含有し、該アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体は、以下の一般式を有する：
【０００９】
【化２４】
【００１０】
該方法は、以下の一般工程を包含する：（ａ）適当なカップリング緩衝液中にて、少なくとも１個のリンカーを固体支持体またはタグにカップリングする工程であって、ここで、該リンカーは、Ｒ２またはＲ１とＲ２との組合せであり；（ｂ）該カップリング工程後、該固体支持体に残っている反応性部位を末端キャップ化する工程；および（ｃ）ヌクレオチドの末端ホスフェートまたはチオホスフェート基を、該固体支持体またはタグにカップリングした該リンカーと反応させる工程であって、ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。
【００１１】
また、本発明には、試験化合物をスクリーニングする方法が含まれ、該方法は、以下の工程を包含する：（ａ）プロテオームを、以下の一般式を含むヌクレオチドアフィニティー媒体と接触させる工程：
【００１２】
【化２５】
【００１３】
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１であり；（ｂ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体を緩衝液で洗浄し、それにより、該プロテオームの非特異的に結合した成分を該ヌクレオチドアフィニティー媒体から溶出しそして該プロテオームの特異的成分は、該ヌクレオチドアフィニティー媒体に結合したままである工程；（ｃ）該プロテオームの特異的成分に結合した該ヌクレオチドアフィニティー媒体を少なくとも１種の試験化合物と接触させる工程；（ｄ）該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該ヌクレオチドアフィニティー媒体成分を溶出する工程；および（ｅ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体から該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該成分を同定する工程。
【００１４】
本明細書中で記述したアルキル連結ヌクレオチド組成物およびアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体は、例えば、プロテオームまたは組合せライブラリをスクリーニングするために、また、化合物（例えば、タンパク質）を精製するために、アフィニティークロマトグラフィー方法における、例えば、アフィニティー配位子として、特に有用である。さらに、本発明は、以前に達成されたものよりも、このようなアルキル連結ヌクレオチドおよびヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する効率的な方法を包含する。
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明の特徴および他の詳細は、本発明の工程として、または本発明の一部の組合せとして、いずれかとして、今ここで、さらに詳しく記述し、そして請求の範囲で指摘する。本発明の特定の実施態様は、本発明の限定ではなく例示の目的で示されていることが分かる。本発明の原則的な特徴は、本発明の範囲から逸脱することなく、種々の実施態様で使用できる。
【００１６】
本発明は、以下の一般式を含むアルキル連結ヌクレオチド組成物に関する：
【００１７】
【化２６】
【００１８】
ここで、Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。
【００１９】
このような置換アルキル基または非置換アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、およびそれらの組合せは、当業者が理解しているように、直鎖または分枝鎖であり得る。
【００２０】
本明細書中で使用する「ヘテロアリール」との用語は、少なくとも１個の芳香環構造を含むアルキル基であり、ここで、該芳香環の少なくとも１個の原子の１個またはそれ以上は、炭素以外の元素（例えば、イオウ、窒素または酸素）である。ヘテロ芳香族化合物の例には、ピリジン、ピリミジン、オキサゾール、キノリン、チオフェンおよびフランが挙げられる。
【００２１】
ヘテロ原子（Ｋ）は、好ましくは、窒素原子（Ｎ）、酸素原子（Ｏ）またはイオウ原子（Ｓ）である。好ましくは、このヘテロ原子（Ｋ）は、窒素原子である。
【００２２】
アルキル連結ヌクレオチドはまた、本明細書中にて、配位子またはアフィニティー配位子と呼ばれている。
【００２３】
固体支持体またはタグがアルキル連結ヌクレオチドがアルキル連結ヌクレオチドの分離に適当であるように、この固体支持体またはタグには、アルキル連結ヌクレオチドが結合され、必要に応じて、未結合化合物からアルキル連結ヌクレオチドに結合された化合物（例えば、タンパク質）はまた、本明細書中にて、「ヌクレオチドアフィニティー媒体」または「アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体」と呼ばれている。
【００２４】
固体支持体（Ｙ）は、任意の適当な支持体、例えば、樹脂または特定の物質（例えば、ビードまたは粒子）であり得る。あるいは、固体支持体は、連続固体表面（例えば、プレート、チップ、ウェル、チャンネル、カラムまたはチューブ）であり得る。固体支持体の材料は、当業者が理解するように、任意の適当な物質、化合物または重合体である。例には、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロース、ポリスチレン、熱応答性重合体（例えば、Ｌｅｅら（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６２：３０１−３１１；Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９６）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２９：８９８７−８９；およびＯｓａｄａ ａｎｄ Ｋｈｏｋｈｌｏｖ著（２００１）Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｇｅｌｓ ａｎｄ Ｎｅｔｗｏｒｌａ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている）およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
１実施態様では、固体支持体（Ｙ）は、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂である。ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）は、アクリルアミド樹脂であり、これは、アリルデキストランを架橋モノマーＮ，Ｎ’−メチレン−ビスアクリルアミドと重合することにより、生成される。
【００２６】
他の実施態様では、固体支持体（Ｙ）は、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂である。ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）は、メタクリレート誘導体であり、これは、メタクリル酸グリシジル、ペンタエリスリトールジメチルメタクリレートおよびポリエチレングリコールを共重合することにより、生成される。
【００２７】
１実施態様では、固体支持体（Ｙ）は、ビーズ状にしたアガロースである。適当なビーズ状アガロースの一例には、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースがある。ビーズ状アガロース（例えば、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース）は、例えば、当業者が理解するように、架橋調製物であり得る。架橋調製物は、一般に、良好な化学的および物理的安定性を有することが認められている。適当な固体支持体の選択は、固体支持体の公知の特性および固体支持体を使用する方法から、当業者に明らかである。アガロースは、以下の基本的な構造を有する直鎖重合体である：
【００２８】
【化２７】
【００２９】
ここで、ｖは、少なくとも１である。アガロースのこの基本的な構造の異形は、当業者に認められている。固体支持体（例えば、アガロース）の調製および使用は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ ａｎｄ Ａｎｆｉｎｓｅｎ，「Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」 ｉｎ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｎｅｌｌら著（ＣＡ：Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｎｃ．），４０：２５９−２７８（１９７１）を参照；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）。
【００３０】
本明細書中で使用するタグとは、このアルキル連結ヌクレオチドの明確な検出または捕捉用に提供された試薬である。例えば、限定するものではないが、適当なタグには、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン、蛍光体または発色団がある。このアルキル連結ヌクレオチドの検出または捕捉は、当該技術分野で標準的な技術を使用する。例えば、ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドは、アビジン、ストレプトアビジンまたは関連したアビジン誘導体を使用して、捕捉できる。このビオチン−アビジン相互作用は、非常に特異的である。ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドを検出または捕捉するのに使用されるアビジン共役試薬は、溶解性（例えば、抗体）であり得るか、または微粒子物質（例えば、ビーズ状アガロースまたは磁化粒子）または連続表面（例えば、アビジンで被覆したプレートまたはウェル）であり得る。ハプテンで標識したアルキル連結ヌクレオチドの検出および捕捉は、例えば、ハプテン特異的抗体を使用して、達成できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的検出方法は、当業者に容易に理解できる。
【００３１】
保護基は、当該技術分野で周知であり、そして標準的である。保護基の選択は、その反応性基の特性、その化合物を使用する条件および望ましい機能に依存している。これらは、当業者に容易に理解できる（一般に、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」 Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ著（ＮＹ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）３版（１９９９）を参照；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）。保護基は、反応性基（例えば、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、カルボニル基、スルフヒドリル基およびホスフェート基）を選択的に保護するのに使用される。
【００３２】
Ｒ１は、共有結合であり得るか、またはＲ１が共有結合ではないとき、Ｒ１はまた、本明細書中にて、リンカーまたはリンカーアームと呼ばれる。Ｒ２はまた、本明細書中にて、リンカーまたはリンカーアームと呼ばれる。リンカーは、任意の適当なアルキル、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、置換、非置換、直鎖または分枝基、またはそれらの組合せから選択できる。一般に、このリンカーは、疎水性リンカーである。例えば、このリンカーは、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれより長い炭素鎖であり得る。さらに、本発明で使用されるリンカーは、当業者が理解するように、非常に疎水性または中程度に疎水性であり得る。あるいは、疎水性リンカーが使用できる。
【００３３】
１実施態様では、Ｒ１は、以下を含む：
【００３４】
【化２８】
【００３５】
ここで、Ｑ＝０またはＮＨ２＋である。
【００３６】
他の実施態様では、Ｒ１は、以下を含む：
【００３７】
【化２９】
【００３８】
ここで、Ｑ＝ＯまたはＮＨ２＋であり；Ｒ４は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；そしてＲ５は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００３９】
１実施態様では、Ｒ２は、以下を含む：
【００４０】
【化３０】
【００４１】
ここで、Ｒ３は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００４２】
適当なリンカーの例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００４３】
【化３１】
【００４４】
【化３２】
【００４５】
さらに、リンカー（例えば、上記のもの）は、（例えば、縮合反応を介して）、他のリンカーに結合でき、さらに大きいおよび／または長いリンカーを形成する。例えば、リンカーは、直鎖配置でのリンカーの直列合成により、形成できる。これは、例えば、以下のように表わすことができる：
（Ｙ）ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｋ−Ｒ７−Ｚ
ここで、Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１であり；Ｌ１およびＬ２は、リンカー（例えば、上記例で提供されたもの）であり、それらは、同一または異なるリンカーであり得る；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体である。上記例で示されているように、２個のリンカーは、直列に合成できるが、しかしながら、２個、３個またはそれ以上のリンカーを直列に合成できることが分かる。あるいは、分枝配置のリンカーが合成できる。この場合もやはり、これらのリンカーは、同一または異なり得る。異なるリンカーは、当業者が理解しているように、それらの異なる疎水性または親水性に従って、選択できる。
【００４６】
それに加えて、またはその代わりに、例えば、Ｙが固体支持体のとき、１種より多い種類のリンカーにより、Ｙには、１個より多いヌクレオチドが結合できる。
【００４７】
この場合もやはり、当業者が理解しているように、それらの異なる疎水性または親水性に従って、選択できる。それゆえ、例えば、Ｙが固体支持体のとき、類似または異なる疎水性（または親水性）を有するリンカーにより、この固体支持体には、１個より多いヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体（これは、同一のヌクレオチドまたは異なるヌクレオチド（例えば、ＡＴＰのみ、またはＡＭＰおよびＡＤＰの混合物など））に結合できる。これらのアフィニティー媒体に適当な合成方法の例は、実施例で提供されている。
【００４８】
本発明のある実施態様では、Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェート基またはチオホスフェート基であり、そしてｎ≧１である。使用され得る適当なホスフェート基またはチオホスフェート基の例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００４９】
【化３３】
【００５０】
当業者が理解するように、ホスフェート基またはチオホスフェート基はまた、イオン化変異体または塩形状で存在できる。本発明のある実施態様では、ｎは、≧１、≧２、≧３または≧４である。例えば、ｎは、１、２、３または４であり得る。ｎ≧１のとき、ホスフェート基またはチオホスフェート基の任意の組合せが使用され得る。
【００５１】
本発明の他の実施態様では、Ｒ７は、ホスフェート基模倣物である。例えば、ある実施態様では、Ｒ７は、その主鎖に４個〜８個の炭素を含有し必要に応じてヘテロ原子を含有するカルボン酸である。適当なカルボン酸の例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００５２】
【化３４】
【００５３】
従って、ある実施態様では、これらのアルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下から選択される一般式を有する：
【００５４】
【化３５】
【００５５】
【化３６】
【００５６】
本発明に従って使用され得る他のホスフェート基には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００５７】
【化３７】
【００５８】
ここで、ＶおよびＷは、Ｈまたはヘテロ原子（例えば、ＮＨ２またはＯＨ）であり得る；
【００５９】
【化３８−１】
【００６０】
ここで、ＶおよびＷは、Ｈまたはヘテロ原子（例えば、ＮＨ２またはＯＨ）であり得る；
【００６１】
【化３８−２】
【００６２】
ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書中で述べるように、天然に生じるか天然に生じないものであり得る。さらに、このヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業者に標準的な技術を使用して、生物学的または合成的に誘導できる。適当なヌクレオシドには、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）およびそれらの誘導体および類似物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
ヌクレオチドは、少なくとも１個のホスフェート基（またはチオホスフェート基）（例えば、モノホスフェート基、ジホスフェート基またはトリホスフェート基）を有するヌクレオシドである。このヌクレオチドは、ホスフェート基またはチオホスフェート基、または両者の組合せを有し得る。ホスフェート基またはチオホスフェート基の数は、少なくとも１個であり、１個、２個、３個またはそれ以上であり得る。このようなヌクレオチドは、しばしば、当業者が理解するように、略語（例えば、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、ＧＭＰ、ＧＤＰ、ＧＴＰなど）で呼ばれる。
【００６４】
１実施態様では、このヌクレオチドは、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンまたはウリジンのモノホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートである。
【００６５】
ヌクレオシドおよびヌクレオチド誘導体および類似物もまた、本発明に含まれる。ヌクレオシド誘導体および類似物の単離または合成は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、達成される：
【００６６】
【表１】
【００６７】
【表２】
【００６８】
これらの全ての教示内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【００６９】
１実施態様では、本発明は、アルキル連結アデノシンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７０】
【化３９】
【００７１】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００７２】
他の１実施態様では、本発明は、アルキル連結グアノシンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７３】
【化４０】
【００７４】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００７５】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結チミジンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７６】
【化４１】
【００７７】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００７８】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結シチジンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００７９】
【化４２】
【００８０】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００８１】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結ウリジンを含有するアルキル連結ヌクレオチド組成物を包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００８２】
【化４３】
【００８３】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【００８４】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結アデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００８５】
【化４４】
【００８６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００８７】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結グアノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００８８】
【化４５】
【００８９】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９０】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結チミジンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００９１】
【化４６】
【００９２】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９３】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結シチジンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００９４】
【化４７】
【００９５】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９６】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結ウリジンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【００９７】
【化４８】
【００９８】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【００９９】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２’−デオキシアデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１００】
【化４９】
【０１０１】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１０２】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結３’−デオキシアデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１０３】
【化５０】
【０１０４】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１０５】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２’−デオキシ−２’−アミノ−アデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１０６】
【化５１】
【０１０７】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１０８】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結３’−デオキシ−３’−アミノ−アデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１０９】
【化５２】
【０１１０】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１１１】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結アデノシン誘導体であるＡｒｉｓｔｅｒｏｍｙｃｉｎを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１１２】
【化５３】
【０１１３】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１１４】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結ＡＴＰ誘導体であるＮｅｐｌａｎｏｃｉｎを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１１５】
【化５４】
【０１１６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１１７】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２’，３’−ジデオキシ−３’−オキソアデノシンを包含し、該アルキル連結ヌクレオチド組成物は、以下の一般式を含む：
【０１１８】
【化５５】
【０１１９】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１２０】
他の実施態様では、本発明は、アルキル連結２−、６−または８−置換アデノシン誘導体を包含する。これらの置換アデノシン誘導体は、それらの対応する臭化物（その２位置および８位置に対して）または塩化物（その６位置に対して）と適当なアミン（これには、例えば、アリルアミン、ベンジルアミン、ｔ−ブチルアミン、２−メトキシエチルアミンおよびジエチルアミンが挙げられる）とを縮合することにより、製造できる。例えば、Ｈａｌｂｆｉｎｇｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：５３２５−３７およびｖａｎ Ｔｉｌｂｕｒｇら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：１３９３−４００を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている。アルキル連結８−置換アデノシンの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１２１】
【化５６】
【０１２２】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり、そしてＲ９は、アミンである。
【０１２３】
追加実施態様では、本発明は、アルキル連結ホルマイシンＡを包含する。アルキル連結ホルマイシンＡの一例は、以下で示す：
【０１２４】
【化５７】
【０１２５】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１２６】
追加実施態様では、本発明は、アルキル連結４−デアザホルマイシンを包含する。４−デアザホルマイシンＡの合成は、Ｋｏｕｒａｆａｌｏｓら（２００３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：６４６６−６９で記述されており、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。アルキル連結４−デアザホルマイシンＡの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１２７】
【化５８】
【０１２８】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１２９】
ある実施態様では、本発明は、アザまたはデアザアデノシン誘導体を包含する。８−アザ、８−アザ−１−デアザ、８−アザ−３−デアザ、１−デアザ、３−デアザおよび１，７−デアザアデノシン誘導体の合成は、Ｆｒａｎｃｈｅｔｔｉら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７，３５３４およびＳｅｅｌａら（１９９１）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ７４：１０４８で記述されている。これらの誘導体は、糖ハロゲン化物であるβ−ｄ−リボフラノース−１−アセテート−２，３，５−トリベンゾエート（Ｋｒａｙｂｉｌｌら（２００２）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２４：１２１１８およびＳａｎｅｙｏｓｈｉら（１９７９）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２７：２５１８を参照）およびＳｎＣｌ４と反応されて、追加アデノシン誘導体を形成できる。このような１誘導体の一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３０】
【化５９】
【０１３１】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１３２】
さらに他の実施態様では、本発明は、アルキル連結プリンリボシドを包含する。アルキル連結プリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３３】
【化６０】
【０１３４】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１３５】
本発明はまた、アルキル連結６−メルカプトプリンリボシドを提供する。アルキル連結６−メルカプトプリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３６】
【化６１】
【０１３７】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１３８】
本発明はまた、アルキル連結６−クロロプリンリボシドを提供する。アルキル連結６−クロロプリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１３９】
【化６２】
【０１４０】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１４１】
本発明はまた、アルキル連結６−メチルプリンリボシドを提供する。この６−メチルプリンリボシドは、６−クロロプリンリボシドとグリニャール試薬である塩化メチルマグネシウムとを反応させて６−メチルプリンリボシドを得ることにより、合成され得る（Ｈｏｃｅｋ ａｎｄ Ｄｖｏｒａｋｏｖａ（２００３）Ｊ：Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ．６８：５７７３−６であって、その内容は、本明細書中で参考として援用されている）。アルキル連結６−メチルプリンリボシドの一般構造の一例は、以下で示す：
【０１４２】
【化６３】
【０１４３】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである。
【０１４４】
他の実施態様では、本発明は、そのリボース基をリボース模倣物で置き換えたアルキル連結アデノシン誘導体を包含する。このようなアルキル連結誘導体の一般構造の一例は、以下である：
【０１４５】
【化６４】
【０１４６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、リンカー（Ｒ３）は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり、そしてＲ８は、リボース模倣物である。ある実施態様では、このリボース模倣物は、アルキル基、Ｃ４〜Ｃ７シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、アリールまたはヘテロアリール基である。例えば、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４２５４−６３を参照（その内容は、本明細書中で参考として援用されている）。他の適当なリボース模倣物の例には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【０１４７】
【化６５】
【０１４８】
【化６６】
【０１４９】
他の実施態様では、これは、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結ヌクレオチドである：
【０１５０】
【化６７】
【０１５１】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１５２】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結グアノシンを包含する：
【０１５３】
【化６８】
【０１５４】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１５５】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結グアノシンを包含する：
【０１５６】
【化６９】
【０１５７】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１５８】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結シチジンを包含する：
【０１５９】
【化７０】
【０１６０】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１６１】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結チミジンを包含する：
【０１６２】
【化７１】
【０１６３】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１６４】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロースに共有結合したアルキル連結ウリジンを包含する：
【０１６５】
【化７２】
【０１６６】
またはそれらのイオン化変異体または塩であって、ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０１６７】
また、本発明には、以下の一般式を含むγ−アルキル連結ヌクレオチド三リン酸が含まれる：
【０１６８】
【化７３】
【０１６９】
【化７４】
【０１７０】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１７１】
また、本発明には、以下の一般式を含むγ−アルキル連結ヌクレオチド類似物が含まれる：
【０１７２】
【化７５】
【０１７３】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結アデノシン三リン酸を包含する：
【０１７４】
【化７６】
【０１７５】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１７６】
１実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結グアノシン三リン酸を包含する：
【０１７７】
【化７７】
【０１７８】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１７９】
他の実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結シチジン三リン酸を包含する：
【０１８０】
【化７８】
【０１８１】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１８２】
さらに他の実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結チミジン三リン酸を包含する：
【０１８３】
【化７９】
【０１８４】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１８５】
他の実施態様では、本発明は、以下の一般構造を含むアガロース固体支持体に結合したγ−ホスフェート連結ウリジン三リン酸を包含する：
【０１８６】
【化８０】
【０１８７】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【０１８８】
（アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体の合成）
また、本発明には、以下の一般式を含むアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する方法が含まれる：
【０１８９】
【化８１】
【０１９０】
該方法は、以下の一般工程を包含する：（ａ）適当なカップリング緩衝液中にて、少なくとも１個のリンカーを固体支持体またはタグにカップリングする工程であって、ここで、該リンカーは、Ｒ２またはＲ１とＲ２との組合せであり；（ｂ）該カップリング工程後、該固体支持体に残っている反応性部位を末端キャップ化する工程；および（ｃ）ヌクレオチドの末端ホスフェートまたはチオホスフェート基を、該固体支持体またはタグにカップリングした該リンカーと反応させる工程であって、ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基またはそれらの組合せの間の共有結合であり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である。本明細書中の他の箇所で記述したように、固体支持体は、任意の適当な支持体、例えば、樹脂または特定の物質（例えば、ビードまたは粒子）であり得る。あるいは、固体支持体は、連続固体表面（例えば、プレート、チップ、ウェル、チャンネル、カラムまたはチューブ）であり得る。固体支持体の材料は、当業者が理解するように、任意の適当な物質、化合物または重合体である。例には、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロース、ポリスチレンおよびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
さらに、本明細書中で使用するタグとは、このアルキル連結ヌクレオチドの明確な検出または捕捉用に提供された試薬である。例えば、限定するものではないが、適当なタグには、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン、蛍光体または発色団がある。このアルキル連結ヌクレオチドの検出または捕捉は、当該技術分野で標準的な技術を使用する。例えば、ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドは、アビジン、ストレプトアビジンまたは関連したアビジン誘導体を使用して、捕捉できる。このビオチン−アビジン相互作用は、非常に特異的である。ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドを検出または捕捉するのに使用されるアビジン共役試薬は、溶解性（例えば、抗体）であり得るか、または微粒子物質（例えば、ビーズ状アガロースまたは磁化粒子）または連続表面（例えば、アビジンで被覆したプレートまたはウェル）であり得る。ハプテンで標識したアルキル連結ヌクレオチドの検出および捕捉は、例えば、ハプテン特異的抗体を使用して、達成できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的検出方法は、当業者に容易に理解できる。
【０１９２】
ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書中で述べるように、天然に生じるか天然に生じないものであり得る。さらに、このヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業者に標準的な技術を使用して、生物学的または合成的に誘導できる。適当なヌクレオシドには、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９３】
１実施態様では、このヌクレオチドは、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンまたはウリジンまたはそれらの類似物の一リン酸、二リン酸、三リン酸または四リン酸である。ある実施態様では、このヌクレオチドのホスフェート部分は、変性されている。例えば、Ｐｉｃｈｅｒら（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５１：１４５３−６０；Ｉｎｇａｌｌら（ｌ９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：２１３−２０；Ｇｅｎｄｒｏｎら（２０００）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：２２３９−４７；およびＸｕら、（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：５６９４−７０９を参照（これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている）。
【０１９４】
他の実施態様では、このヌクレオチドのホスフェート部分は、ホスフェート基模倣物で置き換えられている。例えば、ある実施態様では、これらのアルキル連結ヌクレオチド組成物は、その主鎖に４個〜８個の炭素を含有し必要に応じてヘテロ原子を含有するカルボン酸を含む。これらのヌクレオチド誘導体を製造するには、２’，３’−イソプロピリデンアデノシンは、環状無水物と反応され、次いで、そのアセトニドは、脱保護される。２’，３’−イソプロピリデンと反応され得る環状無水物の例には、無水ジグリコール酸、無水コハク酸、無水グルタル酸および無水マレイン酸が挙げられるが、任意の適当な求電子試薬は、使用され得る。アデノシンの５’−ヒドロキシルの官能基はまた、フタルイミドとの光延反応に続いてヒドラジン分解により、第一級アミンに変換され得る。例えば、Ｂｒｅｓｓｉら（２００１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４：２０８０−９３およびＨｅｒｆｏｒｔｈら（２００２）Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．４：３０２−１４を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０１９５】
他のホスフェート基模倣物は、本発明に従って、使用され得る。例えば、ＡＴＰ類似物は、２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンと４−クロロスルホニル安息香酸とを反応させて次式を有するＡＴＰ類似物を得ることにより、製造できる：
【０１９６】
【化８２】
【０１９７】
このベンゼン環は、水酸基またはアミン基で置換できる。例えば、Ｒｏｓｓｅら（１９９７）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．８０：６５３を参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０１９８】
他の例では、２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンは、塩化スルファモイルと反応され、そのスルホンアミドは、カルボン酸と共役され（例えば、マロン酸ベンジルまたはマロン酸ｔ−ブチル）、次いで、１段階または２段階で脱保護されて、以下の構造を有するＡＴＰ類似物が得られる：
【０１９９】
【化８３】
【０２００】
マロン酸ｔ−ブチルとの共役の後、１段階だけの酸性脱保護が実行される。マロン酸ベンジルとの共役の後、そのベンジル基の触媒水素化およびアセトニド基の酸性開裂が実行される。モノ保護マロネートに加えて、モノ保護スクシレートまたはグルタメートが使用できる。それに加えて、このスルホンアミドは、他の求電子試薬（例えば、ブロモ酢酸）と反応されて、ホスフェート基模倣物を得ることができる。このスルホンアミドをリンカーに連結するには、アミノ酸もまた、使用できる。Ｋｏｒｏｎｉａｋら（２００３）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９３：１４５を参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２０１】
さらに他の例では、ＡＴＰ類似物は、アデノシン−５’−カルボン酸をβ−アラニンと共役して以下の構造を有するＡＴＰ類似物を形成することにより、製造される：
【０２０２】
【化８４】
【０２０３】
他のアミノカルボン酸は、使用できる。それに加えて、アデノシン−５’−カルボン酸は、アミノ酸またはペプチドと共役できる。Ｌｏｏｇら（２０００）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４８０：２４４；およびＰａｒａｎｇら（２００２）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９３：１４５を参照；これらの両方の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２０４】
本発明のアルキル連結ヌクレオチド組成物で使用され得るホスフェート基模倣物の他の非限定的な例には、以下が挙げられる：
【０２０５】
【化８５−１】
【０２０６】
ここで、ＶおよびＷは、ヘテロ原子（例えば、ＮＨ２またはＯＨ）であり得る：
【０２０７】
【化８５−２】
【０２０８】
このアルキル連結ヌクレオチドのリボース部分は、変性または置換され得る。例えば、４−ペンテン−１−オールの酸化およびアセトニド保護により、中間体が得られ、これは、古典的な光延条件下にて、このアデノシンと反応できる。アルコールとアデノシンＮ９との間の光延反応は、十分に確立されている。例えば、Ｃｈａｎｇら（１９９９）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：３６１−７５。次いで、このアセトニドを脱保護すると、リン酸化および樹脂リンカーアームの組合せとの結合の準備となる第一配位子が生じる。同じ中間体の第一級アルコールはまた、そのアルデヒドに酸化でき、続いて、アセトニド脱保護および閉環される。第二級ヒドロキシルよりも第一級ヒドロキシルを選択的に保護し、光延反応し、そして第一級ヒドロキルシを脱保護すると、第二配位子が得られる。
【０２０９】
本発明の組成物中で使用され得るヌクレオシド類似物の非限定的な例には、２’−デオキシ−アデノシン、３’−デオキシ−アデノシン、２’−デオキシ−２’−アミノ−アデノシン、３’−デオキシ−３’−アミノ−アデノシン、ホルマイシンＡ、４−デアザホルマイシンＡ、アリステロマイシン、ネプラノマイシンＡ、プリンリボシド、６−メルカプトプリンリボシド、６−クロロプリンリボシド、６−メチルプリンリボシドおよび２’、３’−ジデオキシ−３’−オキソアデノシンが挙げられる。例えば、Ｇｕｒａｎｏｗｓｋｉら（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０：１１０；Ｙａｇｉｎｕｍａら（１９８１）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．２３：３５９；Ｒｏｂｉｎｓら（１９８３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０５：４０５９；Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（１９８４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９：５３５３；Ｄｅ Ｃｌｅｒｑら（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３６：２５６７；Ｈｕｒｙｎら（１９８９）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３０：６２５９；Ｆｒａｎｃｈｅｔｔｉら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：３５３４；Ｖａｎ Ｃａｌｅｎｂｅｒｇｈら（１９９４）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｅｍ．Ａｃｔａ．７７：６３１；Ｃｏｗａｒｔら（１９９９）Ｊ：Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６４：２２４０；Ｈｏｃｅｋ ａｎｄ Ｄｖｏｒａｋｏｖａ（２００３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：５７７３；およびＫｏｕｒａｆａｌｏｓら（２００３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：６４６６−６９を参照；これらの各々の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２１０】
さらに他の実施態様では、このヌクレオシドまたはヌクレオチドは、２−、６−または８−置換アデノシン誘導体である。このような誘導体は、それらの対応する臭化物（その２位置および８位置に対して）または塩化物（その６位置に対して）と適当なアミン（例えば、アリルアミン、ベンジルアミン、ｔ−ブチルアミン、２−メトキシエチルアミン、ジエチルアミン）とを縮合することにより、製造され得る。例えば、Ｈａｌｂｆｉｎｇｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：５３２５−３７およびｖａｎ Ｔｉｌｂｕｒｇら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：１３９３を参照。
【０２１１】
ある実施態様では、これらの組成物は、リボース模倣物を含有する。例えば、このヌクレオシドまたはヌクレオチドのリボースは、アルキル基、Ｃ４〜Ｃ７シクロアルキル基、ヘテロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基で置換される。これは、ジオールのモノチトリレーション（ｍｏｎｏｔｉｔｒｙｌａｔｉｏｎ）に続いて、アデノシンとの光延反応およびチトリル化したアルコールの脱保護により、達成され得る。例えば、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５、４２５４を参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２１２】
他のリボース模倣物およびそれらの合成は、例えば、以下で記述されている：Ｌｅｅら（１９６１）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８３：１９０６；Ｉｍａｚａｗａ（１９７８）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３：３０４４；Ｒｏｂｉｎｓら（１９８４）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２５：３６７；Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎら（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：２１３１−３７；Ｗｕら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４４：６７０５；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔら（１９８９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２：１７４３−４９；Ｓｅｃｒｉｓｔら（１９９１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：２３６１−６６；Ｓｅｃｒｉｓｔら（１９９２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：５３３−３８；Ｈｏｌｌｅｔｚら（１９９４）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ８：７８９；Ｃｈｏｉら（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２５：３６７；Ｍｅｉｅｒら（１９９９）Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １８：９０７−１２；Ｍｅｉｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：１６１５−２４；ａｎｄ Ｃｈｏｏら、（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６：３８９−９８。
【０２１３】
アルキル連結ヌクレオチドを含有するアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体の合成は、一般に、３段階で行われる：第一に、そのリンカー（または複数のリンカー）は、固体支持体（これはまた、本明細書中にて、一般に、樹脂とも呼ばれている）に結合される；第二に、この固体支持体上の任意の残留している活性部位は、適当な試薬（例えば、エタノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオールまたはグリシン）を使用して末端キャップ化される；そして第三に、そのリンカーアームは、特別なアフィニティー配位子（例えば、ヌクレオチド（例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）））と反応されて、それにより、ヌクレオチドアフィニティー媒体を生成する。
【０２１４】
リンカーを介したヌクレオチドへのタグ（例えば、ビオチン）の結合は、当該技術分野で標準的である技術を使用する。例えば、ビオチンは、結合したリンカーアームを使用して、合成できる；このような化合物は、当業者に公知であり、そして既に結合した異なるリンカーアームと共に市販されている；例えば、
【０２１５】
【化８６】
【０２１６】
ビオチンタグに結合されたアルキル連結ヌクレオチドを合成するには、その水溶性ビオチンリンカー錯体は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）および１−メチルイミダゾールと反応したヌクレオチドと反応される。
【０２１７】
保護基を有するアルキル連結ヌクレオチドの合成は、当該技術分野で公知の技術を使用する。典型的には、このリンカー（例えば、ジアミンリンカー）は、非対称的に保護されて（すなわち、一端で保護されて）、水溶性半保護ジアミンリンカーを形成する。このリンカーの未保護末端は、当業者に理解されるように、このヌクレオチドとＥＤＣおよび１−メチルイミダゾールとを反応させることにより調製されたヌクレオチドと反応される。
【０２１８】
本明細書中で既に記述したように、その固体支持体またはタグがアルキル連結ヌクレオチド、および必要に応じて、アルキル連結ヌクレオチドに結合された化合物（例えば、タンパク質）の分離に適当であるように固体支持体またはタグに結合されたアルキル連結ヌクレオチドはまた、本明細書中にて、「ヌクレオチドアフィニティー媒体」または「アルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体」と呼ばれている。
【０２１９】
一般に、このリンカーは、当業者に理解されるように、任意の適当なカップリング緩衝液中にて、この固体支持体に結合される。例えば、このカップリング緩衝液は、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）には、ｐＨを８〜９に調節した０．１Ｍまたは０．２Ｍリン酸ナトリウム、または１，１’−カルボニルジイミダゾール活性化（ＣＤＩ）−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）には、ｐＨを１０に調節した０．１Ｍまたは０．２Ｍリン酸ナトリウムであり得る。あるいは、ｐＨを８〜９に調節した０．０１Ｍ〜０．１Ｍボレートは、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）をカップリングするのに使用でき、またはｐＨを１０に調節した０．０１Ｍ〜０．１Ｍボレートは、ＣＤＩ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）をカップリングするのに使用できる。例えば、リンカーは、室温で、炭酸水素ナトリウムカップリング緩衝液（例えば、以下の実施例で使用されているように、０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ＝８．２）中にて、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースと反応できる。ＣＤＩ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースとの反応には、そのリンカーは、例えば、室温で、例えば、当業者に理解されるように、０．０５Ｍ ＮａＨＣＯ３−Ｎａ２ＣＯ３カップリング緩衝液中にて、この樹脂と反応できる。典型的には、この固体支持体は、次いで、水で洗浄される。
【０２２０】
この固体支持体は、次いで、その固体支持体上の残りの活性部位をブロックするために末端キャップ化され、これは、任意の適当な試薬（例えば、エタノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオールまたはグリシン）を使って、実行できる。例示のために、末端キャップ化は、室温で、約１時間にわたって、この固体支持体を１Ｍエタノールアミン（ｐＨ＝８．９）と反応させることにより、達成できる。この固体支持体は、次いで、典型的には、１Ｍ ＮａＣｌおよび水で洗浄される。
【０２２１】
このヌクレオチドは、当業者に理解されるように、また、実施例で記述されているように、次いで、適当な条件下にて、この固体支持体上のリンカーアームと反応される。
【０２２２】
固体支持体またはタグ（ヌクレオチドアフィニティー媒体）に結合されたアルキル連結ヌクレオチドは、一旦、調製されると、任意の適当な緩衝液中で保存される。例えば、０．１Ｍ Ｋ２ＨＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４緩衝液（ｐＨ＝７．４）は、防腐剤として、０．０２％ナトリウムアジドを含有する。
【０２２３】
イソ尿素およびカーバメート連鎖の合成方法は、当該技術分野で標準的である（一般に、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎら、「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｌｉｇａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９２を参照；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）。例えば、臭化シアン活性化アガロースの使用（一般に、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ ａｎｄ Ａｎｆｉｎｓｅｎ、「Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」、ｉｎ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｎｅｌｌら著（ＣＡ：Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｎｃ．），４０：２５９−２７８（１９７１）；その教示内容は、本明細書中で参考として援用されている）により、適当なイソ尿素が合成されるのに対して、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース６Ｂ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）を使用すると、適当なカーバメート連鎖が得られる。あるいは、適当な樹脂の水酸基は、中間体として炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルを使用して、適当な脱離基に変換でき、カーバメート連鎖を調製するか、または有機塩化スルホニルを使用して、親水性置換に対して樹脂水酸基を活性化して、炭素−窒素結合を調製する。
【０２２４】
以下の実施例において固体支持体に結合されたアルキル連結ヌクレオチドは、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース４Ｂ（Ｓｉｇｍａ）、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロース６Ｂ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂、Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ樹脂またはＵｌｔｒｏｇｅｌ樹脂を使って、製造した。他の適当な固体支持体は、当業者に容易に理解され、これらには、例えば、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロースおよびポリスチレン、およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２５】
使用前、当業者に理解されるように、標準的なプロトコルに従って、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、１ｍＭ ＨＣｌおよび水で洗浄されるのに対して、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、氷冷水で洗浄される。
【０２２６】
γ−ホスフェート連結ヌクレオチドアフィニティー配位子の化学合成の一例は、図１〜５で図示されている。例示の目的のために、このヌクレオチドは、ＡＴＰである。
【０２２７】
図１は、中間体ＩＡの化学的な形成を図示している。臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、ジアミノ疎水性リンカーと反応されて、樹脂結合リンカー（中間体ＩＡ）を形成する。
【０２２８】
代替樹脂を使用して、図２は、中間体ＩＢの化学的な形成を図示している。ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ状アガロースは、ジアミノ疎水性リンカーと反応されて、樹脂結合リンカー（中間体ＩＢ）を形成する。
【０２２９】
中間体ＩＩの化学的な形成（これは、それの樹脂との結合の調製でのヌクレオチドの変性である）は、図３で図示されている。このヌクレオチドは、水溶性カルボジイミド（例えば、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ））と反応されて、Ｏ−ホスホリルチオ尿素を形成する。このＯ−ホスホリルチオ尿素は、適当な求核性化合物（例えば、１−メチルイミダゾール）と反応されて、中間体ＩＩを形成する。
【０２３０】
ヌクレオチドアフィニティー媒体の合成の最終工程は、図４および５で図示されている。具体的には、図４は、ヌクレオチドアフィニティー媒体の化学的な形成の一例を図示している。中間体ＩＡおよびＩＩは、混ぜ合わされて、固体支持体に結合された最終アルキル連結ヌクレオチドを形成する。他の例では、図５で示されているように、中間体ＩＢおよびＩＩは、混ぜ合わされて、固体支持体に結合された最終アルキル連結ヌクレオチドを形成する。
【０２３１】
１実施態様では、アルキル連結ヌクレオチドを使った固体支持体の装填は、変えることができる。このことは、固体支持体の必ずしも全ての反応部位がアルキル連結ヌクレオチドと反応されることを意味している。例えば、アルキル連結ヌクレオチドを使った固体支持体の装填は、５〜２５％の範囲であり得、このことは、反応部位の５〜２５％がアルキル連結ヌクレオチドと反応されることを意味する。あるいは、このアルキル連結ヌクレオチドの装填は、２０〜５０％、４０〜６５％、６０〜８０％または７５〜１００％の範囲である。この固体支持体のうちアルキル連結ヌクレオチドと反応していない反応部位は、適当なら、適当な試薬を使用して、キャップ化できる。
【０２３２】
（アルキル連結ヌクレオチド組成物の用途）
また、本発明には、化合物（例えば、プロテオーム）をスクリーニングする方法が含まれ、該方法は、以下の工程を包含する：（ａ）プロテオームを、以下の一般式を含むヌクレオチドアフィニティー媒体と接触させる工程：
【０２３３】
【化８７】
【０２３４】
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１であり；（ｂ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体を緩衝液で洗浄し、それにより、該プロテオームの非特異的に結合した成分を該ヌクレオチドアフィニティー媒体から溶出しそして該プロテオームの特異的成分は、該ヌクレオチドアフィニティー媒体に結合したままである工程；（ｃ）該プロテオームの特異的成分に結合した該ヌクレオチドアフィニティー媒体を少なくとも１種の試験化合物と接触させる工程；（ｄ）該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該ヌクレオチドアフィニティー媒体成分を溶出する工程；および（ｅ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体から該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該成分を同定する工程。
【０２３５】
試験化合物は、当業者に理解されるように、有機または無機、天然に生じるか天然に生じないものである任意の化合物であり得る。例えば、この試験化合物は、組合せライブラリまたは化学ライブラリに由来の化合物であり得る。さらに、この試験化合物は、単細胞有機体、多細胞有機体、または多細胞有機体の器官または組織から抽出された化合物であり得る。このような有機体の例には、細菌、藻類、真菌、植物、魚類、両生類、哺乳動物などが挙げられるが、これらに限定されない。この試験化合物は、当業者に理解されるように、単一化合物であり得、あるいは、化合物の混合物であり得る。
【０２３６】
本明細書中の他の箇所で記述したように、固体支持体は、任意の適当な支持体、例えば、樹脂または特定の物質（例えば、ビードまたは粒子）であり得る。あるいは、固体支持体は、連続固体表面（例えば、プレート、チップ、ウェル、チャンネル、カラムまたはチューブ）であり得る。固体支持体の材料は、当業者が理解するように、任意の適当な物質、化合物または重合体である。例には、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート重合体、メタクリレート共重合体、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、磁化粒子または表面、ニトロセルロース、ポリスチレンおよびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３７】
さらに、「タグ」との用語は、本明細書中で使用されているが、このアルキル連結ヌクレオチドの明確な検出または捕捉用に提供された試薬である。例えば、限定するものではないが、適当なタグには、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン、蛍光体または発色団がある。このアルキル連結ヌクレオチドの検出または捕捉は、当該技術分野で標準的な技術を使用する。例えば、ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドは、アビジン、ストレプトアビジンまたは関連したアビジン誘導体を使用して、捕捉できる。このビオチン−アビジン相互作用は、非常に特異的である。ビオチンで標識したアルキル連結ヌクレオチドを検出または捕捉するのに使用されるアビジン共役試薬は、溶解性（例えば、抗体）であり得るか、または微粒子物質（例えば、ビーズ状アガロースまたは磁化粒子）または連続表面（例えば、アビジンで被覆したプレートまたはウェル）であり得る。ハプテンで標識したアルキル連結ヌクレオチドの検出および捕捉は、例えば、ハプテン特異的抗体を使用して、達成できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的検出方法は、当業者に容易に理解できる。蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的な検出は、標識したアルキル連結ヌクレオチドと標的タンパク質との間の特定の相互作用の存在または不在を容易に決定するような技術に有用である。あるいは、蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドの視覚的な検出は、試験化合物と標的タンパク質に結合した標識したアルキル連結ヌクレオチドとの間の特定の相互作用の存在または不在を容易に決定するような技術に有用である。さらに、ある化合物に対するアフィニティー配位子の親和性または親和力のリンカー特異的効果は、蛍光体または発色団で標識したアルキル連結ヌクレオチドを使用して、モニターできる。例えば、リンカーは、例えば、立体障害または静電相互作用を介して相互作用する化合物に対するアルキル連結ヌクレオチドの選択性、親和性または親和力に影響を与えることができる。これらのリンカー特異的効果は、ヌクレオチドに結合されたどのリンカーがヌクレオチドと標的タンパク質または化合物との相互作用に特異的に影響を与えるかを視覚的に検出することにより、アッセイまたはモニターできる。このようなリンカーは、タンパク質または標的化合物のサブセットを選択的に結合するヌクレオチドアフィニティー媒体を調製するのに使用できる。
【０２３８】
本明細書中の他の箇所で記述したように、ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書中で述べるように、天然に生じるか天然に生じないものであり得る。さらに、このヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業者に標準的な技術を使用して、生物学的または合成的に誘導できる。適当なヌクレオシドには、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）およびそれらの誘導体および類似物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３９】
１実施態様では、このヌクレオチドは、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンまたはウリジンまたはそれらの類似物の一リン酸、二リン酸、三リン酸または四リン酸である。
【０２４０】
本発明のアルキル連結ヌクレオチドアフィニティー媒体は、例えば、当業者に公知の方法を使用して、アフィニティークロマトグラフィーで使用できる。例えば、ＷＯ００／６３６９４（これは、２０００年４月１２日に出願された）および米国特許第５，５３６，８２２（これは、１９９４年３月４日に出願された）を参照；これらの教示内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０２４１】
このヌクレオチドアフィニティー媒体およびアルキル連結ヌクレオチドは、ヌクレオチドに結合する生体化合物の検出および精製に有用である。例えば、γ−ホスフェート連結アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は、キナーゼのような化合物（これらは、ＡＴＰに結合することが知られている）を検出し精製するのにの使用できる。具体的には、アルキル連結ヌクレオチド（例えば、ＡＴＰ）は、固体支持体またはタグに結合でき、引き続いて、プロテオームまたはその一部に接触または混合できる。プロテオームの非特異的に相互作用する成分は、一般に、当業者に容易に理解されるように、適当な緩衝液で洗浄することにより、除去される。
【０２４２】
さらに、このアルキル連結ヌクレオチドは、そのアルキル連結ヌクレオチドにより捕捉されたタンパク質と特異的に相互作用する化学化合物をスクリーニングするのに使用できる。引き続いて、このタンパク質は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、同定できる。
【０２４３】
あるいは、このアルキル連結ヌクレオチドは、このヌクレオチドに特異的に結合する化学化合物を検出し単離するのに使用できる例えば、アルキル連結ヌクレオチドは、組合せライブラリと混合できる。このアルキル連結ヌクレオチドと特異的に相互作用する組合せライブラリの化合物は、例えば、１種またはそれ以上の適当な緩衝液で洗浄することにより、非特異的に相互作用する化合物から分離できる。引き続いて、この特異的に相互作用する化合物は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、同定できる。
【０２４４】
あるいは、ヌクレオチドと相互作用することが公知である化合物の競争物が同定できる。例えば、アルキル連結ヌクレオチドは、公知の相互作用化合物（例えば、タンパク質）と混合でき、それらの結合が起こる。次いで、この公知化合物に結合されたアルキル連結ヌクレオチドには、他の化合物または化合物のライブラリ（例えば、組合せライブラリ）を加えることができる。もし、１種またはそれ以上の異なる化合物がこのヌクレオチドと競争できる（それゆえ、第一結合化合物を置換できる）なら、この公知化合物が放出され、その競争化合物は、引き続いて、同定できる。このような化合物は、有用な生物学的または薬理学的阻害剤であり得る。
【実施例】
【０２４５】
本発明は、さらに、以下の実施例で例示されるが、これらは、いずれの様式でも、限定するものとは解釈されない。説明を簡単にする目的のために、固体支持体は、一般に、以下で表わされる：
【０２４６】
【化８８】
【０２４７】
ここで、一般に、固体支持体上の水酸基は、適当な試薬（例えば、臭化シアン）と反応して臭化シアン活性化固体支持体を形成するのに利用可能である。この固体支持体は、上記の任意の固体支持体であり得る。
【０２４８】
（実施例１）
以下の一般構造は、実施例１で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２４９】
【化８９】
【０２５０】
１，３−ジアミノ−２−プロパノール１ｇをカップリング緩衝液３０ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＥＩＲＯＳＥ（登録商標）２ｇと混ぜ合わせることにより、このリンカーアームを樹脂に結合した。その反応は、室温で、約３時間進行した。
【０２５１】
ＡＴＰ（５００ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１０３．５ｍｇおよびＥＤＣ（１７２．５ｍｇ）を水２０ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子であるＡＴＰを樹脂に結合するために調製した。
【０２５２】
最後に、この活性化アフィニティー配位子に４−ジメチルアミノピリジン１１１ｍｇを加え、そして調製した樹脂と混ぜ合わせ、その反応を、室温で、約１２〜１８時間または一晩継続することにより、ヌクレオチドアフィニティー媒体を調製した。
【０２５３】
（実施例２）
以下の一般構造は、実施例２で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２５４】
【化９０】
【０２５５】
まず、カップリング緩衝液３０ｍＬに１，３−ジアミノ−２−プロパノール１ｇを加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２ｇと混ぜ合わせることにより、このリンカーを樹脂に結合した。その反応は、約３時間進行した。カップリング緩衝液３０ｍＬにヨード酢酸１．５ｇを加え、そのｐＨを９．８に調節し、この樹脂と混ぜ合わせることにより、この樹脂の第二反応を実行した。これを、室温で、約１時間、さらに反応させた。この樹脂とのさらなる反応において、水２０ｍＬにＥＤＣ（５００ｍｇ）を加え、この樹脂と混ぜ合わせた。反応は、さらに３０分間進行した。引き続いて、１，３−ジアミノ−２−プロパノール１ｇをカップリング緩衝液３０ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせた。反応を、さらに約１時間継続した。
【０２５６】
ＡＴＰ（５００ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１０３．５ｍｇおよびＥＤＣ（１７２．５ｍｇ）を水２０ｍＬに加え、その反応を約２時間進行させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２５７】
最後に、調製したアフィニティー配位子に４−ジメチルアミノピリジン１１１ｍｇを加え、そして樹脂と混ぜ合わせた。反応を、室温で、約１２〜１８時間または一晩進行させた。
【０２５８】
（実施例３〜８）
以下の一般構造は、実施例３〜８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２５９】
【化９１】
【０２６０】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０２６１】
（実施例１３）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２５０ｍｇをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約２時間反応させた。
【０２６２】
ＡＴＰ（３００ｍｇ）、ＥＤＣ（１０４ｍｇ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド６２ｍｇを水７ｍＬに加え、室温で９０分間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２６３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２６４】
（実施例４）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２５０ｍｇをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２６５】
ＡＴＰ（６９０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール５１３μＬおよびＥＤＣ（１２００ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２６６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２６７】
（実施例５）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン７５０ｍｇをカップリング緩衝液７．５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．４２５ｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２６８】
ＡＴＰ（１３７８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１０２７μＬおよびＥＤＣ（２４００ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２６９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７０】
（実施例６）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２２５ｍｇをカップリング緩衝液１．５ｍＬに加え、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２８５ｍｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２７１】
ＡＴＰ（５５０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１０μＬおよびＥＤＣ（９６０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２７２】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７３】
（実施例７）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン１５０ｍｇをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そのｐＨをｐＨ８．４に調節し、次いで、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５７１ｍｇと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２７４】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール８２０μＬおよびＥＤＣ（１９２０ｍｇ）を水１０ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２７５】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７６】
（実施例８）
この樹脂を調製するために、１，６−ジアミノヘキサン２５０ｍｇをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、ＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２．５ｍＬと混ぜ合わせた。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０２７７】
ＡＴＰ（６９０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール５１３μＬおよびＥＤＣ（１２００ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２７８】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２７９】
（実施例９〜２８）
以下の一般構造は、実施例９〜２８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０２８０】
【化９２】
【０２８１】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０２８２】
実施例９〜１６の全てについて、１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン７００μＬをカップリング緩衝液１０ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。反応した樹脂３００ｍｇのアリコートを実施例９〜１６で使用した。
【０２８３】
（実施例９）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド５８ｍｇおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２８４】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２８５】
（実施例１０）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２８６】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２８７】
（実施例１１）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２９０ｍｇおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２８８】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２８９】
（実施例１２）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９０】
このアフィニティー配位子および調製した樹脂（上記）３００ｍｇを共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２９１】
（実施例１３）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド５８ｍｇおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９２】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０２９３】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド５８ｍｇおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９４】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２９５】
（実施例１４）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９６】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０２９７】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０２９８】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０２９９】
（実施例１５）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２９０ｍｇおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３００】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０３０１】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２９０ｍｇおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０２】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３０３】
（実施例１６）
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０４】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約５時間反応させた。
【０３０５】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約２時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０６】
次いで、このアフィニティー配位子を樹脂３００ｍｇと混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３０７】
（実施例１７）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン５００μＬをカップリング緩衝液１０ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３０８】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水８ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３０９】
このアフィニティー配位子を調製した樹脂と混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１０】
あるいは、ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３１１】
このアフィニティー配位子を調製した樹脂と混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１２】
（実施例１８）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン２００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３１３】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３１４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１５】
（実施例１９）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３１６】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０５μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３１７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３１８】
（実施例２０）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン２５０μＬをカップリング緩衝液５ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３１９】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール８２μＬおよびＥＤＣ（１９２ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２１】
あるいは、ＡＴＰ（２５０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１９５μＬおよびＥＤＣ（４３０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２２】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２３】
（実施例２１）
エタノールアミン７５μＬおよび１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン７５μＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３２４】
ＡＴＰ（４１５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１２５μＬおよびＥＤＣ（２９０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２５】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２６】
（実施例２２）
エタノールアミン１３５μＬおよび１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１５μＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３２７】
ＡＴＰ（４１５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１２５μＬおよびＥＤＣ（２９０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３２８】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３２９】
（実施例２３）
エタノールアミン１４２．５μＬおよび１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン７．５μＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３０】
ＡＴＰ（４１５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１２５μＬおよびＥＤＣ（２９０ｍｇ）を水４ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３３１】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３３２】
（実施例２４）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３３】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール８２μＬおよびＥＤＣ（１９２ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３３４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３３５】
（実施例２５）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３６】
ＡＴＰ（１３８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１０３μＬおよびＥＤＣ（２４０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３３７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３３８】
（実施例２６）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１．５ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３３９】
ＡＴＰ（１３８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３４０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３４１】
（実施例２７）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３４２】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール２０４μＬおよびＥＤＣ（９６ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３４３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３４４】
（実施例２８）
１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１００μＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そしてＣＤＩ活性化架橋ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｍＬと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３４５】
ＡＴＰ（２７５ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１μＬおよびＥＤＣ（４８０ｍｇ）を水３ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３４６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３４７】
（実施例２９〜３６）
以下の一般構造は、実施例２９〜３６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３４８】
【化９３】
【０３４９】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０３５０】
（実施例２９）
１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５７１ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３５１】
ＡＴＰ（５００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール４１０μＬおよびＥＤＣ（９６０ｍｇ）を水６ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３５２】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３５３】
（実施例３０）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３５４】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５．２５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３５５】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３５６】
（実施例３１）
１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３５７】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５．２５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３５８】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３５９】
（実施例３２）
１，１０−ジアミノデカン２１９ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．８７５ｍＬをカップリング緩衝液３．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６０】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３６１】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３６２】
（実施例３３）
１，１０−ジアミノデカン２１９ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．８７５ｍＬをカップリング緩衝液３．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６３】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３６４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３６５】
（実施例３４）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６６】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３６７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３６８】
（実施例３５）
１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３６９】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３７０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３７１】
（実施例３６）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３７２】
ＡＴＰ（４８２ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３５９μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３７３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３７４】
（実施例３７）
以下の一般構造は、実施例３７で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３７５】
【化９４】
【０３７６】
ここで、Ｑ＝ＮＨ２＋またはＯである。
【０３７７】
１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３７８】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３７９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３８０】
（実施例３８）
以下の一般構造は、実施例３８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３８１】
【化９５】
【０３８２】
２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５．５］ウンデカン−３，９−ジプロパンアミン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３８３】
ＡＴＰ（２４１ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３８４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３８５】
（実施例３９）
以下の一般構造は、実施例３９で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３８６】
【化９６】
【０３８７】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３８８】
ＧＴＰ（３９ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３８９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３９０】
（実施例４０）
以下の一般構造は、実施例４０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３９１】
【化９７】
【０３９２】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３９３】
ＩＴＰ（４３ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３９４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０３９５】
（実施例４１）
以下の一般構造は、実施例４１で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０３９６】
【化９８】
【０３９７】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０３９８】
ＣＴＰ（４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０３９９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４００】
（実施例４２）
以下の一般構造は、実施例４２で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４０１】
【化９９】
【０４０２】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４０３】
ＴＴＰ（３６ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４０４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４０５】
（実施例４３）
以下の一般構造は、実施例４３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４０６】
【化１００】
【０４０７】
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２５ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１４０ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４０８】
ＵＴＰ（３７ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３１μＬおよびＥＤＣ（７２ｍｇ）を水１ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４０９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４１０】
（実施例４４〜４８）
以下の一般構造は、実施例４４〜４８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４１１】
【化１０１】
【０４１２】
（実施例４４）
１，１０−ジアミノデカン１８７．５ｍｇ、エタノールアミン６２．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４１３】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４１４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４１５】
（実施例４５）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液１ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４１６】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４１７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４１８】
（実施例４６）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、エタノールアミン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４１９】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４２０】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４２１】
（実施例４７）
１，１０−ジアミノデカン２５ｍｇ、エタノールアミン２２５μＬおよび１，４−ジオキサン４ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４２２】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４２３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４２４】
（実施例４８）
１，１０−ジアミノデカン８３ｍｇ、エタノールアミン１６７μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４２５】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４２６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４２７】
（実施例４９〜５０）
以下の一般構造は、実施例４９〜５０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４２８】
【化１０２】
【０４２９】
（実施例４９）
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４３０】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４３１】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４３２】
（実施例５０）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、１，１１−ジアミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１ｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４３３】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４３４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４３５】
（実施例５１）
以下の一般構造は、実施例５１で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４３６】
【化１０３】
【０４３７】
１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４３８】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４３９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４４０】
（実施例５２〜５３）
以下の一般構造は、実施例５２〜５３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４４１】
【化１０４】
【０４４２】
（実施例５２）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサウンデカン６２．５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４４３】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４４４】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４４５】
（実施例５３）
１，１０−ジアミノデカン３１．５ｍｇ、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサウンデカン９３．７５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４４６】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４４７】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４４８】
（実施例５４〜５６）
以下の一般構造は、実施例５４〜５６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４４９】
【化１０５】
【０４５０】
実施例５４〜５６については、記述したヌクレオチドアフィニティー媒体を調製する際に使用するために、各リンカーアーム１００ｍｇ：１，１０−ジアミノデカン；１，９−ジアミノノナン；および１，６−ジアミノヘキサンの混合物を調製した。
【０４５１】
（実施例５４）
リンカーアーム（上記）の混合物１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４５２】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４５３】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４５４】
（実施例５５）
リンカーアーム（上記）の混合物６２．５ｍｇ、エタノールアミン６２．５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４５５】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４５６】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４５７】
（実施例５６）
リンカーアーム（上記）の混合物３１．２５ｍｇ、エタノールアミン９３．７５μＬおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４５８】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４５９】
次いで、この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４６０】
（実施例５７）
以下の一般構造は、実施例５７で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４６１】
【化１０６】
【０４６２】
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４６３】
ＡＴＰ（１６０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４６４】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４６５】
（実施例５８）
以下の一般構造は、実施例５８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４６６】
【化１０７】
【０４６７】
１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０４６８】
ＡＤＰ（１８８ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０４６９】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０４７０】
（ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）およびＴＯＹＯＰＥＲＬ（登録商標）樹脂の一般手順）
ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）およびＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂は、一般に、２０％エタノール中で保存される。この樹脂を水２容量、３０％アセトン１容量、７０％アセトン１容量および無水アセトン５容量で洗浄した後、その樹脂を無水アセトン２．５ｍＬに移す。１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇを加え、その樹脂を、室温で、約１時間反応させる。約１時間後、この樹脂を無水アセトン５容量、７０％アセトン１容量、３０％アセトン１容量および水２容量で洗浄する。１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍｌを適当なカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そしてこの樹脂と混ぜ合わせる。この樹脂を、４℃で、一晩反応させる。次いで、この樹脂を１Ｍ ＮａＣｌ（３容量）および水２容量で洗浄する。残りの任意の反応部位を末端キャップ化するために、この樹脂に１Ｍエタノールアミン溶液（ｐＨ＝８．９）５ｍＬを加え、その樹脂を、室温で、約１時間反応させる。引き続いて、この樹脂を１Ｍ ＮａＣｌ（３容量）および水２容量で洗浄する。ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加え、そして約１時間反応させた後、この樹脂と混ぜ合わせる。この樹脂を一晩反応させる。最後に、この樹脂を１Ｍ ＮａＣｌ（３容量）および水２容量で洗浄し、そして保存用緩衝液に移す。
【０４７１】
（実施例５９〜６４）
以下の一般構造は、実施例５９〜６４で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４７２】
【化１０８】
【０４７３】
（実施例５９）
ＨＲ Ｓ−３００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４７４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４７５】
（実施例６０）
ＨＲ Ｓ−３００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４７６】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４７７】
（実施例６１）
ＨＲ Ｓ−３００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、エタノールアミン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４７８】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４７９】
（実施例６２）
ＨＲ Ｓ−４００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４８０】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８１】
（実施例６３）
ＨＲ Ｓ−４００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４８２】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８３】
（実施例６４）
ＨＲ Ｓ−４００ ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、エタノールアミン１８７．５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４８４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８５】
（実施例６５〜７０）
以下の一般構造は、実施例６５〜７０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０４８６】
【化１０９】
【０４８７】
（実施例６５）
ＨＷ−６５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４８８】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４８９】
（実施例６６）
ＨＷ−６５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４９０】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９１】
（実施例６７）
ＨＷ−６５Ｓ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４９２】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９３】
（実施例６８）
ＨＷ−６５Ｓ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４９４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９５】
（実施例６９）
ＨＷ−７５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０４９６】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９７】
（実施例７０）
ＨＷ−７５Ｆ ＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂２．５ｍＬを無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製する。その反応を約１時間進行させる。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０４９８】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０４９９】
ＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂の手順は、この樹脂にヒドロキシ官能性（これは、塩化トレシル（有機塩化スルホニル）で予め活性化されている）が付けられて臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）または１，１’−カルボニルジイミダゾール活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）と類似しているので、他のＴＯＹＯＰＥＡＬ（登録商標）樹脂の手順とは異なる。
【０５００】
（実施例７１〜７２）
以下の一般構造は、実施例７１〜７２で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５０１】
【化１１０】
【０５０２】
（実施例７１）
約１０分間にわたって、１ｍＭ ＨＣｌ（１５ｍＬ）中にてＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂０．５ｇを膨潤させることにより、この樹脂を調製する。次いで、この樹脂を１ｍＭ ＨＣｌ（２容量）および水１容量で洗浄する。次に、１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液（０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ＝７．４５）４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして約１時間反応させることにより、残留している任意の反応部位を末端キャップ化する。
【０５０３】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５０４】
（実施例７２）
約１０分間にわたって、１ｍＭ ＨＣｌ（１５ｍＬ）中にてＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）樹脂０．５ｇを膨潤させることにより、この樹脂を調製する。次いで、この樹脂を１ｍＭ ＨＣｌ（２容量）および水１容量で洗浄する。次に、１，１０−ジアミノデカン１２５ｍｇ、エタノールアミン１２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液（０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ＝７．４５）４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。
【０５０５】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに加えることにより、アフィニティー配位子を調製する。この反応を約１時間進行させた後、調製した樹脂と混ぜ合わせる。混ぜ合わせた樹脂およびアフィニティー配位子を約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５０６】
（実施例７３）
以下の一般構造は、実施例７３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５０７】
【化１１１】
【０５０８】
３−［４−（３−アミノプロピル）−フェニル］−プロピルアミン１９０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．５ｍＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５０９】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５１０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５１１】
（実施例７４）
以下の一般構造は、実施例７４で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５１２】
【化１１２】
【０５１３】
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−メチル−ヘキサン−１，６−ジアミン１９０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．７５ｍＬをカップリング緩衝液３ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５１４】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５１５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５１６】
（実施例７５）
以下の一般構造は、実施例７５で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５１７】
【化１１３】
【０５１８】
６−アミノ−２−（４−アミノ−ブチルアミノ）−ヘキサン酸メチルエステル３５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．４ｍＬをカップリング緩衝液５．６ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５１９】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５２０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５２１】
（実施例７６）
以下の一般構造は、実施例７６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５２２】
【化１１４】
【０５２３】
７−（２−アミノ−３−フェニル−プロポキシ）−ヘプチルアミン２６０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．０ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約５時間進行させた。
【０５２４】
ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０μＬおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５２５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５２６】
（実施例７７）
以下の一般構造は、実施例７７で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５２７】
【化１１５】
【０５２８】
スペルミジン１０５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０５２９】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５３０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５３１】
（実施例７８）
以下の一般構造は、実施例７８で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５３２】
【化１１６】
【０５３３】
ビス（３−アミノプロピル）−エチレンジアミン１２７ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２．５ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）５００ｍｇと混ぜ合わせることにより、この樹脂を調製した。その反応を、室温で、約２時間進行させた。
【０５３４】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに加え、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製した。
【０５３５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させた。
【０５３６】
（実施例７９）
以下の一般構造は、実施例７９で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５３７】
【化１１７】
【０５３８】
以下のようにして、１，１０−ジヨード−デカ−５−エンを調製する：９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（１当量）を、０℃で、無水ＴＨＦに加え、続いて、１，５，９−デカトリエン（４当量）を加える。その反応物を室温まで温め、そして１．５時間攪拌する。得られた溶液を−２０℃まで冷却し、そしてナトリウムメトキシド（２当量）を加え、続いて、ヨウ素（２当量）を加える。その反応混合物を、−２０℃で、１．５時間攪拌し、室温まで温め、さらに１時間攪拌する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製する。その適当な画分をプールし、そして真空中で濃縮して、１，１０−ジヨード−デカ−５−エンを得る。
【０５３９】
この１，１０−ジヨード−デカ−５−エン（１当量）を、室温で、無水アセトンに溶解し、続いて、カリウムフタルイミド（４．０当量）を加える。その反応混合物を完結するまで攪拌し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして真空中で濃縮する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジフタルイミド−デカ−５−エンを得る。
【０５４０】
この１，１０−ジフタルイミド−デカ−５−エン（１当量）およびヒドラジン（２当量）を、エタノール中にて、還流状態で攪拌する。その反応混合物を室温まで冷却し、得られた固形物を濾過により除去する。その濾液をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジアミノ−デカ−５−エンを得る。
【０５４１】
このリンカーアーム２００ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．５ｍｌをカップリング緩衝液３ｍｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ５００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約４時間進行させる。ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０ｍｌおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍｌに加え、１時間反応させ、次いで、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を一晩反応させる。
【０５４２】
（実施例８０）
以下の一般構造は、実施例８０で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５４３】
【化１１８】
【０５４４】
無水エーテル中で、窒素雰囲気下にて、マグネシウム（１．２当量）を攪拌し、そして触媒量のヨウ素を加える。その混合物を還流状態まで加熱し、そして４−ブロモメチルピリジン（１当量）を加える。その反応物を、グリニャール試薬の形成が完結するまで攪拌し、そして９−フタルイミドノナール（１．５当量）を加える。その反応混合物を完結するまで攪拌し、塩化アンモニウムでクエンチし、ブラインで抽出し、そして真空中で濃縮する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１−ヒドロキシ−１−（４−ピリジニル）−１０−フタルイミドデカンを得る。
【０５４５】
攪拌しながら、１−ヒドロキシ−１−（４−ピリジニル）−１０−フタルイミドデカン（１当量）をＴＨＦに溶解する。その溶液にフタルイミド（１．５当量）およびトリフェニルホスフィン（２．１当量）を加え、得られた混合物を０℃まで冷却する。上記溶液にジイソプロピルアゾジカルボキシレート（２．０当量）を滴下し、その反応物を完結するまで攪拌する。得られた固形物を濾過により除き、その濾液を真空中で濃縮する。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジフタルイミド−１−ピリジニルデカンを得る。
【０５４６】
１，１０−ジフタルイミド−１−ピリジニルデカン（１当量）およびヒドラジン（２当量）を、エタノール中にて、還流状態で攪拌する。その反応混合物を室温まで冷却し、得られた固形物を濾過により除去する。その濾液をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１，１０−ジアミノ−１−ピリジニルデカンを得る。
【０５４７】
このリンカーアーム２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１．５ｍｌをカップリング緩衝液３ｍｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ５００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約４時間進行させる。ＡＴＰ（４８０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール３６０ｍｌおよびＥＤＣ（８４０ｍｇ）を水２．５ｍｌに加え、約１時間反応させ、次いで、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を一晩反応させる。
【０５４８】
（実施例８１〜８３）
以下の一般構造は、実施例８１〜８３で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５４９】
【化１１９】
【０５５０】
これらの実施例には、ＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）４Ｂ（Ｓｉｇｍａ）を使用する。
【０５５１】
（実施例８１）
２，５−ジアミノピリジン５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．２ｍＬをカップリング緩衝液０．８ｍＬに加え、そしてＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５５２】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７４μＬおよびＥＤＣ（１７２ｍｇ）を水１．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５５３】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５５４】
（実施例８２）
２，５−ジアミノピリジン４０ｍｇ、エタノールアミン１０μＬおよび１，４−ジオキサン０．２ｍＬをカップリング緩衝液０．８ｍＬに加え、そしてＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５５５】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７４μＬおよびＥＤＣ（１７２ｍｇ）を水１．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５５６】
（実施例８３）
２，５−ジアミノピリジン３０ｍｇ、エタノールアミン２０μＬおよび１，４−ジオキサン０．２ｍＬをカップリング緩衝液０．８ｍＬに加え、そしてＣＨ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５５７】
ＡＴＰ（１００ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７４μＬおよびＥＤＣ（１７２ｍｇ）を水１．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５５８】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５５９】
（実施例８４〜８９）
以下の一般構造は、実施例８４〜８９で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５６０】
【化１２０】
【０５６１】
これらの実施例には、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）４Ｂ（Ｓｉｇｍａ）を使用する。
【０５６２】
（実施例８４）
１，１０−ジアミノデカン１１２．５ｍｇ、グリシン１２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５６３】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５６４】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５６５】
（実施例８５）
１，１０−ジアミノデカン９３．７５ｍｇ、グリシン３１．２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５６６】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５６７】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５６８】
（実施例８６）
１，１０−ジアミノデカン６２．５ｍｇ、グリシン６２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５６９】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７０】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５７１】
（実施例８７）
１，１０−ジアミノデカン１１２．５ｍｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１２．５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５７２】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７３】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５７４】
（実施例８８）
１，１０−ジアミノデカン９８．７５ｍｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン３１．２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液２ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５７５】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７６】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５７７】
（実施例８９）
１，１０−ジアミノデカン６２．２５ｍｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン６２．２５ｍｇおよび１，４−ジオキサン０．５ｍＬをカップリング緩衝液 ｍＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）０．５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。
【０５７８】
ＡＴＰ（２４０ｍｇ）、１−メチルイミダゾール１８０μＬおよびＥＤＣ（４２０ｍｇ）を水２．５ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５７９】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５８０】
（実施例９０〜９６）
以下の一般構造は、実施例９０〜９６で記述したリンカーおよび反応条件を使用して合成したとき、固体支持体に結合されたアフィニティー配位子を表わす：
【０５８１】
【化１２１】
【０５８２】
これらの実施例には、Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ樹脂ＧＦ ２０００Ｍ（ＢｉｏＳｅｐｒａ）またはＵｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ２２（ＢｉｏＳｅｐｒａ）樹脂を使用する。これらの樹脂の一般手順は、上記ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）およびＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）について記述した手順と同じである。
【０５８３】
（実施例９０）
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ ＧＦ ２０００Ｍ樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５８４】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５８５】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５８６】
（実施例９１）
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ ＧＦ ２０００Ｍ樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン１６５ｍｇ、エタノールアミン８５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５８７】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５８８】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５８９】
（実施例９２）
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ ＧＦ ２０００Ｍ樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン８２ｍｇ、エタノールアミン１６８μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９０】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５９１】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５９２】
（実施例９３）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン２５０ｍｇおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９３】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５９４】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５９５】
（実施例９４）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン１６５ｍｇ、エタノールアミン８５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９６】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０５９７】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０５９８】
（実施例９５）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン８２ｍｇ、エタノールアミン１６８μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０５９９】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０６００】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０６０１】
（実施例９６）
Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ２２樹脂（２．５ｍＬ）を、無水アセトン２．５ｍＬおよび１，１’−カルボニルジイミダゾール２００ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約１時間進行させる。１，１０−ジアミノデカン２５ｍｇ、エタノールアミン２２５μＬおよび１，４−ジオキサン１ｍＬをカップリング緩衝液４ｍＬに加え、この樹脂と混ぜ合わせる。その反応を、４℃で、約１２〜１８時間または一晩進行させる。次いで、この樹脂に１Ｍエタノールアミン５ｍＬを加え、そして室温で、約１時間反応させる。
【０６０２】
ＡＴＰ（９６４ｍｇ）、１−メチルイミダゾール７２０μＬおよびＥＤＣ（１６８０ｍｇ）を水１０ｍＬに混ぜ合わせ、そして室温で約１時間反応させることにより、アフィニティー配位子を調製する。
【０６０３】
この樹脂およびアフィニティー配位子を共に混ぜ合わせ、そして室温で、約１２〜１８時間または一晩反応させる。
【０６０４】
（実施例９７）
以下の構造は、実施例９７で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６０５】
【化１２２】
【０６０６】
１，１０−ジアミノデカン１３．５ｍｇ、エタノールアミン１３．５μおよび１，４−ジオキサン１０５μＬをカップリング緩衝液４１９μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１０５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。アデニル−イミド−ジホスフェート（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）２９ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６０７】
（実施例９８）
以下の構造は、実施例９８で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６０８】
【化１２３】
【０６０９】
１，１０−ジアミノデカン１３．５ｍｇ、エタノールアミン１３．５μおよび１，４−ジオキサン１０５μＬをカップリング緩衝液４１９μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１０５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。β，γ−メチレン−ＡＴＰ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）３０ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６１０】
（実施例９９）
以下の構造は、実施例９９で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６１１】
【化１２４】
【０６１２】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μおよび１，４−ジオキサン１２５μＬをカップリング緩衝液５００μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。アデノシン−５’−スクシレート（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｓ，ＭＯ）２０ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６１３】
（実施例１００）
以下の構造は、実施例１００で記述された条件を使用してそこからアルキル連結ヌクレオチドを製造するＡＴＰ類似物を表わす：
【０６１４】
【化１２５】
【０６１５】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μおよび１，４−ジオキサン１２５μＬをカップリング緩衝液５００μＬに加え、そして臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を、室温で、約２時間進行させる。２−デオキシ−ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｓ，ＭＯ）２９ｍｇ、１−メチルイミダゾール２２．５μＬおよびＥＤＣ（５２．５ｍｇ）を水６２５μＬに加え、その反応を１時間進行させる。この樹脂を配位子と混ぜ合わせ、その反応を一晩進行させる。
【０６１６】
（実施例１０１〜１０５）
実施例１０１〜１０５のアルキル連結ヌクレオチド組成物を３段階で製造する：このアデノシン誘導体を調製し、ホスホリル化し、次いで、この樹脂−リンカーアーム組合せに結合する。実施例９９〜１０３の各々について、これらのアデノシン誘導体を、以下のようにして、ホスホリル化する。これらのアデノシン誘導体をリン酸トリメチル（５〜１２ｍＬ）に溶解し、そして約０℃まで冷却する。１０分間攪拌した後、オキシ塩化リン（１．８当量）を滴下する。その反応混合物を、０℃で、６時間攪拌する。トリブチルアミン（５．４当量）を加え、続いて、直ちに、０．５Ｍピロリン酸トリブチルアンモニウム（４当量）を加え、そして攪拌をさらに１５分間継続する。０．２Ｍ炭酸水素トリエチルアンモニウム（４０〜５０ｍＬ）を加えることにより、この反応をクエンチする。次いで、その反応混合物を、室温で、１５時間攪拌し、次いで、凍結乾燥する。次いで、その粗調製物をＳｅｐｈａｄｅｘ ＤＥＡＥ−２５−イオン交換樹脂で精製し、そしてＴＥＡＢ緩衝液の勾配（０．０５Ｍ〜０．５Ｍ）に従って、水で溶出する。次いで、適当な画分を合わせる。
【０６１７】
（実施例１０１）
以下の構造は、実施例１０１で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６１８】
【化１２６】
【０６１９】
６−クロロプリンリボシド１．０１６ｇおよびメチルアミン（エチルアルコール中で３３％）８．８２ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約２２時間にわたって、９０℃まで加熱する。この反応容器を、氷浴中にて、約３０分間冷却して、固形沈殿物を形成させる。この沈殿物を濾過し、そして氷冷エチルアルコール（３×２５ｍＬ）で洗浄し、そして乾燥して、収率６６％で、０．６６ｇのＮ６−メチルアデノシンを得る。
【０６２０】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子２０２ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６２１】
（実施例１０２）
以下の構造は、実施例１０２で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６２２】
【化１２７】
【０６２３】
６−クロロプリンリボシド５４７ｍｇ、２−メトキシエチルアミン０．８８２ｍＬおよびエチルアルコール５．０ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約２２時間にわたって、９０℃まで加熱する。次いで、この配位子をシリカゲルクロマトグラフィー（これは、８：１の塩化メチレン：メタノールを使用する）で精製して、Ｎ６−（２−メトキシエチル）−アデノシン（０．６１ｇ、収率９８％）を得る。
【０６２４】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１５４ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６２５】
（実施例１０３）
以下の構造は、実施例１０３で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６２６】
【化１２８】
【０６２７】
６−クロロプリンリボシド４７３ｍｇ、２−ベンジルアミン０．５４ｍＬ、トリエチルアミン０．６９ｍＬおよびエチルアルコール５．０ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約１８時間にわたって、９０℃まで加熱する。この反応容器を、氷浴中にて、約３０分間冷却して、固形沈殿物を形成させる。この沈殿物を濾過し、そして氷冷エチルアルコール（３×２５ｍＬ）で洗浄し、そして乾燥して、０．５１ｇのＮ６−ベンジルアデノシンを得る（収率８６％）。
【０６２８】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１６０．８ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６２９】
（実施例１０４）
以下の構造は、実施例１０４で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６３０】
【化１２９】
【０６３１】
２−クロロアデノシン４００ｍｇ、２−ベンジルアミン０．４２ｍＬおよびトリエチルアミン０．５４ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約９６時間にわたって、９０℃まで加熱する。次いで、この配位子をシリカゲルクロマトグラフィー（これは、２０：１の塩化メチレン：メタノールを使用する）で精製して、０．１１ｇのＮ６−ベンジルアデノシン（２２％）を得る。
【０６３２】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１２０ｍｇ、１−メチルイミダゾール６７．５μｌおよびＥＤＣ（１５７．５ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６３３】
（実施例１０５）
以下の構造は、実施例１０５で記述された条件を使用して合成したＡＴＰ類似物を表わす：
【０６３４】
【化１３０】
【０６３５】
８−ブロモアデノシン５０７ｍｇ、２−メトキシエチルアミン０．６３１ｍＬおよびエチルアルコール５．０ｍＬを混ぜ合わせ、そして密封反応容器中にて、約１６８時間にわたって、９０℃まで加熱する。次いで、この配位子をシリカゲルクロマトグラフィー（これは、４：１の塩化メチレン：メタノールを使用する）で精製して、０．５２ｇのＮ６−（２−メトキシエチル）−アデノシン（９９％）を得る。
【０６３６】
１，１０−ジアミノデカン１６ｍｇ、エタノールアミン１６μｌおよび１，４−ジオキサン１２５μｌをカップリング緩衝液５００μｌに加え、そして臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）１２５ｍｇと混ぜ合わせる。その反応を約２時間進行させる。配位子１５７．２ｍｇ、１−メチルイミダゾール９０μｌおよびＥＤＣ（２１０ｍｇ）を水１ｍｌに加え、そして約１時間反応させる。次いで、この配位子を樹脂に加え、その反応を一晩進行させる。
【０６３７】
本発明は、その好ましい実施態様に関連して特に示され記述されているものの、当業者は、添付の請求の範囲に含まれる本発明の範囲から逸脱することなく、形式および詳細において種々の変更を行い得ることを理解する。
【０６３８】
本明細書中で引用された種々の刊行物、特許出願および特許の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【図面の簡単な説明】
【０６３９】
【図１】図１は、臭化シアンで活性化したビーズ状アガロースおよびリンカーを使用する化合物中間体ＩＡの合成の概略図である。
【図２】図２は、１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）で活性化したビーズ状アガロースおよびリンカーを使用する化合物中間体ＩＢの合成の概略図である。
【図３】図３は、化合物中間体ＩＩの合成の概略図である。
【図４】図４は、反応成分として中間体ＩＡおよびＩＩを使用するγ−ホスフェート連結ＡＴＰの合成の概略図である。
【図５】図５は、反応成分として中間体ＩＢおよびＩＩを使用するγ−ホスフェート連結ＡＴＰの合成の概略図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式：
【化１】
を含むアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、
ここで、Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である、
組成物。
【請求項２】
Ｒ２が、以下の一般式：
【化２】
を含む、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、
ここで、Ｒ３は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである、
組成物。
【請求項３】
Ｒ１が、以下の一般式：
【化３】
を含む、請求項２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、
ここで、Ｑ＝ＯまたはＮＨ２＋であり；Ｒ４は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；そしてＲ５は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである、
組成物。
【請求項４】
Ｒ１が、以下の一般式：
【化４】
を含む、請求項３に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項５】
前記ヘテロ原子（Ｋ）が、窒素原子、酸素原子またはイオウ原子である、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項６】
前記ヘテロ原子（Ｋ）が、窒素原子である、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項７】
Ｙが、固体支持体である、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項８】
前記組成物が、ヌクレオチドアフィニティー媒体である、請求項７に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項９】
前記固体支持体が、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、帯磁粒子、ニトロセルロース、ポリスチレン、熱応答性ポリマーおよびそれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１種のメンバーである、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１０】
前記固体支持体が、ビーズ状アガロースである、請求項９に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１１】
前記固体支持体が、５〜２５％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１２】
前記固体支持体が、２０〜５０％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１３】
前記固体支持体が、４０〜６５％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１４】
前記固体支持体が、６０〜８０％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１５】
前記固体支持体が、７５〜１００％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１６】
前記タグが、ビオチンである、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項１７】
Ｒ７が、（Ｐ）ｎである、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項１８】
ｎが、１、２、３または４である、請求項１７に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項１９】
請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、Ｒ２が、以下：
【化５】
【化６】
【化７】
からなる群から選択されるリンカーである、アルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、Ｒ２が、以下：
【化８】
【化９】
【化１０】
からなる群から選択される少なくとも１個のリンカーである、アルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項２１】
請求項１７に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、Ｐが、以下：
【化１１】
からなる群から選択される、アルキル連結ヌクレオチド組成物およびそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２２】
前記ヌクレオシドが、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジン、ウリジンおよびそれらの類似物からなる群から選択される、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項２３】
前記ヌクレオシドが、アデノシンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物：
【化１２】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２４】
前記ヌクレオシドが、グアノシンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１３】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２５】
前記ヌクレオシドが、チミジンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１４】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２６】
前記ヌクレオシドが、シチジンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１５】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２７】
前記ヌクレオシドが、ウリジンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１６】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２８】
以下の一般式：
【化１７】
を含むヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する方法であって、
該方法は、以下の工程を包含する：
ａ）適当なカップリング緩衝液中にて、少なくとも１個のリンカーを固体支持体またはタグにカップリングする工程であって、ここで、該リンカーは、Ｒ２またはＲ１とＲ２との組合せであり；
ｂ）該カップリング工程後、該固体支持体に残っている反応性部位の少なくとも一部を末端キャップ化する工程；および
ｃ）ヌクレオチドの末端ホスフェートまたはチオホスフェート基を、該固体支持体またはタグにカップリングした該リンカーと反応させる工程であって、
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドであり；そしてｍは、少なくとも１である、
方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法であって、Ｒ２が、以下：
【化１８】
【化１９】
からなる群から選択されるリンカーである、方法。
【請求項３０】
請求項２８に記載の方法であって、もしｍが１より大きいなら、Ｒ２が、以下：
【化２０】
【化２１】
からなる群から選択される少なくとも１種のリンカーである、方法。
【請求項３１】
試験化合物をスクリーニングする方法であって、
該方法は、以下の工程：
ａ）プロテオームを、以下の一般式：
【化２２】
を含むヌクレオチドアフィニティー媒体と接触させる工程であって、
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である、工程；
ｂ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体を緩衝液で洗浄し、それにより、該プロテオームの非特異的に結合した成分を該ヌクレオチドアフィニティー媒体から溶出しそして該プロテオームの特異的成分は、該ヌクレオチドアフィニティー媒体に結合したままである工程；
ｃ）該プロテオームの特異的成分に結合した該ヌクレオチドアフィニティー媒体を少なくとも１種の試験化合物と接触させる工程；
ｄ）該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該ヌクレオチドアフィニティー媒体成分を溶出する工程；および
ｅ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体から該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該成分を同定する工程
を包含する、方法。
【請求項１】
以下の一般式：
【化１】
を含むアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、
ここで、Ｙは、固体支持体、タグまたは保護基であり；ｘ＝０または１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である、
組成物。
【請求項２】
Ｒ２が、以下の一般式：
【化２】
を含む、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、
ここで、Ｒ３は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである、
組成物。
【請求項３】
Ｒ１が、以下の一般式：
【化３】
を含む、請求項２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、
ここで、Ｑ＝ＯまたはＮＨ２＋であり；Ｒ４は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；そしてＲ５は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せである、
組成物。
【請求項４】
Ｒ１が、以下の一般式：
【化４】
を含む、請求項３に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項５】
前記ヘテロ原子（Ｋ）が、窒素原子、酸素原子またはイオウ原子である、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項６】
前記ヘテロ原子（Ｋ）が、窒素原子である、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項７】
Ｙが、固体支持体である、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項８】
前記組成物が、ヌクレオチドアフィニティー媒体である、請求項７に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項９】
前記固体支持体が、アクリルアミド、アガロース、メタクリレート、セルロース、ナイロン、シリカ、ガラス、セラミック、帯磁粒子、ニトロセルロース、ポリスチレン、熱応答性ポリマーおよびそれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１種のメンバーである、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１０】
前記固体支持体が、ビーズ状アガロースである、請求項９に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１１】
前記固体支持体が、５〜２５％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１２】
前記固体支持体が、２０〜５０％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１３】
前記固体支持体が、４０〜６５％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１４】
前記固体支持体が、６０〜８０％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１５】
前記固体支持体が、７５〜１００％の範囲で、アルキル連結ヌクレオチドの装填を有する、請求項８に記載のヌクレオチドアフィニティー媒体。
【請求項１６】
前記タグが、ビオチンである、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項１７】
Ｒ７が、（Ｐ）ｎである、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項１８】
ｎが、１、２、３または４である、請求項１７に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項１９】
請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、Ｒ２が、以下：
【化５】
【化６】
【化７】
からなる群から選択されるリンカーである、アルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、Ｒ２が、以下：
【化８】
【化９】
【化１０】
からなる群から選択される少なくとも１個のリンカーである、アルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項２１】
請求項１７に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物であって、Ｐが、以下：
【化１１】
からなる群から選択される、アルキル連結ヌクレオチド組成物およびそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２２】
前記ヌクレオシドが、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジン、ウリジンおよびそれらの類似物からなる群から選択される、請求項１に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物。
【請求項２３】
前記ヌクレオシドが、アデノシンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物：
【化１２】
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２４】
前記ヌクレオシドが、グアノシンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１３】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２５】
前記ヌクレオシドが、チミジンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１４】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２６】
前記ヌクレオシドが、シチジンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１５】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物
またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２７】
前記ヌクレオシドが、ウリジンであり、前記アルキル連結ヌクレオチド組成物が、以下の一般式：
【化１６】
を含む、請求項２２に記載のアルキル連結ヌクレオチド組成物またはそれらのイオン化変異体または塩。
【請求項２８】
以下の一般式：
【化１７】
を含むヌクレオチドアフィニティー媒体を合成する方法であって、
該方法は、以下の工程を包含する：
ａ）適当なカップリング緩衝液中にて、少なくとも１個のリンカーを固体支持体またはタグにカップリングする工程であって、ここで、該リンカーは、Ｒ２またはＲ１とＲ２との組合せであり；
ｂ）該カップリング工程後、該固体支持体に残っている反応性部位の少なくとも一部を末端キャップ化する工程；および
ｃ）ヌクレオチドの末端ホスフェートまたはチオホスフェート基を、該固体支持体またはタグにカップリングした該リンカーと反応させる工程であって、
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドであり；そしてｍは、少なくとも１である、
方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法であって、Ｒ２が、以下：
【化１８】
【化１９】
からなる群から選択されるリンカーである、方法。
【請求項３０】
請求項２８に記載の方法であって、もしｍが１より大きいなら、Ｒ２が、以下：
【化２０】
【化２１】
からなる群から選択される少なくとも１種のリンカーである、方法。
【請求項３１】
試験化合物をスクリーニングする方法であって、
該方法は、以下の工程：
ａ）プロテオームを、以下の一般式：
【化２２】
を含むヌクレオチドアフィニティー媒体と接触させる工程であって、
ここで、Ｙは、固体支持体またはタグであり；ｘ＝１であり；Ｒ１は、ＹとＲ２との間の共有結合であるか、またはＲ１は、アシル基、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基または非置換ヘテロシクロアルキル基、置換アリール基または非置換アリール基、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ２は、置換アルキル基または非置換アルキル基、置換シクロアルキル基または非置換シクロアルキル基、置換ヘテロアルキル基または非置換ヘテロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキルまたは非置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロアリール基または非置換ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｋは、ヘテロ原子であり；Ｒ７は、（Ｐ）ｎであり、ここで、Ｐは、ホスフェートまたはチオホスフェートであり、そしてｎは、少なくとも１であるか、またはＲ７は、ホスフェート基模倣物であり、そしてＺは、ヌクレオシドまたはヌクレオチド誘導体であり；そしてｍは、少なくとも１である、工程；
ｂ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体を緩衝液で洗浄し、それにより、該プロテオームの非特異的に結合した成分を該ヌクレオチドアフィニティー媒体から溶出しそして該プロテオームの特異的成分は、該ヌクレオチドアフィニティー媒体に結合したままである工程；
ｃ）該プロテオームの特異的成分に結合した該ヌクレオチドアフィニティー媒体を少なくとも１種の試験化合物と接触させる工程；
ｄ）該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該ヌクレオチドアフィニティー媒体成分を溶出する工程；および
ｅ）該ヌクレオチドアフィニティー媒体から該試験化合物で特異的に置き換えられた該プロテオームの該成分を同定する工程
を包含する、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２００７−５２４８０４（Ｐ２００７−５２４８０４Ａ）
【公表日】平成１９年８月３０日（２００７．８．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０１１０２（Ｐ２００６−５０１１０２）
【出願日】平成１６年１月２２日（２００４．１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１７４５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６５５６６
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【出願人】（５０５２７４７８２）セレネックス， インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年８月３０日（２００７．８．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１月２２日（２００４．１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００１７４５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６５５６６
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【出願人】（５０５２７４７８２）セレネックス， インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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