アレルギー疾患の予防又は治療のための重水素を有する水を含む組成物及びその調製プロセス
本発明はアレルギー疾患の予防又は治療のための医薬及び食品組成物並びにその調製プロセスに関する。本発明のプロセスは、０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水（好ましくは既知の電気分解又は蒸留により調製される）を通常の添加物と混合し、この混合物を通常の医薬又は食品工業的方法により、好ましくは薬剤、ノンアルコール飲料又はビールの製造において用いられる標準的な調味料、香料及び他の添加物を適用することにより医薬又は食品製品に製剤化することを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬及び食品工業用組成物並びにその調製プロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、多数の科学刊行物（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３１７、１〜４ページ、１９９３年；Ｔｅｒｍｅｓｚｅｔｇｙｏｇｙａｓｚａｔ １０、２９〜３２ページ、１９９６年；Ｋｉｓａｌｌａｔｏｒｖｏｓｌａｓ ３、１１４〜５ページ、１９９６年；Ｅｒｆａｈｒｕｎｇｓｈｅｉｌｋｕｎｄｅ ７、３８１〜８８ページ、１９９７年；Ｊ．Ｒ．Ｈｅｙｓ及びＤ．Ｇ．Ｍｅｌｉｌｌｏ（編）、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ．、１３７〜１４１ページ、１９９７年）、並びにハンガリー特許（登録番号第２０８０８４号、第２０９７８７号、第２１４５９３号、第２１４８２４号）は、自然に存在する重水素は細胞分裂の制御において重要な役割を果たすという認識に基づくものであった。言及された特許に記載された動物実験のほか、重水素枯渇水（「Ｄｄ水」と略記され、重水素は以下の部分においてＤと略記される）の抗腫瘍効果はヒトでのテスト実験においても証明された。２年間の長期ヒト第ＩＩ相二重盲験臨床試験（この試験では参加した医師も被験者もどの患者が薬剤を受け、どの患者がプラセボを受けたのか知らなかった）において、前立腺癌患者の治療群と対照群との間で有意差が観察された。この試験は、本発明者らの早期の動物及びヒトでの研究結果を明解に確かめるものであった。
【０００３】
治験と独立して、総計で１２９０名の患者が過去１５年間で４００トンのＤｄ水を消費した。これらの症例は、腫瘍細胞は重水素枯渇に対して敏感に反応し、症例の圧倒的大部分（７０〜８０％）において低下した重水素濃度に適応できず、結果として腫瘍塊の部分的又は完全な退縮を生じることをはっきりと示した。
【０００４】
多数の興味深い知見が１５年間を超える長期の患者追跡中に取得された。アレルギー患者での知見は、Ｄｄ水はアレルギー疾患に典型的な愁訴を低減又は除去したという予期しない結果をもたらした（詳細は下で議論される）。
【０００５】
本発明は、飲料水としてのＤｄ水の消費はアレルギー疾患の症状を予防し、減少させ又は除去し、それ故に疾患の予防又は治療に適しているという知見に基づく。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
第１の態様として、本発明は、０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を含む医薬組成物及び食品組成物の調製のためのプロセスに関し、これら組成物はアレルギー疾患の予防又は治療に適している。適用される０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有するＤｄ水は、好ましくは既知の電気分解及び／又は蒸留により、又は他の方法［Ｈｏｗａｒｄ Ｋ．Ｒａｅ（編）、水素同位体の分離（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ６８、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、１９７８年；Ｓｔｅｌｉｏ Ｖｉｌｌａｎｉ（編）、同位体の分離（Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８３年］により調製され、得られる水は、通常の添加物（例えば調味料、香料など）を添加し、特に薬剤、ノンアルコール飲料又はビールの製造に用いられる当該分野の通常の方法を適用することにより、医薬組成物又は食品組成物に製剤化される。
【０００７】
別の態様として、本発明は、
ａ）０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を医薬工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬組成物、及び
ｂ）０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を食品工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための食品組成物
に関する。
【０００８】
上の組成物のいずれにおいても、０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水は、既知の電気分解及び／又は蒸留、又はＤｄ水を生じさせる任意の他の既知の方法により調製される。
【０００９】
好ましい実施形態において、適用されるＤｄ水の重水素濃度は、５〜１２５ｐｐｍ、より好ましくは５０〜１１０、さらにより好ましくは７５〜９０ｐｐｍである。しかし、ヒトの消費については、特に治療の最初の２〜３ヶ月の間は好ましいＤｄ含量は１０５〜１３０ｐｐｍであり、次の２〜３ヶ月の間は８０〜１０５ｐｐｍである。
【００１０】
Ｄｄ水の投与が予防として成功しなかった場合、より低い濃度のＤｄ水が治療段階で適用され得ることに留意されたい。その上、Ｄｄ水を用いた治療成功後、Ｄｄ水は同一又は異なるＤ濃度で将来のアレルギー性の発作に対する予防剤として適用され得る。したがってＤｄ水の場合、予防及び治療は結果的に適用され得るもので、互いを完全なものにしている。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＨＴ−２９細胞におけるＣＯＸ−２発現に対する異なる濃度のＤ２Ｏの効果を示す図である。
【図２】ＨＴ−２９細胞における異なる濃度でのプロスタグランジン産生に対するＤＤＷの効果を示す図である。
【図３】ＨＴ−２９細胞におけるＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）のＦＣＳ誘導性リン酸化に対するＤ２Ｏの効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
水の重水素濃度は赤外分光測光により、波長４μｍでのＯ−Ｄ結合の吸収極大に基づいて決定された。水サンプルをキュベットに満たすと、水を通過する赤外光は重水素含量に応じて吸収され、この吸収が装置により検出される。Ｄ含量が既知の水を用いた装置較正の後、テストサンプル中のＤ量が決定され得る（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ９８、２０８〜２１３、１９７９年）。
【００１３】
下に我々はＤｄ水の生産のための２つの好ましいプロセス、すなわち電気分解及び蒸留について記載するが、これらのプロセスはＤｄ水を大量に比較的低コストで作るのに適している。
【００１４】
ａ）１５〜２０％のＫＯＨ水溶液は電位２〜５Ｖでの直流電流により互いに分離された陰極及び陽極を用いて電気分解される。陰極上に発生し、減少された濃度の重水素を含有する水素は燃焼されて、形成される蒸気が濃縮され、別個に収集される。得られる水の重水素含量は３０〜４０ｐｐｍである（水素同位体の分離（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）、編：Ｈｏｗａｒｄ Ｋ．Ｒａｅ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ６８、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、１９７８年；同位体の分離（Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、編：Ｓｔｅｌｉｏ Ｖｉｌｌａｎｉ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８３年）。得られる水の重水素含量はさらなる電気分解により、６〜２０ｐｐｍさらに減少され得る。
【００１５】
ｂ）水は５０〜１５０プレートの分画カラム中で５０〜６０ｍｂａｒの圧力下、温度４５〜５０℃で蒸留される。蒸留過程において還流値は１２〜１３であり、蒸留中、下部では１０倍希釈が適用される。これらのパラメーターを適用すると、先頭の産物の重水素濃度は０．１から３０ｐｐｍの間である（水素同位体の分離（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）、編：Ｈｏｗａｒｄ Ｋ．Ｒａｅ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ６８、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、１９７８年；同位体の分離（Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、編：Ｓｔｅｌｉｏ Ｖｉｌｌａｎｉ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８３年）。カラム操作過程でのパラメーターの変更、例えばカラム充填量を顕著に増加させることを通じて、３０ｐｐｍより高いＤ濃度のＤｄ水が大量に生産され得る。さらなる可能性は、水のＤ濃度を減少させてＤｄ水を同様の連結カラム上でさらなる分画蒸留プロセスに供することである。
【００１６】
上述の（又は任意の他の）方法により生産されるＤｄ水は出発原料として用いられる。
【００１７】
本明細書において用いられる句「医薬組成物」は動物用組成物をも含む。
【００１８】
句「アレルギー疾患」に関しては、我々は以下に解釈を示すものとする。
【００１９】
アレルギーは、免疫系が環境中の無害の物質に対して反応する時に起こる。免疫系は非常に複雑であるため、物事が悪化する機会が多い。環境中の無害の物質に対して反応し始めた時、この反応はアレルギー反応を導き得るが、これは通常は無害な物質に対する大げさで有害な免疫応答である。
【００２０】
アレルギー疾患を持つ人がチリダニ又は草の花粉などの一般的な環境物質に曝露されると、あるタイプの白血球細胞（Ｂリンパ球）がＩｇＥとして知られるその物質に対する特異的な抗体を産生する。このＩｇＥはその後、別のタイプの白血球細胞（マスト細胞）に付着し、マスト細胞は再びその物質と接触することになると、アレルギーに至る複雑な免疫応答を開始する。
【００２１】
アレルギーを持つ異なる人々は異なる物質に対してアレルギーを起こす。人々が一般的にアレルギーを起こす物質のいくつかには、チリダニ、草木からの花粉や、ネコ、イヌ、ウマを含む動物のフケ、カビや、木の実、ピーナッツ、甲殻類、魚、乳、卵、小麦を含む食品その他が挙げられる。
【００２２】
アレルギーを持つ異なる人々はまた、アレルギーを起こす物質に曝露された時に異なった反応を示す。いくつかの一般的な反応には、アレルギー性湿疹又はじん麻疹、アレルギー性鼻炎（花粉症）、アレルギー性喘息、アナフィラキシー、くしゃみ、鼻づまり及び目の刺激が挙げられる。同様の症状はいくつかの動物においても起こる。
【００２３】
本発明による医薬組成物又は食品組成物の製剤化にあっては、任意の通常の添加物［例えば甘味料、着色料、増粘剤、調味料（調味剤）、ｐＨ調整剤、界面活性剤、香料、果実濃縮物、安定剤など］が適用され得るが、これら添加物は医薬工業（動物用組成物を生産する工業をも含む）及び食品工業において既知であり、後者の場合には特にビール及びノンアルコール飲料の製造において適用されるものである。ここで我々は添加物が普通の（天然の）重水素含量を有する水であり得ることを強調したい。
【００２４】
本発明による組成物の調製にあっては、医薬工業及び食品工業（動物用組成物を生産する工業をも含む）の任意の標準的な（既知の）製剤化方法が適用され得る。
【００２５】
本発明の組成物の調製プロセスにおけるＤｄ水を使用することから、液体の形態が有利な製剤タイプであることがもたらされる。しかし、特に食品工業の適用において、調製される組成物は固体（又は半固体、ゲル、コロイド混合物など）の形態であり得る。この場合、製剤はＤｄ水のみを含有し、すなわちその消費により治療された体の平均重水素含量は増加しない、すなわちこれらの製剤は、液体形態の組成物によりなされる基本的な治癒を補充することができる。
【００２６】
本発明の手順の主な利点は以下の通りである。
ａ）合成の「薬剤」を用いることなくアレルギーの過程への介入を可能にし、疾患の過程に有益に影響する。
ｂ／本手順で用いられるＤｄ水は毒性の副作用を持たない。
ｃ／生産プロセスは有害な廃棄物を生成しない。
ｄ／組成物は容易に製造される。
【００２７】
上述したように、アレルギー疾患の治療におけるＤｄ水のいくつかの重要な肯定的効果は我々が実践した中で見出された。最も価値のある結果は以下のように要約される。
【００２８】
アレルギー患者の群の１つ（１０名の患者）は毎年、主に春季に花粉症に苦しんでいた。彼らは我々のチームにＤ含量１０５又は１２５ｐｐｍのＤｄ水の消費後、症状が完全に消失した又は顕著に弱まったことを報告した。
【００２９】
別の患者は毎年、より強い症状のくしゃみ、鼻づまり及び目の刺激に苦しんでいたが、症状が定期的に現れる３〜４週間前にＤｄ水（８５ｐｐｍ）の消費を開始した後、全ての症状を予防することができた。
【００３０】
重篤なアレルギー反応を持つ患者の１人は症状を軽減するために長い期間服薬していた。Ｄｄ水（８５ｐｐｍ）の消費を開始した後、患者は服薬をやめることができた。
【００３１】
Ｄｄ水の動物用使用の可能性に関して、我々は非常に深刻な鼻づまりに苦しむウマに対するＤｄ水の肯定的な効果を報告することができる。ウマは８５ｐｐｍのＤ含量のＤｄ水をおよそ１５０〜２００リットル消費していると、無症状になった。最も驚くべき結果はこの唯一無二のＤｄ水での治癒の後、症状が次の年に現れなかったことであった。
【００３２】
上の実践的経験からもたらされるように、本発明によるプロセスで得られる組成物はアレルギー疾患の予防又は治療に適している。この効果において決定的であろう分子メカニズムが試験されている。予備的な結果は、Ｄｄ水により誘導される生物中のＤレベルの減少がある特定の遺伝子の発現に影響し得ることを示唆する。症状の改善又は除去についての説明は、Ｄｄ水により誘導される遺伝子発現の変化がアレルギー症状の引き金となる原因に対して適切に応答するというものであり得る。ヒトにおいてＤｄ水を用いて得られた結果は本発明によるプロセスのアレルギー疾患治療への適合性の証拠となる。
【００３３】
詳細な統計的に支持された薬理学的試験はまだ行われていないにも関わらず、見出された医薬的効果の理論的背景を発見するために以下の考察がなされ得る。しかし、我々は下に議論される複雑で、主に未発見のアレルギーの理論的背景に関する理論に縛られない。
【００３４】
薬理学的試験及び実験
アレルギー応答は、誰においても通常は無害な又は免疫応答の原因となることのない物質に対する過敏性の免疫反応である。
【００３５】
リンパ球は免疫及びアレルギーの両方において中心的な役割を果たす白血球細胞である。リンパ球は２つのタイプ、Ｔ及びＢリンパ球に分けられる。各タイプは免疫系の特定の部門に関与する。外来物質を攻撃する作用に直接的に転じられるようにしておくことがＴリンパ球の役目である（細胞性免疫）。いくつかのＴリンパ球は「殺傷」を専門にしている（細胞障害性又はキラーＴ細胞）一方、他方は免疫応答を補助して「ヘルパー」細胞（ＴＨ細胞）と呼ばれる。ＴＨ細胞は放出するタンパク質に応じて、さらにＴＨ１（感染症と戦う細胞）及びＴＨ２（アレルギーを促進する細胞）に分けられる。Ｔリンパ球のパートナーはＢリンパ球である。Ｂリンパ球はＴＨ細胞により、そうするように刺激された時に外来物質の破壊を助ける抗体を産生する、小さな抗体工場である。
【００３６】
好塩基球及び好酸球はアレルギーにおいて重要な役割を果たす他の白血球細胞である。Ｔ細胞はしばしばこれらの細胞をアレルギー状態において働かせる。好酸球の血中レベルは喘息及び他のアレルギー疾患を持つ人々において一般的に上昇している。
【００３７】
サイトカインはリンパ球により放出される小さいタンパク質であり、免疫応答を増加又は低下させることができる。サイトカインの１つであるインターロイキン４（ＩＬ４）はＩｇＥ産生に不可欠である。インターロイキン５（ＩＬ５）等は他の細胞、とりわけ好酸球を誘引するのに重要であり、それで炎症を促進する。この範囲のサイトカインはまたＴＨ２リンパ球によっても放出され、それ故にアレルギー性の炎症をさらに促進する。
【００３８】
治療的介入の主なポイント３つがアレルギー疾患の治療について提案される。Ａ）第１の可能性は、免疫応答の開始を阻止し、それにより疾患を促進するＴヘルパー２（ＴＨ２）のアレルゲンに対する応答の発達を予防することである。例えば、若い時の介入によるもの。Ｂ）第２の可能性は、直接的又は間接的に抗原提示細胞に対する作用を通じてアレルゲン特異的ＴＨ２細胞の活性化を阻止することである。例えばグルココルチコイドなどの抗炎症薬を用いた治療によるもの、又はアレルゲン免疫療法によるもの。Ｃ）第３の可能性は、アレルギー疾患の臨床症状の原因となるエフェクター分子を阻止することである。例えば抗ヒスタミン薬、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＴＨ２サイトカインに特異的な中和抗体又はＩｇＥに特異的な抗体を用いた治療によるもの。ＩＬはインターロイキン、ＴＣＲはＴ細胞受容体である（Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５、２７１〜２８３ページ（２００５年４月）、アレルギー及び喘息におけるインターロイキン１０分泌性制御性Ｔ細胞の潜在的役割（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ ａｓｔｈｍａ）、Ｃ．Ｍ．Ｈａｗｒｙｌｏｗｉｃｚ及びＡ．Ｏ’Ｇａｒｒａ）。
【００３９】
他の結果は、チロシンリン酸化はＩＬ−２を介したシグナル伝達に決定的であり、ＭＡＰキナーゼはこの経路に関与する細胞内の中間体の１つであることを明らかにした（組換えインターロイキン２による芽細胞中のフィトヘマグルチニンにおけるマイトジェン活性化プロテインキナーゼ／ＥＲＫ−２の活性化：ＣＤ３活性化との特徴の対比（Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ／ＥＲＫ−２ ｉｎ ｐｈｙｔｏｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎ ｉｎ ｂｌａｓｔｓ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２： ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｗｉｔｈ ＣＤ３ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）、Ｒ Ｍ Ｆａｉｒｈｕｒｓｔ、Ｍ Ｄａｅｉｐｏｕｒ、Ｍ Ｃ Ａｍａｒａｌ及びＡ Ｅ Ｎｅｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３年５月、７９（１）、１１２〜１１８ページ）。他の論文もまたＩＬ誘導性のケモカイン放出におけるＭＡＰキナーゼの関与を証明する（ヒト気道平滑筋細胞中のＩＬ−１β誘導性ケモカイン放出におけるｐ３８ ＭＡＰＫ、ＪＮＫ、ｐ４２／ｐ４４ ＥＲＫ及びＮＦ−κＢの関与（Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐ３８ ＭＡＰＫ、ＪＮＫ、ｐ４２／ｐ４４ ＥＲＫ ａｎｄ ＮＦ−κＢ ｉｎ ＩＬ−１β−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｉｒｗａｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ）（Ｗｉｍ Ａ．Ｗｕｙｔｓ、Ｂａｒｔ Ｍ．Ｖａｎａｕｄｅｎａｅｒｄｅ、Ｌｉｅｖｅｎ Ｊ．Ｄｕｐｏｎｔ、Ｍａｕｒｉｔｓ Ｇ．Ｄｅｍｅｄｔｓ及びＧｅｅｒｔ Ｍ．Ｖｅｒｌｅｄｅｎ、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００３年７月、９７（７）、８１１〜８１７ページ）。
【００４０】
特異的な経路を明らかにするには、重水素枯渇の適用が何を用いてアレルギー反応を軽減又は予防するかに関してさらなる基礎及び臨床研究が必要であるが、利用可能な結果に基づくと、Ｄｄ水はアレルギー反応において中心的な役割を有する分子メカニズムに影響するという明確な証拠がある。
【００４１】
上述したように、例えば抗炎症薬を用いた治療による、直接的又は間接的に抗原提示細胞に対する作用を通じたアレルゲン特異的ＴＨ２細胞活性化の阻止はアレルギー疾患を治療する１つの可能性である。
【００４２】
非ステロイド性抗炎症薬の主な標的がプロスタグランジン合成に関与するＣＯＸ−２遺伝子であることは周知である。実験はヒト結腸起源の腫瘍細胞系（腺癌）を用いて行われた。細胞は１０パーセントのウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ培地中で二酸化炭素恒温装置（５パーセントのＣＯ２、９５パーセントの空気）の中で培養された。細胞が培養皿内のスペースのほとんどを埋めたら（７０パーセントのコンフルエンス値）、血清は２４時間取り除かれた。血清を欠如させた後、細胞は重水素枯渇水を用いて調製されたＲＰＭＩ培地を与えられ、２４時間後にＭＴＴ（小規模培養テトラゾリウム）アッセイが実施されて細胞増殖が決定された。ウエスタンブロット分析を用いて、我々は上述のように処理された細胞のＣＯＸ−２含量を測定した。アッセイはＤｄ水（２０〜６０ｐｐｍ）がＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞系のＣＯＸ−２遺伝子発現を強く阻害することを示した。細胞増殖実験の結果と同様に、ここでもまた、効果は濃度に依存することが証明された。図１はＣＯＸ−２遺伝子発現に対するＤ２Ｏ濃度の効果を示す。図２はＤ濃度と細胞内プロスタグランジン量との間の相関を示し、これはＣＯＸ−２遺伝子発現に対するＤｄ水の阻害効果が細胞中のプロスタグランジン濃度低下という結果を生じさせたことを確認するものである（Ｇａｂｏｒ Ｓｏｍｌｙａｉ、Ｌｅｔ’ｓ ｄｅｆｅａｔ ｃａｎｃｅｒ、Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋｉａｄｏ発行、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ２４５． Ｈ−１５１９ Ｂｕｄａｐｅｓｔ、ｗｗｗ．ａｋｋｒｔ．ｈｕ、ＩＳＢＮ ９６３ ０５ ７８０７ ６）。
【００４３】
これらの結果はアレルギー患者に対するＤｄ水の作用モードの１つがＣＯＸ−２遺伝子の阻害効果であり得ることを示唆しうる。一方、ＣＯＸ−２遺伝子の阻害効果は抗アレルギー効果をもたらさないことを理解されたい。この現象はかかる効果がアレルギー治療において役割を果たすものの１つであり得ることを明らかにする。
【００４４】
ＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化はＩＬ−２を介したシグナル伝達に決定的であることもまた上述した。図３は普通の水（１５０ｐｐｍ）においてリン酸化されたバンドは誘導から２分後に現れたが、Ｄｄ水（２０ｐｐｍ）において、リン酸化は起こらなかったことを示す（未公開の結果）。これはＤｄ水の適用がシグナル伝達経路に介入してＩＬを介したシグナル伝達を阻害しうることを明確に示唆する。一方、リン酸化の阻害効果は抗アレルギー効果をもたらさないことを理解されたい。この現象はかかる効果がアレルギー治療において役割を果たすものの１つであり得ることを明らかにする。
【００４５】
上で議論されたようにシグナル伝達系はアレルギー反応に対して効果を発揮するが、その方法は非常に複雑で、主に未発見である。異なるＩＬのレベル変更に対するＤ濃度の効果についての試験において得られた結果（表１、実験は適格な独立した研究室でなされた）からもたらされるように、Ｄｄ水はＩＬレベルに対して複雑な効果を持つといってもよい。しかし、アレルギー疾患の治療に対する見出された肯定的な効果は、得られた実験結果を基礎として予想できないものである（異なるＩＬについて、主には減少した、しかし時折は上昇したレベルが見出された）。Ｄｄ水はアレルギーにおいて重要な役割を果たすＩＬレベルに対する影響を有するというただ１つの事実が結果から推論され得る。
【００４６】
下の表１〜３はサイトカイン濃度（レベル）に対するＤｄ水の効果を要約する。滅菌水対照より有意に高い値（ｐ≦０．０５）は太字で示される。滅菌水対照より有意に低い値（ｐ≦０．０５）は太字且つイタリック体で示される。ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１及びＧ−ＣＳＦのレベルは現在の希釈方式では全ての群において定量するには高すぎたことに留意されたい。
【表１】
【表２】
【表３】
【００４７】
重水素枯渇水の効果はまた全層の皮膚等価培養において調べられた。２４時間の処置後、重水素枯渇水は培養の生存率、プロコラーゲンＩｃペプチド産生又はヒアルロン酸産生に対して効果を持たず、したがって毒性の作用は見出されなかった。
【実施例】
【００４８】
本発明によるプロセスは保護の範囲を限定することなく、以下の実施例により実証される。
【００４９】
（例１）
有利なミネラル組成物入り飲料水の生産
Ｄｄ水及び既知の塩組成物入りの天然ミネラル水（Ｈｕｎｇａｒｉａｎ ｓｏｒｔｓ Ｃｓｉｌｌａｇｈｅｇｙｉ、Ｂａｌｆｉ、Ｏｂｕｄａｉ ｇｙｅｍａｎｔなど）は以下のような比率で混合される。
ａ）体積で０．２５部の９０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．７５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１３５ｐｐｍ
ｂ）体積で０．５部の９０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１２０ｐｐｍ
ｃ）体積で０．７５部の９０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．２５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１０５ｐｐｍ
ｄ）体積で０．２５部の６０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．７５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１２７．５ｐｐｍ
ｅ）体積で０．５部の６０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１０５ｐｐｍ
ｆ）体積で０．７５部の６０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．２５部のミネラル水、最終Ｄ濃度８２．５ｐｐｍ
【００５０】
（例２）
Ｄｄ水のカチオン及びアニオン含量は有利な塩組成物の人工濃縮物により設定される。このストック溶液は以下のような組成を持ってもよい。
ＫＣｌ ５．７ｇ
ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ １９９．６５ｇ
ＣａＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２３６．２５ｇ
＋１０００ｍｌになる量のＤｄ水
この方法で作製されたストック溶液はＭｇ２＋が２３．８ｍｇ／Ｌ、Ｃａ２＋が６４．１ｍｇ／Ｌ、Ｋ＋が３ｍｇ／Ｌ、Ｃｌ−が１９２ｍｇ／Ｌという最終濃度を与える。
【００５１】
（例３）
低減されたＤ含量を持つ果実飲料及び炭酸飲料の生産
３０ｐｐｍのＤ含量の蒸留水は水又は果汁濃縮物と以下のような比率で混合される。
ａ）体積で０．１３部の３０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．６７部の水＋体積で０．２０部の果汁濃縮物、最終Ｄ濃度約１２８〜１３０ｐｐｍ
ｂ）体積で０．２０部の３０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．６０部の水＋体積で０．２０部の果汁濃縮物、最終Ｄ濃度約１１８〜１２０ｐｐｍ
ｃ）体積で０．２４部の３０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．５６部の水＋体積で０．２０部の果汁濃縮物、最終Ｄ濃度約１１１〜１１３ｐｐｍ
【００５２】
（例４）
重水素枯渇ビールの生産
ビール醸造用の麦芽の生産に用いられる大麦は最初にＤｄ水の中に浸漬され（Ｄ濃度０．０１〜１３５ｐｐｍ）、次いで５〜１５ｃｍ厚の層に広げられて、良好な通気のもと低温（５〜１５℃）で麦芽にされる。長い麦芽は５６から７５℃の間でキルン乾燥され、次いで発芽株の残渣が除去され、麦芽は粉砕される。粉砕麦芽は適切な量のＤｄ水（Ｄレベル０．０１〜１３５ｐｐｍ）に混合され、５０〜７５℃に維持され、次いで濾過されてホップと共に煮沸される。ホップを加えられたビール麦汁は濾過され、冷却され、次いで予め増殖されたサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を接種される。主発酵は５〜６℃で１０〜１４日間続けられる。最終発酵は気密の樽の中で０℃で数週間行われる。ビールは次いで濾過され、瓶詰めされて、低温殺菌される。生産されるビールの重水素含量は主として用いられた水のＤ含量により決定されるが、エタノール及び他の成分のＤ含量にもまた影響される。
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬及び食品工業用組成物並びにその調製プロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、多数の科学刊行物（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３１７、１〜４ページ、１９９３年；Ｔｅｒｍｅｓｚｅｔｇｙｏｇｙａｓｚａｔ １０、２９〜３２ページ、１９９６年；Ｋｉｓａｌｌａｔｏｒｖｏｓｌａｓ ３、１１４〜５ページ、１９９６年；Ｅｒｆａｈｒｕｎｇｓｈｅｉｌｋｕｎｄｅ ７、３８１〜８８ページ、１９９７年；Ｊ．Ｒ．Ｈｅｙｓ及びＤ．Ｇ．Ｍｅｌｉｌｌｏ（編）、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ．、１３７〜１４１ページ、１９９７年）、並びにハンガリー特許（登録番号第２０８０８４号、第２０９７８７号、第２１４５９３号、第２１４８２４号）は、自然に存在する重水素は細胞分裂の制御において重要な役割を果たすという認識に基づくものであった。言及された特許に記載された動物実験のほか、重水素枯渇水（「Ｄｄ水」と略記され、重水素は以下の部分においてＤと略記される）の抗腫瘍効果はヒトでのテスト実験においても証明された。２年間の長期ヒト第ＩＩ相二重盲験臨床試験（この試験では参加した医師も被験者もどの患者が薬剤を受け、どの患者がプラセボを受けたのか知らなかった）において、前立腺癌患者の治療群と対照群との間で有意差が観察された。この試験は、本発明者らの早期の動物及びヒトでの研究結果を明解に確かめるものであった。
【０００３】
治験と独立して、総計で１２９０名の患者が過去１５年間で４００トンのＤｄ水を消費した。これらの症例は、腫瘍細胞は重水素枯渇に対して敏感に反応し、症例の圧倒的大部分（７０〜８０％）において低下した重水素濃度に適応できず、結果として腫瘍塊の部分的又は完全な退縮を生じることをはっきりと示した。
【０００４】
多数の興味深い知見が１５年間を超える長期の患者追跡中に取得された。アレルギー患者での知見は、Ｄｄ水はアレルギー疾患に典型的な愁訴を低減又は除去したという予期しない結果をもたらした（詳細は下で議論される）。
【０００５】
本発明は、飲料水としてのＤｄ水の消費はアレルギー疾患の症状を予防し、減少させ又は除去し、それ故に疾患の予防又は治療に適しているという知見に基づく。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
第１の態様として、本発明は、０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を含む医薬組成物及び食品組成物の調製のためのプロセスに関し、これら組成物はアレルギー疾患の予防又は治療に適している。適用される０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有するＤｄ水は、好ましくは既知の電気分解及び／又は蒸留により、又は他の方法［Ｈｏｗａｒｄ Ｋ．Ｒａｅ（編）、水素同位体の分離（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ６８、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、１９７８年；Ｓｔｅｌｉｏ Ｖｉｌｌａｎｉ（編）、同位体の分離（Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８３年］により調製され、得られる水は、通常の添加物（例えば調味料、香料など）を添加し、特に薬剤、ノンアルコール飲料又はビールの製造に用いられる当該分野の通常の方法を適用することにより、医薬組成物又は食品組成物に製剤化される。
【０００７】
別の態様として、本発明は、
ａ）０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を医薬工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬組成物、及び
ｂ）０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を食品工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための食品組成物
に関する。
【０００８】
上の組成物のいずれにおいても、０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水は、既知の電気分解及び／又は蒸留、又はＤｄ水を生じさせる任意の他の既知の方法により調製される。
【０００９】
好ましい実施形態において、適用されるＤｄ水の重水素濃度は、５〜１２５ｐｐｍ、より好ましくは５０〜１１０、さらにより好ましくは７５〜９０ｐｐｍである。しかし、ヒトの消費については、特に治療の最初の２〜３ヶ月の間は好ましいＤｄ含量は１０５〜１３０ｐｐｍであり、次の２〜３ヶ月の間は８０〜１０５ｐｐｍである。
【００１０】
Ｄｄ水の投与が予防として成功しなかった場合、より低い濃度のＤｄ水が治療段階で適用され得ることに留意されたい。その上、Ｄｄ水を用いた治療成功後、Ｄｄ水は同一又は異なるＤ濃度で将来のアレルギー性の発作に対する予防剤として適用され得る。したがってＤｄ水の場合、予防及び治療は結果的に適用され得るもので、互いを完全なものにしている。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＨＴ−２９細胞におけるＣＯＸ−２発現に対する異なる濃度のＤ２Ｏの効果を示す図である。
【図２】ＨＴ−２９細胞における異なる濃度でのプロスタグランジン産生に対するＤＤＷの効果を示す図である。
【図３】ＨＴ−２９細胞におけるＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）のＦＣＳ誘導性リン酸化に対するＤ２Ｏの効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
水の重水素濃度は赤外分光測光により、波長４μｍでのＯ−Ｄ結合の吸収極大に基づいて決定された。水サンプルをキュベットに満たすと、水を通過する赤外光は重水素含量に応じて吸収され、この吸収が装置により検出される。Ｄ含量が既知の水を用いた装置較正の後、テストサンプル中のＤ量が決定され得る（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ９８、２０８〜２１３、１９７９年）。
【００１３】
下に我々はＤｄ水の生産のための２つの好ましいプロセス、すなわち電気分解及び蒸留について記載するが、これらのプロセスはＤｄ水を大量に比較的低コストで作るのに適している。
【００１４】
ａ）１５〜２０％のＫＯＨ水溶液は電位２〜５Ｖでの直流電流により互いに分離された陰極及び陽極を用いて電気分解される。陰極上に発生し、減少された濃度の重水素を含有する水素は燃焼されて、形成される蒸気が濃縮され、別個に収集される。得られる水の重水素含量は３０〜４０ｐｐｍである（水素同位体の分離（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）、編：Ｈｏｗａｒｄ Ｋ．Ｒａｅ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ６８、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、１９７８年；同位体の分離（Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、編：Ｓｔｅｌｉｏ Ｖｉｌｌａｎｉ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８３年）。得られる水の重水素含量はさらなる電気分解により、６〜２０ｐｐｍさらに減少され得る。
【００１５】
ｂ）水は５０〜１５０プレートの分画カラム中で５０〜６０ｍｂａｒの圧力下、温度４５〜５０℃で蒸留される。蒸留過程において還流値は１２〜１３であり、蒸留中、下部では１０倍希釈が適用される。これらのパラメーターを適用すると、先頭の産物の重水素濃度は０．１から３０ｐｐｍの間である（水素同位体の分離（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）、編：Ｈｏｗａｒｄ Ｋ．Ｒａｅ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ６８、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、１９７８年；同位体の分離（Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、編：Ｓｔｅｌｉｏ Ｖｉｌｌａｎｉ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８３年）。カラム操作過程でのパラメーターの変更、例えばカラム充填量を顕著に増加させることを通じて、３０ｐｐｍより高いＤ濃度のＤｄ水が大量に生産され得る。さらなる可能性は、水のＤ濃度を減少させてＤｄ水を同様の連結カラム上でさらなる分画蒸留プロセスに供することである。
【００１６】
上述の（又は任意の他の）方法により生産されるＤｄ水は出発原料として用いられる。
【００１７】
本明細書において用いられる句「医薬組成物」は動物用組成物をも含む。
【００１８】
句「アレルギー疾患」に関しては、我々は以下に解釈を示すものとする。
【００１９】
アレルギーは、免疫系が環境中の無害の物質に対して反応する時に起こる。免疫系は非常に複雑であるため、物事が悪化する機会が多い。環境中の無害の物質に対して反応し始めた時、この反応はアレルギー反応を導き得るが、これは通常は無害な物質に対する大げさで有害な免疫応答である。
【００２０】
アレルギー疾患を持つ人がチリダニ又は草の花粉などの一般的な環境物質に曝露されると、あるタイプの白血球細胞（Ｂリンパ球）がＩｇＥとして知られるその物質に対する特異的な抗体を産生する。このＩｇＥはその後、別のタイプの白血球細胞（マスト細胞）に付着し、マスト細胞は再びその物質と接触することになると、アレルギーに至る複雑な免疫応答を開始する。
【００２１】
アレルギーを持つ異なる人々は異なる物質に対してアレルギーを起こす。人々が一般的にアレルギーを起こす物質のいくつかには、チリダニ、草木からの花粉や、ネコ、イヌ、ウマを含む動物のフケ、カビや、木の実、ピーナッツ、甲殻類、魚、乳、卵、小麦を含む食品その他が挙げられる。
【００２２】
アレルギーを持つ異なる人々はまた、アレルギーを起こす物質に曝露された時に異なった反応を示す。いくつかの一般的な反応には、アレルギー性湿疹又はじん麻疹、アレルギー性鼻炎（花粉症）、アレルギー性喘息、アナフィラキシー、くしゃみ、鼻づまり及び目の刺激が挙げられる。同様の症状はいくつかの動物においても起こる。
【００２３】
本発明による医薬組成物又は食品組成物の製剤化にあっては、任意の通常の添加物［例えば甘味料、着色料、増粘剤、調味料（調味剤）、ｐＨ調整剤、界面活性剤、香料、果実濃縮物、安定剤など］が適用され得るが、これら添加物は医薬工業（動物用組成物を生産する工業をも含む）及び食品工業において既知であり、後者の場合には特にビール及びノンアルコール飲料の製造において適用されるものである。ここで我々は添加物が普通の（天然の）重水素含量を有する水であり得ることを強調したい。
【００２４】
本発明による組成物の調製にあっては、医薬工業及び食品工業（動物用組成物を生産する工業をも含む）の任意の標準的な（既知の）製剤化方法が適用され得る。
【００２５】
本発明の組成物の調製プロセスにおけるＤｄ水を使用することから、液体の形態が有利な製剤タイプであることがもたらされる。しかし、特に食品工業の適用において、調製される組成物は固体（又は半固体、ゲル、コロイド混合物など）の形態であり得る。この場合、製剤はＤｄ水のみを含有し、すなわちその消費により治療された体の平均重水素含量は増加しない、すなわちこれらの製剤は、液体形態の組成物によりなされる基本的な治癒を補充することができる。
【００２６】
本発明の手順の主な利点は以下の通りである。
ａ）合成の「薬剤」を用いることなくアレルギーの過程への介入を可能にし、疾患の過程に有益に影響する。
ｂ／本手順で用いられるＤｄ水は毒性の副作用を持たない。
ｃ／生産プロセスは有害な廃棄物を生成しない。
ｄ／組成物は容易に製造される。
【００２７】
上述したように、アレルギー疾患の治療におけるＤｄ水のいくつかの重要な肯定的効果は我々が実践した中で見出された。最も価値のある結果は以下のように要約される。
【００２８】
アレルギー患者の群の１つ（１０名の患者）は毎年、主に春季に花粉症に苦しんでいた。彼らは我々のチームにＤ含量１０５又は１２５ｐｐｍのＤｄ水の消費後、症状が完全に消失した又は顕著に弱まったことを報告した。
【００２９】
別の患者は毎年、より強い症状のくしゃみ、鼻づまり及び目の刺激に苦しんでいたが、症状が定期的に現れる３〜４週間前にＤｄ水（８５ｐｐｍ）の消費を開始した後、全ての症状を予防することができた。
【００３０】
重篤なアレルギー反応を持つ患者の１人は症状を軽減するために長い期間服薬していた。Ｄｄ水（８５ｐｐｍ）の消費を開始した後、患者は服薬をやめることができた。
【００３１】
Ｄｄ水の動物用使用の可能性に関して、我々は非常に深刻な鼻づまりに苦しむウマに対するＤｄ水の肯定的な効果を報告することができる。ウマは８５ｐｐｍのＤ含量のＤｄ水をおよそ１５０〜２００リットル消費していると、無症状になった。最も驚くべき結果はこの唯一無二のＤｄ水での治癒の後、症状が次の年に現れなかったことであった。
【００３２】
上の実践的経験からもたらされるように、本発明によるプロセスで得られる組成物はアレルギー疾患の予防又は治療に適している。この効果において決定的であろう分子メカニズムが試験されている。予備的な結果は、Ｄｄ水により誘導される生物中のＤレベルの減少がある特定の遺伝子の発現に影響し得ることを示唆する。症状の改善又は除去についての説明は、Ｄｄ水により誘導される遺伝子発現の変化がアレルギー症状の引き金となる原因に対して適切に応答するというものであり得る。ヒトにおいてＤｄ水を用いて得られた結果は本発明によるプロセスのアレルギー疾患治療への適合性の証拠となる。
【００３３】
詳細な統計的に支持された薬理学的試験はまだ行われていないにも関わらず、見出された医薬的効果の理論的背景を発見するために以下の考察がなされ得る。しかし、我々は下に議論される複雑で、主に未発見のアレルギーの理論的背景に関する理論に縛られない。
【００３４】
薬理学的試験及び実験
アレルギー応答は、誰においても通常は無害な又は免疫応答の原因となることのない物質に対する過敏性の免疫反応である。
【００３５】
リンパ球は免疫及びアレルギーの両方において中心的な役割を果たす白血球細胞である。リンパ球は２つのタイプ、Ｔ及びＢリンパ球に分けられる。各タイプは免疫系の特定の部門に関与する。外来物質を攻撃する作用に直接的に転じられるようにしておくことがＴリンパ球の役目である（細胞性免疫）。いくつかのＴリンパ球は「殺傷」を専門にしている（細胞障害性又はキラーＴ細胞）一方、他方は免疫応答を補助して「ヘルパー」細胞（ＴＨ細胞）と呼ばれる。ＴＨ細胞は放出するタンパク質に応じて、さらにＴＨ１（感染症と戦う細胞）及びＴＨ２（アレルギーを促進する細胞）に分けられる。Ｔリンパ球のパートナーはＢリンパ球である。Ｂリンパ球はＴＨ細胞により、そうするように刺激された時に外来物質の破壊を助ける抗体を産生する、小さな抗体工場である。
【００３６】
好塩基球及び好酸球はアレルギーにおいて重要な役割を果たす他の白血球細胞である。Ｔ細胞はしばしばこれらの細胞をアレルギー状態において働かせる。好酸球の血中レベルは喘息及び他のアレルギー疾患を持つ人々において一般的に上昇している。
【００３７】
サイトカインはリンパ球により放出される小さいタンパク質であり、免疫応答を増加又は低下させることができる。サイトカインの１つであるインターロイキン４（ＩＬ４）はＩｇＥ産生に不可欠である。インターロイキン５（ＩＬ５）等は他の細胞、とりわけ好酸球を誘引するのに重要であり、それで炎症を促進する。この範囲のサイトカインはまたＴＨ２リンパ球によっても放出され、それ故にアレルギー性の炎症をさらに促進する。
【００３８】
治療的介入の主なポイント３つがアレルギー疾患の治療について提案される。Ａ）第１の可能性は、免疫応答の開始を阻止し、それにより疾患を促進するＴヘルパー２（ＴＨ２）のアレルゲンに対する応答の発達を予防することである。例えば、若い時の介入によるもの。Ｂ）第２の可能性は、直接的又は間接的に抗原提示細胞に対する作用を通じてアレルゲン特異的ＴＨ２細胞の活性化を阻止することである。例えばグルココルチコイドなどの抗炎症薬を用いた治療によるもの、又はアレルゲン免疫療法によるもの。Ｃ）第３の可能性は、アレルギー疾患の臨床症状の原因となるエフェクター分子を阻止することである。例えば抗ヒスタミン薬、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＴＨ２サイトカインに特異的な中和抗体又はＩｇＥに特異的な抗体を用いた治療によるもの。ＩＬはインターロイキン、ＴＣＲはＴ細胞受容体である（Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５、２７１〜２８３ページ（２００５年４月）、アレルギー及び喘息におけるインターロイキン１０分泌性制御性Ｔ細胞の潜在的役割（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ ａｓｔｈｍａ）、Ｃ．Ｍ．Ｈａｗｒｙｌｏｗｉｃｚ及びＡ．Ｏ’Ｇａｒｒａ）。
【００３９】
他の結果は、チロシンリン酸化はＩＬ−２を介したシグナル伝達に決定的であり、ＭＡＰキナーゼはこの経路に関与する細胞内の中間体の１つであることを明らかにした（組換えインターロイキン２による芽細胞中のフィトヘマグルチニンにおけるマイトジェン活性化プロテインキナーゼ／ＥＲＫ−２の活性化：ＣＤ３活性化との特徴の対比（Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ／ＥＲＫ−２ ｉｎ ｐｈｙｔｏｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎ ｉｎ ｂｌａｓｔｓ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２： ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｗｉｔｈ ＣＤ３ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）、Ｒ Ｍ Ｆａｉｒｈｕｒｓｔ、Ｍ Ｄａｅｉｐｏｕｒ、Ｍ Ｃ Ａｍａｒａｌ及びＡ Ｅ Ｎｅｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３年５月、７９（１）、１１２〜１１８ページ）。他の論文もまたＩＬ誘導性のケモカイン放出におけるＭＡＰキナーゼの関与を証明する（ヒト気道平滑筋細胞中のＩＬ−１β誘導性ケモカイン放出におけるｐ３８ ＭＡＰＫ、ＪＮＫ、ｐ４２／ｐ４４ ＥＲＫ及びＮＦ−κＢの関与（Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐ３８ ＭＡＰＫ、ＪＮＫ、ｐ４２／ｐ４４ ＥＲＫ ａｎｄ ＮＦ−κＢ ｉｎ ＩＬ−１β−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｉｒｗａｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ）（Ｗｉｍ Ａ．Ｗｕｙｔｓ、Ｂａｒｔ Ｍ．Ｖａｎａｕｄｅｎａｅｒｄｅ、Ｌｉｅｖｅｎ Ｊ．Ｄｕｐｏｎｔ、Ｍａｕｒｉｔｓ Ｇ．Ｄｅｍｅｄｔｓ及びＧｅｅｒｔ Ｍ．Ｖｅｒｌｅｄｅｎ、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００３年７月、９７（７）、８１１〜８１７ページ）。
【００４０】
特異的な経路を明らかにするには、重水素枯渇の適用が何を用いてアレルギー反応を軽減又は予防するかに関してさらなる基礎及び臨床研究が必要であるが、利用可能な結果に基づくと、Ｄｄ水はアレルギー反応において中心的な役割を有する分子メカニズムに影響するという明確な証拠がある。
【００４１】
上述したように、例えば抗炎症薬を用いた治療による、直接的又は間接的に抗原提示細胞に対する作用を通じたアレルゲン特異的ＴＨ２細胞活性化の阻止はアレルギー疾患を治療する１つの可能性である。
【００４２】
非ステロイド性抗炎症薬の主な標的がプロスタグランジン合成に関与するＣＯＸ−２遺伝子であることは周知である。実験はヒト結腸起源の腫瘍細胞系（腺癌）を用いて行われた。細胞は１０パーセントのウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ培地中で二酸化炭素恒温装置（５パーセントのＣＯ２、９５パーセントの空気）の中で培養された。細胞が培養皿内のスペースのほとんどを埋めたら（７０パーセントのコンフルエンス値）、血清は２４時間取り除かれた。血清を欠如させた後、細胞は重水素枯渇水を用いて調製されたＲＰＭＩ培地を与えられ、２４時間後にＭＴＴ（小規模培養テトラゾリウム）アッセイが実施されて細胞増殖が決定された。ウエスタンブロット分析を用いて、我々は上述のように処理された細胞のＣＯＸ−２含量を測定した。アッセイはＤｄ水（２０〜６０ｐｐｍ）がＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞系のＣＯＸ−２遺伝子発現を強く阻害することを示した。細胞増殖実験の結果と同様に、ここでもまた、効果は濃度に依存することが証明された。図１はＣＯＸ−２遺伝子発現に対するＤ２Ｏ濃度の効果を示す。図２はＤ濃度と細胞内プロスタグランジン量との間の相関を示し、これはＣＯＸ−２遺伝子発現に対するＤｄ水の阻害効果が細胞中のプロスタグランジン濃度低下という結果を生じさせたことを確認するものである（Ｇａｂｏｒ Ｓｏｍｌｙａｉ、Ｌｅｔ’ｓ ｄｅｆｅａｔ ｃａｎｃｅｒ、Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋｉａｄｏ発行、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ２４５． Ｈ−１５１９ Ｂｕｄａｐｅｓｔ、ｗｗｗ．ａｋｋｒｔ．ｈｕ、ＩＳＢＮ ９６３ ０５ ７８０７ ６）。
【００４３】
これらの結果はアレルギー患者に対するＤｄ水の作用モードの１つがＣＯＸ−２遺伝子の阻害効果であり得ることを示唆しうる。一方、ＣＯＸ−２遺伝子の阻害効果は抗アレルギー効果をもたらさないことを理解されたい。この現象はかかる効果がアレルギー治療において役割を果たすものの１つであり得ることを明らかにする。
【００４４】
ＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化はＩＬ−２を介したシグナル伝達に決定的であることもまた上述した。図３は普通の水（１５０ｐｐｍ）においてリン酸化されたバンドは誘導から２分後に現れたが、Ｄｄ水（２０ｐｐｍ）において、リン酸化は起こらなかったことを示す（未公開の結果）。これはＤｄ水の適用がシグナル伝達経路に介入してＩＬを介したシグナル伝達を阻害しうることを明確に示唆する。一方、リン酸化の阻害効果は抗アレルギー効果をもたらさないことを理解されたい。この現象はかかる効果がアレルギー治療において役割を果たすものの１つであり得ることを明らかにする。
【００４５】
上で議論されたようにシグナル伝達系はアレルギー反応に対して効果を発揮するが、その方法は非常に複雑で、主に未発見である。異なるＩＬのレベル変更に対するＤ濃度の効果についての試験において得られた結果（表１、実験は適格な独立した研究室でなされた）からもたらされるように、Ｄｄ水はＩＬレベルに対して複雑な効果を持つといってもよい。しかし、アレルギー疾患の治療に対する見出された肯定的な効果は、得られた実験結果を基礎として予想できないものである（異なるＩＬについて、主には減少した、しかし時折は上昇したレベルが見出された）。Ｄｄ水はアレルギーにおいて重要な役割を果たすＩＬレベルに対する影響を有するというただ１つの事実が結果から推論され得る。
【００４６】
下の表１〜３はサイトカイン濃度（レベル）に対するＤｄ水の効果を要約する。滅菌水対照より有意に高い値（ｐ≦０．０５）は太字で示される。滅菌水対照より有意に低い値（ｐ≦０．０５）は太字且つイタリック体で示される。ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１及びＧ−ＣＳＦのレベルは現在の希釈方式では全ての群において定量するには高すぎたことに留意されたい。
【表１】
【表２】
【表３】
【００４７】
重水素枯渇水の効果はまた全層の皮膚等価培養において調べられた。２４時間の処置後、重水素枯渇水は培養の生存率、プロコラーゲンＩｃペプチド産生又はヒアルロン酸産生に対して効果を持たず、したがって毒性の作用は見出されなかった。
【実施例】
【００４８】
本発明によるプロセスは保護の範囲を限定することなく、以下の実施例により実証される。
【００４９】
（例１）
有利なミネラル組成物入り飲料水の生産
Ｄｄ水及び既知の塩組成物入りの天然ミネラル水（Ｈｕｎｇａｒｉａｎ ｓｏｒｔｓ Ｃｓｉｌｌａｇｈｅｇｙｉ、Ｂａｌｆｉ、Ｏｂｕｄａｉ ｇｙｅｍａｎｔなど）は以下のような比率で混合される。
ａ）体積で０．２５部の９０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．７５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１３５ｐｐｍ
ｂ）体積で０．５部の９０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１２０ｐｐｍ
ｃ）体積で０．７５部の９０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．２５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１０５ｐｐｍ
ｄ）体積で０．２５部の６０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．７５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１２７．５ｐｐｍ
ｅ）体積で０．５部の６０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．５部のミネラル水、最終Ｄ濃度１０５ｐｐｍ
ｆ）体積で０．７５部の６０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．２５部のミネラル水、最終Ｄ濃度８２．５ｐｐｍ
【００５０】
（例２）
Ｄｄ水のカチオン及びアニオン含量は有利な塩組成物の人工濃縮物により設定される。このストック溶液は以下のような組成を持ってもよい。
ＫＣｌ ５．７ｇ
ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ １９９．６５ｇ
ＣａＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２３６．２５ｇ
＋１０００ｍｌになる量のＤｄ水
この方法で作製されたストック溶液はＭｇ２＋が２３．８ｍｇ／Ｌ、Ｃａ２＋が６４．１ｍｇ／Ｌ、Ｋ＋が３ｍｇ／Ｌ、Ｃｌ−が１９２ｍｇ／Ｌという最終濃度を与える。
【００５１】
（例３）
低減されたＤ含量を持つ果実飲料及び炭酸飲料の生産
３０ｐｐｍのＤ含量の蒸留水は水又は果汁濃縮物と以下のような比率で混合される。
ａ）体積で０．１３部の３０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．６７部の水＋体積で０．２０部の果汁濃縮物、最終Ｄ濃度約１２８〜１３０ｐｐｍ
ｂ）体積で０．２０部の３０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．６０部の水＋体積で０．２０部の果汁濃縮物、最終Ｄ濃度約１１８〜１２０ｐｐｍ
ｃ）体積で０．２４部の３０ｐｐｍのＤ含量を持つ水＋体積で０．５６部の水＋体積で０．２０部の果汁濃縮物、最終Ｄ濃度約１１１〜１１３ｐｐｍ
【００５２】
（例４）
重水素枯渇ビールの生産
ビール醸造用の麦芽の生産に用いられる大麦は最初にＤｄ水の中に浸漬され（Ｄ濃度０．０１〜１３５ｐｐｍ）、次いで５〜１５ｃｍ厚の層に広げられて、良好な通気のもと低温（５〜１５℃）で麦芽にされる。長い麦芽は５６から７５℃の間でキルン乾燥され、次いで発芽株の残渣が除去され、麦芽は粉砕される。粉砕麦芽は適切な量のＤｄ水（Ｄレベル０．０１〜１３５ｐｐｍ）に混合され、５０〜７５℃に維持され、次いで濾過されてホップと共に煮沸される。ホップを加えられたビール麦汁は濾過され、冷却され、次いで予め増殖されたサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を接種される。主発酵は５〜６℃で１０〜１４日間続けられる。最終発酵は気密の樽の中で０℃で数週間行われる。ビールは次いで濾過され、瓶詰めされて、低温殺菌される。生産されるビールの重水素含量は主として用いられた水のＤ含量により決定されるが、エタノール及び他の成分のＤ含量にもまた影響される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を医薬工業において適用される通常の添加物と混合し、得られる混合物を医薬組成物に製剤化することを含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬組成物の調製のためのプロセス。
【請求項２】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を食品工業において適用される通常の添加物と混合し、得られる混合物を食品組成物に製剤化することを含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための食品組成物の調製のためのプロセス。
【請求項３】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水が電気分解又は蒸留により調製される、請求項１又は２に記載のプロセス。
【請求項４】
好ましい重水素含量が１０５〜１３０ｐｐｍ又は８０〜１０５ｐｐｍである、請求項１から３までのいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を医薬工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬組成物。
【請求項６】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を食品工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための食品組成物。
【請求項７】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水が電気分解又は蒸留により調製される、請求項５又は６に記載の組成物。
【請求項８】
重水素含量が１０５〜１３０ｐｐｍ又は８０〜１０５ｐｐｍである、請求項５から７までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を医薬工業において適用される通常の添加物と混合し、得られる混合物を医薬組成物に製剤化することを含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬組成物の調製のためのプロセス。
【請求項２】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を食品工業において適用される通常の添加物と混合し、得られる混合物を食品組成物に製剤化することを含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための食品組成物の調製のためのプロセス。
【請求項３】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水が電気分解又は蒸留により調製される、請求項１又は２に記載のプロセス。
【請求項４】
好ましい重水素含量が１０５〜１３０ｐｐｍ又は８０〜１０５ｐｐｍである、請求項１から３までのいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を医薬工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための医薬組成物。
【請求項６】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水を食品工業において適用される通常の添加物と共に含む、アレルギー疾患の予防又は治療のための食品組成物。
【請求項７】
０．０１〜１３５ｐｐｍの重水素含量を有する水が電気分解又は蒸留により調製される、請求項５又は６に記載の組成物。
【請求項８】
重水素含量が１０５〜１３０ｐｐｍ又は８０〜１０５ｐｐｍである、請求項５から７までのいずれか一項に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２０１２−５２４０５７（Ｐ２０１２−５２４０５７Ａ）
【公表日】平成２４年１０月１１日（２０１２．１０．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０５２４３（Ｐ２０１２−５０５２４３）
【出願日】平成２２年４月１６日（２０１０．４．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＨＵ２０１０／００００４４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１９３０３
【国際公開日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【出願人】（５１１２４８３０８）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１０月１１日（２０１２．１０．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月１６日（２０１０．４．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＨＵ２０１０／００００４４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１９３０３
【国際公開日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【出願人】（５１１２４８３０８）
【Ｆターム（参考）】
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