本発明は、MDCK細胞等のイヌ細胞中での核酸配列の発現に有用である、新規なイヌpol I調節核酸配列を提供する。さらに、本発明は、そのような核酸を含む発現ベクターおよび細胞、ならびに感染性インフルエンザウイルスを含めたインフルエンザウイルスを作製するためにそのような核酸を使用する方法も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
イヌＲＮＡポリメラーゼＩ調節配列を含む単離核酸。
【請求項２】
調節配列が、プロモーターである、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
ＲＮＡポリメラーゼＩ調節配列が、配列番号１のヌクレオチド１からヌクレオチド１８０３、またはその機能的に活性のある断片を含む、請求項１に記載の核酸。
【請求項４】
調節配列が、マイナス鎖ウイルスゲノムＲＮＡまたは対応するｃＲＮＡをコードするｃＤＮＡに作動可能に連結している、請求項１、２または３に記載の核酸。
【請求項５】
転写終結配列をさらに含む、請求項４に記載の核酸。
【請求項６】
マイナス鎖ウイルスゲノムＲＮＡが、インフルエンザゲノムＲＮＡである、請求項５に記載の核酸。
【請求項７】
請求項６に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項８】
インフルエンザゲノムＲＮＡを生成するための方法であって、請求項６に記載の核酸を転写するステップを含み、それによってインフルエンザゲノムＲＮＡを生成する、上記方法。
【請求項９】
組換えインフルエンザウイルスを生成する方法であって、請求項７に記載の発現ベクターと、ＰＢ２、ＰＢ１、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１およびＮＳ２からなる群から選択される１つまたは複数のインフルエンザポリペプチドをコードするｍＲＮＡを発現する１つまたは複数の発現ベクターとを含むイヌ細胞を培養するステップと；組換えインフルエンザウイルスを単離するステップとを含む、上記方法。
【請求項１０】
生成されたインフルエンザウイルスが、感染性である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１×１０^３ＰＦＵ／ｍｌのインフルエンザウイルスの生成をもたらす、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
請求項７に記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１３】
イヌ細胞である、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
腎臓細胞である、請求項１３に記載のイヌ細胞。
【請求項１５】
ＭＤＣＫ細胞である、請求項１４に記載のイヌ腎臓細胞。
【請求項１６】
培養イヌ細胞中で、３種を超えるゲノムｖＲＮＡセグメントを有する組換え分節マイナス鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、（ａ）イヌ細胞の集団に、前記ウイルスの完全なゲノムｖＲＮＡセグメントを提供するためにゲノムｖＲＮＡセグメントを前記細胞中で発現することができる発現ベクターの第１のセットを導入するステップと；（ｂ）前記細胞に、前記ウイルスの１つまたは複数のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを発現することができる発現ベクターの第２のセットを導入するステップと；（ｃ）前記細胞を培養するステップであって、それによってウイルス粒子が生成されるステップとを含む、上記方法。
【請求項１７】
感染性インフルエンザウイルス粒子を生成する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
培養イヌ細胞中で、感染性インフルエンザウイルス粒子を生成するための方法であって、（ａ）イヌ細胞の集団中に、（ｉ）前記ウイルスの完全なゲノムｖＲＮＡセグメントを提供するためにゲノムｖＲＮＡセグメントと、（ｉｉ）前記ウイルスの１つまたは複数のポリペプチドをコードするｍＲＮＡとを前記細胞中で発現することができる一セットの発現ベクターを導入するステップと；（ｂ）前記細胞を培養するステップであって、それによって前記ウイルス粒子が生成されるステップとを含む、上記方法。
【請求項１９】
請求項１６に記載の方法によって生成されたウイルス。
【請求項２０】
ヘルパーウイルスを使用する、請求項１６、１７または１８に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公表番号】特表２００８−５４３３３１（Ｐ２００８−５４３３３１Ａ）
【公表日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１８２８７（Ｐ２００８−５１８２８７）
【出願日】平成１８年６月２０日（２００６．６．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２３８６７
【国際公開番号】ＷＯ２００７／００２００８
【国際公開日】平成１９年１月４日（２００７．１．４）
【出願人】（５０５３９６２２４）メッドイミューン　バクシーンズ，インコーポレイティド (13)
【Ｆターム（参考）】