修飾を有するｄｓＲＮＡによる遺伝子発現の特異的な阻害のための組成物および方法
本発明は、真核細胞において特定された遺伝子の発現または活性を減少させるために有用である組成物および方法を特徴とする。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
i）第1の鎖、および、
ii）第2の鎖、を含む単離された二重鎖RNA（dsRNA）であって、
前記第1および第2の鎖は、領域Bにおいて二重鎖を形成し；
前記第1の鎖は、3'末端にて領域Eを含み、領域Eは、テトラループを含み；および、
前記dsRNAは、第1の鎖の3'末端と第2の鎖の5'末端との間に不連続を含む、単離された二重鎖RNA。
【請求項２】
請求項1に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、長さが19〜35ヌクレオチドであり；および前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Bにおける二重鎖は、長さが15〜35塩基対である、単離されたdsRNA。
【請求項３】
請求項1〜2のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、長さが19〜23ヌクレオチドであり；および前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Bにおける二重鎖は、長さが15〜23塩基対である、単離されたdsRNA。
【請求項４】
請求項1〜3のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Bの第2ヌクレオチド配列に対して少なくとも60%、70%、80%、90%、95%または100%の相補的である領域Bのヌクレオチド配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項５】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、前記第1の鎖の5'末端および前記第2の鎖の3'末端によって形成されたブラントエンドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７】
請求項1〜4および6のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜4ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項８】
請求項1〜4および6のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜2ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項９】
請求項1〜8のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、長さが19〜80ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１】
請求項1〜10のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UNCG、GNRA、CUUG、d（GNNA）、d（GNAB）、d（CNNG）およびd（TNCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項１２】
請求項1〜11のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UUCG、GAAA、d（GTTA）およびd（TTCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、5'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項１４】
請求項13に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列と二重鎖を形成する核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項１５】
請求項14に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項１６】
請求項1〜15のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、5'末端にて脱リン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項１７】
請求項1〜15のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、5'末端にてリン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項１８】
請求項1〜17のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、第2の鎖は、前記第2の鎖の長さの少なくとも19〜23ヌクレオチドに沿って標的RNAに対して二重鎖形成する、単離されたdsRNA。
【請求項１９】
請求項1〜18のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、哺乳動物細胞に導入されたときに、参照dsRNAと比較して標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
【請求項２０】
修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜19のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項２１】
複数の修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜20のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項２２】
請求項20〜21のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル、2'-メトキシエトキシ、2'-フルオロ、2'-アリル、2'-O-［2-（メチルアミノ）-2-オキソエチル］、4'-チオ、4'-CH2-O-2'-ブリッジ、4'-（CH2）2-O-2'-ブリッジ、2'-LNA、および2'-O-（N-メチルカルバマート）からなる群より選択される修飾を有する、単離されたdsRNA。
【請求項２３】
請求項20〜22のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項２４】
請求項23に記載の単離されたdsRNAであって、前記塩基類似体は、ユニバーサル塩基である、単離されたdsRNA。
【請求項２５】
請求項20〜24のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項２６】
請求項25に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Bにおける1〜7の修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項２７】
請求項25〜26のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングにおける全ての位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項２８】
請求項25〜27のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、前記第2の鎖の3'末端から位置1、2および3にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項２９】
請求項25〜27のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、領域Cにおいて交互の位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３０】
請求項25〜27に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、領域Cにおいて交互の対の位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３１】
請求項27〜30のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項３２】
請求項20〜31のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３３】
請求項32に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Bにおいて1〜7の修飾されたヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項３４】
請求項32〜33のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Cにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３５】
請求項32〜34のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Cにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３６】
請求項32〜35のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して近位の領域Cにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３７】
請求項36に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Cにおいて第1の鎖の3'末端からの位置1、2または1および2にてテトラループに対して近位の領域Cにおける修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３８】
請求項34〜37のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾されたヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項３９】
請求項1〜36のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Cにおいて第1の鎖の3'末端から位置1、2または1および2にてテトラループに対して近位の領域Cにおけるデオキシリボヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項４０】
請求項1〜39のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してDicerによる切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項４１】
i）第1の鎖、および、
ii）第2の鎖、
を含む単離された二重鎖RNA（dsRNA）であって、
前記第1および第2の鎖は、領域Hにおいて二重鎖を形成し；
前記第2の鎖は、5'末端にて領域Jを含み、前記領域Jは、テトラループを含み；および、
前記dsRNAは、第1の鎖の3'末端と第2の鎖の5'末端との間に不連続を含む、単離された二重鎖RNA。
【請求項４２】
請求項41に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、長さが19〜35ヌクレオチドであり；並びに、前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Hの二重鎖は、長さが19〜35塩基対である、単離された二重鎖RNA。
【請求項４３】
請求項41〜42のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、長さが19〜23ヌクレオチドであり；並びに、前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Hの二重鎖は、長さが19〜23塩基対である、単離された二重鎖RNA。
【請求項４４】
請求項41〜43のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Hの第2ヌクレオチド配列に対して少なくとも60%、70%、80%、90%、95%または100%の相補的である領域Hのヌクレオチド配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項４５】
請求項41〜44のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、前記第1の鎖の5'末端および第2の鎖の3'末端によって形成されるブラントエンドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項４６】
請求項41〜44のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングを含む、単離されたdsRNA。
【請求項４７】
請求項41〜44および46のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜4ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項４８】
請求項41〜44および46のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜2ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項４９】
請求項41〜48のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、長さが27〜80ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項５０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを含む、単離されたdsRNA。
【請求項５１】
請求項41〜50のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UNCG、GNRA、CUUG、d（GNNA）、d（GNAB）、d（CNNG）およびd（TNCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項５２】
請求項41〜51のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UUCG、GAAA、d（GTTA）およびd（TTCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項５３】
請求項41〜52のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、5'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項５４】
請求項53に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列と二重鎖を形成する核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項５５】
請求項54に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項５６】
請求項41〜55のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、5'末端にて脱リン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項５７】
請求項41〜55のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、5'末端にてリン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項５８】
請求項41〜57のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、前記第2の鎖の長さの少なくとも19〜23ヌクレオチドに沿って標的RNAに対して二重鎖を形成する、単離されたdsRNA。
【請求項５９】
請求項41〜58のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、哺乳動物細胞に導入したときに、参照dsRNAと比較して標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
【請求項６０】
修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項41〜59のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項６１】
複数の修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜60のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項６２】
請求項60〜61のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル、2'-メトキシエトキシ、2'-フルオロ、2'-アリル、2'-O-［2-（メチルアミノ）-2-オキソエチル］、4'-チオ、4'-CH2-O-2'-ブリッジ、4'-（CH2）2-O-2'-ブリッジ、2'-LNAおよび2'-O-（N-メチルカルバマート）からなる群より選択される修飾を有する、単離されたdsRNA。
【請求項６３】
請求項60〜62のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項６４】
請求項63記載に記載の単離されたdsRNAであって、前記塩基類似体は、ユニバーサル塩基である、単離されたdsRNA。
【請求項６５】
請求項60〜64のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６６】
請求項65に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Hにおける1〜7の修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項６７】
請求項65〜66のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６８】
請求項65〜67のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、第1の鎖の5'末端から位置1、2および3にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６９】
請求項65〜67のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Iにおいて交互の位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７０】
請求項65〜67に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、領域Iにおいて交互の対の位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７１】
請求項67〜70のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項７２】
請求項60〜71のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７３】
請求項72に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Iにおける1〜7の修飾されたヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項７４】
請求項72〜73のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Iにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７５】
請求項72〜74のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Iにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７６】
請求項72〜75のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して近位の領域Iにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７７】
請求項72〜76のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して近位の領域Iにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７８】
請求項74〜77のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾されたヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項７９】
請求項41〜76のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Cにおいて第1の鎖の3'末端から位置1、2または1および2にてテトラループに対して近位の領域Iにおけるデオキシリボヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項８０】
請求項41〜79のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してDicerによる切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項８１】
i）長さが35〜39ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、かつ3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも16ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端から始まる全てのヌクレオチドは、第1のオリゴヌクレオチドの5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８２】
i）長さが37〜41ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも14ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端からの最後の2つのヌクレオチド以外は全て、前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８３】
i）長さが37〜41ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも16ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端から始まる全てのヌクレオチドは、第1のオリゴヌクレオチド鎖の5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８４】
i）長さが37〜41ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも18ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端からの最後の2つのヌクレオチド以外は全て、第1のオリゴヌクレオチド鎖の5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８５】
細胞における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
細胞を、参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項1〜84のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）と接触させることを含む、方法。
【請求項８６】
動物における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
動物を、参照dsRNAと比較して動物の細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項1〜84のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）で処理することを含む、方法。
【請求項８７】
参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項1〜84のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）および薬学的に許容される担体を含む、被験体の細胞における標的遺伝子の発現を減少させることのための医薬組成物。
【請求項８８】
前記dsRNAを化学的にまたは酵素的に合成することを含む、請求項1〜84のいずれか1項に記載の二重鎖RNA（dsRNA）を合成する方法。
【請求項８９】
i）センス鎖および、
ii）アンチセンス鎖
を含む単離された二重鎖RNA（dsRNA）であって：
前記センス鎖およびアンチセンス鎖は、長さが22〜43塩基対である二重鎖を形成し；かつ、
（図12、15A、15B、16A、16Bおよび17のいずれか1つに関して）、前記dsRNAは、独立して、センス鎖上の位置B*1、アンチセンス鎖上のB*1、センス鎖上のC*1-C*3またはアンチセンス鎖上のC*1-C*3のいずれかにて一つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項９０】
請求項89に記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、長さが25〜30塩基対である、単離されたdsRNA。
【請求項９１】
請求項89〜90のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖が領域Bにおいてアンチセンスヌクレオチド配列に対して少なくとも60%、70%、80%、90%、95%または100%相補的である領域Bにおけるヌクレオチド配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項９２】
請求項89〜91のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、長さが26〜47ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項９３】
請求項89〜92のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖は、長さが22〜43ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項９４】
請求項89〜93のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Bにおける1〜7の修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項９５】
請求項89〜94のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、センス鎖の5'末端およびアンチセンス鎖の3'末端によって形成されるブラントエンドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項９６】
請求項89〜95のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、3'オーバーハングを含む、単離されたdsRNA。
【請求項９７】
請求項89〜94および96のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜4ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項９８】
請求項89〜94および96のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜2ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項９９】
請求項89〜98のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖は、5'末端にてリン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項１００】
請求項89〜99のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、センス鎖の3'末端によって形成されるブラントエンドを含み、かつアンチセンス鎖の5'末端は、ブラントエンドを形成する、単離されたdsRNA。
【請求項１０１】
請求項89〜100のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖およびアンチセンス鎖は、リンカーによって連結される、単離されたdsRNA。
【請求項１０２】
請求項89〜101のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記リンカーは、ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１０３】
請求項89〜102のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記リンカーは、テトラループである、単離されたdsRNA。
【請求項１０４】
請求項89〜103のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してセンスまたはアンチセンス鎖上のDicerによる切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項１０５】
請求項89〜104のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、センス鎖上の位置B*1、C*1またはC*2またはアンチセンス鎖上の位置B*1のいずれかにて複数の修飾ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１０６】
請求項89〜105のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖上の位置B*1にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１０７】
請求項106に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してAgo2との相互作用を増強した、単離されたdsRNA。
【請求項１０８】
請求項89〜107のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル、2'-メトキシエトキシ、2'-フルオロ、2'-アリル、2'-O-［2-（メチルアミノ）-2-オキソエチル］、4'-チオ、4'-CH2-O-2'-ブリッジ、4'-（CH2）2-O-2'-ブリッジ、2'-LNAおよび2'-O-（N-メチルカルバマート）からなる群より選択される修飾を有する、単離されたdsRNA。
【請求項１０９】
請求項89〜108のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１０】
請求項109に記載の単離されたdsRNAであって、前記塩基類似体は、ユニバーサル塩基であるる、単離されたdsRNA。
【請求項１１１】
請求項89〜110のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖は、センス鎖上の位置C*3およびC*4にてデオキシリボヌクレオチドを含むる、単離されたdsRNA。
【請求項１１２】
請求項89〜111のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上の位置B*10またはB*11にてアンチセンス鎖上にユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１３】
請求項89〜111のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上のDicer切断部位に対して遠位の位置10または11にてユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１４】
請求項89〜113のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上の位置B*10およびB*11にてユニバーサルヌクレオチドを、およびアンチセンス鎖上の位置B*9、位置B*12または位置B*9およびB*12のいずれか1つにてユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１５】
請求項89〜113のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上のDicer切断部位に対して遠位の位置10および11にてユニバーサルヌクレオチドを、およびアンチセンス鎖上のDicer切断部位に対して遠位の位置9、位置12または位置9および12のいずれか1つにてユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１６】
請求項112〜115のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記ユニバーサルヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１７】
請求項112〜116のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、参照dsRNAのアンチセンス鎖と比較して、Ago2／RISCによる標的RNAの切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項１１８】
請求項89〜94、96〜116のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、3'オーバーハングにおける全ての位置にて修飾ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１９】
請求項89〜118のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の3'末端からの位置1、2および3にて修飾ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１２０】
請求項89〜119のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、領域B*において交互の位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１２１】
請求項89〜120に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、領域B*において交互の対の位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１２２】
請求項118〜121のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項１２３】
請求項89〜122のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の長さの少なくとも19ヌクレオチドに沿って標的RNAに対して二重鎖形成する、単離されたdsRNA。
【請求項１２４】
請求項89〜123のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、哺乳動物細胞に導入されたときに、参照dsRNAと比較して標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
【請求項１２５】
細胞における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
細胞を、参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項89〜124のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAと接触させることを含む、方法。
【請求項１２６】
動物における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
動物を、参照dsRNAと比較して動物の細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項89〜124のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）で処理することを含む、方法。
【請求項１２７】
参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項89〜124のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAを含む、被験体の細胞における標的遺伝子の減少の発現のための医薬組成物。
【請求項１２８】
請求項89〜124のいずれか1項に記載の二重鎖RNA（dsRNA）を合成する方法であって、前記dsRNAを化学的にまたは酵素的に合成することを含む、方法。
【請求項１】
i）第1の鎖、および、
ii）第2の鎖、を含む単離された二重鎖RNA（dsRNA）であって、
前記第1および第2の鎖は、領域Bにおいて二重鎖を形成し；
前記第1の鎖は、3'末端にて領域Eを含み、領域Eは、テトラループを含み；および、
前記dsRNAは、第1の鎖の3'末端と第2の鎖の5'末端との間に不連続を含む、単離された二重鎖RNA。
【請求項２】
請求項1に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、長さが19〜35ヌクレオチドであり；および前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Bにおける二重鎖は、長さが15〜35塩基対である、単離されたdsRNA。
【請求項３】
請求項1〜2のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、長さが19〜23ヌクレオチドであり；および前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Bにおける二重鎖は、長さが15〜23塩基対である、単離されたdsRNA。
【請求項４】
請求項1〜3のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Bの第2ヌクレオチド配列に対して少なくとも60%、70%、80%、90%、95%または100%の相補的である領域Bのヌクレオチド配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項５】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、前記第1の鎖の5'末端および前記第2の鎖の3'末端によって形成されたブラントエンドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７】
請求項1〜4および6のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜4ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項８】
請求項1〜4および6のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜2ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項９】
請求項1〜8のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、長さが19〜80ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１】
請求項1〜10のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UNCG、GNRA、CUUG、d（GNNA）、d（GNAB）、d（CNNG）およびd（TNCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項１２】
請求項1〜11のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UUCG、GAAA、d（GTTA）およびd（TTCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、5'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項１４】
請求項13に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列と二重鎖を形成する核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項１５】
請求項14に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項１６】
請求項1〜15のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、5'末端にて脱リン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項１７】
請求項1〜15のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、5'末端にてリン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項１８】
請求項1〜17のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、第2の鎖は、前記第2の鎖の長さの少なくとも19〜23ヌクレオチドに沿って標的RNAに対して二重鎖形成する、単離されたdsRNA。
【請求項１９】
請求項1〜18のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、哺乳動物細胞に導入されたときに、参照dsRNAと比較して標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
【請求項２０】
修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜19のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項２１】
複数の修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜20のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項２２】
請求項20〜21のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル、2'-メトキシエトキシ、2'-フルオロ、2'-アリル、2'-O-［2-（メチルアミノ）-2-オキソエチル］、4'-チオ、4'-CH2-O-2'-ブリッジ、4'-（CH2）2-O-2'-ブリッジ、2'-LNA、および2'-O-（N-メチルカルバマート）からなる群より選択される修飾を有する、単離されたdsRNA。
【請求項２３】
請求項20〜22のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項２４】
請求項23に記載の単離されたdsRNAであって、前記塩基類似体は、ユニバーサル塩基である、単離されたdsRNA。
【請求項２５】
請求項20〜24のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項２６】
請求項25に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Bにおける1〜7の修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項２７】
請求項25〜26のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングにおける全ての位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項２８】
請求項25〜27のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、前記第2の鎖の3'末端から位置1、2および3にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項２９】
請求項25〜27のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、領域Cにおいて交互の位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３０】
請求項25〜27に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、領域Cにおいて交互の対の位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３１】
請求項27〜30のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項３２】
請求項20〜31のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３３】
請求項32に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Bにおいて1〜7の修飾されたヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項３４】
請求項32〜33のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Cにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３５】
請求項32〜34のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Cにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３６】
請求項32〜35のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して近位の領域Cにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３７】
請求項36に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Cにおいて第1の鎖の3'末端からの位置1、2または1および2にてテトラループに対して近位の領域Cにおける修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項３８】
請求項34〜37のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾されたヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項３９】
請求項1〜36のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Cにおいて第1の鎖の3'末端から位置1、2または1および2にてテトラループに対して近位の領域Cにおけるデオキシリボヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項４０】
請求項1〜39のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してDicerによる切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項４１】
i）第1の鎖、および、
ii）第2の鎖、
を含む単離された二重鎖RNA（dsRNA）であって、
前記第1および第2の鎖は、領域Hにおいて二重鎖を形成し；
前記第2の鎖は、5'末端にて領域Jを含み、前記領域Jは、テトラループを含み；および、
前記dsRNAは、第1の鎖の3'末端と第2の鎖の5'末端との間に不連続を含む、単離された二重鎖RNA。
【請求項４２】
請求項41に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、長さが19〜35ヌクレオチドであり；並びに、前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Hの二重鎖は、長さが19〜35塩基対である、単離された二重鎖RNA。
【請求項４３】
請求項41〜42のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、長さが19〜23ヌクレオチドであり；並びに、前記第2の鎖および第1の鎖によって形成される領域Hの二重鎖は、長さが19〜23塩基対である、単離された二重鎖RNA。
【請求項４４】
請求項41〜43のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Hの第2ヌクレオチド配列に対して少なくとも60%、70%、80%、90%、95%または100%の相補的である領域Hのヌクレオチド配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項４５】
請求項41〜44のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、前記第1の鎖の5'末端および第2の鎖の3'末端によって形成されるブラントエンドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項４６】
請求項41〜44のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングを含む、単離されたdsRNA。
【請求項４７】
請求項41〜44および46のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜4ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項４８】
請求項41〜44および46のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜2ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項４９】
請求項41〜48のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、長さが27〜80ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項５０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを含む、単離されたdsRNA。
【請求項５１】
請求項41〜50のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UNCG、GNRA、CUUG、d（GNNA）、d（GNAB）、d（CNNG）およびd（TNCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項５２】
請求項41〜51のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、UUCG、GAAA、d（GTTA）およびd（TTCG）からなる群より選択される核酸配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項５３】
請求項41〜52のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、5'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項５４】
請求項53に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列と二重鎖を形成する核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項５５】
請求項54に記載の単離されたdsRNAであって、前記テトラループは、3'末端にてC、CC、GおよびGGからなる群より選択される核酸配列に隣接する、単離されたdsRNA。
【請求項５６】
請求項41〜55のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、5'末端にて脱リン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項５７】
請求項41〜55のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、5'末端にてリン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項５８】
請求項41〜57のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、前記第2の鎖の長さの少なくとも19〜23ヌクレオチドに沿って標的RNAに対して二重鎖を形成する、単離されたdsRNA。
【請求項５９】
請求項41〜58のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、哺乳動物細胞に導入したときに、参照dsRNAと比較して標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
【請求項６０】
修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項41〜59のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項６１】
複数の修飾されたヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜60のいずれか1項に記載の単離されたdsRNA。
【請求項６２】
請求項60〜61のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル、2'-メトキシエトキシ、2'-フルオロ、2'-アリル、2'-O-［2-（メチルアミノ）-2-オキソエチル］、4'-チオ、4'-CH2-O-2'-ブリッジ、4'-（CH2）2-O-2'-ブリッジ、2'-LNAおよび2'-O-（N-メチルカルバマート）からなる群より選択される修飾を有する、単離されたdsRNA。
【請求項６３】
請求項60〜62のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項６４】
請求項63記載に記載の単離されたdsRNAであって、前記塩基類似体は、ユニバーサル塩基である、単離されたdsRNA。
【請求項６５】
請求項60〜64のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６６】
請求項65に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Hにおける1〜7の修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項６７】
請求項65〜66のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、3'オーバーハングにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６８】
請求項65〜67のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、第1の鎖の5'末端から位置1、2および3にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項６９】
請求項65〜67のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Iにおいて交互の位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７０】
請求項65〜67に記載の単離されたdsRNAであって、前記第2の鎖は、領域Iにおいて交互の対の位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７１】
請求項67〜70のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項７２】
請求項60〜71のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、1つまたは複数の修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７３】
請求項72に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Iにおける1〜7の修飾されたヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項７４】
請求項72〜73のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Iにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７５】
請求項72〜74のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して遠位の領域Iにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７６】
請求項72〜75のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して近位の領域Iにおいて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７７】
請求項72〜76のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、テトラループに対して近位の領域Iにおける全ての位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項７８】
請求項74〜77のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾されたヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項７９】
請求項41〜76のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記第1の鎖は、領域Cにおいて第1の鎖の3'末端から位置1、2または1および2にてテトラループに対して近位の領域Iにおけるデオキシリボヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項８０】
請求項41〜79のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してDicerによる切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項８１】
i）長さが35〜39ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、かつ3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも16ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端から始まる全てのヌクレオチドは、第1のオリゴヌクレオチドの5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８２】
i）長さが37〜41ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも14ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端からの最後の2つのヌクレオチド以外は全て、前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８３】
i）長さが37〜41ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも16ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端から始まる全てのヌクレオチドは、第1のオリゴヌクレオチド鎖の5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８４】
i）長さが37〜41ヌクレオチドである第1のオリゴヌクレオチド鎖であって、3'末端からヌクレオチド11〜16は、3'末端からヌクレオチド1〜6と二重鎖を形成し、3'末端からヌクレオチド7〜10は、テトラループを形成する、第1のオリゴヌクレオチド鎖；および、
ii）長さが第1のオリゴヌクレオチド鎖よりも18ヌクレオチド短い第2のオリゴヌクレオチド鎖であって、第2ヌクレオチド鎖の3'末端からの最後の2つのヌクレオチド以外は全て、第1のオリゴヌクレオチド鎖の5'末端にて始まるヌクレオチドの同じ数と二重鎖を形成する、第2のオリゴヌクレオチド鎖、
を含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項８５】
細胞における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
細胞を、参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項1〜84のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）と接触させることを含む、方法。
【請求項８６】
動物における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
動物を、参照dsRNAと比較して動物の細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項1〜84のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）で処理することを含む、方法。
【請求項８７】
参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項1〜84のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）および薬学的に許容される担体を含む、被験体の細胞における標的遺伝子の発現を減少させることのための医薬組成物。
【請求項８８】
前記dsRNAを化学的にまたは酵素的に合成することを含む、請求項1〜84のいずれか1項に記載の二重鎖RNA（dsRNA）を合成する方法。
【請求項８９】
i）センス鎖および、
ii）アンチセンス鎖
を含む単離された二重鎖RNA（dsRNA）であって：
前記センス鎖およびアンチセンス鎖は、長さが22〜43塩基対である二重鎖を形成し；かつ、
（図12、15A、15B、16A、16Bおよび17のいずれか1つに関して）、前記dsRNAは、独立して、センス鎖上の位置B*1、アンチセンス鎖上のB*1、センス鎖上のC*1-C*3またはアンチセンス鎖上のC*1-C*3のいずれかにて一つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含む、単離された二重鎖RNA（dsRNA）。
【請求項９０】
請求項89に記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、長さが25〜30塩基対である、単離されたdsRNA。
【請求項９１】
請求項89〜90のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖が領域Bにおいてアンチセンスヌクレオチド配列に対して少なくとも60%、70%、80%、90%、95%または100%相補的である領域Bにおけるヌクレオチド配列を有する、単離されたdsRNA。
【請求項９２】
請求項89〜91のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、長さが26〜47ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項９３】
請求項89〜92のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖は、長さが22〜43ヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項９４】
請求項89〜93のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記領域Bにおける1〜7の修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む、単離されたdsRNA。
【請求項９５】
請求項89〜94のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、センス鎖の5'末端およびアンチセンス鎖の3'末端によって形成されるブラントエンドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項９６】
請求項89〜95のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、3'オーバーハングを含む、単離されたdsRNA。
【請求項９７】
請求項89〜94および96のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜4ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項９８】
請求項89〜94および96のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記3'オーバーハングは、1〜2ヌクレオチドからなる、単離されたdsRNA。
【請求項９９】
請求項89〜98のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖は、5'末端にてリン酸化される、単離されたdsRNA。
【請求項１００】
請求項89〜99のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、センス鎖の3'末端によって形成されるブラントエンドを含み、かつアンチセンス鎖の5'末端は、ブラントエンドを形成する、単離されたdsRNA。
【請求項１０１】
請求項89〜100のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖およびアンチセンス鎖は、リンカーによって連結される、単離されたdsRNA。
【請求項１０２】
請求項89〜101のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記リンカーは、ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１０３】
請求項89〜102のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記リンカーは、テトラループである、単離されたdsRNA。
【請求項１０４】
請求項89〜103のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してセンスまたはアンチセンス鎖上のDicerによる切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項１０５】
請求項89〜104のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、センス鎖上の位置B*1、C*1またはC*2またはアンチセンス鎖上の位置B*1のいずれかにて複数の修飾ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１０６】
請求項89〜105のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖上の位置B*1にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１０７】
請求項106に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、参照dsRNAと比較してAgo2との相互作用を増強した、単離されたdsRNA。
【請求項１０８】
請求項89〜107のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル、2'-メトキシエトキシ、2'-フルオロ、2'-アリル、2'-O-［2-（メチルアミノ）-2-オキソエチル］、4'-チオ、4'-CH2-O-2'-ブリッジ、4'-（CH2）2-O-2'-ブリッジ、2'-LNAおよび2'-O-（N-メチルカルバマート）からなる群より選択される修飾を有する、単離されたdsRNA。
【請求項１０９】
請求項89〜108のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１０】
請求項109に記載の単離されたdsRNAであって、前記塩基類似体は、ユニバーサル塩基であるる、単離されたdsRNA。
【請求項１１１】
請求項89〜110のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記センス鎖は、センス鎖上の位置C*3およびC*4にてデオキシリボヌクレオチドを含むる、単離されたdsRNA。
【請求項１１２】
請求項89〜111のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上の位置B*10またはB*11にてアンチセンス鎖上にユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１３】
請求項89〜111のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上のDicer切断部位に対して遠位の位置10または11にてユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１４】
請求項89〜113のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上の位置B*10およびB*11にてユニバーサルヌクレオチドを、およびアンチセンス鎖上の位置B*9、位置B*12または位置B*9およびB*12のいずれか1つにてユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１５】
請求項89〜113のいずれかに記載の単離されたdsRNAであって、前記二重鎖は、アンチセンス鎖上のDicer切断部位に対して遠位の位置10および11にてユニバーサルヌクレオチドを、およびアンチセンス鎖上のDicer切断部位に対して遠位の位置9、位置12または位置9および12のいずれか1つにてユニバーサルヌクレオチドをさらに含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１６】
請求項112〜115のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記ユニバーサルヌクレオチドは、ヒポキサンチン（I）、キサンチン（X）、3β-D-リボフラノシル-（2,6-ジアミノピリミジン；K）、3-β-D-リボフラノシル-（1-メチルピラゾロ［4,3-d］ピリミジン-5,7（4H,6H）-ジオン；P）、イソシトシン（イソ-C）、イソグアニン（イソ-G）、1-β-D-リボフラノシル-（5-ニトロインドール）、1-β-D-リボフラノシル-（3-ニトロピロール）、5‐ブロモウラシル、2-アミノプリン、4-チオ-dT、7-（2-チエニル）-イミダゾ[4,5−b］ピリジン（Ds）およびピロール-2-カルバルデヒド（Pa）、2-アミノ-6-（2-チエニル）プリン（S）、2-オキソピリジン（Y）、ジフルオロトリル、4-フルオロ-6-ベンズイミダゾール、4-メチルベンズイミダゾール、3-メチルイソカルボスチリリル、5-メチルイソカルボスチリリルおよび3-メチル-7-プロピニルイソカルボスチリリル、7-アザインドリル、6-メチル-7-アザインドリル、イミダゾピリジニル、9-メチル-イミダゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、7-プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル-7-アザインドリル、2,4,5-トリメチルフェニル、4-メチルインドリル、4,6-ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびこれらの構造的な誘導体からなる群より選択される塩基類似体を含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１７】
請求項112〜116のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、参照dsRNAのアンチセンス鎖と比較して、Ago2／RISCによる標的RNAの切断を増強する、単離されたdsRNA。
【請求項１１８】
請求項89〜94、96〜116のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、3'オーバーハングにおける全ての位置にて修飾ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１１９】
請求項89〜118のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の3'末端からの位置1、2および3にて修飾ヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１２０】
請求項89〜119のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、領域B*において交互の位置にて修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１２１】
請求項89〜120に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、領域B*において交互の対の位置にて、修飾されたヌクレオチドを含む、単離されたdsRNA。
【請求項１２２】
請求項118〜121のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾を有するリボヌクレオチドである、単離されたdsRNA。
【請求項１２３】
請求項89〜122のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の長さの少なくとも19ヌクレオチドに沿って標的RNAに対して二重鎖形成する、単離されたdsRNA。
【請求項１２４】
請求項89〜123のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAであって、前記dsRNAは、哺乳動物細胞に導入されたときに、参照dsRNAと比較して標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
【請求項１２５】
細胞における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
細胞を、参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項89〜124のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAと接触させることを含む、方法。
【請求項１２６】
動物における標的遺伝子の発現を減少させるための方法であって：
動物を、参照dsRNAと比較して動物の細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項89〜124のいずれか1項に記載の単離された二重鎖RNA（dsRNA）で処理することを含む、方法。
【請求項１２７】
参照dsRNAと比較して細胞における標的遺伝子の発現を減少させるのに有効な量の請求項89〜124のいずれか1項に記載の単離されたdsRNAを含む、被験体の細胞における標的遺伝子の減少の発現のための医薬組成物。
【請求項１２８】
請求項89〜124のいずれか1項に記載の二重鎖RNA（dsRNA）を合成する方法であって、前記dsRNAを化学的にまたは酵素的に合成することを含む、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１３Ｄ】
【図１３Ｅ】
【図１３Ｆ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１３Ｄ】
【図１３Ｅ】
【図１３Ｆ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【公表番号】特表２０１２−５０４３８９（Ｐ２０１２−５０４３８９Ａ）
【公表日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２７８２３（Ｐ２０１１−５２７８２３）
【出願日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００５２１４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３３２２５
【国際公開日】平成２２年３月２５日（２０１０．３．２５）
【出願人】（５１１０７２７４７）ダイセルナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (6)
【氏名又は名称原語表記】ＤＩＣＥＲＮＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００５２１４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３３２２５
【国際公開日】平成２２年３月２５日（２０１０．３．２５）
【出願人】（５１１０７２７４７）ダイセルナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (6)
【氏名又は名称原語表記】ＤＩＣＥＲＮＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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