免疫力評価方法、装置、及びプログラム
【課題】総合的な免疫力を高精度に評価できる免疫力評価方法、装置、及びプログラムを提供すること。
【解決手段】採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価方法は、採取した血液における、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、前記特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する。
【解決手段】採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価方法は、採取した血液における、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、前記特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、採取した血液から免疫力を評価する免疫評価方法、装置、及びプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
血液中のリンパ球は免疫力を担当する中心的細胞であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）等、機能の異なる細胞（亜集団）からなっている。また、Ｔ細胞も一様ではなく、機能的に互いに異なるＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞と呼ばれる亜集団からなる。
【０００３】
これら細胞はそれぞれ特異な表面タンパク質（抗原）を有する。そこで従来、これら抗原に対するモノクローナル抗体を用いて染色し、フローサイトメトリにより特定の細胞の数や割合を測定していた。また、培養条件下で、各リンパ球の増殖能力や増殖に関わるタンパク質（サイトカイン）を測定することで、機能測定を行っている。そして、このような方法により、リンパ球の亜集団の構成やそれらの機能が、加齢により変動あるいは低下することを、本願の発明者らは明らかにしている（特許文献１、非特許文献１、２参照）。
【特許文献１】ＷＯ２００７／１４５３３３号パンフレット
【非特許文献１】Ｕｔｓｕｙａｍａ Ｍ， Ｈｉｒｏｋａｗａ Ｋ， Ｋｕｒａｓｈｉｍａ Ｃ， Ｆｕｋａｙａｍａ Ｍ， Ｉｎａｍａｔｓｕ Ｔ， Ｓｕｚｕｋｉ Ｋ， Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｗ ａｎｄ Ｓａｔｏ Ｋ．共著，「Ｄｉｆｆｒｅｎｔｉａｌ ａｇｅ−ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ａｎｄ ＣＤ４＋ＣＤ２９＋Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ．」， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｇｅｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， １９９２年３月１５日６３巻１号ｐ．５７−６８
【非特許文献２】廣川勝▲いく▼，「老化と免疫」，日本老年医学会誌，２００３年１１月４０巻６号ｐ．５４３−５５２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、これら文献に示される個々のパラメータは、各亜集団の比率や機能を示すものではあるが、必ずしもヒトの総合的な免疫力を高精度に反映するものではない。
【０００５】
本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、総合的な免疫力を高精度に評価できる免疫力評価方法、装置、及びプログラムを提供することを第１の目的とする。また、本発明は、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価できる免疫力評価方法、装置、及びプログラムを提供することを第２の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、驚くべきことに、ＣＤ８陽性細胞（キラーＴ細胞）を構成するＣＤ２８陽性Ｔ細胞の数又は割合が総合的な免疫力を高精度に反映することを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、本発明は以下のようなものを提供する。
【０００７】
（１） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液における、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、
前記特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する免疫力評価方法。
【０００８】
（１）の発明によれば、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いたので、算出されるＴリンパ球年齢を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【０００９】
また、年齢との相関性に優れるＴ細胞増殖係数（特許文献１参照）を求めるには、Ｔ細胞増殖能を計測するべくリンパ球の培養が不可欠であり、結果的に３日以上の長時間が要される。しかし、特定Ｔ細胞の数の計測の際、培養等の長時間を費やす工程を行う必要は少ないため、（１）の発明によれば、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価することもできる。
【００１０】
なお、本明細書における「Ｔリンパ球年齢」とは、本発明者らによる先行特許出願（ＰＣＴ／ＪＰ２００７／０６２１５８）に開示される「免疫力年齢」と同じく、ヒトの総合的な免疫機能レベルを判定評価するマーカーである。ただし、「Ｔリンパ球年齢」は、Ｔ細胞の中の特定Ｔ細胞の数等を測定することで算出される点で、Ｔ細胞増殖係数から算出される「免疫力年齢」とは異なる。
【００１１】
（２） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１）記載の免疫力評価方法。
【００１２】
Ｔ細胞数、ＣＤ８陽性Ｔ細胞数、及びＣＤ２８陽性Ｔ細胞数は、いずれも加齢とともに減少する傾向があることが知られている。（２）の発明によれば、このように同様の傾向を有する３条件（ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性であるＴ細胞）を満たすものを特定Ｔ細胞として採用したので、より相関係数の高い回帰式が得られ、結果的に総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００１３】
（３） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１）又は（２）記載の免疫力評価方法。
【００１４】
（３）の発明によれば、特定パラメータとして特定Ｔ細胞の数及び／又は特定Ｔ細胞数の割合を採用したので、総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００１５】
（４） 前記算出手順は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める手順を有する（１）から（３）いずれか記載の免疫力評価方法。
【００１６】
（４）の発明によれば、Ｔリンパ球年齢がある程度の幅を有する推定範囲として算出されるので、免疫力を容易に把握できる。
【００１７】
（５） 免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手順と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手順と、を有し、
前記算出手順では、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価方法。
【００１８】
（５）の発明によれば、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いたので、算出される評価値を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００１９】
また、特定Ｔ細胞の数の計測の際、培養等の長時間を費やす工程を行う必要は少ないため、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価することもできる。
【００２０】
（６） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（５）記載の免疫力評価方法。
【００２１】
（６）の発明によれば、特定Ｔ細胞としてＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞を採用したので、総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００２２】
（７） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（５）又は（６）記載の免疫力評価方法。
【００２３】
（７）の発明によれば、特定パラメータとして特定Ｔ細胞の数及び／又は特定Ｔ細胞数の割合を採用したので、総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００２４】
（８） 前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する（５）から（７）いずれか記載の免疫力評価方法。
【００２５】
（８）の発明によれば、特定パラメータ以外のマーカーを併用したので、評価値が免疫力をより多面的に反映したものになる。このため、より総合的な免疫力を評価できる。
【００２６】
（９） 前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する（８）記載の免疫力評価方法。
【００２７】
（９）の発明によれば、年齢との相関性に優れるＴ細胞増殖係数を併用したので、より総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００２８】
（１０） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記記憶手段に記憶された回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段とを備える免疫力評価装置。
【００２９】
（１１） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１０）記載の免疫力評価装置。
【００３０】
（１２） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１０）又は（１１）記載の免疫力評価装置。
【００３１】
（１３） 前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める推定範囲算出手段を有する（１０）から（１２）いずれか記載の免疫力評価方法。
【００３２】
（１４） 免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、を備え、
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価装置。
【００３３】
（１５） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１４）記載の免疫力評価装置。
【００３４】
（１６） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１４）又は（１５）記載の免疫力評価装置。
【００３５】
（１７） 前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する（１４）から（１６）いずれか記載の免疫力評価装置。
【００３６】
（１８） 前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する（１７）記載の免疫力評価装置。
【００３７】
（１９） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段として機能させるための免疫力評価プログラム。
【００３８】
（２０） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１９）記載の免疫力評価プログラム。
【００３９】
（２１） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１９）又は（２０）記載の免疫力評価プログラム。
【００４０】
（２２） 前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める（１９）から（２１）いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【００４１】
（２３） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、して機能させ、
前記算出手段には、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いさせる免疫力評価プログラム。
【００４２】
（２４） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（２３）記載の免疫力評価プログラム。
【００４３】
（２５） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（２３）又は（２４）記載の免疫力評価プログラム。
【００４４】
（２６） 前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する（２３）から（２５）いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【００４５】
（２７） 前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する（２６）記載の免疫力評価プログラム。
【発明の効果】
【００４６】
本発明によれば、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いたので、算出されるＴリンパ球年齢を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００４７】
また、年齢との相関性に優れるＴ細胞増殖係数（特許文献１参照）を求めるには、Ｔ細胞増殖能を計測するべくリンパ球の培養が不可欠であり、結果的に３日以上の長時間が要される。しかし、特定Ｔ細胞の数の計測の際、培養等の長時間を費やす工程を行う必要は少ないため、本発明によれば、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価することもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
本発明の一実施形態について、図面を参照して説明する。
【００４９】
［ハードウェア構成］
図１は本発明の一実施形態に係る免疫力評価装置１のブロック図であり、図２はコンピュータ本体２０のブロック図である。
【００５０】
図１に示されるように、免疫力評価装置１は、入力部１０、コンピュータ本体２０、記憶部としての外部記憶装置３０、及び表示部４０を備える。入力部１０は、免疫力の評価を受ける者（血液を採取された者）の関連情報、後述する特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値、健常者の関連情報等を入力できるキーボードやマウス等を有する。免疫力の評価を受ける者の関連情報としては、免疫力の評価を受ける者の氏名、住所、性別、実年齢、既往症、及び現症等が挙げられる。
【００５１】
コンピュータ本体２０は、ＣＰＵ（中央処理ユニット）２１の他に、メインメモリ２２、及び外部回路と接続するためのインターフェース回路（図示せず）等を備える。
【００５２】
外部記憶装置３０は、例えばハードディスク装置である。かかる外部記憶装置３０には、後述する免疫力評価プログラムとともにデータベース５０及び評価テーブル８０等が記憶されていて、その内容が必要に応じてコンピュータ本体２０のメインメモリ２２に読み出されて実行される。
【００５３】
データベース５０は、複数の免疫細胞に対応する所定の基準値となる健常者の特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値と、健常者の関連情報とを対応させたデータを記憶し、新たな健常者の特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値を入力部１０から逐次追加して記憶できる構造を有する。ここで、健常者とは、一般的な健康診断において特別な異常が認められなかった者を指し、健常者の関連情報とは、健常者の氏名、住所、性別、実年齢、体重や身長等の身体値、及び特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値等を指す。
【００５４】
［機能構成］
以上のハードウェア構成に記憶された免疫力評価プログラムによって、コンピュータ本体２０は、特定パラメータと年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段として機能させられる。
【００５５】
より具体的に、本実施形態に係るプログラムは、図２に示すように、コンピュータ本体２０を、特定パラメータの予測値算出手段６７、特定パラメータの残差算出手段６８、並びに特定パラメータに基づくランク判定及びＴリンパ球年齢算出手段６９として機能させる。各機能の詳細は、後述する。
【００５６】
［免疫力評価方法］
（第１態様）
本態様に係る免疫力評価方法は、採取した血液における特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する。ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いることで、算出されるＴリンパ球年齢を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００５７】
計測手順は、採取した末梢血液についてフローサイトメトリ解析を行うことで達成してよい。
【００５８】
（フローサイトメトリ解析）
採取した末梢血に基づいて、フローサイトメトリ解析を行う。
１．末梢血５０（μＬ）を試験管に分注する。
２．蛍光標識抗体溶液を試験管に添加する。
３．３０分間、暗所に放置する。
４．赤血球溶血剤２（ｍｌ）を添加し攪拌した後、１０分間放置して赤血球を溶血させる。
５．ＰＢＳ溶液３（ｍｌ）を加えて１２００（ｒｐｍ）で５分間の遠心分離を行う。
６．上清を吸引除去する。
７．ＰＢＳ溶液５００（μＬ）を加えて、細胞を再浮遊させることによって細胞浮遊液を調製する。
８．フローサイトメーターにて蛍光標識抗体陽性細胞率を機器専用ソフトによって算出する。
【００５９】
上記フローサイトメトリで用いる蛍光標識抗体は適宜選択されてよく、例えばＰＥ−ＣＤ３／ＦＩＴＣ−ＣＤ８／ＰＣ５−ＣＤ２８であってよい。この場合、ＦＩＴＣ、ＰＥ及びＰＣ５のいずれの蛍光も検出される細胞はＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞であると判定でき、ＦＩＴＣ及びＰＥの蛍光が検出され且つＰＣ５の蛍光が検出されない細胞はＣＤ８陽性且つＣＤ２８陰性のＴ細胞であると判定できる。
【００６０】
ここで、特定Ｔ細胞としては、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞と、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陰性Ｔ細胞とが挙げられる。Ｔ細胞数、ＣＤ８陽性Ｔ細胞数、及びＣＤ２８陽性Ｔ細胞数は、いずれも加齢とともに減少する傾向があることが知られている。（２）の発明によれば、このように同様の傾向を有する３条件（ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性であるＴ細胞）を満たすものを特定Ｔ細胞として採用したので、より相関係数の高い回帰式が得られ、結果的に総合的な免疫力をより高精度に評価できる。従って、総合的な免疫力をより高精度に評価できる点で、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞が好ましい。
【００６１】
算出手順では、特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める。ここで、特定パラメータは、特定Ｔ細胞数に依存する変数である限りにおいて特に限定されず、特定Ｔ細胞数そのものであっても、なくてもよい。ただし、特定パラメータは、総合的な免疫力をより高精度に評価できる点で、所定量血液あたりの特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００６２】
ＣＤ８陽性細胞数に対する特定Ｔ細胞数の割合と、年齢との相関関係に基づいた回帰式を、健常人約３００人から得たデータに基づいて作成し、図３に示す。なお、図３における特定Ｔ細胞はＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞であり、上記割合をＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率と称する。図３に示される回帰式は、ｙ＝−０．４７ｘ＋８２．８（式中、ｘは年齢、ｙはＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．４３）を有していた。
【００６３】
また、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率と、Ｔ細胞増殖能との相関関係に基づいた回帰式を、健常人約３００人から得たデータに基づいて作成し、図４に示す。なお、Ｔ細胞増殖能は次の手順に従って算出した。
【００６４】
Ｔ細胞増殖係数を算出する場合には、次の手順を行ってよい。
【００６５】
（単核細胞の回収）
１．ＣＰＴ単核球分離用真空採血管（ＢＤ社：８３６２７６１）に８ｍＬを採血する。
２．室温において、３０００（ｒｐｍ）、２０分間の遠心分離をする。
３．遠心分離によって得られたリンパ球層を回収する。
４．回収したリンパ球層に生理食塩水を加える。
５．室温において、１５００（ｒｐｍ）、１０分間の遠心分離を行う。
６．上清を捨て、再度生理食塩水を加える。
７．室温において、１２００（ｒｐｍ）、５分間の遠心分離を行う。
８．上清を捨て、細胞培養液（ＲＰＭＩ−１６４０）を加えて細胞浮遊液とする。
９．細胞濃度を測定する（０．２％ Ｔｒｙｐａｎｂｌｕｅ液使用）。
１０．細胞濃度を１×１０６／ｍＬに細胞培養液にて調整する。
【００６６】
（抗ＣＤ３抗体刺激）
抗ＣＤ３抗体で９６穴プレートをコーティングする。
１．Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３溶液（ＯＲＴＨＯＢＩＯＴＥＣＨ：６７２９９３４０２）３０（μＬ）を、生理食塩水１０（ｍＬ）の割合で希釈する。
２．ＯＫＴ３希釈溶液を９６穴プレートに１００（μｌ／ｗｅｌｌ）を入れる。
３．室温にて２時間の静置を行う。
４．ＯＫＴ３希釈溶液を吸引して廃棄し、生理食塩水を９６穴プレートに２００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れる。
５．生理食塩水を吸引して廃棄し、再度、生理食塩水を９６穴プレートに２００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れる。
６．この操作を計５回繰返す。
７．生理食塩水を９６穴プレートに２００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れ使用時まで冷蔵保管する。
【００６７】
（ＭＴＳ法によるＴ細胞増殖能解析）
１．準備した上記抗ＣＤ３抗体コーティングした９６穴プレートに１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１００（μＬ／ｗｅｌｌ）、１×１０６／ｍＬの細胞浮遊液１００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れる。各サンプルにつき３穴使用する。
２．５％炭酸ガス−３７℃条件の細胞培養器にて培養する。
３．培養６８時間の時点で、ＭＴＳ溶液を４０（μＬ／ｗｅｌｌ）添加する。
４．培養７２時間の時点で、比色計（４９０ｎｍ）で測定する。
これにより、上記のＴ細胞増殖能が算出される。
【００６８】
図４に示される回帰式は、ｙ＝２８．３ｘ＋２０．０（式中、ｘはＴ細胞増殖能、ｙはＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．４６）を有していた。Ｔ細胞増殖能は年齢との相関性に優れるパラメータの１種である（特許文献１参照）ことから、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率が免疫力を高精度に反映したものであることが再確認される。また、Ｔ細胞増殖能及び後述のＴ細胞増殖係数の計測には、上記のような７２時間にも亘る細胞培養が必要であるが、特定Ｔ細胞数の計測にはかかる細胞培養の必要がなく、簡便に完了できる。
【００６９】
次に、図３に示す回帰式に各年齢を入力し、各年齢におけるＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の予測値を求め、得られた予測値と検査値との差を求め、残差を求める。つまり、残差は、検査値（ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率）−予測値（回帰式より得られる値）なる式に基づいて求められる。
【００７０】
次に、Ｔリンパ球年齢を算出する。計算式によるＴリンパ球年齢（計算値年齢）は、前述した回帰式を変換した下式に被検者のＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の検査値を代入することにより、求められる。
計算値年齢＝（検査値−８２．８）／０．４７
【００７１】
同様に、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞の数と、年齢との相関関係に基づいた回帰式を、健常人約３００人から得たデータに基づいて作成し、図５に示す。なお、所定量は、図５では１μＬであるが、これに限られず任意の量であってよい。図５に示される回帰式は、ｙ＝４．８７ｘ＋５２３（式中、ｘは年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．５０）を有していた。
【００７２】
ここで、健常人約３００人から得たデータを、被験者の性別で分類した結果を図６に示す。図６（ａ）に示す男性年齢と、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数との回帰式は、ｙ＝−６．０８９ｘ＋５９７．０（式中、ｘは男性年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である。また、Ｒは０．５４３である。）である一方、図６（ｂ）に示す女性年齢と、所定量血液あたりの特定Ｔ細胞の数との回帰式は、ｙ＝−４．１３６ｘ＋４７６．９（式中、ｘは女性年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である。また、Ｒは０．４７７である。）であった。この結果は、女性の方が男性よりも加齢に伴う免疫力低下が緩やかであることを指すところ、女性が男性よりも長寿であるという事実を正確に反映している。
【００７３】
また、健常人約３００人それぞれのＴ細胞増殖係数（ＴＣＰＩ）と、１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数との回帰式を求め、この結果を図７に示す。なお、Ｔ細胞増殖係数は、年齢との相関性に優れ、免疫力を高精度に反映するパラメータであることが知られている（特許文献１参照）。具体的にＴ細胞増殖係数は、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能を掛け合わせたものであり、例えば次の式で求めることができる。
Ｔ細胞数増殖係数＝ＯＤ（４９０ｎｍ）×（末梢血中Ｔ細胞数（μＬ当たり））／１０００
【００７４】
図７に示される回帰式は、ｙ＝１２５．７ｘ＋１６．４（式中、ｘはＴ細胞増殖係数、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．６９）を有していた。このことからも、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数という特定パラメータの優位性が明らかである。
【００７５】
これに対して、所定量血液あたりのＣＤ８陽性Ｔ細胞数又はＣＤ４陽性Ｔ細胞数と、Ｔ細胞増殖能との回帰式は、図８に示す通りである。図８（ａ）に示される回帰式は、ｙ＝５５．９ｘ＋５４６（式中、ｘはＴ細胞増殖能、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、相関係数が極めて低かった（Ｒ＝０．０６）。また、図８（ｂ）に示される回帰式は、ｙ＝１７９．８ｘ＋６３９（式中、ｘはＴ細胞増殖能、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ４陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、相関係数が低かった（Ｒ＝０．１５）。これにより、所定量血液あたりのＣＤ８陽性Ｔ細胞数又はＣＤ４陽性Ｔ細胞数というパラメータは、免疫力の反映の程度が低いことが明らかになった。
【００７６】
また、ＣＤ８陽性Ｔ細胞数におけるＣＤ２８陰性Ｔ細胞数の比率、又は所定量血液あたりのＣＤ８陽性ＣＤ２８陰性Ｔ細胞数と、Ｔ細胞増殖能との回帰式は、図９及び１０に示す通りである。図９に示される回帰式は、ｙ＝０．４７ｘ＋８２．８（式中、ｘは年齢、ｙはＣＤ８陽性Ｔ細胞数におけるＣＤ２８陰性Ｔ細胞数の比率の予測値である）であり、高い相関係数を有していた（Ｒ＝０．４３）。図１０に示される回帰式は、ｙ＝０．４７ｘ＋８２．８（式中、ｘは年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ４陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、相関係数は低かった（Ｒ＝０．０５）。このように、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陰性Ｔ細胞数という特定パラメータは、非特定パラメータよりも優れるものの、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数には劣る。
【００７７】
次に、図５に示す回帰式に各年齢を入力し、各年齢のおける１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞の予測値を求め、得られた予測値と検査値との差を求め、残差を求める。つまり、残差は、検査値（１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞）−予測値（回帰式より得られる値）なる式に基づいて求められる。
【００７８】
次に、Ｔリンパ球年齢を算出する。計算式によるＴリンパ球年齢（計算値年齢）は、前述した回帰式を変換した下式に被検者の１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞の検査値を代入することにより、求められる。
計算値年齢＝（５２３−検査値）／４．８７
【００７９】
しかし、このようにして得られる計算値年齢は推定値であり、実用的には、ある程度の幅をもって表す方が実際に則している。そこで、次に示すように、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率又は１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞の検査値と、それらの予測値との差である残差が正規分布を示すことから、Ｔリンパ球年齢の幅を定める。
【００８０】
被検者の実年齢から得られる予測値と検査値との差、即ち残差が正規分布を示すので、残差の標準偏差を下式から求めることができる。
【数１】
【００８１】
得られた残差の標準偏差ＳＤに基づいて、年齢表現の範囲を、図１３に示すように、±０．５ＳＤ、±１．ＯＳＤ、±１，５ＳＤ、±２．ＯＳＤといったように区切る。この場合、残差は、±４５（０．５ＳＤ）、±９０（１．ＯＳＤ）、±１３５（１．５ＳＤ）、±１８０（２．ＯＳＤ）である。
【００８２】
これらの標準偏差を基にした残差から被険者の実年齢とＴリンパ球年齢との隔たりを計算する。まず、計算値年齢を前述の式から求め、実年齢との差を見ると、いずれの年齢においても標準偏差から求められる値は略同じであり、±０．５ＳＤは各年齢±約１５歳であり、±１．０ＳＤは±約３０歳であり、±１．５ＳＤは±約４５歳であり、±２．ＯＳＤは±約６０歳であり、±２．ＯＳＤ以上は±約６０歳以上である。
【００８３】
Ｔリンパ球年齢が実際の年齢の値に対応するよう、約１７〜約９９歳で評価を行うことができるように設定するため、以上のようにして得られた計算値年齢と実年齢との差を２０％とし表現形年齢とする。即ち、表現形年齢を、次式から求める。
表現形年齢＝実年齢＋（計算値年齢−実年齢）×０．２
【００８４】
免疫力評価装置１は、上記の免疫力評価プログラムによって、次の手順を実行する。
（１）入力された実年齢を、予め求めて記録されている回帰式に代入して特定パラメータの予測値を算出する手順（特定パラメータの予測値算出手段６７）。
（２）入力された特定パラメータの検査値と予測値とから特定パラメータの残差を算出する手順（特定パラメータの残差算出手段６８）。
（３）得られた残差から、ランク判定及びＴリンパ球年齢を算出する手順（ランク判定及びＴリンパ球年齢算出手段６９）。
【００８５】
図１１は、入力部１０に入力された特定パラメータの検査値及び実年齢に基づいて、コンピュータ本体２０が行う免疫力の評価処理の例を説明するフローチャートである。
【００８６】
まず、免疫力の評価を受ける者の住所、氏名、実年齢、性別、既往症、現症、等の関連情報、並びに特定パラメータ値等を入力部１０から入力し、エンターキーを押下操作する（Ｓ３１）。次に、入力された実年齢を、予め求めて記録されている回帰式に代入して特定パラメータの予測値を算出する（Ｓ３２）。
【００８７】
Ｓ３２で得た予測値と、入力された特定パラメータの検査値とから残差を算出する（Ｓ３３）。得られた残差、つまり予測値及び検査値から、図１２に示されるような検査値のランクＡ〜Ｉを判定すると共に、Ｔリンパ球年齢を求める（Ｓ３４）。即ち、評価テーブル８０には、図１２に示すような、特定パラメータの検査値及び予測値に対する免疫評価ランク及びＴリンパ球年齢の評価表が格納されており、Ｓ３４では、この評価表から検査値及び予測値に基づいてランク判定を行い、Ｔリンパ球年齢を算出する。なお、図１２のＴリンパ球年齢において、最若年齢は１７〜２０歳とし、最高年齢は９６〜９９歳とする。
【００８８】
以上の評価結果を表示部４０に表示し（Ｓ３５）、処理を終了する。評価内容としては、「被験者の実年齢を含む関連情報」、「特定パラメータの検査値」、「特定パラメータの予測値」、「残差」、「免疫評価ランク」及び「Ｔリンパ球年齢」等が挙げられる。なお、手順自体の詳細は、特許文献１を参照してよい。
【００８９】
（第２態様）
本態様に係る免疫力評価方法は、採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手順と、評価値から免疫力を評価する評価手順と、を有し、算出手順では、免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる。ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いることで、算出される評価値を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００９０】
第１態様と同様に、特定Ｔ細胞としては、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞を用いることが好ましく、特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００９１】
ここで「免疫細胞マーカー」は、採取された血液に含まれる複数の免疫細胞に対応するものである。免疫細胞マーカーとしては、特定パラメータを含む限りにおいて特に限定されない。年齢との相関性に優れる点では、単位血液量当たりのＴ細胞数、Ｔ細胞増殖係数、ＣＤ４Ｔ細胞／ＣＤ８Ｔ細胞比率、単位血液量当たりのナイーブＴ細胞数、ナイーブＴ細胞／メモリーＴ細胞比率、単位血液量当たりのＢ細胞数、及び単位血液量当たりのＮＫ（ナチュラルキラー）細胞数からなる群より選ばれる１種以上を併用することが好ましく、特にＴ細胞増殖係数を併用することが好ましい。なお、各マーカーの計測手順は、特許文献１を参照してよい。
【００９２】
免疫細胞マーカーとして特定パラメータ以外のものを併用する場合には、かかる免疫細胞マーカーの組み合わせは、被験者の疾病に対応したもの（その疾病に罹患することで大きく変動する傾向が強いマーカー）にしてもよいし、実年齢に対応したもの（加齢に応じて大きく変動する傾向が強いマーカー）にしてもよい。
【００９３】
各免疫細胞マーカーに基づく評価値は、計測値そのものであってもよいし、計測値が点数化されたものでもよい。計測値の点数化の一例では、健常者の免疫細胞マーカーの値を、累積度数１０（％）未満の範囲、累積度数１０（％）以上４０（％）未満の範囲、及び累積度数４０（％）以上の範囲からなる３つの段階に区分し、免疫力の高い区分から低い区分に向けて次第に小さな点数を割り当てる。このような累積度数に基づいて３つの段階に区分することにより、点数化を的確に行うことができる。
【００９４】
具体的には、累積度数１０（％）の値及び累積度数４０（％）の値を基準として、累積度数１０（％）以下であれば１（点）、累積度数１０（％）の値と累積度数４０（％）の値との間であれば２（点）、累積度数４０（％）の値を超えていれば３（点）を割り当てる。つまり、健常者の値について累積度数１０（％）未満の範囲を免疫力が低いレベルを示す１（点）とし、累積度数１０（％）以上４０（％）未満の範囲を免疫力が中等度のレベルを示す２（点）とし、累積度数４０（％）以上の範囲を免疫力が充分に高いレベルを示す３（点）とする。
【００９５】
本態様では、３つの区分にそれぞれ１、２、３（点）をそれぞれ割り当てたが、これに限るものではなく、免疫力が高いレベルには対応する高い点数を、また、低いレベルには対応する低い点数を割り当てればよい。なお、上記した累積度数１０（％）、累積度数４０（％）は、データベース５０に蓄積される健常者数の増加に伴って若干変動する。
【００９６】
このようにして得られる評価値は、レーダーグラフ等として表示して個別に比較検討してもよいし、特許文献１に示されるような手順で合算してもよい。
【００９７】
なお、本発明は前記実施形態に限定されるものではなく、本発明の目的を達成できる範囲での変形、改良等は本発明に含まれるものである。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】本発明の一実施形態に係る免疫力評価装置のブロック図である。
【図２】図１の免疫力評価装置を構成するコンピュータ本体のブロック図である。
【図３】本発明の一実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図４】本発明の一実施形態に係る特定パラメータと、Ｔ細胞増殖能との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図５】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図６】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、各性別健常者の年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図７】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、Ｔ細胞増殖係数との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図８】比較例に係るパラメータと、Ｔ細胞増殖能との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図９】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図１０】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図１１】図２のコンピュータ本体が行う免疫力の評価処理を示すフローチャートである。
【図１２】本発明の一実施形態に係る特定パラメータの検査値及び予測値に対する免疫評価ランク及びＴリンパ球年齢の評価表である。
【図１３】年齢表現の範囲の区切りの一例を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、採取した血液から免疫力を評価する免疫評価方法、装置、及びプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
血液中のリンパ球は免疫力を担当する中心的細胞であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）等、機能の異なる細胞（亜集団）からなっている。また、Ｔ細胞も一様ではなく、機能的に互いに異なるＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞と呼ばれる亜集団からなる。
【０００３】
これら細胞はそれぞれ特異な表面タンパク質（抗原）を有する。そこで従来、これら抗原に対するモノクローナル抗体を用いて染色し、フローサイトメトリにより特定の細胞の数や割合を測定していた。また、培養条件下で、各リンパ球の増殖能力や増殖に関わるタンパク質（サイトカイン）を測定することで、機能測定を行っている。そして、このような方法により、リンパ球の亜集団の構成やそれらの機能が、加齢により変動あるいは低下することを、本願の発明者らは明らかにしている（特許文献１、非特許文献１、２参照）。
【特許文献１】ＷＯ２００７／１４５３３３号パンフレット
【非特許文献１】Ｕｔｓｕｙａｍａ Ｍ， Ｈｉｒｏｋａｗａ Ｋ， Ｋｕｒａｓｈｉｍａ Ｃ， Ｆｕｋａｙａｍａ Ｍ， Ｉｎａｍａｔｓｕ Ｔ， Ｓｕｚｕｋｉ Ｋ， Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｗ ａｎｄ Ｓａｔｏ Ｋ．共著，「Ｄｉｆｆｒｅｎｔｉａｌ ａｇｅ−ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ａｎｄ ＣＤ４＋ＣＤ２９＋Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ．」， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｇｅｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， １９９２年３月１５日６３巻１号ｐ．５７−６８
【非特許文献２】廣川勝▲いく▼，「老化と免疫」，日本老年医学会誌，２００３年１１月４０巻６号ｐ．５４３−５５２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、これら文献に示される個々のパラメータは、各亜集団の比率や機能を示すものではあるが、必ずしもヒトの総合的な免疫力を高精度に反映するものではない。
【０００５】
本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、総合的な免疫力を高精度に評価できる免疫力評価方法、装置、及びプログラムを提供することを第１の目的とする。また、本発明は、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価できる免疫力評価方法、装置、及びプログラムを提供することを第２の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、驚くべきことに、ＣＤ８陽性細胞（キラーＴ細胞）を構成するＣＤ２８陽性Ｔ細胞の数又は割合が総合的な免疫力を高精度に反映することを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、本発明は以下のようなものを提供する。
【０００７】
（１） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液における、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、
前記特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する免疫力評価方法。
【０００８】
（１）の発明によれば、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いたので、算出されるＴリンパ球年齢を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【０００９】
また、年齢との相関性に優れるＴ細胞増殖係数（特許文献１参照）を求めるには、Ｔ細胞増殖能を計測するべくリンパ球の培養が不可欠であり、結果的に３日以上の長時間が要される。しかし、特定Ｔ細胞の数の計測の際、培養等の長時間を費やす工程を行う必要は少ないため、（１）の発明によれば、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価することもできる。
【００１０】
なお、本明細書における「Ｔリンパ球年齢」とは、本発明者らによる先行特許出願（ＰＣＴ／ＪＰ２００７／０６２１５８）に開示される「免疫力年齢」と同じく、ヒトの総合的な免疫機能レベルを判定評価するマーカーである。ただし、「Ｔリンパ球年齢」は、Ｔ細胞の中の特定Ｔ細胞の数等を測定することで算出される点で、Ｔ細胞増殖係数から算出される「免疫力年齢」とは異なる。
【００１１】
（２） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１）記載の免疫力評価方法。
【００１２】
Ｔ細胞数、ＣＤ８陽性Ｔ細胞数、及びＣＤ２８陽性Ｔ細胞数は、いずれも加齢とともに減少する傾向があることが知られている。（２）の発明によれば、このように同様の傾向を有する３条件（ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性であるＴ細胞）を満たすものを特定Ｔ細胞として採用したので、より相関係数の高い回帰式が得られ、結果的に総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００１３】
（３） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１）又は（２）記載の免疫力評価方法。
【００１４】
（３）の発明によれば、特定パラメータとして特定Ｔ細胞の数及び／又は特定Ｔ細胞数の割合を採用したので、総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００１５】
（４） 前記算出手順は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める手順を有する（１）から（３）いずれか記載の免疫力評価方法。
【００１６】
（４）の発明によれば、Ｔリンパ球年齢がある程度の幅を有する推定範囲として算出されるので、免疫力を容易に把握できる。
【００１７】
（５） 免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手順と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手順と、を有し、
前記算出手順では、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価方法。
【００１８】
（５）の発明によれば、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いたので、算出される評価値を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００１９】
また、特定Ｔ細胞の数の計測の際、培養等の長時間を費やす工程を行う必要は少ないため、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価することもできる。
【００２０】
（６） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（５）記載の免疫力評価方法。
【００２１】
（６）の発明によれば、特定Ｔ細胞としてＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞を採用したので、総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００２２】
（７） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（５）又は（６）記載の免疫力評価方法。
【００２３】
（７）の発明によれば、特定パラメータとして特定Ｔ細胞の数及び／又は特定Ｔ細胞数の割合を採用したので、総合的な免疫力をより高精度に評価できる。
【００２４】
（８） 前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する（５）から（７）いずれか記載の免疫力評価方法。
【００２５】
（８）の発明によれば、特定パラメータ以外のマーカーを併用したので、評価値が免疫力をより多面的に反映したものになる。このため、より総合的な免疫力を評価できる。
【００２６】
（９） 前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する（８）記載の免疫力評価方法。
【００２７】
（９）の発明によれば、年齢との相関性に優れるＴ細胞増殖係数を併用したので、より総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００２８】
（１０） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記記憶手段に記憶された回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段とを備える免疫力評価装置。
【００２９】
（１１） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１０）記載の免疫力評価装置。
【００３０】
（１２） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１０）又は（１１）記載の免疫力評価装置。
【００３１】
（１３） 前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める推定範囲算出手段を有する（１０）から（１２）いずれか記載の免疫力評価方法。
【００３２】
（１４） 免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、を備え、
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価装置。
【００３３】
（１５） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１４）記載の免疫力評価装置。
【００３４】
（１６） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１４）又は（１５）記載の免疫力評価装置。
【００３５】
（１７） 前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する（１４）から（１６）いずれか記載の免疫力評価装置。
【００３６】
（１８） 前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する（１７）記載の免疫力評価装置。
【００３７】
（１９） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段として機能させるための免疫力評価プログラム。
【００３８】
（２０） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（１９）記載の免疫力評価プログラム。
【００３９】
（２１） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（１９）又は（２０）記載の免疫力評価プログラム。
【００４０】
（２２） 前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める（１９）から（２１）いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【００４１】
（２３） 採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、して機能させ、
前記算出手段には、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いさせる免疫力評価プログラム。
【００４２】
（２４） 前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である（２３）記載の免疫力評価プログラム。
【００４３】
（２５） 前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である（２３）又は（２４）記載の免疫力評価プログラム。
【００４４】
（２６） 前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する（２３）から（２５）いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【００４５】
（２７） 前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する（２６）記載の免疫力評価プログラム。
【発明の効果】
【００４６】
本発明によれば、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いたので、算出されるＴリンパ球年齢を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００４７】
また、年齢との相関性に優れるＴ細胞増殖係数（特許文献１参照）を求めるには、Ｔ細胞増殖能を計測するべくリンパ球の培養が不可欠であり、結果的に３日以上の長時間が要される。しかし、特定Ｔ細胞の数の計測の際、培養等の長時間を費やす工程を行う必要は少ないため、本発明によれば、総合的な免疫力を高精度且つ簡便に評価することもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
本発明の一実施形態について、図面を参照して説明する。
【００４９】
［ハードウェア構成］
図１は本発明の一実施形態に係る免疫力評価装置１のブロック図であり、図２はコンピュータ本体２０のブロック図である。
【００５０】
図１に示されるように、免疫力評価装置１は、入力部１０、コンピュータ本体２０、記憶部としての外部記憶装置３０、及び表示部４０を備える。入力部１０は、免疫力の評価を受ける者（血液を採取された者）の関連情報、後述する特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値、健常者の関連情報等を入力できるキーボードやマウス等を有する。免疫力の評価を受ける者の関連情報としては、免疫力の評価を受ける者の氏名、住所、性別、実年齢、既往症、及び現症等が挙げられる。
【００５１】
コンピュータ本体２０は、ＣＰＵ（中央処理ユニット）２１の他に、メインメモリ２２、及び外部回路と接続するためのインターフェース回路（図示せず）等を備える。
【００５２】
外部記憶装置３０は、例えばハードディスク装置である。かかる外部記憶装置３０には、後述する免疫力評価プログラムとともにデータベース５０及び評価テーブル８０等が記憶されていて、その内容が必要に応じてコンピュータ本体２０のメインメモリ２２に読み出されて実行される。
【００５３】
データベース５０は、複数の免疫細胞に対応する所定の基準値となる健常者の特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値と、健常者の関連情報とを対応させたデータを記憶し、新たな健常者の特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値を入力部１０から逐次追加して記憶できる構造を有する。ここで、健常者とは、一般的な健康診断において特別な異常が認められなかった者を指し、健常者の関連情報とは、健常者の氏名、住所、性別、実年齢、体重や身長等の身体値、及び特定パラメータ又は免疫細胞マーカーの値等を指す。
【００５４】
［機能構成］
以上のハードウェア構成に記憶された免疫力評価プログラムによって、コンピュータ本体２０は、特定パラメータと年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段として機能させられる。
【００５５】
より具体的に、本実施形態に係るプログラムは、図２に示すように、コンピュータ本体２０を、特定パラメータの予測値算出手段６７、特定パラメータの残差算出手段６８、並びに特定パラメータに基づくランク判定及びＴリンパ球年齢算出手段６９として機能させる。各機能の詳細は、後述する。
【００５６】
［免疫力評価方法］
（第１態様）
本態様に係る免疫力評価方法は、採取した血液における特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する。ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いることで、算出されるＴリンパ球年齢を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００５７】
計測手順は、採取した末梢血液についてフローサイトメトリ解析を行うことで達成してよい。
【００５８】
（フローサイトメトリ解析）
採取した末梢血に基づいて、フローサイトメトリ解析を行う。
１．末梢血５０（μＬ）を試験管に分注する。
２．蛍光標識抗体溶液を試験管に添加する。
３．３０分間、暗所に放置する。
４．赤血球溶血剤２（ｍｌ）を添加し攪拌した後、１０分間放置して赤血球を溶血させる。
５．ＰＢＳ溶液３（ｍｌ）を加えて１２００（ｒｐｍ）で５分間の遠心分離を行う。
６．上清を吸引除去する。
７．ＰＢＳ溶液５００（μＬ）を加えて、細胞を再浮遊させることによって細胞浮遊液を調製する。
８．フローサイトメーターにて蛍光標識抗体陽性細胞率を機器専用ソフトによって算出する。
【００５９】
上記フローサイトメトリで用いる蛍光標識抗体は適宜選択されてよく、例えばＰＥ−ＣＤ３／ＦＩＴＣ−ＣＤ８／ＰＣ５−ＣＤ２８であってよい。この場合、ＦＩＴＣ、ＰＥ及びＰＣ５のいずれの蛍光も検出される細胞はＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞であると判定でき、ＦＩＴＣ及びＰＥの蛍光が検出され且つＰＣ５の蛍光が検出されない細胞はＣＤ８陽性且つＣＤ２８陰性のＴ細胞であると判定できる。
【００６０】
ここで、特定Ｔ細胞としては、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞と、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陰性Ｔ細胞とが挙げられる。Ｔ細胞数、ＣＤ８陽性Ｔ細胞数、及びＣＤ２８陽性Ｔ細胞数は、いずれも加齢とともに減少する傾向があることが知られている。（２）の発明によれば、このように同様の傾向を有する３条件（ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性であるＴ細胞）を満たすものを特定Ｔ細胞として採用したので、より相関係数の高い回帰式が得られ、結果的に総合的な免疫力をより高精度に評価できる。従って、総合的な免疫力をより高精度に評価できる点で、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞が好ましい。
【００６１】
算出手順では、特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める。ここで、特定パラメータは、特定Ｔ細胞数に依存する変数である限りにおいて特に限定されず、特定Ｔ細胞数そのものであっても、なくてもよい。ただし、特定パラメータは、総合的な免疫力をより高精度に評価できる点で、所定量血液あたりの特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００６２】
ＣＤ８陽性細胞数に対する特定Ｔ細胞数の割合と、年齢との相関関係に基づいた回帰式を、健常人約３００人から得たデータに基づいて作成し、図３に示す。なお、図３における特定Ｔ細胞はＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞であり、上記割合をＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率と称する。図３に示される回帰式は、ｙ＝−０．４７ｘ＋８２．８（式中、ｘは年齢、ｙはＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．４３）を有していた。
【００６３】
また、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率と、Ｔ細胞増殖能との相関関係に基づいた回帰式を、健常人約３００人から得たデータに基づいて作成し、図４に示す。なお、Ｔ細胞増殖能は次の手順に従って算出した。
【００６４】
Ｔ細胞増殖係数を算出する場合には、次の手順を行ってよい。
【００６５】
（単核細胞の回収）
１．ＣＰＴ単核球分離用真空採血管（ＢＤ社：８３６２７６１）に８ｍＬを採血する。
２．室温において、３０００（ｒｐｍ）、２０分間の遠心分離をする。
３．遠心分離によって得られたリンパ球層を回収する。
４．回収したリンパ球層に生理食塩水を加える。
５．室温において、１５００（ｒｐｍ）、１０分間の遠心分離を行う。
６．上清を捨て、再度生理食塩水を加える。
７．室温において、１２００（ｒｐｍ）、５分間の遠心分離を行う。
８．上清を捨て、細胞培養液（ＲＰＭＩ−１６４０）を加えて細胞浮遊液とする。
９．細胞濃度を測定する（０．２％ Ｔｒｙｐａｎｂｌｕｅ液使用）。
１０．細胞濃度を１×１０６／ｍＬに細胞培養液にて調整する。
【００６６】
（抗ＣＤ３抗体刺激）
抗ＣＤ３抗体で９６穴プレートをコーティングする。
１．Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３溶液（ＯＲＴＨＯＢＩＯＴＥＣＨ：６７２９９３４０２）３０（μＬ）を、生理食塩水１０（ｍＬ）の割合で希釈する。
２．ＯＫＴ３希釈溶液を９６穴プレートに１００（μｌ／ｗｅｌｌ）を入れる。
３．室温にて２時間の静置を行う。
４．ＯＫＴ３希釈溶液を吸引して廃棄し、生理食塩水を９６穴プレートに２００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れる。
５．生理食塩水を吸引して廃棄し、再度、生理食塩水を９６穴プレートに２００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れる。
６．この操作を計５回繰返す。
７．生理食塩水を９６穴プレートに２００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れ使用時まで冷蔵保管する。
【００６７】
（ＭＴＳ法によるＴ細胞増殖能解析）
１．準備した上記抗ＣＤ３抗体コーティングした９６穴プレートに１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ１００（μＬ／ｗｅｌｌ）、１×１０６／ｍＬの細胞浮遊液１００（μＬ／ｗｅｌｌ）を入れる。各サンプルにつき３穴使用する。
２．５％炭酸ガス−３７℃条件の細胞培養器にて培養する。
３．培養６８時間の時点で、ＭＴＳ溶液を４０（μＬ／ｗｅｌｌ）添加する。
４．培養７２時間の時点で、比色計（４９０ｎｍ）で測定する。
これにより、上記のＴ細胞増殖能が算出される。
【００６８】
図４に示される回帰式は、ｙ＝２８．３ｘ＋２０．０（式中、ｘはＴ細胞増殖能、ｙはＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．４６）を有していた。Ｔ細胞増殖能は年齢との相関性に優れるパラメータの１種である（特許文献１参照）ことから、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率が免疫力を高精度に反映したものであることが再確認される。また、Ｔ細胞増殖能及び後述のＴ細胞増殖係数の計測には、上記のような７２時間にも亘る細胞培養が必要であるが、特定Ｔ細胞数の計測にはかかる細胞培養の必要がなく、簡便に完了できる。
【００６９】
次に、図３に示す回帰式に各年齢を入力し、各年齢におけるＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の予測値を求め、得られた予測値と検査値との差を求め、残差を求める。つまり、残差は、検査値（ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率）−予測値（回帰式より得られる値）なる式に基づいて求められる。
【００７０】
次に、Ｔリンパ球年齢を算出する。計算式によるＴリンパ球年齢（計算値年齢）は、前述した回帰式を変換した下式に被検者のＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率の検査値を代入することにより、求められる。
計算値年齢＝（検査値−８２．８）／０．４７
【００７１】
同様に、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞の数と、年齢との相関関係に基づいた回帰式を、健常人約３００人から得たデータに基づいて作成し、図５に示す。なお、所定量は、図５では１μＬであるが、これに限られず任意の量であってよい。図５に示される回帰式は、ｙ＝４．８７ｘ＋５２３（式中、ｘは年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．５０）を有していた。
【００７２】
ここで、健常人約３００人から得たデータを、被験者の性別で分類した結果を図６に示す。図６（ａ）に示す男性年齢と、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数との回帰式は、ｙ＝−６．０８９ｘ＋５９７．０（式中、ｘは男性年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である。また、Ｒは０．５４３である。）である一方、図６（ｂ）に示す女性年齢と、所定量血液あたりの特定Ｔ細胞の数との回帰式は、ｙ＝−４．１３６ｘ＋４７６．９（式中、ｘは女性年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である。また、Ｒは０．４７７である。）であった。この結果は、女性の方が男性よりも加齢に伴う免疫力低下が緩やかであることを指すところ、女性が男性よりも長寿であるという事実を正確に反映している。
【００７３】
また、健常人約３００人それぞれのＴ細胞増殖係数（ＴＣＰＩ）と、１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数との回帰式を求め、この結果を図７に示す。なお、Ｔ細胞増殖係数は、年齢との相関性に優れ、免疫力を高精度に反映するパラメータであることが知られている（特許文献１参照）。具体的にＴ細胞増殖係数は、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能を掛け合わせたものであり、例えば次の式で求めることができる。
Ｔ細胞数増殖係数＝ＯＤ（４９０ｎｍ）×（末梢血中Ｔ細胞数（μＬ当たり））／１０００
【００７４】
図７に示される回帰式は、ｙ＝１２５．７ｘ＋１６．４（式中、ｘはＴ細胞増殖係数、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、高い相関係数（Ｒ＝０．６９）を有していた。このことからも、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数という特定パラメータの優位性が明らかである。
【００７５】
これに対して、所定量血液あたりのＣＤ８陽性Ｔ細胞数又はＣＤ４陽性Ｔ細胞数と、Ｔ細胞増殖能との回帰式は、図８に示す通りである。図８（ａ）に示される回帰式は、ｙ＝５５．９ｘ＋５４６（式中、ｘはＴ細胞増殖能、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ８陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、相関係数が極めて低かった（Ｒ＝０．０６）。また、図８（ｂ）に示される回帰式は、ｙ＝１７９．８ｘ＋６３９（式中、ｘはＴ細胞増殖能、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ４陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、相関係数が低かった（Ｒ＝０．１５）。これにより、所定量血液あたりのＣＤ８陽性Ｔ細胞数又はＣＤ４陽性Ｔ細胞数というパラメータは、免疫力の反映の程度が低いことが明らかになった。
【００７６】
また、ＣＤ８陽性Ｔ細胞数におけるＣＤ２８陰性Ｔ細胞数の比率、又は所定量血液あたりのＣＤ８陽性ＣＤ２８陰性Ｔ細胞数と、Ｔ細胞増殖能との回帰式は、図９及び１０に示す通りである。図９に示される回帰式は、ｙ＝０．４７ｘ＋８２．８（式中、ｘは年齢、ｙはＣＤ８陽性Ｔ細胞数におけるＣＤ２８陰性Ｔ細胞数の比率の予測値である）であり、高い相関係数を有していた（Ｒ＝０．４３）。図１０に示される回帰式は、ｙ＝０．４７ｘ＋８２．８（式中、ｘは年齢、ｙは１μＬ血液あたりのＣＤ４陽性Ｔ細胞数の予測値である）であり、相関係数は低かった（Ｒ＝０．０５）。このように、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陰性Ｔ細胞数という特定パラメータは、非特定パラメータよりも優れるものの、所定量血液あたりのＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性Ｔ細胞数には劣る。
【００７７】
次に、図５に示す回帰式に各年齢を入力し、各年齢のおける１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞の予測値を求め、得られた予測値と検査値との差を求め、残差を求める。つまり、残差は、検査値（１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞）−予測値（回帰式より得られる値）なる式に基づいて求められる。
【００７８】
次に、Ｔリンパ球年齢を算出する。計算式によるＴリンパ球年齢（計算値年齢）は、前述した回帰式を変換した下式に被検者の１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞の検査値を代入することにより、求められる。
計算値年齢＝（５２３−検査値）／４．８７
【００７９】
しかし、このようにして得られる計算値年齢は推定値であり、実用的には、ある程度の幅をもって表す方が実際に則している。そこで、次に示すように、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋陽性率又は１μＬ血液あたりの特定Ｔ細胞の検査値と、それらの予測値との差である残差が正規分布を示すことから、Ｔリンパ球年齢の幅を定める。
【００８０】
被検者の実年齢から得られる予測値と検査値との差、即ち残差が正規分布を示すので、残差の標準偏差を下式から求めることができる。
【数１】
【００８１】
得られた残差の標準偏差ＳＤに基づいて、年齢表現の範囲を、図１３に示すように、±０．５ＳＤ、±１．ＯＳＤ、±１，５ＳＤ、±２．ＯＳＤといったように区切る。この場合、残差は、±４５（０．５ＳＤ）、±９０（１．ＯＳＤ）、±１３５（１．５ＳＤ）、±１８０（２．ＯＳＤ）である。
【００８２】
これらの標準偏差を基にした残差から被険者の実年齢とＴリンパ球年齢との隔たりを計算する。まず、計算値年齢を前述の式から求め、実年齢との差を見ると、いずれの年齢においても標準偏差から求められる値は略同じであり、±０．５ＳＤは各年齢±約１５歳であり、±１．０ＳＤは±約３０歳であり、±１．５ＳＤは±約４５歳であり、±２．ＯＳＤは±約６０歳であり、±２．ＯＳＤ以上は±約６０歳以上である。
【００８３】
Ｔリンパ球年齢が実際の年齢の値に対応するよう、約１７〜約９９歳で評価を行うことができるように設定するため、以上のようにして得られた計算値年齢と実年齢との差を２０％とし表現形年齢とする。即ち、表現形年齢を、次式から求める。
表現形年齢＝実年齢＋（計算値年齢−実年齢）×０．２
【００８４】
免疫力評価装置１は、上記の免疫力評価プログラムによって、次の手順を実行する。
（１）入力された実年齢を、予め求めて記録されている回帰式に代入して特定パラメータの予測値を算出する手順（特定パラメータの予測値算出手段６７）。
（２）入力された特定パラメータの検査値と予測値とから特定パラメータの残差を算出する手順（特定パラメータの残差算出手段６８）。
（３）得られた残差から、ランク判定及びＴリンパ球年齢を算出する手順（ランク判定及びＴリンパ球年齢算出手段６９）。
【００８５】
図１１は、入力部１０に入力された特定パラメータの検査値及び実年齢に基づいて、コンピュータ本体２０が行う免疫力の評価処理の例を説明するフローチャートである。
【００８６】
まず、免疫力の評価を受ける者の住所、氏名、実年齢、性別、既往症、現症、等の関連情報、並びに特定パラメータ値等を入力部１０から入力し、エンターキーを押下操作する（Ｓ３１）。次に、入力された実年齢を、予め求めて記録されている回帰式に代入して特定パラメータの予測値を算出する（Ｓ３２）。
【００８７】
Ｓ３２で得た予測値と、入力された特定パラメータの検査値とから残差を算出する（Ｓ３３）。得られた残差、つまり予測値及び検査値から、図１２に示されるような検査値のランクＡ〜Ｉを判定すると共に、Ｔリンパ球年齢を求める（Ｓ３４）。即ち、評価テーブル８０には、図１２に示すような、特定パラメータの検査値及び予測値に対する免疫評価ランク及びＴリンパ球年齢の評価表が格納されており、Ｓ３４では、この評価表から検査値及び予測値に基づいてランク判定を行い、Ｔリンパ球年齢を算出する。なお、図１２のＴリンパ球年齢において、最若年齢は１７〜２０歳とし、最高年齢は９６〜９９歳とする。
【００８８】
以上の評価結果を表示部４０に表示し（Ｓ３５）、処理を終了する。評価内容としては、「被験者の実年齢を含む関連情報」、「特定パラメータの検査値」、「特定パラメータの予測値」、「残差」、「免疫評価ランク」及び「Ｔリンパ球年齢」等が挙げられる。なお、手順自体の詳細は、特許文献１を参照してよい。
【００８９】
（第２態様）
本態様に係る免疫力評価方法は、採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手順と、評価値から免疫力を評価する評価手順と、を有し、算出手順では、免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる。ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いることで、算出される評価値を介して、総合的な免疫力を高精度に評価できる。
【００９０】
第１態様と同様に、特定Ｔ細胞としては、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性のＴ細胞を用いることが好ましく、特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００９１】
ここで「免疫細胞マーカー」は、採取された血液に含まれる複数の免疫細胞に対応するものである。免疫細胞マーカーとしては、特定パラメータを含む限りにおいて特に限定されない。年齢との相関性に優れる点では、単位血液量当たりのＴ細胞数、Ｔ細胞増殖係数、ＣＤ４Ｔ細胞／ＣＤ８Ｔ細胞比率、単位血液量当たりのナイーブＴ細胞数、ナイーブＴ細胞／メモリーＴ細胞比率、単位血液量当たりのＢ細胞数、及び単位血液量当たりのＮＫ（ナチュラルキラー）細胞数からなる群より選ばれる１種以上を併用することが好ましく、特にＴ細胞増殖係数を併用することが好ましい。なお、各マーカーの計測手順は、特許文献１を参照してよい。
【００９２】
免疫細胞マーカーとして特定パラメータ以外のものを併用する場合には、かかる免疫細胞マーカーの組み合わせは、被験者の疾病に対応したもの（その疾病に罹患することで大きく変動する傾向が強いマーカー）にしてもよいし、実年齢に対応したもの（加齢に応じて大きく変動する傾向が強いマーカー）にしてもよい。
【００９３】
各免疫細胞マーカーに基づく評価値は、計測値そのものであってもよいし、計測値が点数化されたものでもよい。計測値の点数化の一例では、健常者の免疫細胞マーカーの値を、累積度数１０（％）未満の範囲、累積度数１０（％）以上４０（％）未満の範囲、及び累積度数４０（％）以上の範囲からなる３つの段階に区分し、免疫力の高い区分から低い区分に向けて次第に小さな点数を割り当てる。このような累積度数に基づいて３つの段階に区分することにより、点数化を的確に行うことができる。
【００９４】
具体的には、累積度数１０（％）の値及び累積度数４０（％）の値を基準として、累積度数１０（％）以下であれば１（点）、累積度数１０（％）の値と累積度数４０（％）の値との間であれば２（点）、累積度数４０（％）の値を超えていれば３（点）を割り当てる。つまり、健常者の値について累積度数１０（％）未満の範囲を免疫力が低いレベルを示す１（点）とし、累積度数１０（％）以上４０（％）未満の範囲を免疫力が中等度のレベルを示す２（点）とし、累積度数４０（％）以上の範囲を免疫力が充分に高いレベルを示す３（点）とする。
【００９５】
本態様では、３つの区分にそれぞれ１、２、３（点）をそれぞれ割り当てたが、これに限るものではなく、免疫力が高いレベルには対応する高い点数を、また、低いレベルには対応する低い点数を割り当てればよい。なお、上記した累積度数１０（％）、累積度数４０（％）は、データベース５０に蓄積される健常者数の増加に伴って若干変動する。
【００９６】
このようにして得られる評価値は、レーダーグラフ等として表示して個別に比較検討してもよいし、特許文献１に示されるような手順で合算してもよい。
【００９７】
なお、本発明は前記実施形態に限定されるものではなく、本発明の目的を達成できる範囲での変形、改良等は本発明に含まれるものである。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】本発明の一実施形態に係る免疫力評価装置のブロック図である。
【図２】図１の免疫力評価装置を構成するコンピュータ本体のブロック図である。
【図３】本発明の一実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図４】本発明の一実施形態に係る特定パラメータと、Ｔ細胞増殖能との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図５】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図６】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、各性別健常者の年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図７】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、Ｔ細胞増殖係数との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図８】比較例に係るパラメータと、Ｔ細胞増殖能との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図９】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図１０】本発明の別の実施形態に係る特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を示すグラフである。
【図１１】図２のコンピュータ本体が行う免疫力の評価処理を示すフローチャートである。
【図１２】本発明の一実施形態に係る特定パラメータの検査値及び予測値に対する免疫評価ランク及びＴリンパ球年齢の評価表である。
【図１３】年齢表現の範囲の区切りの一例を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液における、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、
前記特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する免疫力評価方法。
【請求項２】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１記載の免疫力評価方法。
【請求項３】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１又は２記載の免疫力評価方法。
【請求項４】
前記算出手順は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める手順を有する請求項１から３いずれか記載の免疫力評価方法。
【請求項５】
免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手順と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手順と、を有し、
前記算出手順では、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価方法。
【請求項６】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項５記載の免疫力評価方法。
【請求項７】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項５又は６記載の免疫力評価方法。
【請求項８】
前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する請求項５から７いずれか記載の免疫力評価方法。
【請求項９】
前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する請求項８記載の免疫力評価方法。
【請求項１０】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記記憶手段に記憶された回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段とを備える免疫力評価装置。
【請求項１１】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１０記載の免疫力評価装置。
【請求項１２】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１０又は１１記載の免疫力評価装置。
【請求項１３】
前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める推定範囲算出手段を有する請求項１０から１２いずれか記載の免疫力評価方法。
【請求項１４】
免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、を備え、
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価装置。
【請求項１５】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１４記載の免疫力評価装置。
【請求項１６】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１４又は１５記載の免疫力評価装置。
【請求項１７】
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する請求項１４から１６いずれか記載の免疫力評価装置。
【請求項１８】
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する請求項１７記載の免疫力評価装置。
【請求項１９】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段として機能させるための免疫力評価プログラム。
【請求項２０】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１９記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２１】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１９又は２０記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２２】
前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める請求項１９から２１いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２３】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、して機能させ、
前記算出手段には、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いさせる免疫力評価プログラム。
【請求項２４】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項２３記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２５】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項２３又は２４記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２６】
前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する請求項２３から２５いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２７】
前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する請求項２６記載の免疫力評価プログラム。
【請求項１】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液における、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数を計測する計測手順と、
前記特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータ及び年齢の相関関係に基づいた回帰式と、計測した特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手順とを有する免疫力評価方法。
【請求項２】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１記載の免疫力評価方法。
【請求項３】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１又は２記載の免疫力評価方法。
【請求項４】
前記算出手順は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める手順を有する請求項１から３いずれか記載の免疫力評価方法。
【請求項５】
免疫力を評価する免疫力評価方法であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手順と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手順と、を有し、
前記算出手順では、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価方法。
【請求項６】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項５記載の免疫力評価方法。
【請求項７】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項５又は６記載の免疫力評価方法。
【請求項８】
前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する請求項５から７いずれか記載の免疫力評価方法。
【請求項９】
前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する請求項８記載の免疫力評価方法。
【請求項１０】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記記憶手段に記憶された回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段とを備える免疫力評価装置。
【請求項１１】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１０記載の免疫力評価装置。
【請求項１２】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１０又は１１記載の免疫力評価装置。
【請求項１３】
前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める推定範囲算出手段を有する請求項１０から１２いずれか記載の免疫力評価方法。
【請求項１４】
免疫力を評価する免疫力評価装置であって、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、を備え、
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いる免疫力評価装置。
【請求項１５】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１４記載の免疫力評価装置。
【請求項１６】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１４又は１５記載の免疫力評価装置。
【請求項１７】
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する請求項１４から１６いずれか記載の免疫力評価装置。
【請求項１８】
前記算出手段は、前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する請求項１７記載の免疫力評価装置。
【請求項１９】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータと、年齢との相関関係に基づいた回帰式を記憶する記憶手段と、
前記回帰式と、入力された特定Ｔ細胞の数とに基づいて、Ｔリンパ球年齢を求める算出手段として機能させるための免疫力評価プログラム。
【請求項２０】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項１９記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２１】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項１９又は２０記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２２】
前記算出手段は、入力された実年齢を回帰式に代入して前記特定Ｔ細胞数の予測値を求め、この予測値と、計測した特定Ｔ細胞の数とからＴリンパ球年齢の推定範囲を求める請求項１９から２１いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２３】
採取した血液から免疫力を評価する免疫力評価プログラムであって、コンピュータを、
採取した血液に含まれる各免疫細胞に対応する免疫細胞マーカーに基づく評価値を求める算出手段と、
前記評価値から免疫力を評価する評価手段と、して機能させ、
前記算出手段には、前記免疫細胞マーカーとして、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性又は陰性である特定Ｔ細胞の数に依存する特定パラメータを用いさせる免疫力評価プログラム。
【請求項２４】
前記特定Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性且つＣＤ２８陽性である請求項２３記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２５】
前記特定パラメータは、所定量血液あたりの前記特定Ｔ細胞の数、及びＣＤ８陽性細胞数に対する前記特定Ｔ細胞数の割合からなる群から選ばれる１種以上である請求項２３又は２４記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２６】
前記免疫細胞マーカーとして、前記特定パラメータ以外のマーカーを併用する請求項２３から２５いずれか記載の免疫力評価プログラム。
【請求項２７】
前記免疫細胞マーカーとして、Ｔ細胞数及びＴ細胞増殖能の双方に依存するＴ細胞増殖係数を併用する請求項２６記載の免疫力評価プログラム。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公開番号】特開２０１０−１４５２０５（Ｐ２０１０−１４５２０５Ａ）
【公開日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３２１９９１（Ｐ２００８−３２１９９１）
【出願日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【出願人】（５０４１７９２５５）国立大学法人 東京医科歯科大学 (228)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【出願人】（５０４１７９２５５）国立大学法人 東京医科歯科大学 (228)
【Ｆターム（参考）】
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