免疫学的検査具
【課題】操作者による被検液の正確な計量が不要でありながら定量性を確保するとともに、被検液を採取後迅速に検査する。
【解決手段】所定量の被検液を吸収可能であり、被検液に含まれる被検物質と特異的に結合する抗体が固相化された検査領域２ｂを有する吸収片２と、所定量より大きい容積を有し、その底部において吸収片２の一端部と連通し、上部が開放された被検液滴下部３ａとを備え、該被検液滴下部３ａは、底部側に区画される空間の体積が所定量となる深さ位置に下限目印４が設けられている免疫学的検査具１を提供する。
【解決手段】所定量の被検液を吸収可能であり、被検液に含まれる被検物質と特異的に結合する抗体が固相化された検査領域２ｂを有する吸収片２と、所定量より大きい容積を有し、その底部において吸収片２の一端部と連通し、上部が開放された被検液滴下部３ａとを備え、該被検液滴下部３ａは、底部側に区画される空間の体積が所定量となる深さ位置に下限目印４が設けられている免疫学的検査具１を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学的検査具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、インフルエンザや妊娠、アレルギー等の検査において、免疫クロマトグラフィ法やラテラルフロー法、フロースルー法に基づく検査具が使用されている（例えば、特許文献１参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−１８５９２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
被検液中の被検物質の濃度などの定量的な検査を検査具によって行うためには、検査具に供する被検液を正確に計量する必要がある。特許文献１では、一定の吸収量を有する吸収性材料によって被検液を採取し、吸収性材料を検査具に組み込むことにより、検査に一定量の被検液が供されるようにしており、これにより操作者による被検液の計量の手間を省いている。しかしながら、吸収性材料に被検液が十分に採取されたことを確認する手段が備えられていない。すなわち、吸収性材料に採取された被検液の量が不足していても、そのことに操作者が気付かず被検液を検査に供してしまうこととなり、検査の定量性を確保することができないという問題がある。
【０００５】
また、酵素を豊富に含む膵液や十二指腸液等の消化液に含まれるタンパク質を検査対象とする場合、時間の経過とともにタンパク質が分解されて検査精度が低下するため、採取後迅速に検査されることが要求される。しかしながら、特許文献１の場合、体内から内視鏡的に採取した消化液を別の容器等に移し、吸収性材料に吸収させてから検査具に供さなければならず、採取した被検液を迅速に検査に供することが難しいという問題がある。
【０００６】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、操作者による被検液の正確な計量が不要でありながら定量性を確保することができるとともに、被検液を採取後迅速に検査することができる免疫学的検査具を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、所定量の被検液を吸収可能であり、前記被検液に含まれる被検物質と特異的に結合する抗体が固相化された検査領域を有する吸収片と、前記所定量より大きい容積を有し、その底部において前記吸収片の一端部と連通し、上部が開放された被検液滴下部とを備え、該被検液滴下部は、前記底部側に区画される空間の体積が前記所定量となる深さ位置に下限目印が設けられている免疫学的検査具を提供する。
【０００８】
本発明によれば、被検液滴下部に収容された被検液は被検液滴下部の底部から吸収片に吸収された後、吸収片を一端部から他端部に向かって移動し、移動の間に被検液に含まれる被検物質は検査領域の抗体と結合することにより検査領域に捕捉される。したがって、操作者は、被検液滴下部に被検液を滴下した後に検査領域を確認することにより、被検液中の被検物質の有無を検査することができる。
【０００９】
この場合に、操作者が、被検液の液面が下限目印と同じまたは下限目印よりも高い位置に配されるように被検液を被検液滴下部に滴下するだけで、吸収片は確実に所定量の被検液を吸収することとなる。これにより、操作者による被検液の正確な計量を不要にしながら、検査の定量性を確保することができる。また、体内から採取した被検液をそのまま被検液滴下部に移動させればよいので、被検液を採取後迅速に検査することができる。
【００１０】
上記発明においては、前記吸収片が、前記一端部との間に前記検査領域を挟む他端部に、前記被検液により呈色する確認領域を有することとしてもよい。
このようにすることで、被検液が吸収片を一端部から他端部まで移動したこと、つまり、吸収片に所定量の被検液が吸収されたことを確認領域の呈色によって確認することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記吸収片の外面を覆う被覆部材を備えることとしてもよい。
このようにすることで、吸収片に吸収された被検液の蒸発を被覆部材によって防止し、吸収片によって吸収される被検液の量をより正確に所定量とし、検査の定量性をより向上することができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記被検液滴下部の前記上部を閉塞可能な閉塞部材を備えることとしてもよい。
このようにすることで、被検液滴下部に被検液を滴下した後に被検液滴下部の上部を閉塞部材によって塞ぐことにより、被検液の漏出を防ぐことができる。
【００１３】
また、上記発明においては、前記被検液滴下部が、前記底部から前記上部に向かって漸次内径が大きくなるテーパ状の内面を有することとしてもよい。
このようにすることで、被検液滴下部の容積が小さい場合であっても上部の開口を十分に大きくし、操作者による被検液の滴下の操作を容易にすることができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、操作者による被検液の正確な計量が不要でありながら定量性を確保することができるとともに、被検液を採取後迅速に検査することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施形態に係る免疫学的検査具の全体構成を示す（ａ）平面図および（ｂ）Ｉ−Ｉ断面図である。
【図２】図１の被検液滴下窓の形状の一例を示す図である。
【図３】本発明の免疫学的検査具および市販のＥＬＩＳＡキットを使用して膵液中のＣＡ１９−９濃度を測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、本発明の一実施形態に係る免疫学的検査具１について図１および図２を参照して説明する。
本実施形態に係る免疫学的検査具１は、図１に示されるように、被検液が展開される短冊状の吸収片２と、該吸収片２を外装するカバー（被覆部材）３とを備え、該カバー３には厚さ方向に貫通形成された被検液滴下窓（被検液滴下部）３ａ、判定窓３ｂおよび確認窓３ｃが設けられている。
【００１７】
吸収片２は、多数の細孔が形成され毛細管現象によって被検液を吸収可能な多孔性材料、例えば、セルロースなどの不織布や織布、繊維マトリクス、多孔質膜などからなる。吸収片２は、細孔の総容積によって決まる所定量（以下、吸収量という。）の被検液を吸収可能である。吸収片２毎の被検液の吸収量を一定とするため、多孔性材料は略均一な孔径および密度で細孔が形成されていることが好ましい。吸収片２毎の吸収量のばらつきは、ＣＶ値（変動係数）にして１０％以下であることが望ましい。
【００１８】
吸収片２は、長手方向に間隔を空けて短軸方向にライン状に設けられた標識領域２ａと検査領域２ｂと確認領域２ｃとを有している。標識領域２ａは、被検液に含まれる被検物質を抗原とし金コロイド等の色素で標識された１次抗体を移動可能に保持している。該１次抗体は、被検物質の量に対して十分な量が保持されている。検査領域２ｂは、被検物質を抗原とし１次抗体とは異なるエピトープを認識する２次抗体が固相化されている。確認領域２ｃは、１次抗体を抗原とするコントロール抗体が固相化されている。
【００１９】
カバー３は、３つの窓３ａ，３ｂ，３ｃに相当する部分を除き吸収片２の外面全体を被覆し、吸収片２に吸収された被検液の蒸発および漏出を防止している。吸収片２に吸収された被検液の蒸発をさらに防止するために、カバー３内において吸収片２が図示しない透明のフィルム等によって被覆されていてもよい。このように被検液の蒸発を防ぐことにより、蒸発によって吸収量以上の被検液が吸収片２に吸収されることを防止し、検査に供される被検液の量をより正確に吸収量と一致させることができる。
【００２０】
被検液滴下窓３ａは吸収片２の一端部に対応する位置に設けられ、判定窓３ｂおよび確認窓３ｃは検査領域２ｂおよび確認領域２ｃに対応する位置にそれぞれ設けられている。
被検液滴下窓３ａは、開口した底部が吸収片２の一端部の上面に一致して配置されることにより内部が吸収片２の一端部と連通し、被検液滴下窓３ａ内に滴下された被検体が吸収片２に一端部から吸収されるようになっている。被検液滴下窓３ａの内面は、開放された上部に向かって漸次内径が大きくなるテーパ状に形成されている。これにより、被検液滴下窓３ａの容積が小さい場合であっても上部の開口の大きさを十分に確保し、操作者がより容易に被検液滴下窓３ａ内に被検液を滴下できるようになっている。
【００２１】
被検液滴下窓３ａの内面には、下限ライン（下限目印）４が付されている。下限ライン４は、該下限ライン４によって底部側に区画される空間の体積が吸収片２の吸収量と一致する深さ位置に設けられている。
図２は、四角錐台形状の被検液滴下窓３ａの一例を示している。例えば、被検液滴下窓３ａの容積が５００μＬ、吸収片２の吸収量が２００μＬである場合、ａ＝０．８，ｂ＝１．２、ｃ＝１、ｄ＝０．６、ｅ＝０．９（ｃｍ）となり、下限ライン４は底部から０．６ｃｍの深さ位置に設けられる。
【００２２】
被検液滴下窓３ａの上部近傍には、ゴムや樹脂、プラスチック等からなり被検液滴下窓３ａの上部を閉塞可能な蓋体（閉塞部材）５が設けられている。操作者は、蓋体５によって被検液滴下窓３ａの上部を塞ぐことにより、被検液滴下窓３ａ内に貯留する被検液の漏出を防ぐことができる。
【００２３】
次に、このように構成された免疫学的検査具１の作用について説明する。
本実施形態に係る免疫学的検査具１を使用して被検液中の被検物質の有無を検査するためには、まず、体内からシリンジ等の容器内に採取した被検液を被検液滴下窓３ａに滴下する。このときに、操作者は、図２に示されるように、被検液滴下窓３ａ内に貯留する被検液の液面Ａが下限ライン４よりも高くなるまで被検液を滴下する。
【００２４】
被検液滴下窓３ａ内に貯留した被検液は下層側から吸収片２に吸収され、吸収片２を一端部から他端部に向かって移動する。被検液に被検物質が含まれている場合、被検物質は標識領域２ａにおいて１次抗体と複合体を形成する。該複合体は吸収片２をさらに移動し、検査領域２ｂにおいて１次抗体と２次抗体とが複合体を形成することにより検査領域２ｂに捕捉される。これにより、検査領域２ｂには色素が蓄積されて色素の色のライン（以下、判定ラインという。）が出現する。判定ラインの色の濃さは、捕捉された被検物質の量に比例する。
【００２５】
一方、被検物質と複合体を形成しなかった１次抗体は、被検液とともに吸収片２を移動した後に確認領域２ｃにおいてコントロール抗体と複合体を形成し、確認領域２ｃに捕捉される。これにより、吸収片２の他端部まで十分な量の被検液が移動したときに、すなわち、吸収量と一致する量の被検液が吸収片２に吸収されたときに、確認領域２ｃに色素の色のライン（以下、コントロールラインという。）が出現する。
【００２６】
操作者は、確認窓３ｃ内にコントロールラインが出現するのを待ってから、判定窓３ｂ内の判定ラインの出現の有無を確認し、判定ラインが出現した場合に検査に陽性であると診断する。また、陽性であった場合には、判定ラインの色の濃さから陽性の度合いを診断する。
【００２７】
この場合に、本実施形態によれば、操作者が下限ライン４で示される量よりも多い被検液を被検液滴下窓３ａ内に滴下することにより、吸収片２の吸収量よりも多い被検液が被検液滴下窓３ａ内に収容される。吸収量を超えた分の被検液は、吸収片２に吸収されることなく被検液滴下窓３ａ内に残る。すなわち、操作者が被検液を精密に計量しなくても所定の吸収量の被検液が過不足なく検査に供されることとなり、簡便な操作のみで検査の定量性を確保することができるという利点がある。また、体内から容器内に採取した被検液をそのまま被検液滴下窓３ａ内に移動させればよいので、被検液を採取後迅速に検査することができるという利点がある。
【実施例】
【００２８】
次に、上述した実施形態の実施例について、図３を参照して以下に説明する。
〔実施例１〕
本発明に係る免疫学的検査具の定量性能を、膵液に含まれる癌胎児性抗原（ＣＥＡ）の検査によって評価した。
【００２９】
本発明の実施例１に係る免疫学的検査具の被検液滴下窓は、図２に示される四角錐台形状においてａ＝０．８，ｂ＝１．２、ｃ＝１、ｄ＝０．６、ｅ＝０．９（ｃｍ）とし、容積５００μＬとした。下限ラインは、底部から０．６ｃｍの深さ位置に設けた。吸収片は、吸収量が２００μＬのニトロセルロース製を使用した。吸収片の側面を液体不透過性のフィルムで被覆することにより、吸収片に吸収された被検液の蒸発を防止した。
【００３０】
１次抗体として金コロイド標識ポリクローナル抗ＣＥＡ抗体（ウサギ）を使用し、２次抗体としてモノクローナル抗ＣＥＡ抗体（マウス）、コントロールライン層用の抗体として抗ウサギＩｇＧ抗体を用いた。被検液を滴下した後、被検液滴下窓をゴム製の栓によって密閉した。
【００３１】
被検液としては、ＥＲＣＰ（内視鏡的逆行性胆管膵管造影）によって採取した膵液を、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で１０倍に希釈したものを使用した。被検液を、被検液滴下窓内に液面が下限ラインを超えるまで滴下し、確認窓内のコントロールラインの出現を確認してから、判定ラインの色の濃さをイムノクロマトリーダ（浜松ホトニクス社製）によって測定することによりＣＥＡ濃度を測定した。被検液の滴下から判定ラインの出現までの所要時間は、１０分程度であった。
【００３２】
本発明に係る免疫学的検査具の比較例として、同一の被検液を市販の免疫検査具であるラナマンモカードＣＥＡ（登録商標、日本化薬株式会社）によって検査した。具体的には、スポイドを使用して被検液を５滴クロマトパッドに滴下し、１５分後に判定ラインの色の濃さをイムノクロマトリーダによって測定することによりＣＥＡ濃度を測定した。
なお、ＣＥＡの濃度が既知の被検液を各免疫検査具によって検査し、判定ラインの色の濃さをイムノクロマトリーダ測定することによって予め検量線を作成しておき、該検量線に基づいてＣＥＡ濃度を算出した。
【００３３】
同一の被検液の検査を本発明および市販の免疫検査具によって５回行った。その検査結果を表１に示す。
表１において、市販の免疫学的検査具に比べて、本発明の免疫学的検査具は測定されたＣＥＡ濃度のＳＤ（標準偏差）およびＣＶ値が有意に小さかった。すなわち、本発明の免疫学的検査具は、略一定の量の被検液が検査に供されており、定量性に優れていることが確認された。
【００３４】
【表１】
【００３５】
〔実施例２〕
次に、本発明に係る免疫学的検査具および市販のＥＬＩＳＡキットによって同一の被検液を検査し、両者の検査結果を比較することにより、本発明の免疫学的検査具の検査感度を評価した。被検液としては、ＥＲＣＰによって採取した膵液の原液、および、膵液を０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳで１０倍、１００倍、５００倍に希釈したものを使用し、膵液中に含まれるＣＡ１９−９の濃度を測定した。ＣＡ１９−９は、膵臓腫瘍のマーカとして知られるタンパク質である。
【００３６】
本発明の実施例２に係る免疫学的検査具は、実施例１の免疫学的検査具において、１次抗体を金コロイド標識ポリクローナル抗ＣＡ１９−９抗体（ウサギ）に、２次抗体をモノクローナル抗ＣＡ１９−９抗体（マウス）に代えたものを使用した。実施例１と同様の方法で、４種類の被検液を本実施例の免疫学的検査具に供し、判定ラインの色の濃さからイムノクロマトリーダによってＣＡ１９−９濃度を測定した。
【００３７】
ＥＬＩＳＡキットとしては、ＤＲＧ ＣＡ １９−９ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＤＲＧ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＧｍｂＨ社製）を使用した。以下の１〜６の手順にしたがって被検液中のＣＡ１９―９濃度を測定した。
【００３８】
１．１０μＬの被検液をマイクロタイターウェル（以下、ウェルという。）に滴下する。
２．１００μＬのＥｎｚｙｍｅ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅをウェル内に添加し、十分混合した後、室温で３０分間反応させる。
３．ウェルから溶液を除去した後、ウェルを４００μＬのＷａｓｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎで３回洗浄する。
４．１００μＬのＳｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎをウェルに添加した後、室温で３０分間反応させる。
５．１００μＬのＳｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎをウェルに添加し、酵素反応を停止させる。
６．Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎの添加後１０分以内に波長４５０ｎｍのＯＤ（光学濃度）を測定することにより、ＣＡ１９−９の濃度を測定する。
【００３９】
本実施例の免疫学的検査具および市販のＥＬＩＳＡキットによるＣＡ１９−９濃度の測定結果を図３に示す。図３において、本実施例の免疫学的検査具による濃度はｐｇ／ｍＬの単位で示し、ＥＬＩＳＡキットによる濃度はＵ／ｍＬで示す。両者の測定結果を比較すると、膵液の希釈倍率に応じたＣＡ１９−９濃度の増減の傾向が非常によく相関している。この実験から、本発明に係る免疫学的検査具は、ＥＬＩＳＡ法による検査に比べて所要時間が短く操作が簡便でありながら、ＥＬＩＳＡ法と同等の感度で被検物質を検査できることが確認された。
【符号の説明】
【００４０】
１ 免疫学的検査具
２ 吸収片
２ａ 標識領域
２ｂ 検査領域
２ｃ 確認領域
３ カバー（被覆部材）
３ａ 被検液滴下窓（被検液滴下部）
３ｂ 判定窓
３ｃ 確認窓
４ 下限ライン（下限目印）
５ 蓋体（閉塞部材）
Ａ 被検液の液面
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学的検査具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、インフルエンザや妊娠、アレルギー等の検査において、免疫クロマトグラフィ法やラテラルフロー法、フロースルー法に基づく検査具が使用されている（例えば、特許文献１参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−１８５９２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
被検液中の被検物質の濃度などの定量的な検査を検査具によって行うためには、検査具に供する被検液を正確に計量する必要がある。特許文献１では、一定の吸収量を有する吸収性材料によって被検液を採取し、吸収性材料を検査具に組み込むことにより、検査に一定量の被検液が供されるようにしており、これにより操作者による被検液の計量の手間を省いている。しかしながら、吸収性材料に被検液が十分に採取されたことを確認する手段が備えられていない。すなわち、吸収性材料に採取された被検液の量が不足していても、そのことに操作者が気付かず被検液を検査に供してしまうこととなり、検査の定量性を確保することができないという問題がある。
【０００５】
また、酵素を豊富に含む膵液や十二指腸液等の消化液に含まれるタンパク質を検査対象とする場合、時間の経過とともにタンパク質が分解されて検査精度が低下するため、採取後迅速に検査されることが要求される。しかしながら、特許文献１の場合、体内から内視鏡的に採取した消化液を別の容器等に移し、吸収性材料に吸収させてから検査具に供さなければならず、採取した被検液を迅速に検査に供することが難しいという問題がある。
【０００６】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、操作者による被検液の正確な計量が不要でありながら定量性を確保することができるとともに、被検液を採取後迅速に検査することができる免疫学的検査具を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、所定量の被検液を吸収可能であり、前記被検液に含まれる被検物質と特異的に結合する抗体が固相化された検査領域を有する吸収片と、前記所定量より大きい容積を有し、その底部において前記吸収片の一端部と連通し、上部が開放された被検液滴下部とを備え、該被検液滴下部は、前記底部側に区画される空間の体積が前記所定量となる深さ位置に下限目印が設けられている免疫学的検査具を提供する。
【０００８】
本発明によれば、被検液滴下部に収容された被検液は被検液滴下部の底部から吸収片に吸収された後、吸収片を一端部から他端部に向かって移動し、移動の間に被検液に含まれる被検物質は検査領域の抗体と結合することにより検査領域に捕捉される。したがって、操作者は、被検液滴下部に被検液を滴下した後に検査領域を確認することにより、被検液中の被検物質の有無を検査することができる。
【０００９】
この場合に、操作者が、被検液の液面が下限目印と同じまたは下限目印よりも高い位置に配されるように被検液を被検液滴下部に滴下するだけで、吸収片は確実に所定量の被検液を吸収することとなる。これにより、操作者による被検液の正確な計量を不要にしながら、検査の定量性を確保することができる。また、体内から採取した被検液をそのまま被検液滴下部に移動させればよいので、被検液を採取後迅速に検査することができる。
【００１０】
上記発明においては、前記吸収片が、前記一端部との間に前記検査領域を挟む他端部に、前記被検液により呈色する確認領域を有することとしてもよい。
このようにすることで、被検液が吸収片を一端部から他端部まで移動したこと、つまり、吸収片に所定量の被検液が吸収されたことを確認領域の呈色によって確認することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記吸収片の外面を覆う被覆部材を備えることとしてもよい。
このようにすることで、吸収片に吸収された被検液の蒸発を被覆部材によって防止し、吸収片によって吸収される被検液の量をより正確に所定量とし、検査の定量性をより向上することができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記被検液滴下部の前記上部を閉塞可能な閉塞部材を備えることとしてもよい。
このようにすることで、被検液滴下部に被検液を滴下した後に被検液滴下部の上部を閉塞部材によって塞ぐことにより、被検液の漏出を防ぐことができる。
【００１３】
また、上記発明においては、前記被検液滴下部が、前記底部から前記上部に向かって漸次内径が大きくなるテーパ状の内面を有することとしてもよい。
このようにすることで、被検液滴下部の容積が小さい場合であっても上部の開口を十分に大きくし、操作者による被検液の滴下の操作を容易にすることができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、操作者による被検液の正確な計量が不要でありながら定量性を確保することができるとともに、被検液を採取後迅速に検査することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施形態に係る免疫学的検査具の全体構成を示す（ａ）平面図および（ｂ）Ｉ−Ｉ断面図である。
【図２】図１の被検液滴下窓の形状の一例を示す図である。
【図３】本発明の免疫学的検査具および市販のＥＬＩＳＡキットを使用して膵液中のＣＡ１９−９濃度を測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、本発明の一実施形態に係る免疫学的検査具１について図１および図２を参照して説明する。
本実施形態に係る免疫学的検査具１は、図１に示されるように、被検液が展開される短冊状の吸収片２と、該吸収片２を外装するカバー（被覆部材）３とを備え、該カバー３には厚さ方向に貫通形成された被検液滴下窓（被検液滴下部）３ａ、判定窓３ｂおよび確認窓３ｃが設けられている。
【００１７】
吸収片２は、多数の細孔が形成され毛細管現象によって被検液を吸収可能な多孔性材料、例えば、セルロースなどの不織布や織布、繊維マトリクス、多孔質膜などからなる。吸収片２は、細孔の総容積によって決まる所定量（以下、吸収量という。）の被検液を吸収可能である。吸収片２毎の被検液の吸収量を一定とするため、多孔性材料は略均一な孔径および密度で細孔が形成されていることが好ましい。吸収片２毎の吸収量のばらつきは、ＣＶ値（変動係数）にして１０％以下であることが望ましい。
【００１８】
吸収片２は、長手方向に間隔を空けて短軸方向にライン状に設けられた標識領域２ａと検査領域２ｂと確認領域２ｃとを有している。標識領域２ａは、被検液に含まれる被検物質を抗原とし金コロイド等の色素で標識された１次抗体を移動可能に保持している。該１次抗体は、被検物質の量に対して十分な量が保持されている。検査領域２ｂは、被検物質を抗原とし１次抗体とは異なるエピトープを認識する２次抗体が固相化されている。確認領域２ｃは、１次抗体を抗原とするコントロール抗体が固相化されている。
【００１９】
カバー３は、３つの窓３ａ，３ｂ，３ｃに相当する部分を除き吸収片２の外面全体を被覆し、吸収片２に吸収された被検液の蒸発および漏出を防止している。吸収片２に吸収された被検液の蒸発をさらに防止するために、カバー３内において吸収片２が図示しない透明のフィルム等によって被覆されていてもよい。このように被検液の蒸発を防ぐことにより、蒸発によって吸収量以上の被検液が吸収片２に吸収されることを防止し、検査に供される被検液の量をより正確に吸収量と一致させることができる。
【００２０】
被検液滴下窓３ａは吸収片２の一端部に対応する位置に設けられ、判定窓３ｂおよび確認窓３ｃは検査領域２ｂおよび確認領域２ｃに対応する位置にそれぞれ設けられている。
被検液滴下窓３ａは、開口した底部が吸収片２の一端部の上面に一致して配置されることにより内部が吸収片２の一端部と連通し、被検液滴下窓３ａ内に滴下された被検体が吸収片２に一端部から吸収されるようになっている。被検液滴下窓３ａの内面は、開放された上部に向かって漸次内径が大きくなるテーパ状に形成されている。これにより、被検液滴下窓３ａの容積が小さい場合であっても上部の開口の大きさを十分に確保し、操作者がより容易に被検液滴下窓３ａ内に被検液を滴下できるようになっている。
【００２１】
被検液滴下窓３ａの内面には、下限ライン（下限目印）４が付されている。下限ライン４は、該下限ライン４によって底部側に区画される空間の体積が吸収片２の吸収量と一致する深さ位置に設けられている。
図２は、四角錐台形状の被検液滴下窓３ａの一例を示している。例えば、被検液滴下窓３ａの容積が５００μＬ、吸収片２の吸収量が２００μＬである場合、ａ＝０．８，ｂ＝１．２、ｃ＝１、ｄ＝０．６、ｅ＝０．９（ｃｍ）となり、下限ライン４は底部から０．６ｃｍの深さ位置に設けられる。
【００２２】
被検液滴下窓３ａの上部近傍には、ゴムや樹脂、プラスチック等からなり被検液滴下窓３ａの上部を閉塞可能な蓋体（閉塞部材）５が設けられている。操作者は、蓋体５によって被検液滴下窓３ａの上部を塞ぐことにより、被検液滴下窓３ａ内に貯留する被検液の漏出を防ぐことができる。
【００２３】
次に、このように構成された免疫学的検査具１の作用について説明する。
本実施形態に係る免疫学的検査具１を使用して被検液中の被検物質の有無を検査するためには、まず、体内からシリンジ等の容器内に採取した被検液を被検液滴下窓３ａに滴下する。このときに、操作者は、図２に示されるように、被検液滴下窓３ａ内に貯留する被検液の液面Ａが下限ライン４よりも高くなるまで被検液を滴下する。
【００２４】
被検液滴下窓３ａ内に貯留した被検液は下層側から吸収片２に吸収され、吸収片２を一端部から他端部に向かって移動する。被検液に被検物質が含まれている場合、被検物質は標識領域２ａにおいて１次抗体と複合体を形成する。該複合体は吸収片２をさらに移動し、検査領域２ｂにおいて１次抗体と２次抗体とが複合体を形成することにより検査領域２ｂに捕捉される。これにより、検査領域２ｂには色素が蓄積されて色素の色のライン（以下、判定ラインという。）が出現する。判定ラインの色の濃さは、捕捉された被検物質の量に比例する。
【００２５】
一方、被検物質と複合体を形成しなかった１次抗体は、被検液とともに吸収片２を移動した後に確認領域２ｃにおいてコントロール抗体と複合体を形成し、確認領域２ｃに捕捉される。これにより、吸収片２の他端部まで十分な量の被検液が移動したときに、すなわち、吸収量と一致する量の被検液が吸収片２に吸収されたときに、確認領域２ｃに色素の色のライン（以下、コントロールラインという。）が出現する。
【００２６】
操作者は、確認窓３ｃ内にコントロールラインが出現するのを待ってから、判定窓３ｂ内の判定ラインの出現の有無を確認し、判定ラインが出現した場合に検査に陽性であると診断する。また、陽性であった場合には、判定ラインの色の濃さから陽性の度合いを診断する。
【００２７】
この場合に、本実施形態によれば、操作者が下限ライン４で示される量よりも多い被検液を被検液滴下窓３ａ内に滴下することにより、吸収片２の吸収量よりも多い被検液が被検液滴下窓３ａ内に収容される。吸収量を超えた分の被検液は、吸収片２に吸収されることなく被検液滴下窓３ａ内に残る。すなわち、操作者が被検液を精密に計量しなくても所定の吸収量の被検液が過不足なく検査に供されることとなり、簡便な操作のみで検査の定量性を確保することができるという利点がある。また、体内から容器内に採取した被検液をそのまま被検液滴下窓３ａ内に移動させればよいので、被検液を採取後迅速に検査することができるという利点がある。
【実施例】
【００２８】
次に、上述した実施形態の実施例について、図３を参照して以下に説明する。
〔実施例１〕
本発明に係る免疫学的検査具の定量性能を、膵液に含まれる癌胎児性抗原（ＣＥＡ）の検査によって評価した。
【００２９】
本発明の実施例１に係る免疫学的検査具の被検液滴下窓は、図２に示される四角錐台形状においてａ＝０．８，ｂ＝１．２、ｃ＝１、ｄ＝０．６、ｅ＝０．９（ｃｍ）とし、容積５００μＬとした。下限ラインは、底部から０．６ｃｍの深さ位置に設けた。吸収片は、吸収量が２００μＬのニトロセルロース製を使用した。吸収片の側面を液体不透過性のフィルムで被覆することにより、吸収片に吸収された被検液の蒸発を防止した。
【００３０】
１次抗体として金コロイド標識ポリクローナル抗ＣＥＡ抗体（ウサギ）を使用し、２次抗体としてモノクローナル抗ＣＥＡ抗体（マウス）、コントロールライン層用の抗体として抗ウサギＩｇＧ抗体を用いた。被検液を滴下した後、被検液滴下窓をゴム製の栓によって密閉した。
【００３１】
被検液としては、ＥＲＣＰ（内視鏡的逆行性胆管膵管造影）によって採取した膵液を、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で１０倍に希釈したものを使用した。被検液を、被検液滴下窓内に液面が下限ラインを超えるまで滴下し、確認窓内のコントロールラインの出現を確認してから、判定ラインの色の濃さをイムノクロマトリーダ（浜松ホトニクス社製）によって測定することによりＣＥＡ濃度を測定した。被検液の滴下から判定ラインの出現までの所要時間は、１０分程度であった。
【００３２】
本発明に係る免疫学的検査具の比較例として、同一の被検液を市販の免疫検査具であるラナマンモカードＣＥＡ（登録商標、日本化薬株式会社）によって検査した。具体的には、スポイドを使用して被検液を５滴クロマトパッドに滴下し、１５分後に判定ラインの色の濃さをイムノクロマトリーダによって測定することによりＣＥＡ濃度を測定した。
なお、ＣＥＡの濃度が既知の被検液を各免疫検査具によって検査し、判定ラインの色の濃さをイムノクロマトリーダ測定することによって予め検量線を作成しておき、該検量線に基づいてＣＥＡ濃度を算出した。
【００３３】
同一の被検液の検査を本発明および市販の免疫検査具によって５回行った。その検査結果を表１に示す。
表１において、市販の免疫学的検査具に比べて、本発明の免疫学的検査具は測定されたＣＥＡ濃度のＳＤ（標準偏差）およびＣＶ値が有意に小さかった。すなわち、本発明の免疫学的検査具は、略一定の量の被検液が検査に供されており、定量性に優れていることが確認された。
【００３４】
【表１】
【００３５】
〔実施例２〕
次に、本発明に係る免疫学的検査具および市販のＥＬＩＳＡキットによって同一の被検液を検査し、両者の検査結果を比較することにより、本発明の免疫学的検査具の検査感度を評価した。被検液としては、ＥＲＣＰによって採取した膵液の原液、および、膵液を０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳで１０倍、１００倍、５００倍に希釈したものを使用し、膵液中に含まれるＣＡ１９−９の濃度を測定した。ＣＡ１９−９は、膵臓腫瘍のマーカとして知られるタンパク質である。
【００３６】
本発明の実施例２に係る免疫学的検査具は、実施例１の免疫学的検査具において、１次抗体を金コロイド標識ポリクローナル抗ＣＡ１９−９抗体（ウサギ）に、２次抗体をモノクローナル抗ＣＡ１９−９抗体（マウス）に代えたものを使用した。実施例１と同様の方法で、４種類の被検液を本実施例の免疫学的検査具に供し、判定ラインの色の濃さからイムノクロマトリーダによってＣＡ１９−９濃度を測定した。
【００３７】
ＥＬＩＳＡキットとしては、ＤＲＧ ＣＡ １９−９ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＤＲＧ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＧｍｂＨ社製）を使用した。以下の１〜６の手順にしたがって被検液中のＣＡ１９―９濃度を測定した。
【００３８】
１．１０μＬの被検液をマイクロタイターウェル（以下、ウェルという。）に滴下する。
２．１００μＬのＥｎｚｙｍｅ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅをウェル内に添加し、十分混合した後、室温で３０分間反応させる。
３．ウェルから溶液を除去した後、ウェルを４００μＬのＷａｓｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎで３回洗浄する。
４．１００μＬのＳｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎをウェルに添加した後、室温で３０分間反応させる。
５．１００μＬのＳｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎをウェルに添加し、酵素反応を停止させる。
６．Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎの添加後１０分以内に波長４５０ｎｍのＯＤ（光学濃度）を測定することにより、ＣＡ１９−９の濃度を測定する。
【００３９】
本実施例の免疫学的検査具および市販のＥＬＩＳＡキットによるＣＡ１９−９濃度の測定結果を図３に示す。図３において、本実施例の免疫学的検査具による濃度はｐｇ／ｍＬの単位で示し、ＥＬＩＳＡキットによる濃度はＵ／ｍＬで示す。両者の測定結果を比較すると、膵液の希釈倍率に応じたＣＡ１９−９濃度の増減の傾向が非常によく相関している。この実験から、本発明に係る免疫学的検査具は、ＥＬＩＳＡ法による検査に比べて所要時間が短く操作が簡便でありながら、ＥＬＩＳＡ法と同等の感度で被検物質を検査できることが確認された。
【符号の説明】
【００４０】
１ 免疫学的検査具
２ 吸収片
２ａ 標識領域
２ｂ 検査領域
２ｃ 確認領域
３ カバー（被覆部材）
３ａ 被検液滴下窓（被検液滴下部）
３ｂ 判定窓
３ｃ 確認窓
４ 下限ライン（下限目印）
５ 蓋体（閉塞部材）
Ａ 被検液の液面
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定量の被検液を吸収可能であり、前記被検液に含まれる被検物質と特異的に結合する抗体が固相化された検査領域を有する吸収片と、
前記所定量より大きい容積を有し、その底部において前記吸収片の一端部と連通し、上部が開放された被検液滴下部とを備え、
該被検液滴下部は、前記底部側に区画される空間の体積が前記所定量となる深さ位置に下限目印が設けられている免疫学的検査具。
【請求項２】
前記吸収片が、前記一端部との間に前記検査領域を挟む他端部に、前記被検液により呈色する確認領域を有する請求項１に記載の免疫学的検査具。
【請求項３】
前記吸収片の外面を覆う被覆部材を備える請求項１または請求項２に記載の免疫学的検査具。
【請求項４】
前記被検液滴下部の前記上部を閉塞可能な閉塞部材を備える請求項１から請求項３のいずれかに記載の免疫学的検査具。
【請求項５】
前記被検液滴下部が、前記底部から前記上部に向かって漸次内径が大きくなるテーパ状の内面を有する請求項１から請求項４のいずれかに記載の免疫学的検査具。
【請求項１】
所定量の被検液を吸収可能であり、前記被検液に含まれる被検物質と特異的に結合する抗体が固相化された検査領域を有する吸収片と、
前記所定量より大きい容積を有し、その底部において前記吸収片の一端部と連通し、上部が開放された被検液滴下部とを備え、
該被検液滴下部は、前記底部側に区画される空間の体積が前記所定量となる深さ位置に下限目印が設けられている免疫学的検査具。
【請求項２】
前記吸収片が、前記一端部との間に前記検査領域を挟む他端部に、前記被検液により呈色する確認領域を有する請求項１に記載の免疫学的検査具。
【請求項３】
前記吸収片の外面を覆う被覆部材を備える請求項１または請求項２に記載の免疫学的検査具。
【請求項４】
前記被検液滴下部の前記上部を閉塞可能な閉塞部材を備える請求項１から請求項３のいずれかに記載の免疫学的検査具。
【請求項５】
前記被検液滴下部が、前記底部から前記上部に向かって漸次内径が大きくなるテーパ状の内面を有する請求項１から請求項４のいずれかに記載の免疫学的検査具。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１３−３００９（Ｐ２０１３−３００９Ａ）
【公開日】平成２５年１月７日（２０１３．１．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１３５５２３（Ｐ２０１１−１３５５２３）
【出願日】平成２３年６月１７日（２０１１．６．１７）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【公開日】平成２５年１月７日（２０１３．１．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年６月１７日（２０１１．６．１７）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
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