水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法
【課題】 水系におけるレジオネラ属細菌、特にアメーバなどとの共存状態におけるレジオネラ属細菌を、効果的に除菌する方法を提供する。
【解決手段】 本発明の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法は、アメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することを特徴とするもので、その添加量は１〜１０００mg／L の範囲であることが好ましい。
【解決手段】 本発明の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法は、アメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することを特徴とするもので、その添加量は１〜１０００mg／L の範囲であることが好ましい。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は冷凍装置の循環冷却水や２４時間風呂の循環温水などの、冷温水系あるいは蓄熱水系などにおける細菌類、特にレジオネラ属細菌を殺菌し、且つその増殖を防止する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】空調設備や冷蔵あるいは冷凍庫などに用いられる冷凍装置では、熱交換を効率的に行なうために、開放型の冷却塔などを用いて冷却した循環水を利用することが多い。かかる循環水中には外部から微生物などが入り込んで増殖し易く、スライムなどによる熱交換器の熱交換効率の低下や、濾過器の詰まりなどの障害を起こすほか、病原細菌、特にレジオネラ属細菌などが増殖して飛散すると、特殊な肺炎たとえば在郷軍人病やポンテアック熱のような病気の原因となる。
【０００３】このような微生物による問題の対策として、循環水系に抗菌剤を注入して細菌類の増殖を抑制する方法や、装置内を物理的に清掃洗浄しあるいは洗浄剤を用いて化学的に洗浄する方法などが用いられてきた。そして、レジオネラ属細菌を防除する殺菌剤として、従来から種々の化合物が提案されているが、実験室内で殺菌効果を示す薬剤でも、実際に稼働している水系に使用してみると、必ずしも十分な効果が得られないことが多かった。
【０００４】また、自然界におけるレジオネラ属細菌は、アメーバなどの細菌捕食性原生動物等に捕食されてもなお寄生して繁殖し、共生することが知られている。しかしこのようなアメーバなどとレジオネラ属細菌との共生関係が、レジオネラ属細菌の殺菌剤抵抗性にどのように影響するかについては、明らかではなかった。
【０００５】一方、ピリジニウム塩化合物が抗菌活性を有することは知られており、従来から消毒剤や殺菌剤として種々の用途に使用されている。しかし、冷却水などに添加して、レジオネラ属細菌を除菌するのに特に有効であるとは考えられていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、水系におけるレジオネラ属細菌、特にアメーバなどとの共存状態におけるレジオネラ属細菌の、増殖を防止するための有効な手段がなかったことに鑑み、かかる水系中、特にアメーバ共存水系中のレジオネラ属細菌を、効果的に除菌する方法を提供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記のような本発明の目的は、アメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することを特徴とする、水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法によって達成することができる。かかるピリジニウム塩化合物としては、下記の化７、化８、化９、化１０、化１１及び化１２のいずれかの式で表される化合物から選ばれたものであるのがよい。
【０００８】
【化７】
式中、Ｒはアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかであり、Ｙ及びＺはそれぞれが−Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＮＨ2 のいずれかである。
【化８】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化９】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化１０】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化１１】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化１２】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法は、水系中にレジオネラ属細菌が単独で存在している場合のみならず、特にアメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することにより、細菌類や原生動物等を共に防除でき、極めて効果的にレジオネラ属細菌を除菌できるものである。
【００１０】本発明の方法において、水系中に添加されるピリジニウム塩化合物の量は、１〜１０００mg／L の範囲であってよいが、経済上などの点から、１〜５００mg／L の範囲となるよう添加するのが好ましい。また、水系中へのピリジニウム塩化合物の添加方法については特に制限はないが、対象水系に対して数日から１ケ月の範囲の間隔をおいて間欠的に添加する方法や、水系中の薬剤濃度が一定値以上に維持できるように、補給水などに対して連続的に添加する方法などを利用することができ、これらの方法によって十分な除菌効果を得ることができる。
【００１１】ここでレジオネラ属細菌の除菌に用いられるピリジニウム塩化合物としては、例えばドデシルピリジニウム−アイオダイドなどの前記化７に示される式Ａの化合物、例えば４，４′−（ヘキサメチレンジチオ）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化８に示される式Ｂの化合物、例えば４，４′−（ヘキサメチレンジオキシジカルボニル）ビス（１−オクチルピリジニウム−アイオダイド）などの前記化９に示される式Ｃの化合物、例えばＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−デシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）、Ｎ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化１０に示される式Ｄの化合物、例えば４，４′−（テトラメチレンジカルボニルジアミノ）ビス（１−デシルピリジニウム−ブロマイド）、４，４′−（ｐ−フタルアミド）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化１１に示される式Ｅの化合物、例えばＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化１２に示される式Ｆの化合物等を挙げることができる。
【００１２】本発明の方法に従ってピリジニウム塩化合物を使用するに当たり、通常の水処理剤に配合される腐食防止剤、スケール防止剤、分散剤などの薬剤を併用することができる。かかる併用可能な薬剤として、１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸、２−ホスホノブタン−１，２，４−トリカルボン酸、ポリマレイン酸、ポリアクリル酸、ホスフィン酸又はその塩、正リン酸又はその塩、重合リン酸塩、モリブデン酸塩、亜硝酸塩、珪酸塩、水溶性亜鉛化合物などを挙げることができる。
【００１３】
【実施例】（第１実施例）表１に示した配合組成を有するＢＣＹＥα平板培地上に、レジオネラ(Legionella pneumophila)を接種して３６℃で２日間培養した。
【００１４】
【表１】ＢＣＹＥα平板培地純水 １０００ mL酵母エキス １０．０ ｇＡＣＥＳバッファー １０．０ ｇＬ−システイン１塩酸塩 ０．４ ｇ可溶性ピロ燐酸鉄 ０．２５ｇαケトグルタル酸 １．０ ｇ活性炭粉末 １．５ ｇ寒天 １５ ｇｐＨ ６．９
【００１５】次に、ピリジニウム塩化合物として、式Ａの化合物であるドデシルピリジニウム−アイオダイド（P-12と略記）、式Ｂの化合物である４，４′−（ヘキサメチレンジチオ）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）（S-6,8 と略記）、式Ｃの化合物である４，４′−（ヘキサメチレンジオキシジカルボニル）ビス（１−オクチルピリジニウム−アイオダイド）（4DOCBP-6,8と略記）、式Ｄの化合物であるＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−デシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）（4BP-6,10と略記）及びＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）（4BP-6,12と略記）、式Ｅの化合物である４，４′−（テトラメチレンジカルボニルジアミノ）ビス（１−デシルピリジニウム−ブロマイド）（4RBP-4,10 と略記）及び４，４′−（ｐ−フタルアミド）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）（4DCABP-P,8と略記）、式Ｆの化合物であるＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）（3BP-6,12と略記）を用意し、また比較のために、ピリジニウム塩化合物の代わりの公知の殺菌剤である、１０．１％の５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンと３．８％の２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンとを含む薬剤（ローム・アンド・ハース社商品、KATHON WT と略記）、及び２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール（一般名：ブロノポール、BRNPOLと略記）を用意した。
【００１６】そして、前記の培養レジオネラをｐＨ７の燐酸緩衝液に１０4 個／mLオーダーとなるように接種したのち、その液の一部をＢＣＹＥα平板培地に塗布し、３６℃で５日間培養後のコロニー数をカウントすることにより、生菌数を測定したところ、３．３×１０4 個／mLであることを確認した。次いでこの液をそれぞれの培養フラスコに分けて入れ、殺菌剤無添加のものと、上記の各殺菌剤をそれぞれ１、５、１０及び５０mg／L の濃度となるよう添加したものとを調製し、３７℃で２４時間振盪培養したのち、それぞれの生菌数（個／mL）を上記と同様にして測定した。こうして得た培養後の生菌数の値を、表２に示した。
【００１７】
【表２】
【００１８】表２の結果から、ピリジニウム塩化合物はレジオネラに対して、従来公知の殺菌剤に比較して略同等の殺菌力を有するものであることが分かる。
【００１９】（第２実施例）表３に示した配合組成を有するＰＹＧＣ培地を入れた培養フラスコに、アメーバ（Acanthamoeba）を接種して３０℃で４日間培養し、古い培地を捨てて新しいＰＹＧＣ培地を加え、これに第１実施例と同様にしてＢＣＹＥα平板培地上で２日間培養したレジオネラを接種し、３０℃で４日間培養して、アメーバとレジオネラとが共生している状態とした。
【００２０】この培養フラスコ内の培地を攪拌してアメーバを壁面から剥離し、培養液の一部を血球計数盤に滴下して顕微鏡下でアメーバ数を測定したところ、アメーバ数は１．３×１０6 個／mLであった。また、培養液の別の一部を取り出し、１００００rpm で２０分間の遠心操作を行ってアメーバを破壊したのち、ＢＣＹＥα平板培地に塗布し、３６℃で５日間培養後のコロニー数をカウントすることにより、レジオネラの菌数を測定したところ、８．９×１０5 個／mLであった。
【００２１】
【表３】ＰＹＧＣ培地純水 ９５０ mLプロテアーゼペプトン １０．０ ｇ酵母エキス １０．０ ｇ５０％ブドウ糖水溶液 ２０ mLＬ−システイン１塩酸塩 ０．９５ｇ塩化ナトリウム ５．０ ｇ０．５モル燐酸水素２ナトリウム水溶液 ２０ mL０．５モル燐酸２水素カリウム水溶液 １０ mL０．４モル塩化マグネシウム水溶液 ５ mL０．４モル塩化カルシウム水溶液 １ mLｐＨ ６．５
【００２２】前記のアメーバとレジオネラとが共生した培地を入れた培養フラスコに、第１実施例で用いたのと同じ各殺菌剤を、それぞれ１０、３０及び１００mg／L の濃度となるようそれぞれ添加したもの、及び殺菌剤無添加のものを調製し、３０℃で７日間培養した。そして、顕微鏡観察によりアメーバの形態を調べた後、培養液を攪拌してアメーバとレジオネラとを均一に分散させ、その培養液の一部を取り出し、１００００rpm で２０分間の遠心操作を行ってアメーバを破壊したのち、ＢＣＹＥα平板培地に塗布し、３６℃で５日間培養後のコロニー数をカウントすることによりレジオネラの生菌数（個／mL）を測定し、その結果を表４に示した。
【００２３】その一方で上記の均一に混合分散させた培養液の別の一部を、そのまま新しいＰＹＧＣ培地に接種して３０℃で７日間培養し、アメーバの生死状態を調べた。そして前記の顕微鏡観察結果とあわせて、栄養体として生存している状態を＋、嚢子化して生存している状態を±、死滅している状態を−として、表４に併せて示した。
【００２４】
【表４】
【００２５】表４の結果から、レジオネラに対して優れた殺菌力を示す従来公知の殺菌剤が、アメーバ共存状態ではレジオネラを有効に除菌することができないのに対し、ピリジニウム塩化合物はアメーバに対しても殺生力があり、アメーバ共存状態のレジオネラをも効果的に除菌できることが分かる。
【００２６】
【発明の効果】本発明は、水系中にピリジニウム塩化合物を添加することにより、水系中のレジオネラ属細菌を除菌するもので、従来のレジオネラ属細菌用の殺菌剤では除菌できなかったようなアメーバ共存下の水系中のレジオネラ属細菌を、効果的に除菌することができるという効果があり、しかも濃度の高い水溶液として使用する場合でも、一般的な第四級アンモニウム塩のように泡立ちが著しくないので、取扱いが容易であるという利点がある。
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は冷凍装置の循環冷却水や２４時間風呂の循環温水などの、冷温水系あるいは蓄熱水系などにおける細菌類、特にレジオネラ属細菌を殺菌し、且つその増殖を防止する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】空調設備や冷蔵あるいは冷凍庫などに用いられる冷凍装置では、熱交換を効率的に行なうために、開放型の冷却塔などを用いて冷却した循環水を利用することが多い。かかる循環水中には外部から微生物などが入り込んで増殖し易く、スライムなどによる熱交換器の熱交換効率の低下や、濾過器の詰まりなどの障害を起こすほか、病原細菌、特にレジオネラ属細菌などが増殖して飛散すると、特殊な肺炎たとえば在郷軍人病やポンテアック熱のような病気の原因となる。
【０００３】このような微生物による問題の対策として、循環水系に抗菌剤を注入して細菌類の増殖を抑制する方法や、装置内を物理的に清掃洗浄しあるいは洗浄剤を用いて化学的に洗浄する方法などが用いられてきた。そして、レジオネラ属細菌を防除する殺菌剤として、従来から種々の化合物が提案されているが、実験室内で殺菌効果を示す薬剤でも、実際に稼働している水系に使用してみると、必ずしも十分な効果が得られないことが多かった。
【０００４】また、自然界におけるレジオネラ属細菌は、アメーバなどの細菌捕食性原生動物等に捕食されてもなお寄生して繁殖し、共生することが知られている。しかしこのようなアメーバなどとレジオネラ属細菌との共生関係が、レジオネラ属細菌の殺菌剤抵抗性にどのように影響するかについては、明らかではなかった。
【０００５】一方、ピリジニウム塩化合物が抗菌活性を有することは知られており、従来から消毒剤や殺菌剤として種々の用途に使用されている。しかし、冷却水などに添加して、レジオネラ属細菌を除菌するのに特に有効であるとは考えられていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、水系におけるレジオネラ属細菌、特にアメーバなどとの共存状態におけるレジオネラ属細菌の、増殖を防止するための有効な手段がなかったことに鑑み、かかる水系中、特にアメーバ共存水系中のレジオネラ属細菌を、効果的に除菌する方法を提供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記のような本発明の目的は、アメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することを特徴とする、水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法によって達成することができる。かかるピリジニウム塩化合物としては、下記の化７、化８、化９、化１０、化１１及び化１２のいずれかの式で表される化合物から選ばれたものであるのがよい。
【０００８】
【化７】
式中、Ｒはアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかであり、Ｙ及びＺはそれぞれが−Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＮＨ2 のいずれかである。
【化８】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化９】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化１０】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化１１】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化１２】
式中、Ｒ1 はアルキル基、好ましくは炭素数６〜１６のアルキル基であり、Ｒ2 は炭素数２以上、好ましくは炭素数２〜８のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法は、水系中にレジオネラ属細菌が単独で存在している場合のみならず、特にアメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することにより、細菌類や原生動物等を共に防除でき、極めて効果的にレジオネラ属細菌を除菌できるものである。
【００１０】本発明の方法において、水系中に添加されるピリジニウム塩化合物の量は、１〜１０００mg／L の範囲であってよいが、経済上などの点から、１〜５００mg／L の範囲となるよう添加するのが好ましい。また、水系中へのピリジニウム塩化合物の添加方法については特に制限はないが、対象水系に対して数日から１ケ月の範囲の間隔をおいて間欠的に添加する方法や、水系中の薬剤濃度が一定値以上に維持できるように、補給水などに対して連続的に添加する方法などを利用することができ、これらの方法によって十分な除菌効果を得ることができる。
【００１１】ここでレジオネラ属細菌の除菌に用いられるピリジニウム塩化合物としては、例えばドデシルピリジニウム−アイオダイドなどの前記化７に示される式Ａの化合物、例えば４，４′−（ヘキサメチレンジチオ）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化８に示される式Ｂの化合物、例えば４，４′−（ヘキサメチレンジオキシジカルボニル）ビス（１−オクチルピリジニウム−アイオダイド）などの前記化９に示される式Ｃの化合物、例えばＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−デシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）、Ｎ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化１０に示される式Ｄの化合物、例えば４，４′−（テトラメチレンジカルボニルジアミノ）ビス（１−デシルピリジニウム−ブロマイド）、４，４′−（ｐ−フタルアミド）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化１１に示される式Ｅの化合物、例えばＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）などの前記化１２に示される式Ｆの化合物等を挙げることができる。
【００１２】本発明の方法に従ってピリジニウム塩化合物を使用するに当たり、通常の水処理剤に配合される腐食防止剤、スケール防止剤、分散剤などの薬剤を併用することができる。かかる併用可能な薬剤として、１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸、２−ホスホノブタン−１，２，４−トリカルボン酸、ポリマレイン酸、ポリアクリル酸、ホスフィン酸又はその塩、正リン酸又はその塩、重合リン酸塩、モリブデン酸塩、亜硝酸塩、珪酸塩、水溶性亜鉛化合物などを挙げることができる。
【００１３】
【実施例】（第１実施例）表１に示した配合組成を有するＢＣＹＥα平板培地上に、レジオネラ(Legionella pneumophila)を接種して３６℃で２日間培養した。
【００１４】
【表１】ＢＣＹＥα平板培地純水 １０００ mL酵母エキス １０．０ ｇＡＣＥＳバッファー １０．０ ｇＬ−システイン１塩酸塩 ０．４ ｇ可溶性ピロ燐酸鉄 ０．２５ｇαケトグルタル酸 １．０ ｇ活性炭粉末 １．５ ｇ寒天 １５ ｇｐＨ ６．９
【００１５】次に、ピリジニウム塩化合物として、式Ａの化合物であるドデシルピリジニウム−アイオダイド（P-12と略記）、式Ｂの化合物である４，４′−（ヘキサメチレンジチオ）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）（S-6,8 と略記）、式Ｃの化合物である４，４′−（ヘキサメチレンジオキシジカルボニル）ビス（１−オクチルピリジニウム−アイオダイド）（4DOCBP-6,8と略記）、式Ｄの化合物であるＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−デシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）（4BP-6,10と略記）及びＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）（4BP-6,12と略記）、式Ｅの化合物である４，４′−（テトラメチレンジカルボニルジアミノ）ビス（１−デシルピリジニウム−ブロマイド）（4RBP-4,10 と略記）及び４，４′−（ｐ−フタルアミド）ビス（１−オクチルピリジニウム−ブロマイド）（4DCABP-P,8と略記）、式Ｆの化合物であるＮ，Ｎ′−ヘキサメチレン−ビス（１−ドデシル−４−カルバモイルピリジニウム−ブロマイド）（3BP-6,12と略記）を用意し、また比較のために、ピリジニウム塩化合物の代わりの公知の殺菌剤である、１０．１％の５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンと３．８％の２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンとを含む薬剤（ローム・アンド・ハース社商品、KATHON WT と略記）、及び２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール（一般名：ブロノポール、BRNPOLと略記）を用意した。
【００１６】そして、前記の培養レジオネラをｐＨ７の燐酸緩衝液に１０4 個／mLオーダーとなるように接種したのち、その液の一部をＢＣＹＥα平板培地に塗布し、３６℃で５日間培養後のコロニー数をカウントすることにより、生菌数を測定したところ、３．３×１０4 個／mLであることを確認した。次いでこの液をそれぞれの培養フラスコに分けて入れ、殺菌剤無添加のものと、上記の各殺菌剤をそれぞれ１、５、１０及び５０mg／L の濃度となるよう添加したものとを調製し、３７℃で２４時間振盪培養したのち、それぞれの生菌数（個／mL）を上記と同様にして測定した。こうして得た培養後の生菌数の値を、表２に示した。
【００１７】
【表２】
【００１８】表２の結果から、ピリジニウム塩化合物はレジオネラに対して、従来公知の殺菌剤に比較して略同等の殺菌力を有するものであることが分かる。
【００１９】（第２実施例）表３に示した配合組成を有するＰＹＧＣ培地を入れた培養フラスコに、アメーバ（Acanthamoeba）を接種して３０℃で４日間培養し、古い培地を捨てて新しいＰＹＧＣ培地を加え、これに第１実施例と同様にしてＢＣＹＥα平板培地上で２日間培養したレジオネラを接種し、３０℃で４日間培養して、アメーバとレジオネラとが共生している状態とした。
【００２０】この培養フラスコ内の培地を攪拌してアメーバを壁面から剥離し、培養液の一部を血球計数盤に滴下して顕微鏡下でアメーバ数を測定したところ、アメーバ数は１．３×１０6 個／mLであった。また、培養液の別の一部を取り出し、１００００rpm で２０分間の遠心操作を行ってアメーバを破壊したのち、ＢＣＹＥα平板培地に塗布し、３６℃で５日間培養後のコロニー数をカウントすることにより、レジオネラの菌数を測定したところ、８．９×１０5 個／mLであった。
【００２１】
【表３】ＰＹＧＣ培地純水 ９５０ mLプロテアーゼペプトン １０．０ ｇ酵母エキス １０．０ ｇ５０％ブドウ糖水溶液 ２０ mLＬ−システイン１塩酸塩 ０．９５ｇ塩化ナトリウム ５．０ ｇ０．５モル燐酸水素２ナトリウム水溶液 ２０ mL０．５モル燐酸２水素カリウム水溶液 １０ mL０．４モル塩化マグネシウム水溶液 ５ mL０．４モル塩化カルシウム水溶液 １ mLｐＨ ６．５
【００２２】前記のアメーバとレジオネラとが共生した培地を入れた培養フラスコに、第１実施例で用いたのと同じ各殺菌剤を、それぞれ１０、３０及び１００mg／L の濃度となるようそれぞれ添加したもの、及び殺菌剤無添加のものを調製し、３０℃で７日間培養した。そして、顕微鏡観察によりアメーバの形態を調べた後、培養液を攪拌してアメーバとレジオネラとを均一に分散させ、その培養液の一部を取り出し、１００００rpm で２０分間の遠心操作を行ってアメーバを破壊したのち、ＢＣＹＥα平板培地に塗布し、３６℃で５日間培養後のコロニー数をカウントすることによりレジオネラの生菌数（個／mL）を測定し、その結果を表４に示した。
【００２３】その一方で上記の均一に混合分散させた培養液の別の一部を、そのまま新しいＰＹＧＣ培地に接種して３０℃で７日間培養し、アメーバの生死状態を調べた。そして前記の顕微鏡観察結果とあわせて、栄養体として生存している状態を＋、嚢子化して生存している状態を±、死滅している状態を−として、表４に併せて示した。
【００２４】
【表４】
【００２５】表４の結果から、レジオネラに対して優れた殺菌力を示す従来公知の殺菌剤が、アメーバ共存状態ではレジオネラを有効に除菌することができないのに対し、ピリジニウム塩化合物はアメーバに対しても殺生力があり、アメーバ共存状態のレジオネラをも効果的に除菌できることが分かる。
【００２６】
【発明の効果】本発明は、水系中にピリジニウム塩化合物を添加することにより、水系中のレジオネラ属細菌を除菌するもので、従来のレジオネラ属細菌用の殺菌剤では除菌できなかったようなアメーバ共存下の水系中のレジオネラ属細菌を、効果的に除菌することができるという効果があり、しかも濃度の高い水溶液として使用する場合でも、一般的な第四級アンモニウム塩のように泡立ちが著しくないので、取扱いが容易であるという利点がある。
【特許請求の範囲】
【請求項１】 アメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することを特徴とする、水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法。
【請求項２】 ピリジニウム塩化合物が、下記の化１、化２、化３、化４、化５及び化６のいずれかの式で表される化合物から選ばれたものである、請求項１に記載の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法。
【化１】
式中、Ｒはアルキル基、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかであり、Ｙ及びＺはそれぞれが−Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＮＨ2 のいずれかである。
【化２】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化３】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化４】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化５】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化６】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【請求項３】 ピリジニウム塩化合物の添加量が１〜１０００mg／L の範囲にある、請求項１又は２に記載の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法。
【請求項１】 アメーバとレジオネラ属細菌とが共存している水系に対して、ピリジニウム塩化合物を添加することを特徴とする、水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法。
【請求項２】 ピリジニウム塩化合物が、下記の化１、化２、化３、化４、化５及び化６のいずれかの式で表される化合物から選ばれたものである、請求項１に記載の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法。
【化１】
式中、Ｒはアルキル基、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかであり、Ｙ及びＺはそれぞれが−Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＮＨ2 のいずれかである。
【化２】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化３】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化４】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化５】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【化６】
式中、Ｒ1 はアルキル基、Ｒ2 は炭素数２以上のポリメチレン基か、またはｐ−フェニレン基であり、ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉのいずれかである。
【請求項３】 ピリジニウム塩化合物の添加量が１〜１０００mg／L の範囲にある、請求項１又は２に記載の水系中のレジオネラ属細菌の除菌方法。
【公開番号】特開平１１−１９７６７３
【公開日】平成１１年（１９９９）７月２７日
【国際特許分類】
【出願番号】特願平１０−２２４６
【出願日】平成１０年（１９９８）１月８日
【出願人】（０００１０１０４２）アクアス株式会社 (66)
【公開日】平成１１年（１９９９）７月２７日
【国際特許分類】
【出願日】平成１０年（１９９８）１月８日
【出願人】（０００１０１０４２）アクアス株式会社 (66)
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