炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法
【課題】疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案する。
【解決手段】健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法。
【解決手段】健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(Inflammatory Bowel Disease)等の慢性炎症の鑑別に関する。
【背景技術】
【０００２】
疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別は難しく、これまで内視鏡診断などに頼ってきているが、それでも内視鏡だけでは程度の軽い場合などは判断が簡単ではない。また、治療効果などの判定のたびに内視鏡診断を行うのでは、患者さんに対する侵襲性が高い為、簡便な鑑別方法が求められている。特に、治療効果の検証をする上で、内視鏡診断は現実的な手法とは言いがたかった。
【０００３】
本願の発明者等は、炎症性腸疾患(IBD)の鑑別法として血清IgGの糖鎖異常（フコシル化ガラクトース欠損IgGの増加）が有効であることを発見し、国立大学法人大阪大学より特許申請（特許文献１）するとともに論文に公表した (非特許文献１)。この研究内容については、アメリカの消化器病学会のニュースにも取り上げられ、国際的な注目を浴びた。
【０００４】
なお、ガラストース欠損IgGに関しては、慢性関節リウマチを代表する自己免疫性疾患でも増加することが古くから知られているため、自己免疫疾患分野における応用も期待される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開公報ＷＯ２００７／１３６００１Ａ１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Shinzaki et al. Am. J. Gastroenterology 103 (5), 1173-1181
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１、非特許文献１の提案は、方法論的には、血清からIgG（免疫グロブリンＧ）を単離後、糖鎖を遊離し、蛍光標識した後に、高速液体クロマログラフィー（HPLC）で解析するものである。定量性、再現性に非常に優れ、異なる患者集団でvalidationを行ったが、ほぼ最初の検討結果に一致した。
【０００８】
しかし、1検体当たりの解析に時間がかかり、将来的に多検体処理を行う方法としては、HPLCは必ずしも適当でないと思われる。
【０００９】
前記の特許文献１、非特許文献１の提案により、糖鎖構造の相違によって炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症疾患を鑑別する技術は向上したが、設備、技術力、鑑別する人間の能力の問題でこの手法が使える施設は限定されており、工程が複雑である為、必要な時間、労力とも多大である。
【００１０】
そこで、この発明は、疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案することを目的にしている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本願の請求項１記載の発明は、
健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１２】
請求項２記載の発明は、
使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを特徴とする請求項１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１３】
請求項３記載の発明は、
鑑別の対象とする生体分子を抗体とすることを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１４】
請求項４記載の発明は、
鑑別の対象とする被検体をIgG、又は、その分解物、若しくは、その変性物としたことを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１５】
請求項５記載の発明は、
鑑別はそれぞれのレクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１６】
請求項６記載の発明は、
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項５記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１７】
請求項７記載の発明は、
鑑別はWGAのシグナルに対するそれぞれのレクチン比率が、cut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１８】
請求項８記載の発明は、
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１９】
請求項９記載の発明は、
鑑別の為の検出方法は、アレイ、ELISA、Western Blotting、FACSのいずれかを対象とする請求項１乃至請求項８のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２０】
請求項１０記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、Protein-AまたはProtein-G／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズ含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２１】
請求項１１記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／Protein AまたはProtein G／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２２】
請求項１２記載の発明、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、抗IgG抗体／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２３】
請求項１３記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２４】
請求項１４記載の発明は、
前記抗IgG抗体は、抗体のfull bodyである場合、抗原認識部位を含む抗体の一部である場合、キメラ抗体を含む人工的に処理した抗体である場合を含むことを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２５】
請求項１５記載の発明は、
前記抗IgG抗体の替わりに、IgGを特異的に認識する人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸のいずれかが使用されることを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２６】
請求項１６記載の発明は、
請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、sandwich assayの最上部に位置する分子をラベルすることを特徴とする請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２７】
請求項１７記載の発明は、
請求項１０乃至１６のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、更に、二次抗体を用いる、あるいはラベルした二次抗体を用いることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２８】
請求項１８記載の発明は、
請求項１６または請求項１７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２９】
請求項１９記載の発明は、
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項１８記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３０】
請求項２０記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayでない場合、被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３１】
請求項２１記載の発明は、
前記選択レクチンの代わりに、前記選択レクチンが認識する糖鎖構造と同様の構造を認識する抗糖鎖抗体、人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸を用いることを特徴とする請求項１０乃至請求項２０のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３２】
請求項２２記載の発明は、
請求項２０乃または請求項２１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記被検者試料を直接ラベルすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３３】
請求項２３記載の発明は、
前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする請求項２２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３４】
請求項２４記載の発明は、
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項２３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【発明の効果】
【００３５】
本発明により、IgG（免疫グロブリンＧ）の糖鎖異常を短時間に多検体処理が可能になる。
【００３６】
フコシル化ガラクトース欠損IgGの量は、炎症性腸疾患の臨床的活動性と相関し、少数例での検討ではあるが、治療効果の予測にも応用できることがわかっている。
【００３７】
本発明は高速液体クロマログラフィー（HPLC）のように、特定の研究機関でなければ解析できないことはなく、どこの施設でも測定可能と言える。従って、広く臨床検査として普及させることが可能である。
【００３８】
また、レクチンアレイを使って診断に利用できるものを絞り込む手法は、疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別に限らず、糖鎖を対象とするあらゆる疾患の鑑別に対して有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】本発明の方法を用いて健常及び疾病間のsignalの相違を確認する鑑別方法の模式図。
【図２】WGAとGSL-IIを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。
【図３】WGAとABAを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。
【図４】WGAとHPAを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。
【図５】ＧＳＬ−ＩＩを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図６】ＡＢＡを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図７】ＨＰＡを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図８】ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図９】ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。
【図１０】Ｃａｌｓｅｐａを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図１１】Ｃａｌｓｅｐａを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。
【図１２】ＰＳＡ、ＬＣＡを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を高速液体クロマログラフィー（HPLC）などを使用することなしに簡便に、例えば、臨床現場でも行えるようにする場合、鑑別方法候補としては、ELISA法を検討する必要がある。
【００４１】
このELISA法でレクチン（Lectin）を用いる場合、どのレクチンを用いるかが非常に重要であり、その選択方法が鑑別の成否を左右すると言っても過言ではない。本発明では、特有のLectin Arrayを用いている。
【００４２】
炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症を鑑別する為のtarget moleculeは糖鎖（糖鎖を含む分子）である為、糖鎖構造を反映したシグナルを検出するために用いることのできる分子を使用することで、汎用的且つ簡便な鑑別方法を実現できる。
【００４３】
糖鎖構造を反映したシグナルを検出するために用いることのできる分子としては、一般的には抗糖鎖抗体、レクチン、ペプチドなどが考えられる。
【００４４】
これらの分子から炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症を鑑別できる分子を選択して、疾患由来抗体とこれらの分子の結合状態をシグナルにすることで、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案することができる。
【００４５】
一例としてレクチンを用いる方法について記す。
【００４６】
４５種類のレクチンを固相化したレクチンアレイを用いて、炎症性腸疾患患者のIgGの糖鎖を鑑別するレクチンを選択する。
【００４７】
疾患の鑑別方法においては、レクチンを固層化する為の担体、等の構造を基本とし、ラベルの内容によっては更にシグナル検出用の分子（酵素や二次抗体を含む）を加えることもある。
【００４８】
レクチンを固層化する為の担体としては次のようなものを採用できる。
【００４９】
抗IgG抗体／サンプルタンパク／選択レクチン／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５０】
蛍光物質やRI等でラベルしたサンプルタンパク／選択レクチン／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５１】
選択レクチン／サンプルタンパク／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５２】
蛍光物質やRI等でラベルした選択レクチン／サンプルタンパク／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５３】
これらの基本構造に対して、蛍光、発光、RI、発色等の方法でシグナルを検出する。
【００５４】
また、用いる抗IgG抗体はIgG full body、Fab化したもの、IgGの糖鎖を処理したものなど対象によって使い分ける。
【００５５】
最終的に用いる手法としては、ELISA、アレイ、によるシグナル検出が適当であるが、これらの分子あるいはこれらの分子と同様の認識を示す分子を用いるあらゆる方法に本発明で提示する方法や分子を利用することができる。
【実施例】
【００５６】
本発明による方法の効果、特に、選択レクチンによる鑑別の効果を確認することを目的として、図１に示す形体で、健常及び疾病間のsignalの相違を確認した。
【００５７】
図１の模式図に現したように、基板上にレクチン２種類を固定し（WGAと、GSL-II、 ABA 又は HPA）、これらのレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較した。
【００５８】
WGAとGSL-IIを用いた場合は、図２に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００５９】
WGAとABAを使用した場合は、図３に示したように、図２図示のGSL-IIの場合と同様に、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００６０】
WGAとHPAを使用した場合は、図４に示したように、GSL-II及びHPAの場合と同様に、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００６１】
以上の結果より炎症性腸疾患の鑑別をレクチン（Lectin）を使用することで効果的に行えることが明らかとなった。
【００６２】
また、使用するレクチンを、GSL-II、ABA、HPA、WGAの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることで炎症性腸疾患の鑑別を行えると考えられた。
【００６３】
なお、ここでは検証を行っていないが、BLLはABAと同様の特性を有することが知られているので、前記において、ABAに替えてBLLをレクチンとして使用しても同様に炎症性腸疾患の鑑別を行うことができると考えられる。
【００６４】
また、前記のより、鑑別の対象とする生体分子を抗体にして、（Lectin）を使用して炎症性腸疾患の鑑別を行うことができることを確認できた。前記ではIgGを鑑別の対象とする生体分子にしている。
【００６５】
なお、前記の実施例では、鑑別の対象とする生体分子を抗体（IgG）にしているが、IgGの分解物、又は、IgGの変性物を鑑別の対象とする生体分子にしても、前記の実施例と同様に、（Lectin）を使用して炎症性腸疾患の鑑別を行うことができると考えられる。
【００６６】
更に、図２〜図４の結果に表わされているように、前記実施例のいずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間の鑑別が可能であることを確認できた。
【００６７】
次に、規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であるか検討した。
【００６８】
前記と同様に、基板上にレクチン（ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較した。
【００６９】
図５、図６、図７は、それぞれ、レクチンとして、ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡを用いた場合の、規格化しないシグナル強度で鑑別が可能であるか判定したものであるが、いずれの場合でも鑑別が可能であった。
【００７０】
すなわち、ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡを組み合わせず、１種類で使用した場合であっても、図５、図６、図７に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＶ）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００７１】
この場合も、図５〜図７の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＶ）間の鑑別が可能であった。
【００７２】
同様に、レクチンとしてＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用い、前記と同様に、基板上にレクチン（ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉ及び、これらとＷＧＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較し、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。
【００７３】
図８図示のように、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉの規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であった。
【００７４】
すなわち、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを組み合わせず、１種類で使用した場合であっても、図８に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００７５】
また、複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことができた。
【００７６】
この場合も、図８の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００７７】
また、図９図示のように、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−ＩのＷＧＡで規格化したシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であった。すなわち、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉと、ＷＧＡとの組み合わせにすることで炎症性腸疾患の鑑別を行うことができた。ここでも、複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことが可能であった。
【００７８】
この場合も、図９の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００７９】
なお、図８、図９に示された実験結果から、α2、6 sialic acid を認識するレクチンであれば、上記のＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉに限られず使用可能であることを確認できた。
【００８０】
また、レクチンとしてＣａｌｓｅｐａを用い、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。更に、レクチンとしてＰＳＡ、ＬＣＡを用い、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。すなわち、レクチンとしてＣａｌｓｅｐａ、ＰＳＡ、ＬＣＡを用い、前記と同様に、基板上にレクチン（Ｃａｌｓｅｐａ、ＣａｌｓｅｐａとＷＧＡ、ＰＳＡとＷＧＡ、ＬＣＡとＷＧＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較し、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。
【００８１】
図１０図示のように、Ｃａｌｓｅｐａの規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であり、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００８２】
更に、図１１、図１２図示のように、Ｃａｌｓｅｐａ、ＰＳＡ、ＬＣＡのＷＧＡで規格化したシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であり、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００８３】
以上、添付図面を参照して本発明の好ましい実施形態、実施例を説明したが、本発明はこれらに限られること無く、特許請求の範囲の記載から把握される技術的範囲において種々に変更可能である。
【００８４】
例えば、健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行うにあたり、使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを説明したが、これらは例示であり、同等の認識機能を持つレクチン、抗体であればこれらに限られない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(Inflammatory Bowel Disease)等の慢性炎症の鑑別に関する。
【背景技術】
【０００２】
疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別は難しく、これまで内視鏡診断などに頼ってきているが、それでも内視鏡だけでは程度の軽い場合などは判断が簡単ではない。また、治療効果などの判定のたびに内視鏡診断を行うのでは、患者さんに対する侵襲性が高い為、簡便な鑑別方法が求められている。特に、治療効果の検証をする上で、内視鏡診断は現実的な手法とは言いがたかった。
【０００３】
本願の発明者等は、炎症性腸疾患(IBD)の鑑別法として血清IgGの糖鎖異常（フコシル化ガラクトース欠損IgGの増加）が有効であることを発見し、国立大学法人大阪大学より特許申請（特許文献１）するとともに論文に公表した (非特許文献１)。この研究内容については、アメリカの消化器病学会のニュースにも取り上げられ、国際的な注目を浴びた。
【０００４】
なお、ガラストース欠損IgGに関しては、慢性関節リウマチを代表する自己免疫性疾患でも増加することが古くから知られているため、自己免疫疾患分野における応用も期待される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開公報ＷＯ２００７／１３６００１Ａ１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Shinzaki et al. Am. J. Gastroenterology 103 (5), 1173-1181
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１、非特許文献１の提案は、方法論的には、血清からIgG（免疫グロブリンＧ）を単離後、糖鎖を遊離し、蛍光標識した後に、高速液体クロマログラフィー（HPLC）で解析するものである。定量性、再現性に非常に優れ、異なる患者集団でvalidationを行ったが、ほぼ最初の検討結果に一致した。
【０００８】
しかし、1検体当たりの解析に時間がかかり、将来的に多検体処理を行う方法としては、HPLCは必ずしも適当でないと思われる。
【０００９】
前記の特許文献１、非特許文献１の提案により、糖鎖構造の相違によって炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症疾患を鑑別する技術は向上したが、設備、技術力、鑑別する人間の能力の問題でこの手法が使える施設は限定されており、工程が複雑である為、必要な時間、労力とも多大である。
【００１０】
そこで、この発明は、疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案することを目的にしている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本願の請求項１記載の発明は、
健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１２】
請求項２記載の発明は、
使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを特徴とする請求項１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１３】
請求項３記載の発明は、
鑑別の対象とする生体分子を抗体とすることを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１４】
請求項４記載の発明は、
鑑別の対象とする被検体をIgG、又は、その分解物、若しくは、その変性物としたことを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１５】
請求項５記載の発明は、
鑑別はそれぞれのレクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１６】
請求項６記載の発明は、
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項５記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１７】
請求項７記載の発明は、
鑑別はWGAのシグナルに対するそれぞれのレクチン比率が、cut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１８】
請求項８記載の発明は、
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００１９】
請求項９記載の発明は、
鑑別の為の検出方法は、アレイ、ELISA、Western Blotting、FACSのいずれかを対象とする請求項１乃至請求項８のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２０】
請求項１０記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、Protein-AまたはProtein-G／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズ含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２１】
請求項１１記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／Protein AまたはProtein G／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２２】
請求項１２記載の発明、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、抗IgG抗体／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２３】
請求項１３記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２４】
請求項１４記載の発明は、
前記抗IgG抗体は、抗体のfull bodyである場合、抗原認識部位を含む抗体の一部である場合、キメラ抗体を含む人工的に処理した抗体である場合を含むことを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２５】
請求項１５記載の発明は、
前記抗IgG抗体の替わりに、IgGを特異的に認識する人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸のいずれかが使用されることを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２６】
請求項１６記載の発明は、
請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、sandwich assayの最上部に位置する分子をラベルすることを特徴とする請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２７】
請求項１７記載の発明は、
請求項１０乃至１６のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、更に、二次抗体を用いる、あるいはラベルした二次抗体を用いることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２８】
請求項１８記載の発明は、
請求項１６または請求項１７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００２９】
請求項１９記載の発明は、
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項１８記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３０】
請求項２０記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayでない場合、被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３１】
請求項２１記載の発明は、
前記選択レクチンの代わりに、前記選択レクチンが認識する糖鎖構造と同様の構造を認識する抗糖鎖抗体、人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸を用いることを特徴とする請求項１０乃至請求項２０のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３２】
請求項２２記載の発明は、
請求項２０乃または請求項２１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記被検者試料を直接ラベルすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３３】
請求項２３記載の発明は、
前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする請求項２２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【００３４】
請求項２４記載の発明は、
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項２３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。
【発明の効果】
【００３５】
本発明により、IgG（免疫グロブリンＧ）の糖鎖異常を短時間に多検体処理が可能になる。
【００３６】
フコシル化ガラクトース欠損IgGの量は、炎症性腸疾患の臨床的活動性と相関し、少数例での検討ではあるが、治療効果の予測にも応用できることがわかっている。
【００３７】
本発明は高速液体クロマログラフィー（HPLC）のように、特定の研究機関でなければ解析できないことはなく、どこの施設でも測定可能と言える。従って、広く臨床検査として普及させることが可能である。
【００３８】
また、レクチンアレイを使って診断に利用できるものを絞り込む手法は、疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別に限らず、糖鎖を対象とするあらゆる疾患の鑑別に対して有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】本発明の方法を用いて健常及び疾病間のsignalの相違を確認する鑑別方法の模式図。
【図２】WGAとGSL-IIを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。
【図３】WGAとABAを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。
【図４】WGAとHPAを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。
【図５】ＧＳＬ−ＩＩを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図６】ＡＢＡを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図７】ＨＰＡを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図８】ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図９】ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。
【図１０】Ｃａｌｓｅｐａを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。
【図１１】Ｃａｌｓｅｐａを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。
【図１２】ＰＳＡ、ＬＣＡを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を高速液体クロマログラフィー（HPLC）などを使用することなしに簡便に、例えば、臨床現場でも行えるようにする場合、鑑別方法候補としては、ELISA法を検討する必要がある。
【００４１】
このELISA法でレクチン（Lectin）を用いる場合、どのレクチンを用いるかが非常に重要であり、その選択方法が鑑別の成否を左右すると言っても過言ではない。本発明では、特有のLectin Arrayを用いている。
【００４２】
炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症を鑑別する為のtarget moleculeは糖鎖（糖鎖を含む分子）である為、糖鎖構造を反映したシグナルを検出するために用いることのできる分子を使用することで、汎用的且つ簡便な鑑別方法を実現できる。
【００４３】
糖鎖構造を反映したシグナルを検出するために用いることのできる分子としては、一般的には抗糖鎖抗体、レクチン、ペプチドなどが考えられる。
【００４４】
これらの分子から炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症を鑑別できる分子を選択して、疾患由来抗体とこれらの分子の結合状態をシグナルにすることで、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案することができる。
【００４５】
一例としてレクチンを用いる方法について記す。
【００４６】
４５種類のレクチンを固相化したレクチンアレイを用いて、炎症性腸疾患患者のIgGの糖鎖を鑑別するレクチンを選択する。
【００４７】
疾患の鑑別方法においては、レクチンを固層化する為の担体、等の構造を基本とし、ラベルの内容によっては更にシグナル検出用の分子（酵素や二次抗体を含む）を加えることもある。
【００４８】
レクチンを固層化する為の担体としては次のようなものを採用できる。
【００４９】
抗IgG抗体／サンプルタンパク／選択レクチン／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５０】
蛍光物質やRI等でラベルしたサンプルタンパク／選択レクチン／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５１】
選択レクチン／サンプルタンパク／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５２】
蛍光物質やRI等でラベルした選択レクチン／サンプルタンパク／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。
【００５３】
これらの基本構造に対して、蛍光、発光、RI、発色等の方法でシグナルを検出する。
【００５４】
また、用いる抗IgG抗体はIgG full body、Fab化したもの、IgGの糖鎖を処理したものなど対象によって使い分ける。
【００５５】
最終的に用いる手法としては、ELISA、アレイ、によるシグナル検出が適当であるが、これらの分子あるいはこれらの分子と同様の認識を示す分子を用いるあらゆる方法に本発明で提示する方法や分子を利用することができる。
【実施例】
【００５６】
本発明による方法の効果、特に、選択レクチンによる鑑別の効果を確認することを目的として、図１に示す形体で、健常及び疾病間のsignalの相違を確認した。
【００５７】
図１の模式図に現したように、基板上にレクチン２種類を固定し（WGAと、GSL-II、 ABA 又は HPA）、これらのレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較した。
【００５８】
WGAとGSL-IIを用いた場合は、図２に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００５９】
WGAとABAを使用した場合は、図３に示したように、図２図示のGSL-IIの場合と同様に、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００６０】
WGAとHPAを使用した場合は、図４に示したように、GSL-II及びHPAの場合と同様に、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００６１】
以上の結果より炎症性腸疾患の鑑別をレクチン（Lectin）を使用することで効果的に行えることが明らかとなった。
【００６２】
また、使用するレクチンを、GSL-II、ABA、HPA、WGAの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることで炎症性腸疾患の鑑別を行えると考えられた。
【００６３】
なお、ここでは検証を行っていないが、BLLはABAと同様の特性を有することが知られているので、前記において、ABAに替えてBLLをレクチンとして使用しても同様に炎症性腸疾患の鑑別を行うことができると考えられる。
【００６４】
また、前記のより、鑑別の対象とする生体分子を抗体にして、（Lectin）を使用して炎症性腸疾患の鑑別を行うことができることを確認できた。前記ではIgGを鑑別の対象とする生体分子にしている。
【００６５】
なお、前記の実施例では、鑑別の対象とする生体分子を抗体（IgG）にしているが、IgGの分解物、又は、IgGの変性物を鑑別の対象とする生体分子にしても、前記の実施例と同様に、（Lectin）を使用して炎症性腸疾患の鑑別を行うことができると考えられる。
【００６６】
更に、図２〜図４の結果に表わされているように、前記実施例のいずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間の鑑別が可能であることを確認できた。
【００６７】
次に、規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であるか検討した。
【００６８】
前記と同様に、基板上にレクチン（ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較した。
【００６９】
図５、図６、図７は、それぞれ、レクチンとして、ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡを用いた場合の、規格化しないシグナル強度で鑑別が可能であるか判定したものであるが、いずれの場合でも鑑別が可能であった。
【００７０】
すなわち、ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡを組み合わせず、１種類で使用した場合であっても、図５、図６、図７に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＶ）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００７１】
この場合も、図５〜図７の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＶ）間の鑑別が可能であった。
【００７２】
同様に、レクチンとしてＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用い、前記と同様に、基板上にレクチン（ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉ及び、これらとＷＧＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較し、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。
【００７３】
図８図示のように、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉの規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であった。
【００７４】
すなわち、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを組み合わせず、１種類で使用した場合であっても、図８に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。
【００７５】
また、複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことができた。
【００７６】
この場合も、図８の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００７７】
また、図９図示のように、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−ＩのＷＧＡで規格化したシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であった。すなわち、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉと、ＷＧＡとの組み合わせにすることで炎症性腸疾患の鑑別を行うことができた。ここでも、複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことが可能であった。
【００７８】
この場合も、図９の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００７９】
なお、図８、図９に示された実験結果から、α2、6 sialic acid を認識するレクチンであれば、上記のＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉに限られず使用可能であることを確認できた。
【００８０】
また、レクチンとしてＣａｌｓｅｐａを用い、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。更に、レクチンとしてＰＳＡ、ＬＣＡを用い、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。すなわち、レクチンとしてＣａｌｓｅｐａ、ＰＳＡ、ＬＣＡを用い、前記と同様に、基板上にレクチン（Ｃａｌｓｅｐａ、ＣａｌｓｅｐａとＷＧＡ、ＰＳＡとＷＧＡ、ＬＣＡとＷＧＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較し、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。
【００８１】
図１０図示のように、Ｃａｌｓｅｐａの規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であり、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００８２】
更に、図１１、図１２図示のように、Ｃａｌｓｅｐａ、ＰＳＡ、ＬＣＡのＷＧＡで規格化したシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であり、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。
【００８３】
以上、添付図面を参照して本発明の好ましい実施形態、実施例を説明したが、本発明はこれらに限られること無く、特許請求の範囲の記載から把握される技術的範囲において種々に変更可能である。
【００８４】
例えば、健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行うにあたり、使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを説明したが、これらは例示であり、同等の認識機能を持つレクチン、抗体であればこれらに限られない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２】
使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを特徴とする請求項１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項３】
鑑別の対象とする生体分子を抗体とすることを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項４】
鑑別の対象とする被検体をIgG、又は、その分解物、若しくは、その変性物としたことを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項５】
鑑別はそれぞれのレクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項６】
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項５記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項７】
鑑別はWGAのシグナルに対するそれぞれのレクチン比率が、cut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項８】
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項９】
鑑別の為の検出方法は、アレイ、ELISA、Western Blotting、FACSのいずれかを対象とする請求項１乃至請求項８のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１０】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、Protein-AまたはProtein-G／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズ含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１１】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／Protein AまたはProtein G／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１２】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、抗IgG抗体／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１３】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１４】
前記抗IgG抗体は、抗体のfull bodyである場合、抗原認識部位を含む抗体の一部である場合、キメラ抗体を含む人工的に処理した抗体である場合を含むことを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１５】
前記抗IgG抗体の替わりに、IgGを特異的に認識する人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸のいずれかが使用されることを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１６】
請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、sandwich assayの最上部に位置する分子をラベルすることを特徴とする請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１７】
請求項１０乃至１６のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、更に、二次抗体を用いる、あるいはラベルした二次抗体を用いることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１８】
請求項１６または請求項１７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１９】
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項１８記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２０】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayでない場合、被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２１】
前記選択レクチンの代わりに、前記選択レクチンが認識する糖鎖構造と同様の構造を認識する抗糖鎖抗体、人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸を用いることを特徴とする請求項１０乃至請求項２０のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２２】
請求項２０乃または請求項２１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記被検者試料を直接ラベルすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２３】
前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする請求項２２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２４】
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項２３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１】
健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２】
使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを特徴とする請求項１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項３】
鑑別の対象とする生体分子を抗体とすることを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項４】
鑑別の対象とする被検体をIgG、又は、その分解物、若しくは、その変性物としたことを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項５】
鑑別はそれぞれのレクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項６】
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項５記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項７】
鑑別はWGAのシグナルに対するそれぞれのレクチン比率が、cut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項８】
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項９】
鑑別の為の検出方法は、アレイ、ELISA、Western Blotting、FACSのいずれかを対象とする請求項１乃至請求項８のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１０】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、Protein-AまたはProtein-G／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズ含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１１】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／Protein AまたはProtein G／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１２】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、抗IgG抗体／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１３】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１４】
前記抗IgG抗体は、抗体のfull bodyである場合、抗原認識部位を含む抗体の一部である場合、キメラ抗体を含む人工的に処理した抗体である場合を含むことを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１５】
前記抗IgG抗体の替わりに、IgGを特異的に認識する人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸のいずれかが使用されることを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１６】
請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、sandwich assayの最上部に位置する分子をラベルすることを特徴とする請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１７】
請求項１０乃至１６のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、更に、二次抗体を用いる、あるいはラベルした二次抗体を用いることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１８】
請求項１６または請求項１７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項１９】
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項１８記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２０】
鑑別の為の検出方法がsandwich assayでない場合、被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２１】
前記選択レクチンの代わりに、前記選択レクチンが認識する糖鎖構造と同様の構造を認識する抗糖鎖抗体、人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸を用いることを特徴とする請求項１０乃至請求項２０のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２２】
請求項２０乃または請求項２１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記被検者試料を直接ラベルすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２３】
前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする請求項２２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【請求項２４】
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項２３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
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【図６】
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【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公開番号】特開２０１１−２４７６６５（Ｐ２０１１−２４７６６５Ａ）
【公開日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１１９０９９（Ｐ２０１０−１１９０９９）
【出願日】平成２２年５月２５日（２０１０．５．２５）
【出願人】（５０９１３１７４２）株式会社ＧＰバイオサイエンス (5)
【公開日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月２５日（２０１０．５．２５）
【出願人】（５０９１３１７４２）株式会社ＧＰバイオサイエンス (5)
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