皮膚バリア機能の評価方法
【課題】洗顔料や洗顔料に配合された界面活性剤等に由来する、洗浄による肌荒れを精度良く評価する方法を提供する。
【解決手段】皮膚から水を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、その抽出量によって皮膚バリア機能を評価する方法。あるいは、皮膚から水又は界面活性剤水溶液を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、水と界面活性剤による抽出量の比を算出することを特徴とする皮膚バリア機能の評価方法。なお、界面活性剤水溶液がラウリル硫酸ナトリウム水溶液であることを特徴とする。
【解決手段】皮膚から水を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、その抽出量によって皮膚バリア機能を評価する方法。あるいは、皮膚から水又は界面活性剤水溶液を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、水と界面活性剤による抽出量の比を算出することを特徴とする皮膚バリア機能の評価方法。なお、界面活性剤水溶液がラウリル硫酸ナトリウム水溶液であることを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚バリア機能を評価する方法および皮膚洗浄剤の皮膚に与える影響を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の肌荒れは、外的要因による皮膚の損傷や、疾病や肌質による皮膚状態の悪化により生じ、皮膚のバリア機能が損なわれるとともに、外界からの物質の侵入により炎症が生じ易くなっている。皮膚のバリア機能が損なわれた皮膚に低刺激性で保湿効果の高い化粧料を適用すると皮膚の性状を改善する効果が高いが、健常者向けの使用性、機能性を重視した化粧料をバリア機能が損なわれた皮膚に適用すると肌荒れが悪化する恐れがある。従って、化粧料を消費者に提供するに際して、消費者の皮膚のバリア機能を評価し、その状態に適した化粧料を提供することが好ましい。
皮膚画像の乾燥性落屑性変化を検出し、肌荒れを測定する装置が知られている（特許文献１：特開昭６３−１６１９３５号公報）。しかしながら、顕著な肌荒れは判別できるが弱い肌荒れを評価することは困難であった。
皮膚中の芳香族アミノ酸の蛍光を測定し、ケラチンの疎水的環境（肌荒れ）を評価する方法（特許文献２：特開平９−１７３３０１号公報）が知られているが、健常部との比較が必要であり、各被験者の皮膚性状を評価することは困難であった。
皮膚からのエタノール抽出物をＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）と混合し、ＤＰＰＨの吸光度の減衰率を用いて肌荒れを評価する方法が知られている（特許文献３：特開平１１−７６１６８号公報）。しかしながら、皮膚の汚染が肌荒れとして検出される問題を有していた。
皮膚に複数の化学物質を適用し、浸透量の比（例えば黄色４号／赤色２１５号、１，３−ブタンジオール／グリセリン−１−ベンジル−３−ｎ−ヘキシルジエーテル、フラビンアデニンジヌクレオチド／リボフラビン、フラビンモノヌクレオチド／リボフラビン等）を皮膚性状の指標とする評価方法（特許文献４：特開２００３−１９９７１７号公報）が知られているが、浸透した化学物質と塗布した皮膚上の化学物質を分けて測定することが困難であり、誤差が生じ易い問題があった。
また皮膚洗浄剤が皮膚に及ぼす影響、特に肌荒れを引き起こす要因となるか否かを簡便に評価する方法がなかった。このため、洗浄剤を用いて一定条件で皮膚洗浄したのち水分蒸散量を測定することが一般的に行われていたが、必ずしも皮膚洗浄剤の皮膚に及ぼす影響を適切に評価する方法ではなかった。
【特許文献１】特開昭６３−１６１９３５号公報
【特許文献２】特開平９−１７３３０１号公報
【特許文献３】特開平１１−７６１６８号公報
【特許文献４】特開２００３−１９９７１７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
皮膚のバリア機能を高感度で評価する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の主な構成は、次のとおりである。
１．皮膚から水を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、その抽出量によって皮膚バリア機能を評価する方法。
２．皮膚から水又は界面活性剤水溶液を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、水と界面活性剤による抽出量の比を算出することを特徴とする皮膚バリア機能の評価方法。
３．界面活性剤水溶液がラウリル硫酸ナトリウム水溶液であることを特徴とする２項に記載の評価方法。
４．界面活性剤又は皮膚洗浄剤により洗浄後の皮膚からの、ピロリドンカルボン酸抽出量を測定することを特徴とする、界面活性剤又は皮膚洗浄剤の評価方法
【発明の効果】
【０００５】
肌荒れを経皮水分蒸散量よりも高感度に検出、評価することができる。
界面活性剤で惹起した肌荒れの程度を定量的に評価することができる。
種々の界面活性剤で肌荒れを惹起し、本発明の評価方法で肌荒れの程度を評価することにより、肌荒れを起こし難い界面活性剤や皮膚洗浄剤を容易にかつ適切に選択できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
ピロリドンカルボン酸は角層の下層に多く存在する天然保湿因子である。皮膚から抽出されるピロリドンカルボン酸の挙動について、以下の知見を見出した。皮膚に存在するピロリドンカルボン酸は水よりも界面活性剤水溶液による抽出量が大きい。この抽出量の差は、肌荒れすると小さくなる。バリア機能が破壊されると水でもピロリドンカルボン酸が抽出されやすいので、ピロリドンカルボン酸の水抽出量と界面活性剤水溶液抽出量の差が小さくなる。
【０００７】
本発明の皮膚バリア機能の評価手順として、まず、被験者の皮膚から水及び界面活性剤水溶液でピロリドンカルボン酸を抽出する。水で抽出する部位と界面活性剤水溶液で抽出する部位は重ならない近傍とする。抽出操作としては、抽出部位に枠を押し付け、枠内に水又は界面活性剤水溶液を入れて、攪拌しながらピロリドンカルボン酸を抽出する。枠は例えば直径２ｃｍの円筒が適当であり、円筒の先端をすぼめることにより、円筒内の液体が飛散することを防止することができる。水又は界面活性剤水溶液を攪拌する方法としては、被験者の測定部位（例えば腕）を振盪器に載せて揺らしてもよいし、攪拌棒にてかき混ぜてもよい。尚、本手法は、中山書店 現代皮膚科学大系４Ｂ《検査ＩＩ 実験法》 山村雄一ら、１９８１年６月２５日第１刷発行、１３９ページに記載のカップ法を参考にして確立したものである。
【０００８】
ピロリドンカルボン酸を抽出するための界面活性剤はアニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、ノニオン界面活性剤、両性界面活性剤等、いずれの界面活性剤を用いてもよいが、アニオン界面活性剤が好ましい。アニオン界面活性剤の中でもラウリル硫酸ナトリウムがピロリドンカルボン酸の抽出力に優れるため好ましい。
抽出したピロリドンカルボン酸は高速液体クロマトグラフィーなどにより分析することができる。
ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）の水抽出量または、ＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ界面活性剤抽出量を求めることにより、皮膚バリア機能を高感度で評価することができる。また界面活性剤や皮膚洗浄剤の皮膚への影響を速やかに且つ正確に判断することが可能となる。
【実施例１】
【０００９】
ラウリル硫酸ナトリウムによる皮膚バリア機能損傷試験並びに皮膚バリア機能の評価
６名の被験者に対して、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）による皮膚バリア機能損傷の前後における皮膚バリア機能を評価した。
測定方法
１．１ ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）抽出量
以下の手順により、被験者の皮膚から抽出されたピロリドンカルボン酸の量を測定した。
１）被験者の前腕内側部に直径２ｃｍの円筒状カップを装着する。
２）カップ内に水又は５％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）水溶液２ｍＬを入れ、栓をする。
３）カップを装着した腕を溶液が漏れないように振とう器にのせる。
４）そのまま１０分間振とうし、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）を抽出する。
５）その後、カップ内の溶液をスポイトで取り出し、２ｍＬチューブへ入れる。
６）この溶液を０．４５μｍメンブランフィルターでろ過し、高速液体クロマトグラフィーでピロリドンカルボン酸を定量する。
７）試料溶液及び標準溶液各々２０μＬをとり、下記の条件により高速液体クロマトグラフィーで測定し、得られたピーク面積から検量線法を用いて試料溶液に含まれるピロリドンカルボン酸の濃度を算出する。
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析条件
カラム：TSK−GEL ODS−８０Ｔｓ ４．６ｍmφ×１５０mm
検出器：フォトダイオードアレイ ＵＶ２１０ｎｍ
溶離液：０．５Ｍ硫酸ナトリウム、０．１Ｍリン酸 水溶液
流 速：０．４ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２０μl
【００１０】
１．２ 経皮水分蒸散量
本発明の評価方法と比較するために、従来から行われている経皮水分蒸散量を測定する。
Ｄｅｌｆｉｎ製Ｖａｐｏｍｅｔｅｒを用いて、経皮水分蒸散量を測定した。測定環境は温度２３℃、相対湿度２５％で１０分間順化後に測定する。
【００１１】
２．界面活性剤水溶液洗浄による皮膚バリア機能の損傷方法並びに評価方法
２．１ 界面活性剤水溶液で洗浄することにより、モデルとして皮膚バリア機能を損傷させる前に、皮膚表面の写真を撮影し、前記１．１及び、１．２の手順により前腕内側部のピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）抽出量並びに経皮水分蒸散量を測定した。
２．２ １０％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）水溶液に前腕内側部を浸し、ゴム手袋で１００往復摩擦し洗浄した。水洗後、水分をふき取り、皮膚表面の写真を撮影し、１．１、１．２の手順により前腕内側部のＰＣＡ抽出量並びに経皮水分蒸散量を測定した。
２．３ ２．２の洗浄操作を約１時間おきに繰り返し、６回洗浄後に、皮膚表面の写真を撮影し、１．１、１．２の手順により前腕内側部のＰＣＡ抽出量並びに経皮水分蒸散量を測定した。
２．４ 界面活性剤水溶液洗浄による肌荒れ（皮膚バリア機能の損傷）を、マイクロスコープにより撮影した皮膚表面の写真を以下の基準により目視判定することにより評価した。
０点：キメが明瞭で細かい。
１点：キメの乱れが認められる。
２点：キメが不明瞭。
評価点を平均し、０点以上０．５点未満は肌荒れが殆ど生じていない（皮膚バリア機能が正常）、０．５点以上１．５点未満は肌荒れが生じている（皮膚バリア機能が損傷している）、１．５点以上２点以下は肌荒れが顕著に生じている（皮膚バリア機能が顕著に損傷している）と評価した。
【００１２】
３．結果
３．１ １０％ＳＤＳによる皮膚バリア機能の損傷の皮膚の目視観察による評価
２．４に従って、１０％ＳＤＳによる洗浄前、１回洗浄後、６回洗浄後の皮膚バリア機能を目視評価した。
【００１３】
【表１】
【００１４】
洗浄前は、肌荒れが殆ど生じていない（皮膚バリア機能が正常）が、１回洗浄後、６回洗浄後はともに肌荒れが生じていた（皮膚バリア機能が損傷していた）。１回洗浄後と比べて６回洗浄後の方が、肌荒れ（皮膚バリア機能の損傷）が激しかった。
【００１５】
３．２ １０％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）水溶液による皮膚バリア機能の損傷並びに本発明方法による評価結果を、表２，並びにグラフ化して図１〜４に示す。
【００１６】
【表２】
【００１７】
図１は経皮水分蒸散量の変化を示すグラフである。一般的な皮膚バリア機能の指標である経皮水分蒸散量について、洗浄前と１回洗浄後、６回洗浄後の結果間に有意差が認められなかった。すなわち経皮水分蒸散量測定試験では、バリア機能の損傷を検出できなかった。
図２はＰＣＡ水抽出量の変化を示すグラフである。ＰＣＡ水抽出量は、１０％ＳＤＳ洗浄により上昇し、６回洗浄後において、洗浄前と危険率５％で有意差が認められた。このことから、ＰＣＡ水抽出量を測定することにより、皮膚バリア機能損傷の指標として一般的な経皮水分蒸散量よりも高感度で、皮膚バリア機能の評価ができることがわかった。
図３はＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の変化を示すグラフである。ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量は、1回洗浄後、６回洗浄後のいずれにおいても、洗浄前と比べて有意に少なかった。バリア機能を損傷させるために、１０％ＳＤＳで洗浄した結果、皮膚中のＰＣＡ量が減少したためと考える。ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量はバリア機能の損傷よりも皮膚中のＰＣＡの存在量を反映している。
ＰＣＡ水抽出量は、皮膚バリア機能損傷と１０％ＳＤＳ洗浄操作によるＰＣＡの減少、皮膚中のＰＣＡ存在量の個人差の影響を受ける。そこで、ＰＣＡ水抽出量を皮膚中のＰＣＡ量を反映する５％ＳＤＳ抽出量で除することにより、ＰＣＡ水抽出量に影響を与える皮膚中のＰＣＡ存在量の変動（１０％ＳＤＳ洗浄操作によるＰＣＡの減少及び皮膚中のＰＣＡ存在量の個人差）を相殺し、より、高感度でバリア機能を評価できると推測した。図４はＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の比の変化を示すグラフである。ＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の比の値は、洗浄前と比べて、１回洗浄後は５％有意で比の値が上昇し、６回洗浄後は１％有意で比の値が上昇した。この結果から、ＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の比を算出することにより、ＰＣＡ水抽出量よりもさらに高感度で皮膚バリア機能を評価できた。
【実施例２】
【００１８】
界面活性剤の皮膚に及ぼす影響の評価
６名の被験者に対して、皮膚に対する作用が低刺激であるといわれている界面活性剤Ｎ−アシルグルタミン酸ナトリウム（ＡＧＳ）の皮膚に及ぼす影響を評価した。
評価方法は実施例１に準じ、１０％SDS溶液の洗浄に代えて１０％ＡＧＳ水溶液を用いて皮膚を洗浄し、その後皮膚からのＰＣＡを抽出するとともに水分蒸散量を測定した。
１．結果
１．１ １０％ＡＧＳによる皮膚バリア機能の損傷評価
実施例１の２．４に従って、１０％ＡＧＳによる洗浄前、１回洗浄後、６回洗浄後の皮膚バリア機能を評価した。結果を表３に示す。
【００１９】
【表３】
【００２０】
洗浄前、１回洗浄後、６回洗浄後のいずれについても、肌荒れが殆ど生じていない（皮膚バリア機能が正常）と評価した。
【００２１】
１．２ １０％ＡＧＳ（Ｎ−アシルグルタミン酸ナトリウム）水溶液による皮膚バリア機能の損傷並びに評価結果を、表４に示す。
【００２２】
【表４】
【００２３】
ＰＣＡ水抽出量及びＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量は１０％ＡＧＳによる１回洗浄後、６回洗浄後において、洗浄前と比べて有意な差はなかった。ＡＧＳはＳＤＳと比べて低刺激であり、皮膚バリア機能の損傷が生じにくいことを評価できた。すなわち本発明方法は、洗浄剤や界面活性剤の評価にも適用できることが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後の経皮水分蒸散量の変化を示す
【図２】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後のＰＣＡ水抽出量変化を示す
【図３】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後、５％ＳＤＳで抽出されるＰＣＡ量変化を示す
【図４】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後のＰＣＡ水抽出量と５％ＳＤＳで抽出されるＰＣＡ量の比率の変化を示す
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚バリア機能を評価する方法および皮膚洗浄剤の皮膚に与える影響を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の肌荒れは、外的要因による皮膚の損傷や、疾病や肌質による皮膚状態の悪化により生じ、皮膚のバリア機能が損なわれるとともに、外界からの物質の侵入により炎症が生じ易くなっている。皮膚のバリア機能が損なわれた皮膚に低刺激性で保湿効果の高い化粧料を適用すると皮膚の性状を改善する効果が高いが、健常者向けの使用性、機能性を重視した化粧料をバリア機能が損なわれた皮膚に適用すると肌荒れが悪化する恐れがある。従って、化粧料を消費者に提供するに際して、消費者の皮膚のバリア機能を評価し、その状態に適した化粧料を提供することが好ましい。
皮膚画像の乾燥性落屑性変化を検出し、肌荒れを測定する装置が知られている（特許文献１：特開昭６３−１６１９３５号公報）。しかしながら、顕著な肌荒れは判別できるが弱い肌荒れを評価することは困難であった。
皮膚中の芳香族アミノ酸の蛍光を測定し、ケラチンの疎水的環境（肌荒れ）を評価する方法（特許文献２：特開平９−１７３３０１号公報）が知られているが、健常部との比較が必要であり、各被験者の皮膚性状を評価することは困難であった。
皮膚からのエタノール抽出物をＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）と混合し、ＤＰＰＨの吸光度の減衰率を用いて肌荒れを評価する方法が知られている（特許文献３：特開平１１−７６１６８号公報）。しかしながら、皮膚の汚染が肌荒れとして検出される問題を有していた。
皮膚に複数の化学物質を適用し、浸透量の比（例えば黄色４号／赤色２１５号、１，３−ブタンジオール／グリセリン−１−ベンジル−３−ｎ−ヘキシルジエーテル、フラビンアデニンジヌクレオチド／リボフラビン、フラビンモノヌクレオチド／リボフラビン等）を皮膚性状の指標とする評価方法（特許文献４：特開２００３−１９９７１７号公報）が知られているが、浸透した化学物質と塗布した皮膚上の化学物質を分けて測定することが困難であり、誤差が生じ易い問題があった。
また皮膚洗浄剤が皮膚に及ぼす影響、特に肌荒れを引き起こす要因となるか否かを簡便に評価する方法がなかった。このため、洗浄剤を用いて一定条件で皮膚洗浄したのち水分蒸散量を測定することが一般的に行われていたが、必ずしも皮膚洗浄剤の皮膚に及ぼす影響を適切に評価する方法ではなかった。
【特許文献１】特開昭６３−１６１９３５号公報
【特許文献２】特開平９−１７３３０１号公報
【特許文献３】特開平１１−７６１６８号公報
【特許文献４】特開２００３−１９９７１７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
皮膚のバリア機能を高感度で評価する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の主な構成は、次のとおりである。
１．皮膚から水を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、その抽出量によって皮膚バリア機能を評価する方法。
２．皮膚から水又は界面活性剤水溶液を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、水と界面活性剤による抽出量の比を算出することを特徴とする皮膚バリア機能の評価方法。
３．界面活性剤水溶液がラウリル硫酸ナトリウム水溶液であることを特徴とする２項に記載の評価方法。
４．界面活性剤又は皮膚洗浄剤により洗浄後の皮膚からの、ピロリドンカルボン酸抽出量を測定することを特徴とする、界面活性剤又は皮膚洗浄剤の評価方法
【発明の効果】
【０００５】
肌荒れを経皮水分蒸散量よりも高感度に検出、評価することができる。
界面活性剤で惹起した肌荒れの程度を定量的に評価することができる。
種々の界面活性剤で肌荒れを惹起し、本発明の評価方法で肌荒れの程度を評価することにより、肌荒れを起こし難い界面活性剤や皮膚洗浄剤を容易にかつ適切に選択できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
ピロリドンカルボン酸は角層の下層に多く存在する天然保湿因子である。皮膚から抽出されるピロリドンカルボン酸の挙動について、以下の知見を見出した。皮膚に存在するピロリドンカルボン酸は水よりも界面活性剤水溶液による抽出量が大きい。この抽出量の差は、肌荒れすると小さくなる。バリア機能が破壊されると水でもピロリドンカルボン酸が抽出されやすいので、ピロリドンカルボン酸の水抽出量と界面活性剤水溶液抽出量の差が小さくなる。
【０００７】
本発明の皮膚バリア機能の評価手順として、まず、被験者の皮膚から水及び界面活性剤水溶液でピロリドンカルボン酸を抽出する。水で抽出する部位と界面活性剤水溶液で抽出する部位は重ならない近傍とする。抽出操作としては、抽出部位に枠を押し付け、枠内に水又は界面活性剤水溶液を入れて、攪拌しながらピロリドンカルボン酸を抽出する。枠は例えば直径２ｃｍの円筒が適当であり、円筒の先端をすぼめることにより、円筒内の液体が飛散することを防止することができる。水又は界面活性剤水溶液を攪拌する方法としては、被験者の測定部位（例えば腕）を振盪器に載せて揺らしてもよいし、攪拌棒にてかき混ぜてもよい。尚、本手法は、中山書店 現代皮膚科学大系４Ｂ《検査ＩＩ 実験法》 山村雄一ら、１９８１年６月２５日第１刷発行、１３９ページに記載のカップ法を参考にして確立したものである。
【０００８】
ピロリドンカルボン酸を抽出するための界面活性剤はアニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、ノニオン界面活性剤、両性界面活性剤等、いずれの界面活性剤を用いてもよいが、アニオン界面活性剤が好ましい。アニオン界面活性剤の中でもラウリル硫酸ナトリウムがピロリドンカルボン酸の抽出力に優れるため好ましい。
抽出したピロリドンカルボン酸は高速液体クロマトグラフィーなどにより分析することができる。
ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）の水抽出量または、ＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ界面活性剤抽出量を求めることにより、皮膚バリア機能を高感度で評価することができる。また界面活性剤や皮膚洗浄剤の皮膚への影響を速やかに且つ正確に判断することが可能となる。
【実施例１】
【０００９】
ラウリル硫酸ナトリウムによる皮膚バリア機能損傷試験並びに皮膚バリア機能の評価
６名の被験者に対して、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）による皮膚バリア機能損傷の前後における皮膚バリア機能を評価した。
測定方法
１．１ ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）抽出量
以下の手順により、被験者の皮膚から抽出されたピロリドンカルボン酸の量を測定した。
１）被験者の前腕内側部に直径２ｃｍの円筒状カップを装着する。
２）カップ内に水又は５％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）水溶液２ｍＬを入れ、栓をする。
３）カップを装着した腕を溶液が漏れないように振とう器にのせる。
４）そのまま１０分間振とうし、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）を抽出する。
５）その後、カップ内の溶液をスポイトで取り出し、２ｍＬチューブへ入れる。
６）この溶液を０．４５μｍメンブランフィルターでろ過し、高速液体クロマトグラフィーでピロリドンカルボン酸を定量する。
７）試料溶液及び標準溶液各々２０μＬをとり、下記の条件により高速液体クロマトグラフィーで測定し、得られたピーク面積から検量線法を用いて試料溶液に含まれるピロリドンカルボン酸の濃度を算出する。
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析条件
カラム：TSK−GEL ODS−８０Ｔｓ ４．６ｍmφ×１５０mm
検出器：フォトダイオードアレイ ＵＶ２１０ｎｍ
溶離液：０．５Ｍ硫酸ナトリウム、０．１Ｍリン酸 水溶液
流 速：０．４ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２０μl
【００１０】
１．２ 経皮水分蒸散量
本発明の評価方法と比較するために、従来から行われている経皮水分蒸散量を測定する。
Ｄｅｌｆｉｎ製Ｖａｐｏｍｅｔｅｒを用いて、経皮水分蒸散量を測定した。測定環境は温度２３℃、相対湿度２５％で１０分間順化後に測定する。
【００１１】
２．界面活性剤水溶液洗浄による皮膚バリア機能の損傷方法並びに評価方法
２．１ 界面活性剤水溶液で洗浄することにより、モデルとして皮膚バリア機能を損傷させる前に、皮膚表面の写真を撮影し、前記１．１及び、１．２の手順により前腕内側部のピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）抽出量並びに経皮水分蒸散量を測定した。
２．２ １０％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）水溶液に前腕内側部を浸し、ゴム手袋で１００往復摩擦し洗浄した。水洗後、水分をふき取り、皮膚表面の写真を撮影し、１．１、１．２の手順により前腕内側部のＰＣＡ抽出量並びに経皮水分蒸散量を測定した。
２．３ ２．２の洗浄操作を約１時間おきに繰り返し、６回洗浄後に、皮膚表面の写真を撮影し、１．１、１．２の手順により前腕内側部のＰＣＡ抽出量並びに経皮水分蒸散量を測定した。
２．４ 界面活性剤水溶液洗浄による肌荒れ（皮膚バリア機能の損傷）を、マイクロスコープにより撮影した皮膚表面の写真を以下の基準により目視判定することにより評価した。
０点：キメが明瞭で細かい。
１点：キメの乱れが認められる。
２点：キメが不明瞭。
評価点を平均し、０点以上０．５点未満は肌荒れが殆ど生じていない（皮膚バリア機能が正常）、０．５点以上１．５点未満は肌荒れが生じている（皮膚バリア機能が損傷している）、１．５点以上２点以下は肌荒れが顕著に生じている（皮膚バリア機能が顕著に損傷している）と評価した。
【００１２】
３．結果
３．１ １０％ＳＤＳによる皮膚バリア機能の損傷の皮膚の目視観察による評価
２．４に従って、１０％ＳＤＳによる洗浄前、１回洗浄後、６回洗浄後の皮膚バリア機能を目視評価した。
【００１３】
【表１】
【００１４】
洗浄前は、肌荒れが殆ど生じていない（皮膚バリア機能が正常）が、１回洗浄後、６回洗浄後はともに肌荒れが生じていた（皮膚バリア機能が損傷していた）。１回洗浄後と比べて６回洗浄後の方が、肌荒れ（皮膚バリア機能の損傷）が激しかった。
【００１５】
３．２ １０％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）水溶液による皮膚バリア機能の損傷並びに本発明方法による評価結果を、表２，並びにグラフ化して図１〜４に示す。
【００１６】
【表２】
【００１７】
図１は経皮水分蒸散量の変化を示すグラフである。一般的な皮膚バリア機能の指標である経皮水分蒸散量について、洗浄前と１回洗浄後、６回洗浄後の結果間に有意差が認められなかった。すなわち経皮水分蒸散量測定試験では、バリア機能の損傷を検出できなかった。
図２はＰＣＡ水抽出量の変化を示すグラフである。ＰＣＡ水抽出量は、１０％ＳＤＳ洗浄により上昇し、６回洗浄後において、洗浄前と危険率５％で有意差が認められた。このことから、ＰＣＡ水抽出量を測定することにより、皮膚バリア機能損傷の指標として一般的な経皮水分蒸散量よりも高感度で、皮膚バリア機能の評価ができることがわかった。
図３はＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の変化を示すグラフである。ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量は、1回洗浄後、６回洗浄後のいずれにおいても、洗浄前と比べて有意に少なかった。バリア機能を損傷させるために、１０％ＳＤＳで洗浄した結果、皮膚中のＰＣＡ量が減少したためと考える。ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量はバリア機能の損傷よりも皮膚中のＰＣＡの存在量を反映している。
ＰＣＡ水抽出量は、皮膚バリア機能損傷と１０％ＳＤＳ洗浄操作によるＰＣＡの減少、皮膚中のＰＣＡ存在量の個人差の影響を受ける。そこで、ＰＣＡ水抽出量を皮膚中のＰＣＡ量を反映する５％ＳＤＳ抽出量で除することにより、ＰＣＡ水抽出量に影響を与える皮膚中のＰＣＡ存在量の変動（１０％ＳＤＳ洗浄操作によるＰＣＡの減少及び皮膚中のＰＣＡ存在量の個人差）を相殺し、より、高感度でバリア機能を評価できると推測した。図４はＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の比の変化を示すグラフである。ＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の比の値は、洗浄前と比べて、１回洗浄後は５％有意で比の値が上昇し、６回洗浄後は１％有意で比の値が上昇した。この結果から、ＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量の比を算出することにより、ＰＣＡ水抽出量よりもさらに高感度で皮膚バリア機能を評価できた。
【実施例２】
【００１８】
界面活性剤の皮膚に及ぼす影響の評価
６名の被験者に対して、皮膚に対する作用が低刺激であるといわれている界面活性剤Ｎ−アシルグルタミン酸ナトリウム（ＡＧＳ）の皮膚に及ぼす影響を評価した。
評価方法は実施例１に準じ、１０％SDS溶液の洗浄に代えて１０％ＡＧＳ水溶液を用いて皮膚を洗浄し、その後皮膚からのＰＣＡを抽出するとともに水分蒸散量を測定した。
１．結果
１．１ １０％ＡＧＳによる皮膚バリア機能の損傷評価
実施例１の２．４に従って、１０％ＡＧＳによる洗浄前、１回洗浄後、６回洗浄後の皮膚バリア機能を評価した。結果を表３に示す。
【００１９】
【表３】
【００２０】
洗浄前、１回洗浄後、６回洗浄後のいずれについても、肌荒れが殆ど生じていない（皮膚バリア機能が正常）と評価した。
【００２１】
１．２ １０％ＡＧＳ（Ｎ−アシルグルタミン酸ナトリウム）水溶液による皮膚バリア機能の損傷並びに評価結果を、表４に示す。
【００２２】
【表４】
【００２３】
ＰＣＡ水抽出量及びＰＣＡ水抽出量／ＰＣＡ５％ＳＤＳ抽出量は１０％ＡＧＳによる１回洗浄後、６回洗浄後において、洗浄前と比べて有意な差はなかった。ＡＧＳはＳＤＳと比べて低刺激であり、皮膚バリア機能の損傷が生じにくいことを評価できた。すなわち本発明方法は、洗浄剤や界面活性剤の評価にも適用できることが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後の経皮水分蒸散量の変化を示す
【図２】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後のＰＣＡ水抽出量変化を示す
【図３】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後、５％ＳＤＳで抽出されるＰＣＡ量変化を示す
【図４】１０％ＳＤＳ洗浄による皮膚バリア機能損傷後のＰＣＡ水抽出量と５％ＳＤＳで抽出されるＰＣＡ量の比率の変化を示す
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚から水を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、その抽出量によって皮膚バリア機能を評価する方法。
【請求項２】
皮膚から水又は界面活性剤水溶液を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、水と界面活性剤による抽出量の比を算出することを特徴とする皮膚バリア機能の評価方法。
【請求項３】
界面活性剤水溶液がラウリル硫酸ナトリウム水溶液であることを特徴とする請求項２に記載の評価方法。
【請求項４】
界面活性剤又は皮膚洗浄剤により洗浄後の皮膚からの、ピロリドンカルボン酸抽出量を測定することを特徴とする、界面活性剤又は皮膚洗浄剤の評価方法
【請求項１】
皮膚から水を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、その抽出量によって皮膚バリア機能を評価する方法。
【請求項２】
皮膚から水又は界面活性剤水溶液を用いてピロリドンカルボン酸を抽出し、水と界面活性剤による抽出量の比を算出することを特徴とする皮膚バリア機能の評価方法。
【請求項３】
界面活性剤水溶液がラウリル硫酸ナトリウム水溶液であることを特徴とする請求項２に記載の評価方法。
【請求項４】
界面活性剤又は皮膚洗浄剤により洗浄後の皮膚からの、ピロリドンカルボン酸抽出量を測定することを特徴とする、界面活性剤又は皮膚洗浄剤の評価方法
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１０−７１９１７（Ｐ２０１０−７１９１７Ａ）
【公開日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２４２１９９（Ｐ２００８−２４２１９９）
【出願日】平成２０年９月２２日（２００８．９．２２）
【出願人】（５９３１０６９１８）株式会社ファンケル (310)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月２２日（２００８．９．２２）
【出願人】（５９３１０６９１８）株式会社ファンケル (310)
【Ｆターム（参考）】
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