細菌検出用濃縮器
【課題】レジオネラ属菌を効率よく濃縮することのできる、新規の細菌検出用濃縮器を提供する。
【解決手段】芯部材１と、芯部材１を覆うセロファン２と、セロファン２と芯部材１との間に固定されたポリエチレングリコール粉末３とを備えた。検体水４中に浸漬することで、検体水４中の水がセロファン２を通過してポリエチレングリコール粉末３側に移動するため、検体水４を効率よく濃縮することができる。
【解決手段】芯部材１と、芯部材１を覆うセロファン２と、セロファン２と芯部材１との間に固定されたポリエチレングリコール粉末３とを備えた。検体水４中に浸漬することで、検体水４中の水がセロファン２を通過してポリエチレングリコール粉末３側に移動するため、検体水４を効率よく濃縮することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レジオネラ属菌などの細菌を検出するために用いられる細菌検出用濃縮器に関する。
【背景技術】
【０００２】
レジオネラ属菌は、環境中に普通に存在し、通常では感染症を引き起こすことはあまりない。しかし、浴槽水中や空調用冷却水中などの環境下でレジオネラ属菌は増殖しやすく、このような環境下で増殖したレジオネラ属菌がレジオネラ肺炎などの重篤なレジオネラ症を引き起こすことが知られている。
【０００３】
そして、日本では、特に入浴施設からの感染事例が多いため、厚生労働省により「公衆浴場における水質基準等に関する指針」が定められ、浴槽水の水質に関する基準としてレジオネラ属菌は１０ＣＦＵ／１００ｍＬ未満であること、浴槽水等の水質検査は定期的に行うこと、が定められている。
【０００４】
しかし、レジオネラ属菌の水質検査は寒天平板法により行われているため、検査結果が得られるまでに１〜２週間を要するという問題があった。このため、浴槽水の水質検査は、上記指針に定められた範囲内で行われているのに止まり、日常的には行われていないのが現状である。
【０００５】
なお、特許文献１には、遺伝子検査法の一種であるＬＡＭＰ法を用いた方法によって、短時間で検査結果を得ようとする試みがなされている。しかしながら、この方法は、検査工程が極めて煩雑であり高度な技術が必要であるという大きな欠点がある。
【０００６】
一方、医療診断の分野では、検査が簡便であり、特別な装置を必要とせず、迅速に検査できることから、特許文献２に開示されているようなイムノクロマトグラフィーを用いた細菌の検査が行われている。しかし、イムノクロマトグラフィーを用いた検査では、上記指針に定められた浴槽水の水質検査により要求されるような低濃度のレジオネラ属菌を検出することはできない。
【０００７】
また、特許文献３には、これらの欠点を補うために、レジオネラ属菌を含む検水を効率よく濃縮して、レジオネラ感染症を起こす可能性の高い約１，０００ＣＦＵ／ｍＬ以上の濃度のレジオネラ属菌を検出できるように改良された細菌検出用濃縮濾過器が記載されているが、温泉施設やプールなどの日常管理において厚生労働省が望ましい範囲とする１００ＣＦＵ／ｍＬ以下の検出感度においてレジオネラ属菌を検出するには至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００５−２６５６８０号公報
【特許文献２】特開２０１０−６０２９７号公報
【特許文献３】特願２０１０-２１１５２７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
そこで本発明は上記問題点に鑑み、イムノクロマトグラフィーを用いて、簡便かつ迅速に、かつ１００ＣＦＵ／ｍＬ以下の検出感度においてレジオネラ属菌を検出することを可能とするために、特許文献３に記載された細菌検出用濃縮濾過器によって濃縮されたレジオネラ属菌をさらに濃縮することのできる、新規の細菌検出用濃縮器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の請求項１記載の細菌検出用濃縮器は、芯部材と、この芯部材を覆うセロファンと、このセロファンと前記芯部材との間に固定されたポリエチレングリコール粉末とを備えたことを特徴とする。
【００１１】
本発明の請求項２記載の細菌検出用濃縮器は、請求項１において、前記芯部材は筒状であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の請求項１記載の細菌検出用濃縮器によれば、検体水中に浸漬することで、検体水中の水がセロファンを通過してポリエチレングリコール粉末側に移動するため、検体水を効率よく濃縮することができる。
【００１３】
本発明の請求項２記載の細菌検出用濃縮器によれば、芯部材が筒状であるので、芯部材の軸を略鉛直方向として検体水中に浸漬することで、ポリエチレングリコール粉末と水の接触面積を大きくして、検体水をさらに効率よく濃縮することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例１の細菌検出用濃縮器を示す斜視図である。
【図２】実施例１の細菌検出用濃縮器の使用状態を示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の細菌検出用濃縮器の実施例について、添付した図面を参照しながら詳細に説明する。
【実施例１】
【００１６】
図１、２を参照しながら説明すると、１は透明な合成樹脂からなり、筒状の形状を有する芯部材であり、この芯部材１を外側から覆うようにセロファン２が設けられている。そして、セロファン２と芯部材１との間に、ポリエチレングリコール粉末３が固定されている。なお、ポリエチレングリコール粉末３の量は、検体水４の量に応じて適宜変更できるようになっている。
【００１７】
ここで、芯部材１を構成する合成樹脂としては、特定のものに限定されず、公知のあらゆる合成樹脂を用いることができる。また、セロファン２としては、特定のものに限定されないが、孔径が均一であることから、透析用セロファンが好適に用いられる。セロファンは、水や低分子物質は透過するが蛋白質などの高分子物質や細菌が透過しない孔径を有している。ポリエチレングリコール粉末３としては、常温で粉末状であればよく、特定のものに限定されない。
【００１８】
検体水に本実施例の細菌検出用濃縮器を浸漬すると、検体水４中の水はセロファン２を通過して、ポリエチレングリコール粉末３が固定された筒部材１側に移動する。ポリエチレングリコール粉末３は水に溶解すると、浸透圧の作用によりさらに水が筒部材１側に移動する。ここで、細菌はセロファン２を通過できないので、セロファン２の外側に残留する。その結果、セロファン２の外側に細菌を含む検体水４が濃縮される。
【００１９】
以上のように、本実施例の細菌検出用濃縮器は、芯部材１と、この芯部材１を覆うセロファン２と、このセロファン２と前記芯部材１との間に固定されたポリエチレングリコール粉末３とを備えたものであり、検体水４中に浸漬することで、検体水４中の水がセロファン２を通過してポリエチレングリコール粉末３側に移動するため、検体水４を効率よく濃縮することができる。
【００２０】
また、前記芯部材１は筒状であるため、芯部材１の軸を略鉛直方向として検体水４中に浸漬することで、ポリエチレングリコール粉末３と水の接触面積を大きくして、検体水４をさらに効率よく濃縮することができる。また、芯部材１を自立させてポリエチレングリコール粉末３と水の接触面積を大きくすることもできる。
【００２１】
本実施例の細菌検出用濃縮器は、浴槽水のほか、プールや空調設備のクーリングタワーのレジオネラ属菌の検査、水道水のクリプトスポリジウム属菌の検査、カイワレ大根等の水耕栽培の水質検査、飲料水の水質検査等にも用いることができる。
【００２２】
なお、本発明は上記実施例に限定されるものではなく、本発明の要旨の範囲内において種々の変形実施が可能である。
【実施例２】
【００２３】
レジオネラ属菌の混入が疑われる浴槽水約２０Ｌを、特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器を用いて濾過した。なお、特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器は、水中の細菌をフィルターにより濾過分離するものであり、フィルターとしては、直径４７ｍｍのガラス繊維濾紙（ワットマン社製 ＧＦ／Ｂ）を用いた。浴槽水は１５分かけて濾過した。濾過後、５ｍｌの希釈水（生理食塩水：アジ化ナトリウム０．１％入り）を入れた容量１０ｍｌの遠沈管にフィルターを浸漬して十分に撹拌し、約１０ｍＬの検体水を得た。この検体水中に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）粉末８ｇを備えた実施例１の細菌検出用濃縮器を図２に示すように、芯部材の軸が略鉛直方向を向くようにして浸漬した。
【００２４】
ここで、細菌検出用濃縮器を検体水中に浸漬してから約２時間静置すると、検体水は約１００〜５００μＬになる。したがって、この段階で浴槽水は約40,000〜200,000倍に濃縮されたことになる。しかし、実際は濃縮された検体水は容器などに付着するので、つぎのレジオネラ属菌の検出工程であるイムノクロマト法で使用する容量を考慮して、約５００μＬまで濃縮した。そして、これをイムノクロマト試験紙（自家調整 抗レジオネラ菌ニューモフィラＩ型モノクロナール抗体感作金コロイド塗布）に滴下して判定を行った。
【００２５】
表１に、各種レジオネラ属菌濃度における一段濃縮（特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器を用いた濃縮のみ）と二段濃縮（一段濃縮＋実施例１の細菌検出用濃縮器を用いた濃縮）での検出結果を示した。また、表２に、一段濃縮で約１０ｍＬまで濃縮した後、実施例１の細菌検出用濃縮器を用いて０．５ｍＬまで（２０倍濃縮）に要する時間を測定した。
【００２６】
【表１】
【００２７】
【表２】
【００２８】
以上の結果より、第一段として特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器で約2,000倍に濃縮後、実施例１の細菌検出用濃縮器とイムノクロマトグラフィーを用いることにより、判定まで約１０日間要する公定培養法と匹敵する感度でレジオネラ属菌を検出できることが確認された。
【符号の説明】
【００２９】
１ 芯部材
２ セロファン
３ ポリエチレングリコール粉末
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レジオネラ属菌などの細菌を検出するために用いられる細菌検出用濃縮器に関する。
【背景技術】
【０００２】
レジオネラ属菌は、環境中に普通に存在し、通常では感染症を引き起こすことはあまりない。しかし、浴槽水中や空調用冷却水中などの環境下でレジオネラ属菌は増殖しやすく、このような環境下で増殖したレジオネラ属菌がレジオネラ肺炎などの重篤なレジオネラ症を引き起こすことが知られている。
【０００３】
そして、日本では、特に入浴施設からの感染事例が多いため、厚生労働省により「公衆浴場における水質基準等に関する指針」が定められ、浴槽水の水質に関する基準としてレジオネラ属菌は１０ＣＦＵ／１００ｍＬ未満であること、浴槽水等の水質検査は定期的に行うこと、が定められている。
【０００４】
しかし、レジオネラ属菌の水質検査は寒天平板法により行われているため、検査結果が得られるまでに１〜２週間を要するという問題があった。このため、浴槽水の水質検査は、上記指針に定められた範囲内で行われているのに止まり、日常的には行われていないのが現状である。
【０００５】
なお、特許文献１には、遺伝子検査法の一種であるＬＡＭＰ法を用いた方法によって、短時間で検査結果を得ようとする試みがなされている。しかしながら、この方法は、検査工程が極めて煩雑であり高度な技術が必要であるという大きな欠点がある。
【０００６】
一方、医療診断の分野では、検査が簡便であり、特別な装置を必要とせず、迅速に検査できることから、特許文献２に開示されているようなイムノクロマトグラフィーを用いた細菌の検査が行われている。しかし、イムノクロマトグラフィーを用いた検査では、上記指針に定められた浴槽水の水質検査により要求されるような低濃度のレジオネラ属菌を検出することはできない。
【０００７】
また、特許文献３には、これらの欠点を補うために、レジオネラ属菌を含む検水を効率よく濃縮して、レジオネラ感染症を起こす可能性の高い約１，０００ＣＦＵ／ｍＬ以上の濃度のレジオネラ属菌を検出できるように改良された細菌検出用濃縮濾過器が記載されているが、温泉施設やプールなどの日常管理において厚生労働省が望ましい範囲とする１００ＣＦＵ／ｍＬ以下の検出感度においてレジオネラ属菌を検出するには至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００５−２６５６８０号公報
【特許文献２】特開２０１０−６０２９７号公報
【特許文献３】特願２０１０-２１１５２７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
そこで本発明は上記問題点に鑑み、イムノクロマトグラフィーを用いて、簡便かつ迅速に、かつ１００ＣＦＵ／ｍＬ以下の検出感度においてレジオネラ属菌を検出することを可能とするために、特許文献３に記載された細菌検出用濃縮濾過器によって濃縮されたレジオネラ属菌をさらに濃縮することのできる、新規の細菌検出用濃縮器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の請求項１記載の細菌検出用濃縮器は、芯部材と、この芯部材を覆うセロファンと、このセロファンと前記芯部材との間に固定されたポリエチレングリコール粉末とを備えたことを特徴とする。
【００１１】
本発明の請求項２記載の細菌検出用濃縮器は、請求項１において、前記芯部材は筒状であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の請求項１記載の細菌検出用濃縮器によれば、検体水中に浸漬することで、検体水中の水がセロファンを通過してポリエチレングリコール粉末側に移動するため、検体水を効率よく濃縮することができる。
【００１３】
本発明の請求項２記載の細菌検出用濃縮器によれば、芯部材が筒状であるので、芯部材の軸を略鉛直方向として検体水中に浸漬することで、ポリエチレングリコール粉末と水の接触面積を大きくして、検体水をさらに効率よく濃縮することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例１の細菌検出用濃縮器を示す斜視図である。
【図２】実施例１の細菌検出用濃縮器の使用状態を示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の細菌検出用濃縮器の実施例について、添付した図面を参照しながら詳細に説明する。
【実施例１】
【００１６】
図１、２を参照しながら説明すると、１は透明な合成樹脂からなり、筒状の形状を有する芯部材であり、この芯部材１を外側から覆うようにセロファン２が設けられている。そして、セロファン２と芯部材１との間に、ポリエチレングリコール粉末３が固定されている。なお、ポリエチレングリコール粉末３の量は、検体水４の量に応じて適宜変更できるようになっている。
【００１７】
ここで、芯部材１を構成する合成樹脂としては、特定のものに限定されず、公知のあらゆる合成樹脂を用いることができる。また、セロファン２としては、特定のものに限定されないが、孔径が均一であることから、透析用セロファンが好適に用いられる。セロファンは、水や低分子物質は透過するが蛋白質などの高分子物質や細菌が透過しない孔径を有している。ポリエチレングリコール粉末３としては、常温で粉末状であればよく、特定のものに限定されない。
【００１８】
検体水に本実施例の細菌検出用濃縮器を浸漬すると、検体水４中の水はセロファン２を通過して、ポリエチレングリコール粉末３が固定された筒部材１側に移動する。ポリエチレングリコール粉末３は水に溶解すると、浸透圧の作用によりさらに水が筒部材１側に移動する。ここで、細菌はセロファン２を通過できないので、セロファン２の外側に残留する。その結果、セロファン２の外側に細菌を含む検体水４が濃縮される。
【００１９】
以上のように、本実施例の細菌検出用濃縮器は、芯部材１と、この芯部材１を覆うセロファン２と、このセロファン２と前記芯部材１との間に固定されたポリエチレングリコール粉末３とを備えたものであり、検体水４中に浸漬することで、検体水４中の水がセロファン２を通過してポリエチレングリコール粉末３側に移動するため、検体水４を効率よく濃縮することができる。
【００２０】
また、前記芯部材１は筒状であるため、芯部材１の軸を略鉛直方向として検体水４中に浸漬することで、ポリエチレングリコール粉末３と水の接触面積を大きくして、検体水４をさらに効率よく濃縮することができる。また、芯部材１を自立させてポリエチレングリコール粉末３と水の接触面積を大きくすることもできる。
【００２１】
本実施例の細菌検出用濃縮器は、浴槽水のほか、プールや空調設備のクーリングタワーのレジオネラ属菌の検査、水道水のクリプトスポリジウム属菌の検査、カイワレ大根等の水耕栽培の水質検査、飲料水の水質検査等にも用いることができる。
【００２２】
なお、本発明は上記実施例に限定されるものではなく、本発明の要旨の範囲内において種々の変形実施が可能である。
【実施例２】
【００２３】
レジオネラ属菌の混入が疑われる浴槽水約２０Ｌを、特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器を用いて濾過した。なお、特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器は、水中の細菌をフィルターにより濾過分離するものであり、フィルターとしては、直径４７ｍｍのガラス繊維濾紙（ワットマン社製 ＧＦ／Ｂ）を用いた。浴槽水は１５分かけて濾過した。濾過後、５ｍｌの希釈水（生理食塩水：アジ化ナトリウム０．１％入り）を入れた容量１０ｍｌの遠沈管にフィルターを浸漬して十分に撹拌し、約１０ｍＬの検体水を得た。この検体水中に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）粉末８ｇを備えた実施例１の細菌検出用濃縮器を図２に示すように、芯部材の軸が略鉛直方向を向くようにして浸漬した。
【００２４】
ここで、細菌検出用濃縮器を検体水中に浸漬してから約２時間静置すると、検体水は約１００〜５００μＬになる。したがって、この段階で浴槽水は約40,000〜200,000倍に濃縮されたことになる。しかし、実際は濃縮された検体水は容器などに付着するので、つぎのレジオネラ属菌の検出工程であるイムノクロマト法で使用する容量を考慮して、約５００μＬまで濃縮した。そして、これをイムノクロマト試験紙（自家調整 抗レジオネラ菌ニューモフィラＩ型モノクロナール抗体感作金コロイド塗布）に滴下して判定を行った。
【００２５】
表１に、各種レジオネラ属菌濃度における一段濃縮（特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器を用いた濃縮のみ）と二段濃縮（一段濃縮＋実施例１の細菌検出用濃縮器を用いた濃縮）での検出結果を示した。また、表２に、一段濃縮で約１０ｍＬまで濃縮した後、実施例１の細菌検出用濃縮器を用いて０．５ｍＬまで（２０倍濃縮）に要する時間を測定した。
【００２６】
【表１】
【００２７】
【表２】
【００２８】
以上の結果より、第一段として特許文献３に記載の細菌検出用濃縮濾過器で約2,000倍に濃縮後、実施例１の細菌検出用濃縮器とイムノクロマトグラフィーを用いることにより、判定まで約１０日間要する公定培養法と匹敵する感度でレジオネラ属菌を検出できることが確認された。
【符号の説明】
【００２９】
１ 芯部材
２ セロファン
３ ポリエチレングリコール粉末
【特許請求の範囲】
【請求項１】
芯部材と、この芯部材を覆うセロファンと、このセロファンと前記芯部材との間に固定されたポリエチレングリコール粉末とを備えたことを特徴とする細菌検出用濃縮器。
【請求項２】
前記芯部材は筒状であることを特徴とする請求項１記載の細菌検出用濃縮器。
【請求項１】
芯部材と、この芯部材を覆うセロファンと、このセロファンと前記芯部材との間に固定されたポリエチレングリコール粉末とを備えたことを特徴とする細菌検出用濃縮器。
【請求項２】
前記芯部材は筒状であることを特徴とする請求項１記載の細菌検出用濃縮器。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−２４９５９８（Ｐ２０１２−２４９５９８Ａ）
【公開日】平成２４年１２月２０日（２０１２．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１２５９１０（Ｐ２０１１−１２５９１０）
【出願日】平成２３年６月６日（２０１１．６．６）
【出願人】（５０３１４３２８６）新潟バイオリサーチパーク株式会社 (6)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月２０日（２０１２．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年６月６日（２０１１．６．６）
【出願人】（５０３１４３２８６）新潟バイオリサーチパーク株式会社 (6)
【Ｆターム（参考）】
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