脂肪由来細胞の分離方法
【課題】血管新生を促す細胞を多く含む脂肪由来細胞を効率的に分離する。
【解決手段】血管を含む脂肪組織を切り出して採取する採取ステップＳ１と、該採取ステップＳ１により採取された脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップＳ２と、該注入ステップＳ２により注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップＳ３とを備える脂肪由来細胞の分離方法を提供する。
【解決手段】血管を含む脂肪組織を切り出して採取する採取ステップＳ１と、該採取ステップＳ１により採取された脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップＳ２と、該注入ステップＳ２により注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップＳ３とを備える脂肪由来細胞の分離方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪由来細胞の分離方法であって、特に、血管新生を促す細胞を豊富に含む脂肪由来細胞を分離する分離方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、脂肪由来細胞を採取するには、超音波を利用して溶解させた脂肪組織を採取し、あるいは、負圧により吸引することにより脂肪組織を採取し、フィルタリングあるいは遠心分離により回収することが行われている（例えば、特許文献１参照。）。
【特許文献１】特開平５−２９２９４１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、超音波や吸引による脂肪組織の採取方法では、採取時に脂肪由来細胞が損傷を受ける可能性がある。また、これらの方法で採取された脂肪組織には、血管新生を促す細胞以外の細胞が多く含まれており、血管新生を促す細胞を効率的に分離することができないという不都合がある。
【０００４】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、血管新生を促す細胞を豊富に含む脂肪由来細胞を効率的に分離することができる脂肪由来細胞の分離方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明は、以下の手段を提供する。
本発明は、血管を含む脂肪組織を切り出して採取する採取ステップと、該採取ステップにより採取された脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップと、該注入ステップにより注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップとを備える脂肪由来細胞の分離方法を提供する。
【０００６】
本発明によれば、採取ステップにより、血管を含む脂肪組織を切り出して採取することによって、切断面に血管の開口部が露出した塊状の脂肪組織を採取することができる。
これにより、超音波や吸引による場合とは異なり、脂肪組織を破壊しないので、切断面を除く部分において脂肪由来細胞を損傷する虞がなく、全体として健全な状態の脂肪由来細胞を含む脂肪組織を採取することができる。
【０００７】
また、注入ステップにより、切断面に開口する血管の開口部から消化酵素を注入することにより、血管および血管の周囲に存在する脂肪組織を分解することができる。
そして、注入ステップにより分解された脂肪由来細胞を、回収ステップによって健全な状態のまま回収することができる。この場合において、注入ステップにより注入された消化酵素は、血管組織およびその近傍に存在する脂肪組織を優先的に分解することができる。したがって、回収される細胞には、血管細胞、血管内皮細胞およびペリサイト等が多く含まれている。
【０００８】
上記発明においては、前記注入ステップが、血管内に消化酵素を加圧注入することとしてもよい。
このようにすることで、血管の末端に配される毛細血管に対しても、消化酵素を供給することが可能となる。その結果、血管新生に有効な脂肪由来細胞を効率よく分離することができる。
また、上記発明においては、前記消化酵素が、タンパク質分解酵素、具体的には、コラゲナーゼ活性および／またはゼラチナーゼ活性を有する酵素であることとしてもよい。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、血管新生を促す細胞を効率的に分離することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の一実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法について、図１〜図３を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法は、図１に示されるように、ヒトまたは哺乳動物等の生体から脂肪組織を採取する採取ステップＳ１と、該採取ステップＳ１により採取された脂肪組織に消化酵素を注入する注入ステップＳ２と、該注入ステップにより注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップＳ３とを備えている。
【００１１】
採取ステップＳ１は、メス等の切断手段により血管Ａを含む脂肪組織Ｂを切り出すことにより採取する。これにより、図２に示されるように、切断面Ｃに血管Ａの開口部Ａ１が開口する塊状の脂肪組織Ｂが採取される。このようにすることで、切断手段により切断された切断面Ｃ以外の脂肪組織Ｂは損傷を受けることなく、健全な状態のままで採取することができる。
【００１２】
注入ステップＳ２は、前記採取ステップＳ１により採取された塊状の脂肪組織Ｂの切断面Ｃに開口する血管Ａの開口部Ａ１から消化酵素Ｄを注入する。消化酵素Ｄとしては、コラゲナーゼやトリプシンのようなタンパク質分解酵素が使用される。
【００１３】
さらに具体的には、図３に示されるように、血管Ａの内径より大きな外形寸法を有する注入カニュレ１を血管Ａの開口部Ａ１から差し込み、注入カニュレ１と血管Ａとが液密状態に接続された状態で、該注入カニュレ１を介してシリンジポンプ２により消化酵素Ｄを血管Ａ内に注入する。
これにより、塊状の脂肪組織Ｂ内の血管Ａ内に消化酵素Ｄが加圧注入される。消化酵素Ｄは加圧注入されることで、血管Ａの末端の毛細血管にまで行き渡らされ、血管Ａおよびその周囲の組織を分解していくことになる。
【００１４】
血管Ａおよびその周囲の組織を含む領域Ｅには、血管Ａの新生に有効な血管内皮細胞、血管前駆細胞およびペリサイト等が多く含まれている。したがって、注入ステップＳ２により注入された消化酵素Ｄの働きにより、血管Ａの新生に有効な脂肪由来細胞が優先的に分解される。
【００１５】
回収ステップＳ３は、注入ステップＳ２により消化酵素Ｄを注入した後、所定時間の経過後に、例えば、ＰＢＳにより塊状の脂肪組織Ｂを洗浄する。これにより、消化酵素Ｄによって分解された脂肪由来細胞を周囲の脂肪組織Ｂから分離することができる。そして、分離された脂肪由来細胞を、フィルタあるいは遠心分離（図示略）により回収する。これにより、血管Ａの新生に有用な脂肪由来細胞が回収されることになる。
【００１６】
この場合において、本実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法によれば、血管Ａおよび血管Ａの周囲に存在する組織を含む領域Ｅから分解することにより、血管Ａの新生に有用ではない脂肪由来細胞が最初に分解されて回収されるのを防止することができる。したがって、回収された脂肪由来細胞から血管Ａの新生に有用ではない脂肪由来細胞を除去する作業を排除することができる。その結果、ＣＤ４４，ＣＤ４５のような表面抗原を発現する細胞を豊富に含み、血管新生に有用な脂肪由来細胞を簡易に分離回収することができるという利点がある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の一実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法を示すフローチャートである。
【図２】図１の分離方法における採取ステップにおいて採取された脂肪組織を示す縦断面図である。
【図３】図２に示される脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップを示す縦断面図である。
【符号の説明】
【００１８】
Ａ 血管
Ａ１ 開口部
Ｂ 脂肪組織
Ｃ 切断面
Ｄ 消化酵素
Ｓ１ 採取ステップ
Ｓ２ 注入ステップ
Ｓ３ 回収ステップ
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪由来細胞の分離方法であって、特に、血管新生を促す細胞を豊富に含む脂肪由来細胞を分離する分離方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、脂肪由来細胞を採取するには、超音波を利用して溶解させた脂肪組織を採取し、あるいは、負圧により吸引することにより脂肪組織を採取し、フィルタリングあるいは遠心分離により回収することが行われている（例えば、特許文献１参照。）。
【特許文献１】特開平５−２９２９４１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、超音波や吸引による脂肪組織の採取方法では、採取時に脂肪由来細胞が損傷を受ける可能性がある。また、これらの方法で採取された脂肪組織には、血管新生を促す細胞以外の細胞が多く含まれており、血管新生を促す細胞を効率的に分離することができないという不都合がある。
【０００４】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、血管新生を促す細胞を豊富に含む脂肪由来細胞を効率的に分離することができる脂肪由来細胞の分離方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明は、以下の手段を提供する。
本発明は、血管を含む脂肪組織を切り出して採取する採取ステップと、該採取ステップにより採取された脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップと、該注入ステップにより注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップとを備える脂肪由来細胞の分離方法を提供する。
【０００６】
本発明によれば、採取ステップにより、血管を含む脂肪組織を切り出して採取することによって、切断面に血管の開口部が露出した塊状の脂肪組織を採取することができる。
これにより、超音波や吸引による場合とは異なり、脂肪組織を破壊しないので、切断面を除く部分において脂肪由来細胞を損傷する虞がなく、全体として健全な状態の脂肪由来細胞を含む脂肪組織を採取することができる。
【０００７】
また、注入ステップにより、切断面に開口する血管の開口部から消化酵素を注入することにより、血管および血管の周囲に存在する脂肪組織を分解することができる。
そして、注入ステップにより分解された脂肪由来細胞を、回収ステップによって健全な状態のまま回収することができる。この場合において、注入ステップにより注入された消化酵素は、血管組織およびその近傍に存在する脂肪組織を優先的に分解することができる。したがって、回収される細胞には、血管細胞、血管内皮細胞およびペリサイト等が多く含まれている。
【０００８】
上記発明においては、前記注入ステップが、血管内に消化酵素を加圧注入することとしてもよい。
このようにすることで、血管の末端に配される毛細血管に対しても、消化酵素を供給することが可能となる。その結果、血管新生に有効な脂肪由来細胞を効率よく分離することができる。
また、上記発明においては、前記消化酵素が、タンパク質分解酵素、具体的には、コラゲナーゼ活性および／またはゼラチナーゼ活性を有する酵素であることとしてもよい。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、血管新生を促す細胞を効率的に分離することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の一実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法について、図１〜図３を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法は、図１に示されるように、ヒトまたは哺乳動物等の生体から脂肪組織を採取する採取ステップＳ１と、該採取ステップＳ１により採取された脂肪組織に消化酵素を注入する注入ステップＳ２と、該注入ステップにより注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップＳ３とを備えている。
【００１１】
採取ステップＳ１は、メス等の切断手段により血管Ａを含む脂肪組織Ｂを切り出すことにより採取する。これにより、図２に示されるように、切断面Ｃに血管Ａの開口部Ａ１が開口する塊状の脂肪組織Ｂが採取される。このようにすることで、切断手段により切断された切断面Ｃ以外の脂肪組織Ｂは損傷を受けることなく、健全な状態のままで採取することができる。
【００１２】
注入ステップＳ２は、前記採取ステップＳ１により採取された塊状の脂肪組織Ｂの切断面Ｃに開口する血管Ａの開口部Ａ１から消化酵素Ｄを注入する。消化酵素Ｄとしては、コラゲナーゼやトリプシンのようなタンパク質分解酵素が使用される。
【００１３】
さらに具体的には、図３に示されるように、血管Ａの内径より大きな外形寸法を有する注入カニュレ１を血管Ａの開口部Ａ１から差し込み、注入カニュレ１と血管Ａとが液密状態に接続された状態で、該注入カニュレ１を介してシリンジポンプ２により消化酵素Ｄを血管Ａ内に注入する。
これにより、塊状の脂肪組織Ｂ内の血管Ａ内に消化酵素Ｄが加圧注入される。消化酵素Ｄは加圧注入されることで、血管Ａの末端の毛細血管にまで行き渡らされ、血管Ａおよびその周囲の組織を分解していくことになる。
【００１４】
血管Ａおよびその周囲の組織を含む領域Ｅには、血管Ａの新生に有効な血管内皮細胞、血管前駆細胞およびペリサイト等が多く含まれている。したがって、注入ステップＳ２により注入された消化酵素Ｄの働きにより、血管Ａの新生に有効な脂肪由来細胞が優先的に分解される。
【００１５】
回収ステップＳ３は、注入ステップＳ２により消化酵素Ｄを注入した後、所定時間の経過後に、例えば、ＰＢＳにより塊状の脂肪組織Ｂを洗浄する。これにより、消化酵素Ｄによって分解された脂肪由来細胞を周囲の脂肪組織Ｂから分離することができる。そして、分離された脂肪由来細胞を、フィルタあるいは遠心分離（図示略）により回収する。これにより、血管Ａの新生に有用な脂肪由来細胞が回収されることになる。
【００１６】
この場合において、本実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法によれば、血管Ａおよび血管Ａの周囲に存在する組織を含む領域Ｅから分解することにより、血管Ａの新生に有用ではない脂肪由来細胞が最初に分解されて回収されるのを防止することができる。したがって、回収された脂肪由来細胞から血管Ａの新生に有用ではない脂肪由来細胞を除去する作業を排除することができる。その結果、ＣＤ４４，ＣＤ４５のような表面抗原を発現する細胞を豊富に含み、血管新生に有用な脂肪由来細胞を簡易に分離回収することができるという利点がある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の一実施形態に係る脂肪由来細胞の分離方法を示すフローチャートである。
【図２】図１の分離方法における採取ステップにおいて採取された脂肪組織を示す縦断面図である。
【図３】図２に示される脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップを示す縦断面図である。
【符号の説明】
【００１８】
Ａ 血管
Ａ１ 開口部
Ｂ 脂肪組織
Ｃ 切断面
Ｄ 消化酵素
Ｓ１ 採取ステップ
Ｓ２ 注入ステップ
Ｓ３ 回収ステップ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管を含む脂肪組織を切り出して採取する採取ステップと、
該採取ステップにより採取された脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップと、
該注入ステップにより注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップとを備える脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項２】
前記注入ステップが、血管内に消化酵素を加圧注入する請求項１に記載の脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項３】
前記消化酵素が、タンパク質分解酵素である請求項１に記載の脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項４】
前記タンパク質分解酵素が、コラゲナーゼ活性および／またはゼラチナーゼ活性を有する酵素である請求項３に記載の脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項１】
血管を含む脂肪組織を切り出して採取する採取ステップと、
該採取ステップにより採取された脂肪組織の切断面に露出する血管の開口部から消化酵素を注入する注入ステップと、
該注入ステップにより注入された消化酵素により分解された脂肪由来細胞を回収する回収ステップとを備える脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項２】
前記注入ステップが、血管内に消化酵素を加圧注入する請求項１に記載の脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項３】
前記消化酵素が、タンパク質分解酵素である請求項１に記載の脂肪由来細胞の分離方法。
【請求項４】
前記タンパク質分解酵素が、コラゲナーゼ活性および／またはゼラチナーゼ活性を有する酵素である請求項３に記載の脂肪由来細胞の分離方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００８−６１６２９（Ｐ２００８−６１６２９Ａ）
【公開日】平成２０年３月２１日（２００８．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２４６０６６（Ｐ２００６−２４６０６６）
【出願日】平成１８年９月１１日（２００６．９．１１）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年３月２１日（２００８．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年９月１１日（２００６．９．１１）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
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