豚肉の肉汁損失を減少させるための組成物
２５−ヒドロキシビタミンＤ３は、豚枝肉中の肉汁損失を低下させることが分かった。約２５〜７５μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する飼料は、豚肉をはじめとする肉の保水容量を改善する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の簡単な説明］
本発明は、豚に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与するステップを含んでなる、豚肉の肉汁損失を減少させる方法に関する。本発明はまた、肉汁損失を減少させるのに効果的であり、２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する、豚用飼料およびプレミクスにも関する。
【０００２】
［背景技術］
保水容量（ＷＨＣ）および色は、豚肉の鮮度の主要な品質特性である。それらは新鮮な肉の外観、ひいては消費者の購入時の認知に影響する。さらにＷＨＣは、新鮮な肉の技術的価値と、調理済みまたは加工製品の多汁性との双方に影響する。
【０００３】
過去には、肉質に関与するものとして多数の要素が調査されている。いくつかの遺伝子が、許容できない枝肉品質の一因となるとして同定されている。例えばハロタン遺伝子の存在が、豚枝肉にＰＳＥ（色調が淡く、軟質、滲出性）を高い頻度でもたらした。しかし繁殖戦略の成功によって、今や多かれ少なかれヨーロッパの豚個体群からハロタンキャリアが排除されており、引き続いて極端なＰＳＥ症例が排除されている。しかしＷＨＣの違いおよび淡い肉色は依然として存在するので、この遺伝子の排除は問題を完全に解決していない。
【０００４】
ＵＳＡおよびいくつかのヨーロッパの国々では、重要な経済的損失には、ＲＳＥ（色調は赤く、軟質、滲出性）肉のような典型的なＰＳＥ肉とは異なる品質欠陥が関わっていることが分かっている。いずれにしても肉のＷＨＣが乏しいことが、双方の欠陥の基本的側面である。
【０００５】
豚の肉質に対するストレスおよび栄養の影響が、大規模に研究されている。いくつかの要因が、豚肉のＷＨＣに影響を与えると見なされている。栄養因子中、ビタミンおよび微量元素もまた検討されるべきである。したがって生育−肥育豚の飼料に影響を与えることで、豚肉中の肉汁損失を低下できることが望ましいであろう。２５−ヒドロキシビタミンＤ３が、従来、ブタの飼料に添加されている。例えば国際公開第０３／０５９３５８号パンフレット、国際公開第０５／６６４０１８号パンフレット、および欧州特許第１５１６５４０号明細書を参照されたい。しかしこれらの出願のいずれも肉汁損失量を低下させる２５−ヒドロキシビタミンＤ３の能力を教示していない。
【０００６】
飼料手段を通じて、新鮮な肉中の肉汁損失量を管理できることが望ましいであろう。
【０００７】
［発明の詳細な説明］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料を給餌することで、得られる肉の保水容量（ＷＨＣ）を増大し得て、ひいては枝肉の肉汁損失を低下し得ることが分かった。したがって本発明の一態様は、得られる肉のＷＨＣを改善するのに十分な量の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料を給餌することである。
【０００８】
特に本発明に従って、飼料中で２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（２５−ヒドロキシビタミンＤ３；２５−ＯＨ Ｄ３とも称される）を与えられた生育−肥育豚の枝肉は、肉汁損失量が低下することが分かった。したがって本発明の一態様は、生育／肥育豚に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与することにより豚肉中の肉汁損失を減少させる方法である。
【０００９】
本発明の別の態様は、肉中の肉汁損失を低下させるための２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含んでなる豚用飼料である。本発明のさらに別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ３を含有する豚用プレミクスである。
【００１０】
２５−ＯＨビタミンＤ３飼料を給餌する方法を使用して、滲出性肉を示す可能性のあるあらゆる動物において肉汁損失を防止し得る。好ましくは、動物は豚または仔ウシである。
【００１１】
［投与量］
効果的な投与量は、もちろん飼育される動物種に左右される。豚用では約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、好ましくは５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３が効果的である。この投与量が、好ましくは肥育豚の生育−肥育期（すなわち約６０日目以降）を通して与えられる。いくつかの実施態様では、この投与量は生育−肥育期全体を通して一定である。
【００１２】
２５−ＯＨ Ｄ３は、好ましくは容易に混合されて上の投与量を提供し得る、都合よい濃度のビタミンプレミクスの一部である。本発明の別の態様は、完成飼料中の２５−ＯＨビタミンＤ３の量が、約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、なおもより好ましくは約５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３になる、飼料と混合し得る濃縮ビタミンプレミクスである。約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、好ましくは約５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する完成飼料もまた、本発明の別の態様を成す。
【００１３】
以下、非限定的な実施例を提示して、本発明をさらに例証する。
【００１４】
［実施例］
［実施例１］
［生育−肥育豚の枝肉収率、赤味／脂肪比率、および肉汁損失に対する２５−ヒドロキシコレカルシフェロールによる長期飼料補給効果の評価］
５０匹の２８日齢Ｌａｒｇｅ−Ｗｈｉｔｅ×Ｌａｎｄｒａｃｅ種の離乳したばかりの幼豚、初期体重７．９±０．７４ｋｇを使用した。動物を同数の２群（ＡおよびＢ）に分けて、環境制御された室内で下位群のケージ（８匹の２ケージ、および９匹の１ケージ）に入れた。各ケージはプラスチック被覆溶接金網床を有し、２個の給水ニップルと２個のステンレス鋼給餌器が装着されていた。室温は最初２７℃であり、毎週約２℃ずつ２１〜２２℃まで低下させた。実験全体を通じて環境湿度百分率は５０％であった。実験は、Ｃｅｎｔｒｅ ｄｅ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ ｅｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ａｎｉｍａｌｅ（ＣＲＮＡ），ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｆｒａｎｃｅ，ＢＰ １７０，６８３０５ Ｓａｉｎｔ−Ｌｏｕｉｓ ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅにおいて実施した。これらは生きた動物を用いた実験に関するフランスの法的規制に従って実施された。
【００１５】
各動物群には、２０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３を添加した基礎食（Ａ群）、またはビタミンＤ３なしで５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓから市販されるＲｏｖｉｍｉｘ（登録商標）Ｈｙ・Ｄ（登録商標））を添加した基礎食（Ｂ群）のどちらかを与えた。
【００１６】
どちらの飼料もマッシュ形態で不断給餌した。基礎食は、Ｈｅｎｒｙら（１９８９年）およびＮＲＣ（１９９８年）に記載の動物の所要量を満たすように調合された。基礎食の組成、および栄養補助栄養飼料中のビタミンＤ３と２５−ＯＨ Ｄ３の濃度を表１に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】
離乳後期の終わりに、各群の最も重い２０匹を生育−肥育期のために使用した。それらの初期体重は、Ａ群では１９．４±１．３６ｋｇ、Ｂ群では２１．５±１．４６ｋｇであった。動物は環境制御された室内で、各４匹の下位群で床置き囲いケージ内で飼育した。各囲いはプラスチック被覆溶接金網床を有し、２個の給水ニップルと４個の個別のステンレス鋼給餌器が装着されていた。室温は２１〜２２℃であり、湿度百分率は５０％であった。
【００１９】
豚に、２０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３（Ａ群、離乳後期中に２０００Ｕ／ｋｇを摂取した動物）または５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（Ｂ群、離乳後期中に５０μｇ／ｋｇを摂取した動物）のどちらかを補給した飼料を８７日間にわたり与えた。基礎食（表２）は、Ｌ’ａｌｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｄｅｓ ａｎｉｍａｕｘ ｄｏｍｅｓｔｉｑｕｅｓ − ｐｏｒｃ，ｌａｐｉｎ，ｖｏｌａｉｌｌｅｓ（ＩＮＲＡ編），第２版，ＩＮＲＡ，Ｐａｒｉｓ，４９〜７６頁よりＨｅｎｒｙら，１９８９年；およびＮＲＣ，１９９８年，Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｓｗｉｎｅ，改訂第１０版，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ，Ｕ．Ｓ．Ａ．に記載の動物の所要量を満たすように調合された。
【００２０】
【表２】
【００２１】
動物の健康状態は毎日管理し、肢または足の問題を検出するため動物の秤量中に（起立および歩行姿勢の）特定の観察を行った。
【００２２】
実験の終わりに、全ての動物を無作為に４つの異なるロットに分けて、８４日目、８５日目、８６日目、および８７日目の屠殺（ｓｌａｕｇｈｔｅｒ ｃａｍｐａｉｇｎ）に振り分けた。各ロットの動物を１２時間絶食させ、鎮静および失神処置後の屠殺の直前に秤量した。枝肉は脊柱管に沿って長手方向に切り分け、＋４℃で２４時間の保存後に秤量して枝肉の冷却収率を推定した。
【００２３】
中央枝肉の１つで、腸骨脊柱筋肉（背最長筋（ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ））全体を切開した。各筋肉を即座に秤量してｐＨを測定し、そして＋４℃で２４時間の保存後にも秤量してｐＨを測定した。保存中の水分回収のために、膨張させたビニル袋内で筋肉を個別に熟成させた。筋肉からの肉汁損失百分率を重量の差および水分回収によって推定した。
【００２４】
第２の中央枝肉では、ノギスを用いて異なる３箇所で赤身および脂肪を測定した。第４胸椎の高さでの腸骨脊柱筋肉（背最長筋（ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ））の切開後に、筋肉深度を測定した。皮下背脂肪沈着を第４胸椎および腰椎の高さで測定した。これらの測定値を使用して枝肉の赤味／脂肪比を推定した。
【００２５】
［統計学的分析］
結果の統計学的処理は、平均値および平均値の標準偏差の計算、ならびに９５％信頼水準での二因子階層分散分析を伴った。数理モデルは次のとおりであった。
Ｙｉｊｋ＝μ＋Ａｉ＋Ｂｉｊ＋Ｚｉｊｋ
式中、μは平均値、Ａｉは飼料効果、Ｂｉｊは飼料と動物または囲いとの複合効果、およびＺｉｊｋは残差項である。Ｂｉｊ効果なしで顕著なＡｉ効果が観察された場合、分散分析に続いてスチューデント検定を実施した（ＳｎｅｄｅｃｏｒおよびＣｏｃｈｒａｎ，１９８９年 Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ，第８版，Ｉｏｗａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ａｍｅｓ）。これらの計算は、ＳｔａｔＧｒａｐｈｉｃｓ Ｐｌｕｓ ５．１（Ｍａｎｕｇｉｓｔｉｃｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２００１年）を使用して実施した。全てのパラメーターは、実験単位として各個体を使用して分析した。
【００２６】
［結果］
使用した栄養補助飼料中で観察されたビタミンＤ３および２５−ヒドロキシカルシフェロール濃度は、計画包含レベルと良好に合致した（表１および２）。動物はいかなる実験段階でも疾患症状を呈さず、肢または足の問題も検知されなかった。食餌性２５−ＯＨ Ｄ３補給は、下の表３および４に示されるように冷却収率および枝肉の赤味／脂肪比に対して好ましい効果を与えなかった。
【００２７】
【表３】
【００２８】
【表４】
【００２９】
屠殺直後および２４時間保存後にｐＨ値を測定した。腸骨脊柱筋肉セグメントは、２５−ＯＨ Ｄ３を摂取した動物において対照群動物からの値と同様であった（表５）。
【００３０】
【表５】
【００３１】
筋細胞の細胞内酸性化は、アクチン・ミオシン複合体の立体構造（死後硬直）およびタンパク質変性と共に、筋細線維体積を変える主な３要因の１つである（Ｍｏｎｉｎ，２００３年 ＩＮＲＡ．Ｐｒｏｄ．Ａｎｉｍ．１６（４），２５１）。屠殺後、細胞内ｐＨは７から約５．４〜５．７に低下して筋細線維の収縮を誘発し、筋肉細胞内の水分保持のための利用可能空間を減少させる。
【００３２】
本研究で測定された肉汁損失およびｐＨ値は、屠殺中に最適作業条件に置かれた動物との比較で、異なるストレス要因を被った豚の枝肉において、Ａｌａｒｃｏｎ Ｒｏｊｏら，２００６年、Ａｌａｒｃｏｎ Ｒｏｊｏ Ａ．Ｄ．ら，２００６年、Ｔｅｃ Ｐｅｃｕ Ｍｅｘ．４４（１）：５３で観察したｐＨ値低下および肉汁損失増大に一致する。
【００３３】
迅速なＣａ２＋誘発性内膜開口分泌は膜再封過程の重要な段階であり、１，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールは、骨芽細胞中のＣａ２＋チャネル活性化の結果、細胞内カルシウムの上昇を刺激することが報告されている。
【００３４】
理論による拘束は望まないが、２５−ＯＨ Ｄ３の食餌補給は、死後の過程の結果としての細胞膜破壊に応えて、間接的に筋肉細胞の修復能力を利用可能にすると思われる。ひとたび水が細胞外空間に達すると、それは筋肉繊維を通過して筋肉端で脱落し得る。本実験では、２５−ＯＨ Ｄ３を与えた豚の筋肉セグメントからは明らかにより少ない体積の水が回収され、質量損失はより少なかった（表５）。
【００３５】
［実施例２］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する豚飼料を次のように調製し得る。
【００３６】
【表６】
【００３７】
［実施例３］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する豚飼料用プレミクスを次のように調製し得る。
【００３８】
【表７】
【００３９】
全成分を注意深く混ぜ合わせて、このプレミクスを０．５％、最終豚飼料に添加する（５ｋｇ／１０００ｋｇの飼料）。このようなプレミクスの添加により、調製された飼料中の２５−ヒドロキシビタミンＤ３濃度は５０μｇ／ｋｇになる。
【００４０】
代案としては、２５−ヒドロキシビタミンＤ３はまた、適切な担体を含有する１％希釈プレミクスに添加し得る。このような担体は、小麦粉、小麦ミドリング粉、トウモロコシ穂軸、もみ殻、アーモンド殻または炭酸カルシウムを単独で、またはこれらの担体のいくつかの不定混合物であり得る。典型的な配合は次のとおりである。
【００４１】
【表８】
【００４２】
全ての成分を注意深く混ぜ合わせ、このプレミクスを０．０５％、完成豚飼料に添加する（０．５ｋｇ／１０００ｋｇの飼料）。このようなプレミクスの添加により、調製された飼料中の２５−ヒドロキシビタミンＤ３濃度は５０μｇ／ｋｇになる。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の簡単な説明］
本発明は、豚に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与するステップを含んでなる、豚肉の肉汁損失を減少させる方法に関する。本発明はまた、肉汁損失を減少させるのに効果的であり、２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する、豚用飼料およびプレミクスにも関する。
【０００２】
［背景技術］
保水容量（ＷＨＣ）および色は、豚肉の鮮度の主要な品質特性である。それらは新鮮な肉の外観、ひいては消費者の購入時の認知に影響する。さらにＷＨＣは、新鮮な肉の技術的価値と、調理済みまたは加工製品の多汁性との双方に影響する。
【０００３】
過去には、肉質に関与するものとして多数の要素が調査されている。いくつかの遺伝子が、許容できない枝肉品質の一因となるとして同定されている。例えばハロタン遺伝子の存在が、豚枝肉にＰＳＥ（色調が淡く、軟質、滲出性）を高い頻度でもたらした。しかし繁殖戦略の成功によって、今や多かれ少なかれヨーロッパの豚個体群からハロタンキャリアが排除されており、引き続いて極端なＰＳＥ症例が排除されている。しかしＷＨＣの違いおよび淡い肉色は依然として存在するので、この遺伝子の排除は問題を完全に解決していない。
【０００４】
ＵＳＡおよびいくつかのヨーロッパの国々では、重要な経済的損失には、ＲＳＥ（色調は赤く、軟質、滲出性）肉のような典型的なＰＳＥ肉とは異なる品質欠陥が関わっていることが分かっている。いずれにしても肉のＷＨＣが乏しいことが、双方の欠陥の基本的側面である。
【０００５】
豚の肉質に対するストレスおよび栄養の影響が、大規模に研究されている。いくつかの要因が、豚肉のＷＨＣに影響を与えると見なされている。栄養因子中、ビタミンおよび微量元素もまた検討されるべきである。したがって生育−肥育豚の飼料に影響を与えることで、豚肉中の肉汁損失を低下できることが望ましいであろう。２５−ヒドロキシビタミンＤ３が、従来、ブタの飼料に添加されている。例えば国際公開第０３／０５９３５８号パンフレット、国際公開第０５／６６４０１８号パンフレット、および欧州特許第１５１６５４０号明細書を参照されたい。しかしこれらの出願のいずれも肉汁損失量を低下させる２５−ヒドロキシビタミンＤ３の能力を教示していない。
【０００６】
飼料手段を通じて、新鮮な肉中の肉汁損失量を管理できることが望ましいであろう。
【０００７】
［発明の詳細な説明］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料を給餌することで、得られる肉の保水容量（ＷＨＣ）を増大し得て、ひいては枝肉の肉汁損失を低下し得ることが分かった。したがって本発明の一態様は、得られる肉のＷＨＣを改善するのに十分な量の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料を給餌することである。
【０００８】
特に本発明に従って、飼料中で２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（２５−ヒドロキシビタミンＤ３；２５−ＯＨ Ｄ３とも称される）を与えられた生育−肥育豚の枝肉は、肉汁損失量が低下することが分かった。したがって本発明の一態様は、生育／肥育豚に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与することにより豚肉中の肉汁損失を減少させる方法である。
【０００９】
本発明の別の態様は、肉中の肉汁損失を低下させるための２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含んでなる豚用飼料である。本発明のさらに別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ３を含有する豚用プレミクスである。
【００１０】
２５−ＯＨビタミンＤ３飼料を給餌する方法を使用して、滲出性肉を示す可能性のあるあらゆる動物において肉汁損失を防止し得る。好ましくは、動物は豚または仔ウシである。
【００１１】
［投与量］
効果的な投与量は、もちろん飼育される動物種に左右される。豚用では約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、好ましくは５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３が効果的である。この投与量が、好ましくは肥育豚の生育−肥育期（すなわち約６０日目以降）を通して与えられる。いくつかの実施態様では、この投与量は生育−肥育期全体を通して一定である。
【００１２】
２５−ＯＨ Ｄ３は、好ましくは容易に混合されて上の投与量を提供し得る、都合よい濃度のビタミンプレミクスの一部である。本発明の別の態様は、完成飼料中の２５−ＯＨビタミンＤ３の量が、約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、なおもより好ましくは約５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３になる、飼料と混合し得る濃縮ビタミンプレミクスである。約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、好ましくは約５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する完成飼料もまた、本発明の別の態様を成す。
【００１３】
以下、非限定的な実施例を提示して、本発明をさらに例証する。
【００１４】
［実施例］
［実施例１］
［生育−肥育豚の枝肉収率、赤味／脂肪比率、および肉汁損失に対する２５−ヒドロキシコレカルシフェロールによる長期飼料補給効果の評価］
５０匹の２８日齢Ｌａｒｇｅ−Ｗｈｉｔｅ×Ｌａｎｄｒａｃｅ種の離乳したばかりの幼豚、初期体重７．９±０．７４ｋｇを使用した。動物を同数の２群（ＡおよびＢ）に分けて、環境制御された室内で下位群のケージ（８匹の２ケージ、および９匹の１ケージ）に入れた。各ケージはプラスチック被覆溶接金網床を有し、２個の給水ニップルと２個のステンレス鋼給餌器が装着されていた。室温は最初２７℃であり、毎週約２℃ずつ２１〜２２℃まで低下させた。実験全体を通じて環境湿度百分率は５０％であった。実験は、Ｃｅｎｔｒｅ ｄｅ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ ｅｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ａｎｉｍａｌｅ（ＣＲＮＡ），ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｆｒａｎｃｅ，ＢＰ １７０，６８３０５ Ｓａｉｎｔ−Ｌｏｕｉｓ ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅにおいて実施した。これらは生きた動物を用いた実験に関するフランスの法的規制に従って実施された。
【００１５】
各動物群には、２０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３を添加した基礎食（Ａ群）、またはビタミンＤ３なしで５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓから市販されるＲｏｖｉｍｉｘ（登録商標）Ｈｙ・Ｄ（登録商標））を添加した基礎食（Ｂ群）のどちらかを与えた。
【００１６】
どちらの飼料もマッシュ形態で不断給餌した。基礎食は、Ｈｅｎｒｙら（１９８９年）およびＮＲＣ（１９９８年）に記載の動物の所要量を満たすように調合された。基礎食の組成、および栄養補助栄養飼料中のビタミンＤ３と２５−ＯＨ Ｄ３の濃度を表１に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】
離乳後期の終わりに、各群の最も重い２０匹を生育−肥育期のために使用した。それらの初期体重は、Ａ群では１９．４±１．３６ｋｇ、Ｂ群では２１．５±１．４６ｋｇであった。動物は環境制御された室内で、各４匹の下位群で床置き囲いケージ内で飼育した。各囲いはプラスチック被覆溶接金網床を有し、２個の給水ニップルと４個の個別のステンレス鋼給餌器が装着されていた。室温は２１〜２２℃であり、湿度百分率は５０％であった。
【００１９】
豚に、２０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３（Ａ群、離乳後期中に２０００Ｕ／ｋｇを摂取した動物）または５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（Ｂ群、離乳後期中に５０μｇ／ｋｇを摂取した動物）のどちらかを補給した飼料を８７日間にわたり与えた。基礎食（表２）は、Ｌ’ａｌｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｄｅｓ ａｎｉｍａｕｘ ｄｏｍｅｓｔｉｑｕｅｓ − ｐｏｒｃ，ｌａｐｉｎ，ｖｏｌａｉｌｌｅｓ（ＩＮＲＡ編），第２版，ＩＮＲＡ，Ｐａｒｉｓ，４９〜７６頁よりＨｅｎｒｙら，１９８９年；およびＮＲＣ，１９９８年，Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｓｗｉｎｅ，改訂第１０版，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ，Ｕ．Ｓ．Ａ．に記載の動物の所要量を満たすように調合された。
【００２０】
【表２】
【００２１】
動物の健康状態は毎日管理し、肢または足の問題を検出するため動物の秤量中に（起立および歩行姿勢の）特定の観察を行った。
【００２２】
実験の終わりに、全ての動物を無作為に４つの異なるロットに分けて、８４日目、８５日目、８６日目、および８７日目の屠殺（ｓｌａｕｇｈｔｅｒ ｃａｍｐａｉｇｎ）に振り分けた。各ロットの動物を１２時間絶食させ、鎮静および失神処置後の屠殺の直前に秤量した。枝肉は脊柱管に沿って長手方向に切り分け、＋４℃で２４時間の保存後に秤量して枝肉の冷却収率を推定した。
【００２３】
中央枝肉の１つで、腸骨脊柱筋肉（背最長筋（ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ））全体を切開した。各筋肉を即座に秤量してｐＨを測定し、そして＋４℃で２４時間の保存後にも秤量してｐＨを測定した。保存中の水分回収のために、膨張させたビニル袋内で筋肉を個別に熟成させた。筋肉からの肉汁損失百分率を重量の差および水分回収によって推定した。
【００２４】
第２の中央枝肉では、ノギスを用いて異なる３箇所で赤身および脂肪を測定した。第４胸椎の高さでの腸骨脊柱筋肉（背最長筋（ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ））の切開後に、筋肉深度を測定した。皮下背脂肪沈着を第４胸椎および腰椎の高さで測定した。これらの測定値を使用して枝肉の赤味／脂肪比を推定した。
【００２５】
［統計学的分析］
結果の統計学的処理は、平均値および平均値の標準偏差の計算、ならびに９５％信頼水準での二因子階層分散分析を伴った。数理モデルは次のとおりであった。
Ｙｉｊｋ＝μ＋Ａｉ＋Ｂｉｊ＋Ｚｉｊｋ
式中、μは平均値、Ａｉは飼料効果、Ｂｉｊは飼料と動物または囲いとの複合効果、およびＺｉｊｋは残差項である。Ｂｉｊ効果なしで顕著なＡｉ効果が観察された場合、分散分析に続いてスチューデント検定を実施した（ＳｎｅｄｅｃｏｒおよびＣｏｃｈｒａｎ，１９８９年 Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ，第８版，Ｉｏｗａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ａｍｅｓ）。これらの計算は、ＳｔａｔＧｒａｐｈｉｃｓ Ｐｌｕｓ ５．１（Ｍａｎｕｇｉｓｔｉｃｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２００１年）を使用して実施した。全てのパラメーターは、実験単位として各個体を使用して分析した。
【００２６】
［結果］
使用した栄養補助飼料中で観察されたビタミンＤ３および２５−ヒドロキシカルシフェロール濃度は、計画包含レベルと良好に合致した（表１および２）。動物はいかなる実験段階でも疾患症状を呈さず、肢または足の問題も検知されなかった。食餌性２５−ＯＨ Ｄ３補給は、下の表３および４に示されるように冷却収率および枝肉の赤味／脂肪比に対して好ましい効果を与えなかった。
【００２７】
【表３】
【００２８】
【表４】
【００２９】
屠殺直後および２４時間保存後にｐＨ値を測定した。腸骨脊柱筋肉セグメントは、２５−ＯＨ Ｄ３を摂取した動物において対照群動物からの値と同様であった（表５）。
【００３０】
【表５】
【００３１】
筋細胞の細胞内酸性化は、アクチン・ミオシン複合体の立体構造（死後硬直）およびタンパク質変性と共に、筋細線維体積を変える主な３要因の１つである（Ｍｏｎｉｎ，２００３年 ＩＮＲＡ．Ｐｒｏｄ．Ａｎｉｍ．１６（４），２５１）。屠殺後、細胞内ｐＨは７から約５．４〜５．７に低下して筋細線維の収縮を誘発し、筋肉細胞内の水分保持のための利用可能空間を減少させる。
【００３２】
本研究で測定された肉汁損失およびｐＨ値は、屠殺中に最適作業条件に置かれた動物との比較で、異なるストレス要因を被った豚の枝肉において、Ａｌａｒｃｏｎ Ｒｏｊｏら，２００６年、Ａｌａｒｃｏｎ Ｒｏｊｏ Ａ．Ｄ．ら，２００６年、Ｔｅｃ Ｐｅｃｕ Ｍｅｘ．４４（１）：５３で観察したｐＨ値低下および肉汁損失増大に一致する。
【００３３】
迅速なＣａ２＋誘発性内膜開口分泌は膜再封過程の重要な段階であり、１，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールは、骨芽細胞中のＣａ２＋チャネル活性化の結果、細胞内カルシウムの上昇を刺激することが報告されている。
【００３４】
理論による拘束は望まないが、２５−ＯＨ Ｄ３の食餌補給は、死後の過程の結果としての細胞膜破壊に応えて、間接的に筋肉細胞の修復能力を利用可能にすると思われる。ひとたび水が細胞外空間に達すると、それは筋肉繊維を通過して筋肉端で脱落し得る。本実験では、２５−ＯＨ Ｄ３を与えた豚の筋肉セグメントからは明らかにより少ない体積の水が回収され、質量損失はより少なかった（表５）。
【００３５】
［実施例２］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する豚飼料を次のように調製し得る。
【００３６】
【表６】
【００３７】
［実施例３］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含有する豚飼料用プレミクスを次のように調製し得る。
【００３８】
【表７】
【００３９】
全成分を注意深く混ぜ合わせて、このプレミクスを０．５％、最終豚飼料に添加する（５ｋｇ／１０００ｋｇの飼料）。このようなプレミクスの添加により、調製された飼料中の２５−ヒドロキシビタミンＤ３濃度は５０μｇ／ｋｇになる。
【００４０】
代案としては、２５−ヒドロキシビタミンＤ３はまた、適切な担体を含有する１％希釈プレミクスに添加し得る。このような担体は、小麦粉、小麦ミドリング粉、トウモロコシ穂軸、もみ殻、アーモンド殻または炭酸カルシウムを単独で、またはこれらの担体のいくつかの不定混合物であり得る。典型的な配合は次のとおりである。
【００４１】
【表８】
【００４２】
全ての成分を注意深く混ぜ合わせ、このプレミクスを０．０５％、完成豚飼料に添加する（０．５ｋｇ／１０００ｋｇの飼料）。このようなプレミクスの添加により、調製された飼料中の２５−ヒドロキシビタミンＤ３濃度は５０μｇ／ｋｇになる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物から得られる肉の保水容量（ＷＨＣ）を増大させるのに十分な量の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料。
【請求項２】
豚または仔ウシ飼料である、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項３】
得られる肉のＷＨＣを改善するのに十分な量の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料を給餌するステップを含んでなる、動物から得られる肉のＷＨＣを改善する方法。
【請求項４】
前記動物が豚または仔ウシである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
生育／肥育中の豚に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与することにより、豚肉の肉汁損失を減少させる方法。
【請求項６】
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含んでなる、前記肉中の肉汁損失を低下させる豚用飼料。
【請求項７】
約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、より好ましくは約５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含んでなる、請求項５に記載の飼料。
【請求項８】
完成飼料中の２５−ＯＨビタミンＤ３の量が、約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３であり、より好ましくは５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３である、飼料と混合し得る２５−ＯＨビタミンＤ３を含んでなるビタミンプレミクス。
【請求項１】
動物から得られる肉の保水容量（ＷＨＣ）を増大させるのに十分な量の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料。
【請求項２】
豚または仔ウシ飼料である、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項３】
得られる肉のＷＨＣを改善するのに十分な量の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を添加した動物飼料を給餌するステップを含んでなる、動物から得られる肉のＷＨＣを改善する方法。
【請求項４】
前記動物が豚または仔ウシである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
生育／肥育中の豚に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与することにより、豚肉の肉汁損失を減少させる方法。
【請求項６】
２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含んでなる、前記肉中の肉汁損失を低下させる豚用飼料。
【請求項７】
約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３、より好ましくは約５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３を含んでなる、請求項５に記載の飼料。
【請求項８】
完成飼料中の２５−ＯＨビタミンＤ３の量が、約２５〜７５μｇ／ｋｇ、好ましくは約４０〜６０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３であり、より好ましくは５０μｇ／ｋｇの２５−ヒドロキシビタミンＤ３である、飼料と混合し得る２５−ＯＨビタミンＤ３を含んでなるビタミンプレミクス。
【公表番号】特表２０１１−５２４１７７（Ｐ２０１１−５２４１７７Ａ）
【公表日】平成２３年９月１日（２０１１．９．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１３９８８（Ｐ２０１１−５１３９８８）
【出願日】平成２１年６月９日（２００９．６．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５７０６９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５３１８８
【国際公開日】平成２１年１２月２３日（２００９．１２．２３）
【出願人】（５０３２２０３９２）ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． (873)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年９月１日（２０１１．９．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月９日（２００９．６．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５７０６９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５３１８８
【国際公開日】平成２１年１２月２３日（２００９．１２．２３）
【出願人】（５０３２２０３９２）ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． (873)
【Ｆターム（参考）】
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