食細胞活性化剤
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、オゴノリ属の海藻から抽出される物質を有効成分とする食細胞活性化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】人体にそなわった最も重要な生体防御機能である免疫能を高めることにより疾患の治療に役立てる免疫賦活剤が種々研究され提案されている。この免疫賦活剤は一般に毒性や副作用が少なく、安全性の点で優れるという利点がある反面、薬効の面で今１つ不満なものが多い。
【０００３】一方、海藻類は古くより我国では体によい食品として食されてきたが、近年その中に含まれている種々の生理活性物質が注目され、抗ウイルス剤や抗腫瘍製剤の開発研究が行われるようになってきた。例えば、特開昭６３−３１６７３２号公報には紅藻由来の抗ウイルス剤が記載され、又特開昭６４−６６１２６号公報には紅藻由来の抗腫瘍剤が開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし海藻、特にオゴノリ属に属する海藻から免疫能を高める成分を単離し、それを有効成分にした食細胞活性化剤は未だ開発されていない。本発明は、そのオゴノリ属海藻由来の食細胞活性化剤を提供することを課題とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を解決するため、オゴノリ属の海藻の抽出法について種々検討し、そのうち、特に熱水抽出によって抽出し、精製した物質が食細胞の働きを高める作用を有し、それによって免疫能を活性化することを見出しこの知見にもとづいて本発明を完成した。すなわち本発明はオゴノリ属に属する海藻より水性溶媒で抽出される物質を有効成分とする食細胞活性化剤を提供するものである。以下本発明を詳細に説明する。
【０００６】本発明で用いるオゴノリ属（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ）の海藻としては、オゴノリ（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）、ツルシラモ（Ｇ．ｃｈｏｒｄａ）、シラモ（Ｇ．ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）、オオオゴノリ（Ｇ．ｇｉｇａｓ）、ミゾオゴノリ（Ｇ．ｉｎｃｕｒｖａｔａ）、カバノリ（Ｇ．ｔｅｘｔｏｒｉｉ）等が挙げられ、特にオゴノリが好ましい。これらの海藻はそのままでも用いられるが、水洗し汚れを除き、乾燥した後、粉砕して乾燥粉末として用いるのが好ましい。
【０００７】さらに、海藻粉末も最初から水性溶媒で抽出してもよいが、油分、少糖類、油溶性色素等を除く意味でこれらを溶解し得る有機溶媒でまず海藻を洗浄することが好ましい。洗浄用有機溶媒としては例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等の低級アルカノール、アセトン等の低級アルカノン等を用いることができる。また、これらの溶媒と少量の水（８０：２０v/v 程度まで）との混合物であってもよい。メタノール、エタノール及びこれらと水との混合溶媒を室温以上に加温して用いるのが好ましい。
【０００８】洗浄した該海藻粉末は水性溶媒を加えて加温下に抽出操作を行う。水性溶媒としては水が好ましいが、水に酸又は塩基等を添加した酸性水溶液又は塩基性水溶液として用いることもできる。
【０００９】抽出温度は室温以上〜系の沸騰温度であるが、系の沸騰温度例えば沸騰水溶中で抽出されることが好ましい。抽出時間は通常５分以上であるが、３０分〜２０時間が好ましい。又、抽出操作は１回でもよいが、２回以上繰り返して行うことが好ましい。抽出液は遠心分離、濾過、デカント等により固形分を除去する。
【００１０】以上によって得られた抽出液はそのままもしくは必要に応じ中和、脱塩、濃縮して免疫賦活剤として使用することもできるが、通常さらに一般の精製処理に付すのがよい。精製処理としては有機溶媒による沈澱、塩析、透析、限外濾過、逆浸透処理、ゲル濾過等が使用可能であり、これらは２種以上組み合わせて行ってもよい。
【００１１】有機溶媒による沈澱は通常活性成分を溶解しないか少ししか溶解しない親水性有機溶媒を添加して有効成分を沈澱させることにより行う。かかる有機溶媒としては通常メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等の低級アルカノール、アセトン等の低級アルカノン等を用いることができる。メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等の低級アルカノールが好ましく、特にエタノールが好ましい。
【００１２】塩析工程に用いる塩析剤は硫安、食塩、塩化カリ、炭酸バリウム、塩化セチルピリジニウム等が用いられる。透析は通常セロファン膜、コロジオン膜などの半透膜を用いて行う。ゲル濾過はデキストラン又はポリアクリルアミドゲルなどを充填したカラムを用いて行う。セファデックス、バイオゲルの名称で販売されている充填剤が通常用いられる。
【００１３】限外濾過、逆浸透圧法はいずれも加圧下で膜を用いて分画する方法である。前者は０．５〜５kg／cm2 、後者は２０〜３５kg／cm2 で行うのが通常である。又、上記操作に加えて必要に応じイオン交換処理を行ってもよい。
【００１４】以上の精製操作で得られる活性成分固体はそのまま食細胞活性化剤又はその有効成分として用いることができるが、通常さらに乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、熱風乾燥等）する。上記のようにして得られたオゴノリ属に属する海藻の水性溶媒による抽出物はそれ自体で又は製薬上許容される種々の担体と混合した種々の剤型で食細胞活性化剤として用いることができる。
【００１５】経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などは、通常それらの組成物中に製剤上一般に使用される結合例、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤のような添加物を含有する。又経口用液体製剤として用いる場合は、内用水剤、振盪合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよく、又使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であってもよい。さらに、このような液体製剤は通常用いられる添加剤、保存剤のいずれを含有していてもよい。
【００１６】注射用の場合には、その組成物は通常安定剤、緩衝剤、保存剤、等張化剤などの添加剤を含有し、通常単位投与量アンプル又は多投与量容器の形態で提供される。なお、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中の乳液のような形態であってもよく、一方活性成分は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物質不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であってもよい。
【００１７】本発明の食細胞活性化剤は人間及び動物に経口的又は非経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包含する。非経口的投与は注射例えば皮下、筋肉、静脈注射、点滴などを含む。また、本発明の食細胞活性化剤は食品に添加し、健康食品的に摂取することもできる。
【００１８】本発明の食細胞活性化剤の投与量は動物か人間により、又年齢、個人差、病状などに影響されるので、場合によっては下記範囲外の量を投与する場合も生ずるが、一般に人間を対象とする場合の経口投与量は活性成分固形物量として大人１日体重１kg当り０．５〜１０００mg、好ましくは１〜３００mgであり、１回から３回に分けて投与する。なお、本抽出物（乾燥物として）の急性毒性はいずれもＬＤ50（ＩＣＲ系マウス、経口投与）＞３ｇ／kgであった。
【００１９】
【実施例】以下実施例で本発明を説明する。
実施例１オゴノリ塩蔵品を十分に水洗し、凍結乾燥後粉砕してオゴノリ乾燥粉末を得た。この粉末５０ｇを８５％（ｖ／ｖ）温メタノールで洗浄後、残渣に１リットルの蒸留水を加え沸騰水浴中で３０分加温した。
【００２０】遠心分離により抽出液を回収し、残渣は再度１リットルの蒸留水で加温抽出した。同様の処理によって回収した抽出液を合わせ、ヌッツエで吸引濾過し、固形分を完全に除去した。得られた濾液に４倍量の９９．５％エタノールを加え良く攪拌した後１晩放置し沈澱を十分に析出させた。沈澱を回収し、蒸留水に膨潤溶解後、凍結乾燥して乾燥物５．４ｇを得た（これを試料Ａとする）。
【００２１】実施例２実施例１と同様にして調製したオゴノリ乾燥粉末５０ｇに蒸留水１．５リットルを加え沸騰水浴中で３０分加温抽出した。実施例１と同様にして抽出を繰り返し、抽出液を回収した。回収液をセロファン膜を用いて水に対して透析した後、凍結乾燥し乾燥物９．６ｇを得た（これを試料Ｂとする）。
【００２２】実施例３オゴノリの乾燥品を十分量の水で洗浄し、再度減圧下６０℃で乾燥後粉砕した。この粉末５０ｇを実施例１と同様の操作で熱水抽出し、得られた抽出液にエタノールを加えて実施例１と同様にしてエタノール沈澱物を得た。この沈澱物を減圧下６０℃で乾燥し、乾燥物９．１ｇを得た（これを試料Ｃとする）。
【００２３】実施例４実施例１〜３で得た試料Ａ〜Ｃを分析した結果を表１に示す。なお、分析項目中の全糖はフェノール硫酸法を用い、ガラクタンと仮定して換算した値であり、蛋白質はローリー法を用いて分析した。又硫酸エステルは試料を１規定塩酸で分解後、イオンクロマトグラフィーによって測定し、３，６−アンヒドロガラクトースはＷ．Ｙａｐｈｅらの方法により分析した。
【００２４】
【表１】
【００２５】実施例５（オゴノリ抽出試料のｉｎ ｖｉｖｏ食細胞系に対する作用）
カーボンクリアランス法を用いてマウスの食細胞系の活性化作用を検討した。マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、雄性、６週齢）に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に所定の濃度になるように溶解した試料Ａ及びザイモザンＡ（市販の免疫賦活剤、サッカロミセス・セレビシエ由来細胞壁多糖成分（シグマ社製））をそれぞれ２４時間毎に３回、体重ｇ当り０．０３ml腹腔内投与し、最終投与２４時間後にカーボンクリアランスを測定した。
【００２６】すなわち、マウス尾静脈に１％ゼラチンを加えＰＢＳで６．２５倍に希釈したカーボンインク（ペリカン フォント インディア）を体重ｇ当り０．０１ml投与し、投与５分後に１０μｌ採血し、２mlの０．１％炭酸ナトリウムに溶解して、その６６０nmの吸光度を測定した。１群７匹とし、食細胞系の活性をコントロール群（ＰＢＳ投与群）のＯＤ値を１００とした時の試験群のＯＤ値として求めた。図１に結果を示す。
【００２７】実施例６（貪食指数）
マウス（ＩＣＲ、雌性、７週齢）を３群（１群６匹）に分け、試料Ａを各群に１２５，２５０，３７５mg／kg投与した。５日後に実施例５と同様にしてカーボンインクを静注し、投与５及び１２分後に採血して吸光度を測定し、次式により貪食指数Ｋを求めた。その結果を図２に示した。
【００２８】
【数１】
【００２９】実施例７（マクロファージの貪食能）
マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、雌性、７週齢）に試料Ａを腹腔内投与し、４日後の腹腔マクロファージを常法により採取した。採取したマクロファージを１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）に分散した後、５×１０5 コ／ウェルとなるよう９６穴プレートに分注し、ＣＯ2 インキュベーター内で３０分培養し、プレートの底面に細胞を付着させた後、蛍光ビーズを加えてさらに３０分培養した。培養後浮遊しているビーズをハンクス液で洗浄しプレートに残存した蛍光を測定しマクロファージの貪食能とした。結果を図３に示した。
【００３０】実施例８（ｉｎ ｖｉｔｒｏマクロファージ活性化作用）
常法によりプロテオースペプトンにて誘導したマウスの腹腔細胞を採取し、２×１０6 コ／ウェルとなるよう９６穴プレートに分注し、１時間培養してマクロファージを付着させた。浮遊細胞を除去した後、ＦＣＳ−ＲＰＭＩ培地に溶解した試料を加え７２時間培養後、培養上清を採取し、その残存グルコース濃度及び亜硝酸濃度を測定し、マクロファージ活性化の指標とした。対象としてマクロファージ活性化物質であるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）及びラミナリンを用いた。結果を表２に示した。
【００３１】
【表２】
【００３２】実施例９（カプセル剤）
試料Ａ ２００ｇトウモロコシデンプン １５０ｇタルク ８０ｇステアリン酸マグネシウム ３０ｇ上記成分を充分混和し、６０メッシュの金網を通過させて粒度を調整した後、１０００個のゼラチンカプセルに充填する。
【００３３】実施例１０（坐剤）
試料Ｂ １４０ｇカカオ脂 １２００ｇカカオ脂を５０℃に加熱して溶解し、これに乾燥物Ｂを加えて均一にし、ついでコンテナー中に流し込み、冷却固化して坐剤１０００個を製造する。
【００３４】実施例１１（注射剤）
試料Ｃ ４００ｇポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ５００ｇ注射用蒸留水 全量１０リットル上記成分を用い常法により注射剤を調製し、１アンプルに５mlずつ充填する。
【００３５】
【発明の効果】本発明の食細胞活性化剤は、従来より食品として利用してきたオゴノリ属の海藻から得られるのであるから、極めて安全性の高いものであり、食細胞系を活性化させる作用によって免疫能を賦活せしめる効果を有している。
【図面の簡単な説明】
【図１】試料Ａのカーボンクリアランス活性化作用を示す図。
【図２】試料Ａの投与量と貪食指数の関係を示す図。
【図３】試料Ａ投与によるマクロファージの蛍光ビーズ貪食能を示す図。
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、オゴノリ属の海藻から抽出される物質を有効成分とする食細胞活性化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】人体にそなわった最も重要な生体防御機能である免疫能を高めることにより疾患の治療に役立てる免疫賦活剤が種々研究され提案されている。この免疫賦活剤は一般に毒性や副作用が少なく、安全性の点で優れるという利点がある反面、薬効の面で今１つ不満なものが多い。
【０００３】一方、海藻類は古くより我国では体によい食品として食されてきたが、近年その中に含まれている種々の生理活性物質が注目され、抗ウイルス剤や抗腫瘍製剤の開発研究が行われるようになってきた。例えば、特開昭６３−３１６７３２号公報には紅藻由来の抗ウイルス剤が記載され、又特開昭６４−６６１２６号公報には紅藻由来の抗腫瘍剤が開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし海藻、特にオゴノリ属に属する海藻から免疫能を高める成分を単離し、それを有効成分にした食細胞活性化剤は未だ開発されていない。本発明は、そのオゴノリ属海藻由来の食細胞活性化剤を提供することを課題とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を解決するため、オゴノリ属の海藻の抽出法について種々検討し、そのうち、特に熱水抽出によって抽出し、精製した物質が食細胞の働きを高める作用を有し、それによって免疫能を活性化することを見出しこの知見にもとづいて本発明を完成した。すなわち本発明はオゴノリ属に属する海藻より水性溶媒で抽出される物質を有効成分とする食細胞活性化剤を提供するものである。以下本発明を詳細に説明する。
【０００６】本発明で用いるオゴノリ属（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ）の海藻としては、オゴノリ（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）、ツルシラモ（Ｇ．ｃｈｏｒｄａ）、シラモ（Ｇ．ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）、オオオゴノリ（Ｇ．ｇｉｇａｓ）、ミゾオゴノリ（Ｇ．ｉｎｃｕｒｖａｔａ）、カバノリ（Ｇ．ｔｅｘｔｏｒｉｉ）等が挙げられ、特にオゴノリが好ましい。これらの海藻はそのままでも用いられるが、水洗し汚れを除き、乾燥した後、粉砕して乾燥粉末として用いるのが好ましい。
【０００７】さらに、海藻粉末も最初から水性溶媒で抽出してもよいが、油分、少糖類、油溶性色素等を除く意味でこれらを溶解し得る有機溶媒でまず海藻を洗浄することが好ましい。洗浄用有機溶媒としては例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等の低級アルカノール、アセトン等の低級アルカノン等を用いることができる。また、これらの溶媒と少量の水（８０：２０v/v 程度まで）との混合物であってもよい。メタノール、エタノール及びこれらと水との混合溶媒を室温以上に加温して用いるのが好ましい。
【０００８】洗浄した該海藻粉末は水性溶媒を加えて加温下に抽出操作を行う。水性溶媒としては水が好ましいが、水に酸又は塩基等を添加した酸性水溶液又は塩基性水溶液として用いることもできる。
【０００９】抽出温度は室温以上〜系の沸騰温度であるが、系の沸騰温度例えば沸騰水溶中で抽出されることが好ましい。抽出時間は通常５分以上であるが、３０分〜２０時間が好ましい。又、抽出操作は１回でもよいが、２回以上繰り返して行うことが好ましい。抽出液は遠心分離、濾過、デカント等により固形分を除去する。
【００１０】以上によって得られた抽出液はそのままもしくは必要に応じ中和、脱塩、濃縮して免疫賦活剤として使用することもできるが、通常さらに一般の精製処理に付すのがよい。精製処理としては有機溶媒による沈澱、塩析、透析、限外濾過、逆浸透処理、ゲル濾過等が使用可能であり、これらは２種以上組み合わせて行ってもよい。
【００１１】有機溶媒による沈澱は通常活性成分を溶解しないか少ししか溶解しない親水性有機溶媒を添加して有効成分を沈澱させることにより行う。かかる有機溶媒としては通常メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等の低級アルカノール、アセトン等の低級アルカノン等を用いることができる。メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等の低級アルカノールが好ましく、特にエタノールが好ましい。
【００１２】塩析工程に用いる塩析剤は硫安、食塩、塩化カリ、炭酸バリウム、塩化セチルピリジニウム等が用いられる。透析は通常セロファン膜、コロジオン膜などの半透膜を用いて行う。ゲル濾過はデキストラン又はポリアクリルアミドゲルなどを充填したカラムを用いて行う。セファデックス、バイオゲルの名称で販売されている充填剤が通常用いられる。
【００１３】限外濾過、逆浸透圧法はいずれも加圧下で膜を用いて分画する方法である。前者は０．５〜５kg／cm2 、後者は２０〜３５kg／cm2 で行うのが通常である。又、上記操作に加えて必要に応じイオン交換処理を行ってもよい。
【００１４】以上の精製操作で得られる活性成分固体はそのまま食細胞活性化剤又はその有効成分として用いることができるが、通常さらに乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、熱風乾燥等）する。上記のようにして得られたオゴノリ属に属する海藻の水性溶媒による抽出物はそれ自体で又は製薬上許容される種々の担体と混合した種々の剤型で食細胞活性化剤として用いることができる。
【００１５】経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などは、通常それらの組成物中に製剤上一般に使用される結合例、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤のような添加物を含有する。又経口用液体製剤として用いる場合は、内用水剤、振盪合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよく、又使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であってもよい。さらに、このような液体製剤は通常用いられる添加剤、保存剤のいずれを含有していてもよい。
【００１６】注射用の場合には、その組成物は通常安定剤、緩衝剤、保存剤、等張化剤などの添加剤を含有し、通常単位投与量アンプル又は多投与量容器の形態で提供される。なお、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中の乳液のような形態であってもよく、一方活性成分は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物質不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であってもよい。
【００１７】本発明の食細胞活性化剤は人間及び動物に経口的又は非経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包含する。非経口的投与は注射例えば皮下、筋肉、静脈注射、点滴などを含む。また、本発明の食細胞活性化剤は食品に添加し、健康食品的に摂取することもできる。
【００１８】本発明の食細胞活性化剤の投与量は動物か人間により、又年齢、個人差、病状などに影響されるので、場合によっては下記範囲外の量を投与する場合も生ずるが、一般に人間を対象とする場合の経口投与量は活性成分固形物量として大人１日体重１kg当り０．５〜１０００mg、好ましくは１〜３００mgであり、１回から３回に分けて投与する。なお、本抽出物（乾燥物として）の急性毒性はいずれもＬＤ50（ＩＣＲ系マウス、経口投与）＞３ｇ／kgであった。
【００１９】
【実施例】以下実施例で本発明を説明する。
実施例１オゴノリ塩蔵品を十分に水洗し、凍結乾燥後粉砕してオゴノリ乾燥粉末を得た。この粉末５０ｇを８５％（ｖ／ｖ）温メタノールで洗浄後、残渣に１リットルの蒸留水を加え沸騰水浴中で３０分加温した。
【００２０】遠心分離により抽出液を回収し、残渣は再度１リットルの蒸留水で加温抽出した。同様の処理によって回収した抽出液を合わせ、ヌッツエで吸引濾過し、固形分を完全に除去した。得られた濾液に４倍量の９９．５％エタノールを加え良く攪拌した後１晩放置し沈澱を十分に析出させた。沈澱を回収し、蒸留水に膨潤溶解後、凍結乾燥して乾燥物５．４ｇを得た（これを試料Ａとする）。
【００２１】実施例２実施例１と同様にして調製したオゴノリ乾燥粉末５０ｇに蒸留水１．５リットルを加え沸騰水浴中で３０分加温抽出した。実施例１と同様にして抽出を繰り返し、抽出液を回収した。回収液をセロファン膜を用いて水に対して透析した後、凍結乾燥し乾燥物９．６ｇを得た（これを試料Ｂとする）。
【００２２】実施例３オゴノリの乾燥品を十分量の水で洗浄し、再度減圧下６０℃で乾燥後粉砕した。この粉末５０ｇを実施例１と同様の操作で熱水抽出し、得られた抽出液にエタノールを加えて実施例１と同様にしてエタノール沈澱物を得た。この沈澱物を減圧下６０℃で乾燥し、乾燥物９．１ｇを得た（これを試料Ｃとする）。
【００２３】実施例４実施例１〜３で得た試料Ａ〜Ｃを分析した結果を表１に示す。なお、分析項目中の全糖はフェノール硫酸法を用い、ガラクタンと仮定して換算した値であり、蛋白質はローリー法を用いて分析した。又硫酸エステルは試料を１規定塩酸で分解後、イオンクロマトグラフィーによって測定し、３，６−アンヒドロガラクトースはＷ．Ｙａｐｈｅらの方法により分析した。
【００２４】
【表１】
【００２５】実施例５（オゴノリ抽出試料のｉｎ ｖｉｖｏ食細胞系に対する作用）
カーボンクリアランス法を用いてマウスの食細胞系の活性化作用を検討した。マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、雄性、６週齢）に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に所定の濃度になるように溶解した試料Ａ及びザイモザンＡ（市販の免疫賦活剤、サッカロミセス・セレビシエ由来細胞壁多糖成分（シグマ社製））をそれぞれ２４時間毎に３回、体重ｇ当り０．０３ml腹腔内投与し、最終投与２４時間後にカーボンクリアランスを測定した。
【００２６】すなわち、マウス尾静脈に１％ゼラチンを加えＰＢＳで６．２５倍に希釈したカーボンインク（ペリカン フォント インディア）を体重ｇ当り０．０１ml投与し、投与５分後に１０μｌ採血し、２mlの０．１％炭酸ナトリウムに溶解して、その６６０nmの吸光度を測定した。１群７匹とし、食細胞系の活性をコントロール群（ＰＢＳ投与群）のＯＤ値を１００とした時の試験群のＯＤ値として求めた。図１に結果を示す。
【００２７】実施例６（貪食指数）
マウス（ＩＣＲ、雌性、７週齢）を３群（１群６匹）に分け、試料Ａを各群に１２５，２５０，３７５mg／kg投与した。５日後に実施例５と同様にしてカーボンインクを静注し、投与５及び１２分後に採血して吸光度を測定し、次式により貪食指数Ｋを求めた。その結果を図２に示した。
【００２８】
【数１】
【００２９】実施例７（マクロファージの貪食能）
マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、雌性、７週齢）に試料Ａを腹腔内投与し、４日後の腹腔マクロファージを常法により採取した。採取したマクロファージを１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）に分散した後、５×１０5 コ／ウェルとなるよう９６穴プレートに分注し、ＣＯ2 インキュベーター内で３０分培養し、プレートの底面に細胞を付着させた後、蛍光ビーズを加えてさらに３０分培養した。培養後浮遊しているビーズをハンクス液で洗浄しプレートに残存した蛍光を測定しマクロファージの貪食能とした。結果を図３に示した。
【００３０】実施例８（ｉｎ ｖｉｔｒｏマクロファージ活性化作用）
常法によりプロテオースペプトンにて誘導したマウスの腹腔細胞を採取し、２×１０6 コ／ウェルとなるよう９６穴プレートに分注し、１時間培養してマクロファージを付着させた。浮遊細胞を除去した後、ＦＣＳ−ＲＰＭＩ培地に溶解した試料を加え７２時間培養後、培養上清を採取し、その残存グルコース濃度及び亜硝酸濃度を測定し、マクロファージ活性化の指標とした。対象としてマクロファージ活性化物質であるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）及びラミナリンを用いた。結果を表２に示した。
【００３１】
【表２】
【００３２】実施例９（カプセル剤）
試料Ａ ２００ｇトウモロコシデンプン １５０ｇタルク ８０ｇステアリン酸マグネシウム ３０ｇ上記成分を充分混和し、６０メッシュの金網を通過させて粒度を調整した後、１０００個のゼラチンカプセルに充填する。
【００３３】実施例１０（坐剤）
試料Ｂ １４０ｇカカオ脂 １２００ｇカカオ脂を５０℃に加熱して溶解し、これに乾燥物Ｂを加えて均一にし、ついでコンテナー中に流し込み、冷却固化して坐剤１０００個を製造する。
【００３４】実施例１１（注射剤）
試料Ｃ ４００ｇポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ５００ｇ注射用蒸留水 全量１０リットル上記成分を用い常法により注射剤を調製し、１アンプルに５mlずつ充填する。
【００３５】
【発明の効果】本発明の食細胞活性化剤は、従来より食品として利用してきたオゴノリ属の海藻から得られるのであるから、極めて安全性の高いものであり、食細胞系を活性化させる作用によって免疫能を賦活せしめる効果を有している。
【図面の簡単な説明】
【図１】試料Ａのカーボンクリアランス活性化作用を示す図。
【図２】試料Ａの投与量と貪食指数の関係を示す図。
【図３】試料Ａ投与によるマクロファージの蛍光ビーズ貪食能を示す図。
【特許請求の範囲】
【請求項１】 オゴノリ属に属する海藻より水性溶媒で抽出される物質を有効成分とする食細胞活性化剤。
【請求項２】 オゴノリ属に属する海藻を熱水抽出した後濾過し、その濾液にアルコールを加えて析出せしめた析出物を精製、乾燥して得た物質を有効成分とする食細胞活性化剤。
【請求項１】 オゴノリ属に属する海藻より水性溶媒で抽出される物質を有効成分とする食細胞活性化剤。
【請求項２】 オゴノリ属に属する海藻を熱水抽出した後濾過し、その濾液にアルコールを加えて析出せしめた析出物を精製、乾燥して得た物質を有効成分とする食細胞活性化剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【特許番号】特許第３４１２１５９号（Ｐ３４１２１５９）
【登録日】平成１５年３月２８日（２００３．３．２８）
【発行日】平成１５年６月３日（２００３．６．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願平３−３２９８７０
【出願日】平成３年１１月１９日（１９９１．１１．１９）
【公開番号】特開平５−１３９９８８
【公開日】平成５年６月８日（１９９３．６．８）
【審査請求日】平成１０年１１月１８日（１９９８．１１．１８）
【出願人】（０００１８７０７９）昭和産業株式会社 (64)
【出願人】（０００１９１１４６）新日本化学工業株式会社 (2)
【参考文献】
【文献】特開 昭６４−６６１２６（ＪＰ，Ａ）
【文献】吉沢康子，日本食品工業学会誌，日本，１９９４年，Ｖｏｌ．４１，Ｎｏ．８，ｐｐ．５５７−５６０
【登録日】平成１５年３月２８日（２００３．３．２８）
【発行日】平成１５年６月３日（２００３．６．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成３年１１月１９日（１９９１．１１．１９）
【公開番号】特開平５−１３９９８８
【公開日】平成５年６月８日（１９９３．６．８）
【審査請求日】平成１０年１１月１８日（１９９８．１１．１８）
【出願人】（０００１８７０７９）昭和産業株式会社 (64)
【出願人】（０００１９１１４６）新日本化学工業株式会社 (2)
【参考文献】
【文献】特開 昭６４−６６１２６（ＪＰ，Ａ）
【文献】吉沢康子，日本食品工業学会誌，日本，１９９４年，Ｖｏｌ．４１，Ｎｏ．８，ｐｐ．５５７−５６０
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