Ｉ型インターフェロン産生細胞を標的化するための組成物及び方法
本開示は、インターロイキン３受容体ａ（ＩＬ−３Ｒａ）鎖と結合し、免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除する免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む、ループス、シェーグレン症候群又は強皮症を治療するための方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のデータ
本願は、２０１０年８月１７日に出願された標題「Compositions and Methods for Targeting type I Interferon-Producing Cells」の米国特許出願第６１／３７４，４９７号明細書、２０１０年８月１７日に出願された標題「Humanized Anti-Interleukin 3 Receptor Alpha Chain Antibodies」の米国特許出願第６１／３７４，４８９号明細書及び２０１０年２月１７日に出願された標題「Treatment of Chronic Inflammatory Conditions」の米国特許出願第１２／７０７，２９７号明細書に対する優先権を主張するものである。これら出願の全内容は、これにより参照により本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【０００２】
分野
本開示は、炎症性疾患の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
サイトカインのインターフェロン（ＩＦＮ）ファミリーは、Ｉ型及びＩＩ型両方のサブグループを含む。Ｉ型サブグループは、ＩＦＮａ、ＩＦＮＰ、ＩＦＮω、ＩＦＮＫ及びＩＦＮｘから構成され、ＩＩ型サブグループは、ＩＦＮｙによって表される。Ｉ型ＩＦＮは、ポリクローナルＴ細胞応答の刺激、アイソタイプスイッチ、クラスＩ主要組織適合抗原（ＭＨＣ）分子の発現及び樹状細胞（ＤＣ）分化の誘導等、複数の免疫調節効果を有する。Ｉ型ＩＦＮは、マクロファージ及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の両方を刺激して抗ウイルス応答を誘発し、また、腫瘍に対し活性を有する。Ｉ型ＩＦＮは、視床下部における温度感受性ニューロンの活性を変化させることにより発熱させる発熱性因子としても作用する。Ｉ型ＩＦＮ系の特色は、活発な抗ウイルス免疫応答の開始を確実にする、シグナル伝達経路の迅速な誘導及び増幅である。
【０００４】
しかし、このような経路は、迅速なウイルス根絶には非常に効果的であるが、この増幅は、宿主組織に対する免疫応答において適応不全となり、自己免疫疾患を生じ得る。例として、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ及び糸球体腎炎が挙げられる。
【０００５】
ＳＬＥとは、免疫欠損により、自己抗体産生とそれに続く皮膚、腎臓、血液、脳及び関節等、複数の臓器における炎症及び／又は組織損傷がもたらされる慢性自己免疫疾患である。疾病経過は、慢性的に活動性、再発及び寛解又は長期寛解となり得る。ＳＬＥは、ＩＦＮａ等のＩ型ＩＦＮを含む多くのサイトカインのレベル上昇によって特徴づけられる。
【０００６】
ＳＬＥにおけるＩＦＮａの役割のエビデンスは、ＳＬＥ患者から得られた血清が、正常な哺乳動物から得られた単球のＤＣ成熟化を誘導したことを示す数例のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験において立証されている。このように、ＳＬＥ患者から得られた血清は、正常な静止状態の単球が免疫応答誘導可能な抗原提示細胞となるよう誘導することができた。更に、マウスのＳＬＥモデル（ＮＺＢマウス）におけるＩＦＮＡＲ１（Ｉ型ＩＦＮ受容体のａ鎖）発現の抑制は、溶血性貧血を抑制し、糸球体腎炎を抑制した。
【０００７】
臨床的には、活動性ＳＬＥ患者は、多くの場合、血清中Ｉ型ＩＦＮレベルが上昇しており、このレベルは疾患活動性と正の相関を有する。ＳＬＥにおけるＩＦＮａの推定的な役割の更なる臨床エビデンスは、ＩＦＮａ治療を行った非ＳＬＥ患者が、時に自己抗体及びＳＬＥと一致した臨床症状を発症するとの観察から得られる。
【０００８】
Ｉ型インターフェロンは、リンパ球（ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）、マクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞、骨芽細胞並びに特定の樹状細胞等、多くの細胞型によって産生される。形質細胞様樹状細胞（plasmacytoid dendric cell）（ｐＤＣ）は、外来抗原に応答する最も強力なＩ型ＩＦＮ産生細胞として同定された。ｐＤＣは、血液と、Ｉ型インターフェロン供給源である末梢リンパ器官とに存在する循環樹状細胞のサブタイプである。ヒトｐＤＣは通常、表面マーカー、ＩＬ−３受容体ａ鎖（ＩＬ−３Ｒａ、ＣＤ１２３）、ＢＤＣＡ−２（ＣＤ３０３）及びＢＤＣＡ−４（ＣＤ３０４）を発現するが、ＣＤ１１ｃ又はＣＤ１４を発現せず、この特徴により、この細胞はそれぞれ通常型の樹状細胞又は単球から区別される。刺激とそれに続く活性化により、ｐＤＣは、大量のＩ型インターフェロン（主としてＩＦＮ−ａ及びＩＦＮ−β）を産生する。
【０００９】
ＳＬＥ等、Ｉ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患におけるＩＦＮａの明確な役割から、このサイトカインの作用を中和する抗体又は可溶性ＩＦＮＡＲタンパク質は、治療アプローチ候補として探求されている。
【００１０】
ＳＬＥ等、Ｉ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患の治療に提案される代替的なアプローチは、Ｉ型インターフェロン発現細胞によって発現された細胞表面分子と結合する化合物を用いることである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
自己免疫疾患の治療に関して試験されてきた化合物の一クラスに、毒素とコンジュゲートした抗体由来の単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む免疫毒素がある。このような化合物は、ＩＬ−３Ｒａ発現細胞の殺傷に有用であると示唆されてきた。しかし、このような分子は、多くの不利益を伴う。例えば、免疫毒素は、肝臓及び腎臓に損傷を生じることが知られている。ｓｃＦｖとコンジュゲートした小サイズ毒素は、この免疫毒素が腎臓により迅速に排出されてこの臓器の損傷を更に増悪させること、この免疫毒素が利益をもたらすのに十分な時間身体に保持できないことも意味する。更に、毒素成分は一般に非ヒトであり、これは、患者における免疫応答を誘導し得ることを意味する。この免疫応答は、分子を中和する可能性がある。従って、このような免疫毒素は、慢性自己免疫疾患の治療に必要とされ得る複数の治療に適用できない。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
要旨
従来の一部のアプローチに反して、本発明者らは、Ｉ型ＩＦＮ受容体及び／又はＩＦＮ−ａの遮断が、Ｉ型ＩＦＮの正の抗ウイルス効果が失われるのを回避するのに十分な特異性を持たない可能性があることを理解した。その代わりに、本発明者らは、ｐＤＣ及び好塩基球等、ＩＬ−３応答性細胞におけるＩＬ−３活性の低下若しくは阻害及び／又はＩＬ−３応答性細胞の欠乏化若しくは排除に着目した。本発明者らは、ＩＬ−３Ｒａに対する免疫グロブリンを活用して、ｐＤＣ及び好塩基球等、ＩＬ−３応答性細胞におけるＩＬ−３の活性を低下又は阻害した（即ち、ＩＬ−３シグナル伝達を中和した）。しかし、本発明者らは、ＩＬ−３シグナル伝達のみを中和する免疫グロブリンは、ＩＦＮａレベルを十分に低下させて治療上の利益をもたらす可能性が低いことを見出した。従って、本発明者らは、哺乳動物の免疫系を更に誘導できる免疫グロブリンを活用して、ＩＬ−３応答性細胞（例えば、ｐＤＣ及び好塩基球）を少なくとも部分的に欠乏化又は排除して、これによりＩ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患及びｐＤＣ及び好塩基球に関連する状態、例えばループス（狼瘡（lupus））を治療した。ＩＬ−３応答性細胞におけるＩＬ−３活性の低下又は阻害と、ＩＬ−３応答性細胞の少なくとも部分的な欠乏化又は排除の両方が可能な免疫グロブリンを用いることにより、本発明者らは、ＩＦＮａレベルをｉｎ ｖｉｔｒｏで低下させることができた。ＩＬ−３応答性細胞を少なくとも部分的に欠乏化又は排除するために哺乳動物の免疫系を用いることにより、毒素使用とそれに伴う負の効果の回避が可能となった。
【００１３】
ｐＤＣが、炎症性疾患におけるＩ型ＩＦＮの唯一の供給源ではないが、Ｉ型ＩＦＮの重要な供給源であることを考慮し、本発明者らは、本開示に提示されている方法が、Ｉ型ＩＦＮ受容体及び／又はＩＦＮ−ａを標的とする方法よりもＩ型ＩＦＮの正の効果を打ち消す可能性の低い、より正確で標的化された治療アプローチを提供すると考えた。具体的なＩ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患は、ループス、例えばＳＬＥである。
【００１４】
本発明者らは、増強された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）誘導能を有する免疫グロブリンが、ＩＦＮａ産生及び／又は循環ｐＤＣ及び好塩基球の数を低用量で低下できることも見出した。本発明者らは、これらの効果が投与後数日間持続し、効果の長さが用量依存性であることも見出した。
【００１５】
本発明者らは、ｐＤＣ及び好塩基球数が、免疫グロブリン投与後に回復することも見出したが、この結果は、治療後に哺乳動物の免疫応答（例えば、ウイルスに対する）も回復することを意味する。
【００１６】
本開示は、哺乳動物におけるループスを治療する方法を提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合してＩＬ−３シグナル伝達を中和し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、ループスはＳＬＥである。
【００１７】
本開示は、哺乳動物におけるループスを治療する方法を追加的に又は代替的に提供し、上記の方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと結合し、ＩＬ−３シグナル伝達を中和する。一例において、ループスはＳＬＥである。
【００１８】
本開示は、哺乳動物におけるループスを治療する方法を追加的に又は代替的に提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと結合してＩＬ−３シグナル伝達を中和する。一例において、ループスはＳＬＥである。
【００１９】
本開示はまた、哺乳動物におけるシェーグレン症候群を治療する方法を提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合し、ＩＬ−３シグナル伝達を中和及び／又はモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるシェーグレン症候群を治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。
【００２０】
本開示はまた、哺乳動物における強皮症を治療する方法を提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合し、ＩＬ−３シグナル伝達を中和及び／又はモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物における全身性強皮症を治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、強皮症は全身性強皮症である。
【００２１】
更に別の一例において、本開示は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合する免疫グロブリンと、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む、本開示の上述の例に従って用いるための医薬組成物を提供する。例示的な免疫グロブリンは、本明細書に記載されており、本開示のこの例に適用される。一例において、免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない。一例において、免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除する。一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと結合してＩＬ−３シグナル伝達を中和する。一例において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害する。
【００２２】
更にまた別の一例において、本開示は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合する免疫グロブリンと、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と、キット使用のための説明書とを含む、本開示の上述の例に従って用いるためのキットを提供する。ＩＬ−３Ｒａと結合する例示的な免疫グロブリンは、本明細書に記載されており、本開示のこの例に適宜変更して適用するべきである。
【００２３】
一例において、本方法は、哺乳動物におけるＩＬ−３シグナル伝達の中和並びにｐＤＣ及び好塩基球の欠乏化又は少なくとも部分的な排除に有効な量の免疫グロブリンを投与するステップを含む。
【００２４】
一例において、ＩＬ−３Ｒａは、１又は複数のＩ型インターフェロンを産生するｐＤＣにより発現される。従って、一例において、免疫グロブリンは、１又は複数のＩ型インターフェロンを産生するｐＤＣ上のＩＬ−３Ｒａと結合する。
【００２５】
一例において、ＩＬ３Ｒａ鎖は、１又は複数のサイトカインを産生する好塩基球により発現される。従って、一例において、免疫グロブリンは、１又は複数のサイトカインを産生する好塩基球上のＩＬ−３Ｒａと結合する。
【００２６】
一例において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３と同じエピトープと結合する。
【００２７】
別の一例において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３によって結合されたエピトープと重複するエピトープと結合する。
【００２８】
一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと特異的に結合する。
【００２９】
一例において、免疫グロブリンは、そのままの（naked）免疫グロブリンである。
【００３０】
本開示により企図される例示的な免疫グロブリンは、抗体及びその抗原結合性フラグメントである。
【００３１】
一例において、免疫グロブリンは全長抗体である。
【００３２】
一例において、免疫グロブリンは、キメラ免疫グロブリン、例えば、キメラ抗体又はその抗原結合性フラグメントである。例えば、キメラ抗体は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス）によって産生された抗体に由来する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）並びにヒト由来の定常領域を含む。一例において、キメラ抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３由来の可変領域を含む。
【００３３】
別の一例において、免疫グロブリンは、ヒト化免疫グロブリン、例えば、ヒト化抗体又はその抗原結合性フラグメントである。一例において、ヒト化抗体又はその抗原結合性フラグメントは、モノクローナル抗体７Ｇ３のヒト化型又はその抗原結合性フラグメントである。例えば、ヒト化抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一例において、ヒト化抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３のＶＨのＣＤＲを含む。追加的な又は代替的な一例において、ヒト化抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３のＶＬのＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに１又は複数のアミノ酸置換を含むモノクローナル７Ｇ３のＣＤＲ１を含む。一例において、ヒト化抗体は、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。
【００３４】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、ヒト抗体又はその抗原結合性フラグメント等、ヒト免疫グロブリンである。
【００３５】
本開示により企図されている例示的な抗原結合性フラグメントとして、次のものが挙げられる。
（ｉ）ドメイン抗体（ｄＡｂ）；
（ｉｉ）Ｆｖ；
（ｉｉｉ）ｓｃＦｖ又はその安定化型（例えば、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖ）；
（ｉｖ）二量体ｓｃＦｖ又はその安定化型）；
（ｉｖ）二重特異性抗体（diabody）、三重特異性抗体（triabody）、四重特異性抗体（tetrabody）又はより高次の多量体；
（ｖ）Ｆａｂフラグメント；
（ｖｉ）Ｆａｂ’フラグメント；
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）フラグメント；
（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；
（ｉｘ）抗体のＦｃ領域と融合した（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のうちいずれか１種；
（ｘ）免疫エフェクター細胞と結合する抗体又はその抗原結合性フラグメントと融合した（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のうちいずれか１種
【００３６】
当業者であれば本明細書における開示から理解できると思われるが、例示的な免疫グロブリンは、毒性化合物とコンジュゲートしていなくても、免疫グロブリンが結合する細胞を欠乏化又は少なくとも部分的に排除することができる。
【００３７】
一例において、免疫グロブリンは、細胞にアポトーシスを行わせる。
【００３８】
一例において、免疫グロブリンは、エフェクター機能、例えば、免疫グロブリンが結合する細胞の殺傷をもたらすエフェクター機能を誘導することができる。例示的なエフェクター機能は、ＡＤＣＣ、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含む。
【００３９】
一例において、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣを誘導することができる。
【００４０】
一例において、免疫グロブリンは、エフェクター機能を誘導することのできる抗体Ｆｃ領域を含む。例えば、エフェクター機能は、ＦＣ介在性エフェクター機能である。一例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域又はＩｇＧ３ Ｆｃ領域又はハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。
【００４１】
一例において、免疫グロブリンは、野生型ヒトＩｇＧ１及び／又はヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域と類似（例えば、有意差がない又は約１０％以内である）又は同一レベルのエフェクター機能を誘導することができる。
【００４２】
一例において、免疫グロブリンは、本明細書に記載されているｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３と類似（例えば、有意差がない又は約１０％以内である）又は同一レベルのエフェクター機能を誘導することができる。
【００４３】
一例において、免疫グロブリンは、増強されたレベルのエフェクター機能を誘導することができる。
【００４４】
一例において、免疫グロブリンにより誘導されたエフェクター機能のレベルは、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む場合の免疫グロブリンのレベルと比べて増強されている。
【００４５】
一例において、エフェクター機能は、本明細書に記載されているｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３の機能と比べて増強されている、或いはそれを超える。
【００４６】
一例において、免疫グロブリンは、アフコシル化（afucosylated）されている、或いはアフコシル化されたＦｃ領域を含む。
【００４７】
別の一例において、免疫グロブリンは、タンパク質フコシル化レベルが低下するよう変化させられていないヒト又はＣＨＯ細胞により産生された免疫グロブリンと比べて、より低レベルのフコシル化を有する。この例と一致して、より低レベルのフコシル化とは、免疫グロブリンを含む組成物において、フコシル化免疫グロブリン（例えば、フコースを含む、抗体のＡｓｎ２９７と結合したグリコシル基）のパーセンテージが、タンパク質フコシル化レベルを低下するよう変化させられていないヒト又はＣＨＯ細胞により産生されるものよりも低いことを意味すると理解されるであろう。
【００４８】
一例において、免疫グロブリンは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３である。例えば、免疫グロブリンは、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むアフコシル化ヒト化抗体である。例えば、免疫グロブリンは、配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号４に記述されている配列を含む重鎖とを含むアフコシル化ヒト化抗体である。
【００４９】
一例において、免疫グロブリンは、検出可能レベルのａ−１，６−フコシル基転移酵素（ＦＵＴ８）を発現しない（或いは、その低レベルを発現する）哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）によって発現された、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むヒト化抗体である。一例において、免疫グロブリンは、検出可能レベルのａ−１，６−フコシル基転移酵素（ＦＵＴ８）を発現しない（或いはその低レベルを発現する）哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）によって発現された、配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号４に記述されている配列を含む重鎖とを含むアフコシル化ヒト化抗体である。
【００５０】
一例において、免疫グロブリンは、免疫グロブリンにより誘導されるエフェクター機能を増強する１又は複数のアミノ酸配列置換を含むＦｃ領域を含む。例えば、１又は複数のアミノ酸配列置換は、置換を含まないＦｃ領域と比較してＦｃ領域のＦｅｙ受容体（ＦｃｙＲ）に対する親和性を増加させる。例えば、１又は複数のアミノ酸置換は、置換を含まないＦｃ領域と比較してＦｃ領域の、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩａ、ＦｃｙＲＩＩｃ及びＦｃｙＲＩＩＩａからなる群から選択されたＦｃｙＲに対する親和性増加を増強する。一例において、１又は複数のアミノ酸配列置換は、
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ；又は
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
である。
【００５１】
例えば、免疫グロブリンは、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むヒト化抗体であり、該抗体は、
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ；又は
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
である１又は複数のアミノ酸配列置換を含むＦｃ領域を含む。
【００５２】
一例において、免疫グロブリンは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ１及びｈｚ７Ｇ３Ｖ２からなる群から選択される。例えば、免疫グロブリンは、配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号６に記述されている配列を含む重鎖とを含む（ｈｚ７Ｇ３Ｖ１）、或いは配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号７に記述されている配列を含む重鎖とを含む（ｈｚ７Ｇ３Ｖ２）抗体である。
【００５３】
一例において、哺乳動物に免疫グロブリンを投与した後、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。
【００５４】
例えば、哺乳動物に免疫グロブリンを投与してから少なくとも約６時間後、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。
【００５５】
例えば、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを更に投与せずに投与後少なくとも７日間、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。例えば、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを更に投与せずに投与後少なくとも８日間又は１０日間又は１１日間又は１５日間又は２０日間又は２１日間又は２２日間又は２８日間又は３５日間又は４２日間又は４９日間又は５０日間又は５７日間又は６０日間又は６３日間又は７０日間、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。
【００５６】
例えば、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％＞又は５５％又は６０％＞又は６５％又は７０％＞又は７５％又は８０％又は８５％又は９０％又は９５％又は９６％又は９７％又は９８％又は９９％低下する。
【００５７】
一例において、方法は、治療上有効量の免疫グロブリン等、有効量の免疫グロブリンを投与するステップを含む。
【００５８】
一例において、方法は、哺乳動物に約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の免疫グロブリンを投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。
【００５９】
一例において、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６０】
一例において、免疫グロブリンは、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６１】
一例において、免疫グロブリンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６２】
一例において、免疫グロブリンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６３】
一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物に複数回投与される。一例において、投与間の期間は、少なくとも約８日間等、少なくとも約７日間、例えば、少なくとも約９日間又は１０日間である。一例において、投与間の期間は、少なくとも約１１日間である。別の一例において、投与間の期間は、少なくとも約１６日間等、少なくとも約１５日間、例えば、少なくとも約１８日間又は２０日間である。一例において、投与間の期間は、少なくとも約２２日間である。別の一例において、投与間の期間は、少なくとも約３０日間等、少なくとも約２５日間、例えば、少なくとも約４０日間又は４５日間である。一例において、投与間の期間は、少なくとも約５７又は６０日間である。
【００６４】
例えば、免疫グロブリンは、０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間等、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間、例えば、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間等、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間及び５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。例えば、免疫グロブリンは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。例えば、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。例えば、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。一部の例において、投与間の期間は、少なくとも約１１日間又は１５日間且つ約２０日間未満等、少なくとも約７日間且つ約２２日間未満、例えば、少なくとも約１３日間且つ約１８日間未満である。
【００６５】
一例において、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、６日間又は７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間又は１４日間又は１５日間である。
【００６６】
一例において、免疫グロブリンは、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、６日間又は７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間又は１４日間又は１５日間又は２０日間又は２１日間又は２２日間である。
【００６７】
例えば、免疫グロブリンは、６ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約１５日間である。例えば、免疫グロブリンは、１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約１４又は１５日間である。例えば、免疫グロブリンは、２０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約１４又は１５日間である。一部の例において、投与間の期間は、少なくとも約２１又は２２日間且つ約６５日間未満等、少なくとも約２０日間且つ約７０日間未満、例えば少なくとも約２５日間且つ約５７日間未満である。
【００６８】
一例において、免疫グロブリンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、１４日間又は１５日間又は２１日間又は２２日間又は３０日間又は４８日間又は５０日間又は５６日間又は５７日間又は６０日間である。
【００６９】
一例において、免疫グロブリンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、１４日間又は１５日間又は２１日間又は２２日間又は３０日間又は４８日間又は５０日間又は５６日間又は５７日間又は６０日間である。
【００７０】
一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルを低下させる時間及び条件下で、ループス、例えばＳＬＥを患う哺乳動物に投与される。一例において、免疫グロブリンは、１回又は複数回投与される。免疫グロブリンが複数回投与される場合、一部の例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルを有意に低下させるのに十分な回数投与される。一部の例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルが有意に低下しなくなったときに再投与される。
【００７１】
一部の例において、免疫グロブリンが複数回投与される場合、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルを、健常な被験体と同様の（例えば、１０％又は２０％以内の）レベルへと低下させるのに十分な回数投与される。一部の例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルが有意に低下しなくなったときに再投与される。
【００７２】
一例において、方法は、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状のレベルを検出するステップと、レベルが低下しない場合、免疫グロブリンの投与を反復するステップとを更に含む。
【００７３】
一例において、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状のレベルは、健常な哺乳動物において検出されるレベルへと低下する。
【００７４】
一例において、方法は、哺乳動物における循環中及び／又は炎症組織中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数を検出するステップを更に含む。
【００７５】
一例において、方法は、循環中に検出されるｐＤＣ及び／又は好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数の約５０％以内である場合、免疫グロブリンの投与を反復するステップを更に含む。例えば、方法は、循環中に検出されるｐＤＣ及び／又は好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数の約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％以内である場合、免疫グロブリンの投与を反復するステップを更に含む。
【００７６】
一例において、免疫グロブリンの投与が終了した後、被験体における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は増加する。例えば、被験体における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、正常又は健常な被験体及び／又は正常又は健常な被験体の集団におけるレベルと同様のレベルへと増加する。例えば、被験体における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、治療終了後約１１日又は２０日、２２日又は３０日又は５７日又は６０日又は６５日又は７０日後に増加する。
【００７７】
本開示はまた、免疫グロブリンを本明細書に記載されている通り、いずれかの例に従って、ループス、例えばＳＬＥを再発している、或いはループス、例えばＳＬＥの再発発症リスクのある哺乳動物に投与して、これによりループス、例えばＳＬＥの再発を予防するステップを含む、哺乳動物におけるループス、例えばＳＬＥの再発を予防するための方法を提供する。
【００７８】
一例において、方法は、予防上有効量の免疫グロブリン等、有効量の免疫グロブリンを投与するステップを含む。
【００７９】
一例において、方法は、ループス、例えばＳＬＥを再発している哺乳動物を同定するステップを更に含む。例えば、方法は、哺乳動物における循環中の自己抗体（例えば、Ｃｌｑに対する）及び／又は抗ｄｓＤＮＡ抗体及び／又は免疫複合体を検出するステップを含む。ループス、例えばＳＬＥを再発している哺乳動物を決定するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書に記載されている。
【００８０】
一例において、免疫グロブリンは、本明細書に記載されている通り、本開示のいずれかの例に従って投与される。
【００８１】
一例において、治療される哺乳動物は、このような治療を必要としている。例えば、哺乳動物は、この疾患又は状態を患う、或いは疾患又は状態の発症リスクがある、或いは疾患又は状態を再発している、或いは再発リスクがある。一例において、治療を必要としている哺乳動物は、例えば、健常な哺乳動物の集団において検出されるレベルと比べて増加レベルの循環中ＩＦＮａを有する。
【００８２】
適切には、本開示の上述の例において、哺乳動物はヒトである。
【００８３】
他の目的、実施例及び利点は、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。当業者であれば、この詳細な説明から、本開示の精神及び範囲内における様々な変更及び修正が明らかとなるため、詳細な説明及び特定の実施例は、単に説明のために記載されている。更に、実施例は、本開示に開示されている方法の原則を示すものであり、当業者にとって明らかに有用となり得るあらゆる実施例への本開示の適用を具体的に説明しない。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１は、種々の細胞系列（Ｘ軸）における細胞当りのＩＬ−３Ｒａ発現の平均レベル（Ｙ軸）を示すグラフ表示である。
【図２】図２は、ＩＬ−３Ｒａと結合するアフコシル化ヒト化抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）を種々の投薬量で投与する前後の好塩基球（左側）又はｐＤＣ（右側）のパーセンテージを示す２個のグラフ表示を含む図である。数値は、末梢血試料における全細胞のパーセンテージとして表す（Ｙ軸）。抗体の投与時間に対する末梢血の採取時間をＸ軸に示す。抗体の投薬量も示す。
【図３】図３は、様々な条件下で種々の抗体によって誘導されたＡＤＣＣに起因する細胞溶解レベルを示すグラフ表示である。試験した抗体の命名法は、本明細書の記載と一致する。抗体は、自己標的エフェクター条件下（ｐＤＣ１−ＮＫ１、ｐＤＣ２−ＮＫ２）及び同種異系間標的エフェクター条件下（ｐＤＣ１−ＮＫ２、ｐＤＣ２−ＮＫ１）で試験した。結果は、自発的溶解及びＥｘｔｒａｎ（商標）により得られる最大の溶解の関数として決定された、特異的溶解のパーセンテージとして提示する。
【図４】図４は、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドで活性化されたｐＤＣを含有するＰＢＭＣによって細胞培養培地に分泌されたＩＦＮａ量を示す２個のグラフ表示を含む図である。Ｘ軸に示されている濃度の提示されている抗体と共に細胞を培養した。ＥＬＩＳＡを用いて検出されたＩＦＮａ量をＹ軸に示す。オリゴヌクレオチドによる活性化の６時間後（左側）及び２４時間後（右側）に行ったアッセイの結果を示す。
【図５】図５は、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドで活性化されたｐＤＣを含有するＰＢＭＣによって細胞培養培地に分泌されたＩＦＮａ量を示すグラフ表示である。種々の濃度の、ＩＬ−３Ｒａと結合するアフコシル化ヒト化抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）又はアイソタイプ対照抗体（図示されている）と共に細胞を培養した。ＥＬＩＳＡを用いて検出されたＩＦＮａ量をＹ軸に示す。オリゴヌクレオチドによる活性化の２４時間後に行ったアッセイの結果を示す。
【図６】図６は、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドで活性化されたｐＤＣを含有するＰＢＭＣによって細胞培養培地に分泌されたＩＦＮａ量を示すグラフ表示である。種々の濃度の、ＩＬ−３Ｒａと結合するアフコシル化ヒト化抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）又はこの抗体のＦａｂフラグメント（７Ｇ３ Ｆａｂ）（図示されている）と共に細胞を培養した。ＥＬＩＳＡを用いて検出されたＩＦＮａ量をＹ軸に示す。オリゴヌクレオチドによる活性化の２４時間後に行ったアッセイの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８５】
詳細な説明
配列表の要点
配列番号１は、ＩＬ−３Ｒａ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２は、ｈｚ７Ｇ３のＶＨのアミノ酸配列である。
配列番号３は、ｈｚ７Ｇ３のＶＬのアミノ酸配列である。
配列番号４は、ｈｚ７Ｇ３の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５は、ｈｚ７Ｇ３の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号６は、ｈｚ７Ｇ３Ｖ１の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号７は、ｈｚ７Ｇ３Ｖ２の重鎖のアミノ酸配列である。
【００８６】
概要
本明細書の全体を通じて、他に特に記述がない限り、或いは文脈がそれ以外を必要としない限り、単一のステップ、組成物、ステップ群又は組成物群への言及は、１及び数種（即ち、１又は複数）のこれらステップ、組成物、ステップ群又は組成物群を包含すると解釈するべきである。
【００８７】
当業者であれば、本開示が、特に説明されている以外のバリエーション及び改変を許容することを理解するであろう。本開示が、あらゆるこのようなバリエーション及び改変を含むことを理解されたし。本開示は、本明細書において個々に又は集合的に言及又は提示されているあらゆるステップ、特色、組成物及び化合物並びに前記ステップ又は特色のあらゆる組み合わせ又はその２以上も含む。
【００８８】
本開示は、本明細書に記載されている例証のみを目的とする特定の実施例により定められた範囲に限定するべきではない。機能的均等の製品、組成物及び方法は、明らかに本開示の範囲内に含まれる。
【００８９】
本明細書に開示されているいかなる実施例も、他に特に記述がない限り、本開示のその他の実施例へと適宜変更して適用できると解釈するべきである。
【００９０】
他に特に規定がない限り、本明細書に用いられているあらゆる技術及び科学用語は、当該技術分野（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学及び生化学）の当業者によって一般に理解されるものと同じ意義を有すると解釈するべきである。
【００９１】
他に断りがない限り、本開示において利用されている組換えタンパク質、細胞培養及び免疫学の技法は、標準手順であり、当業者にとって周知のものである。このような技法は、J. Perbal、A Practical Guide to Molecular Cloning、John Wiley and Sons (1984)、J.Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989)、T.A.Brown (編集者)、Essential Molecular Biology: A Practical Approach、1及び2巻、IRL Press(1991)、D.M. Glover and B.D. Hames (編集者)、DNA Cloning: A Practical Approach、1〜4巻、IRL Press (1995及び1996)並びにF.M. Ausubelら(編集者)、Current Protocols in Molecular Biology、Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience (1988、現時点までのあらゆる最新情報を含む)、Ed Harlow and David Lane (編集者) Antibodies: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory(1988)並びにJ.E.Coliganら(編集者) Current Protocols in Immunology、John Wiley&Sons（現時点までのあらゆる最新情報を含む）等、ソース文献を通じて記載及び説明されている。
【００９２】
本明細書における可変領域及びその一部、免疫グロブリン、抗体並びにそれらのフラグメントの記載及び定義は、Kabat「Sequences of Proteins of Immunological Interest」国立衛生研究所、メリーランド州ベテスダ、1987及び1991、Borkら、J Mol. Biol. 242、309〜320、1994、Chothia and Lesk J. Mol Biol. 196: 901〜917、1987、Chothiaら、Nature 342、877〜883、1989及び/又はAl-Lazikaniら、J Mol Biol 273、927〜948、1997における記述により更に明らかにすることができる。
【００９３】
用語「及び／又は」、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解するべきであり、両方の意義又はいずれかの意義に明確な支持を与えるものと解釈するべきである。
【００９４】
本明細書を通じて、単語「含む（comprise）」又は「含む（comprises）」若しくは「含んでいる（comprising）」等の変化形は、記されている要素、整数若しくはステップ又は要素、整数若しくはステップ群の包含を暗示するが、その他の要素、整数若しくはステップ又は要素、整数若しくはステップ群を除外するものではないと理解されるであろう。
【００９５】
本明細書において、用語「に由来する」は、指定の整数が、特定の供給源から得ることができるが、必ずしも該供給源から直接的に得られる必要はないことを示唆するもの解釈するべきである。
【００９６】
定義（抜粋）（selected definition）
本明細書において，用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリンアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＧ及びＩｇＥ並びにそれらの抗原結合性フラグメント等、免疫グロブリン遺伝子複合体の任意の抗原結合性タンパク質産物を含む。例示的な免疫グロブリンは抗体である。免疫グロブリンは、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよく、モノクローナルが本開示の例示的な一形態である。適切に脱免疫化（de-immunized）されることにより、哺乳動物に投与された免疫グロブリンに対する哺乳動物による免疫応答を低下又は排除した任意の免疫グロブリンは、用語「免疫グロブリン」に含まれる。ヒト治療の特定の事例において、適切な免疫グロブリンは、キメラ、ヒト化又はヒト免疫グロブリンを含む。天然起源であれ、ヒト介入による産生であれ（例えば、組換えＤＮＡ技術による）、変化した又は変種アミノ酸残基、配列又は糖鎖付加を含む改変され、突然変異誘発されたキメラ及び／又はヒト化免疫グロブリンもまた、用語「免疫グロブリン」に含まれる。当業者（skilled addressee）であれば、本開示の「免疫グロブリン」が、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合するよう適応した代替的免疫グロブリン又は非免疫グロブリンタンパク質スキャフォールドに基づく他の結合部分及び／又は配列と置換され得ることを理解するであろう。例示的なタンパク質として、Ｆｃ受容体結合部分が挙げられる。例えば、用語「免疫グロブリン」に包含されるタンパク質は、ドメイン抗体、ラクダ科動物抗体及び軟骨魚類由来の抗体（即ち、免疫グロブリン新規抗原受容体（immunoglobulin new antigen receptor）（ＩｇＮＡＲ））を含む。一般に、ラクダ科動物抗体及びＩｇＮＡＲは、Ｖ3/4を含むがＶＬを欠き、多くの場合、重鎖免疫グロブリンと呼ばれる。他の「免疫グロブリン」は、Ｔ細胞受容体と、例えば、可変領域を含む抗原結合部位のために抗原と結合できるタンパク質を含有する他の免疫グロブリン様ドメインとを含む。
【００９７】
当業者であれば、「抗体」は、一般に、複数のポリペプチド鎖、例えば、ＶＬを含むポリペプチドと、ＶＨを含むポリペプチドで構成される可変領域を含むタンパク質であると考えられていることを認識するであろう。抗体は一般に、その一部が、定常領域又は定常フラグメント又はフラグメント結晶化可能（crystallizable）（Ｆｃ）に配置される定常ドメインも含む。ＶＨ及びＶＬは、相互作用して１又は数個の密接に関連した抗原と特異的に結合できる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳動物由来の軽鎖は、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかであり、哺乳動物由来の重鎖は、α、δ、ε、γ又はμである。抗体は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧｉ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｉ及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものとなることができる。用語「抗体」は、ヒト化抗体、霊長類化（primatized）抗体、ヒト抗体及びキメラ抗体も包含する。
【００９８】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」又は「全抗体」は、抗体の抗原結合性フラグメントとは対照的に、その実質的インタクト型の抗体を意味するよう互換的に用いられる。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含み重鎖及び軽鎖を有する抗体を含む。定常ドメインは、野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変種となることができる。一部の事例において、インタクト抗体は、１又は複数のエフェクター機能を有することができる。
【００９９】
抗体の「抗原結合性フラグメント」は、インタクト抗体の抗原結合及び／又は可変領域を含む。抗体フラグメントの例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント；二重特異性抗体；線状抗体（linear antibody）；抗体フラグメントから形成された単鎖抗体分子及び多特異性（multispecific）抗体が挙げられる。
【０１００】
本開示の文脈において、「エフェクター機能」は、細胞の殺傷をもたらす抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変種Ｆｃ領域）と結合する細胞又はタンパク質に媒介される生物活性を意味する。抗体によって誘導されるエフェクター機能の例として、補体依存性細胞傷害；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）；及びＢ細胞活性化が挙げられる。本開示の文脈において、用語「免疫グロブリンにより誘導されるエフェクター機能」又はその類似の用語は、「免疫グロブリンのエフェクター機能」又は類似の用語と互換的に用いられ、各用語は、その他の用語に対し逐語的な支持を与える。
【０１０１】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（「ＮＫ」）細胞、好中球及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（「ＦｃＲ」）上に結合した分泌Ｉｇが、これら細胞傷害性エフェクター細胞と抗原生成標的細胞との特異的な結合を可能にし、その後、標的細胞の細胞毒による殺傷を可能にする細胞傷害性の一形態を意味する。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するため、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核細胞（「ＰＢＭＣ」）及びＮＫ細胞が挙げられる。
【０１０２】
本明細書において、「可変領域」は、抗原と特異的に結合できる本明細書に規定されている抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を意味し、例えば、ＣＤＲのアミノ酸配列、即ち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。例えば、可変領域は、３個のＣＤＲと共に、３又は４個のＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及び必要に応じてＦＲ４）を含む。ＶＨは、重鎖の可変領域を意味する。ＶＬは、軽鎖の可変領域を意味する。ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられたアミノ酸ポジションは、Ｋａｂａｔ（1987及び1991（上記を参照））又は本開示に係る方法の実施における他の付番方式、例えば、Clothia and Leskの超可変ループ付番方式（1987及び／又は1989（上記を参照）及び／又はAl-Lazikaniら、1997（上記を参照））に従って規定することができる。例えば、Ｋａｂａｔの付番方式に従い、ＶＨ ＦＲ及びＣＤＲは、次の通りに配置される。Ｋａｂａｔ付番方式に従って番号を振った、残基１〜３０（ＦＲ１）、３１〜２５（ＣＤＲ１）、３６〜４９（ＦＲ２）、５０〜６５（ＣＤＲ２）、６６〜９４（ＦＲ３）、９５〜１０２（ＣＤＲ３）及び１０３〜１１３（ＦＲ４）。例えば、Ｋａｂａｔの付番方式に従い、ＶＬ ＦＲ及びＣＤＲは次の通りに置かれる。残基１〜２３（ＦＲ１）、２４〜３４（ＣＤＲ１）、３５〜４９（ＦＲ２）、５０〜５６（ＣＤＲ２）、５７〜８８（ＦＲ３）、８９〜９７（ＣＤＲ３）及び９８〜１０７（ＦＲ４）。
【０１０３】
本明細書において、用語「相補性決定領域」（別称ＣＤＲ、即ち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）は、その配列が抗体間で変動する、ＦＲ間のループを形成する抗体可変ドメインのアミノ酸残基を意味する。ＣＤＲの一部又は全体は、抗原と結合する能力を抗体に付与する。各可変ドメインは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として同定される３個のＣＤＲ領域を有する。各相補性決定領域は、Kabatら(1991)によって定義された「相補性決定領域」由来のアミノ酸残基及び／又は「超可変ループ」Chothia and Lesk(1987)若しくはその他の公知の付番技法又はＩＭＧＴ付番方式（Le Francら、2003）等、それらの組み合わせ由来の残基を含むことができる。
【０１０４】
「フレームワーク領域」（以下、ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１０５】
用語「定常領域」又は「フラグメント結晶化可能」又は「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃ部分」（本明細書において互換的に用いることができる）は、本明細書において、一般に（必須ではないが）糖鎖付加され、補体カスケードの１又は複数のＦｃ受容体及び／又は成分と結合できる少なくとも１個の定常ドメインを含む抗体の部分を意味する。重鎖定常領域は、５種のアイソタイプ、α、δ、ε、γ又はμのうちいずれかから選択することができる。更に、種々のサブクラス（重鎖のＩｇＧサブクラス等）の重鎖は、異なるエフェクター機能に関与し、よって、所望の重鎖定常領域を選ぶことにより、所望のエフェクター機能を有するタンパク質を産生することができる。例示的な重鎖定常領域は、ガンマ１（ＩｇＧ１）、ガンマ２（ＩｇＧ２）及びガンマ３（ＩｇＧ３）又はそれらのハイブリッドである。
【０１０６】
「定常ドメイン」は、抗体（同一型、例えば、ＩｇＧ又はＩｇＭ又はＩｇＥの抗体）においてその配列が高度に類似した抗体ドメインである。抗体の定常領域は一般に、複数の定常ドメインを含み、例えば、γ、ａ及びδ 重鎖の定常領域は、２種の定常ドメインを含む。
【０１０７】
本明細書において、用語「特異的に結合する」は、免疫グロブリンが、別の抗原又は細胞とよりも高頻度で、より迅速に、より長期間及び／又はより高親和性で、ＩＬ−３Ｒａ又はそれを発現する細胞と反応又は会合することを意味すると解釈するべきである。この定義を解釈すると、例えば、ＩＬ−３Ｒａと特異的に結合する免疫グロブリンが、第二の抗原と特異的に結合できてもできなくてもよいことが理解される。そのようなものとして、「特異的結合」は、排他的結合又は別の抗原とは検出不能な結合を必ずしも必要としない。用語「特異的に結合する」は、本明細書において「選択的に結合」と互換的に用いられる。一般に、本明細書における結合への言及は、特異的結合を意味し、各用語は、その他の用語に対し明確な支持をも与えるものと理解されるべきである。
【０１０８】
用語「競合的に阻害する」は、免疫グロブリンが、７Ｇ３と称するモノクローナル抗体とＩＬ−３Ｒａとの結合を低下又は阻害することを意味すると理解するべきである。免疫グロブリンが、モノクローナル抗体７Ｇ３の結合を完全に阻害する必要はなく、むしろ結合を統計的に有意な量、例えば、少なくとも約１０％又は２０％又は３０％又は４０％又は５０％又は６０％又は７０％又は８０％又は９０％又は９５％低下させることのみを必要とすることは、前述から明らかになるであろう。結合の競合的阻害を決定するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書に記載されている。例えば、モノクローナル抗体７Ｇ３は、免疫グロブリンの存在下又は不在下でＩＬ−３Ｒａに曝露される。免疫グロブリンの存在下において、免疫グロブリンの不在下よりも少量のモノクローナル抗体が結合する場合、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３の結合を競合的に阻害すると考えられる。
【０１０９】
２種のエピトープの文脈における「重複」は、２種のエピトープが、一方のエピトープと結合する免疫グロブリンが、他方のエピトープと結合する免疫グロブリンの結合を競合的に阻害するのに十分な数のアミノ酸残基を共有することを意味すると解釈するべきである。例えば、２種のエピトープは、少なくとも１個又は２個又は３個又は４個又は５個又は６個以上のアミノ酸を共有する。
【０１１０】
本明細書において、用語「中和する」は、免疫グロブリンが、細胞におけるＩＬ−３介在性シグナル伝達を低下又は阻害できる、及び／又はＩＬ−３Ｒａ鎖及び／又はＩＬ−３Ｒａ鎖とＩＬ−３ＲＰ鎖のヘテロ二量体（コロニー刺激因子２受容体としても知られる）と、ＩＬ−３との結合を低下又は阻害できることを意味すると解釈するべきである。
【０１１１】
本明細書における「モノクローナル抗体７Ｇ３」又は「７Ｇ３」への言及は、受託番号ＨＢ−１２００９としてＡＴＣＣに寄託され、米国特許第６１７７０７８号明細書に記載されている７Ｇ３と称するハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体への言及である。モノクローナル抗体７Ｇ３は、例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（米国ニュージャージー州）からも市販されている。
【０１１２】
用語「ＫａｂａｔのＥＵ付番方式」は、免疫グロブリン重鎖の付番が、Kabatら、1991、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第５版、アメリカ合衆国公衆衛生局（United States Public Health Service）、国立衛生研究所、ベテスダ、に教示されているＥＵインデックスに従うことを意味すると理解されるであろう。ＥＵインデックスは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基付番に基づく。
【０１１３】
本明細書において、用語「治療」は、臨床病理の経過において治療されている個体又は細胞の自然経過を変化させるよう計画された臨床的介入を意味する。望ましい治療効果は、疾患進行速度の低下、病状の寛解又は緩和及び回復又は予後改善を含む。例えば、疾患（例えば、ループス）に関連する１又は複数の症状が軽減又は排除される場合、個体は首尾よく「治療」されている。
【０１１４】
本明細書において、用語「予防」は、個体における疾患の発生又は再発に関する予防法の提供を含む。個体は、疾患発症又は疾患再発し得る又はそのリスクを有し得るが、まだ疾患又は再発と診断されていない。
【０１１５】
本明細書において、疾患若しくは状態の発症若しくはその再発（例えば、ＳＬＥ）又は再発の「リスクのある」哺乳動物は、本開示に係る治療前に、検出可能な疾患又は疾患症状を有しても有さなくてもよく、また、検出可能な疾患又は疾患症状を提示してもしなくてもよい。「リスクがある」とは、哺乳動物が、本技術分野で公知の及び／又は本明細書に記載されている疾患又は状態の発症と相関する測定可能なパラメータである１又は複数のリスク因子を有することを表す。
【０１１６】
「有効量」は、所望の治療上又は予防上の結果を得るのに必要な投薬量及び期間で少なくとも有効な量を意味する。有効量は、１又は複数の投与でもたらされ得る。本開示の一部の例において、用語「有効量」は、上文に記載されている疾患又は状態の治療を得るのに必要な量を意味する。有効量は、治療する疾患又は状態に応じて、また、治療されている哺乳動物に関連する体重、年齢、人種的背景、性別、健康状態及び／又は体調並びに他の要因に応じて変動し得る。通常、有効量は、医師によるルーチンの試行及び実験（trial and experimentation）により決定できる比較的広範囲（例えば、「投薬量」範囲）に含まれるであろう。有効量は、治療期間に亘り単一用量又は１回若しくは数回の反復用量で投与することができる。
【０１１７】
「治療上有効量」は、少なくとも、特定の障害（例えば、ＳＬＥ）の測定可能な改善を得るのに必要とされる最小濃度である。本明細書における治療上有効量は、患者の病状、年齢、性別及び体重並びに個体における所望の応答を誘発する免疫グロブリンの能力等、要因に応じて変動し得る。治療上有効量は、また、治療上有益な効果が、免疫グロブリンの任意の毒性又は有害効果を上回る量である。
【０１１８】
「予防上有効量」は、所望の予防上の結果を得るのに必要な投薬量及び期間で有効な量を意味する。通常、予防的用量は、疾患に先立ち、或いは疾患初期において哺乳動物において用いられるため、予防上有効量は、治療上有効量未満となることができるが、必ずしもその通りではない。
【０１１９】
本明細書において、「形質細胞様樹状細胞」又は「ｐＤＣ」は、ＩＦＮａ及びＩＦＮｐ等、Ｉ型インターフェロンを産生する血液末梢リンパ器官に存在する循環樹状細胞の一種である。ヒトｐＤＣは、表面マーカーＩＬ−３Ｒａ、ＢＤＣＡ−２（ＣＤ３０３）、ＢＤＣＡ−４（ＣＤ３０４）並びにトール様受容体７及び９を発現する。一般に、ヒトｐＤＣは、ＣＤ１１ｃ又はＣＤ１４を発現しない。典型的なヒトｐＤＣ表面表現型は、ＣＤ２０−、ＣＤ３−ＣＤ１４−、ＣＤ１９−ＣＤ５６−、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１１ｃ−及びＣＤ１２３＋である。
【０１２０】
本明細書において、「好塩基球」は、種々のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３）、ヒスタミン及びロイコトリン（leukotrine）を産生する稀少なタイプの顆粒球である。ヒト好塩基球は、ＩＬ−３Ｒａ、ＦｃｓＲ１、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ６９又はＣＤ２０３等、細胞表面マーカーを発現する。
【０１２１】
用語「そのままの抗体」は、別の化合物、例えば、毒性化合物又は放射標識とコンジュゲートしていない抗体を意味する。
【０１２２】
ＩＬ−３Ｒａ鎖のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｅ ＩＤ受託番号３５６３及び／又は配列番号１として教示されているが、これは命名法のためだけであり、限定を目的としない。
【０１２３】
本開示に従って治療される「哺乳動物」は、霊長類、家畜（例えば、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、ロバ）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌやネコ等、ペット）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット）、競技用動物（例えば、競走馬、ラクダ、グレイハウンド）又は捕獲野生動物となることができる。一例において、哺乳動物はヒトである。
【０１２４】
免疫グロブリン
本開示の方法における使用に適した例示的な免疫グロブリンは本明細書に記載されているが、次の段落は、追加的な例示的な免疫グロブリンについて記載する。
【０１２５】
一例において、免疫グロブリンは、ＩＦＮａ分泌の誘導因子と接触させたＰＢＭＣからのＩＦＮａ分泌を低下させることができる。例えば、ＰＢＭＣは、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド等、トール様受容体（ＴＬＲ）−７／９アゴニストに曝露される。例えば、細胞は、１μＭ又は２μＭ又は３μＭ又は４μＭ又は５μＭ濃度のＣ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドと接触させる。一例において、ＩＦＮａのレベルは、免疫グロブリン不在下又はアイソタイプ対照免疫グロブリン（例えば、ＩＬ−３Ｒａと結合しない）存在下のレベルと比較して低下した。一例において、ＩＦＮａのレベルは、約５０％又は少なくとも６０％又は少なくとも７０％又は少なくとも８０％又は少なくとも９０％低下する。例えば、免疫グロブリンは、０．０４μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌの間等、０．０１μｇ／ｍｌ〜約１５μｇ／ｍｌの間、例えば、０．１μｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌの間の濃度でＩＦＮａの低下を達成することができる。
【０１２６】
別の一例において、免疫グロブリンは、ＰＢＭＣ集団における検出可能なｐＤＣ及び／又は好塩基球の数を低下させることができる。一例において、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリン不在下又はアイソタイプ対照免疫グロブリン（例えば、ＩＬ−３Ｒａと結合しない）存在下のレベルと比較して低下する。一例において、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、約５０％又は少なくとも６０％又は少なくとも７０％又は少なくとも８０％又は少なくとも９０％低下する。一例において、免疫グロブリンは、ＰＢＭＣを免疫グロブリンと接触させた後４時間以内に、或いはＰＢＭＣを免疫グロブリンと接触させた後２４時間以内に、或いはＰＢＭＣを免疫グロブリンと接触させた後４８時間以内にｐＤＣ及び／又は好塩基球の数を低下させることができる。
【０１２７】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物（例えば、カニクイザル等、非ヒト霊長類）の循環中の好塩基球及び／又はｐＤＣ数を、２ｍｇ／ｋｇ以下の用量、例えば、１ｍｇ／ｋｇ以下の用量又は０．１ｍｇ／ｋｇ以下の用量で単回投与後少なくとも７日間低下させることができる。例えば、好塩基球及び／又はｐＤＣ数は、免疫グロブリン投与前の細胞数の７０％（又は８０％又は９０％又は９５％）未満へと低下する。一例において、細胞数は、末梢血中の全細胞のパーセンテージとして算出される。例えば、細胞は、少なくとも８日間又は１０日間又は１１日間低下する。例えば、ｐＤＣ数は、少なくとも８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間又は１２日間又は１３日間又は１４日間又は１５日間低下する。一例において、ｐＤＣの数は、少なくとも１１日間低下する。例えば、好塩基球の数は、少なくとも５日間又は６日間又は７日間又は８日間又は９日間又は１０日間低下する。一例において、好塩基球の数は、少なくとも８日間低下する。
【０１２８】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物（例えば、カニクイザル等、非ヒト霊長類）の循環中の好塩基球及び／又はｐＤＣ数を、４０ｍｇ／ｋｇ以下の用量、例えば、３０ｍｇ／ｋｇ以下の用量又は１０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で単回投与後少なくとも１５日間低下させることができる。例えば、好塩基球及び／又はｐＤＣ数は、免疫グロブリン投与前の細胞数の７０％（又は８０％又は９０％又は９５％）未満へと低下する。一例において、細胞数は、末梢血中の全細胞のパーセンテージとして算出される。例えば、細胞は、少なくとも２１日間又は２２日間又は３０日間又は３５日間又は４０日間又は４９日間又は５０日間又は５７日間又は６３日間又は６５日間又は７０日間低下する。例えば、ｐＤＣの数は、少なくとも１２日間又は１３日間又は１４日間又は１５日間又は１６日間又は１７日間又は１８日間又は１９日間又は２０日間低下する。一例において、ｐＤＣの数は、少なくとも１５日間低下する。例えば、好塩基球の数は、少なくとも１２日間又は１３日間又は１４日間又は１５日間又は１６日間又は１７日間又は１８日間又は１９日間又は２０日間又は２１日間又は２２日間又は２３日間又は２４日間又は２５日間又は２６日間又は２７日間又は２８日間低下する。一例において、好塩基球の数は、少なくとも１５日間（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ用量の後）又は２２日間（例えば、３０ｍｇ／ｋｇ用量の後）低下する。
【０１２９】
一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物（例えば、カニクイザル等、非ヒト霊長類）に投与しても、好中球及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞及び／又は単球及び／又は赤血球の数を低下又は欠乏化させない。例えば、免疫グロブリンは、好中球及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞及び／又は単球及び／又は赤血球の数を、免疫グロブリン投与前のレベル（複数可）と比較して約１０％若しくは２０％若しくは３０％若しくは４０％若しくは５０％を超えて又は統計的に有意な量低下又は欠乏化させない。例えば、免疫グロブリンは、好中球及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞及び／又は単球及び／又は赤血球の細胞死を誘導しない。
【０１３０】
抗体
一例において、本明細書に記載されている通り、いずれかの実施例における免疫グロブリンは抗体である。
【０１３１】
抗体を作製するための方法は、本技術分野で公知及び／又はHarlow and Lane (編集者) Antibodies: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、(1988)に記載されている。一般に、このような方法において、必要に応じて任意の適切な又は所望の担体、アジュバント又は医薬的に許容される賦形剤と共に製剤された、ＩＬ−３Ｒａタンパク質若しくは免疫原性フラグメント又はそれらのエピトープ、或いはそれ（即ち、免疫原）を発現及び提示する細胞は、非ヒト動物、例えば、マウス、ニワトリ、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ウマ、ウシ、ヤギ又はブタへと投与される。免疫原は、鼻腔内、筋肉内、皮下、静脈内、皮内、腹腔内又は他の公知の経路により投与することができる。
【０１３２】
ポリクローナル抗体の産生は、免疫化動物の血液を免疫化後の種々の時点でサンプリングしてモニターすることができる。所望の抗体価を得る必要がある場合、１又は複数回の更なる免疫化を行ってよい。適切な力価が得られるまで追加免疫及び力価測定のプロセスは反復される。所望のレベルの免疫原性が得られたら、免疫化動物の血を抜き、血清を単離して保存する及び／又はこの動物を用いてモノクローナル抗体（Ｍａｂ）を作製する。
【０１３３】
モノクローナル抗体は、本開示により企図される抗体の例示的な一形態である。用語「モノクローナル抗体」又は「ＭＡｂ」は、同一抗原（複数可）、例えば、抗原内の同一エピトープと結合できる同種抗体集団を意味する。この用語は、抗体の供給源又はその作製様式に関する限定を目的としない。
【０１３４】
Ｍａｂの産生のため、例えば、米国特許第４１９６２６５号明細書又はHarlow and Lane (1988)（上記を参照）に例証されている手順等、数多くの公知の技法のうちいずれか一法を用いることができる。
【０１３５】
例えば、適切な動物は、抗体産生細胞を刺激するのに十分な条件下において免疫原で免疫化される。ウサギ、マウス及びラット等、齧歯類は、例示的な動物である。ヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するよう、また、例えば、マウス免疫グロブリンタンパク質を発現しないよう遺伝子操作されたマウスは、本開示の抗体の作製に用いることもできる（例えば、国際公開第２００２／０６６６３０号パンフレットに記載されている）。
【０１３６】
免疫化の後、抗体を産生する潜在能力を有する体細胞、特にＢリンパ球（Ｂ細胞）は、ＭＡｂ作製プロトコールにおける使用のために選択される。これらの細胞は、脾臓、扁桃腺若しくはリンパ節生検又は末梢血試料から得ることができる。次に、免疫化動物に由来するＢ細胞は、一般に、免疫原で免疫化された動物と同じ種に由来する不死骨髄腫細胞の細胞と融合される。
【０１３７】
ハイブリッド細胞は、組織培養培地中にヌクレオチドの新規合成を遮断する薬剤を含む選択培地における培養により増幅される。例示的な薬剤は、アミノプテリン、メトトレキサート及びアザセリンである。
【０１３８】
増幅したハイブリドーマは、例えば、フローサイトメトリー及び／又は免疫組織化学及び／又はイムノアッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、細胞傷害性アッセイ、プラークアッセイ、ドットイムノアッセイ等）によるもの等、抗体特異性及び／又は力価に関する機能的選択に付される。
【０１３９】
或いは、ＡＢＬ−ＭＹＣ技術（ＮｅｏＣｌｏｎｅ、米国５３７１３ウィスコンシン州マディソン）が、ＭＡｂを分泌する細胞系の産生に用いられる（例えば、Largaespadaら、J. Immunol. Methods. 197:85〜95、1996に記載されている）。
【０１４０】
抗体は、例えば、米国特許第６３０００６４号明細書及び／又は米国特許第５８８５７９３号明細書に記載されている通り、ディスプレイライブラリー、例えば、ファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによっても産生又は単離することができる。
【０１４１】
一例において、米国特許第６，１７７，０７８号明細書に記載されている通り、抗体は、７Ｇ３、６Ｈ６又は９Ｆ５である。これら抗体の改変バージョン（例えば、本明細書に記載されている方法による等、脱免疫化、キメラ又はヒト化バージョン）も企図されている。
【０１４２】
キメラ抗体
免疫グロブリンは、合成免疫グロブリンであることができる。一例において、本明細書に記載されている抗体は、キメラ抗体である。用語「キメラ抗体」は、重鎖及び／又は軽鎖部分が、特定の種（例えば、マウス等、マウス（murine））に由来する、或いは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるが、一方、鎖（複数可）の残り部分が、別の種（例えば、ヒト等、霊長類）に由来する、或いは別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である抗体を意味する。通常、主にヒトドメインを有する抗体を産生するため、キメラ抗体は、齧歯類又はウサギ可変領域及びヒト定常領域を利用する。キメラ抗体を産生するための方法は、例えば、米国特許第４８１６５６７号明細書及び米国特許第５８０７７１５号明細書に記載されている。
【０１４３】
本開示は、例えば、ある生物種に由来する可変領域が、別の生物種に由来するタンパク質の領域と融合したキメラ免疫グロブリンも含む。例えば、本開示は、ある生物種に由来するＴ細胞受容体定常ドメインと融合した別個の生物種のＴ細胞受容体に由来する可変領域を含む免疫グロブリンを企図する。
【０１４４】
ヒト化及びヒト抗体
本開示の抗体は、ヒト化抗体でもヒト抗体でもよい。
【０１４５】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト生物種の抗体に由来する抗原結合部位又は可変領域と、ヒト抗体の構造及び／又は配列に基づくこの分子の残りの抗体構造とを有するキメラ抗体のサブクラスを意味すると理解するべきである。抗原結合部位は、ヒト抗体の可変ドメインにおける適切なＦＲに移植された非ヒト抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト抗体由来の残りの領域とを含む。抗原結合部位は、野生型であっても、１又は複数のアミノ酸置換により改変されていてもよい。一部の例において、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。
【０１４６】
非ヒト抗体又はその一部（例えば、可変領域）をヒト化するための方法は、本技術分野で公知のものである。ヒト化は、米国特許第５２２５５３９号明細書又は米国特許第５５８５０８９号明細書の方法に従って行うことができる。抗体をヒト化するための他の方法も除外されない。
【０１４７】
抗体に関連する本明細書における用語「ヒト抗体」は、ヒト、例えば、ヒト生殖系列又は体細胞で発見された配列に由来する又は対応する可変領域（例えば、Ｖ３／４ ＶＬ）と、必要に応じて定常領域とを有する抗体を意味する。「ヒト」抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基、例えば、ランダム又は部位特異的変異によってｉｎ ｖｉｔｒｏで導入された変異（特に、保存的置換に関与する変異、或いは抗体の少数の残基、例えば、１、２、３、４又は５個の抗体残基、例えば、抗体の１又は複数のＣＤＲを構成する１、２、３、４又は５個の残基における変異）を含むことができる。このような「ヒト抗体」は、実際には、ヒトによって産生される必要はなく、むしろこれらは、組換え手段を用いて産生することができる、及び／又はヒト抗体定常及び／又は可変領域をコードする核酸を含むトランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離することができる（例えば、上述通り）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー（例えば、米国特許第５８８５７９３号明細書に記載）等、本技術分野で公知の種々の技法を用いて産生することができる。
【０１４８】
選択されたエピトープを認識するヒト抗体は、「誘導選択（guided selection）」と呼ばれる技法を用いて作製することもできる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を用いて、該エピトープを認識する完全なヒト抗体の選択を誘導する（例えば、米国特許第５５６５３３２号明細書に記載）。
【０１４９】
脱免疫化抗体及び免疫グロブリン
本開示は、脱免疫化抗体又はタンパク質も企図する。脱免疫化抗体及びタンパク質は、１又は複数のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープが除去されて（即ち、変異導入され）、これにより、哺乳動物が、該抗体又はタンパク質に対する免疫応答を生じる可能性を低下させる。脱免疫化抗体及びタンパク質を産生するための方法は、本技術分野で公知のものであり、例えば、国際公開第００／３４３１７号パンフレット、国際公開第２００４／１０８１５８号パンフレット及び国際公開第２００４／０６４７２４号パンフレットに記載されている。
【０１５０】
当業者であれば、適切な変異を導入するため並びにその結果生じるタンパク質を発現及びアッセイするための方法は、本明細書の記載に基づき明らかとなるであろう。
【０１５１】
重鎖抗体
重鎖抗体は、重鎖を含むが軽鎖を含まないという点に限り、多くの他の形態の抗体とは構造的に異なる。従って、このような免疫グロブリンは、「重鎖のみ抗体（heavy chain only antibody）」とも呼ばれる。重鎖免疫グロブリンは、例えば、ラクダ科動物及び軟骨魚類に存在する（ＩｇＮＡＲとも呼ばれる）。
【０１５２】
天然に存在する重鎖抗体に存在する可変領域は、一般に、従来の４本鎖抗体に存在する重鎖可変領域（「ＶＨドメイン」と呼ばれる）や、従来の４本鎖抗体に存在する軽鎖可変領域（「ＶＬドメイン」と呼ばれる）と区別するため、ラクダ科動物抗体においては「ＶＨＨドメイン」、ＩｇＮＡＲにおいてはＶ−ＮＡＲと呼ばれる。
【０１５３】
ラクダ科動物由来の重鎖抗体及びその可変領域並びにそれらの産生及び／又は単離及び／又は使用方法の概要は、とりわけ次の参考文献、国際公開第９４／０４６７８号パンフレット、国際公開第９７／４９８０５号パンフレット及び国際公開第９７／４９８０５号パンフレットに見出すことができる。
【０１５４】
軟骨魚類由来の重鎖免疫グロブリン及びその可変領域並びにそれらの産生及び／又は単離及び／又は使用方法の概要は、とりわけ国際公開第２００５／１１８６２９号パンフレットに見出すことができる。
【０１５５】
抗体フラグメント
単一ドメイン抗体
一部の例において、本開示の免疫グロブリンは、単一ドメイン抗体（用語「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ」と互換的に用いられる）である、或いはそれを含む。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体又は一部を含む単一ポリペプチド鎖である。特定の例において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ウォルサム；例えば、米国特許第６２４８５１６号明細書を参照）である。
【０１５６】
二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体
一部の例において、本開示の免疫グロブリンは、国際公開第９８／０４４００１号パンフレット及び／又は国際公開第９４／００７９２１号パンフレットに記載されているもの等、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体又はより高次のタンパク質複合体である、或いはそれらを含む。
【０１５７】
例えば、二重特異性抗体は、各ポリペプチド鎖が構造ＶＬ−Ｘ−ＶＨ又はＶＨ−Ｘ−ＶＬ（式中、ＶＬは、抗体軽鎖可変領域であり、ＶＨは、抗体重鎖可変領域であり、Ｘは、単一ポリペプチド鎖におけるＶＨとＶＬが会合する（又はＦｖを形成する）には不十分な残基を含むリンカーである、或いはこれは存在せず、一方のポリペプチド鎖のＶＨが、他方のポリペプチド鎖のＶＬと結合して抗原結合部位を形成する、即ち、１又は複数の抗原と特異的に結合できるＦｖ分子を形成する）を含む２本の関連するポリペプチド鎖を含むタンパク質である。ＶＬ及びＶＨは、各ポリペプチド鎖で同一であってもよいし、或いはＶＬ及びＶＨは、二特異性の二重特異性抗体を形成するよう、各ポリペプチド鎖で異なっていてもよい（即ち、異なる特異性を有する２種のＦｖを含む）。
【０１５８】
エフェクター活性を誘導できる二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体等は、ＩＬ−３Ｒａと結合できる抗原結合ドメイン及び免疫細胞、例えばＴ細胞における細胞表面分子（例えば、ＣＤ３）と結合できる抗原結合ドメインを用いて産生することができる。
【０１５９】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント
当業者であれば、ｓｃＦｖが、単一のポリペプチド鎖にＶＨ及びＶＬ領域を含み、ＶＨとＶＬとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合のため（即ち、単一ポリペプチド鎖のＶＨとＶＬが、互いに会合してＦｖを形成するため）の所望の構造の形成を可能にするポリペプチドリンカーを含むことを認識するであろう。例えば、リンカーは、１２アミノ酸を超える残基を含み、ｓｃＦｖのより好ましいリンカーの一つは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３である。
【０１６０】
本開示はまた、単一システイン残基がＶＨのＦＲ及びＶＬのＦＲに導入され、ジスルフィド結合によって連結されたシステイン残基同士が安定的なＦｖを生じる、ジスルフィド安定化Ｆｖ（又はｄｉＦｖ若しくはｄｓＦｖ）を企図する。
【０１６１】
或いは、又は更に、本開示は、二量体ｓｃＦｖ、即ち、非共有結合又は共有結合、例えば、ロイシンジッパードメイン（例えば、Ｆｏｓ又はＪｕｎに由来する）によって連結した２種のｓｃＦｖ分子を含むタンパク質を包含する。或いは、２種のｓｃＦｖは、米国特許出願公開第２００６０２６３３６７号明細書に記載されている通り、両方のｓｃＦｖが形成されて、抗原と結合するのに十分な長さのペプチドリンカーにより連結される。
【０１６２】
本開示はまた、エフェクター活性を誘導できる二量体ｓｃＦｖを企図する。例えば、一方のｓｃＦｖは、ＩＬ−３Ｒａと結合し、もう一方のｓｃＦｖは、免疫細胞、例えばＴ細胞における細胞表面分子（例えば、ＣＤ３）と結合する。一例において、二量体タンパク質は、ｄＡｂとｓｃＦｖの組み合わせである。エフェクター機能を誘導できる二特異性抗体フラグメントの例は、例えば、米国特許第７２３５６４１号明細書に記載されている。
【０１６３】
他の抗体及び抗体フラグメント
本開示はまた、
（ｉ）米国特許第５，７３１，１６８号明細書に記載されている「鍵と鍵穴（key and hole）」二特異性タンパク質；
（ｉｉ）例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書に記載されているヘテロコンジュゲートタンパク質；
（ｉｉｉ）例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書に記載されている化学的架橋剤を用いて産生されたヘテロコンジュゲートタンパク質；及び
（ｉｖ）Ｆａｂ３（例えば、ＥＰ１９９３０３０２８９４に記載）
等、他の抗体及び抗体フラグメントを企図する。
【０１６４】
Ｆｃ領域
本開示は、Ｆｃと融合した免疫グロブリンの抗原結合性フラグメント等、抗体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリンを包含する。
【０１６５】
本開示のタンパク質産生に有用なＦｃ領域の配列は、多くの異なるソースから得ることができる。一部の例において、タンパク質のＦｃ又はその一部は、ヒト抗体に由来する。更に、Ｆｃ又はその一部は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥ等、任意の抗体クラス並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４等、任意の抗体アイソタイプに由来することができる。一例において、Ｆｃは、ヒトのアイソタイプＩｇＧ１又はヒトのアイソタイプＩｇＧ２又はヒトのアイソタイプＩｇＧ３又は前述いずれかのハイブリッドである。
【０１６６】
一例において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を誘導することができる。例えば、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃ領域である。別の一例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ Ｆｃ領域のハイブリッド又はＩｇＧ１及びＩｇＧ３ Ｆｃ領域のハイブリッド又はＩｇＧ２及びＩｇＧ３ Ｆｃ領域のハイブリッドである。例示的なヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ２ Ｆｃ領域のハイブリッドは、Chappelら、Proc. Natl Acad. Sci. USA、88:9036〜9040、1991に記載されている。
【０１６７】
Ｆｃ領域が、エフェクター機能を誘導できるか否か決定するための方法は、当業者であれば理解できるであろう及び／又は本明細書に記載されている。
【０１６８】
エフェクター機能
適切には、本開示の方法における使用に適切な抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａ＋形質細胞様樹状細胞の少なくとも部分的な欠乏化、実質的な欠乏化又は排除を促進する又は可能にするエフェクター機能を有する、或いはそれを提示する。このようなエフェクター機能は、Ｆｃ受容体との結合親和性の増強、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）であり得る。
【０１６９】
当業者であれば本明細書の記述に基づき理解できるように、本開示の一部の例は、エフェクター機能を誘導できる免疫グロブリンを利用する。
【０１７０】
一例において、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能を誘導できるような様式でＩＬ−３Ｒａと結合する。
【０１７１】
一例において、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能の誘導を可能にするＩＬ−３Ｒａ内のエピトープと結合する。
【０１７２】
別の一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物のｐＤＣ及び／又は好塩基球におけるＩＬ−３Ｒａと結合して、これによりＡＤＣＣ等、エフェクター機能を誘導することができる。
【０１７３】
例えば、免疫グロブリンは、細胞表面におけるＩＬ−３Ｒａと、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能の誘導に十分な時間結合し続ける。例えば、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ誘導が可能となるよう内部移行が早すぎることはない。
【０１７４】
或いは、又は更に、免疫グロブリンは、免疫エフェクター細胞が免疫グロブリンにおけるＦｃ領域と結合し、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能を誘導できる様式で、細胞表面におけるＩＬ−３Ｒａと結合する。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域は、免疫グロブリンがＩＬ−３Ｒａと結合すると、免疫エフェクター細胞におけるＦｃ受容体（例えば、ＦｃｙＲ）と相互作用できるような様式で露出している。本開示の文脈において、用語「免疫エフェクター細胞」は、Ｆｃ受容体を発現し、それと結合する細胞をＡＤＣＣ又はＡＤＣＰにより殺傷することのできる任意の細胞を意味すると理解されるべきである。
【０１７５】
免疫グロブリンのエフェクター機能に関する上の各段落は、ＣＤＣ誘導に適宜変更して適用するものと解釈するべきである。例えば、免疫グロブリンは、補体成分Ｃ１ｑが免疫グロブリンにおけるＦｃ領域と結合してＣＤＣを誘導できる様式で、細胞表面におけるＩＬ−３Ｒａと結合する。
【０１７６】
一例において、免疫グロブリンは、エフェクター機能のレベル増強を誘導することができる。
【０１７７】
一例において、Ｆｃ領域によって誘導されたエフェクター機能のレベルは、ＩｇＧ１抗体の野生型Ｆｃ領域又はＩｇＧ３抗体の野生型Ｆｃ領域と比べて増強される。
【０１７８】
別の一例において、Ｆｃ領域は、誘導できるエフェクター機能のレベルが、改変なしのＦｃ領域と比較して増加するよう改変される。このような改変は、アミノ酸レベル及び／又は二次構造レベル及び／又は三次構造レベル及び／又はＦｃ領域の糖鎖付加であることができる。
【０１７９】
一例において、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、ｃｈ７Ｇ３（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む７Ｇ３のキメラバージョン、国際公開第２００９／０７０８４４号パンフレットにおいてＣＳＬ３６０と呼ばれる）又はｈｚ７Ｇ３（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む７Ｇ３のヒト化バージョン）によって示されるレベルを超えるエフェクター機能のレベルを有する、或いはそれを提示する。本開示の文脈において、ｃｈ７Ｇ３及びｈｚ７Ｇ３は、基本的に同一レベルのエフェクター機能を示す。
【０１８０】
当業者であれば、より優れたエフェクター機能は、例えば、より高い効果レベル、より持続的な効果又はより迅速な効果速度として、数多くの仕方のいずれかにおいて顕在化できることを理解するであろう。
【０１８１】
例えば、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含むエフェクター機能を有する、或いはそれを提示する。
【０１８２】
一例において、Ｆｃ領域は、そのエフェクター機能増強を誘導する能力を増加させる１又は複数のアミノ酸改変を含む。一例において、Ｆｃ領域は、１又は複数のＦｃｙＲとより高い親和性で結合する。一例において、Ｆｃ領域は、ＦｃｙＲに対し、野生型Ｆｃ領域の親和性の１倍を超えてより高い、或いは野生型Ｆｃ領域の親和性の５倍を超えてより高い、或いは野生型Ｆｃ領域の親和性の５倍〜３００倍の間を超えてより高い親和性を有する。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２及び３３５からなる群から選択されたポジションに、少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数１】
からなる群から選択された少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数２】
からなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【０１８３】
別の一例において、Ｆｃ領域は、ＦｃｙＲＩＩｂよりもＦｃｙＲＩＩＩａと効率的に結合する。例えば、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した２３４、２３５、２３９、２４０、２６４、２９６、３３０及びＩ３３２からなる群から選択されたポジションに、少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番したＬ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｙ、Ｙ２９６Ｑ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ及びＩ３３２Ｅからなる群から選択された少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。例えば、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数３】
からなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【０１８４】
更に別の一例において、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域によって媒介されたレベルを超えるレベルでＡＤＣＣを誘導する。例えば、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域によって誘導されるレベルの５倍を超えてより高い、或いは５倍〜１０００倍の間を超えてより高いレベルでＡＤＣＣを誘導する。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２及び３３５からなる群から選択されたポジションに、少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数４】
からなる群から選択された少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数５】
からなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【０１８５】
一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した次のアミノ酸置換、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅを含む。このＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃｙＲＩＩＩａに対する親和性が約１４倍増加し、野生型Ｆｃ領域と比較して約３．３増加したＡＤＣＣ誘導能を有する。
【０１８６】
一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した次のアミノ酸置換、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含む。このＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃｙＲＩＩＩａに対する親和性が約１３８倍増加し、野生型Ｆｃ領域と比較して約３２３増加したＡＤＣＣ誘導能を有する。
【０１８７】
エフェクター機能を誘導するＦｃ領域の能力を増加させる追加的なアミノ酸置換は、本技術分野で公知のものである及び／又は例えば、米国特許第６７３７０５６号明細書又は米国特許第７３１７０９１号明細書に記載されている。
【０１８８】
一例において、Ｆｃ領域の糖鎖付加は、そのエフェクター機能増強を誘導する能力を増加するよう変化させられる。この点について、哺乳動物細胞によって産生された天然の抗体は通常、一般に、Ｎ型結合によりＦｃ領域ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７と結合した分岐型の二分岐オリゴ糖（branched, biantennary oligosaccharide）を含む。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸並びに二分岐オリゴ糖構造の「基部（stem）」においてＧｌｃＮＡｃと結合したフコースを含むことができる。一部の例において、本開示に係るＦｃ領域は、Ｆｃ領域と結合した（直接的又は間接的に）フコースを欠く、即ち、Ｆｃ領域が「アフコシル化」した炭水化物構造を含む。このような変種は、ＡＤＣＣを誘導する能力が改善され得る。アフコシル化抗体を産生するための方法は、ａ−１，６−フコシル基転移酵素（ＦＵＴ８）を発現できない細胞系において免疫グロブリンを発現させるステップ（例えば、Yumane-Ohnukiら、Biotechnol. Bioengineer.、87:614〜622、2004に記載）、ＦＵＴ８に対する低分子干渉ＲＮＡを発現する細胞において免疫グロブリンを発現させるステップ（例えば、Moriら、Biotechnol. Bioengineer.、88:901〜908、2004に記載）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）−マンノース４，６−デヒドラターゼ（ＧＭＤ）を発現できない細胞において免疫グロブリンを発現させるステップ（例えば、Kandaら、J. Biotechnol.、130:300〜310、2007に記載）を含む。本開示はまた、例えば、β−（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミンイル転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）を発現するよう改変された細胞系を用いて産生した、フコシル化レベルが低下した免疫グロブリンの使用を企図する（例えば、Umanaら、Nat. Biotechnol.、17:176〜180、1999に記載）。
【０１８９】
一例において、本開示に係る免疫グロブリンは、アフコシル化されている。例えば、免疫グロブリンは、ＦＵＴ８を発現しない細胞（例えば、ＣＨＯ細胞等、哺乳動物細胞）において産生される。
【０１９０】
他の方法として、Ｆｃ介在性エフェクター機能増強を誘導できる抗体を生得的に産生する細胞系の使用が挙げられる（例えば、ウイルスワクチン生産のためのアヒル胚由来幹細胞、国際公開第２００８／１２９０５８号パンフレット；鳥類ＥＢＸ（登録商標）細胞における組換えタンパク質産生、国際公開第２００８／１４２１２４号パンフレット）。
【０１９１】
本開示の方法において有用な免疫グロブリンは、オリゴ糖が二分された、例えば、Ｆｃ領域と結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された免疫グロブリンを含む。このような免疫グロブリンは、フコシル化が低下した及び／又はＡＤＣＣ機能が改善され得る。このような免疫グロブリンの例は、例えば、米国特許第６６０２６８４号明細書及び米国特許出願公開第２００５０１２３５４６号明細書に記載されている。
【０１９２】
オリゴ糖における少なくとも１個のガラクトース残基がＦｃ領域と結合した免疫グロブリンも企図される。このような免疫グロブリンは、ＣＤＣ機能が改善され得る。このような免疫グロブリンは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号パンフレット及び国際公開第１９９９／２２７６４号パンフレットに記載されている。
【０１９３】
ＡＤＣＣ活性を示す免疫グロブリンの非限定的な例として、本明細書において「ｈｚ７Ｇ３Ｖ１」、「ｈｚ７Ｇ３Ｖ２」及び「ｈｚ７Ｇ３Ｖ３」と称するモノクローナル抗体が挙げられる。各事例において、これらの免疫グロブリンによって示されるエフェクター機能のレベルは、ｃｈ７Ｇ３（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む７Ｇ３のキメラ型）又はｈｚ７Ｇ３と比べて増強される、或いはそれを超える。
【０１９４】
別の非限定的な例において、異なるエピトープとの結合の又は内部移行速度がより遅い（例えば、ｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３と比較して）結果、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ機能増強等、エフェクター機能を増強して新規に産生することができる。
【０１９５】
エフェクター機能を誘導する免疫グロブリンの能力を決定するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書においてより詳細に記載されている。
【０１９６】
追加的な改変
本開示は、免疫グロブリンに対する追加的な改変も企図する。
【０１９７】
例えば、免疫グロブリンは、免疫グロブリンの半減期を増加させる１又は複数のアミノ酸置換を含む。例えば、免疫グロブリンは、新生児Ｆｃ領域（ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の親和性を増加させる１又は複数のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含む。例えば、Ｆｃ領域は、より低いｐＨ、例えば、約ｐＨ６．０においてＦｃＲｎに対する親和性を増加させて、エンドソームにおけるＦｃ／ＦｃＲｎ結合を促進した。一例において、Ｆｃ領域は、約ｐＨ６におけるＦｃＲｎに対する親和性を、約ｐＨ７．４におけるその親和性と比較して増加させ、これは、細胞による再利用に続くＦｃの血液中への再放出を促進する。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを低下させることによる、免疫グロブリンの半減期延長に有用である。
【０１９８】
例示的なアミノ酸置換は、ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＴ２５０Ｑ及び／又はＭ４２８Ｌを含む。追加的な又は代替的なアミノ酸置換は、例えば、米国特許出願公開第２００７０１３５６２０号明細書に記載されている。
【０１９９】
タンパク質産生
一例において、本明細書に記載されているいずれかの例における免疫グロブリンは、例えば、本明細書に記載されている通り及び／又は本技術分野で公知の通りに、免疫グロブリン産生に十分な条件下でハイブリドーマを培養することにより産生される。
【０２００】
組換え発現
別の一例において、本明細書に記載されているいずれかの例における免疫グロブリンは組換えである。
【０２０１】
組換えタンパク質の場合、これをコードする核酸は発現ベクターにクローニングされ、次にベクターは、そのままでは免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌（E.coli）細胞、酵母細胞、昆虫細胞又はサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞若しくは骨髄腫細胞等の哺乳動物細胞等、宿主細胞にトランスフェクトされる。免疫グロブリンの発現に用いられる例示的な細胞は、ＣＨＯ細胞、骨髄腫細胞又はＨＥＫ細胞である。これらの目標を達成するための分子クローニング技法は、本技術分野で公知のものであり、例えば、Ausubelら(編集者)、Current Protocols in Molecular Biology、Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience(1988、現時点までのあらゆる最新情報を含む)又はSambrookら、Molecularar Cloning: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)に記載されている。幅広いクローニング及びｉｎ ｖｉｔｒｏ増幅方法が、組換え核酸の構築に適切である。組換え抗体を産生する方法も本技術分野で公知のものである。米国特許第４，８１６，５６７号明細書又は米国特許第５５３０１０１号明細書を参照されたし。
【０２０２】
単離後、核酸は、更にクローニングするため（ＤＮＡ増幅）又は無細胞系若しくは細胞における発現のために、発現構築物又は発現ベクターにおけるプロモーターに作動可能に連結して挿入される。
【０２０３】
本明細書において、用語「プロモーター」は、その最も広範な文脈において解釈するべきであり、例えば、発生及び／又は外部刺激に応答して、或いは組織特異的様式で、核酸の発現を変化させる追加的な調節エレメント（例えば、上流活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサー及びサイレンサー）あり又はなしの、正確な転写開始に必要とされるＴＡＴＡボックス又はイニシエータエレメント等、ゲノム遺伝子の転写調節配列を含む。この文脈において、用語「プロモーター」は、それに作動可能に連結した核酸の発現をもたらす、活性化する又は増強する組換え、合成若しくは融合核酸又はその誘導体の説明にも用いられる。例示的なプロモーターは、前記核酸の発現を更に増強するため及び／又は空間的発現及び／又は時間的発現を変化させるため、１又は複数の特異的調節エレメントの追加的なコピーを含有することができる。
【０２０４】
本明細書において、用語「に作動可能に連結した」は、核酸の発現がプロモーターによって制御されるような、核酸に対するプロモーターの配置を意味する。
【０２０５】
細胞における発現のために多くのベクターが利用できる。ベクター構成要素は一般に、次のうち１又は複数を含むが、これらに限定されない；シグナル配列、免疫グロブリンをコードする配列（例えば、本明細書に提供されている情報に由来する）、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終結配列。当業者であれば、免疫グロブリン発現のために適切な配列を認識するであろう。例示的なシグナル配列は、原核生物分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、ａ因子リーダー又は酸性ホスファターゼリーダー）又は哺乳動物分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）を含む。
【０２０６】
哺乳動物細胞において活性を有する例示的なプロモーターは、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ−ＩＥ）、ヒト伸長因子１−ｃｉプロモーター（ＥＦ１）、核内低分子ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、ｃｃ−ミオシン重鎖プロモーター、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β−アクチンプロモーター；ＣＭＶエンハンサー／β−アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターを含むハイブリッド調節エレメント又はそれらの活性フラグメントを含む。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０によって形質転換したサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児由来腎臓系統（２９３又は懸濁培養における増殖のためにサブクローニングした２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；又はチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
【０２０７】
例えば、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）及び分裂酵母（S. pombe）を含む群から選択される酵母細胞等、酵母細胞における発現に適切な典型的なプロモーターとして、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター又はＴＥＦ１プロモーターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２０８】
単離された核酸又はこれを含む発現構築物を発現のために細胞に導入するための手段は、当業者にとって公知のものである。所定の細胞に用いられる技法は、公知の成功した技法に依存する。組換えＤＮＡを細胞に導入するための手段は、とりわけマイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストランを介したトランスフェクション、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ、米国メリーランド州）及び／又はｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ（Ｇｉｂｃｏ、米国メリーランド州）を用いることによる等、リポソームを介したトランスフェクション、ＰＥＧ介在性ＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーション及びＤＮＡコーティングしたタングステン又は金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ Ｉｎｃ．、米国ウィスコンシン州）使用による等の微粒子銃（microparticle bombardment）を含む。
【０２０９】
免疫グロブリン産生に用いられる宿主細胞は、用いる細胞型に応じて様々な培地で培養することができる。ＨａｍのＦｌ０（Ｓｉｇｍａ）、基礎培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭｌ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）等、市販の培地が、哺乳動物細胞の培養に適切である。本明細書に記されている他の細胞型を培養するための培地は、本技術分野で公知のものである。
【０２１０】
タンパク質の単離
免疫グロブリンを精製するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書に記載されている。
【０２１１】
免疫グロブリンが培地に分泌される場合、このような発現系から得られる上清は先ず一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置を用いて濃縮される。タンパク質分解を阻害するため、ＰＭＳＦ等、プロテアーゼ阻害剤が前述のステップのうちいずれかに含まれていてよく、外来性汚染物の増殖を予防するために抗生物質が含まれていてよい。
【０２１２】
細胞から調製された免疫グロブリンは、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー若しくはプロテインＧクロマトグラフィー）又は前述のいずれかの組み合わせを用いて精製することができる。これらの方法は、本技術分野で公知のものであり、例えば、国際公開第９９／５７１３４号パンフレット又はEd Harlow and David Lane (編集者) Antibodies: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory、(1988)に記載されている。
【０２１３】
当業者であれば、免疫グロブリンは、精製又は検出を容易にするタグ、例えば、ポリヒスチジンタグ（例えば、ヘキサヒスチジンタグ）又はインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）タグ又はサルウイルス５（Ｖ５）タグ又はＦＬＡＧタグ又はグルタチオンＳ−転移酵素（ＧＳＴ）タグを含むよう改変できることも認識できるであろう。次に、その結果得られる免疫グロブリンは、親和性精製等、本技術分野で公知の方法を用いて精製される。例えば、ヘキサｈｉｓタグを含む免疫グロブリンは、この免疫グロブリンを含む試料を、固体又は半固体担体上に固定化されたヘキサｈｉｓタグと特異的に結合するニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）と接触させ、試料を洗浄して未結合の免疫グロブリンを除去し、その後に結合した免疫グロブリンを溶出することにより精製される。或いは、又は更に、タグと結合するリガンド又は抗体が、親和性精製方法において用いられる。
【０２１４】
免疫グロブリン活性のアッセイ
競合的結合の決定
モノクローナル抗体７Ｇ３の結合を競合的に阻害する免疫グロブリンを決定するためのアッセイは、当業者であれば理解できるであろう。例えば、７Ｇ３は、検出可能な標識、例えば、蛍光標識又は放射性標識とコンジュゲートされる。次に、標識抗体及び検査免疫グロブリンが混合され、ＩＬ−３Ｒａ若しくはそのエピトープ又はそれを発現する細胞と接触される。次に、標識７Ｇ３のレベルが決定され、標識抗体が免疫グロブリンの不在下でＩＬ−３Ｒａ、エピトープ又は細胞と接触した場合に決定されたレベルと比較される。検査免疫グロブリンの存在下における標識７Ｇ３のレベルが、免疫グロブリンなしと比較して低下する場合、免疫グロブリンは、７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害すると考えられる。
【０２１５】
必要に応じて、検査免疫グロブリンは、７Ｇ３とは異なる標識とコンジュゲートされる。この代替的標識は、検査免疫グロブリンと、ＩＬ−３Ｒａ又はエピトープ又は細胞との結合レベルの検出を可能にする。
【０２１６】
別の一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａを７Ｇ３と接触させる前にＩＬ−３Ｒａと結合してよい。免疫グロブリンの存在下において結合した７Ｇ３量の、免疫グロブリンの不在下と比較した低下は、免疫グロブリンが、ＩＬ−３Ｒａと７Ｇ３の結合を競合的に阻害することを示す。標識免疫グロブリンを用いて、また、先ず７Ｇ３をＩＬ−３Ｒａと結合することにより、相互アッセイを行うことができる。この場合、７Ｇ３の存在下でＩＬ−３Ｒａと結合した標識免疫グロブリン量の、７Ｇ３の不在下と比較した低下は、免疫グロブリンが、７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａの結合を競合的に阻害することを示す。
【０２１７】
別の一例において、免疫グロブリンによって結合されたエピトープは、７Ｇ３によって結合されたエピトープと同一又は重複しているか決定するようマッピングされる。エピトープマッピング法は、当業者であれば理解できるであろう。例えば、ＩＬ−３Ｒａ配列に亘る一連の重複ペプチド、例えば、１０〜１５アミノ酸を含むペプチドが産生される。次に、免疫グロブリンは各ペプチドと接触され、免疫グロブリンと結合するペプチド（複数可）が決定される。この操作は、免疫グロブリンが結合するエピトープを含むペプチド（複数可）の決定を可能にする。複数の非隣接ペプチドが免疫グロブリンによって結合される場合、免疫グロブリンは、立体構造エピトープと結合することができる。
【０２１８】
或いは、又は更に、ＩＬ−３Ｒａ内のアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発により変異導入され、免疫グロブリン及び／又は７Ｇ３結合を低下又は阻害する変異が決定される。免疫グロブリンの結合を低下又は阻害するいずれかの変異は、免疫グロブリンによって結合されるエピトープ内に存在する可能性がある。
【０２１９】
或いは、又は更に、免疫グロブリンは、７Ｇ３が結合するエピトープを用いて産生され、よって、同一エピトープと結合する可能性がある。
【０２２０】
必要に応じて、ＩＬ−３Ｒａ又はそのエピトープに対する免疫グロブリンの解離定数（Ｋｄ）が決定される。ＩＬ−３Ｒａ結合免疫グロブリンの「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、一例において、放射標識ＩＬ−３Ｒａ結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。このアッセイは、滴定系列の非標識ＩＬ−３Ｒａの存在下で最小濃度の放射性ＩＬ−３Ｒａにより免疫グロブリンを平衡化する。洗浄して未結合ＩＬ−３Ｒａを除去した後、放射能の量を決定すると、この値はタンパク質のＫｄを示す。
【０２２１】
別の例において、Ｋｄ又はＫｄ値は、表面プラズモン共鳴アッセイを用いることにより、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を固定化ＩＬ−３Ｒａと共に用いることによって測定される。
【０２２２】
一部の例において、ＩＬ−３Ｒａとの結合に関して競合する可能性があるため、７Ｇ３と同様のＫｄ又はより高いＫｄを有するタンパク質が選択される。
【０２２３】
中和の決定
本開示の一部の例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和することができる。
【０２２４】
受容体を介してリガンドのシグナル伝達を中和する免疫グロブリンの能力を評価するための種々のアッセイは、本技術分野で公知のものである。
【０２２５】
一例において、免疫グロブリンは、３Ｒａ鎖及び／又はＩＬ−３Ｒａ鎖とＩＬ−３ＲＰ鎖のヘテロ二量体と、ＩＬ−３との結合を低下又は阻害する。これらのアッセイは、標識ＩＬ−３及び／又は標識免疫グロブリンを用いて本明細書に記載されている競合的結合アッセイとして行うことができる。
【０２２６】
別の一例において、免疫グロブリンは、好塩基球からのＩＬ−３介在性ヒスタミン放出を低下又は阻害する。例えば、好塩基球を含む低密度の白血球は、ＩｇＥ、ＩＬ−３及び種々の濃度の免疫グロブリンと共にインキュベートされる。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ−３（陰性対照）を含まない。次に、ヒスタミン放出レベルは、標準技法、例えば、ＲＩＡを用いて評価される。ヒスタミン放出レベルを陽性対照に満たないレベルへと低下させる免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和すると考えられる。一例において、低下のレベルは、免疫グロブリン濃度と相関する。ＩＬ−３介在性ヒスタミン放出を評価するための例示的な方法は、例えば、Lopezら、J. Cell. Physiol.、145:69、1990に記載されている。
【０２２７】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、白血病性細胞系ＴＦ−１のＩＬ−３介在性増殖を低下又は阻害する。例えば、ＴＦ−１細胞は、ＩＬ−３又はＧＭ−ＣＳＦなしで、増殖を停止するのに十分な時間（例えば、２４〜４８時間）培養される。次に、細胞は、ＩＬ−３及び種々の濃度の免疫グロブリンの存在下で培養される。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ−３（陰性対照）を含まない。次に、細胞増殖は、標準技法、例えば、３Ｈ−チミジン取り込みを用いて評価される。ＩＬ−３の存在下で細胞増殖を陽性対照に満たないレベルへと低下又は阻害する免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和すると考えられる。
【０２２８】
ＩＬ−３シグナル伝達中和を評価するための別のアッセイは、免疫グロブリンが、内皮細胞に対するＩＬ−３介在性効果を低下又は阻害するか否か決定するステップを含む。例えば、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ＩＬ−３（必要に応じて、ＩＦＮ−γと共に）及び種々の濃度の免疫グロブリンの存在下で培養される。次に、分泌されたＩＬ−６の量は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて評価される。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ−３（陰性対照）を含まない。ＩＬ−３の存在下でＩＬ−６産生を陽性対照に満たないレベルへと低下又は阻害する免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和すると考えられる。
【０２２９】
本開示により、ＩＬ−３シグナル伝達の中和を評価するための他の方法が企図されている。
【０２３０】
エフェクター機能の決定
ＡＤＣＣ活性を評価するための方法は、本技術分野で公知のものである。
【０２３１】
一例において、ＡＤＣＣ活性のレベルは、５１Ｃｒ放出アッセイ、ユーロピウム放出アッセイ又は３５Ｓ放出アッセイを用いて評価される。これらアッセイのそれぞれにおいて、ＩＬ−３Ｒａを発現する細胞は、化合物が細胞によって取り込まれるのに十分な時間及び条件下で、記述されている化合物のうち１又は複数と共に培養される。３５Ｓ放出アッセイの事例において、ＩＬ−３Ｒａを発現する細胞は、標識アミノ酸が新規合成タンパク質へと取り込まれるのに十分な時間、３５Ｓ標識メチオニン及び／又はシステインと共に培養することができる。次に、細胞は、免疫グロブリンの存在下又は不在下、免疫エフェクター細胞、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び／又はＮＫ細胞の存在下で培養される。次に、細胞培養培地における５１Ｃｒ、ユーロピウム及び／又は３５Ｓの量が検出され、免疫グロブリンの不在下と比較した免疫グロブリンの存在下における増加は、免疫グロブリンがエフェクター機能を有することを示す。免疫グロブリンによって誘導されるＡＤＣＣレベルを評価するためのアッセイを開示する例示的な刊行物として、Hellstromら、Proc. Natl Acad. Sci. USA 55:7059〜7063、1986及びBruggemannら、J. Exp. Med. 7(5(5:1351〜1361、1987が挙げられる。
【０２３２】
免疫グロブリンによって誘導されるＡＤＣＣレベルを評価するための他のアッセイとして、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．米国カリフォルニア州）又はＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州）が挙げられる。
【０２３３】
或いは、又は更に、免疫グロブリンのエフェクター機能は、例えば、米国特許第７３１７０９１号明細書に記載されている通り、１又は複数のＦｃｙＲに対するその親和性を決定することにより評価される。
【０２３４】
Ｃ１ｑ結合アッセイは、免疫グロブリンが、Ｃ１ｑと結合でき、ＣＤＣを誘導できることを確認するために行うこともできる。補体活性化を評価するため、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoroら、J. Immunol. Methods 202:163、1996を参照）。
【０２３５】
治療有効性の評価
Ｉｎ Ｖｉｔｒｏアッセイ
本明細書に記載されている疾患又は状態、例えば、ループスを治療する免疫グロブリンの能力の評価に、種々のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが利用できる。
【０２３６】
例えば、ｐＤＣ及び／又は好塩基球又はそれらを含む細胞集団（例えば、ＰＢＭＣ）は、免疫グロブリン及び疾患又は状態において生じる細胞の誘導因子（例えば、ループスの場合はＣｐＧオリゴヌクレオチド及び／又は免疫複合体）の存在下又は不在下で培養される。次に、疾患又は状態の治療における免疫グロブリンの有効性は、例えば、ＥＬＩＳＡを用いて細胞培養培地に分泌されるＩＦＮａレベルを決定することにより評価される。或いは、又は更に、ヒスタミン分泌又はＩＬ−４、ＩＬ−６及び／又はＩＬ−１３分泌のレベルが評価される。これらサイトカインのうちいずれかのレベルの、免疫グロブリンの不在下（又はアイソタイプ対照免疫グロブリンの存在下）と比較した低下は、免疫グロブリンが疾患又は状態の治療に適切であることを示す。或いは、又は更に、細胞死のレベルが評価される。細胞死の増加（特に、他の細胞型の細胞死がバックグラウンドを超えて検出可能に増加しない、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の細胞死）は、疾患又は状態の治療に適切な免疫グロブリンを示す。この点について、本明細書で上に述べた通り、ＩＦＮａ等、サイトカインは、一部の疾患／状態、例えば、ループスにおいて役割を果たすと考えられる。従って、ＩＦＮａ産生を低下させる免疫グロブリンは、このような状態の治療に適切であると考えられる。
【０２３７】
Ｉｎ Ｖｉｖｏアッセイ
一例において、疾患又は状態を治療する免疫グロブリンの有効性は、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイを用いて評価される。
【０２３８】
例えば、免疫グロブリンが非ヒト動物（例えば、非ヒト霊長類）に投与され、循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数／レベルが評価される。投与前及び／又は免疫グロブリンが投与されていない対照哺乳動物と比較して、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の数／レベルを低下させる免疫グロブリンは、疾患又は状態の治療に適切であると考えられる。
【０２３９】
別の一例において、ＩＦＮａ等、サイトカインのレベルは、哺乳動物の循環において例えば、ＥＬＩＳＡを用いて検出される。投与前及び／又は免疫グロブリンが投与されていない対照哺乳動物のレベルと比較してサイトカインレベルを低下させる免疫グロブリンは、疾患又は状態の治療に適切であると考えられる。ＩＦＮａ等、サイトカインは、一部の疾患／状態、例えば、ループスにおいて役割を果たすと考えられるため、ＩＦＮａ産生を低下させる免疫グロブリンは、このような状態の治療に適切であると考えられる。
【０２４０】
別の一例において、免疫グロブリンは、ループスの非ヒト哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類）モデルに投与される。例えば、ＳＬＥを患うヒトの血漿は、ＳＬＥモデルの作製に十分な時間及び条件下でカニクイザル等、非ヒト霊長類に注入される（例えば、Pincusら、Clin. Immunol.、105:141〜154、2002に記載）。免疫グロブリンは、非ヒト霊長類に投与され、例えば、本明細書に記載されているアッセイを用いてＳＬＥ症状におけるその効果が評価される。例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体及び／又は免疫複合体のレベルが評価される。１又は複数のＳＬＥ症状を低下させる免疫グロブリンは、ＳＬＥの治療に適切であると考えられる。
【０２４１】
治療される状態
本開示の方法により治療される疾患又は状態は、通常、Ｉ型インターフェロンに関連する又はそれに部分的に起因若しくは媒介され、及び／又はＩ型インターフェロンを産生する樹状細胞及び／又は好塩基球の欠乏化、除去若しくは少なくとも部分的な排除に対して応答性である。適宜、疾患又は状態は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群及び全身性強皮症（ＳＳｃ）等の強皮症から選択される。
【０２４２】
一例において、疾患又は状態はループスである。例えば、疾患又は状態は、円板状ループス、亜急性皮膚エリテマトーデス、薬剤誘発性ループス、新生児ループス、ループス腎炎又はＳＬＥである。
【０２４３】
特定の疾患又は状態はＳＬＥである。
【０２４４】
一例において、ＳＬＥは血清反応陰性ＳＬＥである、即ち、自己抗体によって特徴づけられない。従って、一例において、本開示の方法は、例えば、本明細書に記載されている自己抗体等、自己抗体の不在を検出することにより、血清反応陰性ＳＬＥを患う哺乳動物を同定するステップを更に含む。
【０２４５】
別の一例において、ＳＬＥは血清反応陽性ＳＬＥである。例えば、ＳＬＥは、抗核抗体（ＡＮＡ）、抗Ｃ１ｑ抗体、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体、抗Ｓｍ抗体、抗核リボヌクレオタンパク質抗体、抗リン脂質抗体、抗リボソームＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｒｏ抗体及び抗Ｌａ抗体等、自己抗体によって特徴づけられる。従って、一例において、本開示の方法は、例えば、本明細書に記載されている自己抗体等、自己抗体の存在を検出することにより、血清反応陽性ＳＬＥを患う哺乳動物を同定するステップを更に含む。
【０２４６】
自己抗体を検出するための方法は、当業者であれば理解できるであろう。例えば、被験体から得られた血清又は血漿試料を、抗体−抗原複合体が形成されるのに十分な時間及び条件下で抗原、例えばｄｓＤＮＡと接触させる。次に、その結果得られる複合体を、複合体が形成される時間及び条件下で、哺乳動物抗体（例えば、抗Ｆｃ抗体）と結合できる標識抗体と接触させ、標識の量を検出する。標識の検出は自己抗体の存在を示す。
【０２４７】
本明細書に記載されているいずれかの例における方法は、疾患若しくは状態を有する又は疾患若しくは状態の再発発症リスクがあることに基づいて、治療のための哺乳動物を選択するステップを更に含むことができる。このような状態及び疾患の具体例は、上述の通りである。
【０２４８】
例えば、ループスである又はループス発症若しくはその再発リスクのある個体は、自己抗体、例えば上述の自己抗体の検出に基づいて同定することができる。
【０２４９】
ＳＬＥの診断は、現在の米国リウマチ学会（ＡＣＲ）判断基準に追加的に又は代替的に従うことができる、及び／又は活動性疾患は、イギリス諸島ループス活動性グループ（British Isles Lupus Activity Group）（ＢＩＬＡＧ）の１つの「Ａ」判断基準若しくは２つのＢＩＬＡＧ「Ｂ」判断基準及び／又は欧州コンセンサスループス活動性基準（European Consensus Lupus Activity Measure）（ＥＣＬＡＭ）及び／又はループス活動性指数（Lupus Activity Index）（ＬＡＩ）及び／又は国立衛生研究所ＳＬＥ指数スコア（SLE Index Score）（ＳＩＳ）及び／又は全身性ループス活動性基準（Systemic Lupus Activity Measure）（ＳＬＡＭ）及び／又はＳＬＥ疾患活動性指数（SLE disease activity index）（ＳＬＥＤＡＩ）により定義することができる。Tanら、Arth Rheum 25、1982から適応されたＳＬＥの診断に用いられる一部の徴候、症状又は他の指標は、頬における発疹等の頬部発疹、円板状発疹又は紅斑（red raised patch）、皮膚発疹の発症又は増加をもたらす太陽光に対する反応等の光線過敏症、鼻又は口における潰瘍等の口腔潰瘍、２以上の末梢関節に関与する非びらん性関節炎（関節周りの骨が破壊されない関節炎）等の関節炎、漿膜炎、胸膜炎又は心膜炎、尿中の過剰なタンパク質（０．５ｇｍ／日を超える又はテストスティックで３＋）等の腎障害及び／又は細胞性円柱（尿及び／又は白血球及び／又は腎尿細管細胞に由来する異常要素）、神経学的徴候、症状若しくは他の指標、発作（痙攣）及び／又は薬物不在下の精神障害又はこのような効果の原因となることが知られている代謝障害並びに溶血性貧血若しくは白血球減少症（１立方ミリメートル当り４，０００細胞を下回る白血球数）若しくはリンパ球減少症（１立方ミリメートル当り１，５００未満のリンパ球）若しくは血小板減少症（１立方ミリメートル当り１００，０００未満の血小板）等の血液学的徴候、症状若しくは他の指標であり得る。白血球減少症及びリンパ球減少症は、２回以上の機会で検出されなければならない。血小板減少症は、それを誘導することが知られている薬物の不在下で検出されなければならない。本開示は、ループスのこれらの徴候、症状又は他の指標に限定されない。
【０２５０】
一例において、哺乳動物は、例えば、前述の基準のうち１又は複数により、重度のＳＬＥを患っていると診断されている。
【０２５１】
ループス再発を患うリスクのある哺乳動物もまた、前述の症状のうち１又は複数を提示する可能性があり、ループスの症状を以前に患ったことがある。或いは、又は更に、ループス再発を患うリスクのある哺乳動物は、ループスを以前に患ったことが知られており、エストロゲン療法及び／又はスルホンアミド薬及び／又はインターフェロンにより治療している。
【０２５２】
一例において、被験体は、シェーグレン（Sjorgen’s）症候群を患う。本明細書に記載されている各例は、シェーグレン症候群の治療に適宜変更して適用されると解釈するべきである。
【０２５３】
シェーグレン症候群は、自己抗体（例えば、抗核抗体（例えば、ＳＳＡ／Ｒｏ及びＳＳＢ／Ｌａ）、リウマトイド因子、アルファ−フォドリン及び／又は抗甲状腺抗体）、眼の乾き、唾液腺炎症及び／又は貧血を検出することにより診断することができる（或いは、シェーグレン症候群を患う被験体を選択できる）。
【０２５４】
一例において、シェーグレン症候群はループスを伴う、即ち、ループスを患う被験体において生じる。
【０２５５】
一例において、被験体は強皮症を患う。本明細書に記載されている各例は、強皮症の治療に適宜変更して適用されると解釈するべきである。
【０２５６】
一例において、強皮症は、限局性全身性強皮症（limited systemic scleroderma）又はびまん性全身性強皮症等、全身性強皮症である。
【０２５７】
強皮症は、自己抗体（例えば、抗トポイソメラーゼ抗体（びまん性全身性型の強皮症における）、抗セントロメア抗体（限局性全身性型の強皮症における）、抗Ｕ３抗体又は抗ＲＮＡポリメラーゼ抗体）、特に手指、足、顔及び首における皮膚のつっぱり又は皮膚の硬化を生じ得る皮膚の炎症の局所性又は広汎性徴候（発赤、腫れ、圧痛、そう痒及び疼痛）を検出することにより診断することができる（或いは強皮症を患う被験体を選択することができる）。種々の症状は、例えば、消化器系、肺及び血管にも生じ得る。
【０２５８】
一例において、強皮症はループスを伴う、即ち、ループスを患う被験体において生じる。
【０２５９】
一例において、哺乳動物は、この疾患又は状態の治療に用いられる別の化合物による治療に対し抵抗性である、それに対し適切に応答しない、或いはそれに不適である。例えば、哺乳動物は、コルチコステロイド及び／又は免疫抑制剤及び／又は抗マラリア剤及び／又はアザチオプリン及び／又はシクロホスファミド及び／又はミコフェノール酸モフェチル及び／又はメトトレキサート及び／又は抗ＴＮＦ抗体及び／又は抗ＣＤ２０抗体及び／又は抗ＩＬ６抗体及び／又は抗ＣＤ２２抗体による治療に対し抵抗性である、それに対し適切に応答しない、或いはそれに不適である。
【０２６０】
組成物
適宜、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンの哺乳動物への投与のための組成物又は方法において、免疫グロブリンは、本技術分野において理解される通り、医薬的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤と組み合わされる。従って、本開示の一例は、医薬的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤と組み合わせた抗ＩＬ．３Ｒａ免疫グロブリンを含む医薬組成物を提供する。別の一例において、本開示は、哺乳動物への投与前に免疫グロブリンと組み合わせる又は混合するのに適切な、医薬的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含むキットを提供する。この例において、キットは、使用のための説明書を更に含むことができる。
【０２６１】
一般用語において、「担体、希釈剤又は賦形剤」は、任意の哺乳動物、例えば、ヒトに安全に投与することのできる固体若しくは液体の充填剤、結合剤、希釈剤、カプセル封入物質、乳化剤、湿潤剤、溶媒、懸濁化剤、コーティング剤又は滑沢剤を意味する。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.米国ニュージャージー州、1991)に記載されている通り、特定の投与経路に依存して、本技術分野で公知の様々な許容される担体、希釈剤又は賦形剤を用いることができる。
【０２６２】
ほんの一例として、担体、希釈剤又は賦形剤は、糖（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース）、澱粉、セルロース及びその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油及び合成モノ又はジグリセリドを含む油、低級アルコール、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝溶液、ステアリン酸ナトリウム又はマグネシウム等の滑沢剤、等張性生理食塩水並びに発熱物質不含水を含む群から選択することができる。例えば、担体、希釈剤又は賦形剤は、非経口投与に適合性又は適切である。非経口投与は、消化管を通らない任意の投与経路を含む。非経口投与の非限定的な例として、注射、注入等が挙げられる。具体例として、注射による投与として、静脈内、動脈内、筋肉内及び皮下注射が挙げられる。例えば、皮内、筋肉内及び皮下送達され得るデポー剤又は徐放性製剤による送達もまた企図される。
【０２６３】
併用療法
一例において、ＩＬ−３Ｒａと結合する免疫グロブリンは、組み合わせて、或いは追加的な治療ステップ又は治療用製剤の追加的な成分として、疾患又は状態、例えば、ループス（ＳＬＥ等）の治療に有用な別の化合物と組み合わせて投与される。
【０２６４】
例えば、他の化合物は抗炎症性化合物である。或いは、又は更に、他の化合物は、免疫抑制剤である。或いは、又は更に、他の化合物は、プレドニゾン及び／又はプレドニゾロン等、コルチコステロイドである。或いは、又は更に、他の化合物は、ヒドロキシクロロキン又はクロロキニン等、抗マラリア化合物である。或いは、又は更に、他の化合物は、メトトレキサートである。或いは、又は更に、他の化合物は、アザチオプリンである。或いは、又は更に、他の化合物は、シクロホスファミドである。或いは、又は更に、他の化合物は、ミコフェノール酸モフェチルである。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ又はオファツムマブ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＣＤ２２抗体（例えば、エプラツズマブ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブ又はアダリムマブ又はゴリムマブ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、アバタセプト、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＩＬ−６抗体である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＢＬｙｓ抗体（例えば、ベリムマブ）等、ＢＬｙｓアンタゴニストである。
【０２６５】
投薬量及び投与のタイミング
疾患若しくは状態又はその再発の予防若しくは治療のため、活性薬剤（即ち、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリン）の適切な投薬量は、治療される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、免疫グロブリンが予防目的で投与されるのか治療目的で投与されるのか、以前の治療法、患者の臨床歴及び免疫グロブリンに対する応答性並びに主治医の裁量に依存するであろう。特定の投薬レジメン、即ち、用量、タイミング及び反復は、特定の個体及び医師に評価される該個体の病歴に依存するであろう。通常、臨床医は、投薬量が所望の結果を得られる量に達するまで免疫グロブリンを投与するであろう。
【０２６６】
本開示の方法は、哺乳動物におけるループス（例えば、ＳＬＥ）等、疾患又は状態の症状の治療、寛解又は予防に、或いは哺乳動物の予後の改善に有用である。免疫グロブリンによる治療後に、ループスを患う哺乳動物におけるクオリティオブライフを改善することができ、ループスの症状を低下又は排除することができる。本開示の方法は、ループス発症又はその再発リスクのある個体におけるループスの発症遅延又は予防にも有用である。
【０２６７】
本明細書に記載されている免疫グロブリンのｉｎ ｖｉｖｏ投与のため、正常な投薬量は、１日間当り約１０ｎｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇ（個体体重）又はそれ以上に変動し得る。例示的な投薬量及びその範囲は、本明細書に記載されている。数日間以上に亘る反復投与のため、治療される疾患又は障害の重症度に応じて、治療は、所望の症状抑制が達成されるまで持続することができる。
【０２６８】
一部の例において、免疫グロブリンは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、或いは約２ｍｇ／ｋｇ又は約３ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ等、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の初期（又は負荷（loading））量で投与される。次に、免疫グロブリンは、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．４ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ等、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの間の維持量で投与することができる。維持量は、１０〜１５日毎、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日毎等、７〜３０日毎に投与することができる。
【０２６９】
一部の例において、免疫グロブリンは、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間等、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇの間、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇの間等、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの間、の用量で投与される。例えば、免疫グロブリンは、約０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．４ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ等、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの間の用量で（例えば、より高い負荷量なしで）投与される。一部の例において、例えば、１０〜２２日毎、例えば、１０〜１５日毎、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日又は１６日又は１７日又は１８日又は１９日又は２０日又は２１日又は２２日毎等、７〜３０日毎に多数の用量が投与される。例えば、免疫グロブリンは、７日毎又は１４日毎又は２１日毎に投与される。
【０２７０】
一部の例において、免疫グロブリンは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ又は約２ｍｇ／ｋｇ又は約３ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ等、或いは、約１０ｍｇ／ｋｇ又は１５ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ又は２５ｍｇ／ｋｇ等、約１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ等、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で（例えば、より低い維持量なしで）投与される。一部の例において、例えば、１４〜６０日毎等、１４〜７０日毎等、１０〜７０日毎、例えば、１４〜４０日毎又は１４〜３０日毎等、１４〜５０日毎に多数の用量が投与される。例えば、用量は、１４日又は２１日又は２５日又は２８日又は３５日又は４０日又は４２日又は４９日又は５０日又は５５日又は５７日又は６３日又は又は７０日毎に投与される。例えば、免疫グロブリンは、２１日毎又は２８日毎又は３５日毎又は４２日毎又は４９日毎又は５６日毎に投与される。
【０２７１】
一部の例において、治療開始時に、哺乳動物は、７日間連続又は６日間連続又は５日間連続又は４日間連続以下で免疫グロブリンを投与される。
【０２７２】
治療に対し適切に応答しない哺乳動物の場合、１週間に複数回の用量を投与することができる。或いは、又は更に、増加した用量を投与することができる。
【０２７３】
別の一例において、有害反応を経験している哺乳動物のため、初期（又は負荷）量を１週間の多数の日に、或いは多数の連続日に分割することができる。
【０２７４】
特定の免疫グロブリンの投薬量は、免疫グロブリンの１又は複数の投与をなされた哺乳動物において経験的に決定することができる。免疫グロブリンの有効性を評価するため、疾患又は状態、例えば、ループス（ＳＬＥ等）の臨床症状をモニターすることができる。
【０２７５】
本開示の方法における免疫グロブリンの投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与目的が治療であるか予防であるかということ、及び当業者にとって公知の他の要因に応じて、継続的であっても間欠的であってもよい。免疫グロブリンの投与は、前選択された期間に亘り基本的に継続的であっても、例えば、ループス（ＳＬＥ等）の発症中又は発症後におけるいずれかの一連の間隔を置いた（spaced）用量であってもよい。
【０２７６】
一例において、免疫グロブリンは、ＳＬＥの重症度を評価するスコア、例えば、ＢＩＬＡＧ判断基準及び／又はＥＣＬＡＭ及び／又はＬＡＩ及び／又はＳＩＳ及び／又はＳＬＡＭ及び／又はＳＬＥＤＡＩの低下を達成するよう投与される。例えば、免疫グロブリンによる治療は、ＢＩＬＡＧ及び／又はＳＬＥＤＡＩに従った１又は２又は３ポイントの低下を達成する。例えば、治療開始後１５週間又は治療開始後３０週間又は治療開始後５２週間まで低下は達成される。例えば、効果は、治療開始後約２０週間又は３０週間又は４０週間又は５０週間持続する。
【０２７７】
非限定的な実施例
実施例に用いた抗体命名法は、次の通りである。（ｉ）抗ＩＬ−３Ｒａマウスモノクローナル抗体（７Ｇ３と称する）、（ｉｉ）７Ｇ３とヒトＩｇＧ１定常ドメインとのキメラバージョン（ｃｈ７Ｇ３と称する）、（ｉｉｉ）７Ｇ３のヒト化ＩｇＧ１バージョン（ｈｚ７Ｇ３と称する）、（ｉｖ）Ｘｅｎｃｏｒ Ｖ９０、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ１／Ｇ２ Ｆｃ改変を含有する７Ｇ３のヒト化バージョン（ｈｚ７Ｇ３Ｖ１と称する）、（ｖ）Ｘｅｎｃｏｒ Ｖ２０９、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ Ｇ１／Ｇ２ Ｆｃ改変を含有する７Ｇ３のヒト化バージョン（ｈｚ７Ｇ３Ｖ２と称する）及び（ｖｉ）フコシル基転移酵素欠損ＣＨＯ細胞系を用いて産生されたｈｚ７Ｇ３のアフコシル化バージョン（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３と称する）。
【実施例１】
【０２７８】
ＩＬ−３Ｒａの発現
標準技法を用いてヒトからＰＢＭＣを同定し、系列特異的細胞表面マーカーと結合する抗体を用いて種々の細胞系列を単離した。Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、系列毎の細胞当りのＩＬ−３Ｒａ分子の数を決定した。図１に示す通り、ＩＬ−３Ｒａは、ｐＤＣ及び好塩基球において高度に発現し、検査した他の細胞系列においては低レベルであった。この限定的な発現パターンにより、ＩＬ−３Ｒａは、ｐＤＣ及び好塩基球を選択的に排除するよう設計された抗体に対して有用な標的となる。
【実施例２】
【０２７９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトｐＤＣの抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂ欠乏化
Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離により正常ドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳにおいて抗体なしで（抗体なし）、或いは１０μｇ／ｍｌ抗ｃｈ７Ｇ３又は１０μｇ／ｍｌ抗ｈｚ７Ｇ３Ｖ３と共に３７℃で種々の時間インキュベートした。９６ウェルＵ字底プレートにおいて２００μＬ容量で１×１０６細胞をルーチンに培養した。形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）数及び好塩基球数の解析をフローサイトメトリーにより決定した（それぞれ表１及び２）。フローサイトメトリーにより系列マーカー陰性（ＣＤ２０−、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９− ＣＤ５６−）、ＨＬＡ−ＤＲ陽性、ＣＤ１１ｃ陰性及びＩＬ−３Ｒａ陽性であるとしてヒトｐＤＣを同定した（フロー図におけるゲートボックス（gated box）を参照）。フローサイトメトリーにより、ヒト好塩基球を系列マーカー陰性（ＣＤ２０−、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９− ＣＤ５６−）、ＩｇＥ陽性及びＩＬ−３Ｒａ陽性であるとして同定した。Ｆｃ−ドメインに修飾を含有する抗ＩＬ−３Ｒａ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）は、早くも添加４時間後にＰＢＭＣからｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化させ、ｐＤＣ及び好塩基球欠乏化を添加最大４８時間後まで維持した。エフェクター機能増強なしの抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｃｈ７Ｇ３）の添加は、添加２４時間後及び４８時間後に観察されたｐＤＣ数減少をもたらした。しかし、観察された効果は、実質的にｈｚ７Ｇ３Ｖ３で観察された効果に満たず、４８時間ではｐＤＣを実質的に完全には欠乏化しなかった。
【０２８０】
【表１】
【０２８１】
【表２】
【実施例３】
【０２８２】
非ヒト霊長類におけるＩｎ ｖｉｖｏでの抗ＩＬ−３ＲａによるｐＤＣ及び好塩基球欠乏化
オーストラリア国立霊長類センター（Australian National Primate Facility）にて、その標準操作手順に従って非ＧＬＰカニクイザルの非ヒト霊長類（ＮＨＰ）試験を行った。全プロトコール及びその修正は、動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）によって承認された。Ｆｃ−ドメインに抗体エフェクター機能を増強する改変を有する中和抗ＩＬ−３Ｒａ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）を、静脈内注入により未処理（naive）サルに単一用量投与した。種々の時点にて末梢血を採取し、ＮＨＰ好塩基球及びｐＤＣの解析をフローサイトメトリーにより行った。フローサイトメトリーにより、ＮＨＰ好塩基球をＩｇＥ＋／ＣＤ１２３陽性として同定した。フローサイトメトリーにより、ｐＤＣを系列マーカー陰性（ＣＤ２０−、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ５６−）、ＨＬＡ−ＤＲ陽性、ＣＤ１１ｃ陰性及びＩＬ−３Ｒａ陽性として同定した。
【０２８３】
ｈｚ７Ｇ３Ｖ３の投与は、全用量において、抗体投与後６時間もの早さで、末梢血における好塩基球及びｐＤＣ数を相当に低下させたことが明らかになった。この低下は、１１日目（好塩基球）又は１５日目（ｐＤＣ）のいずれかにおける両方の細胞型の用量依存性回復（return）前に８日間に亘り持続した（図２）。
【０２８４】
検査したその他の細胞型（好中球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球及び赤血球等）における有意な低下は、いずれの用量においてもサルに関しては観察されず、有害事象は観察されなかった。これらのデータは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３がｉｎ ｖｉｖｏで投与されるとｐＤＣ及び好塩基球を選択的に欠乏化させること、また、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３がこの系から排除されるとｐＤＣ及び好塩基球集団が回復できることを示す。
【実施例４】
【０２８５】
抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂのＡＤＣＣ活性のＩｎ ｖｉｔｒｏ比較
陰性選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）をメーカーによって詳述されている通りに用いて、２種の健常なバフィーコートからヒトｐＤＣ及びＮＫ細胞を単離した。１０μｇ／ｍｌの種々のバージョンの抗ＩＬ−３Ｒａ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ１、ｈｚ７Ｇ３Ｖ２及びｈｚ７Ｇ３Ｖ３）の存在下で、９６ウェルＵ字底プレートにおいて、最終容量１５０μＬ中に１０：１のＥ：Ｔ比でＮＫ細胞（エフェクター「Ｅ」＝１００，０００細胞）及びｐＤＣ（標的「Ｔ」＝１０，０００細胞）を共にインキュベートした。ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳにおける３７℃４時間インキュベーションの後、自己溶解（ｐＤＣ１−ＮＫｌ、ｐＤＣ２−ＮＫ２）及び同種異系間溶解（ｐＤＣ１−ＮＫ２、ｐＤＣ２−ＮＫ１）を試験した。ＬＤＨ ＣｙｔｏＴｏｘ ９６非放射性細胞傷害性キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞溶解を測定した。
【０２８６】
次の計算により特異的溶解を決定した：
特異的溶解＝［試料溶解−自発的溶解］／［最大の溶解 自発的溶解］×１００％
【０２８７】
最大の溶解は、終濃度０．７５％（ｖ／ｖ）となるようＥｘｔｒａｎ（商標）を添加することにより評価した。自発的溶解は、細胞単独（Ａｂなし）でウェル内で生じる溶解である。
【０２８８】
ＡＤＣＣ能力増強のために操作された抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂでは、抗ＩＬ−３Ｒａ抗体ｈｚ７Ｇ３と比較してｐＤＣ溶解の有意なレベルが観察された（図３）。
【実施例５】
【０２８９】
抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂによるインターフェロン産生の阻害
正常ドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、抗体なし（０μｇ／ｍｌ）、増加用量（１、１０又は１００μｇ／ｍｌ）の抗ＩＬ−３Ｒ抗体ｈｚ７Ｇ３又はＦｃ−ドメインに抗体エフェクター機能を増強する改変を含有する抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３及びｈｚ７Ｇ３Ｖ１）と共に３７℃で１８時間インキュベートした。Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド（５μＭ）を添加して、形質細胞様樹状細胞を活性化した。活性化６時間後又は２４時間後のいずれかに上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮａ産生に関してアッセイした。図４に示す通り、抗体ｈｚ７Ｇ３の添加は、ＩＦＮａ産生の僅かな低下をもたらし、この効果は、抗体用量増加によって影響を受ける様子はなかった。対照的に、Ｆｃ−ドメインに修飾を含有する抗ＩＬ−３Ｐｖ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３及びｈｚ７Ｇ３Ｖ１）の添加は、全用量の抗体で活性化６時間後及び２４時間後の両方においてＰＢＭＣからＩＦＮａ産生を相当に低下させた。
【０２９０】
更なる試験において、正常ドナーからＰＢＭＣを単離し、抗体なし又は増加用量のｈｚ７Ｇ３Ｖ３又はアイソタイプ対照抗体と共に３７℃で１８時間インキュベートした。Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド（５μＭ）を添加して、ｐＤＣを活性化させた。活性化２４時間後に上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮｙ産生に関してアッセイした。ｈｚ７Ｇ３Ｖ３の添加は、ＰＢＭＣからＩＦＮａ産生を相当に低下させた。ｈｚ７Ｇ３Ｖ３によるｐＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ欠乏化は、ＴＬＲ−７／９リガンド、ＣｐＧで処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮａ産生の阻害と相関する（図５）。ＰＢＭＣへのＣｐＧの添加は、主にＴＬＲ−７／９アゴニストであるクロマチン成分を含有する、ＳＬＥ免疫複合体と同様の様式でＩＦＮａ産生を誘導する。これらのデータは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３が、末梢血細胞においてＴＬＲ−７／９アゴニストによって誘導されたＩＦＮａの供給源を効果的に排除できることを示す。データは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３の標的とならない末梢血中の他の細胞型が、ＴＬＲ−７／９刺激に対する応答におけるＩＦＮａ産生に関してｐＤＣの減少を相殺できないことも示す。
【０２９１】
更なる試験を行って、ＩＦＮａレベルの細胞欠乏化の効果を決定した。正常ドナーからＰＢＭＣを単離し、抗体なし（０μｇ／ｍｌ）、Ｆｃ−ドメインに抗体エフェクター機能を増強する改変を含有する中和抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）又は該抗体のＦａｂ領域（ｈｚ７Ｇ３ Ｆａｂ）の増加用量と共に３７℃で１８時間インキュベートした。Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド（５μＭ）を添加して、ｐＤＣを活性化させた。活性化６時間後又は２４時間後に上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮａ産生に関してアッセイした。図６に示す通り、エフェクター機能を欠く中和抗ＩＬ−３Ｒ Ｆａｂ（ｈｚ７Ｇ３ Ｆａｂ）の添加は、ＩＦＮａ産生を低下させないが、Ｆｃ−ドメインに改変を含有する抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）の添加は、活性化６時間後及び２４時間後の両方でＰＢＭＣにおけるＩＦＮａ産生を完全に阻害した。
【０２９２】
本明細書において参照されている各特許及び科学文書の開示、コンピュータプログラム及びアルゴリズムは、その全体を参照により本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【技術分野】
【０００１】
関連出願のデータ
本願は、２０１０年８月１７日に出願された標題「Compositions and Methods for Targeting type I Interferon-Producing Cells」の米国特許出願第６１／３７４，４９７号明細書、２０１０年８月１７日に出願された標題「Humanized Anti-Interleukin 3 Receptor Alpha Chain Antibodies」の米国特許出願第６１／３７４，４８９号明細書及び２０１０年２月１７日に出願された標題「Treatment of Chronic Inflammatory Conditions」の米国特許出願第１２／７０７，２９７号明細書に対する優先権を主張するものである。これら出願の全内容は、これにより参照により本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【０００２】
分野
本開示は、炎症性疾患の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
サイトカインのインターフェロン（ＩＦＮ）ファミリーは、Ｉ型及びＩＩ型両方のサブグループを含む。Ｉ型サブグループは、ＩＦＮａ、ＩＦＮＰ、ＩＦＮω、ＩＦＮＫ及びＩＦＮｘから構成され、ＩＩ型サブグループは、ＩＦＮｙによって表される。Ｉ型ＩＦＮは、ポリクローナルＴ細胞応答の刺激、アイソタイプスイッチ、クラスＩ主要組織適合抗原（ＭＨＣ）分子の発現及び樹状細胞（ＤＣ）分化の誘導等、複数の免疫調節効果を有する。Ｉ型ＩＦＮは、マクロファージ及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の両方を刺激して抗ウイルス応答を誘発し、また、腫瘍に対し活性を有する。Ｉ型ＩＦＮは、視床下部における温度感受性ニューロンの活性を変化させることにより発熱させる発熱性因子としても作用する。Ｉ型ＩＦＮ系の特色は、活発な抗ウイルス免疫応答の開始を確実にする、シグナル伝達経路の迅速な誘導及び増幅である。
【０００４】
しかし、このような経路は、迅速なウイルス根絶には非常に効果的であるが、この増幅は、宿主組織に対する免疫応答において適応不全となり、自己免疫疾患を生じ得る。例として、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ及び糸球体腎炎が挙げられる。
【０００５】
ＳＬＥとは、免疫欠損により、自己抗体産生とそれに続く皮膚、腎臓、血液、脳及び関節等、複数の臓器における炎症及び／又は組織損傷がもたらされる慢性自己免疫疾患である。疾病経過は、慢性的に活動性、再発及び寛解又は長期寛解となり得る。ＳＬＥは、ＩＦＮａ等のＩ型ＩＦＮを含む多くのサイトカインのレベル上昇によって特徴づけられる。
【０００６】
ＳＬＥにおけるＩＦＮａの役割のエビデンスは、ＳＬＥ患者から得られた血清が、正常な哺乳動物から得られた単球のＤＣ成熟化を誘導したことを示す数例のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験において立証されている。このように、ＳＬＥ患者から得られた血清は、正常な静止状態の単球が免疫応答誘導可能な抗原提示細胞となるよう誘導することができた。更に、マウスのＳＬＥモデル（ＮＺＢマウス）におけるＩＦＮＡＲ１（Ｉ型ＩＦＮ受容体のａ鎖）発現の抑制は、溶血性貧血を抑制し、糸球体腎炎を抑制した。
【０００７】
臨床的には、活動性ＳＬＥ患者は、多くの場合、血清中Ｉ型ＩＦＮレベルが上昇しており、このレベルは疾患活動性と正の相関を有する。ＳＬＥにおけるＩＦＮａの推定的な役割の更なる臨床エビデンスは、ＩＦＮａ治療を行った非ＳＬＥ患者が、時に自己抗体及びＳＬＥと一致した臨床症状を発症するとの観察から得られる。
【０００８】
Ｉ型インターフェロンは、リンパ球（ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）、マクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞、骨芽細胞並びに特定の樹状細胞等、多くの細胞型によって産生される。形質細胞様樹状細胞（plasmacytoid dendric cell）（ｐＤＣ）は、外来抗原に応答する最も強力なＩ型ＩＦＮ産生細胞として同定された。ｐＤＣは、血液と、Ｉ型インターフェロン供給源である末梢リンパ器官とに存在する循環樹状細胞のサブタイプである。ヒトｐＤＣは通常、表面マーカー、ＩＬ−３受容体ａ鎖（ＩＬ−３Ｒａ、ＣＤ１２３）、ＢＤＣＡ−２（ＣＤ３０３）及びＢＤＣＡ−４（ＣＤ３０４）を発現するが、ＣＤ１１ｃ又はＣＤ１４を発現せず、この特徴により、この細胞はそれぞれ通常型の樹状細胞又は単球から区別される。刺激とそれに続く活性化により、ｐＤＣは、大量のＩ型インターフェロン（主としてＩＦＮ−ａ及びＩＦＮ−β）を産生する。
【０００９】
ＳＬＥ等、Ｉ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患におけるＩＦＮａの明確な役割から、このサイトカインの作用を中和する抗体又は可溶性ＩＦＮＡＲタンパク質は、治療アプローチ候補として探求されている。
【００１０】
ＳＬＥ等、Ｉ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患の治療に提案される代替的なアプローチは、Ｉ型インターフェロン発現細胞によって発現された細胞表面分子と結合する化合物を用いることである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
自己免疫疾患の治療に関して試験されてきた化合物の一クラスに、毒素とコンジュゲートした抗体由来の単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む免疫毒素がある。このような化合物は、ＩＬ−３Ｒａ発現細胞の殺傷に有用であると示唆されてきた。しかし、このような分子は、多くの不利益を伴う。例えば、免疫毒素は、肝臓及び腎臓に損傷を生じることが知られている。ｓｃＦｖとコンジュゲートした小サイズ毒素は、この免疫毒素が腎臓により迅速に排出されてこの臓器の損傷を更に増悪させること、この免疫毒素が利益をもたらすのに十分な時間身体に保持できないことも意味する。更に、毒素成分は一般に非ヒトであり、これは、患者における免疫応答を誘導し得ることを意味する。この免疫応答は、分子を中和する可能性がある。従って、このような免疫毒素は、慢性自己免疫疾患の治療に必要とされ得る複数の治療に適用できない。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
要旨
従来の一部のアプローチに反して、本発明者らは、Ｉ型ＩＦＮ受容体及び／又はＩＦＮ−ａの遮断が、Ｉ型ＩＦＮの正の抗ウイルス効果が失われるのを回避するのに十分な特異性を持たない可能性があることを理解した。その代わりに、本発明者らは、ｐＤＣ及び好塩基球等、ＩＬ−３応答性細胞におけるＩＬ−３活性の低下若しくは阻害及び／又はＩＬ−３応答性細胞の欠乏化若しくは排除に着目した。本発明者らは、ＩＬ−３Ｒａに対する免疫グロブリンを活用して、ｐＤＣ及び好塩基球等、ＩＬ−３応答性細胞におけるＩＬ−３の活性を低下又は阻害した（即ち、ＩＬ−３シグナル伝達を中和した）。しかし、本発明者らは、ＩＬ−３シグナル伝達のみを中和する免疫グロブリンは、ＩＦＮａレベルを十分に低下させて治療上の利益をもたらす可能性が低いことを見出した。従って、本発明者らは、哺乳動物の免疫系を更に誘導できる免疫グロブリンを活用して、ＩＬ−３応答性細胞（例えば、ｐＤＣ及び好塩基球）を少なくとも部分的に欠乏化又は排除して、これによりＩ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患及びｐＤＣ及び好塩基球に関連する状態、例えばループス（狼瘡（lupus））を治療した。ＩＬ−３応答性細胞におけるＩＬ−３活性の低下又は阻害と、ＩＬ−３応答性細胞の少なくとも部分的な欠乏化又は排除の両方が可能な免疫グロブリンを用いることにより、本発明者らは、ＩＦＮａレベルをｉｎ ｖｉｔｒｏで低下させることができた。ＩＬ−３応答性細胞を少なくとも部分的に欠乏化又は排除するために哺乳動物の免疫系を用いることにより、毒素使用とそれに伴う負の効果の回避が可能となった。
【００１３】
ｐＤＣが、炎症性疾患におけるＩ型ＩＦＮの唯一の供給源ではないが、Ｉ型ＩＦＮの重要な供給源であることを考慮し、本発明者らは、本開示に提示されている方法が、Ｉ型ＩＦＮ受容体及び／又はＩＦＮ−ａを標的とする方法よりもＩ型ＩＦＮの正の効果を打ち消す可能性の低い、より正確で標的化された治療アプローチを提供すると考えた。具体的なＩ型ＩＦＮ依存性炎症性疾患は、ループス、例えばＳＬＥである。
【００１４】
本発明者らは、増強された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）誘導能を有する免疫グロブリンが、ＩＦＮａ産生及び／又は循環ｐＤＣ及び好塩基球の数を低用量で低下できることも見出した。本発明者らは、これらの効果が投与後数日間持続し、効果の長さが用量依存性であることも見出した。
【００１５】
本発明者らは、ｐＤＣ及び好塩基球数が、免疫グロブリン投与後に回復することも見出したが、この結果は、治療後に哺乳動物の免疫応答（例えば、ウイルスに対する）も回復することを意味する。
【００１６】
本開示は、哺乳動物におけるループスを治療する方法を提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合してＩＬ−３シグナル伝達を中和し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、ループスはＳＬＥである。
【００１７】
本開示は、哺乳動物におけるループスを治療する方法を追加的に又は代替的に提供し、上記の方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと結合し、ＩＬ−３シグナル伝達を中和する。一例において、ループスはＳＬＥである。
【００１８】
本開示は、哺乳動物におけるループスを治療する方法を追加的に又は代替的に提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと結合してＩＬ−３シグナル伝達を中和する。一例において、ループスはＳＬＥである。
【００１９】
本開示はまた、哺乳動物におけるシェーグレン症候群を治療する方法を提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合し、ＩＬ−３シグナル伝達を中和及び／又はモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるシェーグレン症候群を治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。
【００２０】
本開示はまた、哺乳動物における強皮症を治療する方法を提供し、上記方法は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合し、ＩＬ−３シグナル伝達を中和及び／又はモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害し、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物における全身性強皮症を治療する免疫グロブリンであって、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む。一例において、強皮症は全身性強皮症である。
【００２１】
更に別の一例において、本開示は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合する免疫グロブリンと、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む、本開示の上述の例に従って用いるための医薬組成物を提供する。例示的な免疫グロブリンは、本明細書に記載されており、本開示のこの例に適用される。一例において、免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない。一例において、免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合するｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除する。一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと結合してＩＬ−３シグナル伝達を中和する。一例において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害する。
【００２２】
更にまた別の一例において、本開示は、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合する免疫グロブリンと、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と、キット使用のための説明書とを含む、本開示の上述の例に従って用いるためのキットを提供する。ＩＬ−３Ｒａと結合する例示的な免疫グロブリンは、本明細書に記載されており、本開示のこの例に適宜変更して適用するべきである。
【００２３】
一例において、本方法は、哺乳動物におけるＩＬ−３シグナル伝達の中和並びにｐＤＣ及び好塩基球の欠乏化又は少なくとも部分的な排除に有効な量の免疫グロブリンを投与するステップを含む。
【００２４】
一例において、ＩＬ−３Ｒａは、１又は複数のＩ型インターフェロンを産生するｐＤＣにより発現される。従って、一例において、免疫グロブリンは、１又は複数のＩ型インターフェロンを産生するｐＤＣ上のＩＬ−３Ｒａと結合する。
【００２５】
一例において、ＩＬ３Ｒａ鎖は、１又は複数のサイトカインを産生する好塩基球により発現される。従って、一例において、免疫グロブリンは、１又は複数のサイトカインを産生する好塩基球上のＩＬ−３Ｒａと結合する。
【００２６】
一例において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３と同じエピトープと結合する。
【００２７】
別の一例において、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３によって結合されたエピトープと重複するエピトープと結合する。
【００２８】
一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａと特異的に結合する。
【００２９】
一例において、免疫グロブリンは、そのままの（naked）免疫グロブリンである。
【００３０】
本開示により企図される例示的な免疫グロブリンは、抗体及びその抗原結合性フラグメントである。
【００３１】
一例において、免疫グロブリンは全長抗体である。
【００３２】
一例において、免疫グロブリンは、キメラ免疫グロブリン、例えば、キメラ抗体又はその抗原結合性フラグメントである。例えば、キメラ抗体は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス）によって産生された抗体に由来する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）並びにヒト由来の定常領域を含む。一例において、キメラ抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３由来の可変領域を含む。
【００３３】
別の一例において、免疫グロブリンは、ヒト化免疫グロブリン、例えば、ヒト化抗体又はその抗原結合性フラグメントである。一例において、ヒト化抗体又はその抗原結合性フラグメントは、モノクローナル抗体７Ｇ３のヒト化型又はその抗原結合性フラグメントである。例えば、ヒト化抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一例において、ヒト化抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３のＶＨのＣＤＲを含む。追加的な又は代替的な一例において、ヒト化抗体は、モノクローナル抗体７Ｇ３のＶＬのＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに１又は複数のアミノ酸置換を含むモノクローナル７Ｇ３のＣＤＲ１を含む。一例において、ヒト化抗体は、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。
【００３４】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、ヒト抗体又はその抗原結合性フラグメント等、ヒト免疫グロブリンである。
【００３５】
本開示により企図されている例示的な抗原結合性フラグメントとして、次のものが挙げられる。
（ｉ）ドメイン抗体（ｄＡｂ）；
（ｉｉ）Ｆｖ；
（ｉｉｉ）ｓｃＦｖ又はその安定化型（例えば、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖ）；
（ｉｖ）二量体ｓｃＦｖ又はその安定化型）；
（ｉｖ）二重特異性抗体（diabody）、三重特異性抗体（triabody）、四重特異性抗体（tetrabody）又はより高次の多量体；
（ｖ）Ｆａｂフラグメント；
（ｖｉ）Ｆａｂ’フラグメント；
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）フラグメント；
（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；
（ｉｘ）抗体のＦｃ領域と融合した（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のうちいずれか１種；
（ｘ）免疫エフェクター細胞と結合する抗体又はその抗原結合性フラグメントと融合した（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のうちいずれか１種
【００３６】
当業者であれば本明細書における開示から理解できると思われるが、例示的な免疫グロブリンは、毒性化合物とコンジュゲートしていなくても、免疫グロブリンが結合する細胞を欠乏化又は少なくとも部分的に排除することができる。
【００３７】
一例において、免疫グロブリンは、細胞にアポトーシスを行わせる。
【００３８】
一例において、免疫グロブリンは、エフェクター機能、例えば、免疫グロブリンが結合する細胞の殺傷をもたらすエフェクター機能を誘導することができる。例示的なエフェクター機能は、ＡＤＣＣ、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含む。
【００３９】
一例において、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣを誘導することができる。
【００４０】
一例において、免疫グロブリンは、エフェクター機能を誘導することのできる抗体Ｆｃ領域を含む。例えば、エフェクター機能は、ＦＣ介在性エフェクター機能である。一例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域又はＩｇＧ３ Ｆｃ領域又はハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。
【００４１】
一例において、免疫グロブリンは、野生型ヒトＩｇＧ１及び／又はヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域と類似（例えば、有意差がない又は約１０％以内である）又は同一レベルのエフェクター機能を誘導することができる。
【００４２】
一例において、免疫グロブリンは、本明細書に記載されているｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３と類似（例えば、有意差がない又は約１０％以内である）又は同一レベルのエフェクター機能を誘導することができる。
【００４３】
一例において、免疫グロブリンは、増強されたレベルのエフェクター機能を誘導することができる。
【００４４】
一例において、免疫グロブリンにより誘導されたエフェクター機能のレベルは、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む場合の免疫グロブリンのレベルと比べて増強されている。
【００４５】
一例において、エフェクター機能は、本明細書に記載されているｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３の機能と比べて増強されている、或いはそれを超える。
【００４６】
一例において、免疫グロブリンは、アフコシル化（afucosylated）されている、或いはアフコシル化されたＦｃ領域を含む。
【００４７】
別の一例において、免疫グロブリンは、タンパク質フコシル化レベルが低下するよう変化させられていないヒト又はＣＨＯ細胞により産生された免疫グロブリンと比べて、より低レベルのフコシル化を有する。この例と一致して、より低レベルのフコシル化とは、免疫グロブリンを含む組成物において、フコシル化免疫グロブリン（例えば、フコースを含む、抗体のＡｓｎ２９７と結合したグリコシル基）のパーセンテージが、タンパク質フコシル化レベルを低下するよう変化させられていないヒト又はＣＨＯ細胞により産生されるものよりも低いことを意味すると理解されるであろう。
【００４８】
一例において、免疫グロブリンは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３である。例えば、免疫グロブリンは、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むアフコシル化ヒト化抗体である。例えば、免疫グロブリンは、配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号４に記述されている配列を含む重鎖とを含むアフコシル化ヒト化抗体である。
【００４９】
一例において、免疫グロブリンは、検出可能レベルのａ−１，６−フコシル基転移酵素（ＦＵＴ８）を発現しない（或いは、その低レベルを発現する）哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）によって発現された、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むヒト化抗体である。一例において、免疫グロブリンは、検出可能レベルのａ−１，６−フコシル基転移酵素（ＦＵＴ８）を発現しない（或いはその低レベルを発現する）哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）によって発現された、配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号４に記述されている配列を含む重鎖とを含むアフコシル化ヒト化抗体である。
【００５０】
一例において、免疫グロブリンは、免疫グロブリンにより誘導されるエフェクター機能を増強する１又は複数のアミノ酸配列置換を含むＦｃ領域を含む。例えば、１又は複数のアミノ酸配列置換は、置換を含まないＦｃ領域と比較してＦｃ領域のＦｅｙ受容体（ＦｃｙＲ）に対する親和性を増加させる。例えば、１又は複数のアミノ酸置換は、置換を含まないＦｃ領域と比較してＦｃ領域の、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩａ、ＦｃｙＲＩＩｃ及びＦｃｙＲＩＩＩａからなる群から選択されたＦｃｙＲに対する親和性増加を増強する。一例において、１又は複数のアミノ酸配列置換は、
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ；又は
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
である。
【００５１】
例えば、免疫グロブリンは、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むヒト化抗体であり、該抗体は、
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ；又は
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
である１又は複数のアミノ酸配列置換を含むＦｃ領域を含む。
【００５２】
一例において、免疫グロブリンは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ１及びｈｚ７Ｇ３Ｖ２からなる群から選択される。例えば、免疫グロブリンは、配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号６に記述されている配列を含む重鎖とを含む（ｈｚ７Ｇ３Ｖ１）、或いは配列番号５に記述されている配列を含む軽鎖と、配列番号７に記述されている配列を含む重鎖とを含む（ｈｚ７Ｇ３Ｖ２）抗体である。
【００５３】
一例において、哺乳動物に免疫グロブリンを投与した後、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。
【００５４】
例えば、哺乳動物に免疫グロブリンを投与してから少なくとも約６時間後、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。
【００５５】
例えば、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを更に投与せずに投与後少なくとも７日間、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。例えば、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを更に投与せずに投与後少なくとも８日間又は１０日間又は１１日間又は１５日間又は２０日間又は２１日間又は２２日間又は２８日間又は３５日間又は４２日間又は４９日間又は５０日間又は５７日間又は６０日間又は６３日間又は７０日間、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％低下する。
【００５６】
例えば、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比べて少なくとも約５０％＞又は５５％又は６０％＞又は６５％又は７０％＞又は７５％又は８０％又は８５％又は９０％又は９５％又は９６％又は９７％又は９８％又は９９％低下する。
【００５７】
一例において、方法は、治療上有効量の免疫グロブリン等、有効量の免疫グロブリンを投与するステップを含む。
【００５８】
一例において、方法は、哺乳動物に約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の免疫グロブリンを投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。例えば、方法は、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間を投与するステップを含む。
【００５９】
一例において、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６０】
一例において、免疫グロブリンは、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６１】
一例において、免疫グロブリンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６２】
一例において、免疫グロブリンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６３】
一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物に複数回投与される。一例において、投与間の期間は、少なくとも約８日間等、少なくとも約７日間、例えば、少なくとも約９日間又は１０日間である。一例において、投与間の期間は、少なくとも約１１日間である。別の一例において、投与間の期間は、少なくとも約１６日間等、少なくとも約１５日間、例えば、少なくとも約１８日間又は２０日間である。一例において、投与間の期間は、少なくとも約２２日間である。別の一例において、投与間の期間は、少なくとも約３０日間等、少なくとも約２５日間、例えば、少なくとも約４０日間又は４５日間である。一例において、投与間の期間は、少なくとも約５７又は６０日間である。
【００６４】
例えば、免疫グロブリンは、０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間等、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間、例えば、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間等、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間及び５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。例えば、免疫グロブリンは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。例えば、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。例えば、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間である。一部の例において、投与間の期間は、少なくとも約１１日間又は１５日間且つ約２０日間未満等、少なくとも約７日間且つ約２２日間未満、例えば、少なくとも約１３日間且つ約１８日間未満である。
【００６５】
一例において、免疫グロブリンは、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、６日間又は７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間又は１４日間又は１５日間である。
【００６６】
一例において、免疫グロブリンは、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、６日間又は７日間又は８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間又は１４日間又は１５日間又は２０日間又は２１日間又は２２日間である。
【００６７】
例えば、免疫グロブリンは、６ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約１５日間である。例えば、免疫グロブリンは、１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約１４又は１５日間である。例えば、免疫グロブリンは、２０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与され、投与間の期間は、少なくとも約１４又は１５日間である。一部の例において、投与間の期間は、少なくとも約２１又は２２日間且つ約６５日間未満等、少なくとも約２０日間且つ約７０日間未満、例えば少なくとも約２５日間且つ約５７日間未満である。
【００６８】
一例において、免疫グロブリンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、１４日間又は１５日間又は２１日間又は２２日間又は３０日間又は４８日間又は５０日間又は５６日間又は５７日間又は６０日間である。
【００６９】
一例において、免疫グロブリンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、投与間の期間は、１４日間又は１５日間又は２１日間又は２２日間又は３０日間又は４８日間又は５０日間又は５６日間又は５７日間又は６０日間である。
【００７０】
一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルを低下させる時間及び条件下で、ループス、例えばＳＬＥを患う哺乳動物に投与される。一例において、免疫グロブリンは、１回又は複数回投与される。免疫グロブリンが複数回投与される場合、一部の例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルを有意に低下させるのに十分な回数投与される。一部の例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルが有意に低下しなくなったときに再投与される。
【００７１】
一部の例において、免疫グロブリンが複数回投与される場合、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルを、健常な被験体と同様の（例えば、１０％又は２０％以内の）レベルへと低下させるのに十分な回数投与される。一部の例において、免疫グロブリンは、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状（例えば、本明細書に記載されている）のレベルが有意に低下しなくなったときに再投与される。
【００７２】
一例において、方法は、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状のレベルを検出するステップと、レベルが低下しない場合、免疫グロブリンの投与を反復するステップとを更に含む。
【００７３】
一例において、哺乳動物における循環免疫複合体及び／又は自己抗体及び／又はループス、例えばＳＬＥの炎症若しくはその他の症状のレベルは、健常な哺乳動物において検出されるレベルへと低下する。
【００７４】
一例において、方法は、哺乳動物における循環中及び／又は炎症組織中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数を検出するステップを更に含む。
【００７５】
一例において、方法は、循環中に検出されるｐＤＣ及び／又は好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数の約５０％以内である場合、免疫グロブリンの投与を反復するステップを更に含む。例えば、方法は、循環中に検出されるｐＤＣ及び／又は好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数の約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％以内である場合、免疫グロブリンの投与を反復するステップを更に含む。
【００７６】
一例において、免疫グロブリンの投与が終了した後、被験体における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は増加する。例えば、被験体における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、正常又は健常な被験体及び／又は正常又は健常な被験体の集団におけるレベルと同様のレベルへと増加する。例えば、被験体における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、治療終了後約１１日又は２０日、２２日又は３０日又は５７日又は６０日又は６５日又は７０日後に増加する。
【００７７】
本開示はまた、免疫グロブリンを本明細書に記載されている通り、いずれかの例に従って、ループス、例えばＳＬＥを再発している、或いはループス、例えばＳＬＥの再発発症リスクのある哺乳動物に投与して、これによりループス、例えばＳＬＥの再発を予防するステップを含む、哺乳動物におけるループス、例えばＳＬＥの再発を予防するための方法を提供する。
【００７８】
一例において、方法は、予防上有効量の免疫グロブリン等、有効量の免疫グロブリンを投与するステップを含む。
【００７９】
一例において、方法は、ループス、例えばＳＬＥを再発している哺乳動物を同定するステップを更に含む。例えば、方法は、哺乳動物における循環中の自己抗体（例えば、Ｃｌｑに対する）及び／又は抗ｄｓＤＮＡ抗体及び／又は免疫複合体を検出するステップを含む。ループス、例えばＳＬＥを再発している哺乳動物を決定するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書に記載されている。
【００８０】
一例において、免疫グロブリンは、本明細書に記載されている通り、本開示のいずれかの例に従って投与される。
【００８１】
一例において、治療される哺乳動物は、このような治療を必要としている。例えば、哺乳動物は、この疾患又は状態を患う、或いは疾患又は状態の発症リスクがある、或いは疾患又は状態を再発している、或いは再発リスクがある。一例において、治療を必要としている哺乳動物は、例えば、健常な哺乳動物の集団において検出されるレベルと比べて増加レベルの循環中ＩＦＮａを有する。
【００８２】
適切には、本開示の上述の例において、哺乳動物はヒトである。
【００８３】
他の目的、実施例及び利点は、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。当業者であれば、この詳細な説明から、本開示の精神及び範囲内における様々な変更及び修正が明らかとなるため、詳細な説明及び特定の実施例は、単に説明のために記載されている。更に、実施例は、本開示に開示されている方法の原則を示すものであり、当業者にとって明らかに有用となり得るあらゆる実施例への本開示の適用を具体的に説明しない。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１は、種々の細胞系列（Ｘ軸）における細胞当りのＩＬ−３Ｒａ発現の平均レベル（Ｙ軸）を示すグラフ表示である。
【図２】図２は、ＩＬ−３Ｒａと結合するアフコシル化ヒト化抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）を種々の投薬量で投与する前後の好塩基球（左側）又はｐＤＣ（右側）のパーセンテージを示す２個のグラフ表示を含む図である。数値は、末梢血試料における全細胞のパーセンテージとして表す（Ｙ軸）。抗体の投与時間に対する末梢血の採取時間をＸ軸に示す。抗体の投薬量も示す。
【図３】図３は、様々な条件下で種々の抗体によって誘導されたＡＤＣＣに起因する細胞溶解レベルを示すグラフ表示である。試験した抗体の命名法は、本明細書の記載と一致する。抗体は、自己標的エフェクター条件下（ｐＤＣ１−ＮＫ１、ｐＤＣ２−ＮＫ２）及び同種異系間標的エフェクター条件下（ｐＤＣ１−ＮＫ２、ｐＤＣ２−ＮＫ１）で試験した。結果は、自発的溶解及びＥｘｔｒａｎ（商標）により得られる最大の溶解の関数として決定された、特異的溶解のパーセンテージとして提示する。
【図４】図４は、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドで活性化されたｐＤＣを含有するＰＢＭＣによって細胞培養培地に分泌されたＩＦＮａ量を示す２個のグラフ表示を含む図である。Ｘ軸に示されている濃度の提示されている抗体と共に細胞を培養した。ＥＬＩＳＡを用いて検出されたＩＦＮａ量をＹ軸に示す。オリゴヌクレオチドによる活性化の６時間後（左側）及び２４時間後（右側）に行ったアッセイの結果を示す。
【図５】図５は、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドで活性化されたｐＤＣを含有するＰＢＭＣによって細胞培養培地に分泌されたＩＦＮａ量を示すグラフ表示である。種々の濃度の、ＩＬ−３Ｒａと結合するアフコシル化ヒト化抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）又はアイソタイプ対照抗体（図示されている）と共に細胞を培養した。ＥＬＩＳＡを用いて検出されたＩＦＮａ量をＹ軸に示す。オリゴヌクレオチドによる活性化の２４時間後に行ったアッセイの結果を示す。
【図６】図６は、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドで活性化されたｐＤＣを含有するＰＢＭＣによって細胞培養培地に分泌されたＩＦＮａ量を示すグラフ表示である。種々の濃度の、ＩＬ−３Ｒａと結合するアフコシル化ヒト化抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）又はこの抗体のＦａｂフラグメント（７Ｇ３ Ｆａｂ）（図示されている）と共に細胞を培養した。ＥＬＩＳＡを用いて検出されたＩＦＮａ量をＹ軸に示す。オリゴヌクレオチドによる活性化の２４時間後に行ったアッセイの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８５】
詳細な説明
配列表の要点
配列番号１は、ＩＬ−３Ｒａ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２は、ｈｚ７Ｇ３のＶＨのアミノ酸配列である。
配列番号３は、ｈｚ７Ｇ３のＶＬのアミノ酸配列である。
配列番号４は、ｈｚ７Ｇ３の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５は、ｈｚ７Ｇ３の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号６は、ｈｚ７Ｇ３Ｖ１の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号７は、ｈｚ７Ｇ３Ｖ２の重鎖のアミノ酸配列である。
【００８６】
概要
本明細書の全体を通じて、他に特に記述がない限り、或いは文脈がそれ以外を必要としない限り、単一のステップ、組成物、ステップ群又は組成物群への言及は、１及び数種（即ち、１又は複数）のこれらステップ、組成物、ステップ群又は組成物群を包含すると解釈するべきである。
【００８７】
当業者であれば、本開示が、特に説明されている以外のバリエーション及び改変を許容することを理解するであろう。本開示が、あらゆるこのようなバリエーション及び改変を含むことを理解されたし。本開示は、本明細書において個々に又は集合的に言及又は提示されているあらゆるステップ、特色、組成物及び化合物並びに前記ステップ又は特色のあらゆる組み合わせ又はその２以上も含む。
【００８８】
本開示は、本明細書に記載されている例証のみを目的とする特定の実施例により定められた範囲に限定するべきではない。機能的均等の製品、組成物及び方法は、明らかに本開示の範囲内に含まれる。
【００８９】
本明細書に開示されているいかなる実施例も、他に特に記述がない限り、本開示のその他の実施例へと適宜変更して適用できると解釈するべきである。
【００９０】
他に特に規定がない限り、本明細書に用いられているあらゆる技術及び科学用語は、当該技術分野（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学及び生化学）の当業者によって一般に理解されるものと同じ意義を有すると解釈するべきである。
【００９１】
他に断りがない限り、本開示において利用されている組換えタンパク質、細胞培養及び免疫学の技法は、標準手順であり、当業者にとって周知のものである。このような技法は、J. Perbal、A Practical Guide to Molecular Cloning、John Wiley and Sons (1984)、J.Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989)、T.A.Brown (編集者)、Essential Molecular Biology: A Practical Approach、1及び2巻、IRL Press(1991)、D.M. Glover and B.D. Hames (編集者)、DNA Cloning: A Practical Approach、1〜4巻、IRL Press (1995及び1996)並びにF.M. Ausubelら(編集者)、Current Protocols in Molecular Biology、Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience (1988、現時点までのあらゆる最新情報を含む)、Ed Harlow and David Lane (編集者) Antibodies: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory(1988)並びにJ.E.Coliganら(編集者) Current Protocols in Immunology、John Wiley&Sons（現時点までのあらゆる最新情報を含む）等、ソース文献を通じて記載及び説明されている。
【００９２】
本明細書における可変領域及びその一部、免疫グロブリン、抗体並びにそれらのフラグメントの記載及び定義は、Kabat「Sequences of Proteins of Immunological Interest」国立衛生研究所、メリーランド州ベテスダ、1987及び1991、Borkら、J Mol. Biol. 242、309〜320、1994、Chothia and Lesk J. Mol Biol. 196: 901〜917、1987、Chothiaら、Nature 342、877〜883、1989及び/又はAl-Lazikaniら、J Mol Biol 273、927〜948、1997における記述により更に明らかにすることができる。
【００９３】
用語「及び／又は」、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解するべきであり、両方の意義又はいずれかの意義に明確な支持を与えるものと解釈するべきである。
【００９４】
本明細書を通じて、単語「含む（comprise）」又は「含む（comprises）」若しくは「含んでいる（comprising）」等の変化形は、記されている要素、整数若しくはステップ又は要素、整数若しくはステップ群の包含を暗示するが、その他の要素、整数若しくはステップ又は要素、整数若しくはステップ群を除外するものではないと理解されるであろう。
【００９５】
本明細書において、用語「に由来する」は、指定の整数が、特定の供給源から得ることができるが、必ずしも該供給源から直接的に得られる必要はないことを示唆するもの解釈するべきである。
【００９６】
定義（抜粋）（selected definition）
本明細書において，用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリンアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＧ及びＩｇＥ並びにそれらの抗原結合性フラグメント等、免疫グロブリン遺伝子複合体の任意の抗原結合性タンパク質産物を含む。例示的な免疫グロブリンは抗体である。免疫グロブリンは、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよく、モノクローナルが本開示の例示的な一形態である。適切に脱免疫化（de-immunized）されることにより、哺乳動物に投与された免疫グロブリンに対する哺乳動物による免疫応答を低下又は排除した任意の免疫グロブリンは、用語「免疫グロブリン」に含まれる。ヒト治療の特定の事例において、適切な免疫グロブリンは、キメラ、ヒト化又はヒト免疫グロブリンを含む。天然起源であれ、ヒト介入による産生であれ（例えば、組換えＤＮＡ技術による）、変化した又は変種アミノ酸残基、配列又は糖鎖付加を含む改変され、突然変異誘発されたキメラ及び／又はヒト化免疫グロブリンもまた、用語「免疫グロブリン」に含まれる。当業者（skilled addressee）であれば、本開示の「免疫グロブリン」が、ＩＬ−３Ｒａ鎖と結合するよう適応した代替的免疫グロブリン又は非免疫グロブリンタンパク質スキャフォールドに基づく他の結合部分及び／又は配列と置換され得ることを理解するであろう。例示的なタンパク質として、Ｆｃ受容体結合部分が挙げられる。例えば、用語「免疫グロブリン」に包含されるタンパク質は、ドメイン抗体、ラクダ科動物抗体及び軟骨魚類由来の抗体（即ち、免疫グロブリン新規抗原受容体（immunoglobulin new antigen receptor）（ＩｇＮＡＲ））を含む。一般に、ラクダ科動物抗体及びＩｇＮＡＲは、Ｖ3/4を含むがＶＬを欠き、多くの場合、重鎖免疫グロブリンと呼ばれる。他の「免疫グロブリン」は、Ｔ細胞受容体と、例えば、可変領域を含む抗原結合部位のために抗原と結合できるタンパク質を含有する他の免疫グロブリン様ドメインとを含む。
【００９７】
当業者であれば、「抗体」は、一般に、複数のポリペプチド鎖、例えば、ＶＬを含むポリペプチドと、ＶＨを含むポリペプチドで構成される可変領域を含むタンパク質であると考えられていることを認識するであろう。抗体は一般に、その一部が、定常領域又は定常フラグメント又はフラグメント結晶化可能（crystallizable）（Ｆｃ）に配置される定常ドメインも含む。ＶＨ及びＶＬは、相互作用して１又は数個の密接に関連した抗原と特異的に結合できる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳動物由来の軽鎖は、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかであり、哺乳動物由来の重鎖は、α、δ、ε、γ又はμである。抗体は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧｉ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｉ及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものとなることができる。用語「抗体」は、ヒト化抗体、霊長類化（primatized）抗体、ヒト抗体及びキメラ抗体も包含する。
【００９８】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」又は「全抗体」は、抗体の抗原結合性フラグメントとは対照的に、その実質的インタクト型の抗体を意味するよう互換的に用いられる。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含み重鎖及び軽鎖を有する抗体を含む。定常ドメインは、野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変種となることができる。一部の事例において、インタクト抗体は、１又は複数のエフェクター機能を有することができる。
【００９９】
抗体の「抗原結合性フラグメント」は、インタクト抗体の抗原結合及び／又は可変領域を含む。抗体フラグメントの例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント；二重特異性抗体；線状抗体（linear antibody）；抗体フラグメントから形成された単鎖抗体分子及び多特異性（multispecific）抗体が挙げられる。
【０１００】
本開示の文脈において、「エフェクター機能」は、細胞の殺傷をもたらす抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変種Ｆｃ領域）と結合する細胞又はタンパク質に媒介される生物活性を意味する。抗体によって誘導されるエフェクター機能の例として、補体依存性細胞傷害；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）；及びＢ細胞活性化が挙げられる。本開示の文脈において、用語「免疫グロブリンにより誘導されるエフェクター機能」又はその類似の用語は、「免疫グロブリンのエフェクター機能」又は類似の用語と互換的に用いられ、各用語は、その他の用語に対し逐語的な支持を与える。
【０１０１】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（「ＮＫ」）細胞、好中球及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（「ＦｃＲ」）上に結合した分泌Ｉｇが、これら細胞傷害性エフェクター細胞と抗原生成標的細胞との特異的な結合を可能にし、その後、標的細胞の細胞毒による殺傷を可能にする細胞傷害性の一形態を意味する。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するため、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核細胞（「ＰＢＭＣ」）及びＮＫ細胞が挙げられる。
【０１０２】
本明細書において、「可変領域」は、抗原と特異的に結合できる本明細書に規定されている抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を意味し、例えば、ＣＤＲのアミノ酸配列、即ち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。例えば、可変領域は、３個のＣＤＲと共に、３又は４個のＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及び必要に応じてＦＲ４）を含む。ＶＨは、重鎖の可変領域を意味する。ＶＬは、軽鎖の可変領域を意味する。ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられたアミノ酸ポジションは、Ｋａｂａｔ（1987及び1991（上記を参照））又は本開示に係る方法の実施における他の付番方式、例えば、Clothia and Leskの超可変ループ付番方式（1987及び／又は1989（上記を参照）及び／又はAl-Lazikaniら、1997（上記を参照））に従って規定することができる。例えば、Ｋａｂａｔの付番方式に従い、ＶＨ ＦＲ及びＣＤＲは、次の通りに配置される。Ｋａｂａｔ付番方式に従って番号を振った、残基１〜３０（ＦＲ１）、３１〜２５（ＣＤＲ１）、３６〜４９（ＦＲ２）、５０〜６５（ＣＤＲ２）、６６〜９４（ＦＲ３）、９５〜１０２（ＣＤＲ３）及び１０３〜１１３（ＦＲ４）。例えば、Ｋａｂａｔの付番方式に従い、ＶＬ ＦＲ及びＣＤＲは次の通りに置かれる。残基１〜２３（ＦＲ１）、２４〜３４（ＣＤＲ１）、３５〜４９（ＦＲ２）、５０〜５６（ＣＤＲ２）、５７〜８８（ＦＲ３）、８９〜９７（ＣＤＲ３）及び９８〜１０７（ＦＲ４）。
【０１０３】
本明細書において、用語「相補性決定領域」（別称ＣＤＲ、即ち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）は、その配列が抗体間で変動する、ＦＲ間のループを形成する抗体可変ドメインのアミノ酸残基を意味する。ＣＤＲの一部又は全体は、抗原と結合する能力を抗体に付与する。各可変ドメインは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として同定される３個のＣＤＲ領域を有する。各相補性決定領域は、Kabatら(1991)によって定義された「相補性決定領域」由来のアミノ酸残基及び／又は「超可変ループ」Chothia and Lesk(1987)若しくはその他の公知の付番技法又はＩＭＧＴ付番方式（Le Francら、2003）等、それらの組み合わせ由来の残基を含むことができる。
【０１０４】
「フレームワーク領域」（以下、ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１０５】
用語「定常領域」又は「フラグメント結晶化可能」又は「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃ部分」（本明細書において互換的に用いることができる）は、本明細書において、一般に（必須ではないが）糖鎖付加され、補体カスケードの１又は複数のＦｃ受容体及び／又は成分と結合できる少なくとも１個の定常ドメインを含む抗体の部分を意味する。重鎖定常領域は、５種のアイソタイプ、α、δ、ε、γ又はμのうちいずれかから選択することができる。更に、種々のサブクラス（重鎖のＩｇＧサブクラス等）の重鎖は、異なるエフェクター機能に関与し、よって、所望の重鎖定常領域を選ぶことにより、所望のエフェクター機能を有するタンパク質を産生することができる。例示的な重鎖定常領域は、ガンマ１（ＩｇＧ１）、ガンマ２（ＩｇＧ２）及びガンマ３（ＩｇＧ３）又はそれらのハイブリッドである。
【０１０６】
「定常ドメイン」は、抗体（同一型、例えば、ＩｇＧ又はＩｇＭ又はＩｇＥの抗体）においてその配列が高度に類似した抗体ドメインである。抗体の定常領域は一般に、複数の定常ドメインを含み、例えば、γ、ａ及びδ 重鎖の定常領域は、２種の定常ドメインを含む。
【０１０７】
本明細書において、用語「特異的に結合する」は、免疫グロブリンが、別の抗原又は細胞とよりも高頻度で、より迅速に、より長期間及び／又はより高親和性で、ＩＬ−３Ｒａ又はそれを発現する細胞と反応又は会合することを意味すると解釈するべきである。この定義を解釈すると、例えば、ＩＬ−３Ｒａと特異的に結合する免疫グロブリンが、第二の抗原と特異的に結合できてもできなくてもよいことが理解される。そのようなものとして、「特異的結合」は、排他的結合又は別の抗原とは検出不能な結合を必ずしも必要としない。用語「特異的に結合する」は、本明細書において「選択的に結合」と互換的に用いられる。一般に、本明細書における結合への言及は、特異的結合を意味し、各用語は、その他の用語に対し明確な支持をも与えるものと理解されるべきである。
【０１０８】
用語「競合的に阻害する」は、免疫グロブリンが、７Ｇ３と称するモノクローナル抗体とＩＬ−３Ｒａとの結合を低下又は阻害することを意味すると理解するべきである。免疫グロブリンが、モノクローナル抗体７Ｇ３の結合を完全に阻害する必要はなく、むしろ結合を統計的に有意な量、例えば、少なくとも約１０％又は２０％又は３０％又は４０％又は５０％又は６０％又は７０％又は８０％又は９０％又は９５％低下させることのみを必要とすることは、前述から明らかになるであろう。結合の競合的阻害を決定するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書に記載されている。例えば、モノクローナル抗体７Ｇ３は、免疫グロブリンの存在下又は不在下でＩＬ−３Ｒａに曝露される。免疫グロブリンの存在下において、免疫グロブリンの不在下よりも少量のモノクローナル抗体が結合する場合、免疫グロブリンは、モノクローナル抗体７Ｇ３の結合を競合的に阻害すると考えられる。
【０１０９】
２種のエピトープの文脈における「重複」は、２種のエピトープが、一方のエピトープと結合する免疫グロブリンが、他方のエピトープと結合する免疫グロブリンの結合を競合的に阻害するのに十分な数のアミノ酸残基を共有することを意味すると解釈するべきである。例えば、２種のエピトープは、少なくとも１個又は２個又は３個又は４個又は５個又は６個以上のアミノ酸を共有する。
【０１１０】
本明細書において、用語「中和する」は、免疫グロブリンが、細胞におけるＩＬ−３介在性シグナル伝達を低下又は阻害できる、及び／又はＩＬ−３Ｒａ鎖及び／又はＩＬ−３Ｒａ鎖とＩＬ−３ＲＰ鎖のヘテロ二量体（コロニー刺激因子２受容体としても知られる）と、ＩＬ−３との結合を低下又は阻害できることを意味すると解釈するべきである。
【０１１１】
本明細書における「モノクローナル抗体７Ｇ３」又は「７Ｇ３」への言及は、受託番号ＨＢ−１２００９としてＡＴＣＣに寄託され、米国特許第６１７７０７８号明細書に記載されている７Ｇ３と称するハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体への言及である。モノクローナル抗体７Ｇ３は、例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（米国ニュージャージー州）からも市販されている。
【０１１２】
用語「ＫａｂａｔのＥＵ付番方式」は、免疫グロブリン重鎖の付番が、Kabatら、1991、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第５版、アメリカ合衆国公衆衛生局（United States Public Health Service）、国立衛生研究所、ベテスダ、に教示されているＥＵインデックスに従うことを意味すると理解されるであろう。ＥＵインデックスは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基付番に基づく。
【０１１３】
本明細書において、用語「治療」は、臨床病理の経過において治療されている個体又は細胞の自然経過を変化させるよう計画された臨床的介入を意味する。望ましい治療効果は、疾患進行速度の低下、病状の寛解又は緩和及び回復又は予後改善を含む。例えば、疾患（例えば、ループス）に関連する１又は複数の症状が軽減又は排除される場合、個体は首尾よく「治療」されている。
【０１１４】
本明細書において、用語「予防」は、個体における疾患の発生又は再発に関する予防法の提供を含む。個体は、疾患発症又は疾患再発し得る又はそのリスクを有し得るが、まだ疾患又は再発と診断されていない。
【０１１５】
本明細書において、疾患若しくは状態の発症若しくはその再発（例えば、ＳＬＥ）又は再発の「リスクのある」哺乳動物は、本開示に係る治療前に、検出可能な疾患又は疾患症状を有しても有さなくてもよく、また、検出可能な疾患又は疾患症状を提示してもしなくてもよい。「リスクがある」とは、哺乳動物が、本技術分野で公知の及び／又は本明細書に記載されている疾患又は状態の発症と相関する測定可能なパラメータである１又は複数のリスク因子を有することを表す。
【０１１６】
「有効量」は、所望の治療上又は予防上の結果を得るのに必要な投薬量及び期間で少なくとも有効な量を意味する。有効量は、１又は複数の投与でもたらされ得る。本開示の一部の例において、用語「有効量」は、上文に記載されている疾患又は状態の治療を得るのに必要な量を意味する。有効量は、治療する疾患又は状態に応じて、また、治療されている哺乳動物に関連する体重、年齢、人種的背景、性別、健康状態及び／又は体調並びに他の要因に応じて変動し得る。通常、有効量は、医師によるルーチンの試行及び実験（trial and experimentation）により決定できる比較的広範囲（例えば、「投薬量」範囲）に含まれるであろう。有効量は、治療期間に亘り単一用量又は１回若しくは数回の反復用量で投与することができる。
【０１１７】
「治療上有効量」は、少なくとも、特定の障害（例えば、ＳＬＥ）の測定可能な改善を得るのに必要とされる最小濃度である。本明細書における治療上有効量は、患者の病状、年齢、性別及び体重並びに個体における所望の応答を誘発する免疫グロブリンの能力等、要因に応じて変動し得る。治療上有効量は、また、治療上有益な効果が、免疫グロブリンの任意の毒性又は有害効果を上回る量である。
【０１１８】
「予防上有効量」は、所望の予防上の結果を得るのに必要な投薬量及び期間で有効な量を意味する。通常、予防的用量は、疾患に先立ち、或いは疾患初期において哺乳動物において用いられるため、予防上有効量は、治療上有効量未満となることができるが、必ずしもその通りではない。
【０１１９】
本明細書において、「形質細胞様樹状細胞」又は「ｐＤＣ」は、ＩＦＮａ及びＩＦＮｐ等、Ｉ型インターフェロンを産生する血液末梢リンパ器官に存在する循環樹状細胞の一種である。ヒトｐＤＣは、表面マーカーＩＬ−３Ｒａ、ＢＤＣＡ−２（ＣＤ３０３）、ＢＤＣＡ−４（ＣＤ３０４）並びにトール様受容体７及び９を発現する。一般に、ヒトｐＤＣは、ＣＤ１１ｃ又はＣＤ１４を発現しない。典型的なヒトｐＤＣ表面表現型は、ＣＤ２０−、ＣＤ３−ＣＤ１４−、ＣＤ１９−ＣＤ５６−、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１１ｃ−及びＣＤ１２３＋である。
【０１２０】
本明細書において、「好塩基球」は、種々のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３）、ヒスタミン及びロイコトリン（leukotrine）を産生する稀少なタイプの顆粒球である。ヒト好塩基球は、ＩＬ−３Ｒａ、ＦｃｓＲ１、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ６９又はＣＤ２０３等、細胞表面マーカーを発現する。
【０１２１】
用語「そのままの抗体」は、別の化合物、例えば、毒性化合物又は放射標識とコンジュゲートしていない抗体を意味する。
【０１２２】
ＩＬ−３Ｒａ鎖のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｅ ＩＤ受託番号３５６３及び／又は配列番号１として教示されているが、これは命名法のためだけであり、限定を目的としない。
【０１２３】
本開示に従って治療される「哺乳動物」は、霊長類、家畜（例えば、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、ロバ）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌやネコ等、ペット）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット）、競技用動物（例えば、競走馬、ラクダ、グレイハウンド）又は捕獲野生動物となることができる。一例において、哺乳動物はヒトである。
【０１２４】
免疫グロブリン
本開示の方法における使用に適した例示的な免疫グロブリンは本明細書に記載されているが、次の段落は、追加的な例示的な免疫グロブリンについて記載する。
【０１２５】
一例において、免疫グロブリンは、ＩＦＮａ分泌の誘導因子と接触させたＰＢＭＣからのＩＦＮａ分泌を低下させることができる。例えば、ＰＢＭＣは、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド等、トール様受容体（ＴＬＲ）−７／９アゴニストに曝露される。例えば、細胞は、１μＭ又は２μＭ又は３μＭ又は４μＭ又は５μＭ濃度のＣ型ＣｐＧオリゴヌクレオチドと接触させる。一例において、ＩＦＮａのレベルは、免疫グロブリン不在下又はアイソタイプ対照免疫グロブリン（例えば、ＩＬ−３Ｒａと結合しない）存在下のレベルと比較して低下した。一例において、ＩＦＮａのレベルは、約５０％又は少なくとも６０％又は少なくとも７０％又は少なくとも８０％又は少なくとも９０％低下する。例えば、免疫グロブリンは、０．０４μｇ／ｍｌ〜約４μｇ／ｍｌの間等、０．０１μｇ／ｍｌ〜約１５μｇ／ｍｌの間、例えば、０．１μｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌの間の濃度でＩＦＮａの低下を達成することができる。
【０１２６】
別の一例において、免疫グロブリンは、ＰＢＭＣ集団における検出可能なｐＤＣ及び／又は好塩基球の数を低下させることができる。一例において、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、免疫グロブリン不在下又はアイソタイプ対照免疫グロブリン（例えば、ＩＬ−３Ｒａと結合しない）存在下のレベルと比較して低下する。一例において、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の数は、約５０％又は少なくとも６０％又は少なくとも７０％又は少なくとも８０％又は少なくとも９０％低下する。一例において、免疫グロブリンは、ＰＢＭＣを免疫グロブリンと接触させた後４時間以内に、或いはＰＢＭＣを免疫グロブリンと接触させた後２４時間以内に、或いはＰＢＭＣを免疫グロブリンと接触させた後４８時間以内にｐＤＣ及び／又は好塩基球の数を低下させることができる。
【０１２７】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物（例えば、カニクイザル等、非ヒト霊長類）の循環中の好塩基球及び／又はｐＤＣ数を、２ｍｇ／ｋｇ以下の用量、例えば、１ｍｇ／ｋｇ以下の用量又は０．１ｍｇ／ｋｇ以下の用量で単回投与後少なくとも７日間低下させることができる。例えば、好塩基球及び／又はｐＤＣ数は、免疫グロブリン投与前の細胞数の７０％（又は８０％又は９０％又は９５％）未満へと低下する。一例において、細胞数は、末梢血中の全細胞のパーセンテージとして算出される。例えば、細胞は、少なくとも８日間又は１０日間又は１１日間低下する。例えば、ｐＤＣ数は、少なくとも８日間又は９日間又は１０日間又は１１日間又は１２日間又は１３日間又は１４日間又は１５日間低下する。一例において、ｐＤＣの数は、少なくとも１１日間低下する。例えば、好塩基球の数は、少なくとも５日間又は６日間又は７日間又は８日間又は９日間又は１０日間低下する。一例において、好塩基球の数は、少なくとも８日間低下する。
【０１２８】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物（例えば、カニクイザル等、非ヒト霊長類）の循環中の好塩基球及び／又はｐＤＣ数を、４０ｍｇ／ｋｇ以下の用量、例えば、３０ｍｇ／ｋｇ以下の用量又は１０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で単回投与後少なくとも１５日間低下させることができる。例えば、好塩基球及び／又はｐＤＣ数は、免疫グロブリン投与前の細胞数の７０％（又は８０％又は９０％又は９５％）未満へと低下する。一例において、細胞数は、末梢血中の全細胞のパーセンテージとして算出される。例えば、細胞は、少なくとも２１日間又は２２日間又は３０日間又は３５日間又は４０日間又は４９日間又は５０日間又は５７日間又は６３日間又は６５日間又は７０日間低下する。例えば、ｐＤＣの数は、少なくとも１２日間又は１３日間又は１４日間又は１５日間又は１６日間又は１７日間又は１８日間又は１９日間又は２０日間低下する。一例において、ｐＤＣの数は、少なくとも１５日間低下する。例えば、好塩基球の数は、少なくとも１２日間又は１３日間又は１４日間又は１５日間又は１６日間又は１７日間又は１８日間又は１９日間又は２０日間又は２１日間又は２２日間又は２３日間又は２４日間又は２５日間又は２６日間又は２７日間又は２８日間低下する。一例において、好塩基球の数は、少なくとも１５日間（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ用量の後）又は２２日間（例えば、３０ｍｇ／ｋｇ用量の後）低下する。
【０１２９】
一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物（例えば、カニクイザル等、非ヒト霊長類）に投与しても、好中球及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞及び／又は単球及び／又は赤血球の数を低下又は欠乏化させない。例えば、免疫グロブリンは、好中球及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞及び／又は単球及び／又は赤血球の数を、免疫グロブリン投与前のレベル（複数可）と比較して約１０％若しくは２０％若しくは３０％若しくは４０％若しくは５０％を超えて又は統計的に有意な量低下又は欠乏化させない。例えば、免疫グロブリンは、好中球及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞及び／又は単球及び／又は赤血球の細胞死を誘導しない。
【０１３０】
抗体
一例において、本明細書に記載されている通り、いずれかの実施例における免疫グロブリンは抗体である。
【０１３１】
抗体を作製するための方法は、本技術分野で公知及び／又はHarlow and Lane (編集者) Antibodies: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、(1988)に記載されている。一般に、このような方法において、必要に応じて任意の適切な又は所望の担体、アジュバント又は医薬的に許容される賦形剤と共に製剤された、ＩＬ−３Ｒａタンパク質若しくは免疫原性フラグメント又はそれらのエピトープ、或いはそれ（即ち、免疫原）を発現及び提示する細胞は、非ヒト動物、例えば、マウス、ニワトリ、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ウマ、ウシ、ヤギ又はブタへと投与される。免疫原は、鼻腔内、筋肉内、皮下、静脈内、皮内、腹腔内又は他の公知の経路により投与することができる。
【０１３２】
ポリクローナル抗体の産生は、免疫化動物の血液を免疫化後の種々の時点でサンプリングしてモニターすることができる。所望の抗体価を得る必要がある場合、１又は複数回の更なる免疫化を行ってよい。適切な力価が得られるまで追加免疫及び力価測定のプロセスは反復される。所望のレベルの免疫原性が得られたら、免疫化動物の血を抜き、血清を単離して保存する及び／又はこの動物を用いてモノクローナル抗体（Ｍａｂ）を作製する。
【０１３３】
モノクローナル抗体は、本開示により企図される抗体の例示的な一形態である。用語「モノクローナル抗体」又は「ＭＡｂ」は、同一抗原（複数可）、例えば、抗原内の同一エピトープと結合できる同種抗体集団を意味する。この用語は、抗体の供給源又はその作製様式に関する限定を目的としない。
【０１３４】
Ｍａｂの産生のため、例えば、米国特許第４１９６２６５号明細書又はHarlow and Lane (1988)（上記を参照）に例証されている手順等、数多くの公知の技法のうちいずれか一法を用いることができる。
【０１３５】
例えば、適切な動物は、抗体産生細胞を刺激するのに十分な条件下において免疫原で免疫化される。ウサギ、マウス及びラット等、齧歯類は、例示的な動物である。ヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するよう、また、例えば、マウス免疫グロブリンタンパク質を発現しないよう遺伝子操作されたマウスは、本開示の抗体の作製に用いることもできる（例えば、国際公開第２００２／０６６６３０号パンフレットに記載されている）。
【０１３６】
免疫化の後、抗体を産生する潜在能力を有する体細胞、特にＢリンパ球（Ｂ細胞）は、ＭＡｂ作製プロトコールにおける使用のために選択される。これらの細胞は、脾臓、扁桃腺若しくはリンパ節生検又は末梢血試料から得ることができる。次に、免疫化動物に由来するＢ細胞は、一般に、免疫原で免疫化された動物と同じ種に由来する不死骨髄腫細胞の細胞と融合される。
【０１３７】
ハイブリッド細胞は、組織培養培地中にヌクレオチドの新規合成を遮断する薬剤を含む選択培地における培養により増幅される。例示的な薬剤は、アミノプテリン、メトトレキサート及びアザセリンである。
【０１３８】
増幅したハイブリドーマは、例えば、フローサイトメトリー及び／又は免疫組織化学及び／又はイムノアッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、細胞傷害性アッセイ、プラークアッセイ、ドットイムノアッセイ等）によるもの等、抗体特異性及び／又は力価に関する機能的選択に付される。
【０１３９】
或いは、ＡＢＬ−ＭＹＣ技術（ＮｅｏＣｌｏｎｅ、米国５３７１３ウィスコンシン州マディソン）が、ＭＡｂを分泌する細胞系の産生に用いられる（例えば、Largaespadaら、J. Immunol. Methods. 197:85〜95、1996に記載されている）。
【０１４０】
抗体は、例えば、米国特許第６３０００６４号明細書及び／又は米国特許第５８８５７９３号明細書に記載されている通り、ディスプレイライブラリー、例えば、ファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによっても産生又は単離することができる。
【０１４１】
一例において、米国特許第６，１７７，０７８号明細書に記載されている通り、抗体は、７Ｇ３、６Ｈ６又は９Ｆ５である。これら抗体の改変バージョン（例えば、本明細書に記載されている方法による等、脱免疫化、キメラ又はヒト化バージョン）も企図されている。
【０１４２】
キメラ抗体
免疫グロブリンは、合成免疫グロブリンであることができる。一例において、本明細書に記載されている抗体は、キメラ抗体である。用語「キメラ抗体」は、重鎖及び／又は軽鎖部分が、特定の種（例えば、マウス等、マウス（murine））に由来する、或いは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるが、一方、鎖（複数可）の残り部分が、別の種（例えば、ヒト等、霊長類）に由来する、或いは別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である抗体を意味する。通常、主にヒトドメインを有する抗体を産生するため、キメラ抗体は、齧歯類又はウサギ可変領域及びヒト定常領域を利用する。キメラ抗体を産生するための方法は、例えば、米国特許第４８１６５６７号明細書及び米国特許第５８０７７１５号明細書に記載されている。
【０１４３】
本開示は、例えば、ある生物種に由来する可変領域が、別の生物種に由来するタンパク質の領域と融合したキメラ免疫グロブリンも含む。例えば、本開示は、ある生物種に由来するＴ細胞受容体定常ドメインと融合した別個の生物種のＴ細胞受容体に由来する可変領域を含む免疫グロブリンを企図する。
【０１４４】
ヒト化及びヒト抗体
本開示の抗体は、ヒト化抗体でもヒト抗体でもよい。
【０１４５】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト生物種の抗体に由来する抗原結合部位又は可変領域と、ヒト抗体の構造及び／又は配列に基づくこの分子の残りの抗体構造とを有するキメラ抗体のサブクラスを意味すると理解するべきである。抗原結合部位は、ヒト抗体の可変ドメインにおける適切なＦＲに移植された非ヒト抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト抗体由来の残りの領域とを含む。抗原結合部位は、野生型であっても、１又は複数のアミノ酸置換により改変されていてもよい。一部の例において、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。
【０１４６】
非ヒト抗体又はその一部（例えば、可変領域）をヒト化するための方法は、本技術分野で公知のものである。ヒト化は、米国特許第５２２５５３９号明細書又は米国特許第５５８５０８９号明細書の方法に従って行うことができる。抗体をヒト化するための他の方法も除外されない。
【０１４７】
抗体に関連する本明細書における用語「ヒト抗体」は、ヒト、例えば、ヒト生殖系列又は体細胞で発見された配列に由来する又は対応する可変領域（例えば、Ｖ３／４ ＶＬ）と、必要に応じて定常領域とを有する抗体を意味する。「ヒト」抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基、例えば、ランダム又は部位特異的変異によってｉｎ ｖｉｔｒｏで導入された変異（特に、保存的置換に関与する変異、或いは抗体の少数の残基、例えば、１、２、３、４又は５個の抗体残基、例えば、抗体の１又は複数のＣＤＲを構成する１、２、３、４又は５個の残基における変異）を含むことができる。このような「ヒト抗体」は、実際には、ヒトによって産生される必要はなく、むしろこれらは、組換え手段を用いて産生することができる、及び／又はヒト抗体定常及び／又は可変領域をコードする核酸を含むトランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離することができる（例えば、上述通り）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー（例えば、米国特許第５８８５７９３号明細書に記載）等、本技術分野で公知の種々の技法を用いて産生することができる。
【０１４８】
選択されたエピトープを認識するヒト抗体は、「誘導選択（guided selection）」と呼ばれる技法を用いて作製することもできる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を用いて、該エピトープを認識する完全なヒト抗体の選択を誘導する（例えば、米国特許第５５６５３３２号明細書に記載）。
【０１４９】
脱免疫化抗体及び免疫グロブリン
本開示は、脱免疫化抗体又はタンパク質も企図する。脱免疫化抗体及びタンパク質は、１又は複数のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープが除去されて（即ち、変異導入され）、これにより、哺乳動物が、該抗体又はタンパク質に対する免疫応答を生じる可能性を低下させる。脱免疫化抗体及びタンパク質を産生するための方法は、本技術分野で公知のものであり、例えば、国際公開第００／３４３１７号パンフレット、国際公開第２００４／１０８１５８号パンフレット及び国際公開第２００４／０６４７２４号パンフレットに記載されている。
【０１５０】
当業者であれば、適切な変異を導入するため並びにその結果生じるタンパク質を発現及びアッセイするための方法は、本明細書の記載に基づき明らかとなるであろう。
【０１５１】
重鎖抗体
重鎖抗体は、重鎖を含むが軽鎖を含まないという点に限り、多くの他の形態の抗体とは構造的に異なる。従って、このような免疫グロブリンは、「重鎖のみ抗体（heavy chain only antibody）」とも呼ばれる。重鎖免疫グロブリンは、例えば、ラクダ科動物及び軟骨魚類に存在する（ＩｇＮＡＲとも呼ばれる）。
【０１５２】
天然に存在する重鎖抗体に存在する可変領域は、一般に、従来の４本鎖抗体に存在する重鎖可変領域（「ＶＨドメイン」と呼ばれる）や、従来の４本鎖抗体に存在する軽鎖可変領域（「ＶＬドメイン」と呼ばれる）と区別するため、ラクダ科動物抗体においては「ＶＨＨドメイン」、ＩｇＮＡＲにおいてはＶ−ＮＡＲと呼ばれる。
【０１５３】
ラクダ科動物由来の重鎖抗体及びその可変領域並びにそれらの産生及び／又は単離及び／又は使用方法の概要は、とりわけ次の参考文献、国際公開第９４／０４６７８号パンフレット、国際公開第９７／４９８０５号パンフレット及び国際公開第９７／４９８０５号パンフレットに見出すことができる。
【０１５４】
軟骨魚類由来の重鎖免疫グロブリン及びその可変領域並びにそれらの産生及び／又は単離及び／又は使用方法の概要は、とりわけ国際公開第２００５／１１８６２９号パンフレットに見出すことができる。
【０１５５】
抗体フラグメント
単一ドメイン抗体
一部の例において、本開示の免疫グロブリンは、単一ドメイン抗体（用語「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ」と互換的に用いられる）である、或いはそれを含む。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体又は一部を含む単一ポリペプチド鎖である。特定の例において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ウォルサム；例えば、米国特許第６２４８５１６号明細書を参照）である。
【０１５６】
二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体
一部の例において、本開示の免疫グロブリンは、国際公開第９８／０４４００１号パンフレット及び／又は国際公開第９４／００７９２１号パンフレットに記載されているもの等、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体又はより高次のタンパク質複合体である、或いはそれらを含む。
【０１５７】
例えば、二重特異性抗体は、各ポリペプチド鎖が構造ＶＬ−Ｘ−ＶＨ又はＶＨ−Ｘ−ＶＬ（式中、ＶＬは、抗体軽鎖可変領域であり、ＶＨは、抗体重鎖可変領域であり、Ｘは、単一ポリペプチド鎖におけるＶＨとＶＬが会合する（又はＦｖを形成する）には不十分な残基を含むリンカーである、或いはこれは存在せず、一方のポリペプチド鎖のＶＨが、他方のポリペプチド鎖のＶＬと結合して抗原結合部位を形成する、即ち、１又は複数の抗原と特異的に結合できるＦｖ分子を形成する）を含む２本の関連するポリペプチド鎖を含むタンパク質である。ＶＬ及びＶＨは、各ポリペプチド鎖で同一であってもよいし、或いはＶＬ及びＶＨは、二特異性の二重特異性抗体を形成するよう、各ポリペプチド鎖で異なっていてもよい（即ち、異なる特異性を有する２種のＦｖを含む）。
【０１５８】
エフェクター活性を誘導できる二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体等は、ＩＬ−３Ｒａと結合できる抗原結合ドメイン及び免疫細胞、例えばＴ細胞における細胞表面分子（例えば、ＣＤ３）と結合できる抗原結合ドメインを用いて産生することができる。
【０１５９】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント
当業者であれば、ｓｃＦｖが、単一のポリペプチド鎖にＶＨ及びＶＬ領域を含み、ＶＨとＶＬとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合のため（即ち、単一ポリペプチド鎖のＶＨとＶＬが、互いに会合してＦｖを形成するため）の所望の構造の形成を可能にするポリペプチドリンカーを含むことを認識するであろう。例えば、リンカーは、１２アミノ酸を超える残基を含み、ｓｃＦｖのより好ましいリンカーの一つは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３である。
【０１６０】
本開示はまた、単一システイン残基がＶＨのＦＲ及びＶＬのＦＲに導入され、ジスルフィド結合によって連結されたシステイン残基同士が安定的なＦｖを生じる、ジスルフィド安定化Ｆｖ（又はｄｉＦｖ若しくはｄｓＦｖ）を企図する。
【０１６１】
或いは、又は更に、本開示は、二量体ｓｃＦｖ、即ち、非共有結合又は共有結合、例えば、ロイシンジッパードメイン（例えば、Ｆｏｓ又はＪｕｎに由来する）によって連結した２種のｓｃＦｖ分子を含むタンパク質を包含する。或いは、２種のｓｃＦｖは、米国特許出願公開第２００６０２６３３６７号明細書に記載されている通り、両方のｓｃＦｖが形成されて、抗原と結合するのに十分な長さのペプチドリンカーにより連結される。
【０１６２】
本開示はまた、エフェクター活性を誘導できる二量体ｓｃＦｖを企図する。例えば、一方のｓｃＦｖは、ＩＬ−３Ｒａと結合し、もう一方のｓｃＦｖは、免疫細胞、例えばＴ細胞における細胞表面分子（例えば、ＣＤ３）と結合する。一例において、二量体タンパク質は、ｄＡｂとｓｃＦｖの組み合わせである。エフェクター機能を誘導できる二特異性抗体フラグメントの例は、例えば、米国特許第７２３５６４１号明細書に記載されている。
【０１６３】
他の抗体及び抗体フラグメント
本開示はまた、
（ｉ）米国特許第５，７３１，１６８号明細書に記載されている「鍵と鍵穴（key and hole）」二特異性タンパク質；
（ｉｉ）例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書に記載されているヘテロコンジュゲートタンパク質；
（ｉｉｉ）例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書に記載されている化学的架橋剤を用いて産生されたヘテロコンジュゲートタンパク質；及び
（ｉｖ）Ｆａｂ３（例えば、ＥＰ１９９３０３０２８９４に記載）
等、他の抗体及び抗体フラグメントを企図する。
【０１６４】
Ｆｃ領域
本開示は、Ｆｃと融合した免疫グロブリンの抗原結合性フラグメント等、抗体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリンを包含する。
【０１６５】
本開示のタンパク質産生に有用なＦｃ領域の配列は、多くの異なるソースから得ることができる。一部の例において、タンパク質のＦｃ又はその一部は、ヒト抗体に由来する。更に、Ｆｃ又はその一部は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥ等、任意の抗体クラス並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４等、任意の抗体アイソタイプに由来することができる。一例において、Ｆｃは、ヒトのアイソタイプＩｇＧ１又はヒトのアイソタイプＩｇＧ２又はヒトのアイソタイプＩｇＧ３又は前述いずれかのハイブリッドである。
【０１６６】
一例において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を誘導することができる。例えば、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃ領域である。別の一例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ Ｆｃ領域のハイブリッド又はＩｇＧ１及びＩｇＧ３ Ｆｃ領域のハイブリッド又はＩｇＧ２及びＩｇＧ３ Ｆｃ領域のハイブリッドである。例示的なヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ２ Ｆｃ領域のハイブリッドは、Chappelら、Proc. Natl Acad. Sci. USA、88:9036〜9040、1991に記載されている。
【０１６７】
Ｆｃ領域が、エフェクター機能を誘導できるか否か決定するための方法は、当業者であれば理解できるであろう及び／又は本明細書に記載されている。
【０１６８】
エフェクター機能
適切には、本開示の方法における使用に適切な抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａ＋形質細胞様樹状細胞の少なくとも部分的な欠乏化、実質的な欠乏化又は排除を促進する又は可能にするエフェクター機能を有する、或いはそれを提示する。このようなエフェクター機能は、Ｆｃ受容体との結合親和性の増強、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）であり得る。
【０１６９】
当業者であれば本明細書の記述に基づき理解できるように、本開示の一部の例は、エフェクター機能を誘導できる免疫グロブリンを利用する。
【０１７０】
一例において、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能を誘導できるような様式でＩＬ−３Ｒａと結合する。
【０１７１】
一例において、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能の誘導を可能にするＩＬ−３Ｒａ内のエピトープと結合する。
【０１７２】
別の一例において、免疫グロブリンは、哺乳動物のｐＤＣ及び／又は好塩基球におけるＩＬ−３Ｒａと結合して、これによりＡＤＣＣ等、エフェクター機能を誘導することができる。
【０１７３】
例えば、免疫グロブリンは、細胞表面におけるＩＬ−３Ｒａと、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能の誘導に十分な時間結合し続ける。例えば、免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ誘導が可能となるよう内部移行が早すぎることはない。
【０１７４】
或いは、又は更に、免疫グロブリンは、免疫エフェクター細胞が免疫グロブリンにおけるＦｃ領域と結合し、ＡＤＣＣ等、エフェクター機能を誘導できる様式で、細胞表面におけるＩＬ−３Ｒａと結合する。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域は、免疫グロブリンがＩＬ−３Ｒａと結合すると、免疫エフェクター細胞におけるＦｃ受容体（例えば、ＦｃｙＲ）と相互作用できるような様式で露出している。本開示の文脈において、用語「免疫エフェクター細胞」は、Ｆｃ受容体を発現し、それと結合する細胞をＡＤＣＣ又はＡＤＣＰにより殺傷することのできる任意の細胞を意味すると理解されるべきである。
【０１７５】
免疫グロブリンのエフェクター機能に関する上の各段落は、ＣＤＣ誘導に適宜変更して適用するものと解釈するべきである。例えば、免疫グロブリンは、補体成分Ｃ１ｑが免疫グロブリンにおけるＦｃ領域と結合してＣＤＣを誘導できる様式で、細胞表面におけるＩＬ−３Ｒａと結合する。
【０１７６】
一例において、免疫グロブリンは、エフェクター機能のレベル増強を誘導することができる。
【０１７７】
一例において、Ｆｃ領域によって誘導されたエフェクター機能のレベルは、ＩｇＧ１抗体の野生型Ｆｃ領域又はＩｇＧ３抗体の野生型Ｆｃ領域と比べて増強される。
【０１７８】
別の一例において、Ｆｃ領域は、誘導できるエフェクター機能のレベルが、改変なしのＦｃ領域と比較して増加するよう改変される。このような改変は、アミノ酸レベル及び／又は二次構造レベル及び／又は三次構造レベル及び／又はＦｃ領域の糖鎖付加であることができる。
【０１７９】
一例において、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、ｃｈ７Ｇ３（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む７Ｇ３のキメラバージョン、国際公開第２００９／０７０８４４号パンフレットにおいてＣＳＬ３６０と呼ばれる）又はｈｚ７Ｇ３（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む７Ｇ３のヒト化バージョン）によって示されるレベルを超えるエフェクター機能のレベルを有する、或いはそれを提示する。本開示の文脈において、ｃｈ７Ｇ３及びｈｚ７Ｇ３は、基本的に同一レベルのエフェクター機能を示す。
【０１８０】
当業者であれば、より優れたエフェクター機能は、例えば、より高い効果レベル、より持続的な効果又はより迅速な効果速度として、数多くの仕方のいずれかにおいて顕在化できることを理解するであろう。
【０１８１】
例えば、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含むエフェクター機能を有する、或いはそれを提示する。
【０１８２】
一例において、Ｆｃ領域は、そのエフェクター機能増強を誘導する能力を増加させる１又は複数のアミノ酸改変を含む。一例において、Ｆｃ領域は、１又は複数のＦｃｙＲとより高い親和性で結合する。一例において、Ｆｃ領域は、ＦｃｙＲに対し、野生型Ｆｃ領域の親和性の１倍を超えてより高い、或いは野生型Ｆｃ領域の親和性の５倍を超えてより高い、或いは野生型Ｆｃ領域の親和性の５倍〜３００倍の間を超えてより高い親和性を有する。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２及び３３５からなる群から選択されたポジションに、少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数１】
からなる群から選択された少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数２】
からなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【０１８３】
別の一例において、Ｆｃ領域は、ＦｃｙＲＩＩｂよりもＦｃｙＲＩＩＩａと効率的に結合する。例えば、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した２３４、２３５、２３９、２４０、２６４、２９６、３３０及びＩ３３２からなる群から選択されたポジションに、少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番したＬ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｙ、Ｙ２９６Ｑ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ及びＩ３３２Ｅからなる群から選択された少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。例えば、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数３】
からなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【０１８４】
更に別の一例において、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域によって媒介されたレベルを超えるレベルでＡＤＣＣを誘導する。例えば、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域によって誘導されるレベルの５倍を超えてより高い、或いは５倍〜１０００倍の間を超えてより高いレベルでＡＤＣＣを誘導する。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２及び３３５からなる群から選択されたポジションに、少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数４】
からなる群から選択された少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した
【数５】
からなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【０１８５】
一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した次のアミノ酸置換、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅを含む。このＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃｙＲＩＩＩａに対する親和性が約１４倍増加し、野生型Ｆｃ領域と比較して約３．３増加したＡＤＣＣ誘導能を有する。
【０１８６】
一例において、Ｆｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番した次のアミノ酸置換、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含む。このＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃｙＲＩＩＩａに対する親和性が約１３８倍増加し、野生型Ｆｃ領域と比較して約３２３増加したＡＤＣＣ誘導能を有する。
【０１８７】
エフェクター機能を誘導するＦｃ領域の能力を増加させる追加的なアミノ酸置換は、本技術分野で公知のものである及び／又は例えば、米国特許第６７３７０５６号明細書又は米国特許第７３１７０９１号明細書に記載されている。
【０１８８】
一例において、Ｆｃ領域の糖鎖付加は、そのエフェクター機能増強を誘導する能力を増加するよう変化させられる。この点について、哺乳動物細胞によって産生された天然の抗体は通常、一般に、Ｎ型結合によりＦｃ領域ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７と結合した分岐型の二分岐オリゴ糖（branched, biantennary oligosaccharide）を含む。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸並びに二分岐オリゴ糖構造の「基部（stem）」においてＧｌｃＮＡｃと結合したフコースを含むことができる。一部の例において、本開示に係るＦｃ領域は、Ｆｃ領域と結合した（直接的又は間接的に）フコースを欠く、即ち、Ｆｃ領域が「アフコシル化」した炭水化物構造を含む。このような変種は、ＡＤＣＣを誘導する能力が改善され得る。アフコシル化抗体を産生するための方法は、ａ−１，６−フコシル基転移酵素（ＦＵＴ８）を発現できない細胞系において免疫グロブリンを発現させるステップ（例えば、Yumane-Ohnukiら、Biotechnol. Bioengineer.、87:614〜622、2004に記載）、ＦＵＴ８に対する低分子干渉ＲＮＡを発現する細胞において免疫グロブリンを発現させるステップ（例えば、Moriら、Biotechnol. Bioengineer.、88:901〜908、2004に記載）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）−マンノース４，６−デヒドラターゼ（ＧＭＤ）を発現できない細胞において免疫グロブリンを発現させるステップ（例えば、Kandaら、J. Biotechnol.、130:300〜310、2007に記載）を含む。本開示はまた、例えば、β−（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミンイル転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）を発現するよう改変された細胞系を用いて産生した、フコシル化レベルが低下した免疫グロブリンの使用を企図する（例えば、Umanaら、Nat. Biotechnol.、17:176〜180、1999に記載）。
【０１８９】
一例において、本開示に係る免疫グロブリンは、アフコシル化されている。例えば、免疫グロブリンは、ＦＵＴ８を発現しない細胞（例えば、ＣＨＯ細胞等、哺乳動物細胞）において産生される。
【０１９０】
他の方法として、Ｆｃ介在性エフェクター機能増強を誘導できる抗体を生得的に産生する細胞系の使用が挙げられる（例えば、ウイルスワクチン生産のためのアヒル胚由来幹細胞、国際公開第２００８／１２９０５８号パンフレット；鳥類ＥＢＸ（登録商標）細胞における組換えタンパク質産生、国際公開第２００８／１４２１２４号パンフレット）。
【０１９１】
本開示の方法において有用な免疫グロブリンは、オリゴ糖が二分された、例えば、Ｆｃ領域と結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された免疫グロブリンを含む。このような免疫グロブリンは、フコシル化が低下した及び／又はＡＤＣＣ機能が改善され得る。このような免疫グロブリンの例は、例えば、米国特許第６６０２６８４号明細書及び米国特許出願公開第２００５０１２３５４６号明細書に記載されている。
【０１９２】
オリゴ糖における少なくとも１個のガラクトース残基がＦｃ領域と結合した免疫グロブリンも企図される。このような免疫グロブリンは、ＣＤＣ機能が改善され得る。このような免疫グロブリンは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号パンフレット及び国際公開第１９９９／２２７６４号パンフレットに記載されている。
【０１９３】
ＡＤＣＣ活性を示す免疫グロブリンの非限定的な例として、本明細書において「ｈｚ７Ｇ３Ｖ１」、「ｈｚ７Ｇ３Ｖ２」及び「ｈｚ７Ｇ３Ｖ３」と称するモノクローナル抗体が挙げられる。各事例において、これらの免疫グロブリンによって示されるエフェクター機能のレベルは、ｃｈ７Ｇ３（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む７Ｇ３のキメラ型）又はｈｚ７Ｇ３と比べて増強される、或いはそれを超える。
【０１９４】
別の非限定的な例において、異なるエピトープとの結合の又は内部移行速度がより遅い（例えば、ｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３と比較して）結果、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンは、ＡＤＣＣ機能増強等、エフェクター機能を増強して新規に産生することができる。
【０１９５】
エフェクター機能を誘導する免疫グロブリンの能力を決定するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書においてより詳細に記載されている。
【０１９６】
追加的な改変
本開示は、免疫グロブリンに対する追加的な改変も企図する。
【０１９７】
例えば、免疫グロブリンは、免疫グロブリンの半減期を増加させる１又は複数のアミノ酸置換を含む。例えば、免疫グロブリンは、新生児Ｆｃ領域（ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の親和性を増加させる１又は複数のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含む。例えば、Ｆｃ領域は、より低いｐＨ、例えば、約ｐＨ６．０においてＦｃＲｎに対する親和性を増加させて、エンドソームにおけるＦｃ／ＦｃＲｎ結合を促進した。一例において、Ｆｃ領域は、約ｐＨ６におけるＦｃＲｎに対する親和性を、約ｐＨ７．４におけるその親和性と比較して増加させ、これは、細胞による再利用に続くＦｃの血液中への再放出を促進する。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを低下させることによる、免疫グロブリンの半減期延長に有用である。
【０１９８】
例示的なアミノ酸置換は、ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＴ２５０Ｑ及び／又はＭ４２８Ｌを含む。追加的な又は代替的なアミノ酸置換は、例えば、米国特許出願公開第２００７０１３５６２０号明細書に記載されている。
【０１９９】
タンパク質産生
一例において、本明細書に記載されているいずれかの例における免疫グロブリンは、例えば、本明細書に記載されている通り及び／又は本技術分野で公知の通りに、免疫グロブリン産生に十分な条件下でハイブリドーマを培養することにより産生される。
【０２００】
組換え発現
別の一例において、本明細書に記載されているいずれかの例における免疫グロブリンは組換えである。
【０２０１】
組換えタンパク質の場合、これをコードする核酸は発現ベクターにクローニングされ、次にベクターは、そのままでは免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌（E.coli）細胞、酵母細胞、昆虫細胞又はサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞若しくは骨髄腫細胞等の哺乳動物細胞等、宿主細胞にトランスフェクトされる。免疫グロブリンの発現に用いられる例示的な細胞は、ＣＨＯ細胞、骨髄腫細胞又はＨＥＫ細胞である。これらの目標を達成するための分子クローニング技法は、本技術分野で公知のものであり、例えば、Ausubelら(編集者)、Current Protocols in Molecular Biology、Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience(1988、現時点までのあらゆる最新情報を含む)又はSambrookら、Molecularar Cloning: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)に記載されている。幅広いクローニング及びｉｎ ｖｉｔｒｏ増幅方法が、組換え核酸の構築に適切である。組換え抗体を産生する方法も本技術分野で公知のものである。米国特許第４，８１６，５６７号明細書又は米国特許第５５３０１０１号明細書を参照されたし。
【０２０２】
単離後、核酸は、更にクローニングするため（ＤＮＡ増幅）又は無細胞系若しくは細胞における発現のために、発現構築物又は発現ベクターにおけるプロモーターに作動可能に連結して挿入される。
【０２０３】
本明細書において、用語「プロモーター」は、その最も広範な文脈において解釈するべきであり、例えば、発生及び／又は外部刺激に応答して、或いは組織特異的様式で、核酸の発現を変化させる追加的な調節エレメント（例えば、上流活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサー及びサイレンサー）あり又はなしの、正確な転写開始に必要とされるＴＡＴＡボックス又はイニシエータエレメント等、ゲノム遺伝子の転写調節配列を含む。この文脈において、用語「プロモーター」は、それに作動可能に連結した核酸の発現をもたらす、活性化する又は増強する組換え、合成若しくは融合核酸又はその誘導体の説明にも用いられる。例示的なプロモーターは、前記核酸の発現を更に増強するため及び／又は空間的発現及び／又は時間的発現を変化させるため、１又は複数の特異的調節エレメントの追加的なコピーを含有することができる。
【０２０４】
本明細書において、用語「に作動可能に連結した」は、核酸の発現がプロモーターによって制御されるような、核酸に対するプロモーターの配置を意味する。
【０２０５】
細胞における発現のために多くのベクターが利用できる。ベクター構成要素は一般に、次のうち１又は複数を含むが、これらに限定されない；シグナル配列、免疫グロブリンをコードする配列（例えば、本明細書に提供されている情報に由来する）、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終結配列。当業者であれば、免疫グロブリン発現のために適切な配列を認識するであろう。例示的なシグナル配列は、原核生物分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、ａ因子リーダー又は酸性ホスファターゼリーダー）又は哺乳動物分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）を含む。
【０２０６】
哺乳動物細胞において活性を有する例示的なプロモーターは、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ−ＩＥ）、ヒト伸長因子１−ｃｉプロモーター（ＥＦ１）、核内低分子ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、ｃｃ−ミオシン重鎖プロモーター、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β−アクチンプロモーター；ＣＭＶエンハンサー／β−アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターを含むハイブリッド調節エレメント又はそれらの活性フラグメントを含む。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０によって形質転換したサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児由来腎臓系統（２９３又は懸濁培養における増殖のためにサブクローニングした２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；又はチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
【０２０７】
例えば、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）及び分裂酵母（S. pombe）を含む群から選択される酵母細胞等、酵母細胞における発現に適切な典型的なプロモーターとして、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター又はＴＥＦ１プロモーターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２０８】
単離された核酸又はこれを含む発現構築物を発現のために細胞に導入するための手段は、当業者にとって公知のものである。所定の細胞に用いられる技法は、公知の成功した技法に依存する。組換えＤＮＡを細胞に導入するための手段は、とりわけマイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストランを介したトランスフェクション、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ、米国メリーランド州）及び／又はｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ（Ｇｉｂｃｏ、米国メリーランド州）を用いることによる等、リポソームを介したトランスフェクション、ＰＥＧ介在性ＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーション及びＤＮＡコーティングしたタングステン又は金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ Ｉｎｃ．、米国ウィスコンシン州）使用による等の微粒子銃（microparticle bombardment）を含む。
【０２０９】
免疫グロブリン産生に用いられる宿主細胞は、用いる細胞型に応じて様々な培地で培養することができる。ＨａｍのＦｌ０（Ｓｉｇｍａ）、基礎培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭｌ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）等、市販の培地が、哺乳動物細胞の培養に適切である。本明細書に記されている他の細胞型を培養するための培地は、本技術分野で公知のものである。
【０２１０】
タンパク質の単離
免疫グロブリンを精製するための方法は、本技術分野で公知のものである及び／又は本明細書に記載されている。
【０２１１】
免疫グロブリンが培地に分泌される場合、このような発現系から得られる上清は先ず一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置を用いて濃縮される。タンパク質分解を阻害するため、ＰＭＳＦ等、プロテアーゼ阻害剤が前述のステップのうちいずれかに含まれていてよく、外来性汚染物の増殖を予防するために抗生物質が含まれていてよい。
【０２１２】
細胞から調製された免疫グロブリンは、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー若しくはプロテインＧクロマトグラフィー）又は前述のいずれかの組み合わせを用いて精製することができる。これらの方法は、本技術分野で公知のものであり、例えば、国際公開第９９／５７１３４号パンフレット又はEd Harlow and David Lane (編集者) Antibodies: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory、(1988)に記載されている。
【０２１３】
当業者であれば、免疫グロブリンは、精製又は検出を容易にするタグ、例えば、ポリヒスチジンタグ（例えば、ヘキサヒスチジンタグ）又はインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）タグ又はサルウイルス５（Ｖ５）タグ又はＦＬＡＧタグ又はグルタチオンＳ−転移酵素（ＧＳＴ）タグを含むよう改変できることも認識できるであろう。次に、その結果得られる免疫グロブリンは、親和性精製等、本技術分野で公知の方法を用いて精製される。例えば、ヘキサｈｉｓタグを含む免疫グロブリンは、この免疫グロブリンを含む試料を、固体又は半固体担体上に固定化されたヘキサｈｉｓタグと特異的に結合するニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）と接触させ、試料を洗浄して未結合の免疫グロブリンを除去し、その後に結合した免疫グロブリンを溶出することにより精製される。或いは、又は更に、タグと結合するリガンド又は抗体が、親和性精製方法において用いられる。
【０２１４】
免疫グロブリン活性のアッセイ
競合的結合の決定
モノクローナル抗体７Ｇ３の結合を競合的に阻害する免疫グロブリンを決定するためのアッセイは、当業者であれば理解できるであろう。例えば、７Ｇ３は、検出可能な標識、例えば、蛍光標識又は放射性標識とコンジュゲートされる。次に、標識抗体及び検査免疫グロブリンが混合され、ＩＬ−３Ｒａ若しくはそのエピトープ又はそれを発現する細胞と接触される。次に、標識７Ｇ３のレベルが決定され、標識抗体が免疫グロブリンの不在下でＩＬ−３Ｒａ、エピトープ又は細胞と接触した場合に決定されたレベルと比較される。検査免疫グロブリンの存在下における標識７Ｇ３のレベルが、免疫グロブリンなしと比較して低下する場合、免疫グロブリンは、７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａとの結合を競合的に阻害すると考えられる。
【０２１５】
必要に応じて、検査免疫グロブリンは、７Ｇ３とは異なる標識とコンジュゲートされる。この代替的標識は、検査免疫グロブリンと、ＩＬ−３Ｒａ又はエピトープ又は細胞との結合レベルの検出を可能にする。
【０２１６】
別の一例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３Ｒａを７Ｇ３と接触させる前にＩＬ−３Ｒａと結合してよい。免疫グロブリンの存在下において結合した７Ｇ３量の、免疫グロブリンの不在下と比較した低下は、免疫グロブリンが、ＩＬ−３Ｒａと７Ｇ３の結合を競合的に阻害することを示す。標識免疫グロブリンを用いて、また、先ず７Ｇ３をＩＬ−３Ｒａと結合することにより、相互アッセイを行うことができる。この場合、７Ｇ３の存在下でＩＬ−３Ｒａと結合した標識免疫グロブリン量の、７Ｇ３の不在下と比較した低下は、免疫グロブリンが、７Ｇ３とＩＬ−３Ｒａの結合を競合的に阻害することを示す。
【０２１７】
別の一例において、免疫グロブリンによって結合されたエピトープは、７Ｇ３によって結合されたエピトープと同一又は重複しているか決定するようマッピングされる。エピトープマッピング法は、当業者であれば理解できるであろう。例えば、ＩＬ−３Ｒａ配列に亘る一連の重複ペプチド、例えば、１０〜１５アミノ酸を含むペプチドが産生される。次に、免疫グロブリンは各ペプチドと接触され、免疫グロブリンと結合するペプチド（複数可）が決定される。この操作は、免疫グロブリンが結合するエピトープを含むペプチド（複数可）の決定を可能にする。複数の非隣接ペプチドが免疫グロブリンによって結合される場合、免疫グロブリンは、立体構造エピトープと結合することができる。
【０２１８】
或いは、又は更に、ＩＬ−３Ｒａ内のアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発により変異導入され、免疫グロブリン及び／又は７Ｇ３結合を低下又は阻害する変異が決定される。免疫グロブリンの結合を低下又は阻害するいずれかの変異は、免疫グロブリンによって結合されるエピトープ内に存在する可能性がある。
【０２１９】
或いは、又は更に、免疫グロブリンは、７Ｇ３が結合するエピトープを用いて産生され、よって、同一エピトープと結合する可能性がある。
【０２２０】
必要に応じて、ＩＬ−３Ｒａ又はそのエピトープに対する免疫グロブリンの解離定数（Ｋｄ）が決定される。ＩＬ−３Ｒａ結合免疫グロブリンの「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、一例において、放射標識ＩＬ−３Ｒａ結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。このアッセイは、滴定系列の非標識ＩＬ−３Ｒａの存在下で最小濃度の放射性ＩＬ−３Ｒａにより免疫グロブリンを平衡化する。洗浄して未結合ＩＬ−３Ｒａを除去した後、放射能の量を決定すると、この値はタンパク質のＫｄを示す。
【０２２１】
別の例において、Ｋｄ又はＫｄ値は、表面プラズモン共鳴アッセイを用いることにより、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を固定化ＩＬ−３Ｒａと共に用いることによって測定される。
【０２２２】
一部の例において、ＩＬ−３Ｒａとの結合に関して競合する可能性があるため、７Ｇ３と同様のＫｄ又はより高いＫｄを有するタンパク質が選択される。
【０２２３】
中和の決定
本開示の一部の例において、免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和することができる。
【０２２４】
受容体を介してリガンドのシグナル伝達を中和する免疫グロブリンの能力を評価するための種々のアッセイは、本技術分野で公知のものである。
【０２２５】
一例において、免疫グロブリンは、３Ｒａ鎖及び／又はＩＬ−３Ｒａ鎖とＩＬ−３ＲＰ鎖のヘテロ二量体と、ＩＬ−３との結合を低下又は阻害する。これらのアッセイは、標識ＩＬ−３及び／又は標識免疫グロブリンを用いて本明細書に記載されている競合的結合アッセイとして行うことができる。
【０２２６】
別の一例において、免疫グロブリンは、好塩基球からのＩＬ−３介在性ヒスタミン放出を低下又は阻害する。例えば、好塩基球を含む低密度の白血球は、ＩｇＥ、ＩＬ−３及び種々の濃度の免疫グロブリンと共にインキュベートされる。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ−３（陰性対照）を含まない。次に、ヒスタミン放出レベルは、標準技法、例えば、ＲＩＡを用いて評価される。ヒスタミン放出レベルを陽性対照に満たないレベルへと低下させる免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和すると考えられる。一例において、低下のレベルは、免疫グロブリン濃度と相関する。ＩＬ−３介在性ヒスタミン放出を評価するための例示的な方法は、例えば、Lopezら、J. Cell. Physiol.、145:69、1990に記載されている。
【０２２７】
更に別の一例において、免疫グロブリンは、白血病性細胞系ＴＦ−１のＩＬ−３介在性増殖を低下又は阻害する。例えば、ＴＦ−１細胞は、ＩＬ−３又はＧＭ−ＣＳＦなしで、増殖を停止するのに十分な時間（例えば、２４〜４８時間）培養される。次に、細胞は、ＩＬ−３及び種々の濃度の免疫グロブリンの存在下で培養される。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ−３（陰性対照）を含まない。次に、細胞増殖は、標準技法、例えば、３Ｈ−チミジン取り込みを用いて評価される。ＩＬ−３の存在下で細胞増殖を陽性対照に満たないレベルへと低下又は阻害する免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和すると考えられる。
【０２２８】
ＩＬ−３シグナル伝達中和を評価するための別のアッセイは、免疫グロブリンが、内皮細胞に対するＩＬ−３介在性効果を低下又は阻害するか否か決定するステップを含む。例えば、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ＩＬ−３（必要に応じて、ＩＦＮ−γと共に）及び種々の濃度の免疫グロブリンの存在下で培養される。次に、分泌されたＩＬ−６の量は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて評価される。対照細胞は、免疫グロブリン（陽性対照）又はＩＬ−３（陰性対照）を含まない。ＩＬ−３の存在下でＩＬ−６産生を陽性対照に満たないレベルへと低下又は阻害する免疫グロブリンは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和すると考えられる。
【０２２９】
本開示により、ＩＬ−３シグナル伝達の中和を評価するための他の方法が企図されている。
【０２３０】
エフェクター機能の決定
ＡＤＣＣ活性を評価するための方法は、本技術分野で公知のものである。
【０２３１】
一例において、ＡＤＣＣ活性のレベルは、５１Ｃｒ放出アッセイ、ユーロピウム放出アッセイ又は３５Ｓ放出アッセイを用いて評価される。これらアッセイのそれぞれにおいて、ＩＬ−３Ｒａを発現する細胞は、化合物が細胞によって取り込まれるのに十分な時間及び条件下で、記述されている化合物のうち１又は複数と共に培養される。３５Ｓ放出アッセイの事例において、ＩＬ−３Ｒａを発現する細胞は、標識アミノ酸が新規合成タンパク質へと取り込まれるのに十分な時間、３５Ｓ標識メチオニン及び／又はシステインと共に培養することができる。次に、細胞は、免疫グロブリンの存在下又は不在下、免疫エフェクター細胞、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び／又はＮＫ細胞の存在下で培養される。次に、細胞培養培地における５１Ｃｒ、ユーロピウム及び／又は３５Ｓの量が検出され、免疫グロブリンの不在下と比較した免疫グロブリンの存在下における増加は、免疫グロブリンがエフェクター機能を有することを示す。免疫グロブリンによって誘導されるＡＤＣＣレベルを評価するためのアッセイを開示する例示的な刊行物として、Hellstromら、Proc. Natl Acad. Sci. USA 55:7059〜7063、1986及びBruggemannら、J. Exp. Med. 7(5(5:1351〜1361、1987が挙げられる。
【０２３２】
免疫グロブリンによって誘導されるＡＤＣＣレベルを評価するための他のアッセイとして、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．米国カリフォルニア州）又はＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州）が挙げられる。
【０２３３】
或いは、又は更に、免疫グロブリンのエフェクター機能は、例えば、米国特許第７３１７０９１号明細書に記載されている通り、１又は複数のＦｃｙＲに対するその親和性を決定することにより評価される。
【０２３４】
Ｃ１ｑ結合アッセイは、免疫グロブリンが、Ｃ１ｑと結合でき、ＣＤＣを誘導できることを確認するために行うこともできる。補体活性化を評価するため、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoroら、J. Immunol. Methods 202:163、1996を参照）。
【０２３５】
治療有効性の評価
Ｉｎ Ｖｉｔｒｏアッセイ
本明細書に記載されている疾患又は状態、例えば、ループスを治療する免疫グロブリンの能力の評価に、種々のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが利用できる。
【０２３６】
例えば、ｐＤＣ及び／又は好塩基球又はそれらを含む細胞集団（例えば、ＰＢＭＣ）は、免疫グロブリン及び疾患又は状態において生じる細胞の誘導因子（例えば、ループスの場合はＣｐＧオリゴヌクレオチド及び／又は免疫複合体）の存在下又は不在下で培養される。次に、疾患又は状態の治療における免疫グロブリンの有効性は、例えば、ＥＬＩＳＡを用いて細胞培養培地に分泌されるＩＦＮａレベルを決定することにより評価される。或いは、又は更に、ヒスタミン分泌又はＩＬ−４、ＩＬ−６及び／又はＩＬ−１３分泌のレベルが評価される。これらサイトカインのうちいずれかのレベルの、免疫グロブリンの不在下（又はアイソタイプ対照免疫グロブリンの存在下）と比較した低下は、免疫グロブリンが疾患又は状態の治療に適切であることを示す。或いは、又は更に、細胞死のレベルが評価される。細胞死の増加（特に、他の細胞型の細胞死がバックグラウンドを超えて検出可能に増加しない、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の細胞死）は、疾患又は状態の治療に適切な免疫グロブリンを示す。この点について、本明細書で上に述べた通り、ＩＦＮａ等、サイトカインは、一部の疾患／状態、例えば、ループスにおいて役割を果たすと考えられる。従って、ＩＦＮａ産生を低下させる免疫グロブリンは、このような状態の治療に適切であると考えられる。
【０２３７】
Ｉｎ Ｖｉｖｏアッセイ
一例において、疾患又は状態を治療する免疫グロブリンの有効性は、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイを用いて評価される。
【０２３８】
例えば、免疫グロブリンが非ヒト動物（例えば、非ヒト霊長類）に投与され、循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数／レベルが評価される。投与前及び／又は免疫グロブリンが投与されていない対照哺乳動物と比較して、ｐＤＣ及び／又は好塩基球の数／レベルを低下させる免疫グロブリンは、疾患又は状態の治療に適切であると考えられる。
【０２３９】
別の一例において、ＩＦＮａ等、サイトカインのレベルは、哺乳動物の循環において例えば、ＥＬＩＳＡを用いて検出される。投与前及び／又は免疫グロブリンが投与されていない対照哺乳動物のレベルと比較してサイトカインレベルを低下させる免疫グロブリンは、疾患又は状態の治療に適切であると考えられる。ＩＦＮａ等、サイトカインは、一部の疾患／状態、例えば、ループスにおいて役割を果たすと考えられるため、ＩＦＮａ産生を低下させる免疫グロブリンは、このような状態の治療に適切であると考えられる。
【０２４０】
別の一例において、免疫グロブリンは、ループスの非ヒト哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類）モデルに投与される。例えば、ＳＬＥを患うヒトの血漿は、ＳＬＥモデルの作製に十分な時間及び条件下でカニクイザル等、非ヒト霊長類に注入される（例えば、Pincusら、Clin. Immunol.、105:141〜154、2002に記載）。免疫グロブリンは、非ヒト霊長類に投与され、例えば、本明細書に記載されているアッセイを用いてＳＬＥ症状におけるその効果が評価される。例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体及び／又は免疫複合体のレベルが評価される。１又は複数のＳＬＥ症状を低下させる免疫グロブリンは、ＳＬＥの治療に適切であると考えられる。
【０２４１】
治療される状態
本開示の方法により治療される疾患又は状態は、通常、Ｉ型インターフェロンに関連する又はそれに部分的に起因若しくは媒介され、及び／又はＩ型インターフェロンを産生する樹状細胞及び／又は好塩基球の欠乏化、除去若しくは少なくとも部分的な排除に対して応答性である。適宜、疾患又は状態は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群及び全身性強皮症（ＳＳｃ）等の強皮症から選択される。
【０２４２】
一例において、疾患又は状態はループスである。例えば、疾患又は状態は、円板状ループス、亜急性皮膚エリテマトーデス、薬剤誘発性ループス、新生児ループス、ループス腎炎又はＳＬＥである。
【０２４３】
特定の疾患又は状態はＳＬＥである。
【０２４４】
一例において、ＳＬＥは血清反応陰性ＳＬＥである、即ち、自己抗体によって特徴づけられない。従って、一例において、本開示の方法は、例えば、本明細書に記載されている自己抗体等、自己抗体の不在を検出することにより、血清反応陰性ＳＬＥを患う哺乳動物を同定するステップを更に含む。
【０２４５】
別の一例において、ＳＬＥは血清反応陽性ＳＬＥである。例えば、ＳＬＥは、抗核抗体（ＡＮＡ）、抗Ｃ１ｑ抗体、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体、抗Ｓｍ抗体、抗核リボヌクレオタンパク質抗体、抗リン脂質抗体、抗リボソームＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｒｏ抗体及び抗Ｌａ抗体等、自己抗体によって特徴づけられる。従って、一例において、本開示の方法は、例えば、本明細書に記載されている自己抗体等、自己抗体の存在を検出することにより、血清反応陽性ＳＬＥを患う哺乳動物を同定するステップを更に含む。
【０２４６】
自己抗体を検出するための方法は、当業者であれば理解できるであろう。例えば、被験体から得られた血清又は血漿試料を、抗体−抗原複合体が形成されるのに十分な時間及び条件下で抗原、例えばｄｓＤＮＡと接触させる。次に、その結果得られる複合体を、複合体が形成される時間及び条件下で、哺乳動物抗体（例えば、抗Ｆｃ抗体）と結合できる標識抗体と接触させ、標識の量を検出する。標識の検出は自己抗体の存在を示す。
【０２４７】
本明細書に記載されているいずれかの例における方法は、疾患若しくは状態を有する又は疾患若しくは状態の再発発症リスクがあることに基づいて、治療のための哺乳動物を選択するステップを更に含むことができる。このような状態及び疾患の具体例は、上述の通りである。
【０２４８】
例えば、ループスである又はループス発症若しくはその再発リスクのある個体は、自己抗体、例えば上述の自己抗体の検出に基づいて同定することができる。
【０２４９】
ＳＬＥの診断は、現在の米国リウマチ学会（ＡＣＲ）判断基準に追加的に又は代替的に従うことができる、及び／又は活動性疾患は、イギリス諸島ループス活動性グループ（British Isles Lupus Activity Group）（ＢＩＬＡＧ）の１つの「Ａ」判断基準若しくは２つのＢＩＬＡＧ「Ｂ」判断基準及び／又は欧州コンセンサスループス活動性基準（European Consensus Lupus Activity Measure）（ＥＣＬＡＭ）及び／又はループス活動性指数（Lupus Activity Index）（ＬＡＩ）及び／又は国立衛生研究所ＳＬＥ指数スコア（SLE Index Score）（ＳＩＳ）及び／又は全身性ループス活動性基準（Systemic Lupus Activity Measure）（ＳＬＡＭ）及び／又はＳＬＥ疾患活動性指数（SLE disease activity index）（ＳＬＥＤＡＩ）により定義することができる。Tanら、Arth Rheum 25、1982から適応されたＳＬＥの診断に用いられる一部の徴候、症状又は他の指標は、頬における発疹等の頬部発疹、円板状発疹又は紅斑（red raised patch）、皮膚発疹の発症又は増加をもたらす太陽光に対する反応等の光線過敏症、鼻又は口における潰瘍等の口腔潰瘍、２以上の末梢関節に関与する非びらん性関節炎（関節周りの骨が破壊されない関節炎）等の関節炎、漿膜炎、胸膜炎又は心膜炎、尿中の過剰なタンパク質（０．５ｇｍ／日を超える又はテストスティックで３＋）等の腎障害及び／又は細胞性円柱（尿及び／又は白血球及び／又は腎尿細管細胞に由来する異常要素）、神経学的徴候、症状若しくは他の指標、発作（痙攣）及び／又は薬物不在下の精神障害又はこのような効果の原因となることが知られている代謝障害並びに溶血性貧血若しくは白血球減少症（１立方ミリメートル当り４，０００細胞を下回る白血球数）若しくはリンパ球減少症（１立方ミリメートル当り１，５００未満のリンパ球）若しくは血小板減少症（１立方ミリメートル当り１００，０００未満の血小板）等の血液学的徴候、症状若しくは他の指標であり得る。白血球減少症及びリンパ球減少症は、２回以上の機会で検出されなければならない。血小板減少症は、それを誘導することが知られている薬物の不在下で検出されなければならない。本開示は、ループスのこれらの徴候、症状又は他の指標に限定されない。
【０２５０】
一例において、哺乳動物は、例えば、前述の基準のうち１又は複数により、重度のＳＬＥを患っていると診断されている。
【０２５１】
ループス再発を患うリスクのある哺乳動物もまた、前述の症状のうち１又は複数を提示する可能性があり、ループスの症状を以前に患ったことがある。或いは、又は更に、ループス再発を患うリスクのある哺乳動物は、ループスを以前に患ったことが知られており、エストロゲン療法及び／又はスルホンアミド薬及び／又はインターフェロンにより治療している。
【０２５２】
一例において、被験体は、シェーグレン（Sjorgen’s）症候群を患う。本明細書に記載されている各例は、シェーグレン症候群の治療に適宜変更して適用されると解釈するべきである。
【０２５３】
シェーグレン症候群は、自己抗体（例えば、抗核抗体（例えば、ＳＳＡ／Ｒｏ及びＳＳＢ／Ｌａ）、リウマトイド因子、アルファ−フォドリン及び／又は抗甲状腺抗体）、眼の乾き、唾液腺炎症及び／又は貧血を検出することにより診断することができる（或いは、シェーグレン症候群を患う被験体を選択できる）。
【０２５４】
一例において、シェーグレン症候群はループスを伴う、即ち、ループスを患う被験体において生じる。
【０２５５】
一例において、被験体は強皮症を患う。本明細書に記載されている各例は、強皮症の治療に適宜変更して適用されると解釈するべきである。
【０２５６】
一例において、強皮症は、限局性全身性強皮症（limited systemic scleroderma）又はびまん性全身性強皮症等、全身性強皮症である。
【０２５７】
強皮症は、自己抗体（例えば、抗トポイソメラーゼ抗体（びまん性全身性型の強皮症における）、抗セントロメア抗体（限局性全身性型の強皮症における）、抗Ｕ３抗体又は抗ＲＮＡポリメラーゼ抗体）、特に手指、足、顔及び首における皮膚のつっぱり又は皮膚の硬化を生じ得る皮膚の炎症の局所性又は広汎性徴候（発赤、腫れ、圧痛、そう痒及び疼痛）を検出することにより診断することができる（或いは強皮症を患う被験体を選択することができる）。種々の症状は、例えば、消化器系、肺及び血管にも生じ得る。
【０２５８】
一例において、強皮症はループスを伴う、即ち、ループスを患う被験体において生じる。
【０２５９】
一例において、哺乳動物は、この疾患又は状態の治療に用いられる別の化合物による治療に対し抵抗性である、それに対し適切に応答しない、或いはそれに不適である。例えば、哺乳動物は、コルチコステロイド及び／又は免疫抑制剤及び／又は抗マラリア剤及び／又はアザチオプリン及び／又はシクロホスファミド及び／又はミコフェノール酸モフェチル及び／又はメトトレキサート及び／又は抗ＴＮＦ抗体及び／又は抗ＣＤ２０抗体及び／又は抗ＩＬ６抗体及び／又は抗ＣＤ２２抗体による治療に対し抵抗性である、それに対し適切に応答しない、或いはそれに不適である。
【０２６０】
組成物
適宜、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリンの哺乳動物への投与のための組成物又は方法において、免疫グロブリンは、本技術分野において理解される通り、医薬的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤と組み合わされる。従って、本開示の一例は、医薬的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤と組み合わせた抗ＩＬ．３Ｒａ免疫グロブリンを含む医薬組成物を提供する。別の一例において、本開示は、哺乳動物への投与前に免疫グロブリンと組み合わせる又は混合するのに適切な、医薬的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含むキットを提供する。この例において、キットは、使用のための説明書を更に含むことができる。
【０２６１】
一般用語において、「担体、希釈剤又は賦形剤」は、任意の哺乳動物、例えば、ヒトに安全に投与することのできる固体若しくは液体の充填剤、結合剤、希釈剤、カプセル封入物質、乳化剤、湿潤剤、溶媒、懸濁化剤、コーティング剤又は滑沢剤を意味する。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.米国ニュージャージー州、1991)に記載されている通り、特定の投与経路に依存して、本技術分野で公知の様々な許容される担体、希釈剤又は賦形剤を用いることができる。
【０２６２】
ほんの一例として、担体、希釈剤又は賦形剤は、糖（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース）、澱粉、セルロース及びその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油及び合成モノ又はジグリセリドを含む油、低級アルコール、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝溶液、ステアリン酸ナトリウム又はマグネシウム等の滑沢剤、等張性生理食塩水並びに発熱物質不含水を含む群から選択することができる。例えば、担体、希釈剤又は賦形剤は、非経口投与に適合性又は適切である。非経口投与は、消化管を通らない任意の投与経路を含む。非経口投与の非限定的な例として、注射、注入等が挙げられる。具体例として、注射による投与として、静脈内、動脈内、筋肉内及び皮下注射が挙げられる。例えば、皮内、筋肉内及び皮下送達され得るデポー剤又は徐放性製剤による送達もまた企図される。
【０２６３】
併用療法
一例において、ＩＬ−３Ｒａと結合する免疫グロブリンは、組み合わせて、或いは追加的な治療ステップ又は治療用製剤の追加的な成分として、疾患又は状態、例えば、ループス（ＳＬＥ等）の治療に有用な別の化合物と組み合わせて投与される。
【０２６４】
例えば、他の化合物は抗炎症性化合物である。或いは、又は更に、他の化合物は、免疫抑制剤である。或いは、又は更に、他の化合物は、プレドニゾン及び／又はプレドニゾロン等、コルチコステロイドである。或いは、又は更に、他の化合物は、ヒドロキシクロロキン又はクロロキニン等、抗マラリア化合物である。或いは、又は更に、他の化合物は、メトトレキサートである。或いは、又は更に、他の化合物は、アザチオプリンである。或いは、又は更に、他の化合物は、シクロホスファミドである。或いは、又は更に、他の化合物は、ミコフェノール酸モフェチルである。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ又はオファツムマブ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＣＤ２２抗体（例えば、エプラツズマブ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブ又はアダリムマブ又はゴリムマブ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、アバタセプト、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＩＬ−６抗体である。或いは、又は更に、他の化合物は、抗ＢＬｙｓ抗体（例えば、ベリムマブ）等、ＢＬｙｓアンタゴニストである。
【０２６５】
投薬量及び投与のタイミング
疾患若しくは状態又はその再発の予防若しくは治療のため、活性薬剤（即ち、抗ＩＬ−３Ｒａ免疫グロブリン）の適切な投薬量は、治療される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、免疫グロブリンが予防目的で投与されるのか治療目的で投与されるのか、以前の治療法、患者の臨床歴及び免疫グロブリンに対する応答性並びに主治医の裁量に依存するであろう。特定の投薬レジメン、即ち、用量、タイミング及び反復は、特定の個体及び医師に評価される該個体の病歴に依存するであろう。通常、臨床医は、投薬量が所望の結果を得られる量に達するまで免疫グロブリンを投与するであろう。
【０２６６】
本開示の方法は、哺乳動物におけるループス（例えば、ＳＬＥ）等、疾患又は状態の症状の治療、寛解又は予防に、或いは哺乳動物の予後の改善に有用である。免疫グロブリンによる治療後に、ループスを患う哺乳動物におけるクオリティオブライフを改善することができ、ループスの症状を低下又は排除することができる。本開示の方法は、ループス発症又はその再発リスクのある個体におけるループスの発症遅延又は予防にも有用である。
【０２６７】
本明細書に記載されている免疫グロブリンのｉｎ ｖｉｖｏ投与のため、正常な投薬量は、１日間当り約１０ｎｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇ（個体体重）又はそれ以上に変動し得る。例示的な投薬量及びその範囲は、本明細書に記載されている。数日間以上に亘る反復投与のため、治療される疾患又は障害の重症度に応じて、治療は、所望の症状抑制が達成されるまで持続することができる。
【０２６８】
一部の例において、免疫グロブリンは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、或いは約２ｍｇ／ｋｇ又は約３ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ等、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の初期（又は負荷（loading））量で投与される。次に、免疫グロブリンは、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．４ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ等、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの間の維持量で投与することができる。維持量は、１０〜１５日毎、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日毎等、７〜３０日毎に投与することができる。
【０２６９】
一部の例において、免疫グロブリンは、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間等、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇの間、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇの間等、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの間、の用量で投与される。例えば、免疫グロブリンは、約０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．４ｍｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ等、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの間の用量で（例えば、より高い負荷量なしで）投与される。一部の例において、例えば、１０〜２２日毎、例えば、１０〜１５日毎、例えば、１０日又は１１日又は１２日又は１３日又は１４日又は１５日又は１６日又は１７日又は１８日又は１９日又は２０日又は２１日又は２２日毎等、７〜３０日毎に多数の用量が投与される。例えば、免疫グロブリンは、７日毎又は１４日毎又は２１日毎に投与される。
【０２７０】
一部の例において、免疫グロブリンは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ又は約２ｍｇ／ｋｇ又は約３ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ等、或いは、約１０ｍｇ／ｋｇ又は１５ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇ又は２５ｍｇ／ｋｇ等、約１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ等、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で（例えば、より低い維持量なしで）投与される。一部の例において、例えば、１４〜６０日毎等、１４〜７０日毎等、１０〜７０日毎、例えば、１４〜４０日毎又は１４〜３０日毎等、１４〜５０日毎に多数の用量が投与される。例えば、用量は、１４日又は２１日又は２５日又は２８日又は３５日又は４０日又は４２日又は４９日又は５０日又は５５日又は５７日又は６３日又は又は７０日毎に投与される。例えば、免疫グロブリンは、２１日毎又は２８日毎又は３５日毎又は４２日毎又は４９日毎又は５６日毎に投与される。
【０２７１】
一部の例において、治療開始時に、哺乳動物は、７日間連続又は６日間連続又は５日間連続又は４日間連続以下で免疫グロブリンを投与される。
【０２７２】
治療に対し適切に応答しない哺乳動物の場合、１週間に複数回の用量を投与することができる。或いは、又は更に、増加した用量を投与することができる。
【０２７３】
別の一例において、有害反応を経験している哺乳動物のため、初期（又は負荷）量を１週間の多数の日に、或いは多数の連続日に分割することができる。
【０２７４】
特定の免疫グロブリンの投薬量は、免疫グロブリンの１又は複数の投与をなされた哺乳動物において経験的に決定することができる。免疫グロブリンの有効性を評価するため、疾患又は状態、例えば、ループス（ＳＬＥ等）の臨床症状をモニターすることができる。
【０２７５】
本開示の方法における免疫グロブリンの投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与目的が治療であるか予防であるかということ、及び当業者にとって公知の他の要因に応じて、継続的であっても間欠的であってもよい。免疫グロブリンの投与は、前選択された期間に亘り基本的に継続的であっても、例えば、ループス（ＳＬＥ等）の発症中又は発症後におけるいずれかの一連の間隔を置いた（spaced）用量であってもよい。
【０２７６】
一例において、免疫グロブリンは、ＳＬＥの重症度を評価するスコア、例えば、ＢＩＬＡＧ判断基準及び／又はＥＣＬＡＭ及び／又はＬＡＩ及び／又はＳＩＳ及び／又はＳＬＡＭ及び／又はＳＬＥＤＡＩの低下を達成するよう投与される。例えば、免疫グロブリンによる治療は、ＢＩＬＡＧ及び／又はＳＬＥＤＡＩに従った１又は２又は３ポイントの低下を達成する。例えば、治療開始後１５週間又は治療開始後３０週間又は治療開始後５２週間まで低下は達成される。例えば、効果は、治療開始後約２０週間又は３０週間又は４０週間又は５０週間持続する。
【０２７７】
非限定的な実施例
実施例に用いた抗体命名法は、次の通りである。（ｉ）抗ＩＬ−３Ｒａマウスモノクローナル抗体（７Ｇ３と称する）、（ｉｉ）７Ｇ３とヒトＩｇＧ１定常ドメインとのキメラバージョン（ｃｈ７Ｇ３と称する）、（ｉｉｉ）７Ｇ３のヒト化ＩｇＧ１バージョン（ｈｚ７Ｇ３と称する）、（ｉｖ）Ｘｅｎｃｏｒ Ｖ９０、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ１／Ｇ２ Ｆｃ改変を含有する７Ｇ３のヒト化バージョン（ｈｚ７Ｇ３Ｖ１と称する）、（ｖ）Ｘｅｎｃｏｒ Ｖ２０９、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ Ｇ１／Ｇ２ Ｆｃ改変を含有する７Ｇ３のヒト化バージョン（ｈｚ７Ｇ３Ｖ２と称する）及び（ｖｉ）フコシル基転移酵素欠損ＣＨＯ細胞系を用いて産生されたｈｚ７Ｇ３のアフコシル化バージョン（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３と称する）。
【実施例１】
【０２７８】
ＩＬ−３Ｒａの発現
標準技法を用いてヒトからＰＢＭＣを同定し、系列特異的細胞表面マーカーと結合する抗体を用いて種々の細胞系列を単離した。Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、系列毎の細胞当りのＩＬ−３Ｒａ分子の数を決定した。図１に示す通り、ＩＬ−３Ｒａは、ｐＤＣ及び好塩基球において高度に発現し、検査した他の細胞系列においては低レベルであった。この限定的な発現パターンにより、ＩＬ−３Ｒａは、ｐＤＣ及び好塩基球を選択的に排除するよう設計された抗体に対して有用な標的となる。
【実施例２】
【０２７９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトｐＤＣの抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂ欠乏化
Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離により正常ドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳにおいて抗体なしで（抗体なし）、或いは１０μｇ／ｍｌ抗ｃｈ７Ｇ３又は１０μｇ／ｍｌ抗ｈｚ７Ｇ３Ｖ３と共に３７℃で種々の時間インキュベートした。９６ウェルＵ字底プレートにおいて２００μＬ容量で１×１０６細胞をルーチンに培養した。形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）数及び好塩基球数の解析をフローサイトメトリーにより決定した（それぞれ表１及び２）。フローサイトメトリーにより系列マーカー陰性（ＣＤ２０−、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９− ＣＤ５６−）、ＨＬＡ−ＤＲ陽性、ＣＤ１１ｃ陰性及びＩＬ−３Ｒａ陽性であるとしてヒトｐＤＣを同定した（フロー図におけるゲートボックス（gated box）を参照）。フローサイトメトリーにより、ヒト好塩基球を系列マーカー陰性（ＣＤ２０−、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９− ＣＤ５６−）、ＩｇＥ陽性及びＩＬ−３Ｒａ陽性であるとして同定した。Ｆｃ−ドメインに修飾を含有する抗ＩＬ−３Ｒａ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）は、早くも添加４時間後にＰＢＭＣからｐＤＣ及び好塩基球を欠乏化させ、ｐＤＣ及び好塩基球欠乏化を添加最大４８時間後まで維持した。エフェクター機能増強なしの抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｃｈ７Ｇ３）の添加は、添加２４時間後及び４８時間後に観察されたｐＤＣ数減少をもたらした。しかし、観察された効果は、実質的にｈｚ７Ｇ３Ｖ３で観察された効果に満たず、４８時間ではｐＤＣを実質的に完全には欠乏化しなかった。
【０２８０】
【表１】
【０２８１】
【表２】
【実施例３】
【０２８２】
非ヒト霊長類におけるＩｎ ｖｉｖｏでの抗ＩＬ−３ＲａによるｐＤＣ及び好塩基球欠乏化
オーストラリア国立霊長類センター（Australian National Primate Facility）にて、その標準操作手順に従って非ＧＬＰカニクイザルの非ヒト霊長類（ＮＨＰ）試験を行った。全プロトコール及びその修正は、動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）によって承認された。Ｆｃ−ドメインに抗体エフェクター機能を増強する改変を有する中和抗ＩＬ−３Ｒａ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）を、静脈内注入により未処理（naive）サルに単一用量投与した。種々の時点にて末梢血を採取し、ＮＨＰ好塩基球及びｐＤＣの解析をフローサイトメトリーにより行った。フローサイトメトリーにより、ＮＨＰ好塩基球をＩｇＥ＋／ＣＤ１２３陽性として同定した。フローサイトメトリーにより、ｐＤＣを系列マーカー陰性（ＣＤ２０−、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ５６−）、ＨＬＡ−ＤＲ陽性、ＣＤ１１ｃ陰性及びＩＬ−３Ｒａ陽性として同定した。
【０２８３】
ｈｚ７Ｇ３Ｖ３の投与は、全用量において、抗体投与後６時間もの早さで、末梢血における好塩基球及びｐＤＣ数を相当に低下させたことが明らかになった。この低下は、１１日目（好塩基球）又は１５日目（ｐＤＣ）のいずれかにおける両方の細胞型の用量依存性回復（return）前に８日間に亘り持続した（図２）。
【０２８４】
検査したその他の細胞型（好中球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球及び赤血球等）における有意な低下は、いずれの用量においてもサルに関しては観察されず、有害事象は観察されなかった。これらのデータは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３がｉｎ ｖｉｖｏで投与されるとｐＤＣ及び好塩基球を選択的に欠乏化させること、また、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３がこの系から排除されるとｐＤＣ及び好塩基球集団が回復できることを示す。
【実施例４】
【０２８５】
抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂのＡＤＣＣ活性のＩｎ ｖｉｔｒｏ比較
陰性選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）をメーカーによって詳述されている通りに用いて、２種の健常なバフィーコートからヒトｐＤＣ及びＮＫ細胞を単離した。１０μｇ／ｍｌの種々のバージョンの抗ＩＬ−３Ｒａ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ１、ｈｚ７Ｇ３Ｖ２及びｈｚ７Ｇ３Ｖ３）の存在下で、９６ウェルＵ字底プレートにおいて、最終容量１５０μＬ中に１０：１のＥ：Ｔ比でＮＫ細胞（エフェクター「Ｅ」＝１００，０００細胞）及びｐＤＣ（標的「Ｔ」＝１０，０００細胞）を共にインキュベートした。ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳにおける３７℃４時間インキュベーションの後、自己溶解（ｐＤＣ１−ＮＫｌ、ｐＤＣ２−ＮＫ２）及び同種異系間溶解（ｐＤＣ１−ＮＫ２、ｐＤＣ２−ＮＫ１）を試験した。ＬＤＨ ＣｙｔｏＴｏｘ ９６非放射性細胞傷害性キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞溶解を測定した。
【０２８６】
次の計算により特異的溶解を決定した：
特異的溶解＝［試料溶解−自発的溶解］／［最大の溶解 自発的溶解］×１００％
【０２８７】
最大の溶解は、終濃度０．７５％（ｖ／ｖ）となるようＥｘｔｒａｎ（商標）を添加することにより評価した。自発的溶解は、細胞単独（Ａｂなし）でウェル内で生じる溶解である。
【０２８８】
ＡＤＣＣ能力増強のために操作された抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂでは、抗ＩＬ−３Ｒａ抗体ｈｚ７Ｇ３と比較してｐＤＣ溶解の有意なレベルが観察された（図３）。
【実施例５】
【０２８９】
抗ＩＬ−３Ｒａ ｍＡｂによるインターフェロン産生の阻害
正常ドナーから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、抗体なし（０μｇ／ｍｌ）、増加用量（１、１０又は１００μｇ／ｍｌ）の抗ＩＬ−３Ｒ抗体ｈｚ７Ｇ３又はＦｃ−ドメインに抗体エフェクター機能を増強する改変を含有する抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３及びｈｚ７Ｇ３Ｖ１）と共に３７℃で１８時間インキュベートした。Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド（５μＭ）を添加して、形質細胞様樹状細胞を活性化した。活性化６時間後又は２４時間後のいずれかに上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮａ産生に関してアッセイした。図４に示す通り、抗体ｈｚ７Ｇ３の添加は、ＩＦＮａ産生の僅かな低下をもたらし、この効果は、抗体用量増加によって影響を受ける様子はなかった。対照的に、Ｆｃ−ドメインに修飾を含有する抗ＩＬ−３Ｐｖ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３及びｈｚ７Ｇ３Ｖ１）の添加は、全用量の抗体で活性化６時間後及び２４時間後の両方においてＰＢＭＣからＩＦＮａ産生を相当に低下させた。
【０２９０】
更なる試験において、正常ドナーからＰＢＭＣを単離し、抗体なし又は増加用量のｈｚ７Ｇ３Ｖ３又はアイソタイプ対照抗体と共に３７℃で１８時間インキュベートした。Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド（５μＭ）を添加して、ｐＤＣを活性化させた。活性化２４時間後に上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮｙ産生に関してアッセイした。ｈｚ７Ｇ３Ｖ３の添加は、ＰＢＭＣからＩＦＮａ産生を相当に低下させた。ｈｚ７Ｇ３Ｖ３によるｐＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ欠乏化は、ＴＬＲ−７／９リガンド、ＣｐＧで処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮａ産生の阻害と相関する（図５）。ＰＢＭＣへのＣｐＧの添加は、主にＴＬＲ−７／９アゴニストであるクロマチン成分を含有する、ＳＬＥ免疫複合体と同様の様式でＩＦＮａ産生を誘導する。これらのデータは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３が、末梢血細胞においてＴＬＲ−７／９アゴニストによって誘導されたＩＦＮａの供給源を効果的に排除できることを示す。データは、ｈｚ７Ｇ３Ｖ３の標的とならない末梢血中の他の細胞型が、ＴＬＲ−７／９刺激に対する応答におけるＩＦＮａ産生に関してｐＤＣの減少を相殺できないことも示す。
【０２９１】
更なる試験を行って、ＩＦＮａレベルの細胞欠乏化の効果を決定した。正常ドナーからＰＢＭＣを単離し、抗体なし（０μｇ／ｍｌ）、Ｆｃ−ドメインに抗体エフェクター機能を増強する改変を含有する中和抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）又は該抗体のＦａｂ領域（ｈｚ７Ｇ３ Ｆａｂ）の増加用量と共に３７℃で１８時間インキュベートした。Ｃ型ＣｐＧオリゴヌクレオチド（５μＭ）を添加して、ｐＤＣを活性化させた。活性化６時間後又は２４時間後に上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮａ産生に関してアッセイした。図６に示す通り、エフェクター機能を欠く中和抗ＩＬ−３Ｒ Ｆａｂ（ｈｚ７Ｇ３ Ｆａｂ）の添加は、ＩＦＮａ産生を低下させないが、Ｆｃ−ドメインに改変を含有する抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ｈｚ７Ｇ３Ｖ３）の添加は、活性化６時間後及び２４時間後の両方でＰＢＭＣにおけるＩＦＮａ産生を完全に阻害した。
【０２９２】
本明細書において参照されている各特許及び科学文書の開示、コンピュータプログラム及びアルゴリズムは、その全体を参照により本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物におけるループスを治療する方法であって、インターロイキン３受容体α（ＩＬ−３Ｒα）鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒαとの結合を競合的に阻害し、そして免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含み、前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない、前記方法。
【請求項２】
ループスが全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ３Ｒα鎖が、１又は複数のＩ型インターフェロンを産生するｐＤＣによって発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ３Ｒα鎖が、１又は複数のサイトカインを産生する好塩基球によって発現される、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項５】
免疫グロブリンが、モノクローナル抗体７Ｇ３と同じエピトープ又は重複するエピトープと結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
免疫グロブリンがＩＬ−３シグナル伝達を中和する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
免疫グロブリンが、抗体又はその抗原結合性フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗体がキメラ抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
キメラ抗体が、モノクローナル抗体７Ｇ３の可変領域を含むキメラ抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抗体がヒト化抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
ヒト化抗体が、モノクローナル抗体７Ｇ３に由来する相補性決定領域を含むヒト化抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ヒト化抗体が、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
抗体がヒト抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
免疫グロブリンがエフェクター機能を誘導できる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
エフェクター機能が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
免疫グロブリンによって誘導されたエフェクター機能のレベルが、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む場合の免疫グロブリンのレベルと比べて増強されている、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
エフェクター機能が、ｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３の機能と比べて増強されている、或いはそれを超える、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
免疫グロブリンが、アフコシル化されたＦｃ領域を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
免疫グロブリンがｈｚ７Ｇ３Ｖ３である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
免疫グロブリンが、免疫グロブリンによって誘導されたエフェクター機能を増強する１又は複数のアミノ酸配列置換を含むＦｃ部分を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
１又は複数のアミノ酸配列置換が、置換を含まないＦｃ部分と比較してＦｃ部分のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する親和性を増加させる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１又は複数のアミノ酸配列置換が、
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ；又は
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
免疫グロブリンが、ｈｚ７Ｇ３Ｖ１及びｈｚ７Ｇ３Ｖ２からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
免疫グロブリンを投与した後、哺乳動物における循環中の形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比較して少なくとも約５０％低下する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
免疫グロブリン投与の少なくとも約６時間後に、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比較して少なくとも約５０％低下する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び好塩基球の数が、免疫グロブリンを更に投与することなく投与後少なくとも７日間、免疫グロブリンを投与する前の哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比較して少なくとも約５０％低下する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
免疫グロブリンが哺乳動物に複数回投与され、投与間の期間が少なくとも約１１日間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
哺乳動物におけるループスの治療に用いるための医薬組成物であって、インターロイキン３受容体α（ＩＬ−３Ｒα）鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒαとの結合を競合的に阻害する免疫グロブリンと、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含み、前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除し、そして前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない、前記医薬組成物。
【請求項３０】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法に用いるためのキットであって、ＩＬ−３Ｒα鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒαとの結合を競合的に阻害する免疫グロブリン；医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤；及び前記キットを使用するための説明書を含み、前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除し、そして前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない、前記キット。
【請求項１】
哺乳動物におけるループスを治療する方法であって、インターロイキン３受容体α（ＩＬ−３Ｒα）鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒαとの結合を競合的に阻害し、そして免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除して、これにより哺乳動物におけるループスを治療する免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含み、前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない、前記方法。
【請求項２】
ループスが全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ３Ｒα鎖が、１又は複数のＩ型インターフェロンを産生するｐＤＣによって発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ３Ｒα鎖が、１又は複数のサイトカインを産生する好塩基球によって発現される、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項５】
免疫グロブリンが、モノクローナル抗体７Ｇ３と同じエピトープ又は重複するエピトープと結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
免疫グロブリンがＩＬ−３シグナル伝達を中和する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
免疫グロブリンが、抗体又はその抗原結合性フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗体がキメラ抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
キメラ抗体が、モノクローナル抗体７Ｇ３の可変領域を含むキメラ抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抗体がヒト化抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
ヒト化抗体が、モノクローナル抗体７Ｇ３に由来する相補性決定領域を含むヒト化抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ヒト化抗体が、配列番号３に記述されている配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号２に記述されている配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
抗体がヒト抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
免疫グロブリンがエフェクター機能を誘導できる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
エフェクター機能が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
免疫グロブリンによって誘導されたエフェクター機能のレベルが、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む場合の免疫グロブリンのレベルと比べて増強されている、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
エフェクター機能が、ｃｈ７Ｇ３又はｈｚ７Ｇ３の機能と比べて増強されている、或いはそれを超える、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
免疫グロブリンが、アフコシル化されたＦｃ領域を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
免疫グロブリンがｈｚ７Ｇ３Ｖ３である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
免疫グロブリンが、免疫グロブリンによって誘導されたエフェクター機能を増強する１又は複数のアミノ酸配列置換を含むＦｃ部分を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
１又は複数のアミノ酸配列置換が、置換を含まないＦｃ部分と比較してＦｃ部分のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する親和性を増加させる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１又は複数のアミノ酸配列置換が、
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ；又は
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵ付番方式に従ったＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
免疫グロブリンが、ｈｚ７Ｇ３Ｖ１及びｈｚ７Ｇ３Ｖ２からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
免疫グロブリンを投与した後、哺乳動物における循環中の形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比較して少なくとも約５０％低下する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
免疫グロブリン投与の少なくとも約６時間後に、哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び好塩基球の数が、免疫グロブリンを投与する前の哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比較して少なくとも約５０％低下する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び好塩基球の数が、免疫グロブリンを更に投与することなく投与後少なくとも７日間、免疫グロブリンを投与する前の哺乳動物における循環中のｐＤＣ及び／又は好塩基球の数と比較して少なくとも約５０％低下する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の免疫グロブリンを哺乳動物に投与するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
免疫グロブリンが哺乳動物に複数回投与され、投与間の期間が少なくとも約１１日間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
哺乳動物におけるループスの治療に用いるための医薬組成物であって、インターロイキン３受容体α（ＩＬ−３Ｒα）鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒαとの結合を競合的に阻害する免疫グロブリンと、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含み、前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除し、そして前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない、前記医薬組成物。
【請求項３０】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法に用いるためのキットであって、ＩＬ−３Ｒα鎖と結合してモノクローナル抗体７Ｇ３とＩＬ−３Ｒαとの結合を競合的に阻害する免疫グロブリン；医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤；及び前記キットを使用するための説明書を含み、前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球を欠乏化又は少なくとも部分的に排除し、そして前記免疫グロブリンは、免疫グロブリンが結合する細胞を殺傷する毒性化合物とコンジュゲートしていない、前記キット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１３−５１９６９０（Ｐ２０１３−５１９６９０Ａ）
【公表日】平成２５年５月３０日（２０１３．５．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５５３１４６（Ｐ２０１２−５５３１４６）
【出願日】平成２３年２月１７日（２０１１．２．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１１／０００１５５
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／１００７８６
【国際公開日】平成２３年８月２５日（２０１１．８．２５）
【出願人】（５０００２１４１３）シーエスエル、リミテッド (28)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年５月３０日（２０１３．５．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年２月１７日（２０１１．２．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１１／０００１５５
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／１００７８６
【国際公開日】平成２３年８月２５日（２０１１．８．２５）
【出願人】（５０００２１４１３）シーエスエル、リミテッド (28)
【Ｆターム（参考）】
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