ＮＹＨＡＩ患者についてのナトリウム利尿ペプチドによる心機能不全の診断および危険性層化
本発明の目的は、心機能不全の改善された診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法を提供することである。本発明は、ＮＹＨＡ Ｉ患者についての心機能不全の診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法に関し、ここでプロＡＮＰマーカー、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、試験されるべき患者に対するＢＮＰ、プロＢＮＰ、および／もしくはＮＴ−プロＢＮＰの決定と並行して行われる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＹＨＡ Ｉ患者についての心機能不全の診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法に関し、ここでプロＡＮＰマーカー、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、試験されるべき患者に対するＢＮＰ、プロＢＮＰ、および／もしくはＮＴ−プロＢＮＰの決定と並行して行われる。
【背景技術】
【０００２】
欧州では、急性の息切れの症状を有する約１００万人の患者が、１年間に、病院の救急救命室を訪れている。息切れは、多くの疾患の主な症状であり、上記場合のうちの約３５〜４７％においては、心機能不全に帰し得る（非特許文献１および非特許文献２）。
【０００３】
初期段階では、上記患者はしばしば、心機能不全にほとんど気づかない。処置しなければ、上記疾患は、重篤度が増し、後期段階では、安静時ですら完全な肉体的疲労に至る。全ての身体器官（心筋自体を含む）の供給不足は、この段階において死に至り得る。一旦上記疾患が進行してしまうと、寿命は、最適な治療をもってしても非常に短くなる（１年あたり約３０％が死亡）。従って、任意の心機能不全をできる限り早期に認識し、そしてｔｏ 結果として、その原因に対処することが重要である。
【０００４】
従って、適切な治療を始めるために、初期段階で根底にある疾患の初期診断および区別が、ならびに救急治療および集中治療においても、必要とされる。非特異的症状（息切れ、咳）に起因して、心機能不全および他の疾患の区別および範囲の決定の両方が、しばしば悪化する。
【０００５】
試験は、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰもしくはＮＴプロＢＮＰ）の血漿濃度の決定によって利用可能であり、脳性ナトリウム利尿ペプチドは、心機能不全の慣用的な診断に首尾良く利用されている（Ｍａｉｓｅｌら．（前出））。ＮＴ−プロＢＮＰは、心機能不全を追跡するために、先行技術に従って利用される。先行技術によれば、プロＡＮＰはまた、マーカーとして記載されてきた。ＵＳ５４９８５２４は、無症候性の患者における心機能不全の診断のためのプロＡＮＰの使用を記載している。ＥＰ７２１１０５Ｂ１は、心疾患のための適切な抗体によってプロＡＮＰを決定するための方法を記載している。
【０００６】
しかし、先行技術によれば、心機能不全を示す患者の、特に、診断、危険性層化、および結果予後を改善することが大いに求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊａｎｕｚｚｉ ＪＬ Ｊｒ，Ｃａｍａｒｇｏ ＣＡ，Ａｎｗａｒｕｄｄｉｎ Ｓ，Ｂａｇｇｉｓｈ ＡＬ，Ｃｈｅｎ ＡＡ，Ｋｒａｕｓｅｒ ＤＧ，Ｔｕｎｇ Ｒ，Ｃａｍｅｒｏｎ Ｒ，Ｎａｇｕｒｎｅｙ ＪＴ，Ｃｈａｅ ＣＵ，Ｌｌｏｙｄ−Ｊｏｎｅｓ ＤＭ，Ｂｒｏｗｎ ＤＦ，Ｆｏｒａｎ−Ｍｅｌａｎｓｏｎ Ｓ，Ｓｌｕｓｓ ＰＭ，Ｌｅｅ−Ｌｅｗａｎｄｒｏｗｓｋｉ Ｅ，Ｌｅｗａｎｄｒｏｗｓｋｉ ＫＧ，Ｔｈｅ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒｏＢＮＰ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｓｐｎｅａ ｉｎ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ （ＰＲＩＤＥ） ｓｔｕｄｙ，Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．９５（８）（２００５），ｐｐ．９４８−９５４
【非特許文献２】Ｍａｉｓｅｌ ＡＳ，Ｋｒｉｓｈｎａｓｗａｍｙ Ｐ，Ｎｏｗａｋ ＲＭ，ＭｃＣｏｒｄ Ｊ，Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ ＪＥ，Ｄｕｃ Ｐ，Ｏｍｌａｎｄ Ｔ，Ｓｔｏｒｒｏｗ ＡＢ，Ａｂｒａｈａｍ ＷＴ，Ｗｕ ＡＨ，Ｃｌｏｐｔｏｎ Ｐ，Ｓｔｅｇ ＰＧ，Ｗｅｓｔｈｅｉｍ Ａ，Ｋｎｕｄｓｅｎ ＣＷ，Ｐｅｒｅｚ Ａ，Ｋａｚａｎｅｇｒａ Ｒ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ ＨＣ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ＰＡ；Ｂｒｅａｔｈｉｎｇ Ｎｏｔ Ｐｒｏｐｅｒｌｙ Ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｕｄｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ，Ｒａｐｉｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｂ−ｔｙｐｅ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３４７（３）（２００２），ｐｐ．１６１−１６７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明の目的は、心機能不全の改善された診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法を提供することである。
【０００９】
しかし、現在公知のマーカーを利用する公知の診断方法の１つの欠点は、危険性のある患者の初期のおよび完全な検出が十分に達成されていないことであり、従って、危険性層化は、不十分にしか行われていない。本発明のさらなる目的は、危険性のある患者、特に、患者の亜群についての改善された検出を可能にする、心機能不全の危険性層化のための方法を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
驚くべきことには、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行して、プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド（特に、ＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド）を決定する際に、心機能不全の診断、危険性層化、および結果予後の改善が、実際に、無症候性のいかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）において、特にいかなる不快感もない左心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）において、達成され得ることが示された。
【００１１】
従って、上記目的は、請求項１に記載の方法（本明細書中以降、本発明の方法といわれる）によって解決される。
【００１２】
従って、本発明の方法は、特に有利な様式において、クラスＮＹＨＡ Ｉの患者について診断および予後の誘意性（ｖａｌｅｎｃｅ）の改善を可能にする。
【００１３】
本発明の最も好ましい実施形態において、患者は、少なくとも３０ｋｇ／ｍ２のボディーマス指数（ＢＭＩ）をさらに有する。これは、診断および予後の誘意性をさらに顕著に改善する、さらなるパラメーターである。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ＭＲ−プロＡＮＰについての曲線下面積（ＡＵＣ）＝０．６６５およびＮＴ−プロＢＮＰについての曲線下面積＝０．５３３を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の範囲内において、「心機能不全」とは、安静時もしくは負荷時の間に組織代謝を確保するために、心臓が急性的にもしくは慢性的に十分に血液を供給できない、および結果として、十分な酸素を組織に供給できないことを意味する。臨床的観点からは、収縮機能もしくは拡張機能疾患の意味で心機能障害に本来基づく代表的な症状（呼吸困難、疲労、流体保持）が存在する場合、心機能不全が存在する。本発明はまた、慢性心機能不全（ＣＨＦ）を含む（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｍｅｗｉｓ，Ｒｅｉｍｅｒ Ｒｉｅｓｓｅｎ，およびＩｏａｋｉｍ Ｓｐｙｒｉｄｏｐｏｕｌｏｓによって刊行されたＫａｒｄｉｏｌｏｇｉｅ ｃｏｍｐａｃｔ，第２版（無改訂），Ｔｈｉｅｍｅ ２００６）。心機能不全の原因は、高血圧（ｈｉｇｈ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）（高血圧（ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ））、および／もしくは冠動脈のアテローム硬化（石灰化）（冠動脈心疾患）に加えて、心臓弁欠損（すなわち、リウマチ熱の後期の効果として）、心筋炎（心筋炎症）、心不整脈、心臓発作であり得る。本発明は、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患および腎疾患をさらに含む。本発明は、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）を有する患者に関する（ＮＹＨＡ＝Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎの分類（Ｈｏｐｐｅ ＵＣら：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｃａｒｄｉａｃ Ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ． Ｚ Ｋａｒｄｉｏｌ（２００５）９４：４８８−５０９））。
【００１６】
本発明によれば、用語「危険性層化」とは、可能な限り有望な経過の目的とともに、患者、特に救急救命室患者、ならびに機能不全のより集中的な診断および治療／処置を可能にするという目的で、より悪化した予後の危険性のあるもしくはより悪化した予後を有する患者を見いだすことを包含する。次に、危険性層化は、本発明によれば、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）に関して与えられる有効な処置方法を可能にする。
【００１７】
最も有利なことには、安全な診断もしくは結果予後は、特に、救急医療および／もしくは集中医療の場合において、本発明の方法によって行われ得る。本発明の方法は、迅速な治療的成功をもたらす臨床的決定を可能にする。このような臨床的決定はまた、心機能不全の処置もしくは治療のための薬物療法（例えば、ＡＣＥインヒビター、ＡＴ１アンタゴニスト：アンギオテンシン−ＩＩレセプターの遮断薬（サブタイプ１）、β遮断薬である、Ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ、Ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ、Ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ、およびＮｅｂｉｖｏｌｏｌ、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、ＮＹＨＡステージＩＩＩ以上からアルドステロンアンタゴニスト、カルシウム増感剤（Ｌｅｖｏｓｉｍｅｎｄａｎ））による継続処置を含む。
【００１８】
従って、さらに好ましい実施形態において、本発明の方法は、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）の治療制御に関する。
【００１９】
従って、本発明はまた、患者の危険性層化のための、特に、臨床的決定のための患者の層化のための、好ましくは、年代順に重要な集中医療もしくは緊急医療において、および上記患者の入院のための方法に関する。
【００２０】
本発明の方法のさらに好ましい実施形態において、上記診断は、予後に関して、好ましくは、結果予後に関して、鑑別診断的初期検出および検出のため、重篤度の評価のため、およびいかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）を有する患者の経過の評価に付随する治療のために行われる。
【００２１】
本発明の方法のさらなる実施形態において、体液（特に、血液、必要に応じて、全血もしくは血清）は、試験されるべき患者から採取され、上記診断は、インビトロ／エキソビボ（例えば、ヒトもしくは動物の身体の外で）行われる。上記診断は、少なくとも１つの患者サンプルにおいて、上記マーカー、プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド（特に、ＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド）、およびその既存の量の決定に基づいて、行われ得る。マーカー、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定は、少なくとも１つの患者サンプルにおいて、本発明に従って、その既存の量において、並行して行われる。
【００２２】
用語「プロＡＮＰ」（同様に、ＮＴ−プロＡＮＰ）は、本発明の範囲内において、９８アミノ酸を含む心房性ナトリウム利尿ペプチド、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの遊離ポリペプチド／タンパク質を意味する。Ｎ末端フラグメントプロＡＮＰ（ＡＳ １−９８）は、１２６アミノ酸からなるプロホルモン「プロＡＮＰ」（ＡＳ １〜１２６、配列番号１を参照のこと）からの循環するホルモンα−ＡＮＰ（２８ＡＳを有する９９〜１２６）の分離から作り出され、筋内分泌細胞の分泌顆粒中に貯蔵され、そして本発明において含まれる。さらに、本発明のポリペプチドは、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、脂質化、もしくは誘導体化）を有し得る。特に、ＮＴ−プロＡＮＰ（ＡＳ １〜９８）は、血漿中において特に安定である。
【００２３】
本発明の範囲内において、フラグメントおよび部分ペプチドは、特に、ＮＴ−プロＡＮＰ（１−９８）もしくはプロＡＮＰ（１〜１２６）のＡＳ ５０〜９０の中央領域に関し得、本発明によれば、ＮＴ−プロＡＮＰ（１〜９８）（ＭＲ−プロＡＮＰともいわれる。ＷＯ２００４０４６１８１および配列番号１を参照のこと）のＡＳ ５３〜９０を有するフラグメントもしくは部分ペプチドが、特に好ましい。適切なアッセイは、ＷＯ２００４０４６１８１Ａ１（ＢＲＡＨＭＳ ＡＧ）において開示される。ＮＴ−プロＡＮＰ（ＡＳ １〜９８）もまた、好ましい。本発明は、そのフラグメント（α）−ＡＮＰ（ＡＳ ９９〜１２６）を含む。
【００２４】
本発明の範囲内において、ＢＮＰ（ＡＳ ７７〜１０８）は、Ｂ−タイプナトリウム利尿ペプチドを意味する。これは、プロホルモン、プロＢＮＰ（ＡＳ １〜１０８、配列番号２を参照のこと）から分離され、ここで上記ＮＴ−プロＢＮＰ（ＡＳ １〜７６）は、同時に作り出される。本発明によれば、ＮＴ−プロＢＮＰが好ましい。
【００２５】
「並行した決定」とは、上記決定が、特に、同時に行われるか、または十分な割り当てもしくは組み合わせ評価を少なくとも可能にすることを意味する。
【００２６】
さらなる実施形態において、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、さらなるマーカー（好ましくは、心機能不全を既に示すもの）に加えて、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、および／もしくはＮＴ−プロＢＮＰの決定と並行して行われ得、そして本発明の方法においてマーカー組み合わせの相乗効果を可能にする。
【００２７】
従って、本発明は、上記決定が、試験されるべき患者に対して、炎症マーカー、心血管マーカー、もしくは虚血マーカーの群からの少なくとも１種のさらなるマーカーを伴って、さらに選択される、本発明の方法のこのような実施形態に関する。
【００２８】
本発明によれば、上記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−６）、プロカルシトニン（１〜１１６，３〜１１６）、および接着分子（例えば、ＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭ）の群からの少なくとも１種のマーカーから選択され得、そして上記心血管マーカーは、クレアチンキネシス、ミエロペルオキシダーゼ酵素作用、コペプチン、ミオグロビン、心筋トロポニン、ＣＲＰの群からの少なくとも１種のマーカーから選択され得る。さらに、これらはまた、循環調節性（プロ）ホルモン、特に、例えば、プロガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロエンドセリン（プロＥｎｄ）、プロレプチン、プロニューロペプチド−Ｙ、プロソマトスタチン、プロニューロペプチド−ＹＹ、プロオピオメラノコルチン、プロアドレノメデュリン（プロＡＤＭ）、コペプチン、またはこれらの部分配列を意味する。
【００２９】
上記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびトロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢの群からの少なくとも１種の マーカーから選択され得る。
【００３０】
本発明のさらなる実施形態において、本発明の方法は、上記マーカーの並行決定もしくは同時決定によって行われ得（すなわち、９６個以上の穴を有するマルチタイタープレート）、ここで上記決定は、少なくとも１つの患者サンプルに対して行われる。
【００３１】
さらに、本発明の方法およびその決定は、自動分析機、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ／）によって行われ得る。
【００３２】
さらなる実施形態において、本発明の方法およびその決定は、迅速試験（例えば、ラテラルフロー試験）によって、好ましくは、マルチパラメーター決定において、行われうる。
【００３３】
本発明のさらなる目的は、上記マーカー、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行した、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための、試験されるべき患者に対するマーカー、プロＡＮＰもしくはＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの使用に関する。ＭＲ−プロＡＮＰは、好ましいフラグメントもしくは部分ペプチドである。本発明に従う使用はまた、上記のさらなる実施形態に関する。
【００３４】
以下の実施例および図面は、本発明の詳細な説明の役に立つが、上記実施例および図面に本発明を限定しない。
【実施例】
【００３５】
（実施例および図面）
実施例１：ＮＨＹＡクラス１を有する患者：生存／死亡のための受信者動作特性（ＲＯＣ，ＳｔａｔＶｉｅｗ ５．０ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）（Ａｂａｃｕｓ，Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｂｅｒｋｌｅｙ，Ｃａｎａｄａ，ａｎｄ ＭｅｄＣａｌｃ，Ｂｒｏｅｋｓｔｒａａｔ，Ｍａｒｉａｋｅｒｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ））分析。ＭＲ−プロＡＮＰを、上記患者の血漿から単離し、−８０℃で凍結した。ＭＲ−プロＡＮＰを検出するために、サンドイッチアッセイ（ＬＩＡ）を、ＢＲＡＨＭＳ ＡＧによるＷＯ２００４０４６１８１に従って利用した（Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒら． Ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｉｄｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ−ａｔｒｉａｌ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ，２００４；５０：２３４−２３６）。
【００３６】
ＮＴ−プロＢＮＰを、ＥＬＩＣＩＡ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって決定した。
【００３７】
試験個体の数ｎ＝６６／７名の患者は死亡した。
【００３８】
図１は、ＭＲ−プロＡＮＰについての曲線下面積（ＡＵＣ）＝０．６６５およびＮＴ−プロＢＮＰについての曲線下面積＝０．５３３を示す
ＭＲ−プロＡＮＰ：０．６６５−０．５（有意でない）：０．１６５
ＮＴ−プロＢＮＰ：０．５３３−０．５（有意でない）：０．０３３
０．１６５／０．０３３＝５
従って、このことは、ＮＨＹＡクラス１における患者の亜群におけるＮＴ−プロＢＮＰと比較して、５倍より高いＭＲ−プロＡＮＰについての診断誘意性（生存／死亡の考察）を生じる。
【００３９】
（実施例２）
Ｃｏｘ回帰による、ＮＴ−プロＢＮＰと比較した、ＭＲ−プロＡＮＰの増大した予後誘意性の確認
一変量分析：
アプローチ：メジアンを、ＮＹＨＡ−１患者の亜群において、両方のマーカー（ＭＲ−プロＡＮＰおよびＮＴ−プロＢＮＰ）について計算した；
このことは、ＮＴ−プロＢＮＰについてのメジアンを生じ、このメジアンは、ＭＲ−プロＡＮＰについてより３．７倍高い。従って、ＮＴ−プロＢＮＰについての危険比を、Ｃｏｘ分析においてＭＲ−プロＡＮＰのものより３．７倍高い濃度で計算した。
【００４０】
上記一変量Ｃｏｘ比例ハザード分析の結果：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＭＲ−プロＡＮＰ
（100pmol／Lあたりの増加） 6.758 2.517(1.255-5.047) 0.009
ＮＴ−プロＢＮＰ
（370pg/ml 増加） 0.383 1.107(0.803-1.525) 0.536
有意な結果がＮＴ−プロＢＮＰについては得られなかった（ｐ＝０．５３６）という事実とは無関係に、ＮＴ−プロＢＮＰ（１．１０７）と比較して、ＭＲ−プロＡＮＰについての危険比２．５１７は、ＮＹＨＡ−１患者の亜群における改善を例示する。危険比１，０００は、濃度単位あたりの死亡の危険性が増大していないことを示す。ＭＲ−プロＡＮＰについては、危険比２．５１７は、単位（ここでは１００ｐｍｏｌ／Ｌ）あたりの死亡の危険性が、１５１．７％まで増大することを意味する。これは、ＮＴ−プロＢＮＰと比較して、１４．２倍高い危険性の増大である。
【００４１】
多変量モデル：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＬＮ ＭＲ−プロＡＮＰ 5.861 25.554(1.854-352.272) 0.015
ＬＮ ＮＴ−プロＢＮＰ 2.093 0.429(0.136-1.350) 0.148
年齢 1.673 0.943(0.863-1.031) 0.196
この結果は、繰り返すと、ＭＲ−プロＡＮＰを使用して得られる改善を示す。なぜなら、ＭＲ−プロＡＮＰは、ＮＴ−プロＢＮＰおよび年齢を有するモデルにおいてＮＹＨＡ−１亜群における死亡についての単一の独立した予測量として残っているからである（ｐ＝０．０１５）。
【００４２】
（実施例３：ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２を有する患者）
Ｃｏｘ回帰によって、ＮＴ−プロＢＮＰと比較した、ＭＲ−プロＡＮＰの予後誘意性の増加の分析（試験患者数：ｎ＝１１４；３６名の患者が死亡した）
一変量分析：
アプローチ：メジアンを、ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２を有する患者の亜群において、両方のマーカー（ＭＲ−プロＡＮＰおよびＮＴ−プロＢＮＰ）について計算した；このことは、ＮＴ−プロＢＮＰについてのメジアンを生じた。このメジアンは、ＭＲ−プロＡＮＰについてより５倍高い。従って、ＮＴ−プロＢＮＰについての危険比は、Ｃｏｘ分析におけるＭＲ−プロＡＮＰのものより５倍高い濃度で計算した。
【００４３】
一変量Ｃｏｘ比例ハザード分析の結果：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＭＲ−プロＡＮＰ
（100pmol/L 増加） 14.414 1.503(1.217-1.855) ＜0.0001
ＮＴ−プロＢＮＰ
（370pg/ml 増加） 0.662 1.024(0.963-1.094) 0.416
有意な結果がＮＴ−プロＢＮＰについては得られなかった（ｐ＝０．４１６）という事実とは無関係に、ＮＴ−プロＢＮＰ（１．０２４）と比較して、ＭＲ−プロＡＮＰについての危険比１．５０３は、ＢＭＩ≧３０を有する患者の亜群の利点を意味した。危険比１，０００は、濃度単位あたりの死亡の危険性が増大していないことを示す。従って、ＭＲ−プロＡＮＰについて、危険比１．５０３は、単位（ここでは１００ｐｍｏｌ／Ｌ）あたりの死亡の危険性が５０．３％まで増大することを意味する。これは、ＮＴ−プロＢＮＰと比較して、２１倍高い危険性の増加である。
【００４４】
多変数モデル：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＬＮ ＭＲ−プロＡＮＰ 7.198 2.776(1.317-5.854) 0.007
ＬＮ ＮＴ−プロＢＮＰ 0.005 0.985(0.644-1.506) 0.943
この結果は、繰り返すと、上記ＭＲ−プロＡＮＰの予後増大を示す。なぜなら、ＭＲ−プロＡＮＰは、ＮＴ−プロＢＮＰを有するモデルにおいてＢＭＩ≧３０を有する患者の亜群における死亡についての単一の独立した予測値として残っているからである（ｐ＝０．００７）。しかし、ＮＴ−プロＢＮＰは、独立した予測値ではない。
【００４５】
【表１】
【００４６】
【表２】
表３：NewYork Heart Associationによる分類
(NYHA)
NYHA I 物理的制限なし。日常的な肉体的労作は、不適当な疲労、律動障害、息切れ、狭心症のいずれも引き起こさない。
NYHA II 肉体的能力の軽度の制限。安静時には症状は認められない。日常的な肉体的労作によって、疲労、律動障害、息切れもしくは狭心症。
NYHA III 通常の活動で肉体的能力のより高度の制限。安静時には症状は認められない。わずかな肉体的労作によって、疲労、律動障害、息切れもしくは狭心症。
NYHA IV 全ての肉体的活動および安静時の不快感。ベッドに拘束される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＹＨＡ Ｉ患者についての心機能不全の診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法に関し、ここでプロＡＮＰマーカー、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、試験されるべき患者に対するＢＮＰ、プロＢＮＰ、および／もしくはＮＴ−プロＢＮＰの決定と並行して行われる。
【背景技術】
【０００２】
欧州では、急性の息切れの症状を有する約１００万人の患者が、１年間に、病院の救急救命室を訪れている。息切れは、多くの疾患の主な症状であり、上記場合のうちの約３５〜４７％においては、心機能不全に帰し得る（非特許文献１および非特許文献２）。
【０００３】
初期段階では、上記患者はしばしば、心機能不全にほとんど気づかない。処置しなければ、上記疾患は、重篤度が増し、後期段階では、安静時ですら完全な肉体的疲労に至る。全ての身体器官（心筋自体を含む）の供給不足は、この段階において死に至り得る。一旦上記疾患が進行してしまうと、寿命は、最適な治療をもってしても非常に短くなる（１年あたり約３０％が死亡）。従って、任意の心機能不全をできる限り早期に認識し、そしてｔｏ 結果として、その原因に対処することが重要である。
【０００４】
従って、適切な治療を始めるために、初期段階で根底にある疾患の初期診断および区別が、ならびに救急治療および集中治療においても、必要とされる。非特異的症状（息切れ、咳）に起因して、心機能不全および他の疾患の区別および範囲の決定の両方が、しばしば悪化する。
【０００５】
試験は、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰもしくはＮＴプロＢＮＰ）の血漿濃度の決定によって利用可能であり、脳性ナトリウム利尿ペプチドは、心機能不全の慣用的な診断に首尾良く利用されている（Ｍａｉｓｅｌら．（前出））。ＮＴ−プロＢＮＰは、心機能不全を追跡するために、先行技術に従って利用される。先行技術によれば、プロＡＮＰはまた、マーカーとして記載されてきた。ＵＳ５４９８５２４は、無症候性の患者における心機能不全の診断のためのプロＡＮＰの使用を記載している。ＥＰ７２１１０５Ｂ１は、心疾患のための適切な抗体によってプロＡＮＰを決定するための方法を記載している。
【０００６】
しかし、先行技術によれば、心機能不全を示す患者の、特に、診断、危険性層化、および結果予後を改善することが大いに求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊａｎｕｚｚｉ ＪＬ Ｊｒ，Ｃａｍａｒｇｏ ＣＡ，Ａｎｗａｒｕｄｄｉｎ Ｓ，Ｂａｇｇｉｓｈ ＡＬ，Ｃｈｅｎ ＡＡ，Ｋｒａｕｓｅｒ ＤＧ，Ｔｕｎｇ Ｒ，Ｃａｍｅｒｏｎ Ｒ，Ｎａｇｕｒｎｅｙ ＪＴ，Ｃｈａｅ ＣＵ，Ｌｌｏｙｄ−Ｊｏｎｅｓ ＤＭ，Ｂｒｏｗｎ ＤＦ，Ｆｏｒａｎ−Ｍｅｌａｎｓｏｎ Ｓ，Ｓｌｕｓｓ ＰＭ，Ｌｅｅ−Ｌｅｗａｎｄｒｏｗｓｋｉ Ｅ，Ｌｅｗａｎｄｒｏｗｓｋｉ ＫＧ，Ｔｈｅ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒｏＢＮＰ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｓｐｎｅａ ｉｎ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ （ＰＲＩＤＥ） ｓｔｕｄｙ，Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．９５（８）（２００５），ｐｐ．９４８−９５４
【非特許文献２】Ｍａｉｓｅｌ ＡＳ，Ｋｒｉｓｈｎａｓｗａｍｙ Ｐ，Ｎｏｗａｋ ＲＭ，ＭｃＣｏｒｄ Ｊ，Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ ＪＥ，Ｄｕｃ Ｐ，Ｏｍｌａｎｄ Ｔ，Ｓｔｏｒｒｏｗ ＡＢ，Ａｂｒａｈａｍ ＷＴ，Ｗｕ ＡＨ，Ｃｌｏｐｔｏｎ Ｐ，Ｓｔｅｇ ＰＧ，Ｗｅｓｔｈｅｉｍ Ａ，Ｋｎｕｄｓｅｎ ＣＷ，Ｐｅｒｅｚ Ａ，Ｋａｚａｎｅｇｒａ Ｒ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ ＨＣ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ＰＡ；Ｂｒｅａｔｈｉｎｇ Ｎｏｔ Ｐｒｏｐｅｒｌｙ Ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｕｄｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ，Ｒａｐｉｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｂ−ｔｙｐｅ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３４７（３）（２００２），ｐｐ．１６１−１６７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明の目的は、心機能不全の改善された診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法を提供することである。
【０００９】
しかし、現在公知のマーカーを利用する公知の診断方法の１つの欠点は、危険性のある患者の初期のおよび完全な検出が十分に達成されていないことであり、従って、危険性層化は、不十分にしか行われていない。本発明のさらなる目的は、危険性のある患者、特に、患者の亜群についての改善された検出を可能にする、心機能不全の危険性層化のための方法を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
驚くべきことには、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行して、プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド（特に、ＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド）を決定する際に、心機能不全の診断、危険性層化、および結果予後の改善が、実際に、無症候性のいかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）において、特にいかなる不快感もない左心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）において、達成され得ることが示された。
【００１１】
従って、上記目的は、請求項１に記載の方法（本明細書中以降、本発明の方法といわれる）によって解決される。
【００１２】
従って、本発明の方法は、特に有利な様式において、クラスＮＹＨＡ Ｉの患者について診断および予後の誘意性（ｖａｌｅｎｃｅ）の改善を可能にする。
【００１３】
本発明の最も好ましい実施形態において、患者は、少なくとも３０ｋｇ／ｍ２のボディーマス指数（ＢＭＩ）をさらに有する。これは、診断および予後の誘意性をさらに顕著に改善する、さらなるパラメーターである。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ＭＲ−プロＡＮＰについての曲線下面積（ＡＵＣ）＝０．６６５およびＮＴ−プロＢＮＰについての曲線下面積＝０．５３３を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の範囲内において、「心機能不全」とは、安静時もしくは負荷時の間に組織代謝を確保するために、心臓が急性的にもしくは慢性的に十分に血液を供給できない、および結果として、十分な酸素を組織に供給できないことを意味する。臨床的観点からは、収縮機能もしくは拡張機能疾患の意味で心機能障害に本来基づく代表的な症状（呼吸困難、疲労、流体保持）が存在する場合、心機能不全が存在する。本発明はまた、慢性心機能不全（ＣＨＦ）を含む（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｍｅｗｉｓ，Ｒｅｉｍｅｒ Ｒｉｅｓｓｅｎ，およびＩｏａｋｉｍ Ｓｐｙｒｉｄｏｐｏｕｌｏｓによって刊行されたＫａｒｄｉｏｌｏｇｉｅ ｃｏｍｐａｃｔ，第２版（無改訂），Ｔｈｉｅｍｅ ２００６）。心機能不全の原因は、高血圧（ｈｉｇｈ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）（高血圧（ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ））、および／もしくは冠動脈のアテローム硬化（石灰化）（冠動脈心疾患）に加えて、心臓弁欠損（すなわち、リウマチ熱の後期の効果として）、心筋炎（心筋炎症）、心不整脈、心臓発作であり得る。本発明は、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患および腎疾患をさらに含む。本発明は、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）を有する患者に関する（ＮＹＨＡ＝Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎの分類（Ｈｏｐｐｅ ＵＣら：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｃａｒｄｉａｃ Ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ． Ｚ Ｋａｒｄｉｏｌ（２００５）９４：４８８−５０９））。
【００１６】
本発明によれば、用語「危険性層化」とは、可能な限り有望な経過の目的とともに、患者、特に救急救命室患者、ならびに機能不全のより集中的な診断および治療／処置を可能にするという目的で、より悪化した予後の危険性のあるもしくはより悪化した予後を有する患者を見いだすことを包含する。次に、危険性層化は、本発明によれば、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）に関して与えられる有効な処置方法を可能にする。
【００１７】
最も有利なことには、安全な診断もしくは結果予後は、特に、救急医療および／もしくは集中医療の場合において、本発明の方法によって行われ得る。本発明の方法は、迅速な治療的成功をもたらす臨床的決定を可能にする。このような臨床的決定はまた、心機能不全の処置もしくは治療のための薬物療法（例えば、ＡＣＥインヒビター、ＡＴ１アンタゴニスト：アンギオテンシン−ＩＩレセプターの遮断薬（サブタイプ１）、β遮断薬である、Ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ、Ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ、Ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ、およびＮｅｂｉｖｏｌｏｌ、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、ＮＹＨＡステージＩＩＩ以上からアルドステロンアンタゴニスト、カルシウム増感剤（Ｌｅｖｏｓｉｍｅｎｄａｎ））による継続処置を含む。
【００１８】
従って、さらに好ましい実施形態において、本発明の方法は、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）の治療制御に関する。
【００１９】
従って、本発明はまた、患者の危険性層化のための、特に、臨床的決定のための患者の層化のための、好ましくは、年代順に重要な集中医療もしくは緊急医療において、および上記患者の入院のための方法に関する。
【００２０】
本発明の方法のさらに好ましい実施形態において、上記診断は、予後に関して、好ましくは、結果予後に関して、鑑別診断的初期検出および検出のため、重篤度の評価のため、およびいかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）を有する患者の経過の評価に付随する治療のために行われる。
【００２１】
本発明の方法のさらなる実施形態において、体液（特に、血液、必要に応じて、全血もしくは血清）は、試験されるべき患者から採取され、上記診断は、インビトロ／エキソビボ（例えば、ヒトもしくは動物の身体の外で）行われる。上記診断は、少なくとも１つの患者サンプルにおいて、上記マーカー、プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド（特に、ＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチド）、およびその既存の量の決定に基づいて、行われ得る。マーカー、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定は、少なくとも１つの患者サンプルにおいて、本発明に従って、その既存の量において、並行して行われる。
【００２２】
用語「プロＡＮＰ」（同様に、ＮＴ−プロＡＮＰ）は、本発明の範囲内において、９８アミノ酸を含む心房性ナトリウム利尿ペプチド、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの遊離ポリペプチド／タンパク質を意味する。Ｎ末端フラグメントプロＡＮＰ（ＡＳ １−９８）は、１２６アミノ酸からなるプロホルモン「プロＡＮＰ」（ＡＳ １〜１２６、配列番号１を参照のこと）からの循環するホルモンα−ＡＮＰ（２８ＡＳを有する９９〜１２６）の分離から作り出され、筋内分泌細胞の分泌顆粒中に貯蔵され、そして本発明において含まれる。さらに、本発明のポリペプチドは、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、脂質化、もしくは誘導体化）を有し得る。特に、ＮＴ−プロＡＮＰ（ＡＳ １〜９８）は、血漿中において特に安定である。
【００２３】
本発明の範囲内において、フラグメントおよび部分ペプチドは、特に、ＮＴ−プロＡＮＰ（１−９８）もしくはプロＡＮＰ（１〜１２６）のＡＳ ５０〜９０の中央領域に関し得、本発明によれば、ＮＴ−プロＡＮＰ（１〜９８）（ＭＲ−プロＡＮＰともいわれる。ＷＯ２００４０４６１８１および配列番号１を参照のこと）のＡＳ ５３〜９０を有するフラグメントもしくは部分ペプチドが、特に好ましい。適切なアッセイは、ＷＯ２００４０４６１８１Ａ１（ＢＲＡＨＭＳ ＡＧ）において開示される。ＮＴ−プロＡＮＰ（ＡＳ １〜９８）もまた、好ましい。本発明は、そのフラグメント（α）−ＡＮＰ（ＡＳ ９９〜１２６）を含む。
【００２４】
本発明の範囲内において、ＢＮＰ（ＡＳ ７７〜１０８）は、Ｂ−タイプナトリウム利尿ペプチドを意味する。これは、プロホルモン、プロＢＮＰ（ＡＳ １〜１０８、配列番号２を参照のこと）から分離され、ここで上記ＮＴ−プロＢＮＰ（ＡＳ １〜７６）は、同時に作り出される。本発明によれば、ＮＴ−プロＢＮＰが好ましい。
【００２５】
「並行した決定」とは、上記決定が、特に、同時に行われるか、または十分な割り当てもしくは組み合わせ評価を少なくとも可能にすることを意味する。
【００２６】
さらなる実施形態において、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、さらなるマーカー（好ましくは、心機能不全を既に示すもの）に加えて、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、および／もしくはＮＴ−プロＢＮＰの決定と並行して行われ得、そして本発明の方法においてマーカー組み合わせの相乗効果を可能にする。
【００２７】
従って、本発明は、上記決定が、試験されるべき患者に対して、炎症マーカー、心血管マーカー、もしくは虚血マーカーの群からの少なくとも１種のさらなるマーカーを伴って、さらに選択される、本発明の方法のこのような実施形態に関する。
【００２８】
本発明によれば、上記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−６）、プロカルシトニン（１〜１１６，３〜１１６）、および接着分子（例えば、ＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭ）の群からの少なくとも１種のマーカーから選択され得、そして上記心血管マーカーは、クレアチンキネシス、ミエロペルオキシダーゼ酵素作用、コペプチン、ミオグロビン、心筋トロポニン、ＣＲＰの群からの少なくとも１種のマーカーから選択され得る。さらに、これらはまた、循環調節性（プロ）ホルモン、特に、例えば、プロガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロエンドセリン（プロＥｎｄ）、プロレプチン、プロニューロペプチド−Ｙ、プロソマトスタチン、プロニューロペプチド−ＹＹ、プロオピオメラノコルチン、プロアドレノメデュリン（プロＡＤＭ）、コペプチン、またはこれらの部分配列を意味する。
【００２９】
上記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびトロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢの群からの少なくとも１種の マーカーから選択され得る。
【００３０】
本発明のさらなる実施形態において、本発明の方法は、上記マーカーの並行決定もしくは同時決定によって行われ得（すなわち、９６個以上の穴を有するマルチタイタープレート）、ここで上記決定は、少なくとも１つの患者サンプルに対して行われる。
【００３１】
さらに、本発明の方法およびその決定は、自動分析機、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ／）によって行われ得る。
【００３２】
さらなる実施形態において、本発明の方法およびその決定は、迅速試験（例えば、ラテラルフロー試験）によって、好ましくは、マルチパラメーター決定において、行われうる。
【００３３】
本発明のさらなる目的は、上記マーカー、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行した、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための、試験されるべき患者に対するマーカー、プロＡＮＰもしくはＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの使用に関する。ＭＲ−プロＡＮＰは、好ましいフラグメントもしくは部分ペプチドである。本発明に従う使用はまた、上記のさらなる実施形態に関する。
【００３４】
以下の実施例および図面は、本発明の詳細な説明の役に立つが、上記実施例および図面に本発明を限定しない。
【実施例】
【００３５】
（実施例および図面）
実施例１：ＮＨＹＡクラス１を有する患者：生存／死亡のための受信者動作特性（ＲＯＣ，ＳｔａｔＶｉｅｗ ５．０ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）（Ａｂａｃｕｓ，Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｂｅｒｋｌｅｙ，Ｃａｎａｄａ，ａｎｄ ＭｅｄＣａｌｃ，Ｂｒｏｅｋｓｔｒａａｔ，Ｍａｒｉａｋｅｒｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ））分析。ＭＲ−プロＡＮＰを、上記患者の血漿から単離し、−８０℃で凍結した。ＭＲ−プロＡＮＰを検出するために、サンドイッチアッセイ（ＬＩＡ）を、ＢＲＡＨＭＳ ＡＧによるＷＯ２００４０４６１８１に従って利用した（Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒら． Ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｉｄｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ−ａｔｒｉａｌ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ，２００４；５０：２３４−２３６）。
【００３６】
ＮＴ−プロＢＮＰを、ＥＬＩＣＩＡ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって決定した。
【００３７】
試験個体の数ｎ＝６６／７名の患者は死亡した。
【００３８】
図１は、ＭＲ−プロＡＮＰについての曲線下面積（ＡＵＣ）＝０．６６５およびＮＴ−プロＢＮＰについての曲線下面積＝０．５３３を示す
ＭＲ−プロＡＮＰ：０．６６５−０．５（有意でない）：０．１６５
ＮＴ−プロＢＮＰ：０．５３３−０．５（有意でない）：０．０３３
０．１６５／０．０３３＝５
従って、このことは、ＮＨＹＡクラス１における患者の亜群におけるＮＴ−プロＢＮＰと比較して、５倍より高いＭＲ−プロＡＮＰについての診断誘意性（生存／死亡の考察）を生じる。
【００３９】
（実施例２）
Ｃｏｘ回帰による、ＮＴ−プロＢＮＰと比較した、ＭＲ−プロＡＮＰの増大した予後誘意性の確認
一変量分析：
アプローチ：メジアンを、ＮＹＨＡ−１患者の亜群において、両方のマーカー（ＭＲ−プロＡＮＰおよびＮＴ−プロＢＮＰ）について計算した；
このことは、ＮＴ−プロＢＮＰについてのメジアンを生じ、このメジアンは、ＭＲ−プロＡＮＰについてより３．７倍高い。従って、ＮＴ−プロＢＮＰについての危険比を、Ｃｏｘ分析においてＭＲ−プロＡＮＰのものより３．７倍高い濃度で計算した。
【００４０】
上記一変量Ｃｏｘ比例ハザード分析の結果：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＭＲ−プロＡＮＰ
（100pmol／Lあたりの増加） 6.758 2.517(1.255-5.047) 0.009
ＮＴ−プロＢＮＰ
（370pg/ml 増加） 0.383 1.107(0.803-1.525) 0.536
有意な結果がＮＴ−プロＢＮＰについては得られなかった（ｐ＝０．５３６）という事実とは無関係に、ＮＴ−プロＢＮＰ（１．１０７）と比較して、ＭＲ−プロＡＮＰについての危険比２．５１７は、ＮＹＨＡ−１患者の亜群における改善を例示する。危険比１，０００は、濃度単位あたりの死亡の危険性が増大していないことを示す。ＭＲ−プロＡＮＰについては、危険比２．５１７は、単位（ここでは１００ｐｍｏｌ／Ｌ）あたりの死亡の危険性が、１５１．７％まで増大することを意味する。これは、ＮＴ−プロＢＮＰと比較して、１４．２倍高い危険性の増大である。
【００４１】
多変量モデル：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＬＮ ＭＲ−プロＡＮＰ 5.861 25.554(1.854-352.272) 0.015
ＬＮ ＮＴ−プロＢＮＰ 2.093 0.429(0.136-1.350) 0.148
年齢 1.673 0.943(0.863-1.031) 0.196
この結果は、繰り返すと、ＭＲ−プロＡＮＰを使用して得られる改善を示す。なぜなら、ＭＲ−プロＡＮＰは、ＮＴ−プロＢＮＰおよび年齢を有するモデルにおいてＮＹＨＡ−１亜群における死亡についての単一の独立した予測量として残っているからである（ｐ＝０．０１５）。
【００４２】
（実施例３：ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２を有する患者）
Ｃｏｘ回帰によって、ＮＴ−プロＢＮＰと比較した、ＭＲ−プロＡＮＰの予後誘意性の増加の分析（試験患者数：ｎ＝１１４；３６名の患者が死亡した）
一変量分析：
アプローチ：メジアンを、ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２を有する患者の亜群において、両方のマーカー（ＭＲ−プロＡＮＰおよびＮＴ−プロＢＮＰ）について計算した；このことは、ＮＴ−プロＢＮＰについてのメジアンを生じた。このメジアンは、ＭＲ−プロＡＮＰについてより５倍高い。従って、ＮＴ−プロＢＮＰについての危険比は、Ｃｏｘ分析におけるＭＲ−プロＡＮＰのものより５倍高い濃度で計算した。
【００４３】
一変量Ｃｏｘ比例ハザード分析の結果：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＭＲ−プロＡＮＰ
（100pmol/L 増加） 14.414 1.503(1.217-1.855) ＜0.0001
ＮＴ−プロＢＮＰ
（370pg/ml 増加） 0.662 1.024(0.963-1.094) 0.416
有意な結果がＮＴ−プロＢＮＰについては得られなかった（ｐ＝０．４１６）という事実とは無関係に、ＮＴ−プロＢＮＰ（１．０２４）と比較して、ＭＲ−プロＡＮＰについての危険比１．５０３は、ＢＭＩ≧３０を有する患者の亜群の利点を意味した。危険比１，０００は、濃度単位あたりの死亡の危険性が増大していないことを示す。従って、ＭＲ−プロＡＮＰについて、危険比１．５０３は、単位（ここでは１００ｐｍｏｌ／Ｌ）あたりの死亡の危険性が５０．３％まで増大することを意味する。これは、ＮＴ−プロＢＮＰと比較して、２１倍高い危険性の増加である。
【００４４】
多変数モデル：
マーカー χ２ 危険比（９５％ ＣＩ） Ｐ
ＬＮ ＭＲ−プロＡＮＰ 7.198 2.776(1.317-5.854) 0.007
ＬＮ ＮＴ−プロＢＮＰ 0.005 0.985(0.644-1.506) 0.943
この結果は、繰り返すと、上記ＭＲ−プロＡＮＰの予後増大を示す。なぜなら、ＭＲ−プロＡＮＰは、ＮＴ−プロＢＮＰを有するモデルにおいてＢＭＩ≧３０を有する患者の亜群における死亡についての単一の独立した予測値として残っているからである（ｐ＝０．００７）。しかし、ＮＴ−プロＢＮＰは、独立した予測値ではない。
【００４５】
【表１】
【００４６】
【表２】
表３：NewYork Heart Associationによる分類
(NYHA)
NYHA I 物理的制限なし。日常的な肉体的労作は、不適当な疲労、律動障害、息切れ、狭心症のいずれも引き起こさない。
NYHA II 肉体的能力の軽度の制限。安静時には症状は認められない。日常的な肉体的労作によって、疲労、律動障害、息切れもしくは狭心症。
NYHA III 通常の活動で肉体的能力のより高度の制限。安静時には症状は認められない。わずかな肉体的労作によって、疲労、律動障害、息切れもしくは狭心症。
NYHA IV 全ての肉体的活動および安静時の不快感。ベッドに拘束される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法であって、
マーカープロＡＮＰもしくはＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、試験されるべき患者に対するマーカープロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行して行われる、
ことで特徴づけられる、方法。
【請求項２】
前記マーカーは、ＭＲ−プロＡＮＰ（ＮＴ−プロＡＮＰのＡＳ ５３〜９０）であることで特徴づけられる、請求項１に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項３】
前記患者は、少なくとも３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有することで特徴づけられる、請求項１または２に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項４】
特に集中医療もしくは緊急医療において、および該患者の入院について、臨床的決定、特に、薬物療法による継続処置および継続治療を行うためのものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項５】
鑑別診断的初期検出および検出、重篤度の評価、ならびに経過の評価に付随する治療のためのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項６】
炎症マーカー、心血管マーカー、もしくは虚血マーカーの群から選択される少なくとも１種のさらなるマーカーの決定が、試験されるべき患者に対してさらに行われる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６，３−１１６）、およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記心血管マーカーは、クレアチンキネシス、ミエロペルオキシダーゼ酵素作用、コペプチン、ミオグロブリン、心筋トロポニン、ＣＲＰ、ならびに、プロガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロエンドセリン（プロＥｎｄ）、プロレプチン、プロニューロペプチド−Ｙ、プロソマトスタチン、プロニューロペプチド−ＹＹ、プロオピオメラノコルチン、プロアドレノメデュリン（プロＡＤＭ）、コペプチン、またはこれらの部分配列のような循環調節性（プロ）ホルモンの群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびトロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢの群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記マーカーの並行決定もしくは同時決定が行われることで特徴づけられる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記決定は、少なくとも１つの患者サンプルに対して行われることで特徴づけられる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記決定は、自動分析機で、特にＫｒｙｐｔｏｒによって行われる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記決定は、迅速試験によって、特に、個々のパラメーター決定もしくはマルチパラメーター決定において行われることで特徴づけられる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための、試験されるべき患者に対してマーカープロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行した、マーカープロＡＮＰもしくはＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの使用。
【請求項１】
いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法であって、
マーカープロＡＮＰもしくはＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの決定は、試験されるべき患者に対するマーカープロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行して行われる、
ことで特徴づけられる、方法。
【請求項２】
前記マーカーは、ＭＲ−プロＡＮＰ（ＮＴ−プロＡＮＰのＡＳ ５３〜９０）であることで特徴づけられる、請求項１に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項３】
前記患者は、少なくとも３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有することで特徴づけられる、請求項１または２に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項４】
特に集中医療もしくは緊急医療において、および該患者の入院について、臨床的決定、特に、薬物療法による継続処置および継続治療を行うためのものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項５】
鑑別診断的初期検出および検出、重篤度の評価、ならびに経過の評価に付随する治療のためのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための方法。
【請求項６】
炎症マーカー、心血管マーカー、もしくは虚血マーカーの群から選択される少なくとも１種のさらなるマーカーの決定が、試験されるべき患者に対してさらに行われる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６，３−１１６）、およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記心血管マーカーは、クレアチンキネシス、ミエロペルオキシダーゼ酵素作用、コペプチン、ミオグロブリン、心筋トロポニン、ＣＲＰ、ならびに、プロガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロエンドセリン（プロＥｎｄ）、プロレプチン、プロニューロペプチド−Ｙ、プロソマトスタチン、プロニューロペプチド−ＹＹ、プロオピオメラノコルチン、プロアドレノメデュリン（プロＡＤＭ）、コペプチン、またはこれらの部分配列のような循環調節性（プロ）ホルモンの群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびトロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢの群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記マーカーの並行決定もしくは同時決定が行われることで特徴づけられる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記決定は、少なくとも１つの患者サンプルに対して行われることで特徴づけられる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記決定は、自動分析機で、特にＫｒｙｐｔｏｒによって行われる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記決定は、迅速試験によって、特に、個々のパラメーター決定もしくはマルチパラメーター決定において行われることで特徴づけられる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
いかなる不快感もない心機能不全（ＮＹＨＡステージＩ）のインビトロ診断、および／もしくは危険性層化、および／もしくは結果予後のための、試験されるべき患者に対してマーカープロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、および／もしくはＢＮＰの決定と並行した、マーカープロＡＮＰもしくはＮＴ−プロＡＮＰ、またはそのフラグメントもしくは部分ペプチドの使用。
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５２０４４２（Ｐ２０１０−５２０４４２Ａ）
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５１１０１（Ｐ２００９−５５１１０１）
【出願日】平成２０年３月３日（２００８．３．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００８／０００３５７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０６９３８
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０９０９１３３２）ブラームズ アクチェンゲゼルシャフト (12)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月３日（２００８．３．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００８／０００３５７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０６９３８
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０９０９１３３２）ブラームズ アクチェンゲゼルシャフト (12)
【Ｆターム（参考）】
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