本発明は、最適なプレ-トランス-スプライシング分子(PTM)を同定するための迅速大容量機能的スクリーニングのための方法および組成物を提供する。本発明の組成物は標的前駆体メッセンジャーRNA分子（標的プレmRNA）と相互作用し、新規なキメラRNA分子（キメラRNA）の形成をもたらすトランス-スプライシング反応を媒介するようデザインされている候補PTMをコードし得るPTM発現ライブラリーを含む。本発明の候補PTMは第1のリポーター分子の一部をコードし、かつ、最適なPTM（効率的かつ特異的）を発現する細胞を選択するために使用できる他の1以上のリポーター分子をコードし得る。本発明の組成物はまた、第1のリポーター分子の残部をコードする標的プレmRNAを発現する細胞も含む。
本発明のスクリーニング方法は、(i)PTM発現ライブラリーと標的プレmRNAを発現する細胞とを、最適PTM（ライブラリーベクターによって発現された）の存在下でトランス-スプライシング反応が起こり、それによって少なくとも1つのリポーター分子をコードし得る修復されたキメラRNA分子の形成がもたらされる条件下で接触させること；(ii) 修復されたリポーター分子を発現する細胞を選択すること（ここで、リポーター分子の発現は選択された細胞において最適なPTMが存在することを示す）；および(iii)選択された細胞で発現された最適PTMを同定することを含む。さらなるリポーター分子を用いて、直接的PTM発現だけでなく、特異的および非特異的トランス-スプライシングの双方を評価することができる。
（もっと読む）