本開示は、重量オスモル濃度340mOsm/kg未満の培養培地中で幹細胞を培養する工程を含む、幹細胞から胚葉を作製する方法を提供する。本開示はまた、該胚葉から様々な細胞系列を作製する方法、ならびにこれらを免疫学的方法によって検出する方法も含む。さらに本開示は、言及される前駆細胞を作製、単離、培養、および増殖するための方法、ならびに3種類の胚葉から分化した細胞を作製する方法を提供する。本開示はまた、該3種類の胚葉の誘導において使用するための培養培地も提供する。

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神経コロニー形成細胞（NCFC）アッセイ法について記載する。このアッセイ法により、神経幹細胞を神経前駆細胞から区別することが可能となる。1つの態様において、本発明は、以下の段階を含む、神経幹細胞または神経前駆細胞を同定する方法を提供する：(a) 神経細胞の増殖を支持する半固形培地中に神経細胞を懸濁する段階；(b) 半固形培地においてコロニーの産生を可能にする密度で細胞をプレーティングする段階；(c) コロニー間で大きさの相違が識別できるまで、プレーティングした細胞を培養する段階；および(d) より大きいコロニーは神経幹細胞によって産生された可能性が高く、小さいコロニーは神経前駆細胞によって産生された可能性が高いことからコロニーの大きさを評価する段階。別の態様では、NSCは、コロニーの形態または抗原発現を判定することによって、神経前駆細胞と区別され得る。 （もっと読む）