生物学的に活性な組換えビタミンK依存性タンパク質を高レベルで産生する細胞株の作製法が記載される。トランスフェクトした細胞株は酵素をプロセシングする外来性遺伝子を含有せず、メトトレキサート耐性のような選択圧を施与しない。第VII/VIIa因子および第IX因子を産生する細胞株も記載される。それらの細胞株を用いて、血友病治療のための第VII/VIIa因子および／または第IX因子を単離することができる。 （もっと読む）

第ＩＸ因子のカルシウム結合特性の９０％超を保持する、第ＩＸ因子の凍結調製物を調製する方法を開示する。トレハロースと共に調合した第ＩＸ因子は、２５℃／６０％の相対湿度（ＲＨ）、及び４０℃／７５％ＲＨにて１２週間保管後に、トレハロースを含めずに調合した第ＩＸ因子よりも優れた安定性プロファイルを示す。このデータは、トレハロースを該製剤に含めると、第ＩＸ因子の凍結乾燥産物を温度変化に暴露させるか、又は更に長期間室温で保管することが可能になることを示唆している。試験製剤は、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．８）、３％のマンニトール、６６ｍＭの塩化ナトリウム、０．００７５％のポリソルベート８０を含み、かつ、１％のトレハロースを含むものと、トレハロースを含まないものであった。４０℃／７５％ＲＨ、又は２５℃／６０％ＲＨで１２週間にわたって保管したところ、トレハロースを含む製剤は、２〜８℃で保管した産物に匹敵していたが、トレハロースを含まない製剤は有意な凝集を起こし、活性を失うことが明らかになった。これらの２つの製剤は、−２０℃及び２〜８℃での２６週間のリアルタイム保管では、同様の安定性を示した。 （もっと読む）

グリコシル化部位の数の増加を備える第ＩＸ因子変異体について記載する。第ＩＸ因子変異体が、増加した半減期および／または回収率を有する。
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クロマトグラフィー法を用いて高度にシアル化された組換えビタミンＫ依存性タンパク質、特に第ＩＸ因子を分離する方法について記述する。高度にシアル化された組換えタンパク質の特性を示す。改善された第ＩＸ因子は少なくとも６２％の、３または４のシアル酸残基を持つＮ−グリコシル化、ならびに改善された生物学的利用能および薬物動態特性を有する。 （もっと読む）

本発明は、生物活性ビタミンＫ依存性タンパク質、特に第ＩＸ因子を製造する商業的に実現可能な方法に関する。第ＩＸ因子は、少なくとも約１５ｍｇ／Ｌのレベルで産生され、少なくとも２５％生物活性である。当該方法は、ビタミンＫ依存性タンパク質が、組み換え細胞によって効率的に産生及びプロセシングされるように、１つ又は複数の対になった塩基性アミノ酸変換酵素（ＰＡＣＥ）、ビタミンＫ依存性エポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）及びビタミンＫ依存性γ−グルタミルカルボキシラーゼ（ＶＫＧＣ）を好ましい比率で同時発現させることに関する。 （もっと読む）