本発明は、無細胞合成システムを用いて、タンパク質の事前に選択された位置に非天然アミノ酸を組み込む新規手段を提供する。本方法は、遺伝暗号によってコードされる非直交性で天然のイソ受容センスｔＲＮＡの使用を含む。このような方法は、直交ｔＲＮＡ−合成酵素対に頼らずに、センスコドンを使用することによって数多くの非天然アミノ酸を組み込むことを可能にする。本発明は、無細胞合成システムを用いて、タンパク質の事前に選択された位置に非天然アミノ酸を導入するインビトロにおける方法を提供する。
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