ガレクチン−３および心臓再同期療法
本発明は、心不全患者の心臓再同期療法に対する生理学的応答をモニタリングおよび予測するための材料および方法に関連する。より具体的には、本発明は、内因性タンパク質ガレクチン−３、ならびに心臓再同期療法を受けている患者における疾患の進行のモニタリングにおけるその使用、および心臓再同期療法に対する応答の予測因子としてのその使用に関連する。本発明は、心臓再同期療法の候補であるか、または心臓再同期療法で処置したヒトを評価する方法であって、該ヒト由来のサンプル中のガレクチン−３血中濃度を測定し、それによって、心臓再同期療法への応答性、または心臓再同期療法後の予後の指標となるガレクチン−３血中濃度が存在するかまたは存在しないかを決定する工程を含む、方法を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への参照）
本出願は、２００９年８月２５日に出願された米国仮出願第６１／２３６，７１２号の利益を主張し、上記米国仮出願の全容は、参照によって本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
うっ血性心不全、または心不全は、病的状態および死亡の主な原因である。米国で約５００万人の人々が心不全に罹患し、毎年約５００，０００例の新規症例が診断されている。多くの場合、うっ血性心不全患者は、さらに心臓の効率を減少させる不整脈にも罹患している。
【０００３】
そのような患者のための１つの処置選択肢は、両心室性ペーシングデバイスとしても公知である、心臓再同期療法（ＣＲＴ）デバイスの埋め込みを含む。正常な心拍において、心臓の２つの心房チャンバーは同時に収縮し、血液を２つの心室チャンバーに送る。１秒未満後、２つの心室チャンバーは同時に収縮し、血液を心臓の外へ、そして体中へ送る。いくらかの心不全患者は、心室間に電気的な遅延を有し、これにより２つの心室チャンバーはもはや同時に収縮しない。その結果は、心拍出量の実質的な減少である。例えば、正常な心拍において、左心室の血液の半分超が各心拍において送り出される。言い換えると、「左室駆出率」または「ＬＶＥＦ」は、５０％より高い。対照的に、心拍が同調していないいくらかの心不全患者は、３分の１未満のＬＶＥＦを有する。これらの患者において、各心拍で血液の３分の２は「送り出されない」ままである。
【０００４】
ＣＲＴ療法の目的は、心室の同調したポンピングを回復することである。これを、心拍ごとに同時に収縮させるために２つの心室を刺激する別々の電気リードを有するデバイスによって達成する。ＣＲＴデバイスは、生活の質を改善し、そして中程度または重症の心不全；３５％以下のＬＶＥＦ；および心室の遅い脱分極を示す心エコー図（１２０ｍｓより長い「ＱＲＳ」群）を有するいくらかの患者において、死亡率を減少させた。それでも、ＣＲＴを受ける心不全患者の約３０％は、処置に応答しない（例えば、非特許文献１を参照のこと）。一人の著者が２００７年に警告したように、「最適なＣＲＴ候補を同定するためのより良い基準が、緊急に保証されるべきである（ｗａｒｒａｎｔｅｄ）」（非特許文献２）。さらに、ＣＲＴ介入を受けている心不全患者の中でも、心不全のための予定外の入院および死亡のような有害事象の率が高い（例えば、非特許文献３を参照のこと）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊｅｅｖａｎａｎｔｈａｍら、Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｊ．（２００９）１６（３）１９７−２０９
【非特許文献２】Ｓｔｅｌｌｂｒｉｎｋ、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．（２００７）２８：１５４１−１５４２
【非特許文献３】Ｃｌｅｌａｎｄら「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ」Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２００５）３５２（１５）：１５３９−４９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の概要）
体液中のヒトタンパク質ガレクチン−３（ｇａｌｅｃｔｉｎ−３）の濃度を、心臓再同期療法で処置した患者において、疾患の進行または治療の有効性を予測またはモニタリングするために使用し得ることが現在発見されている。患者のガレクチン−３血中濃度を、ＣＲＴデバイスを埋め込んだ後にモニタリングして、疾患の発症または進行および／または処置過程の継続的妥当性の持続的指標を提供し得る。例えば、本発明は、心不全患者の体液（例えば血液、血清、または血漿）中のガレクチン−３濃度の経時的変化を測定すること、およびガレクチン−３濃度の測定した変化を、心臓再同期療法が有用であったか、または有用でなかった他の患者において観察されたガレクチン−３濃度の変化と比較することを可能にする。
【０００７】
モニタリング方法は、患者のガレクチン−３濃度を、ＣＲＴデバイスの埋め込み前または後に、同じ患者の早期のガレクチン−３濃度と比較することを含み得る。その方法はまた、ＣＲＴデバイスの埋め込み後いくつかの時点で測定したガレクチン−３レベルを比較して、ガレクチン−３濃度の履歴を作ることを含み得る。例えば、本発明は、ＣＲＴデバイスを埋め込んだ心不全患者の体液（例えば血液、血清、または血漿）中のガレクチン−３濃度の増加または減少が、存在するかまたは存在しないかを検出することによって患者を評価するための方法を提供する。経時的に増加するガレクチン−３濃度の存在は、患者におけるうっ血性心不全の悪化の指標である。
【０００８】
１つの実施態様において、本発明は、心臓再同期療法で処置したヒトの予後または結果を予測するための方法を提供する。体液、例えば血液中のガレクチン−３の濃度を、心臓再同期療法後の予後の指標となるガレクチン−３濃度が存在するかまたは存在しないかに関して決定し得る。例えば、ヒトにおけるガレクチン−３血中濃度を測定し、そして最小閾値と比較し得る。最小閾値より上のガレクチン−３血中濃度は、そのヒトの死亡または入院のリスクの増加の指標となり得る。
【０００９】
その評価の結果を使用して、患者の処置を含む決定を知らせ得る。例えば、心不全患者が、患者のガレクチン−３濃度または患者のガレクチン−３濃度の変化に基づいて、心臓再同期療法に対して治療的に非応答性であるようならば、血管形成術または他の手術および／または利尿薬、変力物質、ベータ遮断薬、ナトリウム排泄増加性ペプチド、スタチン、または血管拡張薬の投与のような、他の形式の処置が好ましい場合がある。
【００１０】
体液中のヒトタンパク質ガレクチン−３の濃度は、症候性患者（ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｐａｔｉｅｎｔ）が心臓再同期療法から利益を得ることができるかどうかの決定に有益であり得ることも発見された。この方式で、除細動機能が有るかまたは無いＣＲＴデバイスを、その処置から利益を得る可能性のより高い心不全患者に埋め込み得る。従って、心不全を経験した患者、または心不全のリスクがあると同定された患者を試験して、その循環ガレクチン−３レベルを測定することが想定される。測定したガレクチン−３レベルは、患者の２つのグループ：そのガレクチン−３濃度に基づいて、心臓再同期療法から利益を得るであろう患者；および利益を得る見込みが無い（または可能性が低い）患者の同定を可能にする。ＣＲＴデバイスを、最初のグループの患者に埋め込み、一方２番目のグループの患者には他の治療過程を選択する。
【００１１】
従って、本発明は、心不全に罹患し得る、またはそのリスクのあるヒトのための治療を選択する方法を提供する。その方法は、血液サンプル、血清サンプル、または血漿サンプルのようなサンプル中のガレクチン−３濃度を測定することを含む。測定したガレクチン−３濃度は、その患者が心臓再同期療法に対して有利に応答しそうかどうかの指標となる。有利な応答は、例えばある期間にわたる生存可能性の増加、または心不全の進行または発症の低減、心臓の強度の改善、ＬＶＥＦの増加、心不全の悪化のための予定外の入院の減少、運動中の最大酸素消費量の増加、疲労の減少、息切れの低減、または睡眠時無呼吸の低減を含む。
【００１２】
１つの実施態様において、その方法は、心臓再同期療法の候補である心不全患者の体液（例えば血液、血清、または血漿）中のガレクチン−３濃度を、そのような処置の前に測定すること、およびそのガレクチン−３濃度を、心臓再同期療法が有用であることが証明された、除細動機能を有するかまたは有さないＣＲＴデバイスで処置した他の患者で観察されたガレクチン−３濃度と比較することを含む。
【００１３】
同様に、本発明は、心臓再同期療法の候補（例えば心不全患者）を評価するための方法を提供する。その方法は、心臓再同期療法の候補である患者の体液中のガレクチン−３濃度を測定すること、およびその測定したガレクチン−３濃度を、参照ガレクチン−３濃度と比較することを含む。その参照ガレクチン−３濃度は、他の患者において観察されたガレクチン−３の濃度由来であり得、そしてＣＲＴデバイスの埋め込みに対する応答性または無応答性の指標となり得る。測定したガレクチン−３濃度が、参照ガレクチン−３濃度と異なるなら、心臓再同期療法を制限または拒否し得る。
【００１４】
本発明はまた、心不全に罹患し得るかまたはそのリスクのあるヒトを処置するための方法を提供する；その方法は、心臓再同期療法に対する好ましい応答の指標となる、決定されたガレクチン−３血中濃度を有する患者に、ペースメーカーまたは除細動機能を有するかまたは有さないＣＲＴデバイスを埋め込むことを含む。ガレクチン−３血中濃度を測定する過程を含む、治療を選択する方法とは対照的に、その処置方法は、続くＣＲＴデバイスの埋め込みに関連する。従って、その処置方法は、ガレクチン−３の決定が以前にどのように、または誰によってなされたかにかかわらず、そのガレクチン−３血中濃度が好ましい応答の指標であると決定された患者にＣＲＴデバイスを埋め込むことを含む。
【００１５】
選択または処置された患者において、ガレクチン−３血中濃度が、最小閾値の上、最大閾値の下、または最小および最大閾値によって規定される標的範囲内であることが決定され得る。最小閾値は、例えば１０ｎｇ／ｍｌ超；１０〜１５ｎｇ／ｍｌ；１５〜２０ｎｇ／ｍｌ；２０〜２５ｎｇ／ｍｌ；２５〜３０ｎｇ／ｍｌ；または３０ｎｇ／ｍｌ超であり得る。最大閾値は、例えば７０ｎｇ／ｍｌ未満；６０ｎｇ／ｍｌ未満；４０ｎｇ／ｍｌ未満；３０〜４０ｎｇ／ｍｌ；２５〜３０ｎｇ／ｍｌ；２０〜２５ｎｇ／ｍｌ；または１５〜２０ｎｇ／ｍｌであり得る。
【００１６】
その評価の結果を、患者の処置を含む決定を知らせるために使用し得る。例えば、心不全患者のガレクチン−３濃度が、心臓再同期療法が有用であることが証明された他の心不全患者のものと異なるなら、ＣＲＴデバイスの埋め込みは示されず、そして患者に異なる薬物療法または治療選択肢を提案し得る。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（発明の詳細な説明）
本発明者らは、心不全患者の心臓再同期療法への生理学的応答を予測および／またはモニタリングする方法を発明した。過去の臨床試験において、ＣＲＴデバイスレシピエントの４分の１〜２分の１が、そのデバイスから有意な利益を得られなかったので、「非応答者」として分類された（Ｈａｗｋｉｎｓら（２００６）Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．２７：１２７０−１２８１）。１つの試験は、コントロールグループはさらにより悪かったが、ＣＲＴデバイスレシピエントの４０％で、埋め込み後に心不全が悪化したことを報告した（Ｃｌｅｌａｎｄら（２００５）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５２：１５３９−４９）。本発明者らは、患者における循環ガレクチン−３レベルの測定を使用して、心臓再同期療法のより良い候補である患者を同定し得ることを発見した。この方法において、その治療を、その治療から利益を得る可能性のより高い人に優先的に向け得、一方他の患者のリスクおよび費用をなくし、そして異なる治療過程に向け得る。それに加えて、本発明者らは、ＣＲＴデバイスを埋め込む際、および／またはその後にガレクチン−３を測定することは、疾患の発症または進行および／または処置過程の継続的妥当性の持続的指標を提供することを発見した。
【００１８】
本明細書中で使用される「心不全」、「ＨＦ」、「うっ血性心不全」、または「ＣＨＦ」という用語は、心室の血液を満たすかまたはそれを排出する能力を損なう、複合的な臨床症候群を指す。あらゆる構造的または機能的心臓障害が、ＨＦを引き起こし得、ＨＦ患者の大部分は損なわれた左心室（ＬＶ）心筋機能を有する。ＨＦの症状は、呼吸困難（息切れ）、疲労、および体液貯留を含む。Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＨＡ）は、ＨＦの進行または発症の４つのステージを同定した。ステージＡおよびＢの患者は、明らかな危険因子を示すが、まだＨＦを発症していない。ステージＣおよびＤの患者は、現在ＨＦの症状を示しているか、または過去にその症状を示していた。例えば、ステージＡの患者は、冠状動脈疾患、高血圧、または糖尿病のような危険因子を有し、損なわれた左心室（ＬＶ）機能を示さない患者である。ステージＢの患者は、無症候性であるが、損なわれたＬＶ機能、肥大または幾何学的なチャンバーのゆがみのような、心臓構造異常またはリモデリングを有する。ステージＣの患者は、心臓異常を有し、そして症候性である。ステージＤの患者は、最大限の医学的処置にもかかわらず症状を示す、難治性のＨＦを有する。その患者らは、典型的には繰り返し入院するか、または特別な介入無しには退院できない。
【００１９】
ガレクチン−３は、多機能β−ガラクトシド結合レクチンのファミリーの構造的にユニークなメンバーである（Ｇａｂｉｕｓ（２００６）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：４３−７９）。ガレクチン−３の発現は、上皮および炎症性細胞（マクロファージ、好中球および肥満細胞を含む）と関連していた。ガレクチン−３は、筋線維芽細胞の増殖、線維形成、組織修復、心臓リモデリング、および炎症を含む、心不全において重要な様々な生物学的過程に関係していた（Ｌｉｕら（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９６（２）：Ｈ４０４−１２；Ｐａｐａｓｐｙｒｉｄｏｎｏｓら（２００８）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２８（３）：４３３−４０；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：５０６０−５０６５；Ｓｈａｒｍａら（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １１０：３１２１−３１２８；Ｓａｎｏら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（４）：２１５６−６４；Ｋｕｗａｂａｒａら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（１０）：３９３９−４４）。
【００２０】
本発明者らは、心不全患者において、心臓再同期療法の有効性を予測するために、循環ガレクチン−３タンパク質レベルの使用を可能にする方法を開発した。患者のガレクチン−３レベルの知識は、ＣＲＴデバイスの埋め込みに際して、患者の結果の情報を与える。さらに、埋め込み後のガレクチン−３レベルのような、循環バイオマーカーのレベルは、患者の結果の情報を与え、そしてガレクチン−３レベルの変化は、予後の変化を示し得る。より高い濃度のガレクチン−３は、死亡および入院のような悪い予後と関連するが、ＣＲＴデバイスを受けた比較的高いガレクチン−３レベルを有する患者は、心拍出量、生活の質（例えばＭｉｎｎｅｓｏｔａ Ｌｉｖｉｎｇ Ｗｉｔｈ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ（登録商標） Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａによって測定されるような）、心不全の進行または発症の低減、疲労の減少、息切れの低減、または生存可能性の増強によって測定されるように、有意に利益を得ることができる。
【００２１】
（ガレクチン−３の検出）
本発明は、任意で１つまたはそれ以上の他のマーカー（例えばＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）と組み合わせて、ガレクチン−３のようなマーカーのレベルを測定することによって、心臓再同期療法に対する心不全患者の生理学的応答を予測および／またはモニタリングするための方法を提供する。定量化ありまたは無しで、目的のタンパク質を検出するための多くの方法が周知であり、そして本発明の実施において使用し得る。そのようなアッセイの例を下記に記載し、そして例えば、イムノアッセイ、クロマトグラフィー法、および質量分析を含み得る。そのようなアッセイを、特に、血液、血漿、および血清を含む任意の生物学的サンプルに対して行い得る。よって、複数のアッセイを用いてガレクチン−３を検出し得、そしてサンプルを１つまたはそれ以上の供給源から分析し得る。
【００２２】
１つまたはそれ以上の分離方法の助力によって、サンプルにおけるマーカーを検出または定量化し得る。例えば、適当な分離方法は、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／（ＭＳ）ｎ（ｎはゼロより大きい整数）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、表面増強レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、シリコンを用いる脱離／イオン化（ＤＩＯＳ）、二次イオン質量分析（ＳＩＭＳ）、四重極飛行時間型（Ｑ−ＴＯＦ）、大気圧化学イオン化質量分析（ＡＰＣＩ−ＭＳ）、ＡＰＣＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＡＰＣＩ−（ＭＳ）ｎ、または大気圧光イオン化質量分析（ＡＰＰＩ−ＭＳ）、ＡＰＰＩ−ＭＳ／ＭＳ、およびＡＰＰＩ−（ＭＳ）ｎのような、質量分析法を含み得る。他の質量分析法は、とりわけ四重極、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）およびイオントラップを含み得る。さらに使用し得る分光技術は、共鳴分光法および光学的分光法を含む。
【００２３】
他の適当な分離方法は、化学的抽出分離、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性（逆相）液体クロマトグラフィー、等電点電気泳動、１次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、２次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（２Ｄ−ＰＡＧＥ）、または薄層、ガスもしくは液体クロマトグラフィーのような他のクロマトグラフィー技術、またはそのあらゆる組み合わせを含む。１つの実施態様において、アッセイする生物学的サンプルを、分離方法に適用する前に分画し得る。
【００２４】
マーカー自体の物理的分離を必要としない方法によって、マーカーを検出または定量化し得る。例えば、分子の複雑な混合物からマーカーのプロファイルを解明するために、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法を用い得る。例えば、腫瘍を分類するための類似したＮＭＲの使用が、Ｈａｇｂｅｒｇ（１９９８）ＮＭＲ Ｂｉｏｍｅｄ．１１：１４８−５６において開示される。
【００２５】
サンプル中のマーカーをまた、例えばマーカーを、そのマーカーに特異的に結合し得る結合部分と組み合わせることによって、検出または定量化し得る。その結合部分は、例えば、リガンド−受容体ペア、すなわち特異的結合相互作用を有し得る分子のペアのメンバーを含み得る。その結合部分はまた、例えば抗体−抗原、酵素−基質、核酸−核酸、タンパク質−核酸、タンパク質−タンパク質、または当該分野で公知の他の特異的結合ペアのような、特異的結合ペアのメンバーを含み得る。標的に対する増強した親和性を有する結合タンパク質をデザインし得る。任意で、その結合部分を、酵素、蛍光、放射性、燐光、または呈色粒子標識のような、検出可能な標識と結合し得る。その標識複合体を、例えば視覚的に、または分光光度計または他の検出器の補助によって、検出または定量化し得る。
【００２６】
ガレクチン−３レベルを、イムノアッセイを行うことによって定量化し得る。ガレクチン−３イムノアッセイは、試験する被験体由来のサンプルを、ガレクチン−３が存在するなら免疫特異的な結合が起こり得る条件下で、適当な抗体と接触させること、および抗体による任意の免疫特異的な結合の量を検出または測定することを含む。制限無しに、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光イムノアッセイおよびプロテインＡイムノアッセイのような技術を用いた、競合的または非競合的アッセイシステムを含む、任意の適当なイムノアッセイを使用し得る。
【００２７】
「サンドイッチ」アッセイにおいて、ガレクチン−３の非オーバーラップ部位（エピトープ）に特異的に結合するモノクローナル抗体のような、２つの分子（「結合部分」）を使用する。典型的には、１つの結合部分は、固体表面に固定化され、ここでそれはガレクチン−３に結合および捕捉する。従って、この最初の結合部分は、捕捉結合部分とも呼ばれる。２番目の結合部分のガレクチン−３複合体への結合が、ガレクチン−３が捕捉されたことを示すように、２番目の結合部分を、例えばフルオロフォア、酵素、または呈色粒子で検出可能に標識する。そのシグナルの強度は、サンプル中のガレクチン−３の濃度に比例する。従って、２番目の結合部分は、検出結合部分または標識結合部分とも呼ばれる。結合部分は、ガレクチン−３のＮ末端の一部に特異的に結合する限り、あらゆる型の分子であり得る。好ましい実施態様において、使用される結合部分は、モノクローナル抗ガレクチン−３抗体、すなわち、ガレクチン−３の別々の部分に対して作られた、またはそうでなければそれに結合するよう選択されたモノクローナル抗体である。
【００２８】
そのようなアッセイ手順を、２部位免疫測定（ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ）アッセイ法、「サンドイッチ」法、または（抗体が結合物である場合）「サンドイッチイムノアッセイ」と呼び得る。当該分野で公知であるように、その捕捉および検出抗体を、同時にまたは連続的にテストサンプルと接触させ得る。捕捉抗体をサンプルとインキュベートし、そしてその後標識した検出抗体を前もって決めた時間に加えることによって、連続的な方法を達成し得る（「前向き」法と呼ばれることもある）。あるいは、まず標識した検出抗体を、サンプルとインキュベートし、そして次いでそのサンプルを捕捉抗体に曝露し得る（「逆向き」法と呼ばれることもある）。アッセイを完了するための、短期間で有り得る任意の必要なインキュベーションの後に、その標識を測定する。そのようなアッセイを、様々なハイスループット臨床検査分析器またはポイントオブケア（ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｃａｒｅ）もしくは在宅試験デバイスの使用を含む、当業者に公知である多くの特定の形式で行い得る。
【００２９】
１つの実施態様において、サンドイッチ形式において側方流動デバイスを使用し得、ここで生物学的サンプルにおける、ベースライン感度レベルより上のガレクチン−３の存在は、側方流動アッセイの捕捉ゾーンまたはその上流におけるサンドイッチ相互作用の形成を可能にする。例えば、米国特許第６，４８５，９８２号を参照のこと。その捕捉ゾーンは、ガレクチン−３を捕捉するために適当な抗体分子、またはビオチン化複合体の捕捉のための固定化アビジン等のような捕捉結合部分を含み得る。例えば、米国特許第６，３１９，６７６号を参照のこと。そのデバイスにはまた、捕捉ゾーンにおける捕捉に適当な発光標識を組み込むことができ、ガレクチン−３の濃度は、その捕捉部位におけるシグナルの強度に比例する。適当な標識は、ポリスチレンマイクロスフィアに固定化された蛍光標識を含む。呈色粒子も使用し得る。
【００３０】
本発明の方法で使用し得る他のアッセイ形式は、フロースルーデバイスを含むがこれに限らない。例えば、米国特許第４，６３２，９０１号を参照のこと。フロースルーアッセイにおいて、１つの結合部分（例えば抗体）を、膜表面の規定された領域に固定化する。次いでこの膜を、デバイスを通してサンプル容積を吸い出すための（ｐｕｍｐ）リザーバーとして作用する吸収層の上にかぶせる。固定化の後、膜上の残りのタンパク質結合部位をブロックして、非特異的相互作用を最小限にする。操作において、生物学的サンプルは膜に加えられ、そしてマトリックスを通してろ過され、このことは、サンプル中の抗体に特異的な任意の分析物が、固定化した抗体に結合することを可能にする。２番目の工程において、サンドイッチを完成するために、捕捉されたマーカーと反応する、標識した二次抗体を加え得るかまたは放出し得る。あるいは、二次抗体をサンプルと混合し得、単一の工程において加え得る。ガレクチン−３が存在するなら、呈色スポットが膜表面に現れる。
【００３１】
最もよくある酵素イムノアッセイは、「酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）」である。ＥＬＩＳＡは、標識した（例えば酵素結合）形式の抗体を用いて抗原の濃度を検出および測定するための技術である。異なる形式のＥＬＩＳＡが存在し、それらは当業者に周知である。標準的なＥＬＩＳＡ技術は、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ」第２版、ＲｏｓｅおよびＢｉｇａｚｚｉ編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９８０；Ｃａｍｐｂｅｌｌら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉｎｃ．、１９６４；およびＯｅｌｌｅｒｉｃｈ，Ｍ．（１９８４）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：８９５−９０４において記載されている。ガレクチン−３を検出するための好ましい酵素結合免疫吸着測定法キット（ＥＬＩＳＡ）は、市販で入手可能である（ＢＧ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）。
【００３２】
「サンドイッチＥＬＩＳＡ」において、抗体（例えば抗ガレクチン−３）を、固相（すなわちマイクロタイタープレート）に結合し、そして抗原（例えばガレクチン−３）を含む生物学的サンプルに曝露する。次いでその固相を洗浄し、未結合の抗原を除去する。次いで標識した抗体（例えば酵素結合）を、（存在するならば）結合した抗原に結合させ、抗体−抗原−抗体サンドイッチを形成する。抗体に結合し得る酵素の例は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、ウレアーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼである。酵素結合抗体は、基質と反応して呈色反応産物を産生し、それを測定し得る。本発明のキットおよび方法で使用するために適当な、本明細書中で記載されたいずれのイムノアッセイも、抗体の代わりに任意の結合部分を使用し得る。
【００３３】
免疫学的アッセイデザイン、理論およびプロトコールの詳細な概説を、Ｂｕｔｔ，Ｗ．Ｒ．、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ編、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）およびＨａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ編（１９８８）を含む、当該分野における多くの教科書において見出し得る。
【００３４】
一般的に、イムノアッセイデザインの考慮すべき事柄は、非特異的相互作用の産物から確実に区別し得る複合体を形成するために、標的に対して十分高い結合特異性を有する抗体（例えばモノクローナルまたはポリクローナル抗体）の調製を含む。本明細書中で使用される場合、「抗体」という用語は、結合タンパク質、例えば抗体または免疫グロブリン可変領域様の結合ドメインを含み、標的に対する適当な結合親和性および特異性を有する他のタンパク質を意味すると理解される。抗体の結合特異性が高いほど、検出し得る標的の濃度は低くなる。本明細書中で使用される場合、「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、結合部分、例えば結合タンパク質が、約１０５Ｍ−１より高い、より好ましくは約１０７Ｍ−１より高い、標的に対する結合親和性を有することを意味すると理解される。
【００３５】
個人において心不全を検出するためのアッセイにおいて有用な、単離された標的マーカーに対する抗体を、当該分野で周知であり、そして説明されている、標準的な免疫学的手順を用いて産生し得る。例えば、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、前出を参照のこと。簡単には、単離されたマーカーを用いて、マウス、ヤギ、または他の適当な哺乳動物のような異種の宿主において抗体を作る。そのマーカーを、宿主において抗体産生を増強し得る適当なアジュバントと組み合わせ、そして例えば腹腔内投与によって、宿主に注射する。宿主の免疫反応を刺激するために適当なあらゆるアジュバントを使用し得る。よく使用するアジュバントは、フロイント完全アジュバント（殺菌および乾燥した微生物細胞を含むエマルジョンであり、そして例えばＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、またはＧｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹから入手可能である）である。複数の抗原注射が望ましい場合、後の注射は不完全アジュバント（例えば細胞を含まないエマルジョン）と組み合わせた抗原を含み得る。ポリクローナル抗体を、目的のタンパク質に対する抗体を含む血清を抽出することによって、抗体産生宿主から単離し得る。モノクローナル抗体を、望ましい抗体を産生する宿主細胞を単離し、これらの細胞を免疫学分野で公知の標準的な手順を用いて骨髄腫細胞と融合させ、そして標的と特異的に反応し望ましい結合親和性を有するハイブリッド細胞（ハイブリドーマ）に関してスクリーニングすることによって産生し得る。
【００３６】
ガレクチン−３のＮ末端由来の代表的なエピトープは、ＭＡＤＮＦＳＬＨＤＡＬＳ（配列番号１）；ＭＡＤＮＦＳＬＨＤＡＬＳＧＳ（配列番号２）；ＷＧＮＱＰＡＧＡＧＧ（配列番号３）；ＹＰＧＡＰＧＡＹＰＧＡＰＡＰＧＶ（配列番号４）；ＧＮＰＮＰＱＧＷＰＧＡ（配列番号５）；ＹＰＳＳＧＱＰＳＡＴＧＡ（配列番号６）；ＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡ（配列番号７）；ＹＰＧＡＰＡＰＧＶＹＰＧＰＰＳＧＰＧＡ（配列番号８）；およびＹＰＳＳＧＱＰＳＡＴＧＡ（配列番号９）を含むがこれに限らない。非直線エピトープを含む他のガレクチン−３エピトープも、抗ガレクチン−３抗体による検出の標的として使用し得る。代表的な抗体が、Ｕ．Ｓ．２０１０／０１４９５４において議論され、その内容全体が、本明細書中で参照として組み込まれる。
【００３７】
抗体結合ドメインをまた、生合成的に産生し得、そしてその結合ドメインのアミノ酸配列を、標的上の好ましいエピトープとの結合親和性を増強するように操作し得る。特異的抗体の方法論は、よく理解され、そして文献において記載されている。その調製のより詳細な説明は、例えばＰｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（前出）において見出し得る。
【００３８】
それに加えて、当該分野でＢＡＢＳまたはｓＦｖ’ｓとしても公知である、遺伝的に操作した生合成抗体結合部位を使用して、サンプルがマーカーを含むかどうかを決定し得る。（ｉ）非共有結合的に結合したか、またはジスルフィド結合した合成ＶＨおよびＶＬダイマー、（ｉｉ）共有結合したＶＨ−ＶＬ１本鎖結合部位、（ｉｉｉ）個々のＶＨまたはＶＬドメイン、または（ｉｖ）１本鎖抗体結合部位を含む、ＢＡＢＳを作成および使用する方法が、例えば米国特許第５，０９１，５１３号；同５，１３２，４０５号；同４，７０４，６９２号；および同４，９４６，７７８号において開示される。さらに、マーカーに対して必要な特異性を有するＢＡＢＳを、コンビナトリアル遺伝子ライブラリーから、ファージ抗体クローニングによって得ることができる（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと）。簡単には、それぞれその外被表面に、単離されたマーカーまたはその断片によって予備免疫したマウス由来の可変領域遺伝子配列によってコードされた免疫グロブリン可変領域を有するＢＡＢＳを発現するファージを、固定化したマーカーに対する結合活性に関してスクリーニングする。固定化マーカーに結合するファージを収集し、そしてそのＢＡＢＳをコードする遺伝子を配列決定する。次いで目的のＢＡＢＳをコードする、結果として生じた核酸配列を、従来の発現システムにおいて発現して、ＢＡＢＳタンパク質を産生し得る。
【００３９】
診断およびモニタリングの正確性を改善するために、マルチマーカー分析を使用し得る。例えば、ガレクチン−３（Ｇａｌ−３）および脳ナトリウム排泄増加性ペプチド（ＢＮＰ）の血中濃度を使用して、心不全を診断し得、および心不全の長期の結果を予測し得る（ｖａｎ Ｋｉｍｍｅｎａｄｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４８：１２１７−２４（２００６）；Ｓｈａｒｍａら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１１０：３１２１−２８（２００４）；Ｌｏｋら、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．２８：１４１、Ａｂｓｔｒａｃｔ１０３５（２００７））。ＢＮＰおよびその切断同等物アミノ末端ｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）は、心臓チャンバーの高い充填圧力および心筋線維の伸張の結果として、心不全の間、心筋および血中において上昇する。心不全を診断するために使用し得る他の２次的マーカーは、スフィンゴ脂質、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸、ジヒドロスフィンゴシンおよびスフィンゴシルホスホリルコリンのような、非ペプチド心臓マーカーを含み得る（米国特許第６，５３４，３２２号を参照のこと）。上記のマーカーのレベルを測定する場合、診断の正確性を改善するために、年齢および性別に関する補正を組み込み得る。
【００４０】
（処置方法）
ガレクチン−３レベルによって心臓再同期療法の候補と同定される患者を、ＣＲＴデバイスの埋め込みによって処置し得る。
【００４１】
伝統的なペースメーカーは、収縮を整調するために、右心房、右心室、または両方に置かれた１本または２本の電気リードを含む。ＣＲＴデバイスは、左心室および右心室の同時収縮を誘発するために、少なくとも２本のリード：右心室に１本、そして左心室の壁に対して冠状静脈洞に１本を含む。多くの場合、３番目の感知リードを、右心房に置いて、心室の収縮のタイミングをはかるためのデータを提供する。そのようなＣＲＴデバイスは、左心室および右心室の協調した収縮を促進するだけでなく、心房の収縮に関するタイミングも保証する。そのリードを、胸部の皮膚の下に埋め込んだ電池式パルス発生機に連結する。心房の収縮が心室を血液で満たした後、そのパルス発生器が小さい電気シグナルを心室に送り、その協調した収縮を刺激し、血液を心臓から排出し、そしてそれを循環系に送る。
【００４２】
ＣＲＴデバイスは、付随する除細動機能有りまたは無しで利用可能である。除細動機能を含むデバイスは、ＣＲＴ−Ｄデバイスと呼ばれることもある。ＣＲＴ−Ｄデバイスは、異常な心臓リズムのリスクがある患者において特に有用である。例えば、速い、不規則な心拍は、心臓が完全な収縮を完了するのを妨げ得る；非常に遅い心拍も危険であり得る。心臓が異常なリズムを発症したら、ＣＲＴ−Ｄデバイスは心臓にショックを与え、異常なリズムを破壊し、そして心臓により正常な速度で再開する機会を与え得る。
【００４３】
ＣＲＴデバイスは、Ｓｔ．Ｊｕｄｅ Ｍｅｄｉｃａｌ（Ａｔｌａｓ（登録商標）ＩＩＨＦＩＣＤ、Ａｔｌａｓ（登録商標）＋ＨＦＩＣＤ、Ｅｐｉｃ（登録商標）ＨＦＩＣＤ、Ｅｐｉｃ（登録商標）ＩＩＨＦＩＣＤ、Ｐｒｏｍｏｔｅ（登録商標）ＲＦＣＲＴ−Ｄ）、Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＣＯＧＮＩＳ（登録商標）、Ｃｏｎｔａｋ Ｒｅｎｅｗａｌ、ＬＩＶＩＡＮＴＭ）、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（ＣｏｎｓｕｌｔａＴＭ、Ｃｏｎｃｅｒｔｏ（登録商標）、Ｍａｘｉｍｏ（登録商標）ＩＩ、ＩｎＳｙｎｃ（登録商標）Ｍａｘｉｍｏ（登録商標））、Ｓｏｒｉｎ Ｇｒｏｕｐ ＥＲＭ（ＯＶＡＴＩＯＴＭおよびＮｅｗＬｉｖｉｎｇＴＭ）およびＢＩＯＴＲＯＮＩＫ（登録商標）（Ｓｔｒａｔｏｓ（登録商標）ＬＶおよびＳｔｒａｔｏｓ（登録商標）ＬＶ−Ｔ）のような製造業者から広く入手可能である。
【００４４】
心臓再同期療法を、任意で１つまたはそれ以上の心不全のための他の処置と組み合わせる。例えば、患者をまた、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、またはシンバスタチンのようなスタチン；フロセミド、ブメタニド、ヒドロクロロチアジド、スピロノラクトン、エプレレノン、トリアムテレン、トルセミド、またはメトラゾンのような利尿薬；ドブタミン、ミルリノン、またはジゴキシンのような変力物質；カルベジロールまたはメトプロロールのようなβ遮断薬；および／またはＢＮＰのようなナトリウム排泄増加性ペプチドによっても処置し得る。
【００４５】
処置はまた、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター（例えばカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリル、またはラミプリル）；カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、またはエプロサルタンのようなアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬；一硝酸イソソルビドまたは二硝酸イソソルビドのような硝酸塩；および／またはヒドララジンのような血管拡張薬も含み得る。適当な症例において、血管形成術または他の手術のような、他の形式の医学的介入も実施し得る。
【００４６】
処置の有効性を、ガレクチン−３のような関連するバイオマーカーの定期的な測定によって、経時的にモニタリングし得る。ガレクチン−３レベルおよび／または他のバイオマーカー（ＢＮＰのような）を、ＣＲＴ患者において測定し得、そしてその患者で以前に測定したガレクチン−３濃度と比較し得る。患者において１回またはそれ以上の以前のガレクチン−３濃度と比較した、ガレクチン−３濃度の増加または減少は、患者が心臓再同期療法に応答しているか、または応答していないことの指標となり得る。マーカーレベルを、年１回、年２回、隔月、月１回、３週間ごと、隔週、週１回、毎日、または変動する間隔で患者から得たサンプルにおいてなど、経時的にモニタリングし得る。
【実施例】
【００４７】
（実施例：ガレクチン−３および心臓再同期療法）
（方法）
（試験集団）
臨床試験に、左心室収縮期機能不全および心臓同期不全（１５０ｍｓと同じかまたはそれより大きいＱＲＳ幅、またはＱＲＳが１２０−１４９ｍｓｅｃなら心エコーの同期不全によって示されるような）の証拠を有する、少なくとも６週間心不全（ＨＦ）を有する（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ機能分類ＩＩＩまたはＩＶ）患者を登録した。試験のデザインおよび初期結果が、公開された文献において報告されている［Ｊ．Ｃｌｅｌａｎｄら、「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ」、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００５年４月１４日；３５２（１５）：１５３９−４９］。全ての患者に、アンギオテンシン変換酵素インヒビター、β遮断薬および利尿薬を含む標準的な薬理学的治療を与えた。患者を、最適化した薬理学的治療単独による処置、または心臓再同期療法（ＣＲＴ）と組み合わせた処置に、非盲検方式で無作為に割り当てた。ＣＲＴを受ける患者に、そのバックグラウンドの薬理学的治療に加えて、ＩｎＳｙｎｃ（登録商標）ＩＩＩＣＲＴデバイス（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ Ｉｎｃ．、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を与えた。１分あたり６０拍より遅い速度を防ぐための心房ペーシングを有する、房両心室性（ａｔｒｉｏｂｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）ペーシングを使用した。右心室および左心室を同時に刺激した。心エコーを用いて、僧帽弁流入シグナルを用いて心房−心室の遅延を最適化した。流入シグナルの心房コンポーネントを短縮しない、最も短い心房−心室の遅延が最適と考えられた。
【００４８】
（血液サンプリング）
血清サンプルを、ベースライン、３および１８ヶ月に採った。全てのサンプルを、−８０℃で保存した。
【００４９】
（検査分析）
血清サンプル中のガレクチン−３濃度の決定を、ＥＬＩＳＡキット（ガレクチン−３アッセイ；ＢＧ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて評価した。そのアッセイの感度（ゼロではない最も低い濃度）は、０．９６ｎｇ／ｍＬであった。アッセイ内およびアッセイ間の変動は、それぞれ８％および１０％未満であった。
【００５０】
（統計学的分析）
全ての分析を、ＳＡＳバージョン９ソフトウェア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ、ＵＳＡ）を用いて行った。分析物のレベルおよび結果の関連を評価するために、ロジスティック回帰分析を用いた。特定の分析において、目的の全ての共変数について完全な患者のみを、その分析に含むと考えた。両側の有意性レベルを０．０５に設定し、そして０．０５未満の確率値を有意であると考えた。
【００５１】
（結果）
（患者における経時的ガレクチン−３濃度）
試験の登録時として規定されるベースライン、およびベースラインから１８ヶ月後のガレクチン−３の平均および標準偏差を、介入グループごとに、下記の表１に示す。全ての患者が各時点においてガレクチン−３の測定のために利用可能な血清サンプルを有していたわけではないことに注意する；表１は、ガレクチン−３測定が可能な全ての患者に関する結果を示す。
【００５２】
表１．介入グループごとの、ベースラインおよびベースラインの１８ヶ月後の血清ガレクチン−３濃度（平均および標準偏差）。括弧内の数字は、１標準偏差を示す。ガレクチン−３を測定した血清サンプルを有する患者の数も、各時点およびグループに関して表に示す。
【００５３】
【表１】
表１から、ＣＲＴを受けなかった患者における平均血清ガレクチン−３濃度は、ベースラインおよびベースラインの１８ヶ月後で同じであり、一方ＣＲＴを受けた患者における平均血清ガレクチン−３濃度は、ベースラインと１８ヶ月との間に減少したことが観察される。
【００５４】
（患者における経時的ガレクチン−３濃度および有害な結果）
有害な結果、すなわちベースラインから１８ヶ月以内の心不全による死亡または予定外の入院の頻度を、ベースラインとベースラインの３ヶ月後との間に最も大きい血清ガレクチン−３の減少を経験した１０人の患者に関して調査した。ベースラインとベースラインの３ヶ月後との間に最も大きくガレクチン−３レベルが減少した１０人の患者のうち、これらの患者の６人（６０％）が、ベースラインの１８ヶ月以内に、心不全による死亡または入院の有害な結果を経験した。対照的に、ベースラインおよびベースラインの３ヶ月後の血清ガレクチン−３値を有し、および有害な結果についての情報が入手可能である他の患者のうち、８１％（１５９人の患者のうち１２８人）が、１８ヶ月で心不全による死亡または入院の有害な結果を経験した。
【００５５】
（ＣＲＴを受ける患者のベースラインにおけるガレクチン−３濃度は、有害な結果と関連している）
ＣＲＴを受けた患者において、ベースラインのガレクチン−３血清濃度は、後の有害な結果、すなわち１８ヶ月以内の死亡または１８ヶ月以内の入院のリスクと有意に関連していることが観察された。下記の表２は、ベースラインのガレクチン−３と後の有害な結果との間の関連を評価するための、統計学的ロジスティック回帰分析の結果を示す。ロジスティック回帰分析の技術の詳細に関しては、例えばＤａｖｉｄ Ｗ．ＨｏｓｍｅｒおよびＳｔａｎｌｅｙ Ｌｅｍｅｓｈｏｗ、Ａｐｐｌｉｅｄ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ、２０００）を参照のこと。分析において、３０ｎｇ／ｍＬより高いベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを１つのグループに入れ、そして３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを、別のグループに入れた。それに加えて、各患者の左心室収縮末期容量（ＬＶＥＳＶ）も、統計学的モデルにおいて共変数として考えた；そのため、ベースラインにおいて両方の変数の測定を有する９８人の患者のみを、この分析に含めることができる。ＣＲＴを受け、そして３０ｎｇ／ｍＬより高いベースラインガレクチン−３レベルを有する患者は、ＣＲＴを受け、そして３０ｎｇ／ｍＬかまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３レベルを有する患者と比較して、１８ヶ月以内の死亡または１８ヶ月以内の入院の約３倍高いオッズを有していた。
【００５６】
表２．ＣＲＴを受けた患者の、１８ヶ月以内の死亡または入院のエンドポイントに関するロジスティック回帰分析の結果。ガレクチン−３のオッズ比は、３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３を有するグループと関連がある；ＬＶＥＳＶのオッズ比は、２００ｍＬまたはそれ未満のＬＶＥＳＶを有するグループと関連がある。
【００５７】
【表２】
（ベースラインにおけるガレクチン−３濃度は、ＣＲＴを受けた患者において結果と有意に関連しているが、ＣＲＴを受けなかった患者においてはそうではない）
ＣＲＴを受けた患者において、ベースラインガレクチン−３血清濃度は、後の有害な結果、すなわちベースラインから１８ヶ月以内の死亡または１８ヶ月以内の予定外の入院のリスクと有意に関連しているが、ＣＲＴを受けなかった患者においてはそうではないことが観察された。下記の表３は、ベースラインのガレクチン−３と後の有害な結果との間の関連を評価するための、統計学的ロジスティック回帰分析の結果を示す。この分析を、ＣＲＴを受けた患者に関して、およびＣＲＴを受けなかった患者に関して別々に行った。ロジスティック回帰分析の技術の詳細に関しては、例えばＤａｖｉｄ Ｗ．ＨｏｓｍｅｒおよびＳｔａｎｌｅｙ Ｌｅｍｅｓｈｏｗ、Ａｐｐｌｉｅｄ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ、２０００）を参照のこと。分析において、３０ｎｇ／ｍＬより高いベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを１つのグループに入れ、そして３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを、別のグループに入れた。それに加えて、各患者の左心室収縮末期容量（ＬＶＥＳＶ）も、統計学的モデルにおいて共変数として考えた。表３は、これらの分析の結果を示す。ＣＲＴを受けた９８人の評価可能な患者が存在し、そのうち２２人（９８人の２２．４％）が、１８ヶ月以内に死亡または入院の有害な結果を経験した。ＣＲＴを受けなった９６人の評価可能な患者が存在し、そのうち２９人（９６人の３０．２％）が、１８ヶ月以内に死亡または入院の有害な結果を経験した。
【００５８】
表３．ＣＲＴを受けた患者およびＣＲＴを受けなかった患者に関して別々に分析した、１８ヶ月以内の死亡または入院のエンドポイントのロジスティック回帰分析の結果。ガレクチン−３のオッズ比は、３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３を有するグループと関連がある；ＬＶＥＳＶのオッズ比は、２００ｍＬまたはそれ未満のＬＶＥＳＶを有するグループと関連がある。
【００５９】
【表３】
ＣＲＴを受けた患者でのみ、ベースラインガレクチン−３が１８ヶ月以内の死亡または入院の有害な結果と、前もって指定した統計学的有意性レベルで、統計学的に有意に関連していたことが見出された。ＣＲＴを受けなかった患者のグループのベースラインガレクチン−３は、０．０５未満の定めた有意性レベルで、同じ有害な結果エンドポイントと有意に関連しておらず、そしてそのグループの９５％信頼区間は、１またはユニティのヌルオッズ比の値と重複する。
【００６０】
（ＣＲＴは、全体的に減少した事象率と関連するが、より高いガレクチン−３濃度を有する患者においてより減少が大きい）
ベースラインの１８ヶ月以内に心不全のために死亡または予定外の入院の事象を経験した、４つのカテゴリーそれぞれの患者の数を、下記の表４に列挙する。この表は、ベースライン血液サンプルが、ガレクチン−３ベースライン濃度値を有し、そして１８ヶ月間うまく追跡できてベースラインの１８ヶ月以内における心不全のための死亡または予定外の入院のエンドポイントを確認し得た、試験の全ての患者を含む。
【００６１】
表４．ＣＲＴ処置およびガレクチン−３カテゴリーごとの、患者の数。事象の数およびパーセンテージを、表の各セルに示す。この表の事象は、ベースラインの１８ヶ月以内の心不全による死亡または予定外の入院と規定される。
【００６２】
【表４】
表４から観察し得るように、ＣＲＴを受けた患者は、ＣＲＴを受けなかった患者と比較して、事象頻度の減少を示した。低ガレクチン−３グループ、すなわち≦３０ｎｇ／ｍＬのベースラインガレクチン−３レベルを有する患者において、事象頻度の絶対的低減は９．１％であった（２７．６％マイナス１８．５％）。高ガレクチン−３グループ、すなわち＞３０ｎｇ／ｍＬのベースラインガレクチン−３レベルを有する患者において、事象頻度の絶対的低減は、９．６％であった（４２．９％マイナス３３．３％）。より高いベースラインガレクチン−３グループにおける９．６％の低減は、より低いベースラインガレクチン−３グループにおける９．１％の低減より大きいので、これらのデータは、おそらくより高いベースラインガレクチン−３の値は、ＣＲＴからより大きい利益を得る患者を同定することを示す。
【００６３】
（参照による組込み）
本明細書中で参照された特許文書および科学論文のそれぞれの開示全体は、全ての目的のために参照によって組み込まれる。
【００６４】
（同等物）
本発明を、その精神または本質的な特徴から離れることなく、他の特定の形式で具体化し得る。従って、前述の実施態様は全ての局面において、本明細書中で記載された発明を制限するのではなく説明すると考えられる。従って本発明の範囲は、前述の記載ではなく添付の特許請求の範囲によって示され、そしてその特許請求の範囲と同等の意味および範囲内に含まれる全ての変化は、そこに含まれることが意図される。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への参照）
本出願は、２００９年８月２５日に出願された米国仮出願第６１／２３６，７１２号の利益を主張し、上記米国仮出願の全容は、参照によって本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
うっ血性心不全、または心不全は、病的状態および死亡の主な原因である。米国で約５００万人の人々が心不全に罹患し、毎年約５００，０００例の新規症例が診断されている。多くの場合、うっ血性心不全患者は、さらに心臓の効率を減少させる不整脈にも罹患している。
【０００３】
そのような患者のための１つの処置選択肢は、両心室性ペーシングデバイスとしても公知である、心臓再同期療法（ＣＲＴ）デバイスの埋め込みを含む。正常な心拍において、心臓の２つの心房チャンバーは同時に収縮し、血液を２つの心室チャンバーに送る。１秒未満後、２つの心室チャンバーは同時に収縮し、血液を心臓の外へ、そして体中へ送る。いくらかの心不全患者は、心室間に電気的な遅延を有し、これにより２つの心室チャンバーはもはや同時に収縮しない。その結果は、心拍出量の実質的な減少である。例えば、正常な心拍において、左心室の血液の半分超が各心拍において送り出される。言い換えると、「左室駆出率」または「ＬＶＥＦ」は、５０％より高い。対照的に、心拍が同調していないいくらかの心不全患者は、３分の１未満のＬＶＥＦを有する。これらの患者において、各心拍で血液の３分の２は「送り出されない」ままである。
【０００４】
ＣＲＴ療法の目的は、心室の同調したポンピングを回復することである。これを、心拍ごとに同時に収縮させるために２つの心室を刺激する別々の電気リードを有するデバイスによって達成する。ＣＲＴデバイスは、生活の質を改善し、そして中程度または重症の心不全；３５％以下のＬＶＥＦ；および心室の遅い脱分極を示す心エコー図（１２０ｍｓより長い「ＱＲＳ」群）を有するいくらかの患者において、死亡率を減少させた。それでも、ＣＲＴを受ける心不全患者の約３０％は、処置に応答しない（例えば、非特許文献１を参照のこと）。一人の著者が２００７年に警告したように、「最適なＣＲＴ候補を同定するためのより良い基準が、緊急に保証されるべきである（ｗａｒｒａｎｔｅｄ）」（非特許文献２）。さらに、ＣＲＴ介入を受けている心不全患者の中でも、心不全のための予定外の入院および死亡のような有害事象の率が高い（例えば、非特許文献３を参照のこと）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊｅｅｖａｎａｎｔｈａｍら、Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｊ．（２００９）１６（３）１９７−２０９
【非特許文献２】Ｓｔｅｌｌｂｒｉｎｋ、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．（２００７）２８：１５４１−１５４２
【非特許文献３】Ｃｌｅｌａｎｄら「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ」Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２００５）３５２（１５）：１５３９−４９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の概要）
体液中のヒトタンパク質ガレクチン−３（ｇａｌｅｃｔｉｎ−３）の濃度を、心臓再同期療法で処置した患者において、疾患の進行または治療の有効性を予測またはモニタリングするために使用し得ることが現在発見されている。患者のガレクチン−３血中濃度を、ＣＲＴデバイスを埋め込んだ後にモニタリングして、疾患の発症または進行および／または処置過程の継続的妥当性の持続的指標を提供し得る。例えば、本発明は、心不全患者の体液（例えば血液、血清、または血漿）中のガレクチン−３濃度の経時的変化を測定すること、およびガレクチン−３濃度の測定した変化を、心臓再同期療法が有用であったか、または有用でなかった他の患者において観察されたガレクチン−３濃度の変化と比較することを可能にする。
【０００７】
モニタリング方法は、患者のガレクチン−３濃度を、ＣＲＴデバイスの埋め込み前または後に、同じ患者の早期のガレクチン−３濃度と比較することを含み得る。その方法はまた、ＣＲＴデバイスの埋め込み後いくつかの時点で測定したガレクチン−３レベルを比較して、ガレクチン−３濃度の履歴を作ることを含み得る。例えば、本発明は、ＣＲＴデバイスを埋め込んだ心不全患者の体液（例えば血液、血清、または血漿）中のガレクチン−３濃度の増加または減少が、存在するかまたは存在しないかを検出することによって患者を評価するための方法を提供する。経時的に増加するガレクチン−３濃度の存在は、患者におけるうっ血性心不全の悪化の指標である。
【０００８】
１つの実施態様において、本発明は、心臓再同期療法で処置したヒトの予後または結果を予測するための方法を提供する。体液、例えば血液中のガレクチン−３の濃度を、心臓再同期療法後の予後の指標となるガレクチン−３濃度が存在するかまたは存在しないかに関して決定し得る。例えば、ヒトにおけるガレクチン−３血中濃度を測定し、そして最小閾値と比較し得る。最小閾値より上のガレクチン−３血中濃度は、そのヒトの死亡または入院のリスクの増加の指標となり得る。
【０００９】
その評価の結果を使用して、患者の処置を含む決定を知らせ得る。例えば、心不全患者が、患者のガレクチン−３濃度または患者のガレクチン−３濃度の変化に基づいて、心臓再同期療法に対して治療的に非応答性であるようならば、血管形成術または他の手術および／または利尿薬、変力物質、ベータ遮断薬、ナトリウム排泄増加性ペプチド、スタチン、または血管拡張薬の投与のような、他の形式の処置が好ましい場合がある。
【００１０】
体液中のヒトタンパク質ガレクチン−３の濃度は、症候性患者（ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｐａｔｉｅｎｔ）が心臓再同期療法から利益を得ることができるかどうかの決定に有益であり得ることも発見された。この方式で、除細動機能が有るかまたは無いＣＲＴデバイスを、その処置から利益を得る可能性のより高い心不全患者に埋め込み得る。従って、心不全を経験した患者、または心不全のリスクがあると同定された患者を試験して、その循環ガレクチン−３レベルを測定することが想定される。測定したガレクチン−３レベルは、患者の２つのグループ：そのガレクチン−３濃度に基づいて、心臓再同期療法から利益を得るであろう患者；および利益を得る見込みが無い（または可能性が低い）患者の同定を可能にする。ＣＲＴデバイスを、最初のグループの患者に埋め込み、一方２番目のグループの患者には他の治療過程を選択する。
【００１１】
従って、本発明は、心不全に罹患し得る、またはそのリスクのあるヒトのための治療を選択する方法を提供する。その方法は、血液サンプル、血清サンプル、または血漿サンプルのようなサンプル中のガレクチン−３濃度を測定することを含む。測定したガレクチン−３濃度は、その患者が心臓再同期療法に対して有利に応答しそうかどうかの指標となる。有利な応答は、例えばある期間にわたる生存可能性の増加、または心不全の進行または発症の低減、心臓の強度の改善、ＬＶＥＦの増加、心不全の悪化のための予定外の入院の減少、運動中の最大酸素消費量の増加、疲労の減少、息切れの低減、または睡眠時無呼吸の低減を含む。
【００１２】
１つの実施態様において、その方法は、心臓再同期療法の候補である心不全患者の体液（例えば血液、血清、または血漿）中のガレクチン−３濃度を、そのような処置の前に測定すること、およびそのガレクチン−３濃度を、心臓再同期療法が有用であることが証明された、除細動機能を有するかまたは有さないＣＲＴデバイスで処置した他の患者で観察されたガレクチン−３濃度と比較することを含む。
【００１３】
同様に、本発明は、心臓再同期療法の候補（例えば心不全患者）を評価するための方法を提供する。その方法は、心臓再同期療法の候補である患者の体液中のガレクチン−３濃度を測定すること、およびその測定したガレクチン−３濃度を、参照ガレクチン−３濃度と比較することを含む。その参照ガレクチン−３濃度は、他の患者において観察されたガレクチン−３の濃度由来であり得、そしてＣＲＴデバイスの埋め込みに対する応答性または無応答性の指標となり得る。測定したガレクチン−３濃度が、参照ガレクチン−３濃度と異なるなら、心臓再同期療法を制限または拒否し得る。
【００１４】
本発明はまた、心不全に罹患し得るかまたはそのリスクのあるヒトを処置するための方法を提供する；その方法は、心臓再同期療法に対する好ましい応答の指標となる、決定されたガレクチン−３血中濃度を有する患者に、ペースメーカーまたは除細動機能を有するかまたは有さないＣＲＴデバイスを埋め込むことを含む。ガレクチン−３血中濃度を測定する過程を含む、治療を選択する方法とは対照的に、その処置方法は、続くＣＲＴデバイスの埋め込みに関連する。従って、その処置方法は、ガレクチン−３の決定が以前にどのように、または誰によってなされたかにかかわらず、そのガレクチン−３血中濃度が好ましい応答の指標であると決定された患者にＣＲＴデバイスを埋め込むことを含む。
【００１５】
選択または処置された患者において、ガレクチン−３血中濃度が、最小閾値の上、最大閾値の下、または最小および最大閾値によって規定される標的範囲内であることが決定され得る。最小閾値は、例えば１０ｎｇ／ｍｌ超；１０〜１５ｎｇ／ｍｌ；１５〜２０ｎｇ／ｍｌ；２０〜２５ｎｇ／ｍｌ；２５〜３０ｎｇ／ｍｌ；または３０ｎｇ／ｍｌ超であり得る。最大閾値は、例えば７０ｎｇ／ｍｌ未満；６０ｎｇ／ｍｌ未満；４０ｎｇ／ｍｌ未満；３０〜４０ｎｇ／ｍｌ；２５〜３０ｎｇ／ｍｌ；２０〜２５ｎｇ／ｍｌ；または１５〜２０ｎｇ／ｍｌであり得る。
【００１６】
その評価の結果を、患者の処置を含む決定を知らせるために使用し得る。例えば、心不全患者のガレクチン−３濃度が、心臓再同期療法が有用であることが証明された他の心不全患者のものと異なるなら、ＣＲＴデバイスの埋め込みは示されず、そして患者に異なる薬物療法または治療選択肢を提案し得る。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（発明の詳細な説明）
本発明者らは、心不全患者の心臓再同期療法への生理学的応答を予測および／またはモニタリングする方法を発明した。過去の臨床試験において、ＣＲＴデバイスレシピエントの４分の１〜２分の１が、そのデバイスから有意な利益を得られなかったので、「非応答者」として分類された（Ｈａｗｋｉｎｓら（２００６）Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．２７：１２７０−１２８１）。１つの試験は、コントロールグループはさらにより悪かったが、ＣＲＴデバイスレシピエントの４０％で、埋め込み後に心不全が悪化したことを報告した（Ｃｌｅｌａｎｄら（２００５）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５２：１５３９−４９）。本発明者らは、患者における循環ガレクチン−３レベルの測定を使用して、心臓再同期療法のより良い候補である患者を同定し得ることを発見した。この方法において、その治療を、その治療から利益を得る可能性のより高い人に優先的に向け得、一方他の患者のリスクおよび費用をなくし、そして異なる治療過程に向け得る。それに加えて、本発明者らは、ＣＲＴデバイスを埋め込む際、および／またはその後にガレクチン−３を測定することは、疾患の発症または進行および／または処置過程の継続的妥当性の持続的指標を提供することを発見した。
【００１８】
本明細書中で使用される「心不全」、「ＨＦ」、「うっ血性心不全」、または「ＣＨＦ」という用語は、心室の血液を満たすかまたはそれを排出する能力を損なう、複合的な臨床症候群を指す。あらゆる構造的または機能的心臓障害が、ＨＦを引き起こし得、ＨＦ患者の大部分は損なわれた左心室（ＬＶ）心筋機能を有する。ＨＦの症状は、呼吸困難（息切れ）、疲労、および体液貯留を含む。Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＨＡ）は、ＨＦの進行または発症の４つのステージを同定した。ステージＡおよびＢの患者は、明らかな危険因子を示すが、まだＨＦを発症していない。ステージＣおよびＤの患者は、現在ＨＦの症状を示しているか、または過去にその症状を示していた。例えば、ステージＡの患者は、冠状動脈疾患、高血圧、または糖尿病のような危険因子を有し、損なわれた左心室（ＬＶ）機能を示さない患者である。ステージＢの患者は、無症候性であるが、損なわれたＬＶ機能、肥大または幾何学的なチャンバーのゆがみのような、心臓構造異常またはリモデリングを有する。ステージＣの患者は、心臓異常を有し、そして症候性である。ステージＤの患者は、最大限の医学的処置にもかかわらず症状を示す、難治性のＨＦを有する。その患者らは、典型的には繰り返し入院するか、または特別な介入無しには退院できない。
【００１９】
ガレクチン−３は、多機能β−ガラクトシド結合レクチンのファミリーの構造的にユニークなメンバーである（Ｇａｂｉｕｓ（２００６）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：４３−７９）。ガレクチン−３の発現は、上皮および炎症性細胞（マクロファージ、好中球および肥満細胞を含む）と関連していた。ガレクチン−３は、筋線維芽細胞の増殖、線維形成、組織修復、心臓リモデリング、および炎症を含む、心不全において重要な様々な生物学的過程に関係していた（Ｌｉｕら（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９６（２）：Ｈ４０４−１２；Ｐａｐａｓｐｙｒｉｄｏｎｏｓら（２００８）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２８（３）：４３３−４０；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：５０６０−５０６５；Ｓｈａｒｍａら（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １１０：３１２１−３１２８；Ｓａｎｏら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（４）：２１５６−６４；Ｋｕｗａｂａｒａら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（１０）：３９３９−４４）。
【００２０】
本発明者らは、心不全患者において、心臓再同期療法の有効性を予測するために、循環ガレクチン−３タンパク質レベルの使用を可能にする方法を開発した。患者のガレクチン−３レベルの知識は、ＣＲＴデバイスの埋め込みに際して、患者の結果の情報を与える。さらに、埋め込み後のガレクチン−３レベルのような、循環バイオマーカーのレベルは、患者の結果の情報を与え、そしてガレクチン−３レベルの変化は、予後の変化を示し得る。より高い濃度のガレクチン−３は、死亡および入院のような悪い予後と関連するが、ＣＲＴデバイスを受けた比較的高いガレクチン−３レベルを有する患者は、心拍出量、生活の質（例えばＭｉｎｎｅｓｏｔａ Ｌｉｖｉｎｇ Ｗｉｔｈ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ（登録商標） Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａによって測定されるような）、心不全の進行または発症の低減、疲労の減少、息切れの低減、または生存可能性の増強によって測定されるように、有意に利益を得ることができる。
【００２１】
（ガレクチン−３の検出）
本発明は、任意で１つまたはそれ以上の他のマーカー（例えばＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）と組み合わせて、ガレクチン−３のようなマーカーのレベルを測定することによって、心臓再同期療法に対する心不全患者の生理学的応答を予測および／またはモニタリングするための方法を提供する。定量化ありまたは無しで、目的のタンパク質を検出するための多くの方法が周知であり、そして本発明の実施において使用し得る。そのようなアッセイの例を下記に記載し、そして例えば、イムノアッセイ、クロマトグラフィー法、および質量分析を含み得る。そのようなアッセイを、特に、血液、血漿、および血清を含む任意の生物学的サンプルに対して行い得る。よって、複数のアッセイを用いてガレクチン−３を検出し得、そしてサンプルを１つまたはそれ以上の供給源から分析し得る。
【００２２】
１つまたはそれ以上の分離方法の助力によって、サンプルにおけるマーカーを検出または定量化し得る。例えば、適当な分離方法は、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／（ＭＳ）ｎ（ｎはゼロより大きい整数）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、表面増強レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、シリコンを用いる脱離／イオン化（ＤＩＯＳ）、二次イオン質量分析（ＳＩＭＳ）、四重極飛行時間型（Ｑ−ＴＯＦ）、大気圧化学イオン化質量分析（ＡＰＣＩ−ＭＳ）、ＡＰＣＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＡＰＣＩ−（ＭＳ）ｎ、または大気圧光イオン化質量分析（ＡＰＰＩ−ＭＳ）、ＡＰＰＩ−ＭＳ／ＭＳ、およびＡＰＰＩ−（ＭＳ）ｎのような、質量分析法を含み得る。他の質量分析法は、とりわけ四重極、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）およびイオントラップを含み得る。さらに使用し得る分光技術は、共鳴分光法および光学的分光法を含む。
【００２３】
他の適当な分離方法は、化学的抽出分離、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性（逆相）液体クロマトグラフィー、等電点電気泳動、１次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、２次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（２Ｄ−ＰＡＧＥ）、または薄層、ガスもしくは液体クロマトグラフィーのような他のクロマトグラフィー技術、またはそのあらゆる組み合わせを含む。１つの実施態様において、アッセイする生物学的サンプルを、分離方法に適用する前に分画し得る。
【００２４】
マーカー自体の物理的分離を必要としない方法によって、マーカーを検出または定量化し得る。例えば、分子の複雑な混合物からマーカーのプロファイルを解明するために、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法を用い得る。例えば、腫瘍を分類するための類似したＮＭＲの使用が、Ｈａｇｂｅｒｇ（１９９８）ＮＭＲ Ｂｉｏｍｅｄ．１１：１４８−５６において開示される。
【００２５】
サンプル中のマーカーをまた、例えばマーカーを、そのマーカーに特異的に結合し得る結合部分と組み合わせることによって、検出または定量化し得る。その結合部分は、例えば、リガンド−受容体ペア、すなわち特異的結合相互作用を有し得る分子のペアのメンバーを含み得る。その結合部分はまた、例えば抗体−抗原、酵素−基質、核酸−核酸、タンパク質−核酸、タンパク質−タンパク質、または当該分野で公知の他の特異的結合ペアのような、特異的結合ペアのメンバーを含み得る。標的に対する増強した親和性を有する結合タンパク質をデザインし得る。任意で、その結合部分を、酵素、蛍光、放射性、燐光、または呈色粒子標識のような、検出可能な標識と結合し得る。その標識複合体を、例えば視覚的に、または分光光度計または他の検出器の補助によって、検出または定量化し得る。
【００２６】
ガレクチン−３レベルを、イムノアッセイを行うことによって定量化し得る。ガレクチン−３イムノアッセイは、試験する被験体由来のサンプルを、ガレクチン−３が存在するなら免疫特異的な結合が起こり得る条件下で、適当な抗体と接触させること、および抗体による任意の免疫特異的な結合の量を検出または測定することを含む。制限無しに、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光イムノアッセイおよびプロテインＡイムノアッセイのような技術を用いた、競合的または非競合的アッセイシステムを含む、任意の適当なイムノアッセイを使用し得る。
【００２７】
「サンドイッチ」アッセイにおいて、ガレクチン−３の非オーバーラップ部位（エピトープ）に特異的に結合するモノクローナル抗体のような、２つの分子（「結合部分」）を使用する。典型的には、１つの結合部分は、固体表面に固定化され、ここでそれはガレクチン−３に結合および捕捉する。従って、この最初の結合部分は、捕捉結合部分とも呼ばれる。２番目の結合部分のガレクチン−３複合体への結合が、ガレクチン−３が捕捉されたことを示すように、２番目の結合部分を、例えばフルオロフォア、酵素、または呈色粒子で検出可能に標識する。そのシグナルの強度は、サンプル中のガレクチン−３の濃度に比例する。従って、２番目の結合部分は、検出結合部分または標識結合部分とも呼ばれる。結合部分は、ガレクチン−３のＮ末端の一部に特異的に結合する限り、あらゆる型の分子であり得る。好ましい実施態様において、使用される結合部分は、モノクローナル抗ガレクチン−３抗体、すなわち、ガレクチン−３の別々の部分に対して作られた、またはそうでなければそれに結合するよう選択されたモノクローナル抗体である。
【００２８】
そのようなアッセイ手順を、２部位免疫測定（ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ）アッセイ法、「サンドイッチ」法、または（抗体が結合物である場合）「サンドイッチイムノアッセイ」と呼び得る。当該分野で公知であるように、その捕捉および検出抗体を、同時にまたは連続的にテストサンプルと接触させ得る。捕捉抗体をサンプルとインキュベートし、そしてその後標識した検出抗体を前もって決めた時間に加えることによって、連続的な方法を達成し得る（「前向き」法と呼ばれることもある）。あるいは、まず標識した検出抗体を、サンプルとインキュベートし、そして次いでそのサンプルを捕捉抗体に曝露し得る（「逆向き」法と呼ばれることもある）。アッセイを完了するための、短期間で有り得る任意の必要なインキュベーションの後に、その標識を測定する。そのようなアッセイを、様々なハイスループット臨床検査分析器またはポイントオブケア（ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｃａｒｅ）もしくは在宅試験デバイスの使用を含む、当業者に公知である多くの特定の形式で行い得る。
【００２９】
１つの実施態様において、サンドイッチ形式において側方流動デバイスを使用し得、ここで生物学的サンプルにおける、ベースライン感度レベルより上のガレクチン−３の存在は、側方流動アッセイの捕捉ゾーンまたはその上流におけるサンドイッチ相互作用の形成を可能にする。例えば、米国特許第６，４８５，９８２号を参照のこと。その捕捉ゾーンは、ガレクチン−３を捕捉するために適当な抗体分子、またはビオチン化複合体の捕捉のための固定化アビジン等のような捕捉結合部分を含み得る。例えば、米国特許第６，３１９，６７６号を参照のこと。そのデバイスにはまた、捕捉ゾーンにおける捕捉に適当な発光標識を組み込むことができ、ガレクチン−３の濃度は、その捕捉部位におけるシグナルの強度に比例する。適当な標識は、ポリスチレンマイクロスフィアに固定化された蛍光標識を含む。呈色粒子も使用し得る。
【００３０】
本発明の方法で使用し得る他のアッセイ形式は、フロースルーデバイスを含むがこれに限らない。例えば、米国特許第４，６３２，９０１号を参照のこと。フロースルーアッセイにおいて、１つの結合部分（例えば抗体）を、膜表面の規定された領域に固定化する。次いでこの膜を、デバイスを通してサンプル容積を吸い出すための（ｐｕｍｐ）リザーバーとして作用する吸収層の上にかぶせる。固定化の後、膜上の残りのタンパク質結合部位をブロックして、非特異的相互作用を最小限にする。操作において、生物学的サンプルは膜に加えられ、そしてマトリックスを通してろ過され、このことは、サンプル中の抗体に特異的な任意の分析物が、固定化した抗体に結合することを可能にする。２番目の工程において、サンドイッチを完成するために、捕捉されたマーカーと反応する、標識した二次抗体を加え得るかまたは放出し得る。あるいは、二次抗体をサンプルと混合し得、単一の工程において加え得る。ガレクチン−３が存在するなら、呈色スポットが膜表面に現れる。
【００３１】
最もよくある酵素イムノアッセイは、「酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）」である。ＥＬＩＳＡは、標識した（例えば酵素結合）形式の抗体を用いて抗原の濃度を検出および測定するための技術である。異なる形式のＥＬＩＳＡが存在し、それらは当業者に周知である。標準的なＥＬＩＳＡ技術は、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ」第２版、ＲｏｓｅおよびＢｉｇａｚｚｉ編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９８０；Ｃａｍｐｂｅｌｌら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉｎｃ．、１９６４；およびＯｅｌｌｅｒｉｃｈ，Ｍ．（１９８４）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：８９５−９０４において記載されている。ガレクチン−３を検出するための好ましい酵素結合免疫吸着測定法キット（ＥＬＩＳＡ）は、市販で入手可能である（ＢＧ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）。
【００３２】
「サンドイッチＥＬＩＳＡ」において、抗体（例えば抗ガレクチン−３）を、固相（すなわちマイクロタイタープレート）に結合し、そして抗原（例えばガレクチン−３）を含む生物学的サンプルに曝露する。次いでその固相を洗浄し、未結合の抗原を除去する。次いで標識した抗体（例えば酵素結合）を、（存在するならば）結合した抗原に結合させ、抗体−抗原−抗体サンドイッチを形成する。抗体に結合し得る酵素の例は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、ウレアーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼである。酵素結合抗体は、基質と反応して呈色反応産物を産生し、それを測定し得る。本発明のキットおよび方法で使用するために適当な、本明細書中で記載されたいずれのイムノアッセイも、抗体の代わりに任意の結合部分を使用し得る。
【００３３】
免疫学的アッセイデザイン、理論およびプロトコールの詳細な概説を、Ｂｕｔｔ，Ｗ．Ｒ．、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ編、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）およびＨａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ編（１９８８）を含む、当該分野における多くの教科書において見出し得る。
【００３４】
一般的に、イムノアッセイデザインの考慮すべき事柄は、非特異的相互作用の産物から確実に区別し得る複合体を形成するために、標的に対して十分高い結合特異性を有する抗体（例えばモノクローナルまたはポリクローナル抗体）の調製を含む。本明細書中で使用される場合、「抗体」という用語は、結合タンパク質、例えば抗体または免疫グロブリン可変領域様の結合ドメインを含み、標的に対する適当な結合親和性および特異性を有する他のタンパク質を意味すると理解される。抗体の結合特異性が高いほど、検出し得る標的の濃度は低くなる。本明細書中で使用される場合、「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、結合部分、例えば結合タンパク質が、約１０５Ｍ−１より高い、より好ましくは約１０７Ｍ−１より高い、標的に対する結合親和性を有することを意味すると理解される。
【００３５】
個人において心不全を検出するためのアッセイにおいて有用な、単離された標的マーカーに対する抗体を、当該分野で周知であり、そして説明されている、標準的な免疫学的手順を用いて産生し得る。例えば、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、前出を参照のこと。簡単には、単離されたマーカーを用いて、マウス、ヤギ、または他の適当な哺乳動物のような異種の宿主において抗体を作る。そのマーカーを、宿主において抗体産生を増強し得る適当なアジュバントと組み合わせ、そして例えば腹腔内投与によって、宿主に注射する。宿主の免疫反応を刺激するために適当なあらゆるアジュバントを使用し得る。よく使用するアジュバントは、フロイント完全アジュバント（殺菌および乾燥した微生物細胞を含むエマルジョンであり、そして例えばＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、またはＧｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹから入手可能である）である。複数の抗原注射が望ましい場合、後の注射は不完全アジュバント（例えば細胞を含まないエマルジョン）と組み合わせた抗原を含み得る。ポリクローナル抗体を、目的のタンパク質に対する抗体を含む血清を抽出することによって、抗体産生宿主から単離し得る。モノクローナル抗体を、望ましい抗体を産生する宿主細胞を単離し、これらの細胞を免疫学分野で公知の標準的な手順を用いて骨髄腫細胞と融合させ、そして標的と特異的に反応し望ましい結合親和性を有するハイブリッド細胞（ハイブリドーマ）に関してスクリーニングすることによって産生し得る。
【００３６】
ガレクチン−３のＮ末端由来の代表的なエピトープは、ＭＡＤＮＦＳＬＨＤＡＬＳ（配列番号１）；ＭＡＤＮＦＳＬＨＤＡＬＳＧＳ（配列番号２）；ＷＧＮＱＰＡＧＡＧＧ（配列番号３）；ＹＰＧＡＰＧＡＹＰＧＡＰＡＰＧＶ（配列番号４）；ＧＮＰＮＰＱＧＷＰＧＡ（配列番号５）；ＹＰＳＳＧＱＰＳＡＴＧＡ（配列番号６）；ＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡ（配列番号７）；ＹＰＧＡＰＡＰＧＶＹＰＧＰＰＳＧＰＧＡ（配列番号８）；およびＹＰＳＳＧＱＰＳＡＴＧＡ（配列番号９）を含むがこれに限らない。非直線エピトープを含む他のガレクチン−３エピトープも、抗ガレクチン−３抗体による検出の標的として使用し得る。代表的な抗体が、Ｕ．Ｓ．２０１０／０１４９５４において議論され、その内容全体が、本明細書中で参照として組み込まれる。
【００３７】
抗体結合ドメインをまた、生合成的に産生し得、そしてその結合ドメインのアミノ酸配列を、標的上の好ましいエピトープとの結合親和性を増強するように操作し得る。特異的抗体の方法論は、よく理解され、そして文献において記載されている。その調製のより詳細な説明は、例えばＰｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（前出）において見出し得る。
【００３８】
それに加えて、当該分野でＢＡＢＳまたはｓＦｖ’ｓとしても公知である、遺伝的に操作した生合成抗体結合部位を使用して、サンプルがマーカーを含むかどうかを決定し得る。（ｉ）非共有結合的に結合したか、またはジスルフィド結合した合成ＶＨおよびＶＬダイマー、（ｉｉ）共有結合したＶＨ−ＶＬ１本鎖結合部位、（ｉｉｉ）個々のＶＨまたはＶＬドメイン、または（ｉｖ）１本鎖抗体結合部位を含む、ＢＡＢＳを作成および使用する方法が、例えば米国特許第５，０９１，５１３号；同５，１３２，４０５号；同４，７０４，６９２号；および同４，９４６，７７８号において開示される。さらに、マーカーに対して必要な特異性を有するＢＡＢＳを、コンビナトリアル遺伝子ライブラリーから、ファージ抗体クローニングによって得ることができる（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと）。簡単には、それぞれその外被表面に、単離されたマーカーまたはその断片によって予備免疫したマウス由来の可変領域遺伝子配列によってコードされた免疫グロブリン可変領域を有するＢＡＢＳを発現するファージを、固定化したマーカーに対する結合活性に関してスクリーニングする。固定化マーカーに結合するファージを収集し、そしてそのＢＡＢＳをコードする遺伝子を配列決定する。次いで目的のＢＡＢＳをコードする、結果として生じた核酸配列を、従来の発現システムにおいて発現して、ＢＡＢＳタンパク質を産生し得る。
【００３９】
診断およびモニタリングの正確性を改善するために、マルチマーカー分析を使用し得る。例えば、ガレクチン−３（Ｇａｌ−３）および脳ナトリウム排泄増加性ペプチド（ＢＮＰ）の血中濃度を使用して、心不全を診断し得、および心不全の長期の結果を予測し得る（ｖａｎ Ｋｉｍｍｅｎａｄｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４８：１２１７−２４（２００６）；Ｓｈａｒｍａら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１１０：３１２１−２８（２００４）；Ｌｏｋら、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．２８：１４１、Ａｂｓｔｒａｃｔ１０３５（２００７））。ＢＮＰおよびその切断同等物アミノ末端ｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）は、心臓チャンバーの高い充填圧力および心筋線維の伸張の結果として、心不全の間、心筋および血中において上昇する。心不全を診断するために使用し得る他の２次的マーカーは、スフィンゴ脂質、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸、ジヒドロスフィンゴシンおよびスフィンゴシルホスホリルコリンのような、非ペプチド心臓マーカーを含み得る（米国特許第６，５３４，３２２号を参照のこと）。上記のマーカーのレベルを測定する場合、診断の正確性を改善するために、年齢および性別に関する補正を組み込み得る。
【００４０】
（処置方法）
ガレクチン−３レベルによって心臓再同期療法の候補と同定される患者を、ＣＲＴデバイスの埋め込みによって処置し得る。
【００４１】
伝統的なペースメーカーは、収縮を整調するために、右心房、右心室、または両方に置かれた１本または２本の電気リードを含む。ＣＲＴデバイスは、左心室および右心室の同時収縮を誘発するために、少なくとも２本のリード：右心室に１本、そして左心室の壁に対して冠状静脈洞に１本を含む。多くの場合、３番目の感知リードを、右心房に置いて、心室の収縮のタイミングをはかるためのデータを提供する。そのようなＣＲＴデバイスは、左心室および右心室の協調した収縮を促進するだけでなく、心房の収縮に関するタイミングも保証する。そのリードを、胸部の皮膚の下に埋め込んだ電池式パルス発生機に連結する。心房の収縮が心室を血液で満たした後、そのパルス発生器が小さい電気シグナルを心室に送り、その協調した収縮を刺激し、血液を心臓から排出し、そしてそれを循環系に送る。
【００４２】
ＣＲＴデバイスは、付随する除細動機能有りまたは無しで利用可能である。除細動機能を含むデバイスは、ＣＲＴ−Ｄデバイスと呼ばれることもある。ＣＲＴ−Ｄデバイスは、異常な心臓リズムのリスクがある患者において特に有用である。例えば、速い、不規則な心拍は、心臓が完全な収縮を完了するのを妨げ得る；非常に遅い心拍も危険であり得る。心臓が異常なリズムを発症したら、ＣＲＴ−Ｄデバイスは心臓にショックを与え、異常なリズムを破壊し、そして心臓により正常な速度で再開する機会を与え得る。
【００４３】
ＣＲＴデバイスは、Ｓｔ．Ｊｕｄｅ Ｍｅｄｉｃａｌ（Ａｔｌａｓ（登録商標）ＩＩＨＦＩＣＤ、Ａｔｌａｓ（登録商標）＋ＨＦＩＣＤ、Ｅｐｉｃ（登録商標）ＨＦＩＣＤ、Ｅｐｉｃ（登録商標）ＩＩＨＦＩＣＤ、Ｐｒｏｍｏｔｅ（登録商標）ＲＦＣＲＴ−Ｄ）、Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＣＯＧＮＩＳ（登録商標）、Ｃｏｎｔａｋ Ｒｅｎｅｗａｌ、ＬＩＶＩＡＮＴＭ）、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（ＣｏｎｓｕｌｔａＴＭ、Ｃｏｎｃｅｒｔｏ（登録商標）、Ｍａｘｉｍｏ（登録商標）ＩＩ、ＩｎＳｙｎｃ（登録商標）Ｍａｘｉｍｏ（登録商標））、Ｓｏｒｉｎ Ｇｒｏｕｐ ＥＲＭ（ＯＶＡＴＩＯＴＭおよびＮｅｗＬｉｖｉｎｇＴＭ）およびＢＩＯＴＲＯＮＩＫ（登録商標）（Ｓｔｒａｔｏｓ（登録商標）ＬＶおよびＳｔｒａｔｏｓ（登録商標）ＬＶ−Ｔ）のような製造業者から広く入手可能である。
【００４４】
心臓再同期療法を、任意で１つまたはそれ以上の心不全のための他の処置と組み合わせる。例えば、患者をまた、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、またはシンバスタチンのようなスタチン；フロセミド、ブメタニド、ヒドロクロロチアジド、スピロノラクトン、エプレレノン、トリアムテレン、トルセミド、またはメトラゾンのような利尿薬；ドブタミン、ミルリノン、またはジゴキシンのような変力物質；カルベジロールまたはメトプロロールのようなβ遮断薬；および／またはＢＮＰのようなナトリウム排泄増加性ペプチドによっても処置し得る。
【００４５】
処置はまた、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター（例えばカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリル、またはラミプリル）；カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、またはエプロサルタンのようなアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬；一硝酸イソソルビドまたは二硝酸イソソルビドのような硝酸塩；および／またはヒドララジンのような血管拡張薬も含み得る。適当な症例において、血管形成術または他の手術のような、他の形式の医学的介入も実施し得る。
【００４６】
処置の有効性を、ガレクチン−３のような関連するバイオマーカーの定期的な測定によって、経時的にモニタリングし得る。ガレクチン−３レベルおよび／または他のバイオマーカー（ＢＮＰのような）を、ＣＲＴ患者において測定し得、そしてその患者で以前に測定したガレクチン−３濃度と比較し得る。患者において１回またはそれ以上の以前のガレクチン−３濃度と比較した、ガレクチン−３濃度の増加または減少は、患者が心臓再同期療法に応答しているか、または応答していないことの指標となり得る。マーカーレベルを、年１回、年２回、隔月、月１回、３週間ごと、隔週、週１回、毎日、または変動する間隔で患者から得たサンプルにおいてなど、経時的にモニタリングし得る。
【実施例】
【００４７】
（実施例：ガレクチン−３および心臓再同期療法）
（方法）
（試験集団）
臨床試験に、左心室収縮期機能不全および心臓同期不全（１５０ｍｓと同じかまたはそれより大きいＱＲＳ幅、またはＱＲＳが１２０−１４９ｍｓｅｃなら心エコーの同期不全によって示されるような）の証拠を有する、少なくとも６週間心不全（ＨＦ）を有する（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ機能分類ＩＩＩまたはＩＶ）患者を登録した。試験のデザインおよび初期結果が、公開された文献において報告されている［Ｊ．Ｃｌｅｌａｎｄら、「Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ」、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００５年４月１４日；３５２（１５）：１５３９−４９］。全ての患者に、アンギオテンシン変換酵素インヒビター、β遮断薬および利尿薬を含む標準的な薬理学的治療を与えた。患者を、最適化した薬理学的治療単独による処置、または心臓再同期療法（ＣＲＴ）と組み合わせた処置に、非盲検方式で無作為に割り当てた。ＣＲＴを受ける患者に、そのバックグラウンドの薬理学的治療に加えて、ＩｎＳｙｎｃ（登録商標）ＩＩＩＣＲＴデバイス（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ Ｉｎｃ．、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を与えた。１分あたり６０拍より遅い速度を防ぐための心房ペーシングを有する、房両心室性（ａｔｒｉｏｂｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）ペーシングを使用した。右心室および左心室を同時に刺激した。心エコーを用いて、僧帽弁流入シグナルを用いて心房−心室の遅延を最適化した。流入シグナルの心房コンポーネントを短縮しない、最も短い心房−心室の遅延が最適と考えられた。
【００４８】
（血液サンプリング）
血清サンプルを、ベースライン、３および１８ヶ月に採った。全てのサンプルを、−８０℃で保存した。
【００４９】
（検査分析）
血清サンプル中のガレクチン−３濃度の決定を、ＥＬＩＳＡキット（ガレクチン−３アッセイ；ＢＧ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて評価した。そのアッセイの感度（ゼロではない最も低い濃度）は、０．９６ｎｇ／ｍＬであった。アッセイ内およびアッセイ間の変動は、それぞれ８％および１０％未満であった。
【００５０】
（統計学的分析）
全ての分析を、ＳＡＳバージョン９ソフトウェア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ、ＵＳＡ）を用いて行った。分析物のレベルおよび結果の関連を評価するために、ロジスティック回帰分析を用いた。特定の分析において、目的の全ての共変数について完全な患者のみを、その分析に含むと考えた。両側の有意性レベルを０．０５に設定し、そして０．０５未満の確率値を有意であると考えた。
【００５１】
（結果）
（患者における経時的ガレクチン−３濃度）
試験の登録時として規定されるベースライン、およびベースラインから１８ヶ月後のガレクチン−３の平均および標準偏差を、介入グループごとに、下記の表１に示す。全ての患者が各時点においてガレクチン−３の測定のために利用可能な血清サンプルを有していたわけではないことに注意する；表１は、ガレクチン−３測定が可能な全ての患者に関する結果を示す。
【００５２】
表１．介入グループごとの、ベースラインおよびベースラインの１８ヶ月後の血清ガレクチン−３濃度（平均および標準偏差）。括弧内の数字は、１標準偏差を示す。ガレクチン−３を測定した血清サンプルを有する患者の数も、各時点およびグループに関して表に示す。
【００５３】
【表１】
表１から、ＣＲＴを受けなかった患者における平均血清ガレクチン−３濃度は、ベースラインおよびベースラインの１８ヶ月後で同じであり、一方ＣＲＴを受けた患者における平均血清ガレクチン−３濃度は、ベースラインと１８ヶ月との間に減少したことが観察される。
【００５４】
（患者における経時的ガレクチン−３濃度および有害な結果）
有害な結果、すなわちベースラインから１８ヶ月以内の心不全による死亡または予定外の入院の頻度を、ベースラインとベースラインの３ヶ月後との間に最も大きい血清ガレクチン−３の減少を経験した１０人の患者に関して調査した。ベースラインとベースラインの３ヶ月後との間に最も大きくガレクチン−３レベルが減少した１０人の患者のうち、これらの患者の６人（６０％）が、ベースラインの１８ヶ月以内に、心不全による死亡または入院の有害な結果を経験した。対照的に、ベースラインおよびベースラインの３ヶ月後の血清ガレクチン−３値を有し、および有害な結果についての情報が入手可能である他の患者のうち、８１％（１５９人の患者のうち１２８人）が、１８ヶ月で心不全による死亡または入院の有害な結果を経験した。
【００５５】
（ＣＲＴを受ける患者のベースラインにおけるガレクチン−３濃度は、有害な結果と関連している）
ＣＲＴを受けた患者において、ベースラインのガレクチン−３血清濃度は、後の有害な結果、すなわち１８ヶ月以内の死亡または１８ヶ月以内の入院のリスクと有意に関連していることが観察された。下記の表２は、ベースラインのガレクチン−３と後の有害な結果との間の関連を評価するための、統計学的ロジスティック回帰分析の結果を示す。ロジスティック回帰分析の技術の詳細に関しては、例えばＤａｖｉｄ Ｗ．ＨｏｓｍｅｒおよびＳｔａｎｌｅｙ Ｌｅｍｅｓｈｏｗ、Ａｐｐｌｉｅｄ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ、２０００）を参照のこと。分析において、３０ｎｇ／ｍＬより高いベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを１つのグループに入れ、そして３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを、別のグループに入れた。それに加えて、各患者の左心室収縮末期容量（ＬＶＥＳＶ）も、統計学的モデルにおいて共変数として考えた；そのため、ベースラインにおいて両方の変数の測定を有する９８人の患者のみを、この分析に含めることができる。ＣＲＴを受け、そして３０ｎｇ／ｍＬより高いベースラインガレクチン−３レベルを有する患者は、ＣＲＴを受け、そして３０ｎｇ／ｍＬかまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３レベルを有する患者と比較して、１８ヶ月以内の死亡または１８ヶ月以内の入院の約３倍高いオッズを有していた。
【００５６】
表２．ＣＲＴを受けた患者の、１８ヶ月以内の死亡または入院のエンドポイントに関するロジスティック回帰分析の結果。ガレクチン−３のオッズ比は、３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３を有するグループと関連がある；ＬＶＥＳＶのオッズ比は、２００ｍＬまたはそれ未満のＬＶＥＳＶを有するグループと関連がある。
【００５７】
【表２】
（ベースラインにおけるガレクチン−３濃度は、ＣＲＴを受けた患者において結果と有意に関連しているが、ＣＲＴを受けなかった患者においてはそうではない）
ＣＲＴを受けた患者において、ベースラインガレクチン−３血清濃度は、後の有害な結果、すなわちベースラインから１８ヶ月以内の死亡または１８ヶ月以内の予定外の入院のリスクと有意に関連しているが、ＣＲＴを受けなかった患者においてはそうではないことが観察された。下記の表３は、ベースラインのガレクチン−３と後の有害な結果との間の関連を評価するための、統計学的ロジスティック回帰分析の結果を示す。この分析を、ＣＲＴを受けた患者に関して、およびＣＲＴを受けなかった患者に関して別々に行った。ロジスティック回帰分析の技術の詳細に関しては、例えばＤａｖｉｄ Ｗ．ＨｏｓｍｅｒおよびＳｔａｎｌｅｙ Ｌｅｍｅｓｈｏｗ、Ａｐｐｌｉｅｄ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ、２０００）を参照のこと。分析において、３０ｎｇ／ｍＬより高いベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを１つのグループに入れ、そして３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３レベルを有する患者のデータを、別のグループに入れた。それに加えて、各患者の左心室収縮末期容量（ＬＶＥＳＶ）も、統計学的モデルにおいて共変数として考えた。表３は、これらの分析の結果を示す。ＣＲＴを受けた９８人の評価可能な患者が存在し、そのうち２２人（９８人の２２．４％）が、１８ヶ月以内に死亡または入院の有害な結果を経験した。ＣＲＴを受けなった９６人の評価可能な患者が存在し、そのうち２９人（９６人の３０．２％）が、１８ヶ月以内に死亡または入院の有害な結果を経験した。
【００５８】
表３．ＣＲＴを受けた患者およびＣＲＴを受けなかった患者に関して別々に分析した、１８ヶ月以内の死亡または入院のエンドポイントのロジスティック回帰分析の結果。ガレクチン−３のオッズ比は、３０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満のベースラインガレクチン−３を有するグループと関連がある；ＬＶＥＳＶのオッズ比は、２００ｍＬまたはそれ未満のＬＶＥＳＶを有するグループと関連がある。
【００５９】
【表３】
ＣＲＴを受けた患者でのみ、ベースラインガレクチン−３が１８ヶ月以内の死亡または入院の有害な結果と、前もって指定した統計学的有意性レベルで、統計学的に有意に関連していたことが見出された。ＣＲＴを受けなかった患者のグループのベースラインガレクチン−３は、０．０５未満の定めた有意性レベルで、同じ有害な結果エンドポイントと有意に関連しておらず、そしてそのグループの９５％信頼区間は、１またはユニティのヌルオッズ比の値と重複する。
【００６０】
（ＣＲＴは、全体的に減少した事象率と関連するが、より高いガレクチン−３濃度を有する患者においてより減少が大きい）
ベースラインの１８ヶ月以内に心不全のために死亡または予定外の入院の事象を経験した、４つのカテゴリーそれぞれの患者の数を、下記の表４に列挙する。この表は、ベースライン血液サンプルが、ガレクチン−３ベースライン濃度値を有し、そして１８ヶ月間うまく追跡できてベースラインの１８ヶ月以内における心不全のための死亡または予定外の入院のエンドポイントを確認し得た、試験の全ての患者を含む。
【００６１】
表４．ＣＲＴ処置およびガレクチン−３カテゴリーごとの、患者の数。事象の数およびパーセンテージを、表の各セルに示す。この表の事象は、ベースラインの１８ヶ月以内の心不全による死亡または予定外の入院と規定される。
【００６２】
【表４】
表４から観察し得るように、ＣＲＴを受けた患者は、ＣＲＴを受けなかった患者と比較して、事象頻度の減少を示した。低ガレクチン−３グループ、すなわち≦３０ｎｇ／ｍＬのベースラインガレクチン−３レベルを有する患者において、事象頻度の絶対的低減は９．１％であった（２７．６％マイナス１８．５％）。高ガレクチン−３グループ、すなわち＞３０ｎｇ／ｍＬのベースラインガレクチン−３レベルを有する患者において、事象頻度の絶対的低減は、９．６％であった（４２．９％マイナス３３．３％）。より高いベースラインガレクチン−３グループにおける９．６％の低減は、より低いベースラインガレクチン−３グループにおける９．１％の低減より大きいので、これらのデータは、おそらくより高いベースラインガレクチン−３の値は、ＣＲＴからより大きい利益を得る患者を同定することを示す。
【００６３】
（参照による組込み）
本明細書中で参照された特許文書および科学論文のそれぞれの開示全体は、全ての目的のために参照によって組み込まれる。
【００６４】
（同等物）
本発明を、その精神または本質的な特徴から離れることなく、他の特定の形式で具体化し得る。従って、前述の実施態様は全ての局面において、本明細書中で記載された発明を制限するのではなく説明すると考えられる。従って本発明の範囲は、前述の記載ではなく添付の特許請求の範囲によって示され、そしてその特許請求の範囲と同等の意味および範囲内に含まれる全ての変化は、そこに含まれることが意図される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
心臓再同期療法の候補であるヒトかまたは心臓再同期療法で処置されたヒトを評価する方法であって、該ヒト由来のサンプル中のガレクチン−３血中濃度を測定することによって、心臓再同期療法への応答性の指標または心臓再同期療法後の予後の指標となるガレクチン−３血中濃度が存在するかまたは存在しないかを決定する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記ヒトが心臓再同期療法の候補である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒトが心臓再同期療法で処置された、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
心臓再同期療法で処置されたヒトにおける心不全の発症または進行をモニタリングする方法であって、該ヒト由来のサンプル中のガレクチン−３血中濃度を測定することによって、心臓疾患の発症または進行の指標となるガレクチン−３血中濃度が存在するかまたは存在しないかを決定する工程を含む、方法。
【請求項５】
前記ヒト由来の初期サンプルが、心臓再同期デバイスが埋め込まれる時点で取得される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記初期サンプルが取得された後の時点で、前記ヒト由来の少なくとも一つのさらなるサンプルを取得する工程、ガレクチン−３血中濃度を測定する工程、および該少なくとも一つのさらなるサンプルのガレクチン−３血中濃度を該初期サンプルのガレクチン−３血中濃度と比較する工程をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記サンプルが、血液、血清または血漿を含む、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
心臓再同期療法デバイスに対する応答性の指標となる決定されたガレクチン−３血中濃度を有する患者に該デバイスを埋め込む工程を含む、ヒトを処置する方法。
【請求項９】
前記デバイスを埋め込んだ後、前記患者のガレクチン−３血中濃度をモニタリングするさらなる工程を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
応答性が、生存の改善、心不全の悪化のための予定外の入院の減少、心臓の強度の改善、疲労の減少、息切れの低減、または睡眠時無呼吸の低減を含む、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記心臓再同期療法デバイスが、除細動器をさらに含む、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記患者が、標的範囲内であると決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、最小閾値より上であると決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記最小閾値が、１０ｎｇ／ｍｌ超である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記最小閾値が、１０ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記最小閾値が、１５ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記最小閾値が、２０ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記最小閾値が、２５ｎｇ／ｍｌ〜３０ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記最小閾値が、３０ｎｇ／ｍｌ超である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が、最大閾値未満であると決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記最大閾値が、７０ｎｇ／ｍｌ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記最大閾値が、６０ｎｇ／ｍｌ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記最大閾値が、４０ｎｇ／ｍｌ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記最大閾値が、３０ｎｇ／ｍｌ〜４０ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記最大閾値が、２５ｎｇ／ｍｌ〜３０ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記最大閾値が、２０ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記最大閾値が、１５ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項１】
心臓再同期療法の候補であるヒトかまたは心臓再同期療法で処置されたヒトを評価する方法であって、該ヒト由来のサンプル中のガレクチン−３血中濃度を測定することによって、心臓再同期療法への応答性の指標または心臓再同期療法後の予後の指標となるガレクチン−３血中濃度が存在するかまたは存在しないかを決定する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記ヒトが心臓再同期療法の候補である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒトが心臓再同期療法で処置された、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
心臓再同期療法で処置されたヒトにおける心不全の発症または進行をモニタリングする方法であって、該ヒト由来のサンプル中のガレクチン−３血中濃度を測定することによって、心臓疾患の発症または進行の指標となるガレクチン−３血中濃度が存在するかまたは存在しないかを決定する工程を含む、方法。
【請求項５】
前記ヒト由来の初期サンプルが、心臓再同期デバイスが埋め込まれる時点で取得される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記初期サンプルが取得された後の時点で、前記ヒト由来の少なくとも一つのさらなるサンプルを取得する工程、ガレクチン−３血中濃度を測定する工程、および該少なくとも一つのさらなるサンプルのガレクチン−３血中濃度を該初期サンプルのガレクチン−３血中濃度と比較する工程をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記サンプルが、血液、血清または血漿を含む、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
心臓再同期療法デバイスに対する応答性の指標となる決定されたガレクチン−３血中濃度を有する患者に該デバイスを埋め込む工程を含む、ヒトを処置する方法。
【請求項９】
前記デバイスを埋め込んだ後、前記患者のガレクチン−３血中濃度をモニタリングするさらなる工程を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
応答性が、生存の改善、心不全の悪化のための予定外の入院の減少、心臓の強度の改善、疲労の減少、息切れの低減、または睡眠時無呼吸の低減を含む、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記心臓再同期療法デバイスが、除細動器をさらに含む、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記患者が、標的範囲内であると決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、最小閾値より上であると決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記最小閾値が、１０ｎｇ／ｍｌ超である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記最小閾値が、１０ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記最小閾値が、１５ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記最小閾値が、２０ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記最小閾値が、２５ｎｇ／ｍｌ〜３０ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記最小閾値が、３０ｎｇ／ｍｌ超である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が、最大閾値未満であると決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、前述の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記最大閾値が、７０ｎｇ／ｍｌ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記最大閾値が、６０ｎｇ／ｍｌ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記最大閾値が、４０ｎｇ／ｍｌ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記最大閾値が、３０ｎｇ／ｍｌ〜４０ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記最大閾値が、２５ｎｇ／ｍｌ〜３０ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記最大閾値が、２０ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記最大閾値が、１５ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌである、請求項２０に記載の方法。
【公表番号】特表２０１３−５０３３４３（Ｐ２０１３−５０３３４３Ａ）
【公表日】平成２５年１月３１日（２０１３．１．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２６９４９（Ｐ２０１２−５２６９４９）
【出願日】平成２２年８月２５日（２０１０．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４６６８９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０３１４９３
【国際公開日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【出願人】（５０６０５７６３８）ビージー メディシン， インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年１月３１日（２０１３．１．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年８月２５日（２０１０．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４６６８９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０３１４９３
【国際公開日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【出願人】（５０６０５７６３８）ビージー メディシン， インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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