グルコースの吸収および排泄の指標としてのα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の使用
α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口投与後の胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは尿中のグルコース排泄の指標としてのＡＭＧのｉｎ ｖｉｖｏでの使用法をここに提示する。該方法は、例えば、限定されるものでないが動物におけるナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤の効果の確定、動物における第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異の比較、ならびに動物の胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患の診断において使用を見出す。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の交差引用】
【０００１】
本出願は、２００９年９月１５日に出願された米国仮出願第６１／２４２，５７０号（その内容はそっくりそのまま本明細書に引用することにより組み込まれる）に対する利益を主張する。
【技術分野】
【０００２】
Ｉ．技術分野
本発明は、α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口投与後の胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収、腎尿細管からのグルコース再吸収、および／若しくは尿中のグルコース排泄の指標としてのＡＭＧのｉｎ ｖｉｖｏでの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＩＩ．関連技術の説明
高血糖すなわち上昇された血糖値は糖尿病の特質である。糖尿病症例のおよそ１０％を含んでなるＩ型糖尿病は、以前はインスリン依存型糖尿病（「ＩＤＤＭ」）若しくは若年発症糖尿病と称された。本疾患は膵のβ細胞によるインスリン分泌機能の進行性低下を特徴とする。本特徴はその起源を膵疾患に有する非特発性すなわち「二次性」糖尿病によってもまた共有される。Ｉ型糖尿病は以下の臨床徴候若しくは症状、すなわち、持続的に上昇された血漿グルコース濃度すなわち高血糖；多尿；多飲および／若しくは過食；網膜症、腎症およびニューロパシーのような慢性微小血管合併症；ならびに、失明、末期腎疾患、四肢切断および心筋梗塞につながり得る高脂血症および高血圧のような大血管性合併症を伴う。
【０００４】
ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病若しくはＮＩＤＤＭ）は、グルコース代謝の調節不全およびインスリン感受性低下を伴う代謝障害である。ＩＩ型糖尿病は通常成人期に発症し、そして十分なインスリンを利用若しくは作成することの身体の不能を伴う。標的組織で観察されるインスリン抵抗性に加え、ＩＩ型糖尿病に苦しめられる患者は、所定の血漿グルコース濃度について予測されるインスリンレベルより低い相対的インスリン欠乏を有する。ＩＩ型糖尿病は以下の臨床徴候若しくは症状、すなわち、持続的に上昇された血漿グルコース濃度すなわち高血糖；多尿；多飲および／若しくは過食；網膜症、腎症およびニューロパシーのような慢性微小血管合併症；ならびに失明、末期腎疾患、四肢切断および心筋梗塞につながり得る高脂血症および高血圧のような大血管性合併症を特徴とする。
【０００５】
インスリン抵抗性症候群（ＩＲＳ）、メタボリックシンドローム若しくはメタボリックシンドロームＸともまた命名されるシンドロームＸは、診断的冠動脈特徴付けの２％程度で認識される。しばしば障害性のそれは、耐糖能異常（ＩＧＴ）、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）、高血糖、高インスリン血症、インスリン抵抗性、脂質異常症（例えば高トリグリセリド、低ＨＤＬ）、高血圧および肥満を包含するＩＩ型糖尿病および心血管系疾患の症状若しくはそれらの発症の危険因子を提示する。
【０００６】
ＩＤＤＭ患者のための治療は、多様な供給源（例えばヒト、ウシ、ブタインスリン）に由来しうる外因性インスリンの投与に一貫して集中してきた。異種の種の物質の使用は、活性を制限する影響を有しかつ所望の血糖降下効果を達成するためにより大用量の進行性の要求をもたらす、抗インスリン抗体の形成を生じさせる。
【０００７】
ＩＩ型糖尿病の典型的処置は、食事および運動に関する生活習慣改変、ならびに必要な場合は抗糖尿病薬若しくはインスリンまたはそれらの組合せでの処置を用いて血糖値を可能な限り正常近くに維持することに焦点を当てている。食事管理により制御され得ないＮＩＤＤＭの一次治療は経口抗糖尿病薬での処置である。
【０００８】
ＮＩＤＤＭの一次治療薬は、典型的にメトホルミンおよびスルホニル尿素ならびにチアゾリジンジオンを包含する。メトホルミン単剤療法は、とりわけ、肥満かつ／若しくは脂質異常症でもまたあるＩＩ型糖尿病患者を処置するための一次選択である。メトホルミンに対する適切な応答の欠如の後に、しばしば、スルホニル尿素、チアゾリジンジオン若しくはインスリンと組合せのメトホルミンでの処置が続く。スルホニル尿素単剤療法（全世代の薬物を包含する）もまた普遍的な一次処置の選択肢である。別の一次治療の選択はチアゾリジンジオンでありうる。αグルコシダーゼ阻害薬もまた一次および二次治療として使用される。経口抗糖尿病薬単剤療法に適切に応答しない患者は上で挙げられた剤の組合せを与えられる。経口抗糖尿病薬のみで血糖コントロールを維持し得ない場合、インスリン療法を単剤療法として若しくは経口抗糖尿病薬と組合せでのいずれかで使用する。
【０００９】
インスリン抵抗性は全部のシンドロームＸ患者で常に処置されるわけではないとは言え、空腹時血糖値が正常より高いことがあるがしかし糖尿病診断基準でそうでないことがある糖尿病前症（例えばＩＧＴ、ＩＦＧ）を表す者は、いくつかの国（例えば独国）で糖尿病を予防するためにメトホルミンで処置する。抗糖尿病薬は付随する共存症の処置のための他の薬理学的剤（例えば高血圧のための降圧薬、脂質血症（ｌｉｐｉｄｅｍｉａ）のための脂質低下薬）ともまた組合せてよい。
【００１０】
高血糖の処置における最近の発展は、過剰のグルコースの直接尿中への排泄に集中している。血漿グルコースは通常腎で糸球体中で濾過され、そして近位尿細管中で活発に再吸収される。とりわけ、腎でのグルコース再取り込みの９０パーセントは腎皮質近位尿細管の初期Ｓ１分節（ｅａｒｌｙ Ｓ１ ｓｅｇｍｅｎｔ）の上皮細胞で起こる。ナトリウム依存性グルコース輸送体２（ＳＧＬＴ２）がこの部位でのグルコースの再取り込みを司る主要輸送体であるようである（非特許文献１）。
【００１１】
ＳＧＬＴ２は、腎近位尿細管の初期Ｓ１分節で主に発現される１４個の膜貫通セグメントを含有する６７２アミノ酸のタンパク質である。ＳＧＬＴ２の基質特異性、ナトリウム依存性および局在化は、ヒト腎皮質近位尿細管で以前に特徴付けられた高容量低親和性のナトリウム依存性グルコース輸送体の特性と矛盾しない。加えて、ラットでのハイブリッド枯渇（ｈｙｂｒｉｄ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）研究は、ＳＧＬＴ２を近位尿細管のＳ１分節の優勢なＮａ＋／グルコース共輸送体としてかかわらせた。事実上全部のナトリウム依存性グルコース輸送体活性が、ラットＳＧＬＴ２に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドにより阻害されたためである（非特許文献２）。
【００１２】
ＳＧＬＴ２はまた、いくつかの形態の家族性糖尿すなわち腎グルコース再吸収が変動する程度まで損なわれている遺伝子異常の候補遺伝子でもある（非特許文献３；および非特許文献４）。家族性糖尿症候群は、腸のグルコース輸送が正常でありかつ他のイオンおよびアミノ酸の腎輸送もまた正常である状態である。家族性糖尿患者は正常に発達し、正常な血糖値レベルを有するようであり、かつ、排泄されるグルコースのときに極めて高い（１１０〜１１４ｇ／１日）レベルにもかかわらず、彼らの障害の結果としての大きな健康上の欠陥を経験しないようである。これらの患者で明白な主症状は過食、多尿および多飲を包含する。腎は構造および機能が正常であるようである。従って、これまで入手可能なエビデンスから、グルコースの腎再取り込みの欠陥は、それ以外は正常の個体において最小限度の長期の負の結果を有するようである。高度に相同なげっ歯類ＳＧＬＴの研究もまた、ＳＧＬＴ２をグルコースの主要な腎のナトリウム依存性輸送体として強くかかわらせ
ており、そしてＳＧＬＴ２活性が糖尿で何らかの役割を演じていることを示唆している。
【００１３】
アミノ酸レベルでＳＧＬＴ２に６０％同一である別のナトリウム依存性グルコース輸送体ＳＧＬＴ１は、小腸、および腎近位尿細管のより遠位のＳ３分節で発現される（非特許文献５；および非特許文献６）。それらの配列類似性にもかかわらず、ヒトＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２は生化学的に識別可能である。ＳＧＬＴ１について、輸送されるグルコースに対するＮａ＋のモル比は２：１である。ＳＧＬＴ２について、該比は１：１である。Ｎａ＋のＫｍはＳＧＬＴ１について３２ｍＭおよびＳＧＬＴ２について２５０〜３００ｍＭである。ＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２は数種の糖に対するそれらの基質特異性もまた異なるが、しかしグルコースおよび代謝不可能なグルコースアナログα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の取り込みのＫｍ値は同様である。グルコースについて、Ｋｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．８ｍＭおよび１．６ｍＭである。ＡＭＧについて、Ｋｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．４ｍＭおよび１．６ｍＭである（非特許文献１；および特許文献１）。
【００１４】
非特異的ＳＧＬＴ１／ＳＧＬＴ２阻害薬フロリジンの投与は、高血糖を伴う障害（例えばＮＩＤＤＭおよびシンドロームＸ）を処置するためのＳＧＬＴ阻害薬の使用のための概念データのｉｎ ｖｉｖｏの証明を提供した。フロリジンの投与は、糖尿病のげっ歯類モデルおよび１種のイヌ糖尿病モデルにおいて、低血糖の副作用を伴わずに、グルコース排泄を促進し、空腹時および食後血糖値レベルを低下させ、そしてグルコース利用を促進した（非特許文献７）。血漿イオンバランス、腎機能若しくは腎形態に対する副作用は、約２週間のフロリジン処置の結果として観察されなかった。加えて、フロリジンを正常動物に投与した場合、糖尿の存在にもかかわらず高血糖若しくは他の副作用は観察されなかった。さらに、フロリジン由来の合成剤での長期処置が、肥満のＩＩ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）ラットモデルにおいて空腹時および食後血糖値を改善し、インスリンの分泌および利用を改善し、ならびに低血糖若しくは腎の副作用の非存在下で腎症の発症を相殺することが報告された（非特許文献８）。
【００１５】
フロリジンそれ自身は、しかしながら、それが非特異的ＳＧＬＴ１／ＳＧＬＴ２阻害薬であるため、およびそれが腸でアグリコン、フロレチンに加水分解されるため、経口薬物として魅力がない。該加水分解された生成物は促進グルコース輸送体（ＧＬＵＴ）の強力な阻害剤であり、そしてＧＬＵＴの同時阻害は望ましくない（非特許文献９）。こうした阻害剤は、末梢インスリン抵抗性を悪化させならびにＣＮＳでの低血糖を促進することが予測されるであろう。ＳＧＬＴ１の阻害は、ＳＧＬＴ１共輸送体中の突然変異が腸での損なわれたグルコース取り込みならびに生命を脅かす下痢および脱水をもたらす遺伝性症候群グルコース／ガラクトース吸収不良（ＧＧＭ）により具体的に説明されるとおり、重大な有害な結果もまた有し得る（非特許文献１０；および非特許文献１１）。
【００１６】
全体として考えれば、これらのデータは、糖尿病患者におけるＳＧＬＴ２の特異的阻害が、尿中のグルコースの排泄を高めてそれによりインスリン感受性を改善しかつ糖尿病性合併症の発症を遅らせることにより血糖値を安全に正常化しうることを示唆している。幸運なことに、ＳＧＬＴ１とＳＧＬＴ２の間の生化学的差異ならびにそれらの間の配列の相違の程度は選択的ＳＧＬＴ２阻害剤の同定を見込む。しかしながら、こうした阻害剤の発見および最適化をさらに可能にするためになお必要とされるものは、阻害剤をｉｎ ｖｉｖｏで試験しかつＳＧＬＴ２およびＳＧＬＴ１に対する変動する効力および選択性をもつ阻害剤の効果を評価するためのアッセイである。
【００１７】
グルコースアナログはグルコース輸送の研究およびグルコース輸送体の特徴付けに長く使用されている（総説については非特許文献１２を参照されたい）。α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）は、しばしば、ＳＧＬＴ１および／若しくはＳＧＬＴ２の活性を研究するた
めに設計された細胞に基づくアッセイのための選択すべきアナログである。
【００１８】
【化１】
【００１９】
α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）のいくつかの同義語
α−Ｄ−メチルグルコシド
α−メチル−Ｄ−グルコシド
メチル−α−Ｄ−グルコシド
メチルα−Ｄ−グルコシド
１−Ｏ−メチル−グルコシド
α−メチルグルコピラノシド
α−Ｄ−メチルグルコピラノシド
α−メチル−Ｄ−グルコピラノシド
メチル−アルファ−Ｄ−グルコピラノシド
メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
１−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
α−メチルＤ−グルコースエーテル
【００２０】
ＡＭＧは代謝不可能なグルコースアナログである。それは双方の輸送体についてグルコースに類似のＫｍ値をもつＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２双方の基質であり、このことはそれをＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２によるグルコースの輸送を研究するための理想的な指標にする。グルコースのＫｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．８ｍＭおよび１．６ｍＭである。ＡＭＧのＫｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．４ｍＭおよび１．６ｍＭである（非特許文献１；および特許文献１）。さらに、尾静脈を介する注入により投与される１１Ｃ標識ＡＭＧをグルコース輸送の選択的トレーサーとして使用し得、かつ、ｉｎ ｖｉｖｏで行われるＰＥＴ画像化を用いて多様な輸送体の機能を可視化するのに使用し得ることが示されている（非特許文献１３）。
【００２１】
グルコース輸送のｉｎ ｖｉｖｏ研究にＡＭＧを使用する潜在的な一問題は、ＡＭＧが腸漿膜輸送系の基質でないことが示されていることである。例えば、ＡＭＧが単離されたニワトリ腸上皮細胞に蓄積することが示されている。上皮細胞への一方向の流れの結果として、ＡＭＧの定常状態の勾配が、拡散流出過程によってのみ妨害される集中的過程により正確に表されることが確定された。（非特許文献１４）。加えて、カエル、ワライガエル（Ｒ．ｒｉｄｉｂｕｎｄａ）の小腸の血管灌流標本を使用する研究は、管腔から上皮に負荷されるＡＭＧが細胞から血管床にゆっくりとのみ洗い去り、その結果高速の血管灌流ででさえＡＭＧが組織内に蓄積したことを示した（非特許文献１５）。ＡＭＧの吸収は、雄性Ｗｉｓｔａｒラットからの小腸および結腸組織スリーブ標本（非特許文献１６）ならびに雄性Ｄｕｎｋｉｎ Ｈａｒｔｌｅｙモルモット（Ｃａｖｉａ ｐｏｒｃｅｌｌｕｓ）からの十二指腸、空腸および回腸の裏返しスリーブ（非特許文献１７）で、ｅｘ ｖｉｖｏでもまた示されている。該ｅｘ ｖｉｖｏ実験の性質は、しかしながら、血液、尿若し
くは他組織中のＡＭＧのその後の測定を不可能にした。さらに、ＡＭＧが細胞および組織中に蓄積することを示す実験は、ＡＭＧは腸漿膜輸送系の基質でないため、ＡＭＧが認識できる量で血液若しくは尿に通過しないであろうことを示唆した。
【００２２】
中空腸の一区分にカニューレ挿入された雄性ラットを使用して、１４Ｃ−ＡＭＧの吸収を「管腔損失」として、すなわち空腸の一区域で当初循環された量−溶液を１５分間循環した後に回収されたものを計算した。これらの実験について、１４Ｃ−ＡＭＧはその後血漿、尿若しくはいかなる組織中でも測定されなかった（非特許文献１８）。同様に、１４Ｃ−ＡＭＧの取り込みを、雌性Ｗｉｓｔａｒラットからの空腸のカニューレ挿入された区域の単回通過灌流で測定した。再度、血液若しくは尿中のＡＭＧの後の測定は報告されなかった（非特許文献１９）。雄性Ｗｉｓｔａｒラットからの閉鎖された空腸区域を使用してｉｎ ｓｉｓｕで行われた実験で、１４Ｃ−ＡＭＧの吸収を、閉鎖された空腸区域への注入後の腸静脈血中の出現速度により決定した（非特許文献２０）。別の研究において、吸収に対する食物繊維、管腔内圧および膨満の影響を同一の方法を用いて検討した（非特許文献２１；および非特許文献２２）。閉鎖された空腸区域に注入される１４Ｃ−ＡＭＧを使用するｉｎ ｓｉｔｕで行われた実験は、ＡＭＧがＡＭＧの経口投与後に胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収、腎尿細管からのグルコース再吸収、および／若しくは尿中のグルコース排泄の指標としてｉｎ ｖｉｖｏで使用し得たことを示さなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許出願第２００８／０２３４３６７号明細書
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｋａｎａｉら、（１９９４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ ９３：３９７−４０４
【非特許文献２】Ｙｏｕら、（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７０（４９）：２９３６５−７１
【非特許文献３】ｖａｎ ｄｅｎ Ｈｅｕｖｅｌら、（２００２）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ １１１：５４４−５４７
【非特許文献４】Ｃａｌａｄｏら、（２００４）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ １１４：３１４−３１６
【非特許文献５】ＰａｊｏｒとＷｒｉｇｈｔ（１９９２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７：３５５７−３５６０
【非特許文献６】Ｗｒｉｇｈｔ（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２８０：Ｆ１０−Ｆ１８
【非特許文献７】Ｅｈｒｅｎｋｒａｎｚら、（２００５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｔａｂ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２１：３１−３８
【非特許文献８】Ｕｅｔａら、（２００５）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．７６（２３）：２６５５−６８
【非特許文献９】Ｋａｔｓｕｎｏら、（２００７）Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．３２０（１）：３２３−３０
【非特許文献１０】Ｔｕｒｋら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５０：３５４−３５６
【非特許文献１１】Ｍａｒｔｉｎら、（１９９６）Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １２：２１６−２２０
【非特許文献１２】Ｇａｔｌｅｙ（２００３）Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．４４（７）：１０８２−６
【非特許文献１３】Ｂｏｒｍａｎｓら、（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４４（７）：１０７５−１０８１
【非特許文献１４】ＫｉｍｍｉｃｈとＲａｎｄｌｅｓ（１９８１）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２４１（５）：Ｃ２２７−３２
【非特許文献１５】ＢｏｙｄとＰａｒｓｏｎｓ（１９７９）Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８７：３７１−９１
【非特許文献１６】Ｇｏｎｚaｌｅｚ Ｂｏｓｃら、（１９９８）Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．１９（７）：１２４９−５３
【非特許文献１７】Ｊｕａｎら、（１９９８）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７５（３ Ｐｔ ２）：Ｒ８９７−９０４
【非特許文献１８】Ｄｅｂｎａｍ Ｌｅｖｉｎ（１９７５）Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２４６（１）：１８１−９６
【非特許文献１９】ＥｌｓｅｎｈａｎｓとＳｃｈuｍａｎｎ（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８（２０）：３４２３−９
【非特許文献２０】Ｗｉｎｎｅら、（１９８７）Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３３５（２）：２０４−１５
【非特許文献２１】ＨｏｌｚｈｅｉｍｅｒとＷｉｎｎｅ（１９８６）Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３３４：５１４−５２４
【非特許文献２２】ＨｏｌｚｈｅｉｍｅｒとＷｉｎｎｅ（１９８９）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５６（１ Ｐｔ １）：Ｇ１８８−９７
【発明の概要】
【００２５】
［発明の要約］
本発明を特徴付ける新規性の多様な特徴は、本開示に付されかつその一部を形成する請求の範囲でとりわけ指摘される。本発明、その運用上の利点、およびその使用により達成される特定の目的のより良好な理解のため、本発明の態様が具体的に説明かつ記述されている図面および保護対象（ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ ｍａｔｔｅｒ）への言及が有されるはずである。
【００２６】
一態様において、本発明は、（ａ．）予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を動物に投与する段階；（ｂ．）ＡＭＧ投与後に前記動物からサンプルを得る段階；（ｃ．）前記サンプル中の前記ＡＭＧの量を測定する段階を含んでなる、前記動物の胃腸系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄の指標としてのＡＭＧの使用方法を含んでなり；前記サンプル中のＡＭＧの量が前記動物の胃腸系からのグルコース吸収の量若しくは該動物の腎からのグルコース排泄の量と相関する。
【００２７】
第二の態様において、本発明は、動物がマウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００２８】
第三の態様において、本発明は、サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００２９】
第四の態様において、本発明は、（ａ．）予め決められた量のＳＧＬＴ阻害剤を第一の動物に投与する段階；（ｂ．）予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一の動物および第二の動物に投与する段階であって、前記第二の動物は前記ＳＧＬＴ阻害剤を投与されず；（ｃ．）前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；（ｄ．）前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；（ｅ．）前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階を含んでなる、動物におけるＳＧＬＴ阻害剤の効果の確定方法を含んでなり；前記サンプル中の前記ＡＭＧの量の差異が前記第一の動物における前記ＳＧＬＴ阻害剤の効果を
示す。
【００３０】
第五の態様において、本発明は、ＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３１】
第六の態様において、本発明は、動物がマウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３２】
第七の態様において、本発明は、サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３３】
第八の態様において、本発明は第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異の比較方法を含んでなり、該方法は、（ａ．）予め決められた量の前記第一のＳＧＬＴ阻害剤を第一の動物に投与する段階；（ｂ．）予め決められた量の前記第二のＳＧＬＴ阻害剤を第二の動物に投与する段階；（ｃ．）予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一および第二の動物に投与する段階；（ｄ．）前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；（ｅ．）前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；（ｆ．）前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階を含んでなり；前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が前記第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異を比較するための基礎を提供する。
【００３４】
第九の態様において、本発明は、第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３５】
第十の態様において、本発明は、動物がマウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３６】
第十一の態様において、本発明は、サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３７】
第十二の態様において、本発明は、（ａ．）予め決められた量のＡＭＧの経口用量を、第一の動物、および胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患のない第二の動物にそれぞれ投与する段階；（ｂ．）前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；（ｃ．）前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；（ｄ．）前記第一の動物からのサンプル中の前記ＡＭＧの量を前記第二の動物から得られたサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階を含んでなる、動物における前記疾患の診断方法を含んでなり；前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が、前記第一の動物が胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患を有するかどうかを決定するための基礎を提供する。
【００３８】
第十三の態様において、本発明は動物がヒトである上述された方法を含んでなる。
【００３９】
第十四の態様において、本発明は、サンプルが血漿若しくは尿よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
［発明の詳細な記述］
本発明を具体的に説明するために多様な例示的態様を下述する。本明細書に提供される
図および実施例は例示するためであり、そして本発明およびその多様な態様を制限するためでないことが最初に理解されるべきである。簡潔さのため、本節に引用される全部の特許および他の刊行物の開示は引用することによりそっくりそのまま本明細書に組み込まれる。
【００４１】
特定の一態様において、本発明は、α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口投与後の動物の胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収、動物の腎尿細管からのグルコース再吸収および動物の尿中のグルコース排泄の指標としてのＡＭＧの使用方法を含んでなる。指標としてのＡＭＧは、本発明に記述されるところの意図している目的に依存して多数の方法で使用しうる。例えば、ＡＭＧはグルコースの吸収、代謝若しくは排泄の欠陥を伴う疾患を診断するのに使用しうる。ＡＭＧは、ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病若しくはＮＩＤＤＭ）、およびインスリン抵抗性症候群（ＩＲＳ）、メタボリックシンドローム若しくはメタボリックシンドロームＸともまた命名されるシンドロームＸの処置のための薬物候補をスクリーニングするのにもまた使用しうる。薬物候補の制限しない例は、ＳＧＬＴ２およびＳＧＬＴ１に対する変動する選択性をもつＳＧＬＴ阻害剤のような薬理学的剤を包含する。剤の混合物もまた使用しうる。
【００４２】
本発明での使用に企図している動物の制限しない例は、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類、ヒト、ならびにラット、マウス、ハムスターおよびモルモットのようなげっ歯類のような哺乳動物を包含する。
【００４３】
本発明のＡＭＧは、商業的供給源から得ることができるか、若しくは当業者に公知の合成方法により製造しうる。当業者は、本発明の方法での使用のためのＡＭＧが検出および定量で補助するためにいずれかの適する剤で標識若しくは修飾されうることもまた認識するであろう。例えば、ＡＭＧは発色性、蛍光発生性若しくは放射活性の剤で標識しうる。本発明の制限しない一例において、使用されたＮＭＲ検出方法のため、ＡＭＧはサンプル中のＡＭＧの検出および定量で補助するためのいかなる標識も必要としなかった。
【００４４】
多くの異なる技術を使用して本発明のサンプル中の経口投与されたＡＭＧを検出および定量し得る。該技術は、限定されるものでないが、単独若しくは組合せの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および質量分析（ＭＳ）のようなサンプル中の他成分からＡＭＧを分離するいずれかのクロマトグラフィー手段；いずれかの発色性検出手段；いずれかの蛍光発生性検出手段；いずれかの放射活性検出手段；ならびにいずれかの核磁気共鳴（ＮＭＲ）手段を挙げることができる。本発明の制限しない一例において、経口投与されたＡＭＧをＮＭＲ分光計を使用してサンプル中で検出して、ＮＭＲスペクトル中で４．８０ｐｐｍの二重項である未標識若しくは修飾ＡＭＧのアノマープロトンを検出する。サンプル中に存在するＡＭＧの量は、０．００ｐｐｍの内部参照ＤＳＳ（２，２−ジメチル−２−シラペンタン−ｄ６−スルホン酸ナトリウム塩）との比較により定量する。現在入手可能なＮＭＲ装置はおよそ０．２ｍｇ／ｄｌのＡＭＧ（およそ１０μＭのＡＭＧである）の検出限界を見込むことができる。ＭＳ分析は、しかしながらＡＭＧが十分にイオン化しない場合であってもより高感度である。ＭＳを使用することはμＭ以下の量のＡＭＧを検出することを可能にするとみられる。当業者は、検出限界のさらなる改良が標識ＡＭＧを使用することによってもまたなされ得ることを認識するであろうが、とは言えこうした場合は未標識の指標を使用するという利点が損なわれるであろう。ＮＭＲサンプルサイズは使用される装置の型に依存するが、しかし、制限しない一例においてサンプルサイズはおよそ５から５００μｌまでの範囲にわたることができる。
【００４５】
本発明のＡＭＧは好ましくは経口投与する。経口投与の制限しない例は、経口胃管栄養法、固形経口用量を包含するか、若しくは食事の一部としての食物を伴うＡＭＧを包含する。ＡＭＧの経口投与法は、担体またはＡＭＧの溶解性若しくは利用性を改良する他の剤
もまた包含しうる。本発明の制限しない一例において、ＡＭＧを滅菌水に溶解し、そして約２ｇ／ｋｇ（ＡＭＧ／体重）の用量で胃管栄養法を介して経口投与した。当業者は、用量を検出方法または標識若しくは未標識ＡＭＧを使用するかどうかに依存して増大若しくは減少させてよいことを認識するであろう。
【００４６】
本明細書で使用されるところの「サンプル（１若しくは複数）」という用語は、最小限度に侵襲的若しくは被侵襲的方法（例えば尿収集、採決、針吸引および最小限度の危険性、不快感若しくは努力を必要とする他の処置）を用いて動物から直接採取し得る血液および他の体液を包含する。サンプルは、血清、血漿、他の体液、若しくは組織ライセート、細胞上清、細胞ライセートなどのような組織もまた包含しうる。本発明で企図しているサンプルの特定の型の制限しない例は、尿、血漿、胃の液体内容物、または胃腸系、腎若しくは尿路の外科的に取り出された部分から調製されたライセートを包含する。好ましい一態様において、尿、血漿、および胃腸系から採取されたサンプルから調製されたライセートを、本発明で記述される用途のため調製する。
【００４７】
サンプルは、それらの調達後に、最適な試験結果を得る目的上、タンパク質若しくはポリヌクレオチドのようなある種の成分を可溶化、濃縮若しくは枯渇するための試薬での処理によるようないずれかの方法で操作しうる。
【００４８】
本発明によれば、サンプルは１回若しくはＡＭＧの経口投与後一定の間隔で複数回採取しうる。制限しない一例において、サンプルを動物へのＡＭＧの経口投与１２０若しくは２４０分後に採取した。動物を殺し、尿および血漿サンプルを収集し、そして胃腸（ＧＩ）管全体を取り出しかつ生理的食塩水中に入れた。その後、ライセートをＧＩ管から作成した。アリコートを血漿、尿およびＧＩ管ライセートから採取し、そして全サンプルをアセトニトリルで抽出してタンパク質を沈殿させた。多様なサンプルが大きく異なる量のタンパク質を含有しうるため、タンパク質を除去することが望ましい。
【００４９】
また、本発明によれば、経口投与されたＡＭＧは胃腸（ＧＩ）系から吸収されるのみならず、しかしまた血漿若しくは尿中に認識できるレベルで出現する。本発明に記述されるとおり、ＡＭＧの経口投与は動物におけるＡＭＧの代謝から生じる複雑な事態を引き起こさず、従って多様なサンプル（例えばＧＩ管、血漿および尿）中のＡＭＧの定量が単純化される。これは、グルコース吸収に影響を及ぼす化合物のグルコース排泄に影響を及ぼすもの若しくは双方に影響を及ぼすものからの弁別を見込む。また、未標識ＡＭＧを検出および定量するのに使用されるＮＭＲ法のため、放射活性同位体はもはや必要とされない。本発明のＮＭＲ方法論がなければ、こうした放射活性同位体が、１１Ｃ標識ＡＭＧの静脈内注入後にＰＥＴ画像化を使用する１１Ｃ ＡＭＧ分布の研究で記述された（Ｂｏｒｍａｎｓら、（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４４（７）：１０７５−１０８１）とおり必要とされていたであろう。
【００５０】
本発明は、ＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２に対する変動する効力および選択性をもつＳＧＬＴ阻害剤が、定量可能に異なる量のＡＭＧがＡＭＧ投与後にＧＩ管、血漿、尿若しくは身体中の他の場所で見出されることを引き起こすこともまた示す。さらに、ＧＩ管、血漿若しくは尿など中のＡＭＧ量は用量依存性であることが示されている。従って、経口投与されたＡＭＧを、ＧＩ系からのグルコース吸収、腎尿細管からのグルコース再吸収および尿中のグルコース排泄の指標として使用し得る。
【００５１】
さらなる記述を伴わずに、当業者は、先行する記述および以下の具体的に説明する実施例を使用して、本発明を作成かつ利用しそして特許請求される方法を実践し得ると考えられる。以下の作業実施例は、従って本発明の好ましい態様を具体的に指摘し、そして本開示の残部をいずれかの方法で制限すると解釈されるべきでない。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
図面において、
【図１】ＧＩ管（Ａ）、血漿（Ｂ）および尿（Ｃ）から採取されたサンプル中でベヒクル（０．５％メチルセルロース（メトセル（ｍｅｔｈｏｃｅｌ）））、および０．５％メチルセルロースに懸濁された化合物１若しくは化合物２での多様な処置後に測定されたＡＭＧの量（単位はミリグラム（ｍｇ）若しくは１デシリットルあたりミリグラム（ｍｇ／ｄｌ））を示す。灰色の陰を付けられた棒はベヒクル処置ラットについてであり、黒色棒は０．３ｍｐｋの化合物２で処置されたラットについてであり；縦線が付けられた棒は３．０ｍｐｋの化合物２で処置されたラットについてであり；横線が付けられた棒は０．３ｍｐｋの化合物１で処置されたラットについてであり；そして斜線が付けられた棒は３．０ｍｐｋの化合物１で処置されたラットについてである。
【実施例１】
【００５３】
細胞に基づくアッセイ
化合物１および化合物２でのＳＧＬＴ活性の阻害を、ヒトＳＧＬＴ１若しくはヒトＳＧＬＴ２のいずれかを安定に発現するＣＨＯＫ１細胞で評価した。化合物１および化合物２は米国特許出願第２００５／０２３３９８８号および同第２００８／００２７１２２号明細書（それらの開示はそっくりそのまま引用することにより組み込まれる）に記述されている。
【００５４】
【化２】
【００５５】
ヒトＳＧＬＴ２若しくはヒトＳＧＬＴ１を発現するＣＨＯＫ１細胞を、１０％ウシ胎児血清、４００μｇ／ｍｌのジェネチシン、５０単位／ｍｌのナトリウムペニシリンＧ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）および５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン硫酸塩を含有するＦ−１２栄養混合物（ハムＦ−１２）中におよそ４００，０００細胞／ウェルの密度で２４ウェルプレートに播種した。細胞は５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中３７℃で２日間培養物中で維持した。アッセイの日に化合物１および化合物２をＤＭＳＯに溶解し、そしてその後アッセイ緩衝液で希釈した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。アッセイ緩衝液は１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＣａＣｌ２、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓおよび２０ｍＭトリス、ｐＨ７．４を含有した。アッセイを開始するため、細胞をアッセイ緩衝液で１回洗浄し、そしてその後、化合物１若しくは化合物２を含有する２５０μｌのアッセイ緩衝液と３７℃で１０分間インキュベートした。輸送反応を５０μｌの１４Ｃ−ＡＭＧ溶液（最終濃度、０．５ｍＭの１４Ｃ−ＡＭＧ）の添加により開始した。３７℃で３０分間インキュベーション後に、取り込みをインキュベーション混合物の吸引により停止し、そして細胞を氷冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞をその後０
．３Ｎ ＮａＯＨで可溶化し、そしてアリコートを液体シンチレーションカウンターによる放射活性の測定のため採取した。非特異的ＡＭＧ取り込みは、１００μＭのフロリジン（ナトリウム依存性グルコース共輸送体の特異的阻害剤）の存在下で発生したものと定義した。特異的取り込みを、ブラッドフォードの方法により測定されたタンパク質濃度について正規化した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値を最小二乗法により用量反応曲線から計算した。細胞に基づくＳＧＬＴ２およびＳＧＬＴ１アッセイのＩＣ５０値を表１に提示する。
【００５６】
【表１】
【実施例２】
【００５７】
動物試験
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットに、ベヒクルすなわち滅菌水中０．５％メチルセルロース（メトセル（ｍｅｔｈｏｃｅｌ））または０．３若しくは３．０ｍｇ／ｋｇのＳＧＬＴ阻害剤（化合物１および化合物２）の一方のいずれかを経口胃管栄養法により投与した。化合物は０．５％メチルセルロースおよび滅菌水中の懸濁液として投与した。動物に化合物を投与して１時間後にＡＭＧを胃管栄養法を介して経口投与した（２ｇ／ｋｇ）。ＡＭＧは滅菌水に溶解した。ラットをＡＭＧ投与１２０若しくは２４０分後に殺した。尿および血漿サンプルを収集し、また、胃腸管全体を取り出しかつ生理的食塩水中に入れた。その後ＧＩライセートを作成した。アリコートを血漿、尿およびＧＩライセートのサンプルから採取し、そしてアセトニトリルで抽出してタンパク質を沈殿させた。多様な生物流体が大きく異なる量のタンパク質を含有するため、タンパク質を除去することが望ましかった。タンパク質シグナルはＡＭＧの定量をより困難にしていた可能性がある。水性部分を乾燥しそして重水素化水中０．５ｍｌの容量に再懸濁した。重水素化水の使用は、アノマープロトンがＮＭＲスペクトルのはるかにより少なく混み合った領域で共鳴するため、該スペクトル中のアノマープロトンの観察を可能にした。メチル一重項もまたおそらく使用された可能性があるが、しかし他の代謝物シグナルとの重なりを受ける。
【実施例３】
【００５８】
ｉｎ ｖｉｖｏデータ解析
プロトンＮＭＲスペクトルは、プローブ温度を３２℃に維持したＢｒｕｋｅｒ ＤＭＸ
６００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州ビレリカ）で取得した。軽度に上昇された温度を使用して、溶媒ピーク（サンプル中の残余の水）と定量に使用されたＡＭＧのアノマープロトン（４．８０ｐｐｍの二重項）の間の化学シフト分離を高めた。溶媒ピークは、パルス前遅延（ｐｒｅ−ｐｕｌｓｅ ｄｅｌａｙ）の間の超低出力照射（約４Ｈｚの場の強さ）、次いでシグナルを取得するための３０°のパルスを使用して飽和した。パルス前遅延は３．０ｓであり、そして取得時間は２．１ｓであった。掃引幅は３２ｋ複合点（ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｏｉｎｔ）を使用して１３ｐｐｍであった。フーリエ変換前に、データを０．５Ｈｚ指数関数的線拡大（ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｌｉｎｅｂｒｏａｄｅｎｉｎｇ）でアポダイズした（ａｐｏｄｉｚｅｄ）。サンプル中に存在するＡＭＧの量は０．００ｐｐｍの内部参照
ＤＳＳ（２，２−ジメチル−２−シラペンタン−ｄ６−スルホン酸ナトリウム塩）に関して決定した。
【００５９】
ｉｎ ｖｉｖｏの結果は、ベヒクル処置ラットにおいてＡＭＧがＧＩ系から吸収されかつＧＩ系、血漿および尿サンプル中で検出され得ることを示した。それぞれ図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃ。化合物２（ＳＧＬＴ１のＩＣ５０＝２７０ｎＭ）で処置されたラットでは、ＧＩ系に保持されるＡＭＧ含量がより高用量で顕著に増大された（図１Ａ）。化合物１（ＳＧＬＴ１でのＩＣ５０＝１７００ｎＭ）での処置はＧＩ系におけるＡＭＧの有意の保持を引き起こさなかった。化合物１および化合物２の双方が血漿中で検出されるＡＭＧの量の用量依存性の減少を示した（図１Ｂ）。化合物１について、血漿中で検出されたＡＭＧの量の用量依存性の減少は、ＳＧＬＴ２の強力な阻害（ＳＧＬＴ２のＩＣ５０＝８．４ｎＭ）および尿中で検出されたＡＭＧの量の結果として生じる増大に帰される（図１Ｃ）。化合物２について、血漿中のＡＭＧの量の用量依存性の減少は、ＡＭＧのＧＩ吸収の減少をもたらすＧＩ系におけるＳＧＬＴ１に対する阻害効果（ＳＧＬＴ１のＩＣ５０＝２７０ｎＭ）（図１Ａ）および尿中で検出されたＡＭＧの増大された量をもたらす腎におけるＳＧＬＴ２の強力な阻害（ＳＧＬＴ２のＩＣ５０＝１．９ｎＭ）（図１Ｃ）の双方に帰される。
【００６０】
従って、その好ましい一態様に適用されるところの本発明の基礎的な新規特徴が、示されかつ記述および指摘された一方、具体的に説明される装置の形態および詳細ならびにそれらの操作における多様な省略および置換および変更が、本発明の技術思想から離れることなく当業者によりなされうることが理解されるであろう。例えば、同一の結果を達成するために実質的に同一の方法で実質的に同一の機能を実施する要素および／若しくは方法段階の全部の組合せが本発明の範囲内にあることを明らかに意図している。さらに、本発明のいかなる開示された形態若しくは態様とともに示されかつ／若しくは記述される構造および／若しくは要素および／若しくは方法段階が、いずれかの他の開示若しくは記述若しくは示唆される形態若しくは態様に設計の選択の一般的問題として組み込まれうることが認識されるべきである。従って、ここに付属される請求の範囲の範囲により示されるようにのみ制限されることを意図している。
【関連出願の交差引用】
【０００１】
本出願は、２００９年９月１５日に出願された米国仮出願第６１／２４２，５７０号（その内容はそっくりそのまま本明細書に引用することにより組み込まれる）に対する利益を主張する。
【技術分野】
【０００２】
Ｉ．技術分野
本発明は、α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口投与後の胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収、腎尿細管からのグルコース再吸収、および／若しくは尿中のグルコース排泄の指標としてのＡＭＧのｉｎ ｖｉｖｏでの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＩＩ．関連技術の説明
高血糖すなわち上昇された血糖値は糖尿病の特質である。糖尿病症例のおよそ１０％を含んでなるＩ型糖尿病は、以前はインスリン依存型糖尿病（「ＩＤＤＭ」）若しくは若年発症糖尿病と称された。本疾患は膵のβ細胞によるインスリン分泌機能の進行性低下を特徴とする。本特徴はその起源を膵疾患に有する非特発性すなわち「二次性」糖尿病によってもまた共有される。Ｉ型糖尿病は以下の臨床徴候若しくは症状、すなわち、持続的に上昇された血漿グルコース濃度すなわち高血糖；多尿；多飲および／若しくは過食；網膜症、腎症およびニューロパシーのような慢性微小血管合併症；ならびに、失明、末期腎疾患、四肢切断および心筋梗塞につながり得る高脂血症および高血圧のような大血管性合併症を伴う。
【０００４】
ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病若しくはＮＩＤＤＭ）は、グルコース代謝の調節不全およびインスリン感受性低下を伴う代謝障害である。ＩＩ型糖尿病は通常成人期に発症し、そして十分なインスリンを利用若しくは作成することの身体の不能を伴う。標的組織で観察されるインスリン抵抗性に加え、ＩＩ型糖尿病に苦しめられる患者は、所定の血漿グルコース濃度について予測されるインスリンレベルより低い相対的インスリン欠乏を有する。ＩＩ型糖尿病は以下の臨床徴候若しくは症状、すなわち、持続的に上昇された血漿グルコース濃度すなわち高血糖；多尿；多飲および／若しくは過食；網膜症、腎症およびニューロパシーのような慢性微小血管合併症；ならびに失明、末期腎疾患、四肢切断および心筋梗塞につながり得る高脂血症および高血圧のような大血管性合併症を特徴とする。
【０００５】
インスリン抵抗性症候群（ＩＲＳ）、メタボリックシンドローム若しくはメタボリックシンドロームＸともまた命名されるシンドロームＸは、診断的冠動脈特徴付けの２％程度で認識される。しばしば障害性のそれは、耐糖能異常（ＩＧＴ）、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）、高血糖、高インスリン血症、インスリン抵抗性、脂質異常症（例えば高トリグリセリド、低ＨＤＬ）、高血圧および肥満を包含するＩＩ型糖尿病および心血管系疾患の症状若しくはそれらの発症の危険因子を提示する。
【０００６】
ＩＤＤＭ患者のための治療は、多様な供給源（例えばヒト、ウシ、ブタインスリン）に由来しうる外因性インスリンの投与に一貫して集中してきた。異種の種の物質の使用は、活性を制限する影響を有しかつ所望の血糖降下効果を達成するためにより大用量の進行性の要求をもたらす、抗インスリン抗体の形成を生じさせる。
【０００７】
ＩＩ型糖尿病の典型的処置は、食事および運動に関する生活習慣改変、ならびに必要な場合は抗糖尿病薬若しくはインスリンまたはそれらの組合せでの処置を用いて血糖値を可能な限り正常近くに維持することに焦点を当てている。食事管理により制御され得ないＮＩＤＤＭの一次治療は経口抗糖尿病薬での処置である。
【０００８】
ＮＩＤＤＭの一次治療薬は、典型的にメトホルミンおよびスルホニル尿素ならびにチアゾリジンジオンを包含する。メトホルミン単剤療法は、とりわけ、肥満かつ／若しくは脂質異常症でもまたあるＩＩ型糖尿病患者を処置するための一次選択である。メトホルミンに対する適切な応答の欠如の後に、しばしば、スルホニル尿素、チアゾリジンジオン若しくはインスリンと組合せのメトホルミンでの処置が続く。スルホニル尿素単剤療法（全世代の薬物を包含する）もまた普遍的な一次処置の選択肢である。別の一次治療の選択はチアゾリジンジオンでありうる。αグルコシダーゼ阻害薬もまた一次および二次治療として使用される。経口抗糖尿病薬単剤療法に適切に応答しない患者は上で挙げられた剤の組合せを与えられる。経口抗糖尿病薬のみで血糖コントロールを維持し得ない場合、インスリン療法を単剤療法として若しくは経口抗糖尿病薬と組合せでのいずれかで使用する。
【０００９】
インスリン抵抗性は全部のシンドロームＸ患者で常に処置されるわけではないとは言え、空腹時血糖値が正常より高いことがあるがしかし糖尿病診断基準でそうでないことがある糖尿病前症（例えばＩＧＴ、ＩＦＧ）を表す者は、いくつかの国（例えば独国）で糖尿病を予防するためにメトホルミンで処置する。抗糖尿病薬は付随する共存症の処置のための他の薬理学的剤（例えば高血圧のための降圧薬、脂質血症（ｌｉｐｉｄｅｍｉａ）のための脂質低下薬）ともまた組合せてよい。
【００１０】
高血糖の処置における最近の発展は、過剰のグルコースの直接尿中への排泄に集中している。血漿グルコースは通常腎で糸球体中で濾過され、そして近位尿細管中で活発に再吸収される。とりわけ、腎でのグルコース再取り込みの９０パーセントは腎皮質近位尿細管の初期Ｓ１分節（ｅａｒｌｙ Ｓ１ ｓｅｇｍｅｎｔ）の上皮細胞で起こる。ナトリウム依存性グルコース輸送体２（ＳＧＬＴ２）がこの部位でのグルコースの再取り込みを司る主要輸送体であるようである（非特許文献１）。
【００１１】
ＳＧＬＴ２は、腎近位尿細管の初期Ｓ１分節で主に発現される１４個の膜貫通セグメントを含有する６７２アミノ酸のタンパク質である。ＳＧＬＴ２の基質特異性、ナトリウム依存性および局在化は、ヒト腎皮質近位尿細管で以前に特徴付けられた高容量低親和性のナトリウム依存性グルコース輸送体の特性と矛盾しない。加えて、ラットでのハイブリッド枯渇（ｈｙｂｒｉｄ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）研究は、ＳＧＬＴ２を近位尿細管のＳ１分節の優勢なＮａ＋／グルコース共輸送体としてかかわらせた。事実上全部のナトリウム依存性グルコース輸送体活性が、ラットＳＧＬＴ２に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドにより阻害されたためである（非特許文献２）。
【００１２】
ＳＧＬＴ２はまた、いくつかの形態の家族性糖尿すなわち腎グルコース再吸収が変動する程度まで損なわれている遺伝子異常の候補遺伝子でもある（非特許文献３；および非特許文献４）。家族性糖尿症候群は、腸のグルコース輸送が正常でありかつ他のイオンおよびアミノ酸の腎輸送もまた正常である状態である。家族性糖尿患者は正常に発達し、正常な血糖値レベルを有するようであり、かつ、排泄されるグルコースのときに極めて高い（１１０〜１１４ｇ／１日）レベルにもかかわらず、彼らの障害の結果としての大きな健康上の欠陥を経験しないようである。これらの患者で明白な主症状は過食、多尿および多飲を包含する。腎は構造および機能が正常であるようである。従って、これまで入手可能なエビデンスから、グルコースの腎再取り込みの欠陥は、それ以外は正常の個体において最小限度の長期の負の結果を有するようである。高度に相同なげっ歯類ＳＧＬＴの研究もまた、ＳＧＬＴ２をグルコースの主要な腎のナトリウム依存性輸送体として強くかかわらせ
ており、そしてＳＧＬＴ２活性が糖尿で何らかの役割を演じていることを示唆している。
【００１３】
アミノ酸レベルでＳＧＬＴ２に６０％同一である別のナトリウム依存性グルコース輸送体ＳＧＬＴ１は、小腸、および腎近位尿細管のより遠位のＳ３分節で発現される（非特許文献５；および非特許文献６）。それらの配列類似性にもかかわらず、ヒトＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２は生化学的に識別可能である。ＳＧＬＴ１について、輸送されるグルコースに対するＮａ＋のモル比は２：１である。ＳＧＬＴ２について、該比は１：１である。Ｎａ＋のＫｍはＳＧＬＴ１について３２ｍＭおよびＳＧＬＴ２について２５０〜３００ｍＭである。ＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２は数種の糖に対するそれらの基質特異性もまた異なるが、しかしグルコースおよび代謝不可能なグルコースアナログα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の取り込みのＫｍ値は同様である。グルコースについて、Ｋｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．８ｍＭおよび１．６ｍＭである。ＡＭＧについて、Ｋｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．４ｍＭおよび１．６ｍＭである（非特許文献１；および特許文献１）。
【００１４】
非特異的ＳＧＬＴ１／ＳＧＬＴ２阻害薬フロリジンの投与は、高血糖を伴う障害（例えばＮＩＤＤＭおよびシンドロームＸ）を処置するためのＳＧＬＴ阻害薬の使用のための概念データのｉｎ ｖｉｖｏの証明を提供した。フロリジンの投与は、糖尿病のげっ歯類モデルおよび１種のイヌ糖尿病モデルにおいて、低血糖の副作用を伴わずに、グルコース排泄を促進し、空腹時および食後血糖値レベルを低下させ、そしてグルコース利用を促進した（非特許文献７）。血漿イオンバランス、腎機能若しくは腎形態に対する副作用は、約２週間のフロリジン処置の結果として観察されなかった。加えて、フロリジンを正常動物に投与した場合、糖尿の存在にもかかわらず高血糖若しくは他の副作用は観察されなかった。さらに、フロリジン由来の合成剤での長期処置が、肥満のＩＩ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）ラットモデルにおいて空腹時および食後血糖値を改善し、インスリンの分泌および利用を改善し、ならびに低血糖若しくは腎の副作用の非存在下で腎症の発症を相殺することが報告された（非特許文献８）。
【００１５】
フロリジンそれ自身は、しかしながら、それが非特異的ＳＧＬＴ１／ＳＧＬＴ２阻害薬であるため、およびそれが腸でアグリコン、フロレチンに加水分解されるため、経口薬物として魅力がない。該加水分解された生成物は促進グルコース輸送体（ＧＬＵＴ）の強力な阻害剤であり、そしてＧＬＵＴの同時阻害は望ましくない（非特許文献９）。こうした阻害剤は、末梢インスリン抵抗性を悪化させならびにＣＮＳでの低血糖を促進することが予測されるであろう。ＳＧＬＴ１の阻害は、ＳＧＬＴ１共輸送体中の突然変異が腸での損なわれたグルコース取り込みならびに生命を脅かす下痢および脱水をもたらす遺伝性症候群グルコース／ガラクトース吸収不良（ＧＧＭ）により具体的に説明されるとおり、重大な有害な結果もまた有し得る（非特許文献１０；および非特許文献１１）。
【００１６】
全体として考えれば、これらのデータは、糖尿病患者におけるＳＧＬＴ２の特異的阻害が、尿中のグルコースの排泄を高めてそれによりインスリン感受性を改善しかつ糖尿病性合併症の発症を遅らせることにより血糖値を安全に正常化しうることを示唆している。幸運なことに、ＳＧＬＴ１とＳＧＬＴ２の間の生化学的差異ならびにそれらの間の配列の相違の程度は選択的ＳＧＬＴ２阻害剤の同定を見込む。しかしながら、こうした阻害剤の発見および最適化をさらに可能にするためになお必要とされるものは、阻害剤をｉｎ ｖｉｖｏで試験しかつＳＧＬＴ２およびＳＧＬＴ１に対する変動する効力および選択性をもつ阻害剤の効果を評価するためのアッセイである。
【００１７】
グルコースアナログはグルコース輸送の研究およびグルコース輸送体の特徴付けに長く使用されている（総説については非特許文献１２を参照されたい）。α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）は、しばしば、ＳＧＬＴ１および／若しくはＳＧＬＴ２の活性を研究するた
めに設計された細胞に基づくアッセイのための選択すべきアナログである。
【００１８】
【化１】
【００１９】
α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）のいくつかの同義語
α−Ｄ−メチルグルコシド
α−メチル−Ｄ−グルコシド
メチル−α−Ｄ−グルコシド
メチルα−Ｄ−グルコシド
１−Ｏ−メチル−グルコシド
α−メチルグルコピラノシド
α−Ｄ−メチルグルコピラノシド
α−メチル−Ｄ−グルコピラノシド
メチル−アルファ−Ｄ−グルコピラノシド
メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
１−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
α−メチルＤ−グルコースエーテル
【００２０】
ＡＭＧは代謝不可能なグルコースアナログである。それは双方の輸送体についてグルコースに類似のＫｍ値をもつＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２双方の基質であり、このことはそれをＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２によるグルコースの輸送を研究するための理想的な指標にする。グルコースのＫｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．８ｍＭおよび１．６ｍＭである。ＡＭＧのＫｍ値はＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２についてそれぞれ０．４ｍＭおよび１．６ｍＭである（非特許文献１；および特許文献１）。さらに、尾静脈を介する注入により投与される１１Ｃ標識ＡＭＧをグルコース輸送の選択的トレーサーとして使用し得、かつ、ｉｎ ｖｉｖｏで行われるＰＥＴ画像化を用いて多様な輸送体の機能を可視化するのに使用し得ることが示されている（非特許文献１３）。
【００２１】
グルコース輸送のｉｎ ｖｉｖｏ研究にＡＭＧを使用する潜在的な一問題は、ＡＭＧが腸漿膜輸送系の基質でないことが示されていることである。例えば、ＡＭＧが単離されたニワトリ腸上皮細胞に蓄積することが示されている。上皮細胞への一方向の流れの結果として、ＡＭＧの定常状態の勾配が、拡散流出過程によってのみ妨害される集中的過程により正確に表されることが確定された。（非特許文献１４）。加えて、カエル、ワライガエル（Ｒ．ｒｉｄｉｂｕｎｄａ）の小腸の血管灌流標本を使用する研究は、管腔から上皮に負荷されるＡＭＧが細胞から血管床にゆっくりとのみ洗い去り、その結果高速の血管灌流ででさえＡＭＧが組織内に蓄積したことを示した（非特許文献１５）。ＡＭＧの吸収は、雄性Ｗｉｓｔａｒラットからの小腸および結腸組織スリーブ標本（非特許文献１６）ならびに雄性Ｄｕｎｋｉｎ Ｈａｒｔｌｅｙモルモット（Ｃａｖｉａ ｐｏｒｃｅｌｌｕｓ）からの十二指腸、空腸および回腸の裏返しスリーブ（非特許文献１７）で、ｅｘ ｖｉｖｏでもまた示されている。該ｅｘ ｖｉｖｏ実験の性質は、しかしながら、血液、尿若し
くは他組織中のＡＭＧのその後の測定を不可能にした。さらに、ＡＭＧが細胞および組織中に蓄積することを示す実験は、ＡＭＧは腸漿膜輸送系の基質でないため、ＡＭＧが認識できる量で血液若しくは尿に通過しないであろうことを示唆した。
【００２２】
中空腸の一区分にカニューレ挿入された雄性ラットを使用して、１４Ｃ−ＡＭＧの吸収を「管腔損失」として、すなわち空腸の一区域で当初循環された量−溶液を１５分間循環した後に回収されたものを計算した。これらの実験について、１４Ｃ−ＡＭＧはその後血漿、尿若しくはいかなる組織中でも測定されなかった（非特許文献１８）。同様に、１４Ｃ−ＡＭＧの取り込みを、雌性Ｗｉｓｔａｒラットからの空腸のカニューレ挿入された区域の単回通過灌流で測定した。再度、血液若しくは尿中のＡＭＧの後の測定は報告されなかった（非特許文献１９）。雄性Ｗｉｓｔａｒラットからの閉鎖された空腸区域を使用してｉｎ ｓｉｓｕで行われた実験で、１４Ｃ−ＡＭＧの吸収を、閉鎖された空腸区域への注入後の腸静脈血中の出現速度により決定した（非特許文献２０）。別の研究において、吸収に対する食物繊維、管腔内圧および膨満の影響を同一の方法を用いて検討した（非特許文献２１；および非特許文献２２）。閉鎖された空腸区域に注入される１４Ｃ−ＡＭＧを使用するｉｎ ｓｉｔｕで行われた実験は、ＡＭＧがＡＭＧの経口投与後に胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収、腎尿細管からのグルコース再吸収、および／若しくは尿中のグルコース排泄の指標としてｉｎ ｖｉｖｏで使用し得たことを示さなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許出願第２００８／０２３４３６７号明細書
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｋａｎａｉら、（１９９４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ ９３：３９７−４０４
【非特許文献２】Ｙｏｕら、（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７０（４９）：２９３６５−７１
【非特許文献３】ｖａｎ ｄｅｎ Ｈｅｕｖｅｌら、（２００２）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ １１１：５４４−５４７
【非特許文献４】Ｃａｌａｄｏら、（２００４）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ １１４：３１４−３１６
【非特許文献５】ＰａｊｏｒとＷｒｉｇｈｔ（１９９２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７：３５５７−３５６０
【非特許文献６】Ｗｒｉｇｈｔ（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２８０：Ｆ１０−Ｆ１８
【非特許文献７】Ｅｈｒｅｎｋｒａｎｚら、（２００５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｔａｂ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２１：３１−３８
【非特許文献８】Ｕｅｔａら、（２００５）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．７６（２３）：２６５５−６８
【非特許文献９】Ｋａｔｓｕｎｏら、（２００７）Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．３２０（１）：３２３−３０
【非特許文献１０】Ｔｕｒｋら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５０：３５４−３５６
【非特許文献１１】Ｍａｒｔｉｎら、（１９９６）Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １２：２１６−２２０
【非特許文献１２】Ｇａｔｌｅｙ（２００３）Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．４４（７）：１０８２−６
【非特許文献１３】Ｂｏｒｍａｎｓら、（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４４（７）：１０７５−１０８１
【非特許文献１４】ＫｉｍｍｉｃｈとＲａｎｄｌｅｓ（１９８１）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２４１（５）：Ｃ２２７−３２
【非特許文献１５】ＢｏｙｄとＰａｒｓｏｎｓ（１９７９）Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８７：３７１−９１
【非特許文献１６】Ｇｏｎｚaｌｅｚ Ｂｏｓｃら、（１９９８）Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．１９（７）：１２４９−５３
【非特許文献１７】Ｊｕａｎら、（１９９８）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７５（３ Ｐｔ ２）：Ｒ８９７−９０４
【非特許文献１８】Ｄｅｂｎａｍ Ｌｅｖｉｎ（１９７５）Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２４６（１）：１８１−９６
【非特許文献１９】ＥｌｓｅｎｈａｎｓとＳｃｈuｍａｎｎ（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８（２０）：３４２３−９
【非特許文献２０】Ｗｉｎｎｅら、（１９８７）Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３３５（２）：２０４−１５
【非特許文献２１】ＨｏｌｚｈｅｉｍｅｒとＷｉｎｎｅ（１９８６）Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３３４：５１４−５２４
【非特許文献２２】ＨｏｌｚｈｅｉｍｅｒとＷｉｎｎｅ（１９８９）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５６（１ Ｐｔ １）：Ｇ１８８−９７
【発明の概要】
【００２５】
［発明の要約］
本発明を特徴付ける新規性の多様な特徴は、本開示に付されかつその一部を形成する請求の範囲でとりわけ指摘される。本発明、その運用上の利点、およびその使用により達成される特定の目的のより良好な理解のため、本発明の態様が具体的に説明かつ記述されている図面および保護対象（ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ ｍａｔｔｅｒ）への言及が有されるはずである。
【００２６】
一態様において、本発明は、（ａ．）予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を動物に投与する段階；（ｂ．）ＡＭＧ投与後に前記動物からサンプルを得る段階；（ｃ．）前記サンプル中の前記ＡＭＧの量を測定する段階を含んでなる、前記動物の胃腸系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄の指標としてのＡＭＧの使用方法を含んでなり；前記サンプル中のＡＭＧの量が前記動物の胃腸系からのグルコース吸収の量若しくは該動物の腎からのグルコース排泄の量と相関する。
【００２７】
第二の態様において、本発明は、動物がマウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００２８】
第三の態様において、本発明は、サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００２９】
第四の態様において、本発明は、（ａ．）予め決められた量のＳＧＬＴ阻害剤を第一の動物に投与する段階；（ｂ．）予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一の動物および第二の動物に投与する段階であって、前記第二の動物は前記ＳＧＬＴ阻害剤を投与されず；（ｃ．）前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；（ｄ．）前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；（ｅ．）前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階を含んでなる、動物におけるＳＧＬＴ阻害剤の効果の確定方法を含んでなり；前記サンプル中の前記ＡＭＧの量の差異が前記第一の動物における前記ＳＧＬＴ阻害剤の効果を
示す。
【００３０】
第五の態様において、本発明は、ＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３１】
第六の態様において、本発明は、動物がマウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３２】
第七の態様において、本発明は、サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３３】
第八の態様において、本発明は第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異の比較方法を含んでなり、該方法は、（ａ．）予め決められた量の前記第一のＳＧＬＴ阻害剤を第一の動物に投与する段階；（ｂ．）予め決められた量の前記第二のＳＧＬＴ阻害剤を第二の動物に投与する段階；（ｃ．）予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一および第二の動物に投与する段階；（ｄ．）前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；（ｅ．）前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；（ｆ．）前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階を含んでなり；前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が前記第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異を比較するための基礎を提供する。
【００３４】
第九の態様において、本発明は、第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３５】
第十の態様において、本発明は、動物がマウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３６】
第十一の態様において、本発明は、サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【００３７】
第十二の態様において、本発明は、（ａ．）予め決められた量のＡＭＧの経口用量を、第一の動物、および胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患のない第二の動物にそれぞれ投与する段階；（ｂ．）前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；（ｃ．）前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；（ｄ．）前記第一の動物からのサンプル中の前記ＡＭＧの量を前記第二の動物から得られたサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階を含んでなる、動物における前記疾患の診断方法を含んでなり；前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が、前記第一の動物が胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患を有するかどうかを決定するための基礎を提供する。
【００３８】
第十三の態様において、本発明は動物がヒトである上述された方法を含んでなる。
【００３９】
第十四の態様において、本発明は、サンプルが血漿若しくは尿よりなる群から選択される、上述された方法を含んでなる。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
［発明の詳細な記述］
本発明を具体的に説明するために多様な例示的態様を下述する。本明細書に提供される
図および実施例は例示するためであり、そして本発明およびその多様な態様を制限するためでないことが最初に理解されるべきである。簡潔さのため、本節に引用される全部の特許および他の刊行物の開示は引用することによりそっくりそのまま本明細書に組み込まれる。
【００４１】
特定の一態様において、本発明は、α−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口投与後の動物の胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収、動物の腎尿細管からのグルコース再吸収および動物の尿中のグルコース排泄の指標としてのＡＭＧの使用方法を含んでなる。指標としてのＡＭＧは、本発明に記述されるところの意図している目的に依存して多数の方法で使用しうる。例えば、ＡＭＧはグルコースの吸収、代謝若しくは排泄の欠陥を伴う疾患を診断するのに使用しうる。ＡＭＧは、ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病若しくはＮＩＤＤＭ）、およびインスリン抵抗性症候群（ＩＲＳ）、メタボリックシンドローム若しくはメタボリックシンドロームＸともまた命名されるシンドロームＸの処置のための薬物候補をスクリーニングするのにもまた使用しうる。薬物候補の制限しない例は、ＳＧＬＴ２およびＳＧＬＴ１に対する変動する選択性をもつＳＧＬＴ阻害剤のような薬理学的剤を包含する。剤の混合物もまた使用しうる。
【００４２】
本発明での使用に企図している動物の制限しない例は、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類、ヒト、ならびにラット、マウス、ハムスターおよびモルモットのようなげっ歯類のような哺乳動物を包含する。
【００４３】
本発明のＡＭＧは、商業的供給源から得ることができるか、若しくは当業者に公知の合成方法により製造しうる。当業者は、本発明の方法での使用のためのＡＭＧが検出および定量で補助するためにいずれかの適する剤で標識若しくは修飾されうることもまた認識するであろう。例えば、ＡＭＧは発色性、蛍光発生性若しくは放射活性の剤で標識しうる。本発明の制限しない一例において、使用されたＮＭＲ検出方法のため、ＡＭＧはサンプル中のＡＭＧの検出および定量で補助するためのいかなる標識も必要としなかった。
【００４４】
多くの異なる技術を使用して本発明のサンプル中の経口投与されたＡＭＧを検出および定量し得る。該技術は、限定されるものでないが、単独若しくは組合せの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および質量分析（ＭＳ）のようなサンプル中の他成分からＡＭＧを分離するいずれかのクロマトグラフィー手段；いずれかの発色性検出手段；いずれかの蛍光発生性検出手段；いずれかの放射活性検出手段；ならびにいずれかの核磁気共鳴（ＮＭＲ）手段を挙げることができる。本発明の制限しない一例において、経口投与されたＡＭＧをＮＭＲ分光計を使用してサンプル中で検出して、ＮＭＲスペクトル中で４．８０ｐｐｍの二重項である未標識若しくは修飾ＡＭＧのアノマープロトンを検出する。サンプル中に存在するＡＭＧの量は、０．００ｐｐｍの内部参照ＤＳＳ（２，２−ジメチル−２−シラペンタン−ｄ６−スルホン酸ナトリウム塩）との比較により定量する。現在入手可能なＮＭＲ装置はおよそ０．２ｍｇ／ｄｌのＡＭＧ（およそ１０μＭのＡＭＧである）の検出限界を見込むことができる。ＭＳ分析は、しかしながらＡＭＧが十分にイオン化しない場合であってもより高感度である。ＭＳを使用することはμＭ以下の量のＡＭＧを検出することを可能にするとみられる。当業者は、検出限界のさらなる改良が標識ＡＭＧを使用することによってもまたなされ得ることを認識するであろうが、とは言えこうした場合は未標識の指標を使用するという利点が損なわれるであろう。ＮＭＲサンプルサイズは使用される装置の型に依存するが、しかし、制限しない一例においてサンプルサイズはおよそ５から５００μｌまでの範囲にわたることができる。
【００４５】
本発明のＡＭＧは好ましくは経口投与する。経口投与の制限しない例は、経口胃管栄養法、固形経口用量を包含するか、若しくは食事の一部としての食物を伴うＡＭＧを包含する。ＡＭＧの経口投与法は、担体またはＡＭＧの溶解性若しくは利用性を改良する他の剤
もまた包含しうる。本発明の制限しない一例において、ＡＭＧを滅菌水に溶解し、そして約２ｇ／ｋｇ（ＡＭＧ／体重）の用量で胃管栄養法を介して経口投与した。当業者は、用量を検出方法または標識若しくは未標識ＡＭＧを使用するかどうかに依存して増大若しくは減少させてよいことを認識するであろう。
【００４６】
本明細書で使用されるところの「サンプル（１若しくは複数）」という用語は、最小限度に侵襲的若しくは被侵襲的方法（例えば尿収集、採決、針吸引および最小限度の危険性、不快感若しくは努力を必要とする他の処置）を用いて動物から直接採取し得る血液および他の体液を包含する。サンプルは、血清、血漿、他の体液、若しくは組織ライセート、細胞上清、細胞ライセートなどのような組織もまた包含しうる。本発明で企図しているサンプルの特定の型の制限しない例は、尿、血漿、胃の液体内容物、または胃腸系、腎若しくは尿路の外科的に取り出された部分から調製されたライセートを包含する。好ましい一態様において、尿、血漿、および胃腸系から採取されたサンプルから調製されたライセートを、本発明で記述される用途のため調製する。
【００４７】
サンプルは、それらの調達後に、最適な試験結果を得る目的上、タンパク質若しくはポリヌクレオチドのようなある種の成分を可溶化、濃縮若しくは枯渇するための試薬での処理によるようないずれかの方法で操作しうる。
【００４８】
本発明によれば、サンプルは１回若しくはＡＭＧの経口投与後一定の間隔で複数回採取しうる。制限しない一例において、サンプルを動物へのＡＭＧの経口投与１２０若しくは２４０分後に採取した。動物を殺し、尿および血漿サンプルを収集し、そして胃腸（ＧＩ）管全体を取り出しかつ生理的食塩水中に入れた。その後、ライセートをＧＩ管から作成した。アリコートを血漿、尿およびＧＩ管ライセートから採取し、そして全サンプルをアセトニトリルで抽出してタンパク質を沈殿させた。多様なサンプルが大きく異なる量のタンパク質を含有しうるため、タンパク質を除去することが望ましい。
【００４９】
また、本発明によれば、経口投与されたＡＭＧは胃腸（ＧＩ）系から吸収されるのみならず、しかしまた血漿若しくは尿中に認識できるレベルで出現する。本発明に記述されるとおり、ＡＭＧの経口投与は動物におけるＡＭＧの代謝から生じる複雑な事態を引き起こさず、従って多様なサンプル（例えばＧＩ管、血漿および尿）中のＡＭＧの定量が単純化される。これは、グルコース吸収に影響を及ぼす化合物のグルコース排泄に影響を及ぼすもの若しくは双方に影響を及ぼすものからの弁別を見込む。また、未標識ＡＭＧを検出および定量するのに使用されるＮＭＲ法のため、放射活性同位体はもはや必要とされない。本発明のＮＭＲ方法論がなければ、こうした放射活性同位体が、１１Ｃ標識ＡＭＧの静脈内注入後にＰＥＴ画像化を使用する１１Ｃ ＡＭＧ分布の研究で記述された（Ｂｏｒｍａｎｓら、（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４４（７）：１０７５−１０８１）とおり必要とされていたであろう。
【００５０】
本発明は、ＳＧＬＴ１およびＳＧＬＴ２に対する変動する効力および選択性をもつＳＧＬＴ阻害剤が、定量可能に異なる量のＡＭＧがＡＭＧ投与後にＧＩ管、血漿、尿若しくは身体中の他の場所で見出されることを引き起こすこともまた示す。さらに、ＧＩ管、血漿若しくは尿など中のＡＭＧ量は用量依存性であることが示されている。従って、経口投与されたＡＭＧを、ＧＩ系からのグルコース吸収、腎尿細管からのグルコース再吸収および尿中のグルコース排泄の指標として使用し得る。
【００５１】
さらなる記述を伴わずに、当業者は、先行する記述および以下の具体的に説明する実施例を使用して、本発明を作成かつ利用しそして特許請求される方法を実践し得ると考えられる。以下の作業実施例は、従って本発明の好ましい態様を具体的に指摘し、そして本開示の残部をいずれかの方法で制限すると解釈されるべきでない。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
図面において、
【図１】ＧＩ管（Ａ）、血漿（Ｂ）および尿（Ｃ）から採取されたサンプル中でベヒクル（０．５％メチルセルロース（メトセル（ｍｅｔｈｏｃｅｌ）））、および０．５％メチルセルロースに懸濁された化合物１若しくは化合物２での多様な処置後に測定されたＡＭＧの量（単位はミリグラム（ｍｇ）若しくは１デシリットルあたりミリグラム（ｍｇ／ｄｌ））を示す。灰色の陰を付けられた棒はベヒクル処置ラットについてであり、黒色棒は０．３ｍｐｋの化合物２で処置されたラットについてであり；縦線が付けられた棒は３．０ｍｐｋの化合物２で処置されたラットについてであり；横線が付けられた棒は０．３ｍｐｋの化合物１で処置されたラットについてであり；そして斜線が付けられた棒は３．０ｍｐｋの化合物１で処置されたラットについてである。
【実施例１】
【００５３】
細胞に基づくアッセイ
化合物１および化合物２でのＳＧＬＴ活性の阻害を、ヒトＳＧＬＴ１若しくはヒトＳＧＬＴ２のいずれかを安定に発現するＣＨＯＫ１細胞で評価した。化合物１および化合物２は米国特許出願第２００５／０２３３９８８号および同第２００８／００２７１２２号明細書（それらの開示はそっくりそのまま引用することにより組み込まれる）に記述されている。
【００５４】
【化２】
【００５５】
ヒトＳＧＬＴ２若しくはヒトＳＧＬＴ１を発現するＣＨＯＫ１細胞を、１０％ウシ胎児血清、４００μｇ／ｍｌのジェネチシン、５０単位／ｍｌのナトリウムペニシリンＧ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）および５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン硫酸塩を含有するＦ−１２栄養混合物（ハムＦ−１２）中におよそ４００，０００細胞／ウェルの密度で２４ウェルプレートに播種した。細胞は５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中３７℃で２日間培養物中で維持した。アッセイの日に化合物１および化合物２をＤＭＳＯに溶解し、そしてその後アッセイ緩衝液で希釈した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。アッセイ緩衝液は１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＣａＣｌ２、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓおよび２０ｍＭトリス、ｐＨ７．４を含有した。アッセイを開始するため、細胞をアッセイ緩衝液で１回洗浄し、そしてその後、化合物１若しくは化合物２を含有する２５０μｌのアッセイ緩衝液と３７℃で１０分間インキュベートした。輸送反応を５０μｌの１４Ｃ−ＡＭＧ溶液（最終濃度、０．５ｍＭの１４Ｃ−ＡＭＧ）の添加により開始した。３７℃で３０分間インキュベーション後に、取り込みをインキュベーション混合物の吸引により停止し、そして細胞を氷冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞をその後０
．３Ｎ ＮａＯＨで可溶化し、そしてアリコートを液体シンチレーションカウンターによる放射活性の測定のため採取した。非特異的ＡＭＧ取り込みは、１００μＭのフロリジン（ナトリウム依存性グルコース共輸送体の特異的阻害剤）の存在下で発生したものと定義した。特異的取り込みを、ブラッドフォードの方法により測定されたタンパク質濃度について正規化した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値を最小二乗法により用量反応曲線から計算した。細胞に基づくＳＧＬＴ２およびＳＧＬＴ１アッセイのＩＣ５０値を表１に提示する。
【００５６】
【表１】
【実施例２】
【００５７】
動物試験
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットに、ベヒクルすなわち滅菌水中０．５％メチルセルロース（メトセル（ｍｅｔｈｏｃｅｌ））または０．３若しくは３．０ｍｇ／ｋｇのＳＧＬＴ阻害剤（化合物１および化合物２）の一方のいずれかを経口胃管栄養法により投与した。化合物は０．５％メチルセルロースおよび滅菌水中の懸濁液として投与した。動物に化合物を投与して１時間後にＡＭＧを胃管栄養法を介して経口投与した（２ｇ／ｋｇ）。ＡＭＧは滅菌水に溶解した。ラットをＡＭＧ投与１２０若しくは２４０分後に殺した。尿および血漿サンプルを収集し、また、胃腸管全体を取り出しかつ生理的食塩水中に入れた。その後ＧＩライセートを作成した。アリコートを血漿、尿およびＧＩライセートのサンプルから採取し、そしてアセトニトリルで抽出してタンパク質を沈殿させた。多様な生物流体が大きく異なる量のタンパク質を含有するため、タンパク質を除去することが望ましかった。タンパク質シグナルはＡＭＧの定量をより困難にしていた可能性がある。水性部分を乾燥しそして重水素化水中０．５ｍｌの容量に再懸濁した。重水素化水の使用は、アノマープロトンがＮＭＲスペクトルのはるかにより少なく混み合った領域で共鳴するため、該スペクトル中のアノマープロトンの観察を可能にした。メチル一重項もまたおそらく使用された可能性があるが、しかし他の代謝物シグナルとの重なりを受ける。
【実施例３】
【００５８】
ｉｎ ｖｉｖｏデータ解析
プロトンＮＭＲスペクトルは、プローブ温度を３２℃に維持したＢｒｕｋｅｒ ＤＭＸ
６００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州ビレリカ）で取得した。軽度に上昇された温度を使用して、溶媒ピーク（サンプル中の残余の水）と定量に使用されたＡＭＧのアノマープロトン（４．８０ｐｐｍの二重項）の間の化学シフト分離を高めた。溶媒ピークは、パルス前遅延（ｐｒｅ−ｐｕｌｓｅ ｄｅｌａｙ）の間の超低出力照射（約４Ｈｚの場の強さ）、次いでシグナルを取得するための３０°のパルスを使用して飽和した。パルス前遅延は３．０ｓであり、そして取得時間は２．１ｓであった。掃引幅は３２ｋ複合点（ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｏｉｎｔ）を使用して１３ｐｐｍであった。フーリエ変換前に、データを０．５Ｈｚ指数関数的線拡大（ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｌｉｎｅｂｒｏａｄｅｎｉｎｇ）でアポダイズした（ａｐｏｄｉｚｅｄ）。サンプル中に存在するＡＭＧの量は０．００ｐｐｍの内部参照
ＤＳＳ（２，２−ジメチル−２−シラペンタン−ｄ６−スルホン酸ナトリウム塩）に関して決定した。
【００５９】
ｉｎ ｖｉｖｏの結果は、ベヒクル処置ラットにおいてＡＭＧがＧＩ系から吸収されかつＧＩ系、血漿および尿サンプル中で検出され得ることを示した。それぞれ図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃ。化合物２（ＳＧＬＴ１のＩＣ５０＝２７０ｎＭ）で処置されたラットでは、ＧＩ系に保持されるＡＭＧ含量がより高用量で顕著に増大された（図１Ａ）。化合物１（ＳＧＬＴ１でのＩＣ５０＝１７００ｎＭ）での処置はＧＩ系におけるＡＭＧの有意の保持を引き起こさなかった。化合物１および化合物２の双方が血漿中で検出されるＡＭＧの量の用量依存性の減少を示した（図１Ｂ）。化合物１について、血漿中で検出されたＡＭＧの量の用量依存性の減少は、ＳＧＬＴ２の強力な阻害（ＳＧＬＴ２のＩＣ５０＝８．４ｎＭ）および尿中で検出されたＡＭＧの量の結果として生じる増大に帰される（図１Ｃ）。化合物２について、血漿中のＡＭＧの量の用量依存性の減少は、ＡＭＧのＧＩ吸収の減少をもたらすＧＩ系におけるＳＧＬＴ１に対する阻害効果（ＳＧＬＴ１のＩＣ５０＝２７０ｎＭ）（図１Ａ）および尿中で検出されたＡＭＧの増大された量をもたらす腎におけるＳＧＬＴ２の強力な阻害（ＳＧＬＴ２のＩＣ５０＝１．９ｎＭ）（図１Ｃ）の双方に帰される。
【００６０】
従って、その好ましい一態様に適用されるところの本発明の基礎的な新規特徴が、示されかつ記述および指摘された一方、具体的に説明される装置の形態および詳細ならびにそれらの操作における多様な省略および置換および変更が、本発明の技術思想から離れることなく当業者によりなされうることが理解されるであろう。例えば、同一の結果を達成するために実質的に同一の方法で実質的に同一の機能を実施する要素および／若しくは方法段階の全部の組合せが本発明の範囲内にあることを明らかに意図している。さらに、本発明のいかなる開示された形態若しくは態様とともに示されかつ／若しくは記述される構造および／若しくは要素および／若しくは方法段階が、いずれかの他の開示若しくは記述若しくは示唆される形態若しくは態様に設計の選択の一般的問題として組み込まれうることが認識されるべきである。従って、ここに付属される請求の範囲の範囲により示されるようにのみ制限されることを意図している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を動物に投与する段階；
ｂ．ＡＭＧ投与後に前記動物からサンプルを得る段階；
ｃ．前記サンプル中の前記ＡＭＧの量を測定する段階
を含んでなり；
前記サンプル中のＡＭＧの量が前記動物の胃腸系からのグルコース吸収の量若しくは該動物の腎からのグルコース排泄の量と相関する、
前記動物の胃腸系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄の指標としてのＡＭＧの使用方法。
【請求項２】
動物が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ａ．予め決められた量のナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤を第一の動物に投与する段階；
ｂ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一の動物および第二の動物に投与する段階であって、前記第二の動物は前記ＳＧＬＴ阻害剤を投与されず；
ｃ．前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；
ｄ．前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；
ｅ．前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階
を含んでなり；
前記サンプル中の前記ＡＭＧの量の差異が前記第一の動物における前記ＳＧＬＴ阻害剤の効果を示す、
動物におけるＳＧＬＴ阻害剤の効果の確定方法。
【請求項５】
ＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
動物が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ａ．予め決められた量の第一のナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤を第一の動物に投与する段階；
ｂ．予め決められた量の第二のＳＧＬＴ阻害剤を第二の動物に投与する段階；
ｃ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一および第二の動物に投与する段階；
ｄ．前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；
ｅ．前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；
ｆ．前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階
を含んでなり；
前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が前記第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異
を比較するための基礎を提供する、
前記第一および前記第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異の比較方法。
【請求項９】
第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
動物が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
ａ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を第一の動物、および胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患のない第二の動物にそれぞれ投与する段階；
ｂ．前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；
ｃ．前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；
ｄ．前記第一の動物からのサンプル中の前記ＡＭＧの量を前記第二の動物から得られたサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階
を含んでなり；
前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が、前記第一の動物が胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患を有するかどうかを決定するための基礎を提供する、
動物における前記疾患の診断方法。
【請求項１３】
動物がヒトである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記サンプルが血漿若しくは尿である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１】
ａ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を動物に投与する段階；
ｂ．ＡＭＧ投与後に前記動物からサンプルを得る段階；
ｃ．前記サンプル中の前記ＡＭＧの量を測定する段階
を含んでなり；
前記サンプル中のＡＭＧの量が前記動物の胃腸系からのグルコース吸収の量若しくは該動物の腎からのグルコース排泄の量と相関する、
前記動物の胃腸系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄の指標としてのＡＭＧの使用方法。
【請求項２】
動物が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ａ．予め決められた量のナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤を第一の動物に投与する段階；
ｂ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一の動物および第二の動物に投与する段階であって、前記第二の動物は前記ＳＧＬＴ阻害剤を投与されず；
ｃ．前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；
ｄ．前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；
ｅ．前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階
を含んでなり；
前記サンプル中の前記ＡＭＧの量の差異が前記第一の動物における前記ＳＧＬＴ阻害剤の効果を示す、
動物におけるＳＧＬＴ阻害剤の効果の確定方法。
【請求項５】
ＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
動物が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ａ．予め決められた量の第一のナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤を第一の動物に投与する段階；
ｂ．予め決められた量の第二のＳＧＬＴ阻害剤を第二の動物に投与する段階；
ｃ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を前記第一および第二の動物に投与する段階；
ｄ．前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；
ｅ．前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；
ｆ．前記第一の動物からのサンプル中のＡＭＧの量を前記第二の動物からのサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階
を含んでなり；
前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が前記第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異
を比較するための基礎を提供する、
前記第一および前記第二のＳＧＬＴ阻害剤の効果の差異の比較方法。
【請求項９】
第一および第二のＳＧＬＴ阻害剤がＳＧＬＴ２阻害剤およびＳＧＬＴ１阻害剤よりなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
動物が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、イヌ、ブタ、ヒト以外の霊長類およびヒトよりなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
サンプルが血漿、尿および胃腸管よりなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
ａ．予め決められた量のα−メチルグルコシド（ＡＭＧ）の経口用量を第一の動物、および胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患のない第二の動物にそれぞれ投与する段階；
ｂ．前記第一および第二の動物からサンプルを得る段階；
ｃ．前記サンプル中のＡＭＧの量を測定する段階；
ｄ．前記第一の動物からのサンプル中の前記ＡＭＧの量を前記第二の動物から得られたサンプル中のＡＭＧの量と比較する段階
を含んでなり；
前記サンプル中のＡＭＧの量の差異が、前記第一の動物が胃腸（ＧＩ）系からのグルコース吸収若しくは腎からのグルコース排泄に関連する疾患を有するかどうかを決定するための基礎を提供する、
動物における前記疾患の診断方法。
【請求項１３】
動物がヒトである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記サンプルが血漿若しくは尿である、請求項１２に記載の方法。
【図１】
【公表番号】特表２０１３−５０４７６９（Ｐ２０１３−５０４７６９Ａ）
【公表日】平成２５年２月７日（２０１３．２．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２９８４７（Ｐ２０１２−５２９８４７）
【出願日】平成２２年９月１４日（２０１０．９．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４８７５２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０３４８４６
【国際公開日】平成２３年３月２４日（２０１１．３．２４）
【出願人】（３９００３３００８）ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ (616)
【氏名又は名称原語表記】ＪＡＮＳＳＥＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡ ＮＡＡＭＬＯＺＥ ＶＥＮＮＯＯＴＳＣＨＡＰ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年２月７日（２０１３．２．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月１４日（２０１０．９．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４８７５２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０３４８４６
【国際公開日】平成２３年３月２４日（２０１１．３．２４）
【出願人】（３９００３３００８）ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ (616)
【氏名又は名称原語表記】ＪＡＮＳＳＥＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡ ＮＡＡＭＬＯＺＥ ＶＥＮＮＯＯＴＳＣＨＡＰ
【Ｆターム（参考）】
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