タンパク質を使用する髄膜炎菌の血清群Ｙに対する免疫
髄膜炎菌についての確立された考え方は、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する免疫は、４つの異なる莢膜糖に基づき、そして血清群Ｂに対する免疫は、莢膜糖に基づかないということである。対照的に、本発明は、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対して（そして特に、血清群Ｙに対して）免疫するためにポリペプチド抗原および／またはＯＭＶを使用する。血清群Ｂポリペプチドがこの防御を達成し得、従って、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの全てに対する防御のために使用される単一のポリペプチドベースのワクチンを可能にする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載される全ての文献は、それらの全体が参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、免疫学およびワクチン学の分野にある。特に、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）由来の抗原およびこれらの免疫化における使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、咽頭にコロニーを形成して髄膜炎（および時折、髄膜炎の不存在下で敗血症（ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ））を引き起こす、非運動性のグラム陰性ヒト病原体である。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、風土病および伝染病の両方を引き起こす。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する結合体ワクチンの導入後、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、米国における細菌性髄膜炎の主な原因である。
【０００４】
生物体の莢膜多糖に基づき、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの種々の血清群が同定されている。血清群Ａは、サハラ以南のアフリカにおける伝染病に最も頻繁に関係する病原体である。血清群Ｂおよび血清群Ｃは、米国およびほとんどの先進国における症例の大部分の原因である。血清群Ｗ１３５および血清群Ｙは、米国および先進国における症例の残りの原因である。血清群の後に、分類は、血清型、血清亜型、および免疫型を含み、そしてこの標準的な命名法は、血清群、血清型、血清亜型および免疫型を列挙し、それぞれが、コロンによって分けられる（例えば、Ｂ：４：Ｐ１．１５：Ｌ３，７，９）。血清群Ｂ内では、いくつかの系統は、多くの場合、（超侵襲性）疾患を引き起こし、いくつかの系統は、他の疾患よりもより重い形態の疾患（超毒性）を引き起こし、そして他の系統は、めったに疾患を引き起こさない。７つの高毒性系統が認知される（すなわち、亜群Ｉ、亜群ＩＩＩ、および亜群ＩＶ−１、ＥＴ−５複合体、ＥＴ−３７複合体、Ａ４クラスター、ならびに系統３）。これらは、多座酵素電気泳動（ＭＬＥＥ）により決定されるが、多座配列タイピング（ＭＬＳＴ）もまた、髄膜炎菌を分類するために用いられる［非特許文献１］。
【０００５】
今日まで血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５、および血清群Ｙに対するワクチンは、抗原としてこれらの血清群の莢膜糖を使用する。これらの４つの血清群に対する認可されたヒト多糖は、長年公知である［非特許文献２、非特許文献３］。より最近、焦点は、糖に合わせられたままであるが、キャリアタンパク質への結合体化に合わせられる。血清群Ｃに対する結合体化ワクチンは、ヒトへの使用が認可されており、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ［非特許文献４］、ＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭおよびＮｅｉｓ Ｖａｃ−ＣＴＭが挙げられる。血清群Ａ＋Ｃ由来の結合体の混合物は、公知［非特許文献５、非特許文献６］であり、そして血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ由来の結合体の混合物が、報告されている［特許文献１、特許文献２、非特許文献７、非特許文献８］。
血清群Ｂの莢膜糖は、ヒトにおける自己抗原であるのでワクチン接種に使用され得ない。化学的に改変された血清群Ｂ糖が、提案された［特許文献３］が、臨床使用に適さなかった。外膜小胞に基づくワクチンがまた、試験された［例えば、非特許文献９］が、これらのワクチンによって提供される防御は、代表的に、ワクチンを作製するための使用される株に限定される。血清群Ａのゲノム配列［非特許文献１０］および血清群Ｂのゲノム配列［非特許文献１１、特許文献４］が報告され、そして血清群Ｂの配列は、ワクチン抗原を同定するために研究された［例えば、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、非特許文献１２］。候補抗原は、異種の発現を改良するために操作された［特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２］。
【０００６】
従って、髄膜炎菌に対する確立された考え方は、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する免疫は、４つの異なる莢膜糖に基づき、そして血清群Ｂに対する免疫は、莢膜糖に基づかないということである。
【特許文献１】国際公開第０２／０５８７３７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／００７９８５号パンフレット
【特許文献３】欧州特許第０９３９６４７号明細書
【特許文献４】国際公開第００／６６７９１号パンフレット
【特許文献５】国際公開第９９／２４５７８号パンフレット
【特許文献６】国際公開第９９／３６５４４号パンフレット
【特許文献７】国際公開第９９／５７２８０号パンフレット
【特許文献８】国際公開第００／２２４３０号パンフレット
【特許文献９】国際公開第００／６６７４１号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第０１／６４９２０号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第０１／６４９２２号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第０３／０２０７５６号パンフレット
【非特許文献１】Ｍａｉｄｅｎら、「ＰＮＡＳ ＵＳＡ」、１９９８年、第９５巻、ｐ．３１４０〜３１４５
【非特許文献２】Ａｒｍａｎｄら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．」、１９８２年、第１０巻、ｐ．３３５〜３３９
【非特許文献３】Ｃａｄｏｚら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９８５年、第３巻、ｐ．３４０〜３４２
【非特許文献４】Ｊｏｎｅｓ、「Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ」、２００１年、第２巻、ｐ．４７〜４９
【非特許文献５】Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９９２年、第１０巻、ｐ．６９１〜６９８
【非特許文献６】Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、「ＪＡＭＡ」、１９９６年、第２７５巻、ｐ．１４９９〜１５０３
【非特許文献７】Ｒｅｎｎｅｌｓら、「Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ」、２００２年、第２１巻、ｐ．９７８〜９７９
【非特許文献８】Ｃａｍｐｂｅｌｌら、「Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ」、２００２年、第１８６巻、ｐ．１８４８〜１８５１
【非特許文献９】Ｂｊｕｎｅら、「Ｌａｎｃｅｔ」、１９９１年、第３３８巻、第８７７５号、ｐ．１０９３〜１０９６
【非特許文献１０】Ｐａｒｋｈｉｌｌら、「Ｎａｔｕｒｅ」、２０００年、第４０４巻、ｐ．５０２〜５０６
【非特許文献１１】Ｔｅｔｔｅｌｉｎら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、２０００年、第２８７巻、ｐ．１８０９〜１８１５
【非特許文献１２】Ｐｉｚｚａら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、２０００年、第２８７巻、ｐ．１８１６〜１８２０
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の開示）
この考え方とは対照的に、本発明者らは、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する免疫（そして特に、血清群Ｙに対する免疫）がポリペプチド抗原を使用して達成され得ることを見出した。さらに、本発明者らは、血清群Ｂポリペプチドがこの防御を達成し、従って、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの全てに対する防御のために使用される単一のポリペプチドベースのワクチンを可能にすることを見出した。
【０００８】
従って、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫する方法を提供し、この方法は、１種以上の免疫原性ポリペプチドを含有する組成物を被験体に投与する工程を包含する。同様に、本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における１種以上の免疫原性ポリペプチドの使用を提供する。
【０００９】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙに対して被験体を免疫する方法を提供し、この方法は、髄膜炎菌性ＯＭＶを含有する組成物をこの被験体に投与する工程を包含する。同様に、本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における髄膜炎菌性ＯＭＶの使用を提供する。
【００１０】
本方法および使用は、好ましくは血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫し、そしてまた血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび血清群Ｗ１３５の少なくとも１つに対して被験体を免疫するための方法に関連する。次いで被験体が、髄膜炎菌の所定の血清群に対して免疫された場合、この組成物は、好ましくはこの血清群由来の莢膜糖（結合体化されているか、または結合体化されていない）を含有しない。したがって、好ましい組成物は、血清群Ｙ由来の莢膜糖を含有せず、好ましい組成物はまた、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび／または血清群Ｗ１３５由来の莢膜糖を含有しなくても良い。
【００１１】
本発明に従って使用するための組成物は、公知の技術を使用して調製され得る（例えば、参考文献１５〜２４に開示される髄膜炎菌性ポリペプチド抗原を調製するための技術、または参考文献３４〜３８に開示されるＯＭＶを調製するための公知の技術）。精製したポリペプチド抗原の使用は、外膜小胞の使用に好ましい。
【００１２】
病原体に対するワクチン（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、ジフテリアおよび破傷風）は、代表的に、単一のタンパク質抗原（例えば、ＨＢＶ表面抗原、または破傷風毒素）を含む。対照的に、無細胞性百日咳ワクチンは、代表的に、少なくとも３つのＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓタンパク質を含み、ＰｒｅｖｅｎａｒＴＭ肺炎球菌ワクチンは、７つの分離した結合体化された糖抗原を含む。他のワクチン（例えば、細胞性百日咳ワクチン、麻疹ワクチン、不活性型ポリオワクチン（ＩＰＶ）および髄膜炎菌性ＯＭＶワクチン）は、非常に多くの抗原の天然の非常に複雑な混合物によるものである。単一の抗原、少数の同定された抗原、または複雑な同定されていない抗原の混合物によって誘発され得、従ってこの防御は多くの因子に依存する。
【００１３】
（免疫原性ポリペプチド）
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの感染に対する防御を提供するために少なくとも１種の免疫原性ポリペプチドを被験体に投与する工程を包含する。これらの免疫原性ポリペプチドは、一般的に、髄膜炎菌性のアミノ酸配列（例えば、血清群Ｂ株（例えば、配列決定されたＭＣ５８株［１３］）中に見出されるアミノ酸配列）を含む。
【００１４】
少数の特定された抗原が、使用され得る。したがって、単一の抗原からなるよりも、１０種または少数（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２）の精製された抗原の混合物を含有する本発明の組成物が好ましく、特に好ましくは、この組成物は、抗原の複合物または抗原の同定されていない混合物を含まないことが好ましい（例えば、組成物中に外膜小胞を含まないことが好ましい）。
【００１５】
本発明の使用に好ましい免疫原性ポリペプチドは、以下の参考文献２４に開示されるものである：（１）「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「７４１」タンパク質；（３）「９３６」タンパク質；（４）「９５３」タンパク質；および（５）「２８７」タンパク質。これらの抗原は、本明細書中に「５種の基本抗原」として参照される。本発明は、これらの抗原のうちの１種、２種、３種、４種または５種全てを使用し得る。
【００１６】
（ＮａｄＡタンパク質）
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｂ由来の「ＮａｄＡ」（ナイセリアアドヘジンＡ）は、参考文献１７にタンパク質「９６１」（配列番号２９４３および配列番号２９４４）として、そして参考文献１３に「ＮＭＢ１９９４」として開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：１１３５２９０４および７２２７２５６もまた参照のこと）。これらのタンパク質の詳細な説明は、参考文献２５のなかに見出される。対応するタンパク質は、血清群Ａゲノム中に見出されなかった［１２、２５］が、ＮａｄＡ＋血清群Ａ株は、［２５］により報告された。
【００１７】
本発明に従って使用される場合、ＮａｄＡは、種々の形態を採り得る。ＮａｄＡの好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜２３に開示される改変体）である。特に、Ｃ末端の膜アンカーを有さないＮａｄＡが、好ましく（例えば、株２９９６［配列番号１］の残基３５１〜４０５の欠失）、これはときとして、本明細書中で上付き「Ｃ」の使用によって区別される（例えば、ＮａｄＡ（Ｃ））。Ｅ．ｃｏｌｉにおけるこの膜アンカードメイン（例えば、配列番号１）を有さないＮａｄＡの発現は、２３マーのリーダーペプチドの除去（例えば、株２９９６の３２７マー［配列番号２］を残す）を伴って、このタンパク質の培養上清中への分泌を生じる。そのリーダーペプチドを有さないポリペプチドは、本明細書中で、時に、上付き「ＮＬ」の使用（例えば、ＮａｄＡ（ＮＬ）またはＮａｄＡ（Ｃ）（ＮＬ））により区別される。
【００１８】
好ましいＮａｄＡ配列は、配列番号２に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、ＮａｄＡ改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）、パラログ（ｐａｒａｌｏｇ）、変異体など）を包含する。ＮａｄＡの対立遺伝子形態は、参考文献２６の図９に示される。
【００１９】
他の好ましいＮａｄＡ配列は、配列番号１由来の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、ここでｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、ＮａｄＡ由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号１のＣ末端および／またはＮ末端の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）を欠く（例えば、ＮａｄＡ（Ｃ）、ＮａｄＡ（ＮＬ）、ＮａｄＡ（Ｃ）（ＮＬ））。Ｎ末端残基が欠失される場合、この欠失は、ＮａｄＡのヒト上皮細胞に付着する能力を除去するべきことが好ましい。配列番号１の好ましいフラグメントは、配列番号２である。
【００２０】
ＮａｄＡは、好ましくはオリゴマー形態で使用される（例えば、トリマー形態）。
【００２１】
（７４１タンパク質）
血清群Ｂ由来の「７４１」タンパク質は、参考文献１７（配列番号２５３５および配列番号２５３６）において開示され、そして参考文献１３において「ＮＭＢ１８７０」として開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＧＩ：７２２７１２８もまた参照のこと）。血清群Ａにおける対応するタンパク質［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３７９３２２を有する。７４１は、天然には、リポタンパク質である。
【００２２】
本発明に従って使用される場合、７４１タンパク質は、種々の形態をとり得る。７４１の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体である（例えば、参考文献２１〜２３に開示されているトランケーション改変体または欠失改変体）。特に、７４１のＮ末端は、そのポリグリシン配列まで欠失されても、およびポリグリシン配列を含めて欠失されてもよく（すなわち、ＭＣ５８株についての残基１〜残基７２の欠失［配列番号３］）、この配列は、時に、本明細書中で、接頭辞「ΔＧ」の使用により区別される。この欠失は、発現を増強し得る。この欠失はまた、７４１の脂質化部位を除去する。
【００２３】
好ましい７４１配列は、配列番号３に対する５０％以上の同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）を有する。これは、７４１改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。７４１の対立遺伝子形態は、参考文献２３の配列番号１〜配列番号２２、ならびに参考文献２７の配列番号１〜配列番号２３および配列番号１２３〜配列番号１４１に見出され得る。参考文献２８の配列番号１〜配列番号２９９は、さらなる７４１配列を与える。
【００２４】
他の好ましい７４１配列は、配列番号３由来の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、ここでｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、７４１由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号３のＣ末端および／またはＮ末端の１個以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）を欠く。
【００２５】
タンパク質７４１は、抗髄膜炎菌抗体応答を惹起するのに極めて有効な抗原であり、そしてこれは、髄膜炎菌の全ての血清群にわたって発現される。系統発生的分析は、これらのタンパク質が２つの群に分かれること、およびそれらの分けられたもののうちの一方が、合計３つの改変体をさらに与え［２９］、そして一方で、所定の改変体に対して惹起された血清は、同じ改変体群内においては殺菌性であり、他の２つの改変体のうちの１つを発現する株に対しては活性ではないこと（すなわち、改変体内の交差防御は存在するが、改変体間の交差防御は存在しないこと）を示している。従って、最大の株にまたがった（ｃｒｏｓｓ−ｓｔｒａｉｎ）効力のためには、組成物が、タンパク質７４１の１種より多い改変体を含有すべきことが好ましい。各々の改変体由来の例示的配列を、本明細書中で、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２に与え、これらの配列は、７４１のリポタンパク質形態では脂質が共有結合するＮ末端システイン残基で始まる。
【００２６】
従って、この組成物が、以下のうちの少なくとも２種を含有すべきことが好ましい：（１）配列番号１０に対して少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして／または配列番号１０由来の少なくともｘ個の連続するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第１のタンパク質；（２）配列番号１１に対して少なくともｂ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして／または配列番号１１由来の少なくともｙ個の連続するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第２のタンパク質；ならびに（３）配列番号１２に対して少なくともｃ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして／または配列番号１２由来の少なくともｚ個の連続するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第３のタンパク質。
【００２７】
ａの値は、少なくとも８５（例えば、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい）である。ｂの値は、少なくとも８５（例えば、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい）である。ｃの値は、少なくとも８５（例えば、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい）である。ａの値、ｂの値およびｃの値は、本質的に、互いに関連しない。
【００２８】
ｘの値は、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｙの値は、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｚの値は、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｘの値、ｙの値およびｚの値は、本質的に、互いに関連しない。
【００２９】
いずれの所定の７４１アミノ酸配列も、分類（１）、分類（２）および分類（３）のうちの１種よりも多くに分類されないことが好ましい。従って、いずれの所定の７４１配列も、分類（１）、分類（２）および分類（３）のうちのただ１種にのみ分類される。従って、以下が好ましい：タンパク質（１）が、タンパク質（２）に対してｉ％未満の配列同一性を有すること；タンパク質（１）が、タンパク質（３）に対してｊ％未満の配列同一性を有すること；およびタンパク質（２）が、タンパク質（３）に対してｋ％未満の配列同一性を有する。ｉの値は、６０以上（例えば、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０など）であり、最大がａである。ｊの値は、６０以上（例えば、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０など）であり、最大がｂである。ｋの値は、６０以上（例えば、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０など）であり、最大がｃである。ｉの値、ｊの値およびｋの値は、本質的に、互いに関連しない。
【００３０】
（９３６タンパク質）
血清群Ｂ由来の「９３６」タンパク質は、参考文献１７（配列番号２８８３および配列番号２８８４）に開示され、「ＮＭＢ２０９１」として参考文献１３に開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＧＩ：７２２７３５３もまた参照のこと）。血清群Ａの対応する遺伝子［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３７９０９３である。
【００３１】
本発明に従って使用される場合、９３６タンパク質は、種々の形態をとり得る。９３６の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜参考文献２３に開示されるもの）である。特に、９３６のＮ末端リーダーペプチドは、９３６（ＮＬ）を与えるために欠失され得る（すなわち、株ＭＣ５８の残基１〜残基２３の欠失［配列番号４］）。
【００３２】
好ましい９３６配列は、配列番号４に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。他の好ましい９３６配列は、配列番号４由来の少なくともｎ個の連続するアミノ酸を含み、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、９３６由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号４のＣ末端および／またはＮ末端由来の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）を欠く。
【００３３】
（９５３タンパク質）
血清群Ｂ由来の「９５３」タンパク質は、参考文献１７（配列番号２９１７および配列番号２９１８）に開示され、そして「ＮＭＢ１０３０」として参考文献１３に開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号 ＧＩ：７２２６２６９もまた参照のこと）。血清群Ａの対応するタンパク質［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３８０１０８を有する。
【００３４】
本発明に従って使用される場合、９５３タンパク質は、種々の形態をとり得る。９５３の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜参考文献２３に開示されるもの）である。特に、９５３のＮ末端リーダーペプチドは、９５３（ＮＬ）を与えるために欠失され得る（すなわち、株ＭＣ５８の残基１〜残基１９の欠失［配列番号５］）。
【００３５】
好ましい９５３配列は、配列番号５に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、９５３改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。９５３の対立遺伝子形態は、参考文献１９の図１９に認められ得る。
【００３６】
他の好ましい９５３配列は、配列番号５由来の少なくともｎ個の連続するアミノ酸を含み、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、９５３由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号５のＣ末端および／またはＮ末端由来の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）のアミノ酸を欠く。
【００３７】
（２８７タンパク質）
血清群Ｂ由来の「２８７」タンパク質は、参考文献１７（配列番号３１０３および配列番号３１０４）に開示され、参考文献１３において「ＮＭＢ２１３２」として開示され、そして参考文献２０において「ＧＮＡ２１３２」として開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＧＩ：７２２７３８８もまた参照のこと）。血清群Ａにおける対応するタンパク質［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３７９０５７を有する。
【００３８】
本発明に従って使用される場合、２８７タンパク質は、種々の形態をとり得る。２８７の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜２３に開示されているトランケーション改変体または欠失改変体）である。特に、２８７のＮ末端は、そのポリ−グリシン配列までおよびポリ−グリシン配列を含めて欠失され得る（すなわち、本明細書中で接頭辞「ΔＧ」の使用によって区別される、ＭＣ５８株についての残基１〜残基２４の欠失［配列番号６］）。この欠失は、発現を増強し得る。
【００３９】
好ましい２８７配列は、配列番号６に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、２８７改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。２８７の対立遺伝子形態は、参考文献１９の図５および図１５に認められ、そして参考文献１７の実施例１３および図２１に認められ得る（配列番号３１７９〜配列番号３１８４）。
【００４０】
他の好ましい２８７配列は、配列番号６由来の少なくともｎ個の連続するアミノ酸を含み、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、２８７由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号６のＣ末端および／またはＮ末端由来の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）のアミノ酸を欠く。
【００４１】
（融合タンパク質）
５種の抗原は、５種の別個のポリペプチドとして組成物中に存在し得るが、これは、少なくとも２つの抗原が、単一のポリペプチド鎖（「ハイブリッド」タンパク質［参考文献２１〜参考文献２４］）であることが好ましい。例えば、その結果、５種の抗原は、５種よりも少ない種類のポリペプチドを形成する。ハイブリッドタンパク質は、２つの主な利点を提供する：第１に、不安定であり得るかまたはそのままではほとんど発現されないかもしれないタンパク質が、この問題を克服する適切なハイブリッドパートナーを付加することによって補助され得る；第２に、２つの別々に有用なタンパク質を産生するためにたった１種の発現および精製を用いることが必要とされるので、商業的製造が単純化される。
【００４２】
本発明の組成物中に含まれるハイブリッドタンパク質は、５種の基本抗原のうちの２種以上（すなわち、２種、３種、４種または５種）を含み得る。５種の基本抗原の２種からなるハイブリッドが好ましい。
【００４３】
５種の基本抗原の組み合わせ内で、ある抗原は、１種より多いハイブリッドタンパク質において存在し得るか、そして／または非ハイブリッドタンパク質として存在し得る。しかし、抗原は、ハイブリッドとして存在するかまたは非ハイブリッドとして存在するかのいずれかが好ましいが、両方として存在することは好ましくない。しかし、ハイブリッド抗原および非ハイブリッド（好ましくは、リポタンパク質）抗原の両方としてタンパク質７４１を含むことは、有用であり得る（特に、１種より多い７４１改変体が使用される場合）。
【００４４】
本発明に使用される２種抗原のハイブリッドは、以下を含む：ＮａｄＡおよび７４１；ＮａｄＡおよび９３６；ＮａｄＡおよび９５３；ＮａｄＡおよび２８７；７４１および９３６；７４１および９５３；７４１および２８７；９３６および９５３；９３６および２８７；９５３および２８７。好ましい２種抗原のハイブリッドは、以下を含む：７４１および９３６；９５３および２８７。参考文献２４のさらなる詳細を参照のこと。
【００４５】
ハイブリッドタンパク質は、式ＮＨ２−Ａ−［−Ｘ−Ｌ−］ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨにより表され得、ここで：Ｘは、５種の基本抗原のうちの１種のアミノ酸配列であり；Ｌは、任意のリンカーアミノ酸配列であり；Ａは、任意のＮ末端アミノ酸配列であり；Ｂは、任意のＣ末端アミノ酸配列であり；そしてｎは、２、３、４または５である。
【００４６】
−Ｘ−部分が、その野生型形態においてリーダーペプチド配列を有する場合、これは、ハイブリッドタンパク質に含まれてもよくまたは削除されてもよい。いくつかの実施形態において、このリーダーペプチドは、ハイブリッドタンパク質のＮ末端に位置する−Ｘ−部分のリーダーペプチドを除いて、欠失される（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは維持されるが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドは、削除される）。このことは、全てのリーダーペプチドを削除し、かつＸ１のリーダーペプチドを部分−Ａ−として使用することと等価である。
【００４７】
［−Ｘ−Ｌ−］の各々のｎの場合について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、存在してもよく、存在しなくてもよい。例えば、ｎ＝２である場合、上記ハイブリッドは、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、代表的に、短い（例えば、２０以下（すなわち、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）のアミノ酸）。例としては、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリ−グリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎを含有する（ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい））およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい））が挙げられる。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーは、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドがＢａｍＨＩ制限酵素部位から形成されていてクローニングおよび操作が容易になるＧＳＧＧＧＧ（配列番号９）であり、そして（Ｇｌｙ）４テトラペプチドは、代表的なポリ−グリシンリンカーである。Ｘｎ＋１が、ΔＧタンパク質であり、かつＬｎがグリシンリンカーである場合、これは、Ｘｎ＋１が、ΔＧタンパク質ではなく、かつＬｎが存在しないことと等価であり得る。
【００４８】
−Ａ−は、任意のＮ末端アミノ酸配列である。−Ａ−は、代表的に、短い（例えば、４０以下（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）のアミノ酸）。例としては、タンパク質輸送をもたらすリーダー配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい））が挙げられる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。Ｘ１が、それ自体のＮ末端メチオニンを欠く場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニンを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８アミノ酸を有する）である。
【００４９】
−Ｂ−は、任意のＣ末端アミノ酸配列である。−Ｂ−は、代表的に、短い（例えば、４０以下（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）のアミノ酸）。例としては、タンパク質輸送をもたらす配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい）を含む）またはタンパク質安定性を増強する配列が挙げられる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。
【００５０】
最も好ましくは、ｎは、２である。この型の２つの好ましいタンパク質は、以下である：Ｘ１は、９３６であり、そしてＸ２は、７４１であり；Ｘ１は、２８７であり、そしてＸ２は、９５３である。
【００５１】
２種の特に好ましい本発明のハイブリッドタンパク質は、以下のとおりである：
【００５２】
【表１】
これらの２種のタンパク質は、（特に、配列番号２を有する）ＮａｄＡと組み合わせて使用され得る［２４］。
【００５３】
ＯＭＶおよび／またはリポオリゴ糖を含まない混合物が、好ましい。
【００５４】
（外膜小胞）
精製したポリペプチド抗原を使用に代わる手段として、本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの微小小胞［３０］、「ネイティブなＯＭＶ」［３１］、ブレブまたは外膜小胞［例えば、参考文献３２〜３７など］の調製物を利用し得る。これらの種々の調製物の全ては、本明細書中で、一般的な用語「ＯＭＶ」といわれる。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ＯＭＶは、遺伝子操作された細菌から調製され［３８〜４１］、例えば、免疫原性の増加（例えば、超発現免疫原（ｈｙｐｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ））、毒性の減少、莢膜多糖類合成の阻害、ＰｏｒＡ発現の下方制御または排除、ｌｇｔＢ発現［４２］の下方制御または排除などを行う。これらは、超ブレブ形成株から調製され得る［４３−４６］。非病原性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ由来の小胞が、含まれ得る［４７］。ＯＭＶは、洗浄剤を使用せずに調製され得る［４８、４９］。これらは、非Ｎｅｉｓｓｅｒｉａタンパク質をその表面上に発現し得る［５０］。これらは、ＬＰＳが枯渇し得る。これらは、重要な抗原としてリポオリゴ糖を保持し得る［４２、５１］。これらは、組換え抗原と混合され得る［３２、５２］。これらは、リポオリゴ糖免疫型の相可変性（ｐｈａｓｅ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ）を減少させるために処理され得る［５３］。ＯＭＶの混合物が、使用され得［３０］、これは、異なる血清型および／または血清型の亜群からの混合物を含み得る［３０、５４］。
【００５６】
異なるクラスＩ外膜タンパク質の血清型（例えば、それぞれ３つの血清型を提示する２つの異なる遺伝子操作された小胞集団を用いる６つの異なる血清型［５５、５６］、またはそれぞれ３種の血清型を提示する３つの異なる遺伝子操作された小胞集団を用いる９つの異なる血清型など）を有する細菌由来の小胞が、使用され得る。有用な血清型としては、以下が挙げられる：Ｐ１．７，１６；Ｐ１．５−１，２−２；Ｐ１．１９，１５−１；Ｐ１．５−２，１０；Ｐ１．１２−１，１３；Ｐ１．７−２，４；Ｐ１．２２，１４；Ｐ１．７−１，１；Ｐ１．１８−１，３，６。
【００５７】
（免疫化の結果）
免疫化の結果は、被験体中の抗体の産生であり、この抗体は、（ａ）この免疫原性ポリペプチドを認識し、そして（ｂ）複数の髄膜炎菌の血清型による感染に対する防御を行う。免疫化の代表的な結果は、少なくとも血清群Ｙの髄膜炎菌に対して殺菌性であり、そしてより代表的には血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの各々に対して殺菌性である抗体応答の形成である。
【００５８】
好ましい結果は、以下に対して有効な免疫化である：（ａ）血清群Ｙおよび血清群Ａ；（ｂ）血清群Ｙおよび血清群Ｂ；（ｃ）血清群Ｙおよび血清群Ｃ；（ｄ）血清群Ｙおよび血清群Ｗ１３５；など。少なくとも血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび血清群Ｙに対する免疫化が好ましい。防御はまた、他の（非病原性）血清群（例えば、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｘ、Ｚ、２９Ｅなど）に対して提供され得る。防御は、他のＮｅｉｓｓｅｒｉａ種（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｃｉｎｅｒｅａなど）に対して提供され得る。
【００５９】
免疫化の後、血清は、好ましくは、少なくとも１０２４（例えば、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８またはそれより高い、好ましくは、少なくとも２１４）の殺菌性力価を有する。すなわち、この血清は、参考文献２０に記載されるように、１／１０２４に希釈される場合、特定の株の試験細菌の少なくとも５０％を殺傷可能である。
【００６０】
（血清群および株）
本発明の方法および使用は、血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するためであり、そしてまた少なくとも血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび血清群Ｗ１３５のうちの１つに対して被験体を免疫するためである。
【００６１】
本発明の好ましいタンパク質は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｂにおいて見出されるアミノ酸配列を含む。血清群Ｂにおいて、好ましい株は、２９９６、ＭＣ５８、９５Ｎ４７７、および３９４／９８である。３９４／９８株は、時に、本明細書中で「ＮＺ」といわれ、この株は、ニュージーランド株である。
【００６２】
タンパク質２８７は、好ましくは、２９９６株由来であり、より好ましくは、３９４／９８株由来である。
【００６３】
タンパク質７４１は、好ましくは、血清群ＢのＭＣ５８株、２９９６株、３９４／９８株、または９５Ｎ４７７株に由来するか、または血清群Ｃの９０／１８３１１株に由来する。ＭＣ５８株が、より好ましい。
【００６４】
タンパク質９３６、タンパク質９５３およびＮａｄＡは、好ましくは、２９９６株由来である。
【００６５】
株は、下付き文字として示され得る（例えば、７４１ＭＣ５８は、ＭＣ５８株由来のタンパク質７４１である）。他に示されない限り、本明細書中に記載されるタンパク質（例えば、下付き文字を含まない）は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの２９９６株由来であり、この株は、「基準」株として理解され得る。しかし、本発明は、一般的に、株に制限されないことが理解される。上記されるように、タンパク質についての一般的な参照（例えば、「２８７」、「９１９」など）は、任意の株由来のタンパク質を含むことが理解され得る。これは、代表的に、２９９６に対して９０％以上（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上）の配列同一性を有する。
【００６６】
組成物は、特定のタンパク質抗原（例えば、７４１または２８７）を含有する場合、この組成物は、１種より多い改変体の形態で（例えば、同じタンパク質であるが、１種より多い株由来である）、その抗原を含有し得る。これらのタンパク質は、縦列タンパク質または別個のタンパク質として含まれ得る。
【００６７】
ハイブリッドタンパク質が使用される場合、ハイブリッド（すなわち、個々の−Ｘ−部分）内の個々の抗原は、１種以上の株に由来し得る。ｎ＝２である場合、例えば、Ｘ２は、Ｘ１と同じ株に由来し得るか、または異なる株に由来し得る。ｎ＝３である場合、これらの株は、以下：
【００６８】
【化１】
などであり得る。
【００６９】
（超毒性系統および殺菌性抗体応答）
一般的に、本発明の組成物は、被験体に投与された後、血清殺菌性抗体応答を誘導し得る。これらの応答は、これらの抗体応答は、マウスにおいて簡便に測定され、そしてワクチン効力の標準的な指標である［例えば、参考文献２０の巻末の注１４を参照のこと］。血清殺菌活性（ＳＢＡ）は、補体によって媒介される細菌殺傷を測定し、そしてヒトまたはウサギ乳仔の補体を用いてアッセイされ得る。ＷＨＯ基準は、ワクチンが、レシピエントの９０％より多くにおいて、少なくとも４倍のＳＢＡ上昇を誘導することを要求している。
【００７０】
狭い防御を提供するよりもむしろ、本発明の組成物は、１種より多い髄膜炎菌の血清群に対する殺菌性抗体応答を誘導し得る。血清群において、組成物は、１種より多い超毒性系統に対する抗体応答を誘導し得る。特に、この組成物は、以下の３種の超毒性系統のうちの２種または３種に対する殺菌性応答を誘導し得る：（ｉ）クラスターＡ４；（ｉｉ）ＥＴ５複合体；および（ｉｉｉ）系統３。この組成物は、さらに、超毒性系統の亜群Ｉ、亜群ＩＩＩ、亜群ＩＶ−１またはＥＴ−３７複合体のうちの１種以上、および他の系統（例えば、超侵襲性系統）に対する殺菌性抗体応答を誘導し得る。しかし、組成物は、特定の超毒性系統の各株およびあらゆる株に対する殺菌性抗体を誘導することを必要としない。
【００７１】
好ましい組成物は、以下に対する殺菌性応答を誘導し得る：（ａ）血清群Ｙの髄膜炎菌の８６０８００株、ＥＳ１３８２２株、ＥＳ１５０８５株および／またはＥＳ１４４８７株；（ｂ）血清群Ａの髄膜炎菌のＦ６１２４株；（ｃ）血清群Ｗ１３５の髄膜炎菌のＬＰＮ１７５９２株；（ｄ）血清群Ｃの髄膜炎菌のＣ１１株；（ｅ）血清群Ｂの髄膜炎菌の（ｉ）クラスターＡ４由来の９６１−５９４５株（Ｂ：２ｂ：Ｐ１．２１，１６）および／またはＧ２１３６株（Ｂ：−）；（ｉｉ）ＥＴ−５複合体由来のＭＣ５８株（Ｂ：１５：Ｐ１．７，１６ｂ）および／または４４／７６株（Ｂ：１５：Ｐ１．７，１６）；（ｉｉｉ）系統３由来の３９４／９８株（Ｂ：４：Ｐ１．４）および／またはＢＺ１９８株（Ｂ：ＮＴ：−）。
【００７２】
血清群Ｙの８６０８００株は、参考文献１の２９行目、および参考文献５７に認められる。血清群ＡのＦ６１２４株は、参考文献２０、参考文献５７および参考文献５８に認められる。血清群ＣのＣ１１株は、参考文献５９に開示される基準株のうちの１つである。血清群Ｂの９６１−５９４５株およびＧ２１３６株は、両方ともＮｅｉｓｓｅｒｉａ ＭＬＳＴ基準株である［参考文献６０におけるｉｄｓ ６３８および１００２］。ＭＣ５８株は、広範に利用可能であり（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−３３５）、そして参考文献１３において配列決定された株であった。４４／７６株は、広範に使用され、そして特徴付けられており（例えば、参考文献６１）、そしてＮｅｉｓｓｅｒｉａ ＭＬＳＴ基準株の１つである［参考文献６０におけるｉｄ ２３７；参考文献１における表２の３２行目］。３９４／９８株は、元々、ニュージーランドにおいて１９９８年に単離され、そしてこの株を用いたいくつかの公開された研究が存在している（例えば、参考文献６２および６３）。ＢＺ１９８株は、別のＭＬＳＴ基準株である［参考文献６０におけるｉｄ ４０９；参考文献１における表２の４１行目］。
【００７３】
（免疫原性組成物および医薬）
本発明の組成物は、免疫原性であり、そしてより好ましくはワクチン組成物である。本発明のワクチンは、予防的（すなわち、感染を防ぐため）または治療的（すなわち、感染を処置するため）のいずれかであり得るが、代表的には予防的である。
【００７４】
上記組成物のｐＨは、好ましくは６と８との間であり、好ましくは約７である。適切なｐＨは、緩衝剤の使用によって維持され得る。組成物が水酸化アルミニウム塩を含有する場合、ヒスチジン緩衝剤を使用することが好ましい［６４］。この組成物は、無菌であり得るか、そして／または発熱物質を含まないかもしれない。本発明の組成物は、ヒトに対して等張であり得る。
【００７５】
組成物は、バイアル中に存在してもよく、またはこれらは充填済み（ｒｅａｄｙ−ｆｉｌｌｅｄ）注射器中に存在してもよい。この注射器は針を備えて供給されても、針なしで供給されても良い。注射器は、単回用量のこの組成物を含み、一方、バイアルは、単回用量または複数回用量を含み得る。注射可能な組成物は、通常、液体溶液または液体懸濁物である。代替的に、これらは、注射前に水性ビヒクル中に溶解するか、または懸濁するための固形物形態（例えば、凍結乾燥された）で存在し得る。
【００７６】
本発明の組成物は、単位用量形態または複数用量形態でパッケージングされ得る。複数用量形態については、バイアルが、充填済み注射器よりも好ましい。有効投薬容量は、慣用的に確立され得るが、注射用組成物の代表的なヒト用量は、０．５ｍｌの容量を有する。
【００７７】
本発明の組成物が、使用前に即座の調製のために用いられるべき場合（例えば、成分が凍結乾燥形態である場合）、本発明は、キットを提供し、このキットは、２つのバイアルを備えてもよく、またはこのキットは、１つの充填済み注射器および１つのバイアルを備えてもよく、この注射器の内容物は、注射前にこのバイアルの内容物を再活性化するために用いられる。
【００７８】
本発明の免疫化は、哺乳動物（好ましくは、ヒト）におけるものである。このワクチンが、予防的用途のためのものである場合、ヒトは好ましくは小児（例えば、よちよち歩きの幼児または乳児）である；このワクチンが治療用途のためのものである場合、ヒトは好ましくは成人である。小児が意図されるワクチンはまた、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために、成人にも投与され得る。
【００７９】
これらの使用および方法は、好ましくは以下によって引き起こされる疾患の予防および／または処置のために好ましい：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（例えば、髄膜炎、敗血症（ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、菌血症、淋病など）。細菌性および／または髄膜炎菌性の髄膜炎の予防および／または処置が好ましい。
【００８０】
治療処置の効力をチェックする１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＮｅｉｓｓｅｒｉａの感染をモニタリングすることを含む。予防的処置の効力をチェックする１つの方法は、この組成物の投与後に５つの基本抗原に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。本発明の組成物の免疫原性は、この組成物を、試験被験体（例えば、１２ヶ月齢〜１６ヶ月齢の小児、または動物モデル［６５］）に投与し、次いでＩｇＧ全体および高アビディティＩｇＧの血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含む標準的なパラメータを決定することにより、決定され得る。これらの免疫応答は、一般的に、この組成物の投与後約４週間で決定され、そして、この組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡ増加が好ましい。１用量より多くのこの組成物が投与される場合、１回より多くの投与後決定が行われ得る。
【００８１】
本発明の好ましい組成物は、患者において、容認可能な百分率のヒト被験体に対して各々の抗原成分についての血清防御基準より優れた抗体力価を与え得る。宿主がその力価より上ではその抗原に対してセロコンバージョンされると考えられる関連する抗体力価を有する抗原は周知であり、そしてこのような力価は、ＷＨＯのような機関により公開されている。好ましくは、被験体の統計学的に有意なサンプルのうちの８０％より多く、より好ましくは９０％より多く、さらにより好ましくは９３％より多く、そして最も好ましくは９６〜１００％が、セロコンバージョンされる。
【００８２】
本発明の組成物は一般に、患者に直接的に投与される。直接的な送達は、非経口注射（例えば、皮下に、腹腔内に、静脈内に、筋肉内に、または組織の間隙空間への）、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻腔内投与、眼内投与、耳投与、肺投与もしくは他の粘膜投与によって達成され得る。大腿または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針（例えば、皮下針）を介し得るが、針なしでの注射が、代替的に使用され得る。代表的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。
【００８３】
本発明は、全身免疫および／または粘膜免疫を惹起するために用いられ得る。
【００８４】
投薬処置は、単回用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであり得る。複数回用量は、初回免疫スケジュールおよび／または追加免疫スケジュールにおいて用いられ得る。初回投与スケジュールには、追加免疫投与スケジュールが続き得る。初回免疫投与の間（例えば、４〜１６週間の間）および初回免疫投与と追加免疫投与との間の適切なタイミングは、慣用的に決定され得る。
【００８５】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染は、身体の種々の領域に罹患し得、それゆえ、本発明の組成物は、種々の形態で調製され得る。例えば、この組成物は、液体溶液または懸濁物のいずれかとしての、注射可能物として調製され得る。注射前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁するのに適した固形物形態もまた、調製され得る（例えば、凍結乾燥組成物）。この組成物は、例えば、軟膏、クリームまたは粉末として局所投与のために調製され得る。この組成物は、例えば、錠剤もしくはカプセル、またはシロップ（必要に応じて香り付けされた）として経口投与のために調製され得る。この組成物は、微細粉末またはスプレーを用いて（例えば、吸入器として）肺投与のために調製され得る。この組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。この組成物は、例えば、スプレー、点滴剤、ゲルまたは散剤として、鼻腔投与、耳投与または眼投与のために調製され得る［例えば、参考文献６６および６７］。肺炎球菌糖［６８、６９］、肺炎球菌ポリペプチド［７０］、Ｈｉｂ糖［７１］、ＭｅｎＣ糖［７２］、およびＨｉｂ糖結合体およびＭｅｎＣ糖結合体の混合物［７３］の鼻投与に関する成功が報告されている。
【００８６】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原、ならびに必要に応じて、任意の他の成分を含有する。「免疫学的有効量」により、単回用量においてかまたはある一連のものの一部としてのいずれかでの、個体に対するその量の投与が、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置されるべき個体の健康状態および身体状態、年齢、処置されるべき個体の分類学群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、その個体の免疫系の抗体合成能力、所望される防御の程度、そのワクチンの処方、処置医によるその医学的状態の評価および他の関連因子に依存して変化する。この量が、慣習的な試験を通して決定され得る比較的広範な範囲にわたり、１用量あたりの個々の髄膜炎菌糖抗原の一般的な量は、（糖の質量として示して）１μｇ〜２０μｇの間（例えば、約１μｇ、約２．５μｇ、約４μｇ、約５μｇまたは約１０μｇ）であることが予想される。
【００８７】
（組成物のさらなる非抗原成分）
本発明の組成物は、上述の成分に加えて、代表的に、１以上の「薬学的に受容可能なキャリア」を含有し、このようなキャリアとしては、それ自体ではその組成物を受容する個体に有害な抗体の産生を誘導しない、任意のキャリアが挙げられる。適切なキャリアは、代表的に、大きく、ゆっくりと代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、スクロース［７４］、トレハロース［７５］、ラクトース、および脂質凝集物（例えば、油小滴またはリポソーム）である。このようなキャリアは、当業者に周知である。上記ワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、グリセロールなど）を含有し得る。さらに、補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質など）が存在し得る。無菌で発熱物質を含まず、リン酸緩衝化された生理食塩水は、代表的なキャリアである。薬学的に受容可能な賦形剤の徹底的な考察は、参考文献７６において入手可能である。
【００８８】
本発明の組成物は、特に、複数用量様式でパッケージングされる場合、抗菌剤を含有し得る。
【００８９】
本発明の組成物は、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート）（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０））を含有し得る。洗浄剤は、一般に、低いレベル（例えば、０．０１％未満）で存在する。
【００９０】
本発明の組成物は、ナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含有して張度を与え得る。１０±２ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌの濃度が、代表的である。
【００９１】
本発明の組成物は、一般的に、緩衝剤を含有する。リン酸緩衝剤が、代表的である。
【００９２】
本発明の組成物は、特にそれらが凍結乾燥される場合か、またはそれらが凍結乾燥された材料から再構成された材料を含む場合に、糖アルコール（例えば、マンニトール）または二糖類（例えば、ショ糖またはトレハロース）を、例えば、約１５ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ（例えば、２５ｍｇ／ｍｌ）で含有し得る。凍結乾燥のための組成物のｐＨは、凍結乾燥の前に、約６．１に調整され得る。
【００９３】
本発明のワクチンは、他の免疫調節剤とともに投与され得る。特に、組成物は通常、アジュバントを含む。本発明の組成物において使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：
（Ａ．無機質含有組成物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な無機質含有組成物としては、無機塩（例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩）が挙げられる。本発明は、無機塩（例えば、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩など）［例えば、参考文献７７の第８章および第９章を参照のこと］、または異なる無機化合物の混合物を含み、この化合物は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとり、そして、吸着が好ましい。この無機質含有組成物はまた、無機塩の粒子として処方され得る［７８］。
【００９４】
アルミニウムリン酸塩は、特に、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ糖抗原を含有する組成物において好ましく、そして代表的なアジュバントは、０．８４と０．９２の間のＰＯ４／Ａｌのモル比で、かつ０．６ｍｇ Ａｌ３＋／ｍｌで含有される非晶質のアルミニウムヒドロキシリン酸塩である。アルミニウムリン酸塩の低用量での吸着が使用され得る（例えば、一用量当たりの一結合体当たり、５０μｇと１００μｇの間のＡｌ３＋）。組成物において一より多くの結合体がある場合、全ての結合体が、吸着に必要とは限らない。
【００９５】
（Ｂ．油エマルジョン）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な油エマルジョン組成物としては、スクアレン−水エマルジョン（例えば、ＭＦ５９）が挙げられる［参考文献７７の第１０章；参考文献７９もまた参照のこと。］（５％スクアレン、０．５％ Ｔｗｅｅｎ ８０および０．５％ Ｓｐａｎ ８５、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を用いて、サブミクロン粒子に処方される）。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、使用され得る。
【００９６】
（Ｃ．サポニン処方物［参考文献７７の第２２章］）
サポニン処方物はまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根および花においてさえ見られる、不均一な群のステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドである。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ（モリナの木（Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅ））の樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウ（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から市販され得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製された処方物（例えば、ＱＳ２１）および液体処方物（例えば、ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販される。
【００９７】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されている。これらの技術を用いる特定の精製フラクションが同定されており、これらのフラクションとしては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、このサポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、参考文献８０に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（例えば、コレステロール）を含有し得る［８１］。
【００９８】
サポニンとコレステロールとの組み合わせが使用されて、免疫刺激複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特な粒子を形成し得る［参考文献７７の第２３章］。ＩＳＣＯＭとしてはまた、代表的に、リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリン）が挙げられる。任意の公知のサポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、このＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献８１〜８３にさらに記載されている。必要に応じて、このＩＳＣＯＭは、さらなる洗剤を含まなくてもよい［８４］。
【００９９】
サポニンベースのアジュバントの開発の概説は、参考文献８５および８６に見られ得る。
【０１００】
（Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造体は、一般的に、必要に応じてリン脂質と組み合わされるかまたはリン脂質とともに処方されたウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。それらは、一般的に、非病原性で非複製性であり、そして一般的に、あらゆる天然ウイルスゲノムを含まない。このウイルスタンパク質は、組換え的に生成されてもよく、またはウイルス全体から単離されてもよい。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用のために適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（例えば、コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビスウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒトパピローマウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡファージ由来のタンパク質、Ｑβファージ由来のタンパク質（例えば、コートタンパク質）、ＧＡファージ由来のタンパク質、ｆｒファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質およびＴｙ由来のタンパク質（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献８７〜９２においてさらに考察されている。ビロソームは、例えば、参考文献９３においてさらに考察されている。
【０１０１】
（Ｅ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、細菌誘導体または微生物誘導体（例えば、腸内細菌リポポリサッカリド（ＬＰＳ）の無毒性誘導体、リピドＡ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドならびにＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒性誘導体）が挙げられる。
【０１０２】
ＬＰＳの無毒性誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、３ 脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡと、４、５または６アシル化鎖との混合物である。３ 脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい「小さい粒子」形態は、参考文献９４に開示されている。３ｄＭＰＬのこのような「小さい粒子」は、０．２２μｍメンブレンを通って滅菌濾過されるために充分小さい［９４］。他の無毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ模倣物（例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９））が挙げられる［９５，９６］。
【０１０３】
リピドＡ誘導体としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来のリピドＡ誘導体（例えば、ＯＭ−１７４）が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献９７および９８に記載されている。
【０１０４】
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（グアノシンへのホスフェート結合により連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）を含むヌクレオチド配列が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む、二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。
【０１０５】
ＣｐＧは、ヌクレオチド改変体／アナログ（例えば、ホスホロチオエート改変体）を含み得、そして、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献９９、１００および１０１は、可能なアナログ置換（例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置換）を開示している。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１０２〜１０７において、さらに考察されている。
【０１０６】
このＣｐＧ配列（例えば、ＧＴＣＧＴＴモチーフまたはＴＴＣＧＴＴモチーフ）は、ＴＬＲ９に導かれ得る［１０８］。このＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ）は、Ｔｈ１免疫応答誘導に特異的であってもよく、または、このＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞応答誘導に、より特異的であってもよい。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１０９〜１１１において考察されている。好ましくは、このＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１０７】
好ましくは、このＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端がレセプター認識のために接近可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列がそれらの３’末端で結合されて、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成し得る。例えば、参考文献１０８および１１２〜１１４を参照のこと。
【０１０８】
細菌ＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒化誘導体は、本発明においてアジュバントとして使用され得る。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ由来（「ＣＴ」）または百日咳由来（「ＰＴ」）である。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１５に記載されており、そして、非経口的アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１６に記載されている。このトキシンまたはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロトキシンの形態である。好ましくは、このＡサブユニットは、無毒化変異を含み；好ましくは、このＢサブユニットは、変異していない。好ましくは、このアジュバントは、無毒化ＬＴ変異体（例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴ−Ｇ１９２）である。ＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒化誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用は、参考文献１１７〜１２４において見出され得る。アミノ酸置換についての多くの参考文献は、好ましくは、参考文献１２５に記載のＡＤＰ−リボシル化トキシンのＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。参考文献１２５は、特に、本明細書中で、その全体が参考として援用される。
【０１０９】
（Ｆ．ヒト免疫調節因子）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なヒト免疫刺激因子としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１２６］など）［１２７］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子）が挙げられる。
【０１１０】
（Ｇ．生体接着因子および粘膜接着因子）
生体接着因子および粘膜接着因子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。適切な生体接着因子としては、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア［１２８］または粘膜接着因子（例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体）が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る［１２９］。
【０１１１】
（Ｈ．微粒子）
微粒子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。生分解性かつ無毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）と、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とから形成される微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして、最も好ましくは、直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、必要に応じて処理されて、（例えば、ＳＤＳによって）負に荷電した表面または（例えば、カチオン性洗剤（例えば、ＣＴＡＢ）によって）正に荷電した表面を有する。
【０１１２】
（Ｉ．リポソーム（参考文献７７の第１３章および第１４章））
アジュバントとしての使用のために適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１３０〜１３２に記載されている。
【０１１３】
（Ｊ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる［１３３］。このような処方物は、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１３４］、ならびに少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤またはポリオキシエチレンアルキルエステル界面活性剤［１３５］をさらに含む。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群より選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１１４】
（Ｋ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、参考文献１３６および１３７において記載されている。
【０１１５】
（Ｌ．ムラミルペプチド）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【０１１６】
（Ｍ．イミダゾキノロン化合物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なイミダゾキノロン化合物の例としては、参考文献１３８および１３９にさらに記載される、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびそのホモログ（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）が挙げられる。
【０１１７】
本発明はまた、上に同定されるアジュバントの１つ以上の局面の組み合わせを含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において使用され得る：（１）サポニンおよび水中油型エマルジョン［１４０］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［１４１］：（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、＋ステロール）［１４２］；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組み合わせ［１４３］；（６）マイクロフルイダイズされてサブミクロンエマルジョンにされるか、またはボルテックスされてより大きい粒子サイズのエマルジョンを生じるかのいずれかの、１０％ スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０ＴＭ、５％ プルロニックブロック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋ）ポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ；（７）２％ スクアレン、０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁成分を含むＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））；ならびに（８）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの無毒性誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）。
【０１１８】
免疫刺激因子として作用する他の物質は、参考文献７７の第７章に開示されている。
【０１１９】
水酸化アルミニウムアジュバントの使用またはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が、特に好ましく、そして抗原は、概して、これらの塩に吸着される。この組成物がＨｉｂ抗原を含有する場合、水酸化アルミニウムは、好ましくは、アジュバントとして回避される。アジュバントにリン酸アルミニウムが使用され、かつ抗原がアジュバントに吸着しないことが望まれる場合、これは、溶液中に遊離型のリン酸イオンを含むことにより（例えば、リン酸緩衝液の使用により）好まれる。吸着の防止はまた、抗原／アジュバントを混合する間、正しいｐＨを選択すること、適切な電荷ゼロの点を有するアジュバントを選択すること、および組成物中の異なる抗原に対して適切な混合順序を選択することによって、成し遂げられ得る［１４４］。
【０１２０】
リン酸カルシウムは、別の好ましいアジュバントである。
【０１２１】
（さらなる抗原）
本発明の組成物は、５つの基本髄膜炎菌性タンパク質抗原を含有する。これらの組成物はまた、５つの基本抗原以外の髄膜炎菌性タンパク質抗原は含有し得ないにもかかわらず、さらなる抗原を含有し得る。封入用のさらなる抗原は、例えば、以下のものであり得る：
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ由来の糖抗原；
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｗ１３５ならびに／またはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｙ由来の糖抗原（参考文献５に開示される血清群Ｃ由来のオリゴ糖または参考文献８のオリゴ糖）（以下を参照のこと）；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の糖抗原［例えば、１８０、１８１ １８２］；
−Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、不活性化ウイルス）［例えば、１４５、１４６］；
−Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、表面抗原および／またはコア抗原）［例えば、１４６、１４７］；
−ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）［例えば、参考文献１４８の第３章］（例えば、ＣＲＭ１９７変異体［例えば、１４９］）；
−破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド［例えば、参考文献１４８の第４章］）；
−必要に応じて、またパータクチン（ｐｅｒｔａｃｔｉｎ）および／または凝集原２および凝集原３との組合わせで、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原（例えば、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の百日咳ハロ毒素（ＰＴ）および線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ））［例えば、参考文献１５０および１５１］。細胞性百日咳抗原が使用され得る；
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来の外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（例えば、参考文献３４、参考文献３５、参考文献３７、参考文献１５２などに開示される調製物）；
−ポリオ抗原［例えば、１５３、１５４」（例えば、ＯＰＶまたは、好ましくはＩＰＶ）。
【０１２２】
この組成物は、一以上のこれらさらなる抗原を含有し得る。抗原は、各々代表的に、少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。概して、任意の所定の抗原の濃度は、この抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分である。実際の免疫原性（例えば、ＥＬＩＳＡ力価）は減少され得るが、個々の糖抗原の防御効果は、これらを結合することによって除去されないことが好ましい。
【０１２３】
ジフテリア抗原がこの組成物に含有される場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含有することもまた、好ましい。同様に、破傷風抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含有することもまた、好ましい。同様に、百日咳抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含有することもまた、好ましい。このようなＤＴＰ組合わせは、凍結乾燥された結合体の再構成に使用され得る。
【０１２４】
糖抗原または炭水化物抗原が使用される場合、この抗原は、好ましくは、免疫原性を増強するためにキャリアタンパク質に結合体化される（以下を参照のこと）。
【０１２５】
有毒性タンパク質抗原は、必要に応じて、解毒され得る（例えば、化学的手法および／または遺伝子的手法による百日咳毒素の解毒［１５１］）。
【０１２６】
本発明の組成物において、タンパク質抗原を使用することの代替手段として、この抗原をコードする核酸が使用され得る［例えば、参考文献１５５〜１６３］。したがって、本発明の組成物のタンパク質成分は、このタンパク質をコードする核酸（好ましくは、ＤＮＡ、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ）によって置き換えられ得る。同様に、本発明の組成物は、糖抗原を模倣するタンパク質（例えば、ミモトープ（ｍｉｍｏｔｏｐｅ）［１６４］または抗イディオタイプ抗体）を含有し得る。これらは、個々の糖成分に置き換えられ得るか、または個々の糖成分を追加し得る。例として、ワクチンは、糖自身の代わりに、ＭｅｎＣ［１６５］莢膜多糖のペプチド模倣物、またはＭｅｎＡ［１６６］莢膜多糖のペプチド模倣物を含み得る。
【０１２７】
特に好ましい本発明の組成物は、以下のいずれかまたは両方を含有する：（ａ）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型由来の糖抗原；および／または（ｂ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原。これらはまた、所定の血清群に由来する糖が、この血清群に対する防御を提供するためのものではないポリペプチドおよび／またはＯＭＶ中にのみ包含され得るときを除いて、髄膜炎菌血清群Ｙ、髄膜炎菌血清群Ｗ１３５、髄膜炎菌血清群Ｃ、および髄膜炎菌血清群Ａ由来の糖抗原を含有する。
【０１２８】
（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型）
この組成物が、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型抗原を含有する場合、それは、代表的に、Ｈｉｂ莢膜糖抗原である。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ由来の糖抗原は周知である。
【０１２９】
有利なことに、Ｈｉｂ糖は、この免疫原性を増強するため、とりわけ子供において、キャリアタンパク質に共有結合される。概して、多糖結合体の調製、および特にＨｉｂ莢膜多糖の調製は、よく記録される［例えば、参考文献１６７〜１７５など］。本発明は、任意の適切なＨｉｂ結合体を使用し得る。適切なキャリアタンパク質は、以下に記載され、Ｈｉｂ糖に対する好ましいキャリアはＣＲＭ１９７（「ＨｂＯＣ」）、破傷風トキソイド（「ＰＲＰ−Ｔ」）およびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜複合体（「ＰＲＰ−ＯＭＰ」）である。
【０１３０】
この結合体の糖部分は多糖であり得る（例えば、全長ポリリボシルリビトールホスフェート（ＰＲＰ））が、しかしオリゴ糖（例えば、分子量約１〜約５ｋＤａ）を形成するために多糖を加水分解することが好ましい。
【０１３１】
好ましい結合体は、アジピン酸リンカーを介してＣＲＭ１９７に共役結合したＨｉｂオリゴ糖を含む［１７６、１７７］。破傷風トキソイドはまた、好ましいキャリアである。
【０１３２】
Ｈｉｂ抗原の投与は、好ましくは≧０．１５μｇ／ｍｌ、およびより好ましくは≧１μｇ／ｍｌの濃度の抗ＰＲＰ抗体を生じる。
【０１３３】
本発明の組成物は、一より多くのＨｉｂ抗原を含み得る。
【０１３４】
組成物が、Ｈｉｂ糖抗原を含有する場合、この組成物は水酸化アルミニウムアジュバントも含有しないことが好ましい。この組成物が、リン酸アルミニウムアジュバントを含有する場合、Ｈｉｂ抗原はアジュバントに吸着されても［１７８］、吸着されなくてもよい［１７９］。
【０１３５】
Ｈｉｂ抗原は、（例えば、髄膜炎菌性抗原とともに）凍結乾燥され得る。
【０１３６】
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）
この組成物が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原を含有する場合、これは、代表的に、好ましくは、キャリアタンパク質に結合体化される莢膜糖抗原である［例えば、参考文献１８０〜１８２］。一より多くのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの血清型由来の糖を含有することが好ましい。例えば、２３の異なる血清型由来の多糖の混合物が、５と１１との間の異なる血清型由来の多糖との結合体化ワクチンとして広く使用される［１８３］。例えば、ＰｒｅｖＮａｒＴＭ［１８４］は、各糖が還元的アミノ化によりＣＲＭ１９７に個々に結合される状態で、各糖が０．５ｍｌの用量当たり２μｇ（４μｇの血清型６Ｂ）で、かつ、結合体がリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される状態で、７つの血清型（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ）由来の抗原を含む。本発明の組成物は、好ましくは、少なくとも血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆを含有する。結合体は、リン酸アルミニウム上に吸着され得る。
【０１３７】
肺炎球菌由来の糖抗原を使用することの代替手段として、この組成物は、一以上のポリペプチド抗原を含有し得る。肺炎球菌のいくつかの株のゲノム配列は入手可能であり［１８５、１８６］、ワクチン学を覆す対象となり［１８７〜１９０］、適切なポリペプチド抗原を同定し得る［１９１、１９２］。例えば、この組成物は、以下の抗原のうち一以上を含有し得る：参考文献１９３で規定される、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＥ、ＳｐｓＡ、ＬｙｔＢ、ＬｙｔＣ、ＬｙｔＡ、Ｓｐ１２５、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１３０およびＳｐ１３０。この組成物は、一より多く（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４）のこれら抗原を含み得る。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、この組成物は、肺炎球菌由来の糖抗原およびポリペプチド抗原の両方を含有し得る。これらは、単純な混合で使用され得るか、または肺炎球菌の糖抗原は、肺炎球菌のタンパク質に結合体化され得る。このような実施形態にとって適切なキャリアタンパク質としては、前の段落において列挙される抗原が挙げられる［１９３］。
【０１３９】
肺炎球菌抗原は（例えば、髄膜炎菌抗原および／またはＨｉｂ抗原とともに）凍結乾燥され得る。
【０１４０】
（髄膜炎菌血清群Ｙ、髄膜炎菌血清群Ｗ１３５、髄膜炎菌血清群Ｃおよび髄膜炎菌血清群Ａ）
上記のように、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する多糖ワクチンが、長年知られてきた。これらのワクチン（ＭＥＮＣＥＶＡＸ ＡＣＷＹＴＭおよびＭＥＮＯＭＵＮＥＴＭ）は、生物の莢膜多糖ベースであり、青年および成人において有効であるにもかかわらず、それらは、乏しい免疫応答および防御の短い継続時間を生じ、そして乳児において使用され得ない。
【０１４１】
これらのワクチンにおける結合体化されていない多糖抗原とは対照的に、最近認可された血清群Ｃワクチン（ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ［４］、ＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭおよびＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭ）は結合体化された糖を含有する。ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭおよびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭは、ＣＲＭ１９７キャリアに結合体化されたオリゴ糖抗原を有し、一方で、ＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭは、破傷風トキソイドキャリアに結合体化された完全な多糖（脱Ｏ−アセチル化多糖）を使用する。
【０１４２】
本発明の組成物は、好ましくは、一以上の髄膜炎菌血清群Ｙ、髄膜炎菌血清群Ｗ１３５、髄膜炎菌血清群Ｃおよび髄膜炎菌血清群Ａ由来の莢膜糖抗原を含有し、ここでこの抗原はキャリアタンパク質に結合体化され、そして必要に応じて、オリゴ糖である。Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ莢膜多糖およびそれらの結合体は、参考文献７および８に記載のように調製され得る。
【０１４３】
一用量当たりの各髄膜炎菌性糖抗原の代表的な量は、１μｇと２０μｇとの間（例えば、約１μｇ、約２．５μｇ、約４μｇ、約５μｇ、または約１０μｇ（糖として表示））である。
【０１４４】
混合物が、血清群Ａおよび血清群Ｃの両方由来の莢膜糖を含む場合、ＭｅｎＡ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は、１より大きく（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）あり得る。混合物が、血清群Ｙならびに、血清群Ｃおよび血清群Ｗ１３５の一方、あるいは両方に由来する莢膜糖を含む場合、ＭｅｎＹ糖：ＭｅｎＷ１３５糖の比（ｗ／ｗ）は、１より大きく（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）あり得、そして／または、ＭｅｎＹ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は、１より小さく（例えば、１：２、１：３、１：４、１：５以下）あり得る。血清群Ａ由来の糖：血清群Ｃ由来の糖：血清群Ｗ１３５由来の糖：血清群Ｙ由来の糖についての好ましい比（ｗ／ｗ）は、以下である： １：１：１：１； １：１：１：２； ２：１：１：１； ４：２：１：１； ８：４：２：１； ４：２：１：２； ８：４：１：２； ４：２：２：１； ２：２：１：１； ４：４：２：１； ２：２：１：２； ４：４：１：２；および２：２：２：１。血清群Ｃ由来の糖：血清群Ｗ１３５由来の糖：血清群Ｙ由来の糖についての好ましい比（ｗ／ｗ）は、以下である： １：１：１； １：１：２； １：１：１； ２：１：１； ４：２：１； ２：１：２； ４：１：２； ２：２：１；および２：１：１。実質的に各糖の同等の質量を使用することが好ましい。
【０１４５】
莢膜糖は、概して、オリゴ糖形態で使用される。これらは、精製された莢膜多糖の断片化によって（例えば、加水分解によって）簡便に形成され、その後に、通常、所望のサイズのフラグメントが精製される。
【０１４６】
多糖の断片化は、好ましくは、３０より小さい（例えば、血清群Ａについて１０と２０の間、好ましくは約１０；血清群Ｗ１３５および血清群Ｙについて１５と２５の間；好ましくは約１５〜２０；血清群Ｃについて１２と２２の間など）オリゴ糖において、最終的な平均重合度（ＤＰ）を生じるように実施される。ＤＰは、イオン交換クロマトグラフィーによってかまたは比色アッセイによって、簡便に測定され得る［１９４］。
【０１４７】
加水分解が実施される場合、この加水分解物は、概して、短い長さのオリゴ糖を除去するための大きさにされ得る［１９５］。これは、種々の方法（例えば、限外濾過後のイオン交換クロマトグラフィー）において、成し遂げられ得る。好ましくは、血清群Ａについて、約６以下の重合度を有するオリゴ糖は除去され、そして好ましくは、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙについて、約４より少ない重合度を有するオリゴ糖は除去される。
【０１４８】
好ましいＭｅｎＣ糖抗原は、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭにおいて使用されたように、参考文献５に開示される。
【０１４９】
糖は、好ましくは、（任意の断片化、結合体化、修飾などを含めて）別々に調製され、次いで本発明の組成物を生じるために混合される。
【０１５０】
しかしながら、この組成物が、血清群Ａ由来の莢膜糖を含有する場合、加水分解の可能性を最小限に抑えるために、血清群Ａの糖は、使用直前まで、他の糖に混合されないことが好ましい。これは、血清群Ａ成分（代表的には適切な賦形剤とともに）を凍結乾燥形態にし、そして他の血清群成分（これもまた適切な賦形剤とともに）を液体形態にすることにより、使用準備が整ったときに、液体成分を、この凍結乾燥ＭｅｎＡ成分を再構成するように使用することによって、簡便に成し遂げられ得る。アルミニウム塩アジュバントが使用される場合、液体ワクチンを含むバイアル内にアジュバントを含むこと、およびＭｅｎＡ成分をアジュバントなしで凍結乾燥させることが好ましい。したがって、本発明の組成物は、以下のものを備えるキットから調製され得る：（ａ）凍結乾燥形態の、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ由来の莢膜糖；および（ｂ）液体形態の、この組成物由来のさらなる抗原。
【０１５１】
（共有結合性結合）
本発明の組成物における莢膜糖は、通常、キャリアタンパク質に結合される。結合は、糖をＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原へ転換し、よって、免疫記憶のための初回抗原刺激を可能とすることから、一般に、結合は、糖の免疫原性を増強する。結合は、小児ワクチンにとって特に有用であり、周知の技術である［例えば、参考文献１９６および１６７〜１７５で概説される］。
【０１５２】
好ましいキャリアタンパク質は、細菌性毒素または細菌性トキソイド（例えば、ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイド）である。ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体［１９７〜１９９］は特に好ましい。他の適したキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［２００］、合成ペプチド［２０１、２０２］、熱ショックタンパク質［２０３、２０４］、百日咳タンパク質［２０５、２０６］、サイトカイン［２０７］、リンホカイン［２０７］、ホルモン［２０７］、増殖因子［２０７］、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［２０８］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［２０９、２１０］、肺炎球菌の表面タンパク質ＰｓｐＡ［２１１］、鉄取り込みタンパク質［２１２］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［２１３］などが挙げられる。好ましいキャリアは、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄ、およびＣＲＭ１９７である。
【０１５３】
本発明の組成物内で、（例えば、キャリア抑制の危険を減少させるため）一より多くのキャリアタンパク質を使用することが可能である。従って、異なるキャリアタンパク質は、異なる血清群に使用され得る（例えば、血清群Ａの糖はＣＲＭ１９７に結合され得、一方で血清群Ｃの糖は破傷風トキソイドに結合され得る）。特定の糖抗原に一より多くのタンパク質を使用することもまた可能である（例えば、血清群Ａの糖は二つの群であり得、ＣＲＭ１９７に結合されたものと、破傷風トキソイドに結合されるものとを含む）。しかしながら、概して、同一のキャリアタンパク質を全ての糖に使用することが好ましい。
【０１５４】
単一キャリアタンパク質は一より多くの糖抗原を保有し得る［２１４］。例えば、単一キャリアタンパク質は、そのキャリアタンパク質に結合された血清群Ａおよび血清群Ｃ由来の糖を有し得る。この目的を成し遂げるため、糖は結合反応の前に混合され得る。しかしながら、概して、各血清群のための別個の結合体を有することが好ましい。
【０１５５】
１：５（すなわち、過剰のタンパク質）と５：１（すなわち、過剰の糖）の間の糖：タンパク質の比（ｗ／ｗ）での結合が好ましい。１：２と５：１の間の比が好ましく、１：１．２５と１：２．５の間の比はより好ましい。過剰のキャリアタンパク質は、ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣについて好ましくあり得る。
【０１５６】
結合体は、遊離のキャリアタンパク質との結合において使用され得る［２１５］。ある所定のキャリアタンパク質が、本発明の組成物中に遊離型形態および結合体化形態の両方おいて存在する場合、非結合体化形態は、好ましくは、全体として、その組成物中のキャリアタンパク質の総量の５％以下であり、より好ましくは、２重量％以下で与える。
【０１５７】
任意の適した結合反応は、必要な場合、任意の適したリンカーとともに使用され得る。
【０１５８】
糖は、典型的に、結合の前に活性化されるか、または官能化される。例えば、活性化は、ＣＤＡＰ（例えば、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジウムテトラフルオロボレート［２１６、２１７など］）のようなシアン化試薬を含む。他の適した技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する；参考文献１７３への序論をまた参照のこと）。
【０１５９】
リンカー基を介した連結は、任意の公知の手順（例えば、参考文献２１８および２１９に記載された手順）を利用して作られ得る。一つの型の連結は、多糖の還元的アミノ化、アジピン酸リンカー基の一端と、結果として生じるアミノ基とのカップリング、およびその後、アジピン酸リンカー基の他の一端へのタンパク質のカップリングを含む［１７１、２２０、２２１］。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド［２２２］、ニトロフェニル−エチルアミン［２２３］、ハロゲン化ハロアシル［２２４］、グリコシド結合［２２５］、６−アミノカプロン酸［２２６］、ＡＤＨ［２２７］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［２２８］などが挙げられる。リンカーの使用に代わる手段として、直接的結合が使用され得る。そのタンパク質への直接的結合は、例えば、参考文献２２９および参考文献２３０に記載されるような多糖の酸化とその後のタンパク質との還元的アミノ化を含み得る。
【０１６０】
糖へのアミノ基の導入（例えば、−ＮＨ２での末端＝Ｏ基の交換による導入）およびその後のアジピン酸ジエステル（例えば、アジピン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドジエステル）での誘導化、ならびにキャリアタンパク質との反応を包含するプロセスは、好ましい。別の好ましい反応は、プロテインＤキャリア（例えば、ＭｅｎＡまたはＭｅｎＣのためのキャリア）でのＣＤＡＰ活性化を使用する。
【０１６１】
結合後、遊離型糖および結合体化糖は、分離され得る。疎水性クロマトグラフィー、タンジェンシャル限外濾過、ダイアフィルトレーションなどを包含する多くの適した方法がある［参考文献２３１および２３２などをまた参照のこと］。
【０１６２】
本発明の組成物が結合体化されたオリゴ糖を含有する場合、オリゴ糖の調製は結合に先行することが好ましい。
【０１６３】
精製に代わる手段として、莢膜糖は、全合成または部分合成によって得られ得る（例えば、Ｈｉｂの合成は参考文献２２３に開示され、そしてＭｅｎＡの合成は参考文献２３４に開示される）。
【０１６４】
（さらなるかつ代わりの血清群Ｂポリペプチド抗原）
本発明は、被験体に投与後、その被験体内において抗体反応を誘導し得る組成物を使用し、ここでその抗体反応は、少なくとも髄膜炎菌の血清群Ｙに対して防御的である。ＮａｄＡ、７４１、９３６、９５３、および２８７は、この防御を成し遂げるための好ましい抗原であるが、本発明の組成物（必要に応じて５つの基本抗原のうちの一以上との組合わせた組成物）内に含有され得る他のＭｅｎＢポリペプチド抗原は、以下のアミノ酸配列のうちの一つを含むものを含む：参考文献１５由来の配列番号６５０；参考文献１５由来の配列番号８７８；参考文献１５由来の配列番号８８４；参考文献１６由来の配列番号４；参考文献１７由来の配列番号５９８；参考文献１７由来の配列番号８１８；参考文献１７由来の配列番号８６４；参考文献１７由来の配列番号８６６；参考文献１７由来の配列番号１１９６；参考文献１７由来の配列番号１２７２；参考文献１７由来の配列番号１２７４；参考文献１７由来の配列番号１６４０；参考文献１７由来の配列番号１７８８；参考文献１７由来の配列番号２２８８；参考文献１７由来の配列番号２４６６；参考文献１７由来の配列番号２５５４；参考文献１７由来の配列番号２５７６；参考文献１７由来の配列番号２６０６；参考文献１７由来の配列番号２６０８；参考文献１７由来の配列番号２６１６；参考文献１７由来の配列番号２６６８；参考文献１７由来の配列番号２７８０；参考文献１７由来の配列番号２９３２；参考文献１７由来の配列番号２９５８；参考文献１７由来の配列番号２９７０；参考文献１７由来の配列番号２９８８、または（ａ）上記の配列に対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上）を有し；そして／または（ｂ）上記配列由来の少なくともｎの連続的アミノ酸のフラグメントを含むものであって、ここでｎは７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０以上）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。（ｂ）のための好ましいフラグメントは、関連する配列由来のエピトープを含む。これらのポリペプチドのうちの一より多く（例えば、２、３、４、５、６）が含まれ得る。
【０１６５】
抗原であるトランスフェリン結合タンパク質および／またはＨｓｆタンパク質もまた使用され得る［２３５］。ＮｓｐＡタンパク質もまた、好ましくは、参考文献２３７のように、組換え発現され、そして精製されて、使用され得る［２３６］。
【０１６６】
（一般）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「構成する（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、もっぱらＸから構成されるか、またはさらなる何か（例えば、Ｘ＋Ｙ）を含有し得る。
【０１６７】
数値ｘに関する用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１６８】
単語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、「完全に（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ）」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｆｒｅｅ）」の組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要に応じて、その単語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、本発明の定義から省略され得る。
【０１６９】
二つのアミノ酸配列間の配列同一性割合の言及は、整列化された場合に、その割合のアミノ酸が、二つの配列を比較した際に同一であることを意味する。この整列化および相同性パーセントまたは配列同一性は、当該分野で公知のソフトウェア・プログラム（例えば、参考文献２３８の第７．７．１８章に記載されるソフトウェア・プログラム）を使用して決定され得る。好ましい整列化は、１２のギャップオープンペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティを有するアフィンギャップ検索（６２のＢＬＯＳＵＭマトリクス）を利用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献２３９において教示される。
【０１７０】
用語「ポリペプチド」は、一般に、アミノ酸残基のポリマーをいい、そしてその生成物の最短の長さに制限されない。従って、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などが、この定義に包含される。全長タンパク質およびそのフラグメントの両方は、この定義により包含される。代表的に、本発明において有用なポリペプチドは、意図される用途に対して適切な最長の長さを有し得る。一般に、最長の長さは重要でなく、そして当業者によって容易に選択され得る。
【０１７１】
本発明のポリペプチドは、多くの方法によって、例えば、化学合成によって（少なくとも部分的に）、プロテアーゼを使用するより長いポリペプチドの消化によって、ＲＮＡの翻訳によって、細胞培養物（例えば、組換え発現由来の細胞培養物）からの精製によって、生物体自体（例えば、細菌培養後の生物体）からの精製によって、細胞株供給源からの精製、などによって、調製され得る。４０未満のアミノ酸長のペプチドの産生のための好ましい方法は、インビトロ化学合成［２４０、２４１］を含む。固相ペプチド合成、例えば、ｔＢｏｃ化学反応またはＦｍｏｃ化学反応［２４２］に基づく方法は、特に好ましい。酵素的合成［２４３］もまた、部分的かまたは完全に使用され得る。化学合成に対する代替物として、生物学的合成がまた使用され得、例えば、翻訳によってポリペプチドが産生され得る。この生物学的合成は、インビトロまたはインビボで実行され得る。生物学的方法は、一般に、Ｌ−アミノ酸に基づくポリペプチドの産生に限定されるが、翻訳機構の操作（例えば、アミノアシルｔＲＮＡ分子の操作）を使用して、Ｄ−アミノ酸の導入（または、他の非天然アミノ酸（例えば、ヨードチロシンまたはメチルフェニルアラニン、アジドホモアラニンなど）の導入［２４４］）も可能であり得る。しかしながら、Ｄ−アミノ酸が含まれる場合、化学合成を使用することが好ましい。本発明のポリペプチドは、Ｃ末端および／またはＮ末端において共有結合性の改変を有し得る。
【０１７２】
本発明のポリペプチドは、種々の形態（例えば、天然の形態、融合形態、グリコシル化形態、非グリコシル化形態、脂質付加形態、非脂質付加形態、リン酸化形態、非リン酸化形態、ミリストイル化形態、非ミリストイル化形態、単量体形態、多量体形態、部分的形態、変性形態、など）をとり得る。精製されたポリペプチドは、それが発現される生物体全体から分かれており、そして分離されている。
【０１７３】
用語「核酸」は、一般に、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそれらのアナログを含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を意味する。これはまた、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを含む。この用語はまた、ＤＮＡアナログまたはＲＮＡアナログ（例えば、改変された骨格（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホロチオエート）または改変された塩基を含むもの）を含む。従って、本発明は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸、分枝核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを含む。本発明の核酸がＲＮＡ形態をとる場合、この核酸は５’キャップを有してもよいし、有さなくてもよい。
【０１７４】
本発明の核酸は、多く方法によって、例えば、化学合成によって（少なくとも部分的に）、ヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）を使用するより長い核酸の消化によって、より短い核酸の（例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを使用する）接続によって、遺伝子ライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーから、などによって調製され得る。
【０１７５】
クローニングまたは精製などを容易にするために核酸中またはポリペプチド中に含まれる配列は、必ずしも本発明に寄与するのではなく、省略され得るかまたは除外され得る。
【実施例】
【０１７６】
（発明を実施するための形態）
（ポリペプチド）
ΔＧ２８７−９５３ハイブリッドポリペプチド、９３６−ΔＧ７４１ハイブリッドポリペプチド、およびＮａｄＡ（ＮＬ）（Ｃ）ポリペプチドを、参考文献２４に開示されるように調製した。これらのポリペプチドは、髄膜炎菌の血清型Ｂ株の遺伝子から取られた配列によってコードされる。
【０１７７】
これら３つのポリペプチドを混合して、合わせた処方物（これは、水酸化アルミニウムアジュバントを含む）を得た。この処方物を使用してマウスを免疫し、そして免疫血清の殺菌力価を、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙにおける髄膜炎菌株に対して評価した。１１株に対する結果は、以下のとおりであった：
【０１７８】
【表２】
従って、これらの混合組成物は、血清群Ｂに対して殺菌活性である血清を惹起するのに有効であった。この血清群Ｂは、ポリペプチド中に含まれるアミノ酸配列に対する起源の血清群である。同範囲の力価は、血清群Ａおよび血清群Ｃに対しても認められ、そしてわずかに低い力価が、血清群Ｗに対して認められた。驚くべきことに、最も高い力価は、血清群Ｙにおける株に対して認められた。
【０１７９】
さらに、血清群Ｙ株に対して認められた力価は、４価のＡ／Ｃ／Ｗ１３５／Ｙの複合ワクチン［８］を使用して得られた力価と等価であった。
【０１８０】
【表３】
従って、本発明者らは、病原性血清群（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹ）の各々に由来する髄膜炎菌に対して、ポリペプチド抗原を使用し、かつ莢膜糖を使用せずに、有効な免疫反応を初めて達成した。
【０１８１】
本発明は、例示として記載されているにすぎずないこと、および本発明の範囲と精神を保持しつつ、改変がなされ得ることが理解される。
【０１８２】
（参考文献 これらの内容は参考として本明細書中に援用される）
【０１８３】
【化２】
【０１８４】
【化３】
【０１８５】
【化４】
【０１８６】
【化５】
【０１８７】
【化６】
【０１８８】
【化７】
【０１８９】
【化８】
【０１９０】
【化９】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載される全ての文献は、それらの全体が参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、免疫学およびワクチン学の分野にある。特に、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）由来の抗原およびこれらの免疫化における使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、咽頭にコロニーを形成して髄膜炎（および時折、髄膜炎の不存在下で敗血症（ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ））を引き起こす、非運動性のグラム陰性ヒト病原体である。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、風土病および伝染病の両方を引き起こす。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する結合体ワクチンの導入後、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、米国における細菌性髄膜炎の主な原因である。
【０００４】
生物体の莢膜多糖に基づき、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの種々の血清群が同定されている。血清群Ａは、サハラ以南のアフリカにおける伝染病に最も頻繁に関係する病原体である。血清群Ｂおよび血清群Ｃは、米国およびほとんどの先進国における症例の大部分の原因である。血清群Ｗ１３５および血清群Ｙは、米国および先進国における症例の残りの原因である。血清群の後に、分類は、血清型、血清亜型、および免疫型を含み、そしてこの標準的な命名法は、血清群、血清型、血清亜型および免疫型を列挙し、それぞれが、コロンによって分けられる（例えば、Ｂ：４：Ｐ１．１５：Ｌ３，７，９）。血清群Ｂ内では、いくつかの系統は、多くの場合、（超侵襲性）疾患を引き起こし、いくつかの系統は、他の疾患よりもより重い形態の疾患（超毒性）を引き起こし、そして他の系統は、めったに疾患を引き起こさない。７つの高毒性系統が認知される（すなわち、亜群Ｉ、亜群ＩＩＩ、および亜群ＩＶ−１、ＥＴ−５複合体、ＥＴ−３７複合体、Ａ４クラスター、ならびに系統３）。これらは、多座酵素電気泳動（ＭＬＥＥ）により決定されるが、多座配列タイピング（ＭＬＳＴ）もまた、髄膜炎菌を分類するために用いられる［非特許文献１］。
【０００５】
今日まで血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５、および血清群Ｙに対するワクチンは、抗原としてこれらの血清群の莢膜糖を使用する。これらの４つの血清群に対する認可されたヒト多糖は、長年公知である［非特許文献２、非特許文献３］。より最近、焦点は、糖に合わせられたままであるが、キャリアタンパク質への結合体化に合わせられる。血清群Ｃに対する結合体化ワクチンは、ヒトへの使用が認可されており、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ［非特許文献４］、ＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭおよびＮｅｉｓ Ｖａｃ−ＣＴＭが挙げられる。血清群Ａ＋Ｃ由来の結合体の混合物は、公知［非特許文献５、非特許文献６］であり、そして血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ由来の結合体の混合物が、報告されている［特許文献１、特許文献２、非特許文献７、非特許文献８］。
血清群Ｂの莢膜糖は、ヒトにおける自己抗原であるのでワクチン接種に使用され得ない。化学的に改変された血清群Ｂ糖が、提案された［特許文献３］が、臨床使用に適さなかった。外膜小胞に基づくワクチンがまた、試験された［例えば、非特許文献９］が、これらのワクチンによって提供される防御は、代表的に、ワクチンを作製するための使用される株に限定される。血清群Ａのゲノム配列［非特許文献１０］および血清群Ｂのゲノム配列［非特許文献１１、特許文献４］が報告され、そして血清群Ｂの配列は、ワクチン抗原を同定するために研究された［例えば、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、非特許文献１２］。候補抗原は、異種の発現を改良するために操作された［特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２］。
【０００６】
従って、髄膜炎菌に対する確立された考え方は、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する免疫は、４つの異なる莢膜糖に基づき、そして血清群Ｂに対する免疫は、莢膜糖に基づかないということである。
【特許文献１】国際公開第０２／０５８７３７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／００７９８５号パンフレット
【特許文献３】欧州特許第０９３９６４７号明細書
【特許文献４】国際公開第００／６６７９１号パンフレット
【特許文献５】国際公開第９９／２４５７８号パンフレット
【特許文献６】国際公開第９９／３６５４４号パンフレット
【特許文献７】国際公開第９９／５７２８０号パンフレット
【特許文献８】国際公開第００／２２４３０号パンフレット
【特許文献９】国際公開第００／６６７４１号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第０１／６４９２０号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第０１／６４９２２号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第０３／０２０７５６号パンフレット
【非特許文献１】Ｍａｉｄｅｎら、「ＰＮＡＳ ＵＳＡ」、１９９８年、第９５巻、ｐ．３１４０〜３１４５
【非特許文献２】Ａｒｍａｎｄら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．」、１９８２年、第１０巻、ｐ．３３５〜３３９
【非特許文献３】Ｃａｄｏｚら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９８５年、第３巻、ｐ．３４０〜３４２
【非特許文献４】Ｊｏｎｅｓ、「Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ」、２００１年、第２巻、ｐ．４７〜４９
【非特許文献５】Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９９２年、第１０巻、ｐ．６９１〜６９８
【非特許文献６】Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、「ＪＡＭＡ」、１９９６年、第２７５巻、ｐ．１４９９〜１５０３
【非特許文献７】Ｒｅｎｎｅｌｓら、「Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ」、２００２年、第２１巻、ｐ．９７８〜９７９
【非特許文献８】Ｃａｍｐｂｅｌｌら、「Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ」、２００２年、第１８６巻、ｐ．１８４８〜１８５１
【非特許文献９】Ｂｊｕｎｅら、「Ｌａｎｃｅｔ」、１９９１年、第３３８巻、第８７７５号、ｐ．１０９３〜１０９６
【非特許文献１０】Ｐａｒｋｈｉｌｌら、「Ｎａｔｕｒｅ」、２０００年、第４０４巻、ｐ．５０２〜５０６
【非特許文献１１】Ｔｅｔｔｅｌｉｎら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、２０００年、第２８７巻、ｐ．１８０９〜１８１５
【非特許文献１２】Ｐｉｚｚａら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、２０００年、第２８７巻、ｐ．１８１６〜１８２０
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の開示）
この考え方とは対照的に、本発明者らは、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する免疫（そして特に、血清群Ｙに対する免疫）がポリペプチド抗原を使用して達成され得ることを見出した。さらに、本発明者らは、血清群Ｂポリペプチドがこの防御を達成し、従って、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの全てに対する防御のために使用される単一のポリペプチドベースのワクチンを可能にすることを見出した。
【０００８】
従って、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫する方法を提供し、この方法は、１種以上の免疫原性ポリペプチドを含有する組成物を被験体に投与する工程を包含する。同様に、本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における１種以上の免疫原性ポリペプチドの使用を提供する。
【０００９】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙに対して被験体を免疫する方法を提供し、この方法は、髄膜炎菌性ＯＭＶを含有する組成物をこの被験体に投与する工程を包含する。同様に、本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における髄膜炎菌性ＯＭＶの使用を提供する。
【００１０】
本方法および使用は、好ましくは血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫し、そしてまた血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび血清群Ｗ１３５の少なくとも１つに対して被験体を免疫するための方法に関連する。次いで被験体が、髄膜炎菌の所定の血清群に対して免疫された場合、この組成物は、好ましくはこの血清群由来の莢膜糖（結合体化されているか、または結合体化されていない）を含有しない。したがって、好ましい組成物は、血清群Ｙ由来の莢膜糖を含有せず、好ましい組成物はまた、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび／または血清群Ｗ１３５由来の莢膜糖を含有しなくても良い。
【００１１】
本発明に従って使用するための組成物は、公知の技術を使用して調製され得る（例えば、参考文献１５〜２４に開示される髄膜炎菌性ポリペプチド抗原を調製するための技術、または参考文献３４〜３８に開示されるＯＭＶを調製するための公知の技術）。精製したポリペプチド抗原の使用は、外膜小胞の使用に好ましい。
【００１２】
病原体に対するワクチン（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、ジフテリアおよび破傷風）は、代表的に、単一のタンパク質抗原（例えば、ＨＢＶ表面抗原、または破傷風毒素）を含む。対照的に、無細胞性百日咳ワクチンは、代表的に、少なくとも３つのＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓタンパク質を含み、ＰｒｅｖｅｎａｒＴＭ肺炎球菌ワクチンは、７つの分離した結合体化された糖抗原を含む。他のワクチン（例えば、細胞性百日咳ワクチン、麻疹ワクチン、不活性型ポリオワクチン（ＩＰＶ）および髄膜炎菌性ＯＭＶワクチン）は、非常に多くの抗原の天然の非常に複雑な混合物によるものである。単一の抗原、少数の同定された抗原、または複雑な同定されていない抗原の混合物によって誘発され得、従ってこの防御は多くの因子に依存する。
【００１３】
（免疫原性ポリペプチド）
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの感染に対する防御を提供するために少なくとも１種の免疫原性ポリペプチドを被験体に投与する工程を包含する。これらの免疫原性ポリペプチドは、一般的に、髄膜炎菌性のアミノ酸配列（例えば、血清群Ｂ株（例えば、配列決定されたＭＣ５８株［１３］）中に見出されるアミノ酸配列）を含む。
【００１４】
少数の特定された抗原が、使用され得る。したがって、単一の抗原からなるよりも、１０種または少数（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２）の精製された抗原の混合物を含有する本発明の組成物が好ましく、特に好ましくは、この組成物は、抗原の複合物または抗原の同定されていない混合物を含まないことが好ましい（例えば、組成物中に外膜小胞を含まないことが好ましい）。
【００１５】
本発明の使用に好ましい免疫原性ポリペプチドは、以下の参考文献２４に開示されるものである：（１）「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「７４１」タンパク質；（３）「９３６」タンパク質；（４）「９５３」タンパク質；および（５）「２８７」タンパク質。これらの抗原は、本明細書中に「５種の基本抗原」として参照される。本発明は、これらの抗原のうちの１種、２種、３種、４種または５種全てを使用し得る。
【００１６】
（ＮａｄＡタンパク質）
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｂ由来の「ＮａｄＡ」（ナイセリアアドヘジンＡ）は、参考文献１７にタンパク質「９６１」（配列番号２９４３および配列番号２９４４）として、そして参考文献１３に「ＮＭＢ１９９４」として開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：１１３５２９０４および７２２７２５６もまた参照のこと）。これらのタンパク質の詳細な説明は、参考文献２５のなかに見出される。対応するタンパク質は、血清群Ａゲノム中に見出されなかった［１２、２５］が、ＮａｄＡ＋血清群Ａ株は、［２５］により報告された。
【００１７】
本発明に従って使用される場合、ＮａｄＡは、種々の形態を採り得る。ＮａｄＡの好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜２３に開示される改変体）である。特に、Ｃ末端の膜アンカーを有さないＮａｄＡが、好ましく（例えば、株２９９６［配列番号１］の残基３５１〜４０５の欠失）、これはときとして、本明細書中で上付き「Ｃ」の使用によって区別される（例えば、ＮａｄＡ（Ｃ））。Ｅ．ｃｏｌｉにおけるこの膜アンカードメイン（例えば、配列番号１）を有さないＮａｄＡの発現は、２３マーのリーダーペプチドの除去（例えば、株２９９６の３２７マー［配列番号２］を残す）を伴って、このタンパク質の培養上清中への分泌を生じる。そのリーダーペプチドを有さないポリペプチドは、本明細書中で、時に、上付き「ＮＬ」の使用（例えば、ＮａｄＡ（ＮＬ）またはＮａｄＡ（Ｃ）（ＮＬ））により区別される。
【００１８】
好ましいＮａｄＡ配列は、配列番号２に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、ＮａｄＡ改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）、パラログ（ｐａｒａｌｏｇ）、変異体など）を包含する。ＮａｄＡの対立遺伝子形態は、参考文献２６の図９に示される。
【００１９】
他の好ましいＮａｄＡ配列は、配列番号１由来の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、ここでｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、ＮａｄＡ由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号１のＣ末端および／またはＮ末端の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）を欠く（例えば、ＮａｄＡ（Ｃ）、ＮａｄＡ（ＮＬ）、ＮａｄＡ（Ｃ）（ＮＬ））。Ｎ末端残基が欠失される場合、この欠失は、ＮａｄＡのヒト上皮細胞に付着する能力を除去するべきことが好ましい。配列番号１の好ましいフラグメントは、配列番号２である。
【００２０】
ＮａｄＡは、好ましくはオリゴマー形態で使用される（例えば、トリマー形態）。
【００２１】
（７４１タンパク質）
血清群Ｂ由来の「７４１」タンパク質は、参考文献１７（配列番号２５３５および配列番号２５３６）において開示され、そして参考文献１３において「ＮＭＢ１８７０」として開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＧＩ：７２２７１２８もまた参照のこと）。血清群Ａにおける対応するタンパク質［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３７９３２２を有する。７４１は、天然には、リポタンパク質である。
【００２２】
本発明に従って使用される場合、７４１タンパク質は、種々の形態をとり得る。７４１の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体である（例えば、参考文献２１〜２３に開示されているトランケーション改変体または欠失改変体）。特に、７４１のＮ末端は、そのポリグリシン配列まで欠失されても、およびポリグリシン配列を含めて欠失されてもよく（すなわち、ＭＣ５８株についての残基１〜残基７２の欠失［配列番号３］）、この配列は、時に、本明細書中で、接頭辞「ΔＧ」の使用により区別される。この欠失は、発現を増強し得る。この欠失はまた、７４１の脂質化部位を除去する。
【００２３】
好ましい７４１配列は、配列番号３に対する５０％以上の同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）を有する。これは、７４１改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。７４１の対立遺伝子形態は、参考文献２３の配列番号１〜配列番号２２、ならびに参考文献２７の配列番号１〜配列番号２３および配列番号１２３〜配列番号１４１に見出され得る。参考文献２８の配列番号１〜配列番号２９９は、さらなる７４１配列を与える。
【００２４】
他の好ましい７４１配列は、配列番号３由来の少なくともｎ個の連続したアミノ酸を含み、ここでｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、７４１由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号３のＣ末端および／またはＮ末端の１個以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）を欠く。
【００２５】
タンパク質７４１は、抗髄膜炎菌抗体応答を惹起するのに極めて有効な抗原であり、そしてこれは、髄膜炎菌の全ての血清群にわたって発現される。系統発生的分析は、これらのタンパク質が２つの群に分かれること、およびそれらの分けられたもののうちの一方が、合計３つの改変体をさらに与え［２９］、そして一方で、所定の改変体に対して惹起された血清は、同じ改変体群内においては殺菌性であり、他の２つの改変体のうちの１つを発現する株に対しては活性ではないこと（すなわち、改変体内の交差防御は存在するが、改変体間の交差防御は存在しないこと）を示している。従って、最大の株にまたがった（ｃｒｏｓｓ−ｓｔｒａｉｎ）効力のためには、組成物が、タンパク質７４１の１種より多い改変体を含有すべきことが好ましい。各々の改変体由来の例示的配列を、本明細書中で、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２に与え、これらの配列は、７４１のリポタンパク質形態では脂質が共有結合するＮ末端システイン残基で始まる。
【００２６】
従って、この組成物が、以下のうちの少なくとも２種を含有すべきことが好ましい：（１）配列番号１０に対して少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして／または配列番号１０由来の少なくともｘ個の連続するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第１のタンパク質；（２）配列番号１１に対して少なくともｂ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして／または配列番号１１由来の少なくともｙ個の連続するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第２のタンパク質；ならびに（３）配列番号１２に対して少なくともｃ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして／または配列番号１２由来の少なくともｚ個の連続するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第３のタンパク質。
【００２７】
ａの値は、少なくとも８５（例えば、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい）である。ｂの値は、少なくとも８５（例えば、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい）である。ｃの値は、少なくとも８５（例えば、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい）である。ａの値、ｂの値およびｃの値は、本質的に、互いに関連しない。
【００２８】
ｘの値は、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｙの値は、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｚの値は、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｘの値、ｙの値およびｚの値は、本質的に、互いに関連しない。
【００２９】
いずれの所定の７４１アミノ酸配列も、分類（１）、分類（２）および分類（３）のうちの１種よりも多くに分類されないことが好ましい。従って、いずれの所定の７４１配列も、分類（１）、分類（２）および分類（３）のうちのただ１種にのみ分類される。従って、以下が好ましい：タンパク質（１）が、タンパク質（２）に対してｉ％未満の配列同一性を有すること；タンパク質（１）が、タンパク質（３）に対してｊ％未満の配列同一性を有すること；およびタンパク質（２）が、タンパク質（３）に対してｋ％未満の配列同一性を有する。ｉの値は、６０以上（例えば、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０など）であり、最大がａである。ｊの値は、６０以上（例えば、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０など）であり、最大がｂである。ｋの値は、６０以上（例えば、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０など）であり、最大がｃである。ｉの値、ｊの値およびｋの値は、本質的に、互いに関連しない。
【００３０】
（９３６タンパク質）
血清群Ｂ由来の「９３６」タンパク質は、参考文献１７（配列番号２８８３および配列番号２８８４）に開示され、「ＮＭＢ２０９１」として参考文献１３に開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＧＩ：７２２７３５３もまた参照のこと）。血清群Ａの対応する遺伝子［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３７９０９３である。
【００３１】
本発明に従って使用される場合、９３６タンパク質は、種々の形態をとり得る。９３６の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜参考文献２３に開示されるもの）である。特に、９３６のＮ末端リーダーペプチドは、９３６（ＮＬ）を与えるために欠失され得る（すなわち、株ＭＣ５８の残基１〜残基２３の欠失［配列番号４］）。
【００３２】
好ましい９３６配列は、配列番号４に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。他の好ましい９３６配列は、配列番号４由来の少なくともｎ個の連続するアミノ酸を含み、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、９３６由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号４のＣ末端および／またはＮ末端由来の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）を欠く。
【００３３】
（９５３タンパク質）
血清群Ｂ由来の「９５３」タンパク質は、参考文献１７（配列番号２９１７および配列番号２９１８）に開示され、そして「ＮＭＢ１０３０」として参考文献１３に開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号 ＧＩ：７２２６２６９もまた参照のこと）。血清群Ａの対応するタンパク質［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３８０１０８を有する。
【００３４】
本発明に従って使用される場合、９５３タンパク質は、種々の形態をとり得る。９５３の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜参考文献２３に開示されるもの）である。特に、９５３のＮ末端リーダーペプチドは、９５３（ＮＬ）を与えるために欠失され得る（すなわち、株ＭＣ５８の残基１〜残基１９の欠失［配列番号５］）。
【００３５】
好ましい９５３配列は、配列番号５に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、９５３改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。９５３の対立遺伝子形態は、参考文献１９の図１９に認められ得る。
【００３６】
他の好ましい９５３配列は、配列番号５由来の少なくともｎ個の連続するアミノ酸を含み、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、９５３由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号５のＣ末端および／またはＮ末端由来の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）のアミノ酸を欠く。
【００３７】
（２８７タンパク質）
血清群Ｂ由来の「２８７」タンパク質は、参考文献１７（配列番号３１０３および配列番号３１０４）に開示され、参考文献１３において「ＮＭＢ２１３２」として開示され、そして参考文献２０において「ＧＮＡ２１３２」として開示される（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＧＩ：７２２７３８８もまた参照のこと）。血清群Ａにおける対応するタンパク質［１２］は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号７３７９０５７を有する。
【００３８】
本発明に従って使用される場合、２８７タンパク質は、種々の形態をとり得る。２８７の好ましい形態は、トランケーション改変体または欠失改変体（例えば、参考文献２１〜２３に開示されているトランケーション改変体または欠失改変体）である。特に、２８７のＮ末端は、そのポリ−グリシン配列までおよびポリ−グリシン配列を含めて欠失され得る（すなわち、本明細書中で接頭辞「ΔＧ」の使用によって区別される、ＭＣ５８株についての残基１〜残基２４の欠失［配列番号６］）。この欠失は、発現を増強し得る。
【００３９】
好ましい２８７配列は、配列番号６に対して５０％以上（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）の同一性を有する。これは、２８７改変体（例えば、対立遺伝子改変体、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）を包含する。２８７の対立遺伝子形態は、参考文献１９の図５および図１５に認められ、そして参考文献１７の実施例１３および図２１に認められ得る（配列番号３１７９〜配列番号３１８４）。
【００４０】
他の好ましい２８７配列は、配列番号６由来の少なくともｎ個の連続するアミノ酸を含み、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である。好ましいフラグメントは、２８７由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号６のＣ末端および／またはＮ末端由来の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれ以上）のアミノ酸を欠く。
【００４１】
（融合タンパク質）
５種の抗原は、５種の別個のポリペプチドとして組成物中に存在し得るが、これは、少なくとも２つの抗原が、単一のポリペプチド鎖（「ハイブリッド」タンパク質［参考文献２１〜参考文献２４］）であることが好ましい。例えば、その結果、５種の抗原は、５種よりも少ない種類のポリペプチドを形成する。ハイブリッドタンパク質は、２つの主な利点を提供する：第１に、不安定であり得るかまたはそのままではほとんど発現されないかもしれないタンパク質が、この問題を克服する適切なハイブリッドパートナーを付加することによって補助され得る；第２に、２つの別々に有用なタンパク質を産生するためにたった１種の発現および精製を用いることが必要とされるので、商業的製造が単純化される。
【００４２】
本発明の組成物中に含まれるハイブリッドタンパク質は、５種の基本抗原のうちの２種以上（すなわち、２種、３種、４種または５種）を含み得る。５種の基本抗原の２種からなるハイブリッドが好ましい。
【００４３】
５種の基本抗原の組み合わせ内で、ある抗原は、１種より多いハイブリッドタンパク質において存在し得るか、そして／または非ハイブリッドタンパク質として存在し得る。しかし、抗原は、ハイブリッドとして存在するかまたは非ハイブリッドとして存在するかのいずれかが好ましいが、両方として存在することは好ましくない。しかし、ハイブリッド抗原および非ハイブリッド（好ましくは、リポタンパク質）抗原の両方としてタンパク質７４１を含むことは、有用であり得る（特に、１種より多い７４１改変体が使用される場合）。
【００４４】
本発明に使用される２種抗原のハイブリッドは、以下を含む：ＮａｄＡおよび７４１；ＮａｄＡおよび９３６；ＮａｄＡおよび９５３；ＮａｄＡおよび２８７；７４１および９３６；７４１および９５３；７４１および２８７；９３６および９５３；９３６および２８７；９５３および２８７。好ましい２種抗原のハイブリッドは、以下を含む：７４１および９３６；９５３および２８７。参考文献２４のさらなる詳細を参照のこと。
【００４５】
ハイブリッドタンパク質は、式ＮＨ２−Ａ−［−Ｘ−Ｌ−］ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨにより表され得、ここで：Ｘは、５種の基本抗原のうちの１種のアミノ酸配列であり；Ｌは、任意のリンカーアミノ酸配列であり；Ａは、任意のＮ末端アミノ酸配列であり；Ｂは、任意のＣ末端アミノ酸配列であり；そしてｎは、２、３、４または５である。
【００４６】
−Ｘ−部分が、その野生型形態においてリーダーペプチド配列を有する場合、これは、ハイブリッドタンパク質に含まれてもよくまたは削除されてもよい。いくつかの実施形態において、このリーダーペプチドは、ハイブリッドタンパク質のＮ末端に位置する−Ｘ−部分のリーダーペプチドを除いて、欠失される（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは維持されるが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドは、削除される）。このことは、全てのリーダーペプチドを削除し、かつＸ１のリーダーペプチドを部分−Ａ−として使用することと等価である。
【００４７】
［−Ｘ−Ｌ−］の各々のｎの場合について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、存在してもよく、存在しなくてもよい。例えば、ｎ＝２である場合、上記ハイブリッドは、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、代表的に、短い（例えば、２０以下（すなわち、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）のアミノ酸）。例としては、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリ−グリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎを含有する（ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい））およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい））が挙げられる。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーは、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドがＢａｍＨＩ制限酵素部位から形成されていてクローニングおよび操作が容易になるＧＳＧＧＧＧ（配列番号９）であり、そして（Ｇｌｙ）４テトラペプチドは、代表的なポリ−グリシンリンカーである。Ｘｎ＋１が、ΔＧタンパク質であり、かつＬｎがグリシンリンカーである場合、これは、Ｘｎ＋１が、ΔＧタンパク質ではなく、かつＬｎが存在しないことと等価であり得る。
【００４８】
−Ａ−は、任意のＮ末端アミノ酸配列である。−Ａ−は、代表的に、短い（例えば、４０以下（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）のアミノ酸）。例としては、タンパク質輸送をもたらすリーダー配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい））が挙げられる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。Ｘ１が、それ自体のＮ末端メチオニンを欠く場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニンを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８アミノ酸を有する）である。
【００４９】
−Ｂ−は、任意のＣ末端アミノ酸配列である。−Ｂ−は、代表的に、短い（例えば、４０以下（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）のアミノ酸）。例としては、タンパク質輸送をもたらす配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい）を含む）またはタンパク質安定性を増強する配列が挙げられる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。
【００５０】
最も好ましくは、ｎは、２である。この型の２つの好ましいタンパク質は、以下である：Ｘ１は、９３６であり、そしてＸ２は、７４１であり；Ｘ１は、２８７であり、そしてＸ２は、９５３である。
【００５１】
２種の特に好ましい本発明のハイブリッドタンパク質は、以下のとおりである：
【００５２】
【表１】
これらの２種のタンパク質は、（特に、配列番号２を有する）ＮａｄＡと組み合わせて使用され得る［２４］。
【００５３】
ＯＭＶおよび／またはリポオリゴ糖を含まない混合物が、好ましい。
【００５４】
（外膜小胞）
精製したポリペプチド抗原を使用に代わる手段として、本発明は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの微小小胞［３０］、「ネイティブなＯＭＶ」［３１］、ブレブまたは外膜小胞［例えば、参考文献３２〜３７など］の調製物を利用し得る。これらの種々の調製物の全ては、本明細書中で、一般的な用語「ＯＭＶ」といわれる。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ＯＭＶは、遺伝子操作された細菌から調製され［３８〜４１］、例えば、免疫原性の増加（例えば、超発現免疫原（ｈｙｐｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ））、毒性の減少、莢膜多糖類合成の阻害、ＰｏｒＡ発現の下方制御または排除、ｌｇｔＢ発現［４２］の下方制御または排除などを行う。これらは、超ブレブ形成株から調製され得る［４３−４６］。非病原性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ由来の小胞が、含まれ得る［４７］。ＯＭＶは、洗浄剤を使用せずに調製され得る［４８、４９］。これらは、非Ｎｅｉｓｓｅｒｉａタンパク質をその表面上に発現し得る［５０］。これらは、ＬＰＳが枯渇し得る。これらは、重要な抗原としてリポオリゴ糖を保持し得る［４２、５１］。これらは、組換え抗原と混合され得る［３２、５２］。これらは、リポオリゴ糖免疫型の相可変性（ｐｈａｓｅ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ）を減少させるために処理され得る［５３］。ＯＭＶの混合物が、使用され得［３０］、これは、異なる血清型および／または血清型の亜群からの混合物を含み得る［３０、５４］。
【００５６】
異なるクラスＩ外膜タンパク質の血清型（例えば、それぞれ３つの血清型を提示する２つの異なる遺伝子操作された小胞集団を用いる６つの異なる血清型［５５、５６］、またはそれぞれ３種の血清型を提示する３つの異なる遺伝子操作された小胞集団を用いる９つの異なる血清型など）を有する細菌由来の小胞が、使用され得る。有用な血清型としては、以下が挙げられる：Ｐ１．７，１６；Ｐ１．５−１，２−２；Ｐ１．１９，１５−１；Ｐ１．５−２，１０；Ｐ１．１２−１，１３；Ｐ１．７−２，４；Ｐ１．２２，１４；Ｐ１．７−１，１；Ｐ１．１８−１，３，６。
【００５７】
（免疫化の結果）
免疫化の結果は、被験体中の抗体の産生であり、この抗体は、（ａ）この免疫原性ポリペプチドを認識し、そして（ｂ）複数の髄膜炎菌の血清型による感染に対する防御を行う。免疫化の代表的な結果は、少なくとも血清群Ｙの髄膜炎菌に対して殺菌性であり、そしてより代表的には血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの各々に対して殺菌性である抗体応答の形成である。
【００５８】
好ましい結果は、以下に対して有効な免疫化である：（ａ）血清群Ｙおよび血清群Ａ；（ｂ）血清群Ｙおよび血清群Ｂ；（ｃ）血清群Ｙおよび血清群Ｃ；（ｄ）血清群Ｙおよび血清群Ｗ１３５；など。少なくとも血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび血清群Ｙに対する免疫化が好ましい。防御はまた、他の（非病原性）血清群（例えば、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｘ、Ｚ、２９Ｅなど）に対して提供され得る。防御は、他のＮｅｉｓｓｅｒｉａ種（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｃｉｎｅｒｅａなど）に対して提供され得る。
【００５９】
免疫化の後、血清は、好ましくは、少なくとも１０２４（例えば、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８またはそれより高い、好ましくは、少なくとも２１４）の殺菌性力価を有する。すなわち、この血清は、参考文献２０に記載されるように、１／１０２４に希釈される場合、特定の株の試験細菌の少なくとも５０％を殺傷可能である。
【００６０】
（血清群および株）
本発明の方法および使用は、血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するためであり、そしてまた少なくとも血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび血清群Ｗ１３５のうちの１つに対して被験体を免疫するためである。
【００６１】
本発明の好ましいタンパク質は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｂにおいて見出されるアミノ酸配列を含む。血清群Ｂにおいて、好ましい株は、２９９６、ＭＣ５８、９５Ｎ４７７、および３９４／９８である。３９４／９８株は、時に、本明細書中で「ＮＺ」といわれ、この株は、ニュージーランド株である。
【００６２】
タンパク質２８７は、好ましくは、２９９６株由来であり、より好ましくは、３９４／９８株由来である。
【００６３】
タンパク質７４１は、好ましくは、血清群ＢのＭＣ５８株、２９９６株、３９４／９８株、または９５Ｎ４７７株に由来するか、または血清群Ｃの９０／１８３１１株に由来する。ＭＣ５８株が、より好ましい。
【００６４】
タンパク質９３６、タンパク質９５３およびＮａｄＡは、好ましくは、２９９６株由来である。
【００６５】
株は、下付き文字として示され得る（例えば、７４１ＭＣ５８は、ＭＣ５８株由来のタンパク質７４１である）。他に示されない限り、本明細書中に記載されるタンパク質（例えば、下付き文字を含まない）は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの２９９６株由来であり、この株は、「基準」株として理解され得る。しかし、本発明は、一般的に、株に制限されないことが理解される。上記されるように、タンパク質についての一般的な参照（例えば、「２８７」、「９１９」など）は、任意の株由来のタンパク質を含むことが理解され得る。これは、代表的に、２９９６に対して９０％以上（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上）の配列同一性を有する。
【００６６】
組成物は、特定のタンパク質抗原（例えば、７４１または２８７）を含有する場合、この組成物は、１種より多い改変体の形態で（例えば、同じタンパク質であるが、１種より多い株由来である）、その抗原を含有し得る。これらのタンパク質は、縦列タンパク質または別個のタンパク質として含まれ得る。
【００６７】
ハイブリッドタンパク質が使用される場合、ハイブリッド（すなわち、個々の−Ｘ−部分）内の個々の抗原は、１種以上の株に由来し得る。ｎ＝２である場合、例えば、Ｘ２は、Ｘ１と同じ株に由来し得るか、または異なる株に由来し得る。ｎ＝３である場合、これらの株は、以下：
【００６８】
【化１】
などであり得る。
【００６９】
（超毒性系統および殺菌性抗体応答）
一般的に、本発明の組成物は、被験体に投与された後、血清殺菌性抗体応答を誘導し得る。これらの応答は、これらの抗体応答は、マウスにおいて簡便に測定され、そしてワクチン効力の標準的な指標である［例えば、参考文献２０の巻末の注１４を参照のこと］。血清殺菌活性（ＳＢＡ）は、補体によって媒介される細菌殺傷を測定し、そしてヒトまたはウサギ乳仔の補体を用いてアッセイされ得る。ＷＨＯ基準は、ワクチンが、レシピエントの９０％より多くにおいて、少なくとも４倍のＳＢＡ上昇を誘導することを要求している。
【００７０】
狭い防御を提供するよりもむしろ、本発明の組成物は、１種より多い髄膜炎菌の血清群に対する殺菌性抗体応答を誘導し得る。血清群において、組成物は、１種より多い超毒性系統に対する抗体応答を誘導し得る。特に、この組成物は、以下の３種の超毒性系統のうちの２種または３種に対する殺菌性応答を誘導し得る：（ｉ）クラスターＡ４；（ｉｉ）ＥＴ５複合体；および（ｉｉｉ）系統３。この組成物は、さらに、超毒性系統の亜群Ｉ、亜群ＩＩＩ、亜群ＩＶ−１またはＥＴ−３７複合体のうちの１種以上、および他の系統（例えば、超侵襲性系統）に対する殺菌性抗体応答を誘導し得る。しかし、組成物は、特定の超毒性系統の各株およびあらゆる株に対する殺菌性抗体を誘導することを必要としない。
【００７１】
好ましい組成物は、以下に対する殺菌性応答を誘導し得る：（ａ）血清群Ｙの髄膜炎菌の８６０８００株、ＥＳ１３８２２株、ＥＳ１５０８５株および／またはＥＳ１４４８７株；（ｂ）血清群Ａの髄膜炎菌のＦ６１２４株；（ｃ）血清群Ｗ１３５の髄膜炎菌のＬＰＮ１７５９２株；（ｄ）血清群Ｃの髄膜炎菌のＣ１１株；（ｅ）血清群Ｂの髄膜炎菌の（ｉ）クラスターＡ４由来の９６１−５９４５株（Ｂ：２ｂ：Ｐ１．２１，１６）および／またはＧ２１３６株（Ｂ：−）；（ｉｉ）ＥＴ−５複合体由来のＭＣ５８株（Ｂ：１５：Ｐ１．７，１６ｂ）および／または４４／７６株（Ｂ：１５：Ｐ１．７，１６）；（ｉｉｉ）系統３由来の３９４／９８株（Ｂ：４：Ｐ１．４）および／またはＢＺ１９８株（Ｂ：ＮＴ：−）。
【００７２】
血清群Ｙの８６０８００株は、参考文献１の２９行目、および参考文献５７に認められる。血清群ＡのＦ６１２４株は、参考文献２０、参考文献５７および参考文献５８に認められる。血清群ＣのＣ１１株は、参考文献５９に開示される基準株のうちの１つである。血清群Ｂの９６１−５９４５株およびＧ２１３６株は、両方ともＮｅｉｓｓｅｒｉａ ＭＬＳＴ基準株である［参考文献６０におけるｉｄｓ ６３８および１００２］。ＭＣ５８株は、広範に利用可能であり（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−３３５）、そして参考文献１３において配列決定された株であった。４４／７６株は、広範に使用され、そして特徴付けられており（例えば、参考文献６１）、そしてＮｅｉｓｓｅｒｉａ ＭＬＳＴ基準株の１つである［参考文献６０におけるｉｄ ２３７；参考文献１における表２の３２行目］。３９４／９８株は、元々、ニュージーランドにおいて１９９８年に単離され、そしてこの株を用いたいくつかの公開された研究が存在している（例えば、参考文献６２および６３）。ＢＺ１９８株は、別のＭＬＳＴ基準株である［参考文献６０におけるｉｄ ４０９；参考文献１における表２の４１行目］。
【００７３】
（免疫原性組成物および医薬）
本発明の組成物は、免疫原性であり、そしてより好ましくはワクチン組成物である。本発明のワクチンは、予防的（すなわち、感染を防ぐため）または治療的（すなわち、感染を処置するため）のいずれかであり得るが、代表的には予防的である。
【００７４】
上記組成物のｐＨは、好ましくは６と８との間であり、好ましくは約７である。適切なｐＨは、緩衝剤の使用によって維持され得る。組成物が水酸化アルミニウム塩を含有する場合、ヒスチジン緩衝剤を使用することが好ましい［６４］。この組成物は、無菌であり得るか、そして／または発熱物質を含まないかもしれない。本発明の組成物は、ヒトに対して等張であり得る。
【００７５】
組成物は、バイアル中に存在してもよく、またはこれらは充填済み（ｒｅａｄｙ−ｆｉｌｌｅｄ）注射器中に存在してもよい。この注射器は針を備えて供給されても、針なしで供給されても良い。注射器は、単回用量のこの組成物を含み、一方、バイアルは、単回用量または複数回用量を含み得る。注射可能な組成物は、通常、液体溶液または液体懸濁物である。代替的に、これらは、注射前に水性ビヒクル中に溶解するか、または懸濁するための固形物形態（例えば、凍結乾燥された）で存在し得る。
【００７６】
本発明の組成物は、単位用量形態または複数用量形態でパッケージングされ得る。複数用量形態については、バイアルが、充填済み注射器よりも好ましい。有効投薬容量は、慣用的に確立され得るが、注射用組成物の代表的なヒト用量は、０．５ｍｌの容量を有する。
【００７７】
本発明の組成物が、使用前に即座の調製のために用いられるべき場合（例えば、成分が凍結乾燥形態である場合）、本発明は、キットを提供し、このキットは、２つのバイアルを備えてもよく、またはこのキットは、１つの充填済み注射器および１つのバイアルを備えてもよく、この注射器の内容物は、注射前にこのバイアルの内容物を再活性化するために用いられる。
【００７８】
本発明の免疫化は、哺乳動物（好ましくは、ヒト）におけるものである。このワクチンが、予防的用途のためのものである場合、ヒトは好ましくは小児（例えば、よちよち歩きの幼児または乳児）である；このワクチンが治療用途のためのものである場合、ヒトは好ましくは成人である。小児が意図されるワクチンはまた、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために、成人にも投与され得る。
【００７９】
これらの使用および方法は、好ましくは以下によって引き起こされる疾患の予防および／または処置のために好ましい：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（例えば、髄膜炎、敗血症（ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）、菌血症、淋病など）。細菌性および／または髄膜炎菌性の髄膜炎の予防および／または処置が好ましい。
【００８０】
治療処置の効力をチェックする１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＮｅｉｓｓｅｒｉａの感染をモニタリングすることを含む。予防的処置の効力をチェックする１つの方法は、この組成物の投与後に５つの基本抗原に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。本発明の組成物の免疫原性は、この組成物を、試験被験体（例えば、１２ヶ月齢〜１６ヶ月齢の小児、または動物モデル［６５］）に投与し、次いでＩｇＧ全体および高アビディティＩｇＧの血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含む標準的なパラメータを決定することにより、決定され得る。これらの免疫応答は、一般的に、この組成物の投与後約４週間で決定され、そして、この組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡ増加が好ましい。１用量より多くのこの組成物が投与される場合、１回より多くの投与後決定が行われ得る。
【００８１】
本発明の好ましい組成物は、患者において、容認可能な百分率のヒト被験体に対して各々の抗原成分についての血清防御基準より優れた抗体力価を与え得る。宿主がその力価より上ではその抗原に対してセロコンバージョンされると考えられる関連する抗体力価を有する抗原は周知であり、そしてこのような力価は、ＷＨＯのような機関により公開されている。好ましくは、被験体の統計学的に有意なサンプルのうちの８０％より多く、より好ましくは９０％より多く、さらにより好ましくは９３％より多く、そして最も好ましくは９６〜１００％が、セロコンバージョンされる。
【００８２】
本発明の組成物は一般に、患者に直接的に投与される。直接的な送達は、非経口注射（例えば、皮下に、腹腔内に、静脈内に、筋肉内に、または組織の間隙空間への）、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻腔内投与、眼内投与、耳投与、肺投与もしくは他の粘膜投与によって達成され得る。大腿または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針（例えば、皮下針）を介し得るが、針なしでの注射が、代替的に使用され得る。代表的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。
【００８３】
本発明は、全身免疫および／または粘膜免疫を惹起するために用いられ得る。
【００８４】
投薬処置は、単回用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであり得る。複数回用量は、初回免疫スケジュールおよび／または追加免疫スケジュールにおいて用いられ得る。初回投与スケジュールには、追加免疫投与スケジュールが続き得る。初回免疫投与の間（例えば、４〜１６週間の間）および初回免疫投与と追加免疫投与との間の適切なタイミングは、慣用的に決定され得る。
【００８５】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染は、身体の種々の領域に罹患し得、それゆえ、本発明の組成物は、種々の形態で調製され得る。例えば、この組成物は、液体溶液または懸濁物のいずれかとしての、注射可能物として調製され得る。注射前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁するのに適した固形物形態もまた、調製され得る（例えば、凍結乾燥組成物）。この組成物は、例えば、軟膏、クリームまたは粉末として局所投与のために調製され得る。この組成物は、例えば、錠剤もしくはカプセル、またはシロップ（必要に応じて香り付けされた）として経口投与のために調製され得る。この組成物は、微細粉末またはスプレーを用いて（例えば、吸入器として）肺投与のために調製され得る。この組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。この組成物は、例えば、スプレー、点滴剤、ゲルまたは散剤として、鼻腔投与、耳投与または眼投与のために調製され得る［例えば、参考文献６６および６７］。肺炎球菌糖［６８、６９］、肺炎球菌ポリペプチド［７０］、Ｈｉｂ糖［７１］、ＭｅｎＣ糖［７２］、およびＨｉｂ糖結合体およびＭｅｎＣ糖結合体の混合物［７３］の鼻投与に関する成功が報告されている。
【００８６】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原、ならびに必要に応じて、任意の他の成分を含有する。「免疫学的有効量」により、単回用量においてかまたはある一連のものの一部としてのいずれかでの、個体に対するその量の投与が、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置されるべき個体の健康状態および身体状態、年齢、処置されるべき個体の分類学群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、その個体の免疫系の抗体合成能力、所望される防御の程度、そのワクチンの処方、処置医によるその医学的状態の評価および他の関連因子に依存して変化する。この量が、慣習的な試験を通して決定され得る比較的広範な範囲にわたり、１用量あたりの個々の髄膜炎菌糖抗原の一般的な量は、（糖の質量として示して）１μｇ〜２０μｇの間（例えば、約１μｇ、約２．５μｇ、約４μｇ、約５μｇまたは約１０μｇ）であることが予想される。
【００８７】
（組成物のさらなる非抗原成分）
本発明の組成物は、上述の成分に加えて、代表的に、１以上の「薬学的に受容可能なキャリア」を含有し、このようなキャリアとしては、それ自体ではその組成物を受容する個体に有害な抗体の産生を誘導しない、任意のキャリアが挙げられる。適切なキャリアは、代表的に、大きく、ゆっくりと代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、スクロース［７４］、トレハロース［７５］、ラクトース、および脂質凝集物（例えば、油小滴またはリポソーム）である。このようなキャリアは、当業者に周知である。上記ワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、グリセロールなど）を含有し得る。さらに、補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質など）が存在し得る。無菌で発熱物質を含まず、リン酸緩衝化された生理食塩水は、代表的なキャリアである。薬学的に受容可能な賦形剤の徹底的な考察は、参考文献７６において入手可能である。
【００８８】
本発明の組成物は、特に、複数用量様式でパッケージングされる場合、抗菌剤を含有し得る。
【００８９】
本発明の組成物は、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート）（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０））を含有し得る。洗浄剤は、一般に、低いレベル（例えば、０．０１％未満）で存在する。
【００９０】
本発明の組成物は、ナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含有して張度を与え得る。１０±２ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌの濃度が、代表的である。
【００９１】
本発明の組成物は、一般的に、緩衝剤を含有する。リン酸緩衝剤が、代表的である。
【００９２】
本発明の組成物は、特にそれらが凍結乾燥される場合か、またはそれらが凍結乾燥された材料から再構成された材料を含む場合に、糖アルコール（例えば、マンニトール）または二糖類（例えば、ショ糖またはトレハロース）を、例えば、約１５ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ（例えば、２５ｍｇ／ｍｌ）で含有し得る。凍結乾燥のための組成物のｐＨは、凍結乾燥の前に、約６．１に調整され得る。
【００９３】
本発明のワクチンは、他の免疫調節剤とともに投与され得る。特に、組成物は通常、アジュバントを含む。本発明の組成物において使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：
（Ａ．無機質含有組成物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な無機質含有組成物としては、無機塩（例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩）が挙げられる。本発明は、無機塩（例えば、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩など）［例えば、参考文献７７の第８章および第９章を参照のこと］、または異なる無機化合物の混合物を含み、この化合物は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとり、そして、吸着が好ましい。この無機質含有組成物はまた、無機塩の粒子として処方され得る［７８］。
【００９４】
アルミニウムリン酸塩は、特に、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ糖抗原を含有する組成物において好ましく、そして代表的なアジュバントは、０．８４と０．９２の間のＰＯ４／Ａｌのモル比で、かつ０．６ｍｇ Ａｌ３＋／ｍｌで含有される非晶質のアルミニウムヒドロキシリン酸塩である。アルミニウムリン酸塩の低用量での吸着が使用され得る（例えば、一用量当たりの一結合体当たり、５０μｇと１００μｇの間のＡｌ３＋）。組成物において一より多くの結合体がある場合、全ての結合体が、吸着に必要とは限らない。
【００９５】
（Ｂ．油エマルジョン）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な油エマルジョン組成物としては、スクアレン−水エマルジョン（例えば、ＭＦ５９）が挙げられる［参考文献７７の第１０章；参考文献７９もまた参照のこと。］（５％スクアレン、０．５％ Ｔｗｅｅｎ ８０および０．５％ Ｓｐａｎ ８５、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を用いて、サブミクロン粒子に処方される）。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、使用され得る。
【００９６】
（Ｃ．サポニン処方物［参考文献７７の第２２章］）
サポニン処方物はまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根および花においてさえ見られる、不均一な群のステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドである。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ（モリナの木（Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅ））の樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウ（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から市販され得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製された処方物（例えば、ＱＳ２１）および液体処方物（例えば、ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販される。
【００９７】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されている。これらの技術を用いる特定の精製フラクションが同定されており、これらのフラクションとしては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、このサポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、参考文献８０に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（例えば、コレステロール）を含有し得る［８１］。
【００９８】
サポニンとコレステロールとの組み合わせが使用されて、免疫刺激複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特な粒子を形成し得る［参考文献７７の第２３章］。ＩＳＣＯＭとしてはまた、代表的に、リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリン）が挙げられる。任意の公知のサポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、このＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献８１〜８３にさらに記載されている。必要に応じて、このＩＳＣＯＭは、さらなる洗剤を含まなくてもよい［８４］。
【００９９】
サポニンベースのアジュバントの開発の概説は、参考文献８５および８６に見られ得る。
【０１００】
（Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造体は、一般的に、必要に応じてリン脂質と組み合わされるかまたはリン脂質とともに処方されたウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。それらは、一般的に、非病原性で非複製性であり、そして一般的に、あらゆる天然ウイルスゲノムを含まない。このウイルスタンパク質は、組換え的に生成されてもよく、またはウイルス全体から単離されてもよい。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用のために適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（例えば、コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビスウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒトパピローマウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡファージ由来のタンパク質、Ｑβファージ由来のタンパク質（例えば、コートタンパク質）、ＧＡファージ由来のタンパク質、ｆｒファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質およびＴｙ由来のタンパク質（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献８７〜９２においてさらに考察されている。ビロソームは、例えば、参考文献９３においてさらに考察されている。
【０１０１】
（Ｅ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、細菌誘導体または微生物誘導体（例えば、腸内細菌リポポリサッカリド（ＬＰＳ）の無毒性誘導体、リピドＡ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドならびにＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒性誘導体）が挙げられる。
【０１０２】
ＬＰＳの無毒性誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、３ 脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡと、４、５または６アシル化鎖との混合物である。３ 脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい「小さい粒子」形態は、参考文献９４に開示されている。３ｄＭＰＬのこのような「小さい粒子」は、０．２２μｍメンブレンを通って滅菌濾過されるために充分小さい［９４］。他の無毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ模倣物（例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９））が挙げられる［９５，９６］。
【０１０３】
リピドＡ誘導体としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来のリピドＡ誘導体（例えば、ＯＭ−１７４）が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献９７および９８に記載されている。
【０１０４】
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（グアノシンへのホスフェート結合により連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）を含むヌクレオチド配列が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む、二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。
【０１０５】
ＣｐＧは、ヌクレオチド改変体／アナログ（例えば、ホスホロチオエート改変体）を含み得、そして、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献９９、１００および１０１は、可能なアナログ置換（例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置換）を開示している。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１０２〜１０７において、さらに考察されている。
【０１０６】
このＣｐＧ配列（例えば、ＧＴＣＧＴＴモチーフまたはＴＴＣＧＴＴモチーフ）は、ＴＬＲ９に導かれ得る［１０８］。このＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ）は、Ｔｈ１免疫応答誘導に特異的であってもよく、または、このＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞応答誘導に、より特異的であってもよい。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１０９〜１１１において考察されている。好ましくは、このＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１０７】
好ましくは、このＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端がレセプター認識のために接近可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列がそれらの３’末端で結合されて、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成し得る。例えば、参考文献１０８および１１２〜１１４を参照のこと。
【０１０８】
細菌ＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒化誘導体は、本発明においてアジュバントとして使用され得る。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ由来（「ＣＴ」）または百日咳由来（「ＰＴ」）である。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１５に記載されており、そして、非経口的アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１６に記載されている。このトキシンまたはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロトキシンの形態である。好ましくは、このＡサブユニットは、無毒化変異を含み；好ましくは、このＢサブユニットは、変異していない。好ましくは、このアジュバントは、無毒化ＬＴ変異体（例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴ−Ｇ１９２）である。ＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒化誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用は、参考文献１１７〜１２４において見出され得る。アミノ酸置換についての多くの参考文献は、好ましくは、参考文献１２５に記載のＡＤＰ−リボシル化トキシンのＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。参考文献１２５は、特に、本明細書中で、その全体が参考として援用される。
【０１０９】
（Ｆ．ヒト免疫調節因子）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なヒト免疫刺激因子としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１２６］など）［１２７］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子）が挙げられる。
【０１１０】
（Ｇ．生体接着因子および粘膜接着因子）
生体接着因子および粘膜接着因子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。適切な生体接着因子としては、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア［１２８］または粘膜接着因子（例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体）が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る［１２９］。
【０１１１】
（Ｈ．微粒子）
微粒子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。生分解性かつ無毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）と、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とから形成される微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして、最も好ましくは、直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、必要に応じて処理されて、（例えば、ＳＤＳによって）負に荷電した表面または（例えば、カチオン性洗剤（例えば、ＣＴＡＢ）によって）正に荷電した表面を有する。
【０１１２】
（Ｉ．リポソーム（参考文献７７の第１３章および第１４章））
アジュバントとしての使用のために適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１３０〜１３２に記載されている。
【０１１３】
（Ｊ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる［１３３］。このような処方物は、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１３４］、ならびに少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤またはポリオキシエチレンアルキルエステル界面活性剤［１３５］をさらに含む。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群より選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１１４】
（Ｋ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、参考文献１３６および１３７において記載されている。
【０１１５】
（Ｌ．ムラミルペプチド）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【０１１６】
（Ｍ．イミダゾキノロン化合物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なイミダゾキノロン化合物の例としては、参考文献１３８および１３９にさらに記載される、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびそのホモログ（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）が挙げられる。
【０１１７】
本発明はまた、上に同定されるアジュバントの１つ以上の局面の組み合わせを含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において使用され得る：（１）サポニンおよび水中油型エマルジョン［１４０］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［１４１］：（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、＋ステロール）［１４２］；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組み合わせ［１４３］；（６）マイクロフルイダイズされてサブミクロンエマルジョンにされるか、またはボルテックスされてより大きい粒子サイズのエマルジョンを生じるかのいずれかの、１０％ スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０ＴＭ、５％ プルロニックブロック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋ）ポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ；（７）２％ スクアレン、０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁成分を含むＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））；ならびに（８）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの無毒性誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）。
【０１１８】
免疫刺激因子として作用する他の物質は、参考文献７７の第７章に開示されている。
【０１１９】
水酸化アルミニウムアジュバントの使用またはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が、特に好ましく、そして抗原は、概して、これらの塩に吸着される。この組成物がＨｉｂ抗原を含有する場合、水酸化アルミニウムは、好ましくは、アジュバントとして回避される。アジュバントにリン酸アルミニウムが使用され、かつ抗原がアジュバントに吸着しないことが望まれる場合、これは、溶液中に遊離型のリン酸イオンを含むことにより（例えば、リン酸緩衝液の使用により）好まれる。吸着の防止はまた、抗原／アジュバントを混合する間、正しいｐＨを選択すること、適切な電荷ゼロの点を有するアジュバントを選択すること、および組成物中の異なる抗原に対して適切な混合順序を選択することによって、成し遂げられ得る［１４４］。
【０１２０】
リン酸カルシウムは、別の好ましいアジュバントである。
【０１２１】
（さらなる抗原）
本発明の組成物は、５つの基本髄膜炎菌性タンパク質抗原を含有する。これらの組成物はまた、５つの基本抗原以外の髄膜炎菌性タンパク質抗原は含有し得ないにもかかわらず、さらなる抗原を含有し得る。封入用のさらなる抗原は、例えば、以下のものであり得る：
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ由来の糖抗原；
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｗ１３５ならびに／またはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｙ由来の糖抗原（参考文献５に開示される血清群Ｃ由来のオリゴ糖または参考文献８のオリゴ糖）（以下を参照のこと）；
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の糖抗原［例えば、１８０、１８１ １８２］；
−Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、不活性化ウイルス）［例えば、１４５、１４６］；
−Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、表面抗原および／またはコア抗原）［例えば、１４６、１４７］；
−ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）［例えば、参考文献１４８の第３章］（例えば、ＣＲＭ１９７変異体［例えば、１４９］）；
−破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド［例えば、参考文献１４８の第４章］）；
−必要に応じて、またパータクチン（ｐｅｒｔａｃｔｉｎ）および／または凝集原２および凝集原３との組合わせで、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原（例えば、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の百日咳ハロ毒素（ＰＴ）および線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ））［例えば、参考文献１５０および１５１］。細胞性百日咳抗原が使用され得る；
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来の外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（例えば、参考文献３４、参考文献３５、参考文献３７、参考文献１５２などに開示される調製物）；
−ポリオ抗原［例えば、１５３、１５４」（例えば、ＯＰＶまたは、好ましくはＩＰＶ）。
【０１２２】
この組成物は、一以上のこれらさらなる抗原を含有し得る。抗原は、各々代表的に、少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。概して、任意の所定の抗原の濃度は、この抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分である。実際の免疫原性（例えば、ＥＬＩＳＡ力価）は減少され得るが、個々の糖抗原の防御効果は、これらを結合することによって除去されないことが好ましい。
【０１２３】
ジフテリア抗原がこの組成物に含有される場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含有することもまた、好ましい。同様に、破傷風抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含有することもまた、好ましい。同様に、百日咳抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含有することもまた、好ましい。このようなＤＴＰ組合わせは、凍結乾燥された結合体の再構成に使用され得る。
【０１２４】
糖抗原または炭水化物抗原が使用される場合、この抗原は、好ましくは、免疫原性を増強するためにキャリアタンパク質に結合体化される（以下を参照のこと）。
【０１２５】
有毒性タンパク質抗原は、必要に応じて、解毒され得る（例えば、化学的手法および／または遺伝子的手法による百日咳毒素の解毒［１５１］）。
【０１２６】
本発明の組成物において、タンパク質抗原を使用することの代替手段として、この抗原をコードする核酸が使用され得る［例えば、参考文献１５５〜１６３］。したがって、本発明の組成物のタンパク質成分は、このタンパク質をコードする核酸（好ましくは、ＤＮＡ、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ）によって置き換えられ得る。同様に、本発明の組成物は、糖抗原を模倣するタンパク質（例えば、ミモトープ（ｍｉｍｏｔｏｐｅ）［１６４］または抗イディオタイプ抗体）を含有し得る。これらは、個々の糖成分に置き換えられ得るか、または個々の糖成分を追加し得る。例として、ワクチンは、糖自身の代わりに、ＭｅｎＣ［１６５］莢膜多糖のペプチド模倣物、またはＭｅｎＡ［１６６］莢膜多糖のペプチド模倣物を含み得る。
【０１２７】
特に好ましい本発明の組成物は、以下のいずれかまたは両方を含有する：（ａ）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型由来の糖抗原；および／または（ｂ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原。これらはまた、所定の血清群に由来する糖が、この血清群に対する防御を提供するためのものではないポリペプチドおよび／またはＯＭＶ中にのみ包含され得るときを除いて、髄膜炎菌血清群Ｙ、髄膜炎菌血清群Ｗ１３５、髄膜炎菌血清群Ｃ、および髄膜炎菌血清群Ａ由来の糖抗原を含有する。
【０１２８】
（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型）
この組成物が、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型抗原を含有する場合、それは、代表的に、Ｈｉｂ莢膜糖抗原である。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ由来の糖抗原は周知である。
【０１２９】
有利なことに、Ｈｉｂ糖は、この免疫原性を増強するため、とりわけ子供において、キャリアタンパク質に共有結合される。概して、多糖結合体の調製、および特にＨｉｂ莢膜多糖の調製は、よく記録される［例えば、参考文献１６７〜１７５など］。本発明は、任意の適切なＨｉｂ結合体を使用し得る。適切なキャリアタンパク質は、以下に記載され、Ｈｉｂ糖に対する好ましいキャリアはＣＲＭ１９７（「ＨｂＯＣ」）、破傷風トキソイド（「ＰＲＰ−Ｔ」）およびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜複合体（「ＰＲＰ−ＯＭＰ」）である。
【０１３０】
この結合体の糖部分は多糖であり得る（例えば、全長ポリリボシルリビトールホスフェート（ＰＲＰ））が、しかしオリゴ糖（例えば、分子量約１〜約５ｋＤａ）を形成するために多糖を加水分解することが好ましい。
【０１３１】
好ましい結合体は、アジピン酸リンカーを介してＣＲＭ１９７に共役結合したＨｉｂオリゴ糖を含む［１７６、１７７］。破傷風トキソイドはまた、好ましいキャリアである。
【０１３２】
Ｈｉｂ抗原の投与は、好ましくは≧０．１５μｇ／ｍｌ、およびより好ましくは≧１μｇ／ｍｌの濃度の抗ＰＲＰ抗体を生じる。
【０１３３】
本発明の組成物は、一より多くのＨｉｂ抗原を含み得る。
【０１３４】
組成物が、Ｈｉｂ糖抗原を含有する場合、この組成物は水酸化アルミニウムアジュバントも含有しないことが好ましい。この組成物が、リン酸アルミニウムアジュバントを含有する場合、Ｈｉｂ抗原はアジュバントに吸着されても［１７８］、吸着されなくてもよい［１７９］。
【０１３５】
Ｈｉｂ抗原は、（例えば、髄膜炎菌性抗原とともに）凍結乾燥され得る。
【０１３６】
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）
この組成物が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原を含有する場合、これは、代表的に、好ましくは、キャリアタンパク質に結合体化される莢膜糖抗原である［例えば、参考文献１８０〜１８２］。一より多くのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの血清型由来の糖を含有することが好ましい。例えば、２３の異なる血清型由来の多糖の混合物が、５と１１との間の異なる血清型由来の多糖との結合体化ワクチンとして広く使用される［１８３］。例えば、ＰｒｅｖＮａｒＴＭ［１８４］は、各糖が還元的アミノ化によりＣＲＭ１９７に個々に結合される状態で、各糖が０．５ｍｌの用量当たり２μｇ（４μｇの血清型６Ｂ）で、かつ、結合体がリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される状態で、７つの血清型（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ）由来の抗原を含む。本発明の組成物は、好ましくは、少なくとも血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆを含有する。結合体は、リン酸アルミニウム上に吸着され得る。
【０１３７】
肺炎球菌由来の糖抗原を使用することの代替手段として、この組成物は、一以上のポリペプチド抗原を含有し得る。肺炎球菌のいくつかの株のゲノム配列は入手可能であり［１８５、１８６］、ワクチン学を覆す対象となり［１８７〜１９０］、適切なポリペプチド抗原を同定し得る［１９１、１９２］。例えば、この組成物は、以下の抗原のうち一以上を含有し得る：参考文献１９３で規定される、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＥ、ＳｐｓＡ、ＬｙｔＢ、ＬｙｔＣ、ＬｙｔＡ、Ｓｐ１２５、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１３０およびＳｐ１３０。この組成物は、一より多く（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４）のこれら抗原を含み得る。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、この組成物は、肺炎球菌由来の糖抗原およびポリペプチド抗原の両方を含有し得る。これらは、単純な混合で使用され得るか、または肺炎球菌の糖抗原は、肺炎球菌のタンパク質に結合体化され得る。このような実施形態にとって適切なキャリアタンパク質としては、前の段落において列挙される抗原が挙げられる［１９３］。
【０１３９】
肺炎球菌抗原は（例えば、髄膜炎菌抗原および／またはＨｉｂ抗原とともに）凍結乾燥され得る。
【０１４０】
（髄膜炎菌血清群Ｙ、髄膜炎菌血清群Ｗ１３５、髄膜炎菌血清群Ｃおよび髄膜炎菌血清群Ａ）
上記のように、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙに対する多糖ワクチンが、長年知られてきた。これらのワクチン（ＭＥＮＣＥＶＡＸ ＡＣＷＹＴＭおよびＭＥＮＯＭＵＮＥＴＭ）は、生物の莢膜多糖ベースであり、青年および成人において有効であるにもかかわらず、それらは、乏しい免疫応答および防御の短い継続時間を生じ、そして乳児において使用され得ない。
【０１４１】
これらのワクチンにおける結合体化されていない多糖抗原とは対照的に、最近認可された血清群Ｃワクチン（ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ［４］、ＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭおよびＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭ）は結合体化された糖を含有する。ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭおよびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭは、ＣＲＭ１９７キャリアに結合体化されたオリゴ糖抗原を有し、一方で、ＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭは、破傷風トキソイドキャリアに結合体化された完全な多糖（脱Ｏ−アセチル化多糖）を使用する。
【０１４２】
本発明の組成物は、好ましくは、一以上の髄膜炎菌血清群Ｙ、髄膜炎菌血清群Ｗ１３５、髄膜炎菌血清群Ｃおよび髄膜炎菌血清群Ａ由来の莢膜糖抗原を含有し、ここでこの抗原はキャリアタンパク質に結合体化され、そして必要に応じて、オリゴ糖である。Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ莢膜多糖およびそれらの結合体は、参考文献７および８に記載のように調製され得る。
【０１４３】
一用量当たりの各髄膜炎菌性糖抗原の代表的な量は、１μｇと２０μｇとの間（例えば、約１μｇ、約２．５μｇ、約４μｇ、約５μｇ、または約１０μｇ（糖として表示））である。
【０１４４】
混合物が、血清群Ａおよび血清群Ｃの両方由来の莢膜糖を含む場合、ＭｅｎＡ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は、１より大きく（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）あり得る。混合物が、血清群Ｙならびに、血清群Ｃおよび血清群Ｗ１３５の一方、あるいは両方に由来する莢膜糖を含む場合、ＭｅｎＹ糖：ＭｅｎＷ１３５糖の比（ｗ／ｗ）は、１より大きく（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）あり得、そして／または、ＭｅｎＹ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は、１より小さく（例えば、１：２、１：３、１：４、１：５以下）あり得る。血清群Ａ由来の糖：血清群Ｃ由来の糖：血清群Ｗ１３５由来の糖：血清群Ｙ由来の糖についての好ましい比（ｗ／ｗ）は、以下である： １：１：１：１； １：１：１：２； ２：１：１：１； ４：２：１：１； ８：４：２：１； ４：２：１：２； ８：４：１：２； ４：２：２：１； ２：２：１：１； ４：４：２：１； ２：２：１：２； ４：４：１：２；および２：２：２：１。血清群Ｃ由来の糖：血清群Ｗ１３５由来の糖：血清群Ｙ由来の糖についての好ましい比（ｗ／ｗ）は、以下である： １：１：１； １：１：２； １：１：１； ２：１：１； ４：２：１； ２：１：２； ４：１：２； ２：２：１；および２：１：１。実質的に各糖の同等の質量を使用することが好ましい。
【０１４５】
莢膜糖は、概して、オリゴ糖形態で使用される。これらは、精製された莢膜多糖の断片化によって（例えば、加水分解によって）簡便に形成され、その後に、通常、所望のサイズのフラグメントが精製される。
【０１４６】
多糖の断片化は、好ましくは、３０より小さい（例えば、血清群Ａについて１０と２０の間、好ましくは約１０；血清群Ｗ１３５および血清群Ｙについて１５と２５の間；好ましくは約１５〜２０；血清群Ｃについて１２と２２の間など）オリゴ糖において、最終的な平均重合度（ＤＰ）を生じるように実施される。ＤＰは、イオン交換クロマトグラフィーによってかまたは比色アッセイによって、簡便に測定され得る［１９４］。
【０１４７】
加水分解が実施される場合、この加水分解物は、概して、短い長さのオリゴ糖を除去するための大きさにされ得る［１９５］。これは、種々の方法（例えば、限外濾過後のイオン交換クロマトグラフィー）において、成し遂げられ得る。好ましくは、血清群Ａについて、約６以下の重合度を有するオリゴ糖は除去され、そして好ましくは、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙについて、約４より少ない重合度を有するオリゴ糖は除去される。
【０１４８】
好ましいＭｅｎＣ糖抗原は、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭにおいて使用されたように、参考文献５に開示される。
【０１４９】
糖は、好ましくは、（任意の断片化、結合体化、修飾などを含めて）別々に調製され、次いで本発明の組成物を生じるために混合される。
【０１５０】
しかしながら、この組成物が、血清群Ａ由来の莢膜糖を含有する場合、加水分解の可能性を最小限に抑えるために、血清群Ａの糖は、使用直前まで、他の糖に混合されないことが好ましい。これは、血清群Ａ成分（代表的には適切な賦形剤とともに）を凍結乾燥形態にし、そして他の血清群成分（これもまた適切な賦形剤とともに）を液体形態にすることにより、使用準備が整ったときに、液体成分を、この凍結乾燥ＭｅｎＡ成分を再構成するように使用することによって、簡便に成し遂げられ得る。アルミニウム塩アジュバントが使用される場合、液体ワクチンを含むバイアル内にアジュバントを含むこと、およびＭｅｎＡ成分をアジュバントなしで凍結乾燥させることが好ましい。したがって、本発明の組成物は、以下のものを備えるキットから調製され得る：（ａ）凍結乾燥形態の、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ由来の莢膜糖；および（ｂ）液体形態の、この組成物由来のさらなる抗原。
【０１５１】
（共有結合性結合）
本発明の組成物における莢膜糖は、通常、キャリアタンパク質に結合される。結合は、糖をＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原へ転換し、よって、免疫記憶のための初回抗原刺激を可能とすることから、一般に、結合は、糖の免疫原性を増強する。結合は、小児ワクチンにとって特に有用であり、周知の技術である［例えば、参考文献１９６および１６７〜１７５で概説される］。
【０１５２】
好ましいキャリアタンパク質は、細菌性毒素または細菌性トキソイド（例えば、ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイド）である。ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体［１９７〜１９９］は特に好ましい。他の適したキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［２００］、合成ペプチド［２０１、２０２］、熱ショックタンパク質［２０３、２０４］、百日咳タンパク質［２０５、２０６］、サイトカイン［２０７］、リンホカイン［２０７］、ホルモン［２０７］、増殖因子［２０７］、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［２０８］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［２０９、２１０］、肺炎球菌の表面タンパク質ＰｓｐＡ［２１１］、鉄取り込みタンパク質［２１２］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［２１３］などが挙げられる。好ましいキャリアは、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄ、およびＣＲＭ１９７である。
【０１５３】
本発明の組成物内で、（例えば、キャリア抑制の危険を減少させるため）一より多くのキャリアタンパク質を使用することが可能である。従って、異なるキャリアタンパク質は、異なる血清群に使用され得る（例えば、血清群Ａの糖はＣＲＭ１９７に結合され得、一方で血清群Ｃの糖は破傷風トキソイドに結合され得る）。特定の糖抗原に一より多くのタンパク質を使用することもまた可能である（例えば、血清群Ａの糖は二つの群であり得、ＣＲＭ１９７に結合されたものと、破傷風トキソイドに結合されるものとを含む）。しかしながら、概して、同一のキャリアタンパク質を全ての糖に使用することが好ましい。
【０１５４】
単一キャリアタンパク質は一より多くの糖抗原を保有し得る［２１４］。例えば、単一キャリアタンパク質は、そのキャリアタンパク質に結合された血清群Ａおよび血清群Ｃ由来の糖を有し得る。この目的を成し遂げるため、糖は結合反応の前に混合され得る。しかしながら、概して、各血清群のための別個の結合体を有することが好ましい。
【０１５５】
１：５（すなわち、過剰のタンパク質）と５：１（すなわち、過剰の糖）の間の糖：タンパク質の比（ｗ／ｗ）での結合が好ましい。１：２と５：１の間の比が好ましく、１：１．２５と１：２．５の間の比はより好ましい。過剰のキャリアタンパク質は、ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣについて好ましくあり得る。
【０１５６】
結合体は、遊離のキャリアタンパク質との結合において使用され得る［２１５］。ある所定のキャリアタンパク質が、本発明の組成物中に遊離型形態および結合体化形態の両方おいて存在する場合、非結合体化形態は、好ましくは、全体として、その組成物中のキャリアタンパク質の総量の５％以下であり、より好ましくは、２重量％以下で与える。
【０１５７】
任意の適した結合反応は、必要な場合、任意の適したリンカーとともに使用され得る。
【０１５８】
糖は、典型的に、結合の前に活性化されるか、または官能化される。例えば、活性化は、ＣＤＡＰ（例えば、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジウムテトラフルオロボレート［２１６、２１７など］）のようなシアン化試薬を含む。他の適した技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する；参考文献１７３への序論をまた参照のこと）。
【０１５９】
リンカー基を介した連結は、任意の公知の手順（例えば、参考文献２１８および２１９に記載された手順）を利用して作られ得る。一つの型の連結は、多糖の還元的アミノ化、アジピン酸リンカー基の一端と、結果として生じるアミノ基とのカップリング、およびその後、アジピン酸リンカー基の他の一端へのタンパク質のカップリングを含む［１７１、２２０、２２１］。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド［２２２］、ニトロフェニル−エチルアミン［２２３］、ハロゲン化ハロアシル［２２４］、グリコシド結合［２２５］、６−アミノカプロン酸［２２６］、ＡＤＨ［２２７］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［２２８］などが挙げられる。リンカーの使用に代わる手段として、直接的結合が使用され得る。そのタンパク質への直接的結合は、例えば、参考文献２２９および参考文献２３０に記載されるような多糖の酸化とその後のタンパク質との還元的アミノ化を含み得る。
【０１６０】
糖へのアミノ基の導入（例えば、−ＮＨ２での末端＝Ｏ基の交換による導入）およびその後のアジピン酸ジエステル（例えば、アジピン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドジエステル）での誘導化、ならびにキャリアタンパク質との反応を包含するプロセスは、好ましい。別の好ましい反応は、プロテインＤキャリア（例えば、ＭｅｎＡまたはＭｅｎＣのためのキャリア）でのＣＤＡＰ活性化を使用する。
【０１６１】
結合後、遊離型糖および結合体化糖は、分離され得る。疎水性クロマトグラフィー、タンジェンシャル限外濾過、ダイアフィルトレーションなどを包含する多くの適した方法がある［参考文献２３１および２３２などをまた参照のこと］。
【０１６２】
本発明の組成物が結合体化されたオリゴ糖を含有する場合、オリゴ糖の調製は結合に先行することが好ましい。
【０１６３】
精製に代わる手段として、莢膜糖は、全合成または部分合成によって得られ得る（例えば、Ｈｉｂの合成は参考文献２２３に開示され、そしてＭｅｎＡの合成は参考文献２３４に開示される）。
【０１６４】
（さらなるかつ代わりの血清群Ｂポリペプチド抗原）
本発明は、被験体に投与後、その被験体内において抗体反応を誘導し得る組成物を使用し、ここでその抗体反応は、少なくとも髄膜炎菌の血清群Ｙに対して防御的である。ＮａｄＡ、７４１、９３６、９５３、および２８７は、この防御を成し遂げるための好ましい抗原であるが、本発明の組成物（必要に応じて５つの基本抗原のうちの一以上との組合わせた組成物）内に含有され得る他のＭｅｎＢポリペプチド抗原は、以下のアミノ酸配列のうちの一つを含むものを含む：参考文献１５由来の配列番号６５０；参考文献１５由来の配列番号８７８；参考文献１５由来の配列番号８８４；参考文献１６由来の配列番号４；参考文献１７由来の配列番号５９８；参考文献１７由来の配列番号８１８；参考文献１７由来の配列番号８６４；参考文献１７由来の配列番号８６６；参考文献１７由来の配列番号１１９６；参考文献１７由来の配列番号１２７２；参考文献１７由来の配列番号１２７４；参考文献１７由来の配列番号１６４０；参考文献１７由来の配列番号１７８８；参考文献１７由来の配列番号２２８８；参考文献１７由来の配列番号２４６６；参考文献１７由来の配列番号２５５４；参考文献１７由来の配列番号２５７６；参考文献１７由来の配列番号２６０６；参考文献１７由来の配列番号２６０８；参考文献１７由来の配列番号２６１６；参考文献１７由来の配列番号２６６８；参考文献１７由来の配列番号２７８０；参考文献１７由来の配列番号２９３２；参考文献１７由来の配列番号２９５８；参考文献１７由来の配列番号２９７０；参考文献１７由来の配列番号２９８８、または（ａ）上記の配列に対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上）を有し；そして／または（ｂ）上記配列由来の少なくともｎの連続的アミノ酸のフラグメントを含むものであって、ここでｎは７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０以上）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。（ｂ）のための好ましいフラグメントは、関連する配列由来のエピトープを含む。これらのポリペプチドのうちの一より多く（例えば、２、３、４、５、６）が含まれ得る。
【０１６５】
抗原であるトランスフェリン結合タンパク質および／またはＨｓｆタンパク質もまた使用され得る［２３５］。ＮｓｐＡタンパク質もまた、好ましくは、参考文献２３７のように、組換え発現され、そして精製されて、使用され得る［２３６］。
【０１６６】
（一般）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「構成する（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、もっぱらＸから構成されるか、またはさらなる何か（例えば、Ｘ＋Ｙ）を含有し得る。
【０１６７】
数値ｘに関する用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１６８】
単語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、「完全に（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ）」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｆｒｅｅ）」の組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要に応じて、その単語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、本発明の定義から省略され得る。
【０１６９】
二つのアミノ酸配列間の配列同一性割合の言及は、整列化された場合に、その割合のアミノ酸が、二つの配列を比較した際に同一であることを意味する。この整列化および相同性パーセントまたは配列同一性は、当該分野で公知のソフトウェア・プログラム（例えば、参考文献２３８の第７．７．１８章に記載されるソフトウェア・プログラム）を使用して決定され得る。好ましい整列化は、１２のギャップオープンペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティを有するアフィンギャップ検索（６２のＢＬＯＳＵＭマトリクス）を利用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献２３９において教示される。
【０１７０】
用語「ポリペプチド」は、一般に、アミノ酸残基のポリマーをいい、そしてその生成物の最短の長さに制限されない。従って、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などが、この定義に包含される。全長タンパク質およびそのフラグメントの両方は、この定義により包含される。代表的に、本発明において有用なポリペプチドは、意図される用途に対して適切な最長の長さを有し得る。一般に、最長の長さは重要でなく、そして当業者によって容易に選択され得る。
【０１７１】
本発明のポリペプチドは、多くの方法によって、例えば、化学合成によって（少なくとも部分的に）、プロテアーゼを使用するより長いポリペプチドの消化によって、ＲＮＡの翻訳によって、細胞培養物（例えば、組換え発現由来の細胞培養物）からの精製によって、生物体自体（例えば、細菌培養後の生物体）からの精製によって、細胞株供給源からの精製、などによって、調製され得る。４０未満のアミノ酸長のペプチドの産生のための好ましい方法は、インビトロ化学合成［２４０、２４１］を含む。固相ペプチド合成、例えば、ｔＢｏｃ化学反応またはＦｍｏｃ化学反応［２４２］に基づく方法は、特に好ましい。酵素的合成［２４３］もまた、部分的かまたは完全に使用され得る。化学合成に対する代替物として、生物学的合成がまた使用され得、例えば、翻訳によってポリペプチドが産生され得る。この生物学的合成は、インビトロまたはインビボで実行され得る。生物学的方法は、一般に、Ｌ−アミノ酸に基づくポリペプチドの産生に限定されるが、翻訳機構の操作（例えば、アミノアシルｔＲＮＡ分子の操作）を使用して、Ｄ−アミノ酸の導入（または、他の非天然アミノ酸（例えば、ヨードチロシンまたはメチルフェニルアラニン、アジドホモアラニンなど）の導入［２４４］）も可能であり得る。しかしながら、Ｄ−アミノ酸が含まれる場合、化学合成を使用することが好ましい。本発明のポリペプチドは、Ｃ末端および／またはＮ末端において共有結合性の改変を有し得る。
【０１７２】
本発明のポリペプチドは、種々の形態（例えば、天然の形態、融合形態、グリコシル化形態、非グリコシル化形態、脂質付加形態、非脂質付加形態、リン酸化形態、非リン酸化形態、ミリストイル化形態、非ミリストイル化形態、単量体形態、多量体形態、部分的形態、変性形態、など）をとり得る。精製されたポリペプチドは、それが発現される生物体全体から分かれており、そして分離されている。
【０１７３】
用語「核酸」は、一般に、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそれらのアナログを含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を意味する。これはまた、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを含む。この用語はまた、ＤＮＡアナログまたはＲＮＡアナログ（例えば、改変された骨格（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホロチオエート）または改変された塩基を含むもの）を含む。従って、本発明は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸、分枝核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを含む。本発明の核酸がＲＮＡ形態をとる場合、この核酸は５’キャップを有してもよいし、有さなくてもよい。
【０１７４】
本発明の核酸は、多く方法によって、例えば、化学合成によって（少なくとも部分的に）、ヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）を使用するより長い核酸の消化によって、より短い核酸の（例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを使用する）接続によって、遺伝子ライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーから、などによって調製され得る。
【０１７５】
クローニングまたは精製などを容易にするために核酸中またはポリペプチド中に含まれる配列は、必ずしも本発明に寄与するのではなく、省略され得るかまたは除外され得る。
【実施例】
【０１７６】
（発明を実施するための形態）
（ポリペプチド）
ΔＧ２８７−９５３ハイブリッドポリペプチド、９３６−ΔＧ７４１ハイブリッドポリペプチド、およびＮａｄＡ（ＮＬ）（Ｃ）ポリペプチドを、参考文献２４に開示されるように調製した。これらのポリペプチドは、髄膜炎菌の血清型Ｂ株の遺伝子から取られた配列によってコードされる。
【０１７７】
これら３つのポリペプチドを混合して、合わせた処方物（これは、水酸化アルミニウムアジュバントを含む）を得た。この処方物を使用してマウスを免疫し、そして免疫血清の殺菌力価を、血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙにおける髄膜炎菌株に対して評価した。１１株に対する結果は、以下のとおりであった：
【０１７８】
【表２】
従って、これらの混合組成物は、血清群Ｂに対して殺菌活性である血清を惹起するのに有効であった。この血清群Ｂは、ポリペプチド中に含まれるアミノ酸配列に対する起源の血清群である。同範囲の力価は、血清群Ａおよび血清群Ｃに対しても認められ、そしてわずかに低い力価が、血清群Ｗに対して認められた。驚くべきことに、最も高い力価は、血清群Ｙにおける株に対して認められた。
【０１７９】
さらに、血清群Ｙ株に対して認められた力価は、４価のＡ／Ｃ／Ｗ１３５／Ｙの複合ワクチン［８］を使用して得られた力価と等価であった。
【０１８０】
【表３】
従って、本発明者らは、病原性血清群（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹ）の各々に由来する髄膜炎菌に対して、ポリペプチド抗原を使用し、かつ莢膜糖を使用せずに、有効な免疫反応を初めて達成した。
【０１８１】
本発明は、例示として記載されているにすぎずないこと、および本発明の範囲と精神を保持しつつ、改変がなされ得ることが理解される。
【０１８２】
（参考文献 これらの内容は参考として本明細書中に援用される）
【０１８３】
【化２】
【０１８４】
【化３】
【０１８５】
【化４】
【０１８６】
【化５】
【０１８７】
【化６】
【０１８８】
【化７】
【０１８９】
【化８】
【０１９０】
【化９】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫する方法であって、該方法が、１種以上の免疫原性ポリペプチドを含有する組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫する方法であって、該方法が、髄膜炎菌性ＯＭＶを含有する組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における１種以上の免疫原性ポリペプチドの使用。
【請求項４】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における髄膜炎菌性ＯＭＶの使用。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法または使用であって、被験体をまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび／または血清群Ｗ１３５による感染に対して免疫するための、方法または使用。
【請求項１】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫する方法であって、該方法が、１種以上の免疫原性ポリペプチドを含有する組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫する方法であって、該方法が、髄膜炎菌性ＯＭＶを含有する組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における１種以上の免疫原性ポリペプチドの使用。
【請求項４】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ｙによる感染に対して被験体を免疫するための医薬の製造における髄膜炎菌性ＯＭＶの使用。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法または使用であって、被験体をまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃおよび／または血清群Ｗ１３５による感染に対して免疫するための、方法または使用。
【公表番号】特表２００７−５３３７２９（Ｐ２００７−５３３７２９Ａ）
【公表日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０９００８（Ｐ２００７−５０９００８）
【出願日】平成１７年４月２２日（２００５．４．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００５／００１２７９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０２３８４
【国際公開日】平成１７年１１月３日（２００５．１１．３）
【出願人】（５９２２４３７９３）カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ (107)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月２２日（２００５．４．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００５／００１２７９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１０２３８４
【国際公開日】平成１７年１１月３日（２００５．１１．３）
【出願人】（５９２２４３７９３）カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ (107)
【Ｆターム（参考）】
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