ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤
【課題】人畜や環境に対する安全性等に優れ、ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウに対する高い防除効果を有する防除剤を実現する。
【解決手段】アワユキセンダングサを原材料とし、その抽出物を有効成分として、ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤とする。
【解決手段】アワユキセンダングサを原材料とし、その抽出物を有効成分として、ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤に関し、栽培作物に対する害虫の防除技術の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
近年、栽培作物に対する寄生性線虫類による被害が拡大し、問題となっている。この問題は特定作物を連作する場合に特に顕著となり、その作物への寄生性の強い線虫の土壌中の密度が高くなる結果、作物の生育を阻害したり、収量を低下させたりするなどの被害をもたらす。
【０００３】
その対策として、従来、堆肥等の粗大有機物が用いられてきたが、この方法は、有害線虫に対する抑制効果は高いものの、大量に用いる必要があるので、労働負担が高く、さらに、作物の異常生長を招いたり、土壌中に病原菌が蔓延しやすくなるなどの欠点がある。
【０００４】
また、土壌中での線虫の繁殖を抑制する化学的物質を含有する植物、例えばマリーゴールド、クロタラリア、ギニアグラスなどを栽培作物と併せて植え付ける方法もあるが、この方法は目的とする作物の作付面積を制約するという難点がある。
【０００５】
さらに、播種あるいは植付け前にくん蒸処理用の農薬を用いた土壌消毒はコストも低く、現在最も汎用的に使用されている防除法であり、土壌中の線虫除去に効果を有するが、この方法は人畜に対する安全性を損なう懸念があり、また、有用微生物を死滅させるなど、土壌生態系への影響が大きい。さらに、リサージェンス（誘導多発性）と呼ばれるように、処理後、かえって対象害虫あるいは他の害虫が増加するという被害の常態化をしばしば誘発することが知られている。
【０００６】
また、物理的防除方法として、ハウスでの太陽熱を利用した消毒や、大量の潅水と熱とによる還元消毒なども効果的ではあるが、この方法は大規模な設備が必要で、コストや労働負担が高い。
【０００７】
そして、これらの対策方法は、いずれも予防的な方法であって、作付中に一旦寄生されると、それを排除して土壌を回復するのはきわめて困難であり、さらなる汚染を防ぐしかないのが実情である。
【０００８】
このような実情に対し、土壌生態系や人畜に与える影響がなく、安全性に優れ、しかも実施が容易な線虫の防除剤として、特許文献１にはネコブセンチュウに有効な天然物由来の防除剤が開示されており、センダングサ属、ヒメジョン属、ムカシヨモギ属などのキク科植物のアルコール抽出物及び蒸留水による煮沸抽出物が、ネコブセンチュウを不動化させる効果を有することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００８−１２０７４９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、前記特許文献１に記載のものは、ネコブセンチュウを対象とするもので、ネコブセンチュウと共に３大有害線虫とされるネグサレセンチュウおよびシストセンチュウについての記載はない。ネグサレセンチュウおよびシストセンチュウの被害を抑制することができれば、線虫病害による損害を大幅に削減することが可能であるが、同じ植物寄生性線虫であってもそれぞれの生態や作物に対する被害の及ぼし方は大きく異なり、ネコブセンチュウの場合は、幼虫が幼令期の限られた期間に植物根に侵入、定着し、根の組織を肥大させて養分を奪いながら成長し、成熟すると植物根組織表面に卵嚢を形成、その後土壌中に大量の幼虫が孵化し、被害を拡大していくのに対し、ネグサレセンチュウの場合は、根の組織内に産卵し、孵化した幼虫は根の中を加害活動するだけでなく、その生活環の大半において、好適な宿主を求め、植物根と土壌中を自由に移動することができるため、より広域に被害をもたらす。また、シストセンチュウは、土壌中にシストと呼ばれる強固の殻を形成し、その中に数百の卵を保護することができるため、乾燥や低温といった、ネコブセンチュウやネグサレセンチュウにとっては好ましくない環境下においても長期間耐えることができる。
【００１１】
また、ネコブセンチュウは花きでは、キク科、アスター、ガーベラ、ダリア、カーネーション、ストック、スイセン、スイートピー、シャクヤク、グラジオラス、ケイトウ、リンドウ、花木では、モモ、ヤナギ、アカシヤ、ナンテン、ウメ、サクラ、バラ、ツバキ、サザンカ、クレマチスなど、野菜類ではトマト、ナス、ウリ類、アブラナ科、ホウレンソウ、シュンギク、ネギ類、ショウガ、マメ科など、極めて多くの植物に寄生し、収穫低下などの被害を及ぼすが、ネグサレセンチュウの場合、ネコブセンチュウの寄生対象植物にも寄生することが報告されているが、その他代表的な寄生対象植物として、花きでは、ユリ、センニチコウ、スミレ、アプラナ科、花木では、カナメモチ、スイリュウ、ゴム、カエデ、マツ、ニレ、ヒノキ、その他樹木及びシバなどでの被害が多い。同様に、野菜類でも、イネ科、キク科の他、ニンジン、ダイコン、ゴボウなどの根菜類において被害が多いことが知られている。また、シストセンチュウとして代表的な種はジャガイモシストセンチュウやダイズシストセンチュウなどであり、これらは主に関東以北においてジャガイモ、大豆やアズキ、インゲンなどのマメ科作物に特異的に大きな被害を及ぼしている。
【００１２】
したがって、ネコブセンチュウと共に３大有害線虫を構成するネグサレセンチュウ及びシストセンチュウについては、別途、安全性や実施の容易性等に優れた防除剤の実現が望まれているのである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、前記課題を解決するためになされたものであって、まず、請求項１に記載の発明は、ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤であって、アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
【００１４】
また、請求項２に記載の発明は、前記請求項１に記載のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤であって、アワユキセンダングサの乾燥微粉末１０ｇに対して５０ｍｌの割合で水を加え、加熱後、液体成分を抽出して前記水のほぼ１／２の量に精製したものを原液とし、その原液又はその５０倍までの希釈液であることを特徴とする。
【００１５】
また、請求項３に記載の発明は、前記請求項２に記載の発明におけるネグサレセンチュウの防除剤であって、前記原液又はその２０倍までの希釈液であることを特徴とする。
【００１６】
さらに、請求項４に記載の発明は、前記請求項２に記載の発明におけるシストセンチュウの防除剤であって、前記原液の１０倍から２０倍までの希釈液であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係るネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤によれば、アワユキセンダングサの抽出物が有効成分としてネグサレセンチュウ及びシストセンチュウに作用し、不動化ないし致死の効果を発揮して、これらのセンチュウが寄生することによる作物被害を防止もしくは軽減する。
【００１８】
特に、この防除剤は、日本国内及び国外において広範囲に自生する雑草の一種で、入手が容易なアワユキセンダングサを原材料とするから安価に製造でき、かつ使用に際しての大掛かりな設備等が不要である。しかも、天然由来物であり、かつ一部の地域では葉や茎を煎じて飲用したり、食用して利用されており、人畜や環境への影響がなく、土壌生態系を損なうおそれもない。
【００１９】
特に、請求項３の発明に係る防除剤は、ネグサレセンチュウに対する即効性を有し、作物への寄生が認められてからであっても、被害を直ちに防止もしくは軽減することができる。
【００２０】
また、請求項４の発明に係る防除剤は、シストセンチュウに対する即効性を有し、同様に、作物への寄生が認められてからであっても、被害を直ちに防止もしくは軽減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】ミナミネグサレセンチュウの生存状態と致死状態とを示す写真である。
【図２】ダイズシストセンチュウの生存状態と致死状態とを示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウ防除剤は、アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とするもので、その原材料は、自生するアワユキセンダングサを採取することにより得られ、その生の状態又は乾燥させたものが素材となる。その場合に、花、葉、茎などを含む全草を素材として用いることができるが、根は除く方が好ましい。また、乾燥させた場合は、腐ることがないので、取り扱いに便である。
【００２３】
この素材からの原液の抽出は次のように行われる。
【００２４】
まず、前記素材を細かく破砕ないし粉砕し、これに、乾燥素材の場合、質量で５〜数１０倍の水を加え、該素材に浸透させる。素材が生の場合は、該素材自体が８０％程度の水分を含んでいるので、乾燥素材の場合に比べて加える水の量は約１／５となる。
【００２５】
次に、この水が浸透した素材を湯煎、煮沸等により加熱した後、冷却し、その後、圧搾分離法、遠心分離法、沈降分離法等により固液分離し、その液体部分をろ過し、必要に応じて周知の精製処理を加えて、防除剤の原液とする。
【００２６】
この原液は、そのまま又は濃縮され或いは水などで希釈されて液状の防除剤となり、或いは乾燥されて粒状或いは粉状の防除剤となる。
【００２７】
液状の防除剤の場合、一定の効果を得るには原液の５０倍程度までの希釈液が望ましく、ほぼ１００％の防除効果を得るためには、原液もしくは２０倍程度までの希釈液とするのが望ましい。
【００２８】
また、即効性が必要とされる場合は、ネグサレセンチュウ用防除剤としては、原液又は原液の２０倍程度までの希釈液がよく、シストセンチュウ用防除剤としては、原液の１０倍から２０倍程度までの希釈液がよい。
【００２９】
この防除剤は、土壌へ散布することにより、液状の場合はさらに土壌中に灌注して用いることができるほか、適宜担体に担持させ、これを土壌表面又は土壌中に配置して用いることもできる。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明の実施例について説明する。
【００３１】
１．アワユキセンダングサ抽出液の調製
（１）琉球大学構内にて自生していた、変色・変形・モザイクウイルス等の感染のない開花期のアワユキセンダングサ株を選定し、根以外の全草を採取し、枯れた部位等を除去したものを素材とした。
（２）この素材を、乾燥機により１００℃にて約２時間乾燥させた後、ミルを用いて微粉砕し、乾燥微粉末素材を得た。なお、乾燥方法としては、自然乾燥でもよく、その場合、乾燥持間は機械乾燥に比べて長くなる。
（３）乾燥微粉末素材を１０ｇ秤取し、ビーカーに入れ、蒸留水５０ｍｌを加えて十分浸透させた。
（４）前記ビーカーをラップ及びアルミホイルで蓋をし、１００℃、３０分間、湯煎で加熱後、放冷し、ガーゼを用いて圧搾し、粗抽出液を得た。
（５）この粗抽出液を、３０００ｒｐｍ、５分の条件下で遠心分離し、さらに上澄みをろ過して、約２５ｍｌの抽出液を得た。そして、この抽出液を、本実施例に係る防除剤の原液とした。
【００３２】
２．試験用センチュウ幼虫の準備
［シストセンチュウ］
中央農業総合研究センターから分譲された線虫汚染土壌中に含まれる蔵卵雌成虫（シスト）を実体顕微鏡下でピンセットを用いて破壊し、これをインゲンマメの根滲出液（約５ｍｌ）を入れたシャーレ内のキムワイプの上に置いた状態で、２５℃のインキュベーターで孵化させた。１週間後、孵化した２期幼虫をパスツールピペットで回収し、１週間以内に実験に供試した。
【００３３】
［ネグサレセンチュウ］
九州沖縄農業研究センターから分譲されたＳＨ培地（保存液１：５０ｍｌ、保存液２：１０ｍｌ、保存液３：１ｍｌ、保存液４：１ｍｌ、保存液５：１ｍｌ、イノシトール：１ｇ、ショ糖：３０ｇ、ゲランガム：３ｇ、蒸留水：９３７ｍｌ）から増殖したミナミネグサレセンチュウをベルマン法により分離し、実験に供試した。
【００３４】
ここで、前記保存液１〜５の組成は次の通りである。
保存液１（ＫＮＯ３：５０ｇ、水：１，０００ｍｌ）
保存液２（ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：２０ｇ、ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４：１５ｇ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ：１０ｇ）
保存液３（ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ：５ｇ、Ｈ３ＢＯ３：２．５ｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：５００ｍｌ、ＫＩ５００ｍｌ）
保存液４（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ：１００ｍｌ、Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ：５０ｍｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ：５０ｍｌ）
保存液５（塩酸チアミン：５００ｍｌ、塩酸ピリドキシン：５０ｍｌ、ニコチン酸：５００ｍｌ、２，４−Ｄ：２００ｍｌ）
また、ベルマン法とは、線虫自身の活動性を利用して土壌等から線虫を分離する周知の方法である。
【００３５】
３．センチュウ懸濁液の密度調整
（１）三角フラスコ中で１０℃に保存されているセンチュウ幼虫の懸濁液を滅菌済みのコマゴメピペットを用いて滅菌済みの遠沈管に入れ、遠心分離機を用いて、１０００ｒｐｍ、１秒の条件下で遠心分離し、幼虫を沈殿させた。
（２）滅菌済みのコマゴメピペットを用いて上澄みを取り除き、高密度の線虫懸濁液を得た。
（３）この懸濁液の一部を滅菌済みのコマゴメピペットを用いて滅菌済みの別容器に移し、タッチミキサーで撹拌した後、滅菌済みのピペットマンを用いて０．１ｍｌ採取し、これをプレパラート上に直線状に滴下した。
（４）顕微鏡（４０倍）で観察しながら、カウンターを用いてプレパラート上の線虫をカウントした。
（５）必要に応じて遠沈管の高密度センチュウ懸濁液を足し、或いは滅菌済み蒸留水を加えて、０．１ｍｌ当たり１３０〜１４０頭となるように密度を調製した。
【００３６】
４．センチュウ不動化・致死試験
（１）実施例に係る液剤として、前述の防除剤の原液、及びこれを滅菌済み蒸留水で１０倍、２０倍、１００倍にそれぞれ希釈したものを用意した。また、比較対照用として蒸留水を用意し、これらを滅菌済みのメスピペットを用いて滅菌済みの試験管にそれぞれ１ｍｌずつ投入した。その際、ネグサレセンチュウ用として上記各条件ごとに５本ずつ、シストセンチュウ用として上記各条件ごとに、同じく５本ずつ用意した。
（２）次に、各試験管に滅菌済みのピペットマンを用いて上記の密度調製済み線虫懸濁液を０．１ｍｌづつ加え、全量が１．１ｍｌで、その中に１３０〜１４０頭の線虫が存在する試験液を生成した。その後、試験管をパラフィルムで蓋をした。
（３）前記試験管を、２５℃の条件下で１日静置した後、タッチミキサーで撹拌した上で、試験液の全量を滅菌済みのパスツールピペットを用いてプレパラートに移し、顕微鏡（４０倍）にて観察し、動いている線虫と不動化した（動かなくなった）線虫の数をそれぞれカウントし、全線虫のうちの不動化した線虫の率（不動化率）を求めた。その後、プレパラート上の試験液の全量を試験管に戻し、パラフィルムで蓋をした。
（４）同様に、試験開始後４日目及び７日目に、動いている線虫と不動化している線虫の数をカウントし、不動化率を求めた。
（５）７日目の測定後、試験液の全量を遠沈管に入れ、遠心分離機を用いて１０００ｒｐｍ、１秒の条件下で遠心分離した。その後、滅菌済みのコマゴメピペットを用いて上澄みを除去し、沈殿物を蒸留水で洗浄した後、滅菌水を約１０ｍｌ加え、２５℃で静置した。そして、１日静置した後、上澄みを取り除き、顕微鏡（４０倍）にて全量を観察し、生存、致死を判定して、全線虫のうちの致死の線虫の率（致死率）を求めた。
【００３７】
ここで、線虫の生存、致死の判定は、図１に示すミナミネグサレセンチュウ、図２に示すダイズシストセンチュウのいずれについても、（ａ）に示すように、比較的複雑に屈曲し、観察中、たえず動いているものを生存、（ｂ）に示すように、棒状に硬直し、観察中、全く動かないものを致死とした。
【００３８】
５．試験結果
以上の試験結果は、ネグサレセンチュウについては表１、シストセンチュウについては表２に示すとおりである。なお、表中の数字の「ａ．ａ±ｂ．ｂ」の「ａ．ａ」は、各条件での５つの試験結果の平均値を示し、「ｂ．ｂ」はその平均値に対する標準偏差を示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
【表２】
【００４１】
ミナミネグサレセンチュウについては、比較例では、不動化率が７日目でも３０〜４０％であるのに対し、実施例に係る防除剤の原液、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、試験開始後１日目からほぼ１００％の不動化率を示し、この不動化率を維持したまま、８日目の致死の判定においても、８０〜１００％の高い率で致死が確認された。
【００４２】
なお、１００倍希釈液は、１日目に高い不動化率を示したものの、その後、不動化率は低下し、比較例以上の防除効果は認められなかった。
【００４３】
以上により、アワユキセンダングサの抽出液を有効成分とする本実施例の防除剤は、その希釈度を適切に設定することにより、ネグサレセンチュウに対する高い防除効果を有することが確認された。その場合に、２０倍希釈液でほぼ１００％の不動化率、ほぼ８０％の致死率が認められることから、５０倍希釈液でもある程度の効果が得られることが推測される。
【００４４】
また、原液、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、その効果が試験開始後１日目から認められ、即効性を有することも確認された。
【００４５】
ダイズシストセンチュウについては、比較例では、不動化率が７日目でも数％であって、ほとんど生存状態が維持されているのに対し、実施例に係る防除剤については、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、試験開始後１日目からほぼ１００％の不動化率を示し、この不動化率を維持したまま、８日目の致死の判定においても、ほぼ１００％で致死が確認された。
【００４６】
原液は、試験開始後１日目には高い効果が得られなかったものの、４日目以降は不動化率が１００％であり、そのまま８日目には致死にいたっている。
【００４７】
なお、１００倍希釈液は、ミナミネグサレセンチュウの場合と同様に、顕著な防除効果は認められなかった。
【００４８】
以上により、アワユキセンダングサの抽出液を有効成分とする本実施例の防除剤は、その希釈度を適切に設定することにより、シストセンチュウに対する高い防除効果を有することが確認された。その場合に、２０倍希釈液でほぼ１００％の不動化率と致死率とが認められることから、５０倍希釈液でもある程度の効果が得られることが推測される。
【００４９】
また、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、その効果が試験開始後１日目から認められ、即効性を有することも確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
以上のように、本発明に係る防除剤は、入手容易な天然物であるアワユキセンダングサを原材料とすることにより、環境や人畜に対する安全性に優れ、かつ低コストで実施可能でありながら、ネグサレセンチュウ及びシストセンチュウに対する高い防除効果を有し、したがって、農産物の生産業において好適に利用される可能性がある。
【技術分野】
【０００１】
本発明はネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤に関し、栽培作物に対する害虫の防除技術の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
近年、栽培作物に対する寄生性線虫類による被害が拡大し、問題となっている。この問題は特定作物を連作する場合に特に顕著となり、その作物への寄生性の強い線虫の土壌中の密度が高くなる結果、作物の生育を阻害したり、収量を低下させたりするなどの被害をもたらす。
【０００３】
その対策として、従来、堆肥等の粗大有機物が用いられてきたが、この方法は、有害線虫に対する抑制効果は高いものの、大量に用いる必要があるので、労働負担が高く、さらに、作物の異常生長を招いたり、土壌中に病原菌が蔓延しやすくなるなどの欠点がある。
【０００４】
また、土壌中での線虫の繁殖を抑制する化学的物質を含有する植物、例えばマリーゴールド、クロタラリア、ギニアグラスなどを栽培作物と併せて植え付ける方法もあるが、この方法は目的とする作物の作付面積を制約するという難点がある。
【０００５】
さらに、播種あるいは植付け前にくん蒸処理用の農薬を用いた土壌消毒はコストも低く、現在最も汎用的に使用されている防除法であり、土壌中の線虫除去に効果を有するが、この方法は人畜に対する安全性を損なう懸念があり、また、有用微生物を死滅させるなど、土壌生態系への影響が大きい。さらに、リサージェンス（誘導多発性）と呼ばれるように、処理後、かえって対象害虫あるいは他の害虫が増加するという被害の常態化をしばしば誘発することが知られている。
【０００６】
また、物理的防除方法として、ハウスでの太陽熱を利用した消毒や、大量の潅水と熱とによる還元消毒なども効果的ではあるが、この方法は大規模な設備が必要で、コストや労働負担が高い。
【０００７】
そして、これらの対策方法は、いずれも予防的な方法であって、作付中に一旦寄生されると、それを排除して土壌を回復するのはきわめて困難であり、さらなる汚染を防ぐしかないのが実情である。
【０００８】
このような実情に対し、土壌生態系や人畜に与える影響がなく、安全性に優れ、しかも実施が容易な線虫の防除剤として、特許文献１にはネコブセンチュウに有効な天然物由来の防除剤が開示されており、センダングサ属、ヒメジョン属、ムカシヨモギ属などのキク科植物のアルコール抽出物及び蒸留水による煮沸抽出物が、ネコブセンチュウを不動化させる効果を有することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００８−１２０７４９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、前記特許文献１に記載のものは、ネコブセンチュウを対象とするもので、ネコブセンチュウと共に３大有害線虫とされるネグサレセンチュウおよびシストセンチュウについての記載はない。ネグサレセンチュウおよびシストセンチュウの被害を抑制することができれば、線虫病害による損害を大幅に削減することが可能であるが、同じ植物寄生性線虫であってもそれぞれの生態や作物に対する被害の及ぼし方は大きく異なり、ネコブセンチュウの場合は、幼虫が幼令期の限られた期間に植物根に侵入、定着し、根の組織を肥大させて養分を奪いながら成長し、成熟すると植物根組織表面に卵嚢を形成、その後土壌中に大量の幼虫が孵化し、被害を拡大していくのに対し、ネグサレセンチュウの場合は、根の組織内に産卵し、孵化した幼虫は根の中を加害活動するだけでなく、その生活環の大半において、好適な宿主を求め、植物根と土壌中を自由に移動することができるため、より広域に被害をもたらす。また、シストセンチュウは、土壌中にシストと呼ばれる強固の殻を形成し、その中に数百の卵を保護することができるため、乾燥や低温といった、ネコブセンチュウやネグサレセンチュウにとっては好ましくない環境下においても長期間耐えることができる。
【００１１】
また、ネコブセンチュウは花きでは、キク科、アスター、ガーベラ、ダリア、カーネーション、ストック、スイセン、スイートピー、シャクヤク、グラジオラス、ケイトウ、リンドウ、花木では、モモ、ヤナギ、アカシヤ、ナンテン、ウメ、サクラ、バラ、ツバキ、サザンカ、クレマチスなど、野菜類ではトマト、ナス、ウリ類、アブラナ科、ホウレンソウ、シュンギク、ネギ類、ショウガ、マメ科など、極めて多くの植物に寄生し、収穫低下などの被害を及ぼすが、ネグサレセンチュウの場合、ネコブセンチュウの寄生対象植物にも寄生することが報告されているが、その他代表的な寄生対象植物として、花きでは、ユリ、センニチコウ、スミレ、アプラナ科、花木では、カナメモチ、スイリュウ、ゴム、カエデ、マツ、ニレ、ヒノキ、その他樹木及びシバなどでの被害が多い。同様に、野菜類でも、イネ科、キク科の他、ニンジン、ダイコン、ゴボウなどの根菜類において被害が多いことが知られている。また、シストセンチュウとして代表的な種はジャガイモシストセンチュウやダイズシストセンチュウなどであり、これらは主に関東以北においてジャガイモ、大豆やアズキ、インゲンなどのマメ科作物に特異的に大きな被害を及ぼしている。
【００１２】
したがって、ネコブセンチュウと共に３大有害線虫を構成するネグサレセンチュウ及びシストセンチュウについては、別途、安全性や実施の容易性等に優れた防除剤の実現が望まれているのである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、前記課題を解決するためになされたものであって、まず、請求項１に記載の発明は、ネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤であって、アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
【００１４】
また、請求項２に記載の発明は、前記請求項１に記載のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤であって、アワユキセンダングサの乾燥微粉末１０ｇに対して５０ｍｌの割合で水を加え、加熱後、液体成分を抽出して前記水のほぼ１／２の量に精製したものを原液とし、その原液又はその５０倍までの希釈液であることを特徴とする。
【００１５】
また、請求項３に記載の発明は、前記請求項２に記載の発明におけるネグサレセンチュウの防除剤であって、前記原液又はその２０倍までの希釈液であることを特徴とする。
【００１６】
さらに、請求項４に記載の発明は、前記請求項２に記載の発明におけるシストセンチュウの防除剤であって、前記原液の１０倍から２０倍までの希釈液であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係るネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤によれば、アワユキセンダングサの抽出物が有効成分としてネグサレセンチュウ及びシストセンチュウに作用し、不動化ないし致死の効果を発揮して、これらのセンチュウが寄生することによる作物被害を防止もしくは軽減する。
【００１８】
特に、この防除剤は、日本国内及び国外において広範囲に自生する雑草の一種で、入手が容易なアワユキセンダングサを原材料とするから安価に製造でき、かつ使用に際しての大掛かりな設備等が不要である。しかも、天然由来物であり、かつ一部の地域では葉や茎を煎じて飲用したり、食用して利用されており、人畜や環境への影響がなく、土壌生態系を損なうおそれもない。
【００１９】
特に、請求項３の発明に係る防除剤は、ネグサレセンチュウに対する即効性を有し、作物への寄生が認められてからであっても、被害を直ちに防止もしくは軽減することができる。
【００２０】
また、請求項４の発明に係る防除剤は、シストセンチュウに対する即効性を有し、同様に、作物への寄生が認められてからであっても、被害を直ちに防止もしくは軽減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】ミナミネグサレセンチュウの生存状態と致死状態とを示す写真である。
【図２】ダイズシストセンチュウの生存状態と致死状態とを示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウ防除剤は、アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とするもので、その原材料は、自生するアワユキセンダングサを採取することにより得られ、その生の状態又は乾燥させたものが素材となる。その場合に、花、葉、茎などを含む全草を素材として用いることができるが、根は除く方が好ましい。また、乾燥させた場合は、腐ることがないので、取り扱いに便である。
【００２３】
この素材からの原液の抽出は次のように行われる。
【００２４】
まず、前記素材を細かく破砕ないし粉砕し、これに、乾燥素材の場合、質量で５〜数１０倍の水を加え、該素材に浸透させる。素材が生の場合は、該素材自体が８０％程度の水分を含んでいるので、乾燥素材の場合に比べて加える水の量は約１／５となる。
【００２５】
次に、この水が浸透した素材を湯煎、煮沸等により加熱した後、冷却し、その後、圧搾分離法、遠心分離法、沈降分離法等により固液分離し、その液体部分をろ過し、必要に応じて周知の精製処理を加えて、防除剤の原液とする。
【００２６】
この原液は、そのまま又は濃縮され或いは水などで希釈されて液状の防除剤となり、或いは乾燥されて粒状或いは粉状の防除剤となる。
【００２７】
液状の防除剤の場合、一定の効果を得るには原液の５０倍程度までの希釈液が望ましく、ほぼ１００％の防除効果を得るためには、原液もしくは２０倍程度までの希釈液とするのが望ましい。
【００２８】
また、即効性が必要とされる場合は、ネグサレセンチュウ用防除剤としては、原液又は原液の２０倍程度までの希釈液がよく、シストセンチュウ用防除剤としては、原液の１０倍から２０倍程度までの希釈液がよい。
【００２９】
この防除剤は、土壌へ散布することにより、液状の場合はさらに土壌中に灌注して用いることができるほか、適宜担体に担持させ、これを土壌表面又は土壌中に配置して用いることもできる。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明の実施例について説明する。
【００３１】
１．アワユキセンダングサ抽出液の調製
（１）琉球大学構内にて自生していた、変色・変形・モザイクウイルス等の感染のない開花期のアワユキセンダングサ株を選定し、根以外の全草を採取し、枯れた部位等を除去したものを素材とした。
（２）この素材を、乾燥機により１００℃にて約２時間乾燥させた後、ミルを用いて微粉砕し、乾燥微粉末素材を得た。なお、乾燥方法としては、自然乾燥でもよく、その場合、乾燥持間は機械乾燥に比べて長くなる。
（３）乾燥微粉末素材を１０ｇ秤取し、ビーカーに入れ、蒸留水５０ｍｌを加えて十分浸透させた。
（４）前記ビーカーをラップ及びアルミホイルで蓋をし、１００℃、３０分間、湯煎で加熱後、放冷し、ガーゼを用いて圧搾し、粗抽出液を得た。
（５）この粗抽出液を、３０００ｒｐｍ、５分の条件下で遠心分離し、さらに上澄みをろ過して、約２５ｍｌの抽出液を得た。そして、この抽出液を、本実施例に係る防除剤の原液とした。
【００３２】
２．試験用センチュウ幼虫の準備
［シストセンチュウ］
中央農業総合研究センターから分譲された線虫汚染土壌中に含まれる蔵卵雌成虫（シスト）を実体顕微鏡下でピンセットを用いて破壊し、これをインゲンマメの根滲出液（約５ｍｌ）を入れたシャーレ内のキムワイプの上に置いた状態で、２５℃のインキュベーターで孵化させた。１週間後、孵化した２期幼虫をパスツールピペットで回収し、１週間以内に実験に供試した。
【００３３】
［ネグサレセンチュウ］
九州沖縄農業研究センターから分譲されたＳＨ培地（保存液１：５０ｍｌ、保存液２：１０ｍｌ、保存液３：１ｍｌ、保存液４：１ｍｌ、保存液５：１ｍｌ、イノシトール：１ｇ、ショ糖：３０ｇ、ゲランガム：３ｇ、蒸留水：９３７ｍｌ）から増殖したミナミネグサレセンチュウをベルマン法により分離し、実験に供試した。
【００３４】
ここで、前記保存液１〜５の組成は次の通りである。
保存液１（ＫＮＯ３：５０ｇ、水：１，０００ｍｌ）
保存液２（ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：２０ｇ、ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４：１５ｇ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ：１０ｇ）
保存液３（ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ：５ｇ、Ｈ３ＢＯ３：２．５ｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：５００ｍｌ、ＫＩ５００ｍｌ）
保存液４（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ：１００ｍｌ、Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ：５０ｍｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ：５０ｍｌ）
保存液５（塩酸チアミン：５００ｍｌ、塩酸ピリドキシン：５０ｍｌ、ニコチン酸：５００ｍｌ、２，４−Ｄ：２００ｍｌ）
また、ベルマン法とは、線虫自身の活動性を利用して土壌等から線虫を分離する周知の方法である。
【００３５】
３．センチュウ懸濁液の密度調整
（１）三角フラスコ中で１０℃に保存されているセンチュウ幼虫の懸濁液を滅菌済みのコマゴメピペットを用いて滅菌済みの遠沈管に入れ、遠心分離機を用いて、１０００ｒｐｍ、１秒の条件下で遠心分離し、幼虫を沈殿させた。
（２）滅菌済みのコマゴメピペットを用いて上澄みを取り除き、高密度の線虫懸濁液を得た。
（３）この懸濁液の一部を滅菌済みのコマゴメピペットを用いて滅菌済みの別容器に移し、タッチミキサーで撹拌した後、滅菌済みのピペットマンを用いて０．１ｍｌ採取し、これをプレパラート上に直線状に滴下した。
（４）顕微鏡（４０倍）で観察しながら、カウンターを用いてプレパラート上の線虫をカウントした。
（５）必要に応じて遠沈管の高密度センチュウ懸濁液を足し、或いは滅菌済み蒸留水を加えて、０．１ｍｌ当たり１３０〜１４０頭となるように密度を調製した。
【００３６】
４．センチュウ不動化・致死試験
（１）実施例に係る液剤として、前述の防除剤の原液、及びこれを滅菌済み蒸留水で１０倍、２０倍、１００倍にそれぞれ希釈したものを用意した。また、比較対照用として蒸留水を用意し、これらを滅菌済みのメスピペットを用いて滅菌済みの試験管にそれぞれ１ｍｌずつ投入した。その際、ネグサレセンチュウ用として上記各条件ごとに５本ずつ、シストセンチュウ用として上記各条件ごとに、同じく５本ずつ用意した。
（２）次に、各試験管に滅菌済みのピペットマンを用いて上記の密度調製済み線虫懸濁液を０．１ｍｌづつ加え、全量が１．１ｍｌで、その中に１３０〜１４０頭の線虫が存在する試験液を生成した。その後、試験管をパラフィルムで蓋をした。
（３）前記試験管を、２５℃の条件下で１日静置した後、タッチミキサーで撹拌した上で、試験液の全量を滅菌済みのパスツールピペットを用いてプレパラートに移し、顕微鏡（４０倍）にて観察し、動いている線虫と不動化した（動かなくなった）線虫の数をそれぞれカウントし、全線虫のうちの不動化した線虫の率（不動化率）を求めた。その後、プレパラート上の試験液の全量を試験管に戻し、パラフィルムで蓋をした。
（４）同様に、試験開始後４日目及び７日目に、動いている線虫と不動化している線虫の数をカウントし、不動化率を求めた。
（５）７日目の測定後、試験液の全量を遠沈管に入れ、遠心分離機を用いて１０００ｒｐｍ、１秒の条件下で遠心分離した。その後、滅菌済みのコマゴメピペットを用いて上澄みを除去し、沈殿物を蒸留水で洗浄した後、滅菌水を約１０ｍｌ加え、２５℃で静置した。そして、１日静置した後、上澄みを取り除き、顕微鏡（４０倍）にて全量を観察し、生存、致死を判定して、全線虫のうちの致死の線虫の率（致死率）を求めた。
【００３７】
ここで、線虫の生存、致死の判定は、図１に示すミナミネグサレセンチュウ、図２に示すダイズシストセンチュウのいずれについても、（ａ）に示すように、比較的複雑に屈曲し、観察中、たえず動いているものを生存、（ｂ）に示すように、棒状に硬直し、観察中、全く動かないものを致死とした。
【００３８】
５．試験結果
以上の試験結果は、ネグサレセンチュウについては表１、シストセンチュウについては表２に示すとおりである。なお、表中の数字の「ａ．ａ±ｂ．ｂ」の「ａ．ａ」は、各条件での５つの試験結果の平均値を示し、「ｂ．ｂ」はその平均値に対する標準偏差を示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
【表２】
【００４１】
ミナミネグサレセンチュウについては、比較例では、不動化率が７日目でも３０〜４０％であるのに対し、実施例に係る防除剤の原液、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、試験開始後１日目からほぼ１００％の不動化率を示し、この不動化率を維持したまま、８日目の致死の判定においても、８０〜１００％の高い率で致死が確認された。
【００４２】
なお、１００倍希釈液は、１日目に高い不動化率を示したものの、その後、不動化率は低下し、比較例以上の防除効果は認められなかった。
【００４３】
以上により、アワユキセンダングサの抽出液を有効成分とする本実施例の防除剤は、その希釈度を適切に設定することにより、ネグサレセンチュウに対する高い防除効果を有することが確認された。その場合に、２０倍希釈液でほぼ１００％の不動化率、ほぼ８０％の致死率が認められることから、５０倍希釈液でもある程度の効果が得られることが推測される。
【００４４】
また、原液、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、その効果が試験開始後１日目から認められ、即効性を有することも確認された。
【００４５】
ダイズシストセンチュウについては、比較例では、不動化率が７日目でも数％であって、ほとんど生存状態が維持されているのに対し、実施例に係る防除剤については、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、試験開始後１日目からほぼ１００％の不動化率を示し、この不動化率を維持したまま、８日目の致死の判定においても、ほぼ１００％で致死が確認された。
【００４６】
原液は、試験開始後１日目には高い効果が得られなかったものの、４日目以降は不動化率が１００％であり、そのまま８日目には致死にいたっている。
【００４７】
なお、１００倍希釈液は、ミナミネグサレセンチュウの場合と同様に、顕著な防除効果は認められなかった。
【００４８】
以上により、アワユキセンダングサの抽出液を有効成分とする本実施例の防除剤は、その希釈度を適切に設定することにより、シストセンチュウに対する高い防除効果を有することが確認された。その場合に、２０倍希釈液でほぼ１００％の不動化率と致死率とが認められることから、５０倍希釈液でもある程度の効果が得られることが推測される。
【００４９】
また、１０倍希釈液、２０倍希釈液は、その効果が試験開始後１日目から認められ、即効性を有することも確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
以上のように、本発明に係る防除剤は、入手容易な天然物であるアワユキセンダングサを原材料とすることにより、環境や人畜に対する安全性に優れ、かつ低コストで実施可能でありながら、ネグサレセンチュウ及びシストセンチュウに対する高い防除効果を有し、したがって、農産物の生産業において好適に利用される可能性がある。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とすることを特徴とするネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤。
【請求項２】
アワユキセンダングサの乾燥微粉末１０ｇに対して５０ｍｌの割合で水を加え、加熱後、液体成分を抽出して前記水のほぼ１／２の量に精製したものを原液とし、その原液又はその５０倍までの希釈液であることを特徴とする請求項１に記載のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤。
【請求項３】
前記原液又はその２０倍までの希釈液であることを特徴とする請求項２に記載のネグサレセンチュウの防除剤。
【請求項４】
前記原液の１０倍から２０倍までの希釈液であることを特徴とする請求項２に記載のシストセンチュウの防除剤。
【請求項１】
アワユキセンダングサの抽出物を有効成分とすることを特徴とするネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤。
【請求項２】
アワユキセンダングサの乾燥微粉末１０ｇに対して５０ｍｌの割合で水を加え、加熱後、液体成分を抽出して前記水のほぼ１／２の量に精製したものを原液とし、その原液又はその５０倍までの希釈液であることを特徴とする請求項１に記載のネグサレセンチュウ又はシストセンチュウの防除剤。
【請求項３】
前記原液又はその２０倍までの希釈液であることを特徴とする請求項２に記載のネグサレセンチュウの防除剤。
【請求項４】
前記原液の１０倍から２０倍までの希釈液であることを特徴とする請求項２に記載のシストセンチュウの防除剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１１−６８６１２（Ｐ２０１１−６８６１２Ａ）
【公開日】平成２３年４月７日（２０１１．４．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２２２１１２（Ｐ２００９−２２２１１２）
【出願日】平成２１年９月２８日（２００９．９．２８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２１年４月８日 日本雑草学会発行の「雑草研究 ２００９年４月第５４巻別号 第４８回 講演会講演要旨」に発表
【出願人】（５９１１００４４８）パネフリ工業株式会社 (31)
【出願人】（５０４１４５３０８）国立大学法人 琉球大学 (100)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年４月７日（２０１１．４．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月２８日（２００９．９．２８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２１年４月８日 日本雑草学会発行の「雑草研究 ２００９年４月第５４巻別号 第４８回 講演会講演要旨」に発表
【出願人】（５９１１００４４８）パネフリ工業株式会社 (31)
【出願人】（５０４１４５３０８）国立大学法人 琉球大学 (100)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]