ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法
本発明の目的は、生分解性のポリヒドロキシアルカノエートを溶剤抽出法により簡便に得る方法を提供することである。
本発明は、抽出溶剤が炭素数４〜１０の１価アルコールであり、溶解液総量に対して水を０．１重量％から１０重量％含有するポリヒドロキシアルカノエート溶解液を７０℃以上に保温し、７０℃より低い温度に冷却することにより、ポリヒドロキシアルカノエートの結晶を析出させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法である。
本発明は、抽出溶剤が炭素数４〜１０の１価アルコールであり、溶解液総量に対して水を０．１重量％から１０重量％含有するポリヒドロキシアルカノエート溶解液を７０℃以上に保温し、７０℃より低い温度に冷却することにより、ポリヒドロキシアルカノエートの結晶を析出させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオマス内に蓄積したポリヒドロキシアルカノエートを、溶剤を用いて効率よく製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリヒドロキシアルカノエート（以降、ＰＨＡと略す）は、多くの微生物種の菌体内にエネルギー貯蔵物質として合成、蓄積される生分解性の熱可塑性ポリエステルである。微生物によって天然の有機酸や油脂を炭素源に生産されるＰＨＡは、土中や水中の微生物により完全に生分解されるため自然界の炭素循環プロセスに取り込まれることになる。従って、ＰＨＡは生態系への悪影響がほとんどない環境調和型のプラスチック材料と言える。近年、合成プラスチックが環境汚染、廃棄物処理、石油資源の観点から深刻な社会問題となるに至り、ＰＨＡが環境に優しいグリーンプラスチックとして注目され、その実用化が切望されている。
【０００３】
ＰＨＡを工業的に生産する場合には、生来的にＰＨＡを生産する微生物を用いる場合や、ＰＨＡ合成酵素遺伝子を微生物や植物に組換え、形質転換体を取得しそれを製造用宿主として用いる場合がある。そのどちらの場合もＰＨＡはそれらバイオマス中に蓄積されるため、ＰＨＡの製造は、ＰＨＡを含むバイオマスを回収し、そのバイオマスから分離精製して行われることになる。
【０００４】
バイオマスからのＰＨＡの分離精製に関しては、ＰＨＡ溶解性の溶剤を用いて抽出し、貧溶剤を用いて晶析を行い、結晶を回収する方法が最も簡便な方法として知られている。例えば、ＰＨＡが蓄積されたバイオマスを乾燥し、乾燥バイオマスからクロロホルムや塩化メチレンなどのハロゲン系有機溶媒を用いてＰＨＡを抽出した後、抽出液をメタノールやヘキサンなどの貧溶媒と混合することによってＰＨＡを析出させて回収する方法（特許文献１）がある。これらの抽出溶剤では、乾燥バイオマスからしか抽出できないため培養液から得られたバイオマスを乾燥する工程が必要となってくる。さらに環境規制に関わるハロゲン系有機溶媒を使用することなどの問題がある。
特許文献２には溶剤による湿バイオマスからのＰＨＢ（３−ヒドロキシブチレートのホモポリマー）の抽出方法が記載されているが、ここで用いられる溶剤はプロパンジオールやグリセリンホルマールなどいずれも特殊なものであり、経済性等の点で工業的な利用には不十分である。
【０００５】
また、特許文献３では、水との混和性の好ましい溶剤での抽出が公開されている。そこでは、メタノール、エタノール、またはイソプロパノールが挙げられているが、これらの溶剤では沸点を大きく超える１００℃以上の加圧状態でバイオマスを処理しないとＰＨＡは抽出できないし、実施例１あるいは２で用いられている１４０℃という高温での溶解は激しい分子量低下を起こすことが懸念される。さらに、冷却により硬質で不透明なゲルを形成後、これを回転ロールで圧縮するとあるが、本発明者らはポリマーが硬質で不透明なゲルになると、反応容器からの払い出しがもはや不可能となり、実質的にＰＨＡは回収不能となることを経験した。
特許文献４では、主に植物からのＰＨＡの回収を溶剤を用いて行っているが、ＰＨＡ濃度１％で行っており、このような低濃度では使用する溶剤量が膨大となり実質的に工業化は困難である。また、上記条件においてもゲル化を防止できないことを本発明者らは経験した。
【０００６】
このように、ＰＨＡを溶剤により抽出し回収する場合、晶析時のゲル化が激しいため実質的に簡便と考えられる溶剤抽出法が利用できない。あるいは、ゲル化を回避するためには低濃度での溶解と晶析を行うしかなく、ＰＨＡの回収が非効率になるため工業的に採算が合わない、という現状がある。このように、ＰＨＡのゲル化は深刻な問題であるが、ＰＨＡが実用化に到っていない大きな原因の一つになっているにもかかわらず、未だゲル化を回避する有効な手立ては見つかっていない。
【特許文献１】特開昭５９−２０５９９２号公報
【特許文献２】特開平２−６９１８７号公報
【特許文献３】特表平１０−５０４４６０号公報
【特許文献４】米国特許第５９４２５９７号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の課題は、ポリヒドロキシアルカノエート含有バイオマスより、溶剤を用いてポリヒドロキシアルカノエートを抽出後ポリヒドロキシアルカノエートを晶析する時、ポリヒドロキシアルカノエートが実質的に払い出し不可能なゲル化した状態になるのを回避し、回収が極めて容易な状態の当該ポリマーを得る方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、乾燥バイオマスあるいは湿バイオマスからＰＨＡを炭素数４〜１０の１価のアルコール中に７０℃以上で溶解させたのち、該抽出液をバイオマス残渣から分離し、抽出溶液中に水分が０．１〜１０重量％、好ましくは２〜８重量％存在するように抽出液を調製し、この抽出液を含水状態にすることがＰＨＡの強度のゲル化を最小限に止め、さらに溶液を７０℃より温度を低くすることにより収量が増大し、しかもＰＨＡが濾過により回収可能な状態となることを発見し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は、抽出溶剤が炭素数４〜１０の１価アルコールであり、溶解液総量に対して水を０．１重量％から１０重量％含有するポリヒドロキシアルカノエート溶解液を７０℃以上に保温し、７０℃より低い温度に冷却することにより、ポリヒドロキシアルカノエートの結晶を析出させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法に関する。
【００１０】
以下に好ましい実施の形態を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
本発明に使用される抽出溶剤は炭素数４から１０の１価のアルコールであり、そのような抽出溶剤としてはブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノール、デカノール、及びそれらの異性体が挙げられるが、より好ましくは沸点が比較的低く、値段が比較的安価な炭素数４〜７の、抽出、溶解能力に非常に優れている１価アルコールであり、そのような１価のアルコールとしては、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール及びそれらの異性体が本発明の抽出溶剤として特に好ましい。上記ブタノールとしては、イソブタノールが好ましい。上記抽出溶剤は、１種又は２種以上を用いることができる。
【００１１】
本発明の好ましい実施態様によれば、ＰＨＡは乾燥バイオマスから抽出することもできるし、湿バイオマスからの抽出も行うことができる。何れの場合にも、抽出溶液中に水分が０．１〜１０重量％、好ましくは２〜８重量％存在するように抽出液を調製する。これにより、抽出後の晶析時に強度のゲル化が緩和されることを、本発明者らは初めて発見した。但し、抽出液中の水分含量が１０重量％を超える場合、抽出溶剤の回収が困難となる。
【００１２】
抽出操作の好ましい実施態様によれば、バイオマスよりＰＨＡを本発明による抽出溶剤の１つで抽出する。ＰＨＡ濃度は特に制限されないが、好ましくは１〜２０重量％、より好ましくは２〜１５重量％、さらに好ましくは３〜１０重量％になるよう抽出溶剤を加えればよい。ＰＨＡを抽出するための温度は７０℃以上が好ましく、より好ましくは８０℃以上、さらに好ましくは９０℃以上で行う。しかし、ＰＨＡの分解を回避するために温度は実質的に１００℃を越えないことが好ましい。ＰＨＡを抽出するための時間は特に制限されないが、一般に２０〜１５０分であり、良好な抽出効率と分解を防ぐ点から６０〜１２０分がより好ましい。次いで抽出溶液を不溶性バイオマスと分離する。この場合加熱された濾過器、あるいは加熱された遠心分離機、例えばデカンター等を使用するのが有利である。分離を行うときは加圧状態で行っても良いが、分離中に温度が７０℃よりも低くなると急激にゲル化し、やがて固化して残渣との分離が不能となる場合がある。そのためバイオマス残渣を除去するまでは溶液は常に７０℃以上で保温する。その後、抽出液を７０℃より低い温度まで徐冷することによりＰＨＡの晶出量を増大させることができる。
【００１３】
ＰＨＡの回収は、ＰＨＡ溶解溶液から液体を濾過、遠心分離など当業者には周知の方法で行われる。回収したＰＨＡは、水、メタノール、エタノール、ブタノール、アセトン、ヘキサン、ヘプタンなどの溶剤またはその混合物で洗浄することができるが、これらに限られるわけではない。ＰＨＡの乾燥は、当業者には周知の方法、たとえば気流乾燥、真空乾燥などで行われる。
【００１４】
本発明におけるＰＨＡとは、ヒドロキシアルカノエートの重合体の総称である。ヒドロキシアルカノエート成分としては特に限定されないが、具体的には、３−ヒドロキシブチレート（３ＨＢ）、３−ヒドロキシバレレート（３ＨＶ）、３−ヒドロキシプロピオネート、４−ヒドロキシブチレート、４−ヒドロキシバレレート、５−ヒドロキシバレレート、３−ヒドロキシヘキサノエート（３ＨＨ）、３−ヒドロキシヘプタノエート、３−ヒドロキシオクタノエート、３−ヒドロキシノナノエート、３−ヒドロキシデカノエートなどが挙げられる。本発明におけるＰＨＡは、これらヒドロキシアルカノエートの単重合体であっても、２種以上が共重合した共重合体であってもよいが、２種以上が共重合した共重合体が好ましい。ＰＨＡの具体例としては、３ＨＢの単重合体であるＰＨＢや、３ＨＢと３ＨＶの２成分共重合体であるＰＨＢＶ、３ＨＢと３ＨＨとの２成分共重合体ＰＨＢＨ（特許第２７７７７５７号公報参照）または、３ＨＢと３ＨＶと３ＨＨとの３成分共重合体ＰＨＢＨＶ（特許第２７７７７５７号公報参照）などが例示できる。特に、生分解性ポリマーとしての分解性と柔らかい性質を持つ点で、モノマー成分として３ＨＨを有する共重合体が好ましく、より好ましくはＰＨＢＨである。このときＰＨＢＨを構成する各モノマーのｍｏｌ比については特に限定されるものではないが、良好な加工性を示す点から１〜９９ｍｏｌ％のものが好ましく、より好ましくは１〜３０ｍｏｌ％である。また、晶析時の結晶性状の良好さから、好ましくは３ＨＨｍｏｌ％は２０ｍｏｌ％以下であり、より好ましくは１５ｍｏｌ％以下、とりわけ操作性の良好さから１０ｍｏｌ％以下が好ましい。ＰＨＢＨＶの場合、構成する各モノマーユニットの組成比については特に限定されるものではないが、例えば、３ＨＢユニットの含量は１〜９５ｍｏｌ％、３ＨＶユニットの含量は１〜９６ｍｏｌ％、３ＨＨユニットの含量は１〜３０ｍｏｌ％といった範囲のものが好適である。
【００１５】
ＰＨＡが実用化できるためには、ＰＨＡはゲルクロマトグラフィー法でポリスチレンを分子量標準とした重量平均分子量１万以上を有しなければならない。好ましくは５万以上、より好ましくは１０万以上、特に２０万以上である。
【００１６】
本発明に用いられるバイオマスは、細胞内にＰＨＡを蓄積することが可能な生物であれば特に限定されない。例えば、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｌａｔｕｓ等のアルカリゲネス属、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａなどのラルストニア属、シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、アゾトバクター属（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、ノカルディア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、アエロモナス属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ属、Ｚｏｏｇｌｏｅａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｙａｒｒｏｗｉａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属などの微生物は、培養条件を調整することによってＰＨＡを細胞内に蓄積することが可能である。また、これら微生物のＰＨＡ合成に関与する遺伝子群を導入した形質転換体であっても良い。その場合、宿主としては特に限定されず、上記微生物の他、大腸菌や酵母（ＷＯ０１／８８１４４参照）などの微生物や、さらには植物などが挙げられる。このなかで、アエロモナス属のＡ．ｃａｖｉａｅや、該Ａ．ｃａｖｉａｅのＰＨＡ合成酵素群の遺伝子を導入した形質転換菌体が、ポリマーとして優れたＰＨＢＨを合成できる能力があるという点で好ましい。特に、Ａ．ｃａｖｉａｅのＰＨＡ合成酵素群の遺伝子を導入したＲａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａがより好ましく、該微生物の１例は、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ ＡＣ３２（受託日：平成９年８月７日、受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０３８）として日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６にある独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに、ブダペスト条約に基づいて国際寄託されている。
【００１７】
ここに挙げたＰＨＡ生産微生物の培養方法については特に限定されないが、例えば特開２００１−３４００７８号公報に示した当業者に周知の方法が用いられる。
【００１８】
ＰＨＡを回収するうえで、培養後の微生物菌中のＰＨＡ含有率は、高い方が好ましいのは当然であり、工業レベルでの適用においては乾燥菌体中に５０重量％以上のＰＨＡが含有されているのが好ましく、以後の分離操作、分離ポリマーの純度等を考慮するとより好ましいＰＨＡ含有率は６０重量％以上、さらには７０重量％以上である。
【００１９】
培養完了後は、菌体を定法で、例えば噴霧乾燥等により直接培養液から乾燥菌体を得る、あるいは、遠心や膜分離などの方法により菌体を回収する。回収した菌体は、乾燥した状態、あるいは水で湿らした湿菌体の状態で抽出工程に用いることができる。また、回収菌体をメタノール、アセトン等の脂質溶剤で洗浄した湿菌体、あるいはこれを乾燥したものもＰＨＡ抽出用菌体として用いることができる。
【００２０】
本発明により得られたポリヒドロキシアルカノエートは、各種繊維、糸、ロープ、織物、編物、不織布、紙、フィルム、シート、チューブ、板、棒、容器、袋、部品、発泡体などの形状に成形できる。また、２軸延伸フィルムにも加工できる。成形品は、農業、漁業、林業、園芸、医学、衛生品、衣料、非衣料、包装、その他の分野に好適に用いることができる。
【００２１】
本発明により処理した後のバイオマス物質は動物飼料として用いることが好ましい。従って、本発明で用いる溶媒は、動物飼料として許容可能の量であることが好ましい。しかし、溶媒はバイオマス物質から実質的に除去する方が好ましい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の方法により、ゲル化を抑制し、流動性があり、払い出し可能なポリヒドロキシアルカノエートを得ることができるため、生分解性のポリヒドロキシアルカノエートを工業的に安価に生産、提供できるようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
以下の実施例においては、いずれも共重合ポリエステルとして、ポリ（３−ヒドロキシブチレート−ｃｏ−３−ヒドロキシヘキサノエート）（以下、ＰＨＢＨと略す）を生産した。もちろん本発明はこれら実施例にその技術範囲を限定するものではなく、ＰＨＢＨに限られるものではない。
【００２４】
（実施例１）
アエロモナス・キャビエ由来のＰＨＡ合成酵素群遺伝子を導入したＲ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６０３８）を特開２００１−３４００７８の実施例１に記載した方法で培養を行い、ＰＨＢＨの生産を行った。培養終了後遠心分離により菌体を回収し湿菌体を得た。さらにこの菌体を５０℃で１５時間真空乾燥し乾燥菌体を得た。乾燥菌体中のＰＨＢＨの含量は６０％、重量平均分子量は１３０万、３−ヒドロキシヘキサノエート（以下、３ＨＨと略す）組成は７ｍｏｌ％であった。この乾燥菌体２４．８ｇにイソブタノール２１１．４ｇを加え、１００℃で１時間抽出を行った。溶液を１００℃に保温したジャケット式加圧濾過器に移し濾過によりＰＨＢＨ溶解液を回収した。回収した溶解液を９０℃に保温し、その温度を維持した状態で、溶液を強攪拌しながら水１０ｇを徐々に添加した（水含量は４．１重量％）。添加終了後、溶液を強攪拌しながら室温まで徐々に冷却すると、ＰＨＢＨが沈殿した。該沈殿は濾過により容易に回収できた。回収したＰＨＢＨをイソブタノール５０ｇで洗浄後４５℃で真空乾燥した。回収量は１４．１ｇ（９５％）、純度９９％以上、３ＨＨ組成７ｍｏｌ％であった。分子量は１１０万と減少したが、加工には十分な分子量であった。
【００２５】
（実施例２）
アエロモナス・キャビエ由来のＰＨＡ合成酵素群遺伝子を導入したＲ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６０３８）を特開２００１−３４００７８の実施例１に記載した方法で培養を行い、ＰＨＢＨの生産を行った。培養終了後遠心分離により菌体を回収し湿菌体を得た。湿菌体中のＰＨＢＨの含量は３０％、重量平均分子量は１３０万、３ＨＨ組成は７ｍｏｌ％であった。この湿菌体５０．０ｇにイソブタノール２１１．４ｇを加え、１００℃で１時間抽出を行った。溶液を１００℃に保温したジャケット式加圧濾過器に移し濾過によりＰＨＢＨ溶解液を回収した。回収した溶解液を９０℃に保温し、その温度を維持した状態で、溶液を強攪拌しながら水５ｇを徐々に添加した（水含量は１．９重量％）。添加終了後、溶液を強攪拌しながら室温まで徐々に冷却すると、ＰＨＢＨが沈殿した。該沈殿は濾過により容易に回収できた。回収したＰＨＢＨをイソブタノール５０ｇで洗浄後４５℃で真空乾燥した。回収量は１４．１ｇ（９４％）、純度９９％以上、３ＨＨ組成７ｍｏｌ％であった。分子量は１１０万と減少したが、加工には十分な分子量であった。
【００２６】
（比較例１）
実施例１において、水を添加することなく強攪拌下ＰＨＡ抽出液を徐冷により室温まで冷却した（水含量は０．０４重量％）。その結果、ＰＨＡはゲル化し流動性が無くなったため、払い出し不能であった。その後、水を添加しても流動性は改善されず、払い出し不能であった。
【００２７】
本実施例における分子量の測定は、Ｓｈｏｄｅｘ Ｋ８０６Ｌ（３００ｘ８ｍｍ、２本連結）（昭和電工社製）を装着した島津製作所製ゲルクロマトグラフィシステム（ＲＩ検出）を用いクロロホルムを移動相として分析した。分子量標準サンプルには市販の標準ポリスチレンを用いた。またＰＨＢＨの純度はＰＨＢＨをメチルエステル化しガスクロマトグラフィにより測定した。水分含量はケット科学研究所製の赤外線水分計ＦＤ―２３０を用いて測定した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオマス内に蓄積したポリヒドロキシアルカノエートを、溶剤を用いて効率よく製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリヒドロキシアルカノエート（以降、ＰＨＡと略す）は、多くの微生物種の菌体内にエネルギー貯蔵物質として合成、蓄積される生分解性の熱可塑性ポリエステルである。微生物によって天然の有機酸や油脂を炭素源に生産されるＰＨＡは、土中や水中の微生物により完全に生分解されるため自然界の炭素循環プロセスに取り込まれることになる。従って、ＰＨＡは生態系への悪影響がほとんどない環境調和型のプラスチック材料と言える。近年、合成プラスチックが環境汚染、廃棄物処理、石油資源の観点から深刻な社会問題となるに至り、ＰＨＡが環境に優しいグリーンプラスチックとして注目され、その実用化が切望されている。
【０００３】
ＰＨＡを工業的に生産する場合には、生来的にＰＨＡを生産する微生物を用いる場合や、ＰＨＡ合成酵素遺伝子を微生物や植物に組換え、形質転換体を取得しそれを製造用宿主として用いる場合がある。そのどちらの場合もＰＨＡはそれらバイオマス中に蓄積されるため、ＰＨＡの製造は、ＰＨＡを含むバイオマスを回収し、そのバイオマスから分離精製して行われることになる。
【０００４】
バイオマスからのＰＨＡの分離精製に関しては、ＰＨＡ溶解性の溶剤を用いて抽出し、貧溶剤を用いて晶析を行い、結晶を回収する方法が最も簡便な方法として知られている。例えば、ＰＨＡが蓄積されたバイオマスを乾燥し、乾燥バイオマスからクロロホルムや塩化メチレンなどのハロゲン系有機溶媒を用いてＰＨＡを抽出した後、抽出液をメタノールやヘキサンなどの貧溶媒と混合することによってＰＨＡを析出させて回収する方法（特許文献１）がある。これらの抽出溶剤では、乾燥バイオマスからしか抽出できないため培養液から得られたバイオマスを乾燥する工程が必要となってくる。さらに環境規制に関わるハロゲン系有機溶媒を使用することなどの問題がある。
特許文献２には溶剤による湿バイオマスからのＰＨＢ（３−ヒドロキシブチレートのホモポリマー）の抽出方法が記載されているが、ここで用いられる溶剤はプロパンジオールやグリセリンホルマールなどいずれも特殊なものであり、経済性等の点で工業的な利用には不十分である。
【０００５】
また、特許文献３では、水との混和性の好ましい溶剤での抽出が公開されている。そこでは、メタノール、エタノール、またはイソプロパノールが挙げられているが、これらの溶剤では沸点を大きく超える１００℃以上の加圧状態でバイオマスを処理しないとＰＨＡは抽出できないし、実施例１あるいは２で用いられている１４０℃という高温での溶解は激しい分子量低下を起こすことが懸念される。さらに、冷却により硬質で不透明なゲルを形成後、これを回転ロールで圧縮するとあるが、本発明者らはポリマーが硬質で不透明なゲルになると、反応容器からの払い出しがもはや不可能となり、実質的にＰＨＡは回収不能となることを経験した。
特許文献４では、主に植物からのＰＨＡの回収を溶剤を用いて行っているが、ＰＨＡ濃度１％で行っており、このような低濃度では使用する溶剤量が膨大となり実質的に工業化は困難である。また、上記条件においてもゲル化を防止できないことを本発明者らは経験した。
【０００６】
このように、ＰＨＡを溶剤により抽出し回収する場合、晶析時のゲル化が激しいため実質的に簡便と考えられる溶剤抽出法が利用できない。あるいは、ゲル化を回避するためには低濃度での溶解と晶析を行うしかなく、ＰＨＡの回収が非効率になるため工業的に採算が合わない、という現状がある。このように、ＰＨＡのゲル化は深刻な問題であるが、ＰＨＡが実用化に到っていない大きな原因の一つになっているにもかかわらず、未だゲル化を回避する有効な手立ては見つかっていない。
【特許文献１】特開昭５９−２０５９９２号公報
【特許文献２】特開平２−６９１８７号公報
【特許文献３】特表平１０−５０４４６０号公報
【特許文献４】米国特許第５９４２５９７号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の課題は、ポリヒドロキシアルカノエート含有バイオマスより、溶剤を用いてポリヒドロキシアルカノエートを抽出後ポリヒドロキシアルカノエートを晶析する時、ポリヒドロキシアルカノエートが実質的に払い出し不可能なゲル化した状態になるのを回避し、回収が極めて容易な状態の当該ポリマーを得る方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、乾燥バイオマスあるいは湿バイオマスからＰＨＡを炭素数４〜１０の１価のアルコール中に７０℃以上で溶解させたのち、該抽出液をバイオマス残渣から分離し、抽出溶液中に水分が０．１〜１０重量％、好ましくは２〜８重量％存在するように抽出液を調製し、この抽出液を含水状態にすることがＰＨＡの強度のゲル化を最小限に止め、さらに溶液を７０℃より温度を低くすることにより収量が増大し、しかもＰＨＡが濾過により回収可能な状態となることを発見し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は、抽出溶剤が炭素数４〜１０の１価アルコールであり、溶解液総量に対して水を０．１重量％から１０重量％含有するポリヒドロキシアルカノエート溶解液を７０℃以上に保温し、７０℃より低い温度に冷却することにより、ポリヒドロキシアルカノエートの結晶を析出させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法に関する。
【００１０】
以下に好ましい実施の形態を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
本発明に使用される抽出溶剤は炭素数４から１０の１価のアルコールであり、そのような抽出溶剤としてはブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノール、デカノール、及びそれらの異性体が挙げられるが、より好ましくは沸点が比較的低く、値段が比較的安価な炭素数４〜７の、抽出、溶解能力に非常に優れている１価アルコールであり、そのような１価のアルコールとしては、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール及びそれらの異性体が本発明の抽出溶剤として特に好ましい。上記ブタノールとしては、イソブタノールが好ましい。上記抽出溶剤は、１種又は２種以上を用いることができる。
【００１１】
本発明の好ましい実施態様によれば、ＰＨＡは乾燥バイオマスから抽出することもできるし、湿バイオマスからの抽出も行うことができる。何れの場合にも、抽出溶液中に水分が０．１〜１０重量％、好ましくは２〜８重量％存在するように抽出液を調製する。これにより、抽出後の晶析時に強度のゲル化が緩和されることを、本発明者らは初めて発見した。但し、抽出液中の水分含量が１０重量％を超える場合、抽出溶剤の回収が困難となる。
【００１２】
抽出操作の好ましい実施態様によれば、バイオマスよりＰＨＡを本発明による抽出溶剤の１つで抽出する。ＰＨＡ濃度は特に制限されないが、好ましくは１〜２０重量％、より好ましくは２〜１５重量％、さらに好ましくは３〜１０重量％になるよう抽出溶剤を加えればよい。ＰＨＡを抽出するための温度は７０℃以上が好ましく、より好ましくは８０℃以上、さらに好ましくは９０℃以上で行う。しかし、ＰＨＡの分解を回避するために温度は実質的に１００℃を越えないことが好ましい。ＰＨＡを抽出するための時間は特に制限されないが、一般に２０〜１５０分であり、良好な抽出効率と分解を防ぐ点から６０〜１２０分がより好ましい。次いで抽出溶液を不溶性バイオマスと分離する。この場合加熱された濾過器、あるいは加熱された遠心分離機、例えばデカンター等を使用するのが有利である。分離を行うときは加圧状態で行っても良いが、分離中に温度が７０℃よりも低くなると急激にゲル化し、やがて固化して残渣との分離が不能となる場合がある。そのためバイオマス残渣を除去するまでは溶液は常に７０℃以上で保温する。その後、抽出液を７０℃より低い温度まで徐冷することによりＰＨＡの晶出量を増大させることができる。
【００１３】
ＰＨＡの回収は、ＰＨＡ溶解溶液から液体を濾過、遠心分離など当業者には周知の方法で行われる。回収したＰＨＡは、水、メタノール、エタノール、ブタノール、アセトン、ヘキサン、ヘプタンなどの溶剤またはその混合物で洗浄することができるが、これらに限られるわけではない。ＰＨＡの乾燥は、当業者には周知の方法、たとえば気流乾燥、真空乾燥などで行われる。
【００１４】
本発明におけるＰＨＡとは、ヒドロキシアルカノエートの重合体の総称である。ヒドロキシアルカノエート成分としては特に限定されないが、具体的には、３−ヒドロキシブチレート（３ＨＢ）、３−ヒドロキシバレレート（３ＨＶ）、３−ヒドロキシプロピオネート、４−ヒドロキシブチレート、４−ヒドロキシバレレート、５−ヒドロキシバレレート、３−ヒドロキシヘキサノエート（３ＨＨ）、３−ヒドロキシヘプタノエート、３−ヒドロキシオクタノエート、３−ヒドロキシノナノエート、３−ヒドロキシデカノエートなどが挙げられる。本発明におけるＰＨＡは、これらヒドロキシアルカノエートの単重合体であっても、２種以上が共重合した共重合体であってもよいが、２種以上が共重合した共重合体が好ましい。ＰＨＡの具体例としては、３ＨＢの単重合体であるＰＨＢや、３ＨＢと３ＨＶの２成分共重合体であるＰＨＢＶ、３ＨＢと３ＨＨとの２成分共重合体ＰＨＢＨ（特許第２７７７７５７号公報参照）または、３ＨＢと３ＨＶと３ＨＨとの３成分共重合体ＰＨＢＨＶ（特許第２７７７７５７号公報参照）などが例示できる。特に、生分解性ポリマーとしての分解性と柔らかい性質を持つ点で、モノマー成分として３ＨＨを有する共重合体が好ましく、より好ましくはＰＨＢＨである。このときＰＨＢＨを構成する各モノマーのｍｏｌ比については特に限定されるものではないが、良好な加工性を示す点から１〜９９ｍｏｌ％のものが好ましく、より好ましくは１〜３０ｍｏｌ％である。また、晶析時の結晶性状の良好さから、好ましくは３ＨＨｍｏｌ％は２０ｍｏｌ％以下であり、より好ましくは１５ｍｏｌ％以下、とりわけ操作性の良好さから１０ｍｏｌ％以下が好ましい。ＰＨＢＨＶの場合、構成する各モノマーユニットの組成比については特に限定されるものではないが、例えば、３ＨＢユニットの含量は１〜９５ｍｏｌ％、３ＨＶユニットの含量は１〜９６ｍｏｌ％、３ＨＨユニットの含量は１〜３０ｍｏｌ％といった範囲のものが好適である。
【００１５】
ＰＨＡが実用化できるためには、ＰＨＡはゲルクロマトグラフィー法でポリスチレンを分子量標準とした重量平均分子量１万以上を有しなければならない。好ましくは５万以上、より好ましくは１０万以上、特に２０万以上である。
【００１６】
本発明に用いられるバイオマスは、細胞内にＰＨＡを蓄積することが可能な生物であれば特に限定されない。例えば、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｌａｔｕｓ等のアルカリゲネス属、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａなどのラルストニア属、シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、アゾトバクター属（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、ノカルディア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、アエロモナス属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ属、Ｚｏｏｇｌｏｅａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｙａｒｒｏｗｉａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属などの微生物は、培養条件を調整することによってＰＨＡを細胞内に蓄積することが可能である。また、これら微生物のＰＨＡ合成に関与する遺伝子群を導入した形質転換体であっても良い。その場合、宿主としては特に限定されず、上記微生物の他、大腸菌や酵母（ＷＯ０１／８８１４４参照）などの微生物や、さらには植物などが挙げられる。このなかで、アエロモナス属のＡ．ｃａｖｉａｅや、該Ａ．ｃａｖｉａｅのＰＨＡ合成酵素群の遺伝子を導入した形質転換菌体が、ポリマーとして優れたＰＨＢＨを合成できる能力があるという点で好ましい。特に、Ａ．ｃａｖｉａｅのＰＨＡ合成酵素群の遺伝子を導入したＲａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａがより好ましく、該微生物の１例は、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ ＡＣ３２（受託日：平成９年８月７日、受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０３８）として日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６にある独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに、ブダペスト条約に基づいて国際寄託されている。
【００１７】
ここに挙げたＰＨＡ生産微生物の培養方法については特に限定されないが、例えば特開２００１−３４００７８号公報に示した当業者に周知の方法が用いられる。
【００１８】
ＰＨＡを回収するうえで、培養後の微生物菌中のＰＨＡ含有率は、高い方が好ましいのは当然であり、工業レベルでの適用においては乾燥菌体中に５０重量％以上のＰＨＡが含有されているのが好ましく、以後の分離操作、分離ポリマーの純度等を考慮するとより好ましいＰＨＡ含有率は６０重量％以上、さらには７０重量％以上である。
【００１９】
培養完了後は、菌体を定法で、例えば噴霧乾燥等により直接培養液から乾燥菌体を得る、あるいは、遠心や膜分離などの方法により菌体を回収する。回収した菌体は、乾燥した状態、あるいは水で湿らした湿菌体の状態で抽出工程に用いることができる。また、回収菌体をメタノール、アセトン等の脂質溶剤で洗浄した湿菌体、あるいはこれを乾燥したものもＰＨＡ抽出用菌体として用いることができる。
【００２０】
本発明により得られたポリヒドロキシアルカノエートは、各種繊維、糸、ロープ、織物、編物、不織布、紙、フィルム、シート、チューブ、板、棒、容器、袋、部品、発泡体などの形状に成形できる。また、２軸延伸フィルムにも加工できる。成形品は、農業、漁業、林業、園芸、医学、衛生品、衣料、非衣料、包装、その他の分野に好適に用いることができる。
【００２１】
本発明により処理した後のバイオマス物質は動物飼料として用いることが好ましい。従って、本発明で用いる溶媒は、動物飼料として許容可能の量であることが好ましい。しかし、溶媒はバイオマス物質から実質的に除去する方が好ましい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の方法により、ゲル化を抑制し、流動性があり、払い出し可能なポリヒドロキシアルカノエートを得ることができるため、生分解性のポリヒドロキシアルカノエートを工業的に安価に生産、提供できるようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
以下の実施例においては、いずれも共重合ポリエステルとして、ポリ（３−ヒドロキシブチレート−ｃｏ−３−ヒドロキシヘキサノエート）（以下、ＰＨＢＨと略す）を生産した。もちろん本発明はこれら実施例にその技術範囲を限定するものではなく、ＰＨＢＨに限られるものではない。
【００２４】
（実施例１）
アエロモナス・キャビエ由来のＰＨＡ合成酵素群遺伝子を導入したＲ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６０３８）を特開２００１−３４００７８の実施例１に記載した方法で培養を行い、ＰＨＢＨの生産を行った。培養終了後遠心分離により菌体を回収し湿菌体を得た。さらにこの菌体を５０℃で１５時間真空乾燥し乾燥菌体を得た。乾燥菌体中のＰＨＢＨの含量は６０％、重量平均分子量は１３０万、３−ヒドロキシヘキサノエート（以下、３ＨＨと略す）組成は７ｍｏｌ％であった。この乾燥菌体２４．８ｇにイソブタノール２１１．４ｇを加え、１００℃で１時間抽出を行った。溶液を１００℃に保温したジャケット式加圧濾過器に移し濾過によりＰＨＢＨ溶解液を回収した。回収した溶解液を９０℃に保温し、その温度を維持した状態で、溶液を強攪拌しながら水１０ｇを徐々に添加した（水含量は４．１重量％）。添加終了後、溶液を強攪拌しながら室温まで徐々に冷却すると、ＰＨＢＨが沈殿した。該沈殿は濾過により容易に回収できた。回収したＰＨＢＨをイソブタノール５０ｇで洗浄後４５℃で真空乾燥した。回収量は１４．１ｇ（９５％）、純度９９％以上、３ＨＨ組成７ｍｏｌ％であった。分子量は１１０万と減少したが、加工には十分な分子量であった。
【００２５】
（実施例２）
アエロモナス・キャビエ由来のＰＨＡ合成酵素群遺伝子を導入したＲ．ｅｕｔｒｏｐｈａ（寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６０３８）を特開２００１−３４００７８の実施例１に記載した方法で培養を行い、ＰＨＢＨの生産を行った。培養終了後遠心分離により菌体を回収し湿菌体を得た。湿菌体中のＰＨＢＨの含量は３０％、重量平均分子量は１３０万、３ＨＨ組成は７ｍｏｌ％であった。この湿菌体５０．０ｇにイソブタノール２１１．４ｇを加え、１００℃で１時間抽出を行った。溶液を１００℃に保温したジャケット式加圧濾過器に移し濾過によりＰＨＢＨ溶解液を回収した。回収した溶解液を９０℃に保温し、その温度を維持した状態で、溶液を強攪拌しながら水５ｇを徐々に添加した（水含量は１．９重量％）。添加終了後、溶液を強攪拌しながら室温まで徐々に冷却すると、ＰＨＢＨが沈殿した。該沈殿は濾過により容易に回収できた。回収したＰＨＢＨをイソブタノール５０ｇで洗浄後４５℃で真空乾燥した。回収量は１４．１ｇ（９４％）、純度９９％以上、３ＨＨ組成７ｍｏｌ％であった。分子量は１１０万と減少したが、加工には十分な分子量であった。
【００２６】
（比較例１）
実施例１において、水を添加することなく強攪拌下ＰＨＡ抽出液を徐冷により室温まで冷却した（水含量は０．０４重量％）。その結果、ＰＨＡはゲル化し流動性が無くなったため、払い出し不能であった。その後、水を添加しても流動性は改善されず、払い出し不能であった。
【００２７】
本実施例における分子量の測定は、Ｓｈｏｄｅｘ Ｋ８０６Ｌ（３００ｘ８ｍｍ、２本連結）（昭和電工社製）を装着した島津製作所製ゲルクロマトグラフィシステム（ＲＩ検出）を用いクロロホルムを移動相として分析した。分子量標準サンプルには市販の標準ポリスチレンを用いた。またＰＨＢＨの純度はＰＨＢＨをメチルエステル化しガスクロマトグラフィにより測定した。水分含量はケット科学研究所製の赤外線水分計ＦＤ―２３０を用いて測定した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抽出溶剤が炭素数４〜１０の１価アルコールであり、溶解液総量に対して水を０．１重量％から１０重量％含有するポリヒドロキシアルカノエート溶解液を７０℃以上に保温し、７０℃より低い温度に冷却することにより、ポリヒドロキシアルカノエートの結晶を析出させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項２】
１価アルコールがブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノール、デカノール、及びそれらの異性体から選択されることを特徴とする請求項１に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項３】
ポリヒドロキシアルカノエート溶解液におけるポリヒドロキシアルカノエート濃度が１重量％から２０重量％であることを特徴とする請求項１あるいは２に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項４】
ポリヒドロキシアルカノエートが、３−ヒドロキシブチレート、３−ヒドロキシバレレート、３−ヒドロキシプロピオネート、４−ヒドロキシブチレート、４−ヒドロキシバレレート、５−ヒドロキシバレレート、３−ヒドロキシヘキサノエート、３−ヒドロキシヘプタノエート、３−ヒドロキシオクタノエート、３−ヒドロキシノナノエートおよび３−ヒドロキシデカノエートからなる群から選択されるモノマーのうち少なくとも２種類以上が共重合した共重合体であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項５】
ポリヒドロキシアルカノエートが、３−ヒドロキシヘキサノエートと他のヒドロキシアルカノエート１種以上との共重合体であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項６】
ポリヒドロキシアルカノエートが、３−ヒドロキシヘキサノエートと３−ヒドロキシブチレートとの共重合体であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項７】
ポリヒドロキシアルカノエートが、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｎｏｒｃａｄｉａ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ属、Ｐｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ属、Ｚｏｏｇｌｏｅａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｙａｒｒｏｗｉａ属及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属からなる群より選択される少なくとも１種の微生物により産生されたものであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項８】
ポリヒドロキシアルカノエートが、アエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子群を導入された形質転換体により産生されたものである請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項９】
アエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子群を導入された形質転換体が、アエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子群を導入されたＲａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａである請求項８に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項１０】
ポリヒドロキシアルカノエートを抽出し、かつその溶媒含量を低下させた後の残存バイオマス物質を動物の飼料とすることを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項１】
抽出溶剤が炭素数４〜１０の１価アルコールであり、溶解液総量に対して水を０．１重量％から１０重量％含有するポリヒドロキシアルカノエート溶解液を７０℃以上に保温し、７０℃より低い温度に冷却することにより、ポリヒドロキシアルカノエートの結晶を析出させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項２】
１価アルコールがブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノール、デカノール、及びそれらの異性体から選択されることを特徴とする請求項１に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項３】
ポリヒドロキシアルカノエート溶解液におけるポリヒドロキシアルカノエート濃度が１重量％から２０重量％であることを特徴とする請求項１あるいは２に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項４】
ポリヒドロキシアルカノエートが、３−ヒドロキシブチレート、３−ヒドロキシバレレート、３−ヒドロキシプロピオネート、４−ヒドロキシブチレート、４−ヒドロキシバレレート、５−ヒドロキシバレレート、３−ヒドロキシヘキサノエート、３−ヒドロキシヘプタノエート、３−ヒドロキシオクタノエート、３−ヒドロキシノナノエートおよび３−ヒドロキシデカノエートからなる群から選択されるモノマーのうち少なくとも２種類以上が共重合した共重合体であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項５】
ポリヒドロキシアルカノエートが、３−ヒドロキシヘキサノエートと他のヒドロキシアルカノエート１種以上との共重合体であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項６】
ポリヒドロキシアルカノエートが、３−ヒドロキシヘキサノエートと３−ヒドロキシブチレートとの共重合体であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項７】
ポリヒドロキシアルカノエートが、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｎｏｒｃａｄｉａ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ属、Ｐｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ属、Ｚｏｏｇｌｏｅａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｙａｒｒｏｗｉａ属及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属からなる群より選択される少なくとも１種の微生物により産生されたものであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項８】
ポリヒドロキシアルカノエートが、アエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子群を導入された形質転換体により産生されたものである請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項９】
アエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子群を導入された形質転換体が、アエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子群を導入されたＲａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａである請求項８に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【請求項１０】
ポリヒドロキシアルカノエートを抽出し、かつその溶媒含量を低下させた後の残存バイオマス物質を動物の飼料とすることを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート結晶の製造方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４９６９１
【国際公開日】平成１７年６月２日（２００５．６．２）
【発行日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１５６５４（Ｐ２００５−５１５６５４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１７２４５
【国際出願日】平成１６年１１月１９日（２００４．１１．１９）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【出願人】（５９０００５０５８）ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー (2,280)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年６月２日（２００５．６．２）
【発行日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１７２４５
【国際出願日】平成１６年１１月１９日（２００４．１１．１９）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【出願人】（５９０００５０５８）ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー (2,280)
【Ｆターム（参考）】
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